PT100671B

PT100671B - Sal de l-ascorbato de 16-descarboxi-16-hidroxi-metilanfotericina b e processo para a sua preparacao

Info

Publication number: PT100671B
Application number: PT10067192A
Authority: PT
Inventors: Alexander Richard Greenlees; David Timothy Macpherson
Original assignee: Smithkline Beecham Plc
Priority date: 1991-07-11
Filing date: 1992-07-09
Publication date: 1999-07-30
Also published as: WO1993001203A1; GB9114949D0; TW199894B; MX9204031A; PT100671A; IE922264A1; AU2230892A

Description

SAL DE L-ASCORBATO DE 16-DESCARBÓXI-16-HIDROXI-METILANFOTERICINA Β E PROCESSO PARA A SUA PREPARAÇÃO

MEMÓRIA DESCRITIVA

Resumo

O presente invento refere-se ao sal de L-ascorbato de 16-descarboxi-16-hidróxi-metilanfotericina B, a um processo para a sua preparação e à sua utilização como um agente anti-fúngico.

16-descarbóxi-16-hidroximetilanfotericina B, à sua preparação e à sua utilização como agente terapêutico.

A PE—A—0375222 (Beecham Group p.l.c.) divulga uma classe de compostos que são descritos como possuindo actividade anti-fúgica. Um composto que é especialmente mencionado nesta patente é o do Exemplo 4, i.e. a 16-descarbóxi-16-hidroximetilanfotericina B. Este composto é apenas descrito na forma de sua base livre, relativamente à qual se demonstrou possuir uma fraca solubilidade em meio aquoso.

Foi agora descoberto que o sal de L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetilanfotericina B é particularmente estável e possui uma melhor solubilidade em meio aquoso.

Deste modo, o presente invento proporciona o sal de L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetilanfotericina B.

presente invento proporciona ainda o sal de L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetilanfotericina B na forma praticamente pura.

De acordo com um outro aspecto, o presente invento proporciona o sal de L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetilanfotericina B com uma pureza maior do que 5%, de preferência superior a 60%, com maior preferência superior a 80%, ainda com maior preferência superior a 90% e o mais preferivelmente com uma pureza superior a 95%.

o presente invento proporciona também um processo para a preparação do sal de L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetilanfotericina B que compreende a reacção da base livre ou de um sal diferente do de L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetilanfotericina B em solução com o ácido L-ascórbico e isolamento do produto resultante.

A reacção é de preferência efectuada num meio aquoso à temperatura ambiente. A adição do ácido L-ascórbico é de preferência controlada de tal maneira que o pH da solução de 16-descarbóxi-16-hidroximetilanfotericina B não caia abaixo de pH5.

• O sal de ascorbato é adequadamente isolado por secagem por congelação.

A 16-descarbóxi-16-hidroximetilanfotericina B, base livre, pode ser preparada de acordo com o processo descrito na PE-0375222 (Beecham Group p.l.c.).

Alternativamente, a base livre de 16-descarbóxi-16-hiB é preparada pelo processo que compreende composto de fórmula (II).

droximetilanfotericina selectiva de a redução um

de ácido carboxílico em que R ' é um derivado alquilo 0^_θ; ⁷ é um grupo de protecção de amina;

um grupo de protecção sililo; e a seguir, facultativamente, . necessário, e por qualquer ordem apropriada, a conversão de activado; R₂ ⁷e cada R.' ou se

era hidrogénio, a remoção de qualquer grupo de protecção de amina existente e remoção de qualquer grupo de protecção sililo e/ou a formação de um seu sal farmaceuticamente aceitável (isto proporciona um outro aspecto do invento), e a sua base livre pode ser convertida no sal de L-ascorbato descrito anteriormente.

Os valores preferidos para R·^', R₂' e R₃' e as interconversões de R₂' em hidrogénio e a remoção dos grupos de protecção de amina são referidos na PE-A-0375222 (Beecham Group p.l.c.).

Os grupos de protecção sililo preferidos são descritos na PE-A-0375223 (Beecham Group p.l.c.), R₂ ^Z é de preferência metilo, R₃' é de preferência 9-fluoroenilmetóxi-carbonil e R^' é com maior preferência trietilsililo.

Os compostos de fórmula (II) podem ser preparados por utilização dos processos descritos na PE-A-037522 (Beecham Group p.l.c.).

O sal de L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetilanfotericina B é um agente anti-fúngico, potencialmente útil para o combate de infecções fúngicas em animais, incluindo seres humanos. Por exemplo, é potencialmente útil no tratamento de infecções fúngicas tópicas no homem, causadas por, entre outros organismos, espécies de Candida, Trichophvton, Microsporum ou Epidermophyton, ou em infecções das mucosas causadas por Candida albicans (por exemplo, aftas e candidiase vaginal). Pode ser igualmente útil para o tratamento de infecções fúngicas sistémicas causados por, por exemplo Candida albicans, Cryptococcus neoformans, Aspercfillus________fumicratus, Coccidioides, Paracoccidioides, Histoplasma ou Blastomyces spp. Pode ser

também útil para o tratamento de micetoma eumicótico, cromoblastomicose e ficomicose.

O invento proporciona ainda uma composição farmacêutica que compreende o sal de L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetilanfotericina B, conjuntamente com um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável. A composição é de preferência para utilização em seres humanos na forma de comprimidos, cápsulas, injectáveis ou cremes.

Para utilização em seres humanos, o sal de L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetilanfotericina B pode ser administrado isoladamente, mas normalmente será administrado em mistura com um veículo farmacêutico seleccionado em função da via de administração pretendida e da prática farmacêutica corrente. Por exemplo, pode ser administrado oralmente na forma de um comprimido que contém excipientes tais como amido ou lactose, ou de uma cápsula ou óvulo isoladamente ou em mistura com excipientes, ou na forma de um elixir ou suspensão que contém um agente aromatizante ou corante. Pode ser injectado parentericamente, por exemplo intravenosa, intramuscular ou subcutaneamente. Para administração parentérica, é melhor utilizado na forma de uma solução aquosa esterilizada que pode conter outras substâncias, por exemplo, sais ou glicose em quantidade suficiente para tornar a solução isotónica.

Para administração oral ou parentérica a doentes humanos, espera-se que o nível de dosagem diário do sal de L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetilanfotericina B varie entre 0,1 e 20 mg/kg, de preferência entre 0,5 e 2 mg/kg (em doses divididas), quando administrado quer pela via oral quer parentérica. Deste modo, os comprimidos ou cápsulas dos compostos podem conter desde 5 mg a 0,5 g do composto activo, para

administração numa, duas ou mais vezes, conforme for apropriado. 0 médico em qualquer caso determinará a dosagem real que será mais adequada para um determinado doente e esta variará com a idade, peso e resposta desse doente. As dosagens anteriores são exemplificativas do caso médio. Podem, evidentemente, haver situações particulares que requeiram níveis de dosagem superiores ou inferiores, e estas encontram-se dentro do âmbito deste invento.

Alternativamente, o sal de L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetilanfotericina B pode ser administrado na forma de um supositório ou pessário, ou pode ser aplicado topicamente na forma de uma loção, solução, creme, pomada ou pó fino. Por exemplo, pode ser incorporado num creme que consiste numa emulsão aquosa de polietileno glicóis ou de parafina líquida; ou pode ser incorporado, a uma concentração entre 1 e 10%, numa pomada que consiste numa base de cera ou de parafina macia branca, conjuntamente com estabilizadores e preservativos, na medida do necessário.

Dentro dos níveis de dosagem indicados, não se observaram efeitos toxicológicos adversos com o sal de L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetilanfotericina Β, o que permitirá a sua administração a doentes, no sentido do tratamento de infecções fúngicas.

presente invento proporciona ainda o sal de L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetilanfotericina B para utilização como substância terapêutica activa.

Um composto para utilização como substância terapêutica activa destina-se ao tratamento de perturbações em animais, incluindo seres humanos. Como referido anteriormente, o sal de

Ί

L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetilanfotericina B possui actividade anti-fúngica e é potencialmente útil para o combate de infecções fúngicas em animais, incluindo seres humanos.

Deste modo, o presente invento proporciona ainda o sal de L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetilanfotericina B para utilização no tratamento de infecções fúngicas.

presente invento proporciona ainda um método de tratamento de infecções fúngicas em animais, incluindo seres humanos, o qual compreende a administração de uma quantidade anti-fúgica eficaz do sal de L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetilanfotericina B ao animal.

O presente invento proporciona ainda a utilização do sal de L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetilanfotericina B na manufactura de um medicamento para ser utilizado como substância terapêutica activa no tratamento de infecções fúngicas em animais, incluindo seres humanos.

presente invento proporciona ainda uma composição farmacêutica para utilização no tratamento de infecções fúngicas, a qual compreende uma quantidade anti-fungicamente eficaz do sal de L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetilanfotericina B e de um veículo farmaceuticamente eficaz.

presente invento proporciona ainda a utilização do sal de L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetilanfotericina B para o tratamento de infecções fúngicas em animais.

O Exemplo seguinte ilustra a preparação do composto do invento e as Descrições seguintes ilustram a preparação dos seus intermediários.

DESCRIÇÃO 1

N-(9-Fluorenilmetoxicarbonil)-16-decarbóxi-16-hidroximetil anfotericina B (Dl)

Uma solução de N-(9-fluorenilmetoxicarbonil)-16-descarboxi-16-hidroximetil-13-0-metil-3,5,8,9,11,15,35,2⁷,4 ⁷-nona-0-trietilsililanfotericina B (preparada como descrito na PE-375223) (25,90 g, 11,90 mmoles) em tetrahidrofurano (60 ml) foi adicionada por meio de uma cânula a uma solução de HF-piridina (preparada a partir de 26,3 g de HF-piridina e 186 ml de piridina levada até um volume de 460 ml com tetrahidrofurano) num frasco cónico de plástico. Adicionou-se o metanol (50 ml) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente. Após 20 horas, a mistura foi deitada em éter de dietilo/n-hexano (9L, 1:1). 0 produto precipitado foi recolhido por filtração, foi lavado com éter dietilico e foi seco para proporcionar um pó amarelo.

Este produto foi agitado à temperatura ambiente em tetrahidrofurano (360 ml)/água (60 ml) com p-toluenosulfonato de piridínio (18,4 g, 73,1 mmoles). Após 1,5 horas, adicionou-se trietilamina (9,66 g, 13,3 ml, 95,4 mmoles) e o tetrahidrofurano foi removido no evaporador rotativo. 0 concentrado aquoso foi diluído com água (2L) e o produto sólido foi recolhido por filtração, foi lavado com água e foi seco sob sucção. 0 produto sólido foi agitado em tetrahidrofurano/água (4:3, 100 ml) e depois foi filtrado. Este procedimento de lavagem foi repetido duas vezes e produto foi então seco para proporcionar o composto do título sob a forma de um pó amarelo brilhante (9,72 g) (Dl).

HPLC: Coluna de compressão radial, fase invertida ODS

4m Nova Pak SmmxlOcm; eluente 82% de metanol-18% de tampão

9' fosfato pH 3,5 - lml.min ¹;

comprimento de onda de detecção

350 nm; Tempo de retenção de 10,5 minutos.

DESCRIÇÃO 2

16-Decarbóxi-16-hidroximetilanfotericina B (D2)

O composto do título da Descrição 1 (9,720 g, 8,59 mmoles) foi agitado ã temperatura ambiente em DMSO (140 ml/metanol (40 ml) e adicionou-se piperidina (1,17 g, 1,36 ml, 13,7 mmoles). Ao fim de 1,25 horas, a mistura foi diluída com metanol (100 ml), foi filtrada e adicionada a éter dietílico (10 L). O produto precipitado foi recolhido por filtração, foi lavado com éter dietílico/acetato de etilo (1:1, 3x250) e foi seco para proporcionar o composto do título sob a forma de um pó amarelo (7,49 g) (D2).

Espectro de massa: FAB’ (matriz de tiodietanol/matriz de sódio) massa observada 932,5, massa calculada para C₄₇H₇₅NO_lgNa 932,5.

EXEMPLO 1

16-descarbóxi-16-hidroximetilanfotericina B - L-ascorbato (El)

Uma suspensão do composto do título da Descrição 2 (18,80 g, 20,7 mmoles) em água destilada (1,25 L) foi agitada à temperatura ambiente e adicionou-se em porções o ácido L-ascórbico (3,46 g, 19,6 mmoles) a um débito tal que o nível do pH não caiu abaixo de 5. Depois de todo ácido ascórbico ter sido adicionado (1,25 horas), a mistura foi agitada durante mais 30 minutos à temperatura ambiente, foi filtrada e depois foi seca

O- ?

X) ?

V/ por congelação para proporcionar o composto do título sob a forma de um sólido amarelo/alaranjado (22,3 g)(Èl).

dH 400 MHz (CD^OD/Dô-DMSO, 3:1):6,51-6,12 (12H, séries de m) , 6,05 (1H, dd, J 8,6, 15,2 Hz), 5,44-5,31 (2H, m), 4,64 (lH,s),

4,35 (lH,d,J 3,3 Hz), 4,34 (lH,m), 4,24 (lH,m), 4,15 (lH,tt,J 3,4, 9,2 Hz), 3,94 (1H, dt, J 4,7, 10,8 Hz), 3,90 (1H, m), 3,77 (3H, m), 3,67 (lH,m), 3,64-3,55 (3H,m), 3,32 (lH,m), 3,17 (2H,m), 2,99 (lH,m), 2,44-2,33 (2H,m), 2,27 (1H, dd, J 9,3, 16,9 Hz),

2,19 (1H, dd, J 3,1, 16,8 Hz), 1,98 (1H, dd, J 4,8, 12,1 Hz),

1,82-1,28 (14H, série de m), 1,26 (3H, d, J 5,9 Hz), 1,18 (3H, d, J 6,4 Hz), 1,10 (3H, d, J 6,4 Hz), 0,99 (3H, d, J 7,1 Hz) ppm. Dois protões dissimulados por solvente.

Claims

ia.- Sal de L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetil-anfotericina B.
2 a.- Sal de L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetil-anfotericina B na sua forma praticamente pura.
3 a.- Sal de L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetil-anfotericina B, com uma pureza maior do que 95%.
4a.- Sal de L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetil-anfotericina B, com uma pureza maior do que 90%.
5a.- Sal de L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetil-anfotericina B, com uma pureza maior do que 80%.
6a.- Processo para a preparação do sal de L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetilanfotericina B, caracterizado por compreender a reacção da base livre ou de um sal diferente do L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetilanfotericina B em solução com o ácido L-ascórbico e o isolamento do produto resultante.
7a.~ Processo para a preparação do sal de L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroxímetilanfotericina B ou da sua base livre, caracterizado por compreender a redução selectiva de um composto de fórmula (II) :

em que R ' é um derivado do ácido carboxílico activado; R^' é alquilo C₁__g; ' é um grupo de protecção de amina; e cada R^^z ê um grupo de protecção de sililo; e subsequentemente, facultativamente ou na medida do necesssário e por qualquer ordem apropriada, a conversão de R₂' em hidrogénio, a remoção de qualquer grupo de protecção de amina e a remoção de qualquer grupo de protecção de sililo R ' e subsequentemente, se necessário, realização do processo como definido na reivindicação 6.

83,- Processo de acordo com a reivindicação 6 ou 7, caracterizado por o sal de L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetil-anfotericina B ser isolado por secagem por congelação.
9â.- Composição farmacêutica caracterizada por compreender o sal de L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetilanfotericina B, conjuntamente com um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.
10-.— Método de tratamento de infecções fúngicas em animais, caracterizado por compreender a administração de uma < .· quantidade anti-fúngica eficaz do sal de L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetilanfotericina B ao animal.
11^a.- Utilização do sal de L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetilanfotericina B caracterizado por o referido sal ser utilizado na manufactura de um medicamento para utilização como substância terapêutica activa para o tratamento de infecções fúngicas em animais.
12 a.- Composição farmacêutica para utilização no tratamento de infecções fúngicas em animais, caracterizada por compreender uma quantidade eficaz do sal de L-ascorbato de 16-descarbóxi-16-hidroximetilanfotericina B na forma de um veículo farmaceuticamente aceitável.
13^a.- Utilização do sal de L-ascorbato de 16-descarbõxi-16-hidroximetilanfotericina B caracterizado por o referido sal ser utilizado no tratamento de infecções fúngicas em animais.