PL97676B1 - Sposob kondycjonowania komorek bakteryjnych zawierajacych aktywna izomeraze glikozy - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób kondycjono¬ wania komórek bakteryjnych, zawierajacych ak¬ tywna izomeraze glikozy, przeznaczonych do uzytku przy wytwarzaniu produktu, zawierajacego fruk¬ toze.

Wiadomo, ze enzym izomerazy glikozy mozna stosowac jako katalizator konwersji glikozy (dek¬ strozy) we fruktoze (lewuloze), która jest slodsza niz material wyjsciowy. Izomeraze glikozy otrzy¬ muje sie, jak wiadomo, przez hodowanie róznych bakterii, takich jak Streptomyces flavovirens;.

Streptomyces echinatur, Streptomyces achromoge- nus, Streptomyces olivaceus itp., w odpowiednim srodowisku odzywczym. Izomeraza glikozy po¬ wstaje poczatkowo wewnatrz komórek bakteryj¬ nych, wzrastajacych podczas produkcji. Niektóre szczepy wytwarzaja znaczna ilosc enzymu poza- komórkowego. Na ogól jest korzystne, aby poza- komórkowa aktywnosc enzymu byla nieznaczna, fcomórki odsacza sie nastepnie z brzeczki fermen¬ tacyjnej i uzywa bezposrednio jako zródlo izome¬ razy glikozy.

Byloby pozadane, aby komórki bakteryjne, zawie¬ rajace aktywna izomeraze glikozy, nadawaly sie do uzytku w ciaglym procesie izomeryzacji glikozy do fruktozy. Dotychcza*s, znane sa rózne sposoby unieruchamiania tego enzymu tak, aby mógl byc ponownie uzyty w procesie ciaglym. Jeden z ko¬ rzystnych sposobów polega na dzialaniu na ko¬ mórki bakteryjne aldehydem blutarowym. Zabieg 30 ten unieruchamia izomeraze glikozy wewnatrz ko¬ mórek i powoduje, ze komórki te nadaja sie do stosowania w reaktorze z mieszaniem lub w ko¬ lumnie do izomeryzacji. Stwierdzono jednakze, ze dopóki komórki bakteryjne, zawierajace unieru¬ chomiona aktywna izomeraze glikozy, nie zostana poddane odpowiedniemu kondycjonowaniu przed uzyciem jako katalizatory izomeryzacji, wykazuja niezadawalajaca trwalosc fizyczna, pogarszajac cha¬ rakterystyke hydrauliczna kolumny, otrzymany izo- meryzowany syrop moze miec nieodpowiednie za¬ barwienie, a czas dzialania enzymu moze byc zbyt ograniczony.

Sposób kondycjonowania komórek bakteryjnych, zawierajacych aktywna izomeraze glikozy, przezna¬ czonych do uzytku przy wytwarzaniu produktu, zawierajacego fruktoze, polega na mieszaniu ko¬ mórek bakteryjnych w temperaturze 10—27DC z woda lub wodnym roztworem dekstrozy o war¬ tosci pH, mierzonej w temperaturze 25°C okolo 8, do czasu, az komórki zostana uwodnione, a war¬ tosc pH zrównowazy sie i przepuszczeniu ku gó¬ rze, przez warstwe komórek bakteryjnych, w tem¬ peraturze okolo 60°C wodnego roztworu dekstrozy o wartosci pH, mierzonej w temperaturze 60°C, wynoszacej 7,5—8,0, do czasu, az otrzyma sie przezroczysty odciek o wartosci pH; ustabilizowa¬ nej na poziomie 7,5—8,0, mierzonej w tempera¬ turze 60°C lub przepuszczeniu ku górze przez warstwe komórek bakteryjnych, w temperaturze 97 676•3 97676 4 —27°C wody o wartosci pH, mierzonej w tem¬ peraturze 25°C, wynoszacej 8,0, do czasu, az otrzy¬ ma sie przezroczysty odcinek o wartosci pH, usta¬ bilizowanej na poziomie 8,0, mierzonej w tempe¬ raturze 25°C, a nastepnie przepuszczeniu ku górze, przez warstwe komórek bakteryjnych, w tempera¬ turze okolo 60°C wodnego roztworu dekstrozy o wartosci pH, mierzonej w temperaturze 60°C, wynoszacej 7,5—8,0, do czasu, az odciek bedzie mial te sama zawartosc dekstrozy, co roztwór wprowadzany.

Komórki bakteryjne, posiadajace izomeraze gli- kozy, nadajace sie do stosowania w sposobie wedlug wynalazku, mozna otrzymac dobrze 'znanymi spo¬ sobami. Korzystne komórki bakteryjne, zawieraja¬ ce enzym, otrzymuje sie przez hodowle podpo- wierzchniowa, w warunkach aerobowych Strepto- myces olivaceus NRRL 3583 lub jego mutantów, w srodowisku odpowiedniej pozywki. Otrzymane komórki bakteryjne oddziela sie od brzeczki fer¬ mentacyjnej przez saczenie lub wirowanie.

Do unieruchomienia izomerazy glikozy mozna za¬ stosowac rózne dobrze znane sposoby. Korzystny sposób polega na wytwarzaniu zawiesiny otrzyma¬ nych z hodowli komórek bakteryjnych w srodo¬ wisku wodnym i mieszaniu ich z aldehydem glu- tarowym, w ilosci 0,1—50% wagowych w stosunku do ciezaru suchych komórek.

Poniewaz wstepnie przygotowane komórki bakte¬ ryjne, zawierajace enzym, otrzymuje sie zazwyczaj w róznych miejscach i wczesniej, niz wymaga tego proces izomeryzacji syropu, zwykle suszy sie je przed zmagazynowaniem lub przewozem. Suszenie da zawartosci wilgoci 3—10% wagowych prowadzi sie w zwyklej suszarce, w temperaturze 60—70°C.

Otrzymane zaglomerowane i wysuszone komórki przesiewa sie przed uzyciem jako warstwa w ko¬ lumnie. Zaglomerowana i wysuszona mase roz¬ drabnia sie zwykle na mniejsze czastki, stosujac jak najmniejsze sily na poszczególne komórki i czastki te przenosi sie na sita w celu otrzymania frakcji, pozostajacej na sicie 0,25 mm, a przecho¬ dzacej przez sito 0,84 mm.

Jezeli otrzymane w ten sposób aglomeraty ko¬ mórek maja byc uzyte do wytwarzania z dekstro¬ zy syropu, zawierajacego fruktoze, to zgodnie z do¬ tychczasowa praktyka umieszczano je w kolumnie i rozpoczynano przepuszczanie roztworu dekstrozy w dól kolumny, zachowujac odpowiednie warunki temperatury i wartosci pH. Zwykle ustabilizowa¬ nie reakcji izomeryzacji na wzglednie stalym po¬ ziomie zabiera dosc duzo czasu. W tym czasie otrzymuje sie syrop o nieodpowiednim zabarwie¬ niu, a ponadto stwierdzono, ze uzyteczny czas zy¬ cia komórek jest bardzo krótki.

Zgodnie ze sposobem wedlug wynalazku komórki najpierw miesza sie z woda lub z wodnym roztwo¬ rem dekstrozy. Roztwór dekstrozy moze skladac sie z dekstrozy, rozpuszczonej w wodzie, a ko¬ rzystnie zawiera mocno scukrzony roztwór dekstro¬ zy, otrzymany na drodze enzymatycznej konwersji skrobii. Roztwór dekstrozy powinien zawierac 30— 50% wagowych rozpuszczonych cial stalych, w któ¬ rych 93—96% stanowi dekstroza, a jego równo¬ waznik dekstrozowy wynosi 97—98. Wode lub wod¬ ny roztwór dekstrozy stosuje sie w ilosci okolo czesci wagowych na 1 czesc wagowa wysuszo¬ nych komórek. Woda lub wodny roztwór dekstrozy maja temperature 10—27°C. Roztwory te powinny takze zawierac okolo 0,0005 molowe stezenie ko¬ baltu, np. w postaci chlorku kobaltu, 0,005—0,007 molowe stezenie magnezu, np. w postaci wodoro¬ tlenku magnezu i okolo 0,01 normalne stezenie czynnika chelatujacego i buforujacego, takiego jak 0 kwas cytrynowy. Kwas cytrynowy jest korzystny, poniewaz tworzy rozpuszczalne kompleksy chela- towe z jonami kobaltu i magnezu, i pomaga w bu¬ forowaniu wody lub roztworu dekstrozy na potrzeb¬ nej wartosci pH. Wartosc pH wody lub roztworu dekstrozy, mierzona w temperaturze 25°C, powin¬ na wynosic 8. Wartosc te uzyskuje sie dogodnie przez dodanie odpowiedniej ilosci wodorotlenku sodu. Komórki kontaktuje sie z woda lub wodnym roztworem dekstrozy, lekko mieszajac, w ciagu }0 okolo 1 godziny w celu doprowadzenia do odpo¬ wiedniego uwodnienia komórek i zrównowazenia wartosci pH.

Otrzymana w ten sposób zawiesine komórek w wodzie lub wodnym roztworze dekstrozy wpro- wadza sie nastepnie do kolumny reakcyjnej z plasz¬ czem i formuje sie warstwe o glebokosci osadze¬ nia 89—100 cm. W celu ograniczenia jakichkolwiek uszkodzen mechanicznych aglomeratów komórko¬ wych wskazane jest lekkie mieszanie zawiesiny. i0 Proces mozna prowadzic w ten sposób, ze roztwór dekstrozy, opisany powyzej o wartosci pH, mie¬ rzonej w temperaturze 60°C, wynoszacej 7,5—8,0, przepuszcza sie w temperaturze 60°C ku górze, przez warstwe komórek z szybkoscia 53—61 l/m- powierzchni przekroju poprzecznego warstwy/min.

Przy tej predkosci przeplywu nastepuje 50—60% .objetosciowych ekspansji osadzonej objetosci aglo¬ meratów komórek. Ponadto, powoduje ona odpo¬ wiednia klasyfikacje i przegrupowanie aglomera- 40 tów komórek. Od chwili, kiedy do warstwy za¬ czyna przenikac roztwór dekstrozy, odpowiedni plyn grzejny, o temperaturze 60°C przepuszcza sie przez plaszcz kolumny. Odciek ze szczytu kolumny zawiera znaczna ilosc substancji barwnych, ponie- 45 waz znajduja sie w nim rózne pozostalosci komó¬ rek bakteryjnych. Goracy roztwór dekstrozy po¬ winno sie przepuszczac ku górze kolumny, do czasu., az wyplyw stanie sie przezroczysty, a jego war¬ tosc pH, mierzona w temperaturze 60°C, ustabili- 50 zuje sie na poziomie 7,5—8,0. Wymaga to przeply¬ wu okolo 2—3 objetosci roztworu na godzine w cia¬ gu 1—3 godzin.

Nastepnie wstrzymuje sie przeplyw roztworu dekstrozy i pozwala sie na osadzenie sie warstwy 55 komórek. W celu ograniczenia ilosci roztworu dek¬ strozy, potrzebnej do kondycjonowania, wiekszosc odprowadzanego roztworu dekstrozy, z wyjatkiem poczatkowej czesci silnie zabarwionego roztworu, mozna ponownie wprowadzac do kolumny. Wartosc 60 pH zawracanego roztworu, mierzona w tempera¬ turze 60°C, musi byc doprowadzona do 7,5—8,0 do¬ datkiem substancji alkalicznej przed ponownym uzyciem. Alternatywnie, proces mozna prowadzic nej dziala sie poczatkowo woda, przepuszczajac 65 w ten sposób, ze na komórki w kolumnie reakcyj-* 9787* * roztwór wodny o takim samym skladzie, jak opi¬ sany powyzej, w temperaturze 10—27°C i przy wartosci pH, mierzonej w temperaturze 25°C, wy¬ noszacej 8,0, ku górze przez warstwe komórek, do czasu, az odcinek bedzie przezroczysty, a jego war¬ tosc pH, mierzona w temperaturze 25°C, ustabili¬ zuje sie na poziomie 8,0, a nastepnie przepuszczajac wodny roztwór dekstrozy o takim samym skladzie, jak opisany powyzej, w temperaturze okolo 60°C i przy wartosci pH, mierzonej w temperaturze 60°C, wynoszacej 7,5—8,8, do czasu, az odcinek bedzie mial te sama zawartosc dekstrozy, co roztwór wprowadzany.

Podczas procesu roztwór wodny i wodny roztwór dekstrozy zawraca sie do obiegu, przy czym war¬ tosc pH zawracanych roztworów nastawia sie na odpowiednim poziomie dodatkiem substancji alka¬ licznej przed ponownym uzyciem.

Wszystkie roztwory dekstrozy kontaktujace sie z komórkami bakteryjnymi, posiadajacymi aktywna izomeraze glikozy, zawieraja pewna ilosc fruktozy, która powstaje na drodze izomeryzacji. Dlatego tez, roztwory fruktozy, stosowane w procesie kondycjo¬ nowania mozna odbarwiac weglem, odmineralizo- wac na wymieniaczach jonowych, a nastepnie sto¬ sowac jako skladniki produktów, zawierajacych fruktoze.

Komórki, kondycjonowane sposobem wedlug wy¬ nalazku, stosuje sie w dobrze znanych metodach produkcji izomeryzowanego syropu. Roztwór dek¬ strozy o podanym wyzej skladzie mozna przepusz¬ czac przez zloze w dól, przy wartosci pH okolo 8 i w temperaturze okolo 60°C w celu otrzymania produktu, zawierajacego, w zaleznosci od szybkosci przeplywu, 42—48°/o wagowych fruktozy. Aglome¬ raty komórek, kondycjonowanych sposobem wedlug wynalazku, posiadaja nieoczekiwanie wysoka trwa¬ losc fizyczna i dobra charakterystyke hydrauliczna, doskonale odpowiadajaca stosowaniu we wzglednie glebokich warstwach rzedu 76—102 cm. Dla porów¬ nania komórki, przygotowywane wstepnie znanymi metodami, maja zastosowanie ograniczone do warstw plytkich rzedu 1,3—10,2 cm, przy gra¬ nicznie duzej powierzchni.

Sposób wedlug wynalazku opisany jest doklad¬ niej w nastepujacych przykladach.

Przyklad I. Brzeczke fermentacyjna, zawie¬ rajaca komórki bakteryjne Streptomyces olivaceus NRRL 3583, otrzymano przez hodowanie komórek w znany sposób, w srodowisku zawierajacym ksy- loze. Wartosc pH brzeczki fermentacyjnej dopro¬ wadzono do 8,2, dodajac wodorotlenek sodu. Do brzeczki dodano 1% (w stosunku ciezar/objetosc) roztwór wodny aldehydu glutarowego w ilosci 7°/o wagowych aldehydu w stosunku do suchej masy komórek, zawartych w brzeczce. Calosc mieszano w ciagu 1 i 1/2 godziny i w tym czasie dodano wo¬ dorotlenek sodu w celu utrzymania wartosci pH= —8,2. Komórki odsaczono, przemyto woda o war¬ tosci pH = 8 i wysuszono w. temperaturze 60— 70°C, do zawartosci wilgoci 3—10% wagowych.

Wysuszony placek filtracyjny zaglomerowanych ko¬ mórek rozdrobniono i zbierano na sitach w ce]u otrzymania frakcji, pozostajacej na sicie 0,25 mm, a przechodzacej prze2 sita Dv84 mm. Otrzymane su¬ szone aglomeraty komórek bakteryjnych o odpo¬ wiednich rozmiarach, zawierajace unieruchomiona izomeraze glikozy, mozna przechowywac w tem¬ peraturze pokojowej przed dalszym uzyciem. 300 g przechowywanych w ten sposób komórek mieszano z wodnym syropem dekstrozy, otrzyma¬ nym na drodze enzymatycznej ze skrobi. Syrop mial równowaznik dekstrozowy 97 i zawieral 30% wagowych rozpuszczonych cial stalych, w których 94% wagowych stanowila dekstroza. Syrop mial temperature 10—27°C i zastosowano go w ilosci czesci wagowych na 1 czesc wagowa suszor nych komórek. Syrop zawieral ponadto okolo 0,0005 molowe stezenie chlorku kobaltu, okolo 0,005—0,007 molowe stezenie wodorotlenku mag¬ nezu i okolo 0,01 normalne stezenie kwasu cytry¬ nowego. W celu utrzymania wartosci pH syropu dekstrozy, mierzonej w temperaturze 25°C na po¬ ziomie 8, dodano odpowiednia ilosc wodorotlenku M sodu.~4Comórki utrzymywano w kontakcie z roz¬ tworem dekstrozy w ciagu okolo 1 godz., azeby pozwolic na odpowiednie uwodnienie i zrównowa¬ zenie wartosci pH.

Otrzymana zawiesine komórek w roztworze dek- • jj strozy przeniesiono do odpowiedniej kolumny re¬ akcyjnej z plaszczem o srednicy 38 mm i ufor¬ mowano warstwe komórek o grubosci osadzenia 89—100 cm. W celu ograniczenia jakichkolwiek uszkodzen mechanicznych uwodnionych komórek w zawiesine lekko mieszano. Roztwór dekstrozy 0 tym samym skladzie, jak podany powyzej, o war¬ tosci pH, mierzonej w temperaturze 60°C, wyno¬ szacej 7,5—8,0, przepuszczano w temperaturze 60°C ku górze przez warstwe komórek z szybkoscia 53—61 l/m2 powierzchni przekroju poprzecznego warstwy/min. Od chwili, kiedy do warstwy zaczal przenikac roztwór dekstrozy, odpowiedni plyn grzejny o temperaturze 60°C przepuszczano przez plaszcz kolumny. Goracy roztwór dekstrozy prze- 40 puszczano przez kolumne ku górze, w ciagu okolo 1 godziny, zanim odciek z kolumny byl przezro¬ czysty i zanim wartosc pH tego roztworu, mie¬ rzona w^temperaturze 60°Ó, ustabilizowala sie na poziomie 7,8—8,0. Wstrzymano przeplyw roztworu 41 dekstrozy i pozwolono na osadzenie sie warstwy komórek w ciagu 15—20 min. W czasie tego pro¬ cesu kondycjonowania roztwór dekstrozy byl za¬ wracany do obiegu, przy czym wartosc pH zawra¬ canego roztworu dekstrozy, mierzona w tempera- 5o turze 60°C, utrzymywano na poziomie 7,5—8,0, do¬ dajac wodorotlenek sodu. Gdyby dopuszczono do obnizenia sie pH w czasie kondycjonowania do wartosci nizszej niz 7, mierzonej w temperaturze 60°C, spowodowaloby to fizyczne zniszczenie aglo- 55 meratów komórek.

Warstwa komórek po opisanej obróbce byla go¬ towa do zastosowania do izomeryzacji dekstrozy do fruktozy. Roztwór dekstrozy o tym samym skladzie, jak podany wyzej, przepuszczano ku do- 60 lowi kolumny, pod dzialaniem sil grawitacyjnych, przy cisnieniu górnym 10,2—15,2 cm roztworu, przez otrzymana warstwe w temperaturze 60°C i z szyb¬ koscia 22 l/m2 powierzchni przekroju poprzecznego warstwy/godz. Wartosc pH roztworu dekstrozy, 6$ mierzona w temperaturze 60°C, utrzymywano na7 97676 ¦ " " - 8 poziomie 8, dodajac wodorotlenek sodu. Otrzymano izomeryzowany syrop, zawierajacy 42—43% wago¬ wych fruktozy w stosunku do ciezaru rozpuszczo¬ nych cial stalych, nie zabarwiony i nie zawiera¬ jacy psykozy. Kiedy szybkosc przeplywu dekstro- zy zmieniono na 1,1 objetosci warstwy/godz., czyli 16,3 l/m2/godz. otrzymano produkt zawierajacy 45—46% wagowych fruktozy, w stosunku do ciezaru rozpuszczonych cial stalych, nie zabarwiony i nie zawierajacy psykozy.

Otrzymana w opisany sposób warstwe komórek stosowano w sposób ciagly do izomeryzacji przez ponad 1000 godzin i aktywnosc aglomeratów obni¬ zyla sie w niewielkim stopniu. Komórki, otrzymane znanymi sposobami, a nie poddawane kondycjono¬ waniu sposobem wedlug wynalazku traca co naj¬ mniej polowe aktywnosci enzymatycznej po 500— 600 godzinach ciaglego uzywania.

Przyklad II. Wedlug wstepnej czesci przy¬ kladu I otrzymano 300 g suszonych aglomeratów komórek, zawierajacych unieruchomiona izomeraze glikozy. Przygotowano wodny roztwór zawierajacy okolo 0,0005 molowe stezenie chlorku kobaltu, 0,005—0,007 molowe stezenie wodorotlenku magnezu, okolo 0,01 normalne stezenie kwasu cytrynowego i odpowiednia ilosc wodorotlenku sodu do utrzy¬ mania wartosci pH, mierzonej w temperaturze °C, na poziomie 8. Wysuszone komórki zmiesza¬ no z roztworem wodnym, w temperaturze 10—27°C, w stosunku 10 czesci wagowych roztworu wodnego na 1 czesc wagowa wysuszonych komórek. Komórki kontaktowano z roztworem wodnym w ciagu okolo 1 godziny w celu odpowiedniego uwodnienia ko¬ mórek i zrównowazenia wartosci pH.

Otrzymana zawiesine, zlozona z komórek i roz¬ tworu wodnego, wprowadzono do kolumny reak¬ cyjnej z plaszczem o srednicy 38 mm i uformowano warstwe komórek o glebokosci osadzenia 100 cm.

W celu ograniczenia jakichkolwiek uszkodzen me¬ chanicznych uwodnionych komórek zawiesine lekko mieszano. Roztwór wodny o tym samym skladzie, jak podany powyzej, o wartosci pH, mierzonej w temperaturze 25°C, wynoszacej 8, przepuszczo¬ no w temperaturze 10—27°C ku górze przez warstwe komórek z szybkoscia 53—61 l/m2 po¬ wierzchni przekroju poprzecznego warstwy/min.

Roztwór przepuszczano przez kolumne ku górze, w ciagu okolo 1 godziny, zanim wyciek byl prze¬ zroczysty i zanim wartosc pH roztworu, mierzona w temperaturze 25°C ustabilizowala sie na po¬ ziomie 8,0. Wstrzymano przepuszczanie roztworu, a nastepnie rozpoczeto przepuszczanie roztworu dekstrozy, opisanego w przykladzie I, w tempera¬ turze 60°C, który mial wartosc pH, mierzona w temperaturze 60°C, równa 7,5—8,0, przez war¬ stwe komórek ku górze, z szybkoscia 53—61 l/m2 powierzchni przekroju poprzecznego warstwy/min do czasu, az wyplywajacy roztwór mial te sama zawartosc dekstrozy, co roztwór wprowadzany.

Od chwili, kiedy roztwór dekstrozy zaczal prze¬ nikac do warstwy, rozpoczeto przepuszczanie od¬ powiedniego plynu grzejnego przez plaszcz kolum¬ ny. Przepuszczanie roztworu dekstrozy wstrzymano i pozwolono na osadzenie sie warstwy komórek w ciagu 15—20 min. W czasie tego procesu kon¬ dycjonowania roztwór wodny i wodny roztwór dekstrozy zawracano do obiegu. Wartosc pH za¬ wracanego do obiegu roztworu wodnego i wod¬ nego roztworu dekstrozy utrzymywano odpowied- nio na poziomie 8 przy pomiarze w temperaturze °C i 7,5—8,0 przy pomiarze w temperaturze 60°C, dodajac wodorotlenek sodu.

Otrzymana kondycjonowana warstwe komórek stosowano do izomeryzacji dekstrozy do fruktozy w sposób, opisany w przykladzie I, uzyskujac izo¬ meryzowany syrop, zawierajacy 42—43% wagowych fruktozy, nie zabarwiony i nie zawierajacy psy¬ kozy. Zgodnie z oczekiwaniami kondycjonowana w opisany sposób warstwa komórek byla bardzo trwala.

Claims (12)

Zastrzezenia patentowe

1. Sposób kondycjonowania komórek bakteryi-

2. | nych, zawierajacych aktywna izomeraze glikozy, przeznaczonych do uzytku przy wytwarzaniu pro¬ duktu, zawierajacego fruktoze, znamienny tym, ze komórki bakteryjne miesza sie w temperaturze 10—27°C z wodnym roztworem dekstrozy o war- 25 tosci pH, mierzonej w temperaturze 25°C, okolo 8, do czasu, az komórki zostana uwodnione, a war¬ tosc pH zrównowazy sie i przez warstwe komórek bakteryjnych przepuszcza sie ku górze, w tempe¬ raturze okolo 60°C, wodny roztwór dekstrozy 30 o wartosci pH, mierzonej w temperaturze 60°C, wynoszacej 7,5—8,0, do czasu, az otrzyma sie przezroczysty odciek o wartosci pH, ustabilizowa¬ nej na poziomie 7,5—8,0, mierzonej w tempera¬ turze 60°C. 35 2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze stosuje sie wodny roztwór dekstrozy, którego rów¬ nowaznik dekstrozowy wynosi 97—98, zawierajacy 30—50% wagowych rozpuszczalnych substancji sta¬ lych, w których 93—96% wagowych stanowi dek- 40 stroza.

3. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze komórki bakteryjne, zawierajace aktywna izome¬ raze glikozy, traktuje sie wstepnie aldehydem glu- tarowym. 45

4. Sposób wedlug zastrz. 3, znamienny tym, ze komórki bakteryjne przed traktowaniem aldehy¬ dem glutarowym suszy sie i sortuje, odbierajac frakcje, pozostajaca na sicie 0,25 mm, a przecho¬ dzaca przez sito 0,84 mm. 50

5. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze przez warstwe komórek bakteryjnych przepuszcza sie wodny roztwór dekstrozy z szybkoscia 53— 61 l/m2 powierzchni przekroju poprzecznego war¬ stwy/min. 55 6. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze przez warstwe komórek bakteryjnych przepuszcza sie wodny roztwór dekstrozy, zawierajacy okolo 0,0005 molowe stezenie kobaltu, okolo 0,005—0,007 molowe stezenie magnezu i okolo 0,01 normalne

6. ° stezenie kwasu cytrynowego.

7. Sposób kondycjonowania komórek bakteryj¬ nych, zawierajacych aktywna izomeraze glikozy, przeznaczonych do uzytku przy wytwarzaniu pro¬ duktu, zawierajacego fruktoze, znamienny tym, ze 65 komórki bakteryjne miesza sie w temperaturze9 97 676 10 10—27°C z woda o wartosci pH, mierzonej w tem¬ peraturze 25°C, okolo 8, do czasu, az komórki zo¬ stana uwodnione, a wartosc pH zrównowazy sie i przez warstwe komórek bakteryjnych przepuszcza sie ku górze, w temperaturze 10—27°C, wode o war¬ tosci pH, mierzonej w temperaturze 25°C, wynosza¬ cej 8,0, do czasu, az otrzyma sie przezroczysty od¬ ciek o wartosci pH, ustabilizowanej na poziomie 8,0, mierzonej w temperaturze 25°C, a nastepnie przez warstwe komórek przepuszcza sie ku górze, w tem¬ peraturze 60°C wodny roztwór dekstrozy o war¬ tosci pH, mierzonej w temperaturze 60°C, wyno¬ szacej 7,5—8,0, do czasu, az odciek bedzie mial te sama zawartosc dekstrozy, co roztwór wprowa¬ dzany.

8. Sposób wedlug zastrz. 7, znamienny tym, ze stosuje sie wodny roztwór dekstrozy którego rów¬ nowaznik dekstrozowy wynosi 97—98, zawierajacy 30—50% wagowych rozpuszczalnych substancji sta¬ lych, w których 93—96% wagowych stanowi dek- stroza.

9. Sposób wedlug zastrz. 7, znamienny tym, ze komórki bakteryjne, zawierajace aktywna izome- raze glikozy, traktuje sie wstepnie aldehydem glu- tarowym.

10. Sposób wedlug zastrz. 7, znamienny tym, ze komórki bakteryjne przed traktowaniem aldehy¬ dem glutarowym suszy sie i sortuje, odbierajac frakcje, pozostajaca na sicie 0,25 mm, a przecho¬ dzaca przez sito 0,84 mm.

11. Sposób wedlug zastrz. 7, znamienny tym, ze przez warstwe komórek bakteryjnych przepuszcza sie w drugim etapie wode z szybkoscia 53—61 l/m2 powierzchni przekroju poprzecznego warstwy/min.

12. Sposób wedlug zastrz. 7, znamienny tym, ze przez warstwe komórek bakteryjnych przepuszcza sie wode, zawierajaca okolo 0.0005 molowe steze¬ nie kobaltu, okolo 0,0005—0,007 molowe stezenie magnezu i okolo 0,01 normalne stezenie kwasu cytrynowego. 10 15