Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarza¬ nia pochodnych kwasu L-a-hydrazyno-P-fenylopro- pionowego.Wytwarzane sposobem wedlug wynalazku nie¬ znane dotychczas zwiazki o ogólnym wzorze 1, w którym R1 i R2 oznaczaja atom wodoru, grupe hy¬ droksylowa lub alkoksylowa o 1—6 atomach we¬ gla, fenoksylowa lub benzyloksylowa, R8 i R4 ozna¬ czaja atom wodoru lub rodnik alkilowy o 1—6 ato¬ mach wegla, R5 oznacza atom wodoru, atom metalu lub rodnik alkilowy o 1—6 atomach wegla, sa cen¬ nymi srodkami leczniczymi. Racematy kwasów a- hydrazyno-p -(3,4-dwuhydroksyfenylo)propiono- wych podstawionych w pozycji a i ich estry sa znane jako silne inhibitory dzialania dekarboksy- lazy u ssaków (Sletzinger, „Journal of Medicinal Chemistry", 6, 101 (1963) i Porter „Biochemical Pharmacology", li, 1067 (1962). Takie zwiazki zna¬ lazly zastosowanie jako srodki lecznicze.Stwierdzono, ze D-izomer mieszaniny racemicz- nej jest nieaktywny, a nawet w pewnym stopniu przeciwdziala dzialaniu L-izomeru, który jest ak¬ tywnym skladnikiem mieszaniny. Na podstawie pe¬ wnych testów stwierdzono, ze L-izomer jest jedy¬ nym skladnikiem aktywnym racematu, natomiast D-izomer jest nieaktywny. Inne testy wykazaly, ze X-izomer przeciwdziala i zmniejsza dzialanie L- -izomeru. Celem wiec wynalazku bylo otrzymanie czystego L-izomeru, który okazal sie duzo silniej- szym inhibitorem dzialania dekarboksylazy niz do¬ tychczas znane zwiazki.Zahamowanie dzialania dekarboksylazy u ssaków jest wazna czescia dzialania fizjologicznego wielu typów farmaceutyków, co zilustrowano na przy¬ kladzie leczenia choroby Parkinsona przy uzyciu L-dopa. Zwiazek ten zuzywany jest zarówno w mózgu jak i w obwodowych czesciach ciala, ale pozadane jest by byl zuzywany jedynie w mózgu.Hydrazynozwiazki nie przechodza z krwia do mó¬ zgu i dlatego inhibituja dzialanie dekarboksylazy jedynie w obwodowych czesciach ciala. Tak wiec, jezeli L-dopa stosuje sie wraz ze zwiazkami hy¬ drazyny otrzymywanymi sposobem wedlug wyna¬ lazku dzialanie dekarboksylazy na L-dopa jest in- hibitowane w obwodowych czesciach ciala, wsku¬ tek czego wiecej L-dopa moze byc wykorzystane w mózgu. W wyniku tego mniejsze ilosci L-dopa sa potrzebne do skutecznego leczenia.Zahamowanie dzialania dekarboksylazy jest rów¬ niez wazne w leczeniu zaburzen grubego jelita. U pewnych osób komórki jelit, i byc moze i inne, przejawiaja nadaktywnosc w produkcji serotoniny z 5-hydroksytryptofanu. W wyniku takiej obfitosci serotoniny nastepuje stale zaczerwienienie okrez- nicy i usuwanie zawartosci jelit. Jezeli tego sie nie leczy, moga nastapic powazne schorzenia. Inhibi¬ tory dzialania dekarboksylazy chronia przed two¬ rzeniem serotoniny i dlatego mozna je stosowac przy leczeniu biegunki. Szczególnie korzystne sa 96 93396 933 3 4 inhibitory dzialania dekarboksylazy takiej jak hy- drazynozwiazki otrzymywane sposobem wedlug wy¬ nalazku, a zwlaszcza te, które nie sa aktywne fizjologicznie w innych kierunkach.Zwiazki otrzymywane sposobem wedlug wyna¬ lazku hamuja nie tylko dzialanie dekarboksylazy dwuoksyfenyloalaniny, lecz równiez dekarboksylazy histydyny. Tak wiec mozna je równiez uzywac jako srodki przeciwhistaminowe.Jak juz wspomniano, zwiazki otrzymywane spo¬ sobem wedlug wynalazku odpowiadaja wzorowi ogólnemu 1. Szczególnie korzystne sa takie kwasy propionowe, w których w pozycji a znajduje sie atom wodoru, rodnik metylowy lub etylowy. Kwas L-a-hydrazyno-a-wodoro- lub alkilo-P-(3,4-dwuhy- droksyfenylo)-propionowy jest aktywny przy stoso¬ waniu go u ssaków w ilosciach od 0,05 do 100 mg/ /kg/dzien.Omawiane zwiazki mozna stosowac równiez w postaci dopuszczalnych w lecznictwie soli, takich jak sole metali alkalicznych i sole amonowe grup karboksylowych lub chlorowodorki, siarczany itp. grup aminowych. Korzystnie jest jednak stosowac wolne aminokwasy zamiast ich soli.Aktywnosc biologiczna zwiazków badano wedlug opisanych ponizej testów.Badania hamowania dzialania dekarboksylazy u ssaków W tescie stosowano biale myszki plci zenskiej wazace 18—22 g. Zwierzetom doustnie podawano L-dopa (L-3,4-dwuhydroksyfenyloalanine) w ilosci 80 mg/kg w polaczeniu z wyzej podanymi dawkami kwasu L-a -hydrazyno-a -metylo-p -(3,4-dwuhydro- ksyferty!o)propionowego w postaci roztworu lub za¬ wiesiny wodnej. Po 90 min. zwierzetom odcinano glowy, usuwano mózg i zbierano w grupach po 7 sztuk. Trzy oddzielne grupy traktowano w rózny sposób lekami i otrzymane wartosci usredniano.Mózgi homogenizowano 0,4 n kwasem nadchloro¬ wym w ilosci 9 ml/g tkanki. Katecholoaminy i ka- techoloaminokwasy adsorbowano na tlenku glinu a nastepnie eluowano.Dopa i dopamine rozdzielano chromatograficznie, stosujac kolumne zawierajaca zywice jonowymien¬ na typu Amberlite CG-50 o rozmiarach 200—400 mesh. Nastepnie dopa i dopamine utleniano jodem w celu fluorymetrycznego oznaczenia zawartosci dopa i dopaminy zgodnie ze sposobem opisanym w A.J. Pharmac. Exp. Therap. 150, 17 (1965) (Por¬ ter, Totaro i Bercin).Uzyskane srednie wyniki z 3 prób podano w ta¬ blicy 1.Tablica I Próba kontrolna Racemat L-izomer Dawka mg/kg Dopa Mikro- gramy/g 0,05 3,60 2,85 Dopamina Mikro- 1 gramy/g 1 1,30 3,05 2,68 | Z wyników podanych w tablicy widac, ze w oma¬ wianym przypadku 10 mg L-zwiazku ma te sama aktywnosc, co 20 mg DL-zwiazków (racematy). Ina¬ czej mówiac, w niniejszym tescie L-izomer jest zasadniczo 2 razy bardziej aktywny niz racemat.Porównanie, zdolnosci racematu, D i L izomerów kwasu a-hydrazynor a-metylo- 0-(3,4-dwuhydroksy- fenylo)propionowego wzmacniania dzialania L-dopy stosowanej przy wywolanym rezerpina zaniku ru¬ chu oraz opadaniu powieki (ptosis).Myszy umieszczono w przezroczystych, plastiko¬ wych pudelkach i aklimatyzowano je w ciagu no¬ cy. Zwierzetom podawano doustnie rózne dawki racematu,- L lub D izomerów kwasu a-hydrazyno- -a- metylo- P-(3,4-dWuhydroksyfenylo)propionowego w metocelu (srodek dyspergujacy ;— 1-proc. roz¬ twór wodny metylocelulozy) 1 godzine po dootrzew- nym wprowadzeniu rezerpiny w ilosci 4 mg/kg. W 2 godziny po podaniu rezerpiny podawano zwierze¬ tom dootrzewno L-dopa w ilosci 150 mg/kg i w godzine pózniej myszy obserwowano pod katem za¬ nikania ruchliwosci i wystepowania ptosis. Zanika¬ nie ruchliwosci oznaczano umieszczajac myszy od¬ dzielnie na srodku siatki drucianej o rozmiarach 20X50 cm na okres 15 sekund. Jezeli mysz nie przespacerowala do brzegów siatki (zwykle mniej niz 15% myszy potraktowanych rezerpina osiaga brzeg siatki), uznawano, ze ruch zanikl. Myszy nie traktowane rezerpina spacerowaly po siatce lub schodzily z niej w ciagu tego okresu czasu. Ptosis uznawano za istniejaca jezeli powieki opadly o 50% lub wiecej.Tablica II Porównanie wplywu D i L izomeru kwasu a-hy- drazyno- a-metylo- 0- (3,4-dwuhydroksyfenylo)pro- pionowego na przeciwdzialanie L-dopa porezerpi- nowemu zanikaniu ruchu i ptosis.Wstepne 1 traktowanie myszy*) Metocel D-izomer + metocel L-izomer + metocel Dawka mg/kg — ,0 ,0 125,0 0,2 1,0 ,0* ED50c Porezer- pinowy zanik ruchu Stosunek liczby myszy ochronio¬ nych do liczby myszy badanych 1/10 1/10 2/10 2/10 3/10 /10 8/10 0,86 mg/kg Poreze- rpinowe wystepo¬ wanie ptosis Stosunek liczby myszy ochr nio- nych do liczby myszy badanych | 1/10 1/10 2/10 ¦3/1.0 2/10 7/10 9/10 1 0,56 mg/kg a) 1 godzine przed podaniem L-dopa w ilosci 150 mg/kg. b) Ta dawka kwasu L-a-hydrazyno-a-metylo-|3- -(3,4-dwuhydroksyfenylo)propionowego nie przeciw- S0 40 45 50 5596 933 6 Izomer D kwasu a-hydrazynq-a-metylo-P-(3,4- dwuhydroksyfenylo)propionowego wykazywal nie¬ wielka albo zadna zdolnosc wzmacniania efektów dzialania L-dopa na myszy potraktowane rezerpi- s na. Z porównania wskazników EDW uzyskanych w przypadku stosowania racematu i L-izomeru kwa¬ su a-hydrazyno-a-metylo-P-(3,4-dwuhydroksyfeny- lo)propionowego wynika, ze L-izomer (EDW = 1,2 mg/kg) jest okolo 2,4 razy bardziej aktywny od ra- io cematu (EDso = 2,9 mg/kg) przy wzmacnianiu dzia¬ lania L-dopa likwidujacego porezerpinowy zanik ruchu. W odniesieniu do przeciwdzialania ptosis spowodowanej rezerpina, L-izomer (ED^ = 1,0 mg/ /kg) jest okolo 2,8 razy aktywniejszy od racematu (ED5o = 2,9 mg/kg).Sposobem wedlug wynalazku pochodne kwasu L-a-hydrazyno-P-fenylopropionowegó o wzorze ogólnym 1, w którym R1 i R2 oznaczaja atom wo¬ doru, grupe hydroksylowa lub alkoksylowa o 1—6 atomach wegla, grupe fenoksylowa lub benzyloksy- lowa, R« i R4 oznaczaja atom wodoru lub grupe alkilowa o 1—6 atomach wegla, ewentualnie w po¬ staci soli lub estru otrzymuje sie na drodze hydro¬ lizy zwiazków o wzorze ogólnym 2, w którym R1, R2, R* i R4 maja wyzej podane znaczenie, R5 ozna¬ cza grupe cyjanowa lub karboksylowa ewentualnie zalkilowana lub zaminowana, a R6 oznacza grupe o wzorze 3, grupe o wzorze 4, ugrupowanie —NHNH2, hydrazyno, lub grupe o wzorze —NR7NR8R», w którym R7, R8 i R9 oznaczaja atom wodoru lub grupe acylowa, R8 i R9 razem z ato¬ mem azotu moga oznaczac grupe amidowa aroma¬ tycznego kwasu dwukarboksylowego lub R6 i R8 lacznie oznaczaja grupe o wzorze —NH—CH2— _NCI—CO—NH—O—C(NH)—, —NH—CO—NH— —O—CO—, grupe o wzorze 5, —N(NH2)2—CH(CF3)— —O—CO—, —NH—NH—CO—, grupe o wzorze 6, —NH—NH—C^r-NH—CX— lub —N(NH2)—CX— —C(NH2)—CX—,w których X oznacza atom tlenu 40 lub siarki. dziala skutkom wywolanym przez podanie rezerpi- ny, o ile byla podana przed podaniem metocelu. c) EDM oznacza niezbedna dawke kwasu a-hydra- zyno-a-metylo- P-(3,4-dwuhydroksyfenylo)propiono- wego, która w polaczeniu z L-dopa podawana w ilosci 150 mg/kg przeciwdziala skutkom wywola¬ nym przez podanie rezerpiny u 50% myszy.Tablica III Porównanie wplywu racematu i L-izomeru kwa¬ su a-hydrazyno-a-metylo-P-(3,4-dwuhydroksyfeny- lo)propionowego na przeciwdzialanie L-dopa (150 mg/kg) porezerpinowemu zanikowi ruchu i ptosis.Wstepne traktowanie myszya) Metocel L-izomer + metocel Racemat + metocel Dawka mg/kg — 0,07 0,22 0,67 2,0 6,0 ED50b 0,67 2,0 6,0 18,0 ED50t Porezer¬ pinowy zanik ruchu Stosunek liczby myszy ochronio¬ nych do liczby myszy badanych 7/70 4/30 /70 /70 45/70 33/40 1,2 mg/kg (0,5-2,9) 11/70 29/70 49/70 63/70 2,9 mg/kg (2,4-3,5) Porezer- pinowe wystepo¬ wanie ptosis Stosunek liczby myszy ochronio¬ nych do liczby myszy badanych 8/70 /30 16/70 23/70 44/70 34/40 1,0 mg/kg (0,5-1,8) /70 /70 50/70 62/70 i 2,8 mg/kg (2,2-3,8) | a) 1 godzine przed podaniem L-dopa w ilosci 150 mg/kg. b) EDgo oznacza niezbedna dawke kwasu a-hydra- zyno- a-metylo-|3-(3,4-dwuhydroksyfenylo)propiono- wego, która w polaczeniu z L-dopa w ilosci 150 mg/kg przeciwdziala skutkom wywolanym przez podanie rezerpiny u 50% myszy. Wartosci w na¬ wiasach odnosza sie do przedzialu ufnosci 95%.W talbicy II i III zebrano wyniki dotyczace wplywu dootrzewnego podania L-dopy w ilosci 150 mg/kg po traktowaniu rezerpina wywolujaca zanik ruchu i ptosis u myszy potraktowanych u- przednio dawkami racematu, D i L izomerów kwa¬ su a-hydrazyno-cr-metylo-|3-(3,4-dwuhydroksyfeny- lo)propionowego. Ta dawka L-dopy (150 mg/kg) nie przeciwdziala rozerpinie u myszy potraktowanych uprzednio metocelem. Dawki racematu, D i L izo¬ merów kwasu a-hydrazyno-a-metylo-p-(3,4-dwuhy- drofenylo)propionowego, które sa niezbedne do przeciwdzialania zanikowi ruchu i ptosis spowodo¬ wanemu rezerpina (u 50% myszy — ED^), poda¬ wane w polaczeniu z L-dopa (150 mg/kg), obliczono z równania regresji otrzymanego z danych do¬ swiadczalnych.Mozna prowadzic hydrolize na drodze chemicz¬ nej lub za pomoca enzymów. Warunki hydrolizy zaleza od rodzaju podstawnika. W przypadku, gdy pochodne kwasu a-hydrazyno-P-fenylopropionowego uprzednio acylowano dla utworzenia diastereozio- merów, które rozdzielano na drodze np. frakcjono¬ wanej krystalizacji, oddzielony diastereoizomer hy- drolizuje sie, korzystnie w wodnym roztworze kwa¬ su lub zasady w umiarkowanych warunkach, w celu usuniecia grup acylowych. Jezeli zwiazek za¬ wiera inne podstawniki, takie jak grupe 3,4-dwu- metoksylowa lub 3,4-dwubenzyloksylowa mozna je hydrolizowac równoczesnie uzyskujac wolne grupy hydroksylowe, co jednak wymaga bardziej ostrych warunków hydrolizy. Hydrolize korzystnie wiec jest prowadzic w temperaturze 75—165°C. W razie potrzeby równoczesnej hydrolizy grup 3,4-dwume- toksylowej lub 3,4-dwubenzyloksylowej zwiazek hy- drolizuje sie stezonymi kwasami chlorowcowodoro wymi w temperaturze 100—165°C. W przypadku nieobecnosci takich podstawników hydrolize prowa¬ dzi sie w lagodniejszych warunkach.W przypadku, gdy acylozwiazki poddawano uprze¬ dnio aminowaniu, po aminowaniu, w razie potrze- io 40 45 50 55 607 96 933 8 by, otrzymane zwiazki hydrolizuje sie wodnym roz¬ tworem kwasu lub zasady w umiarkowanych wa¬ runkach, w celu usuniecia grup acylowych. Jezeli w czasteczce zwiazku znajduja sie takie podstaw¬ niki jak grupa 3,4-dwumetyksylowa lub 3,4-dwu- benzyloksylowa mozna je równoczesnie hydrolizo- wac do grup hydroksylowych, ale wymaga to ostrzejszych" warunków hydrolizy. Omawiane zwiazki mozna ponadto otrzymac przez hydrolize zwiazków, w których znajduje sie podstawiona grupa hydrazyno. Warunki hydrolizy zaleza od ro¬ dzaju podstawnika, ale zwykle hydrolize prowadzi sie w temperaturze od —50 do +200°C, korzystnie 90—165°C.Kwas a-hydrazyno-P-hydroksyfenylopropionowy otrzymuje sie równiez w wyniku hydrolizy o8po- wiednich pochodnych alkoksykarbonylowych, ami¬ dowych lub cyjanowych. Hydrolize mozna prowa¬ dzic za pomoca enzymów lub tez za pomoca kwa¬ sów i zasad. Jako enzymy hydrolizy stosuje sie mikroorganizmy takie jak Aspergillus oryzae, Zygo- saccharomyces acidifiens, Streptomyces spheroides lub Alcaligenes sp. Mikroorganizmy stosuje sie w postaci zawiesiny komórek, przy pH równym 5—9 utrzymywanym za pomoca buforu fosforanowego.Mozna równiez hydrolizowac enzymami wyodreb¬ nionymi z komórek.Ponizej podano przyklady ilustrujace sposób we¬ dlug wynalazku.Przyklad I. Do oziebionego lodem roztworu mmoli mieszaniny racemicznej kwasu a-hydra- zyno-a-metylo-p-(3,4-dwumetoksy)propionowego w 50 ml 2% roztworu kwasnego weglanu sodowego dodaje sie 12 mmoli 1-metoksychloromrówczanu i mieszanine miesza sie w ciagu 3 godzin. Mieszanine zakwasza sie do pH = 3 i produkt usuwa sie na drodze saczenia. Otrzymuje sie mieszanine D i L kwasu a-(l-mentoksyacetylohydrazo)-a-metylo-p- -(3,4-dwumetoksyfenylo)propionowego.Mieszanine D i L kwasu rozpuszcza sie w eta¬ nolu i traktuje 1 równowaznikiem wodorotlenku sodowego, otrzymujac sól sodowa. Sól sodowa wy¬ traca sie z roztworu i rozpuszcza w mieszaninie metanolu i wody. Nastepnie dodaje sie heksan do momentu, gdy roztwór przestaje byc klarowny.Wytracony osad izomeru L odsacza sie i hydroli¬ zuje gotujac w kwasnym roztworze. Po rekrystali¬ zacji z mieszaniny metanolu i wody otrzymuje sie czysty kwas L-a-hydrazyno^a-metylo-P-(3,4-dwuhy- droksyfenylo)propionowy topiacy sie z rozkladem w temperaturze 203—205°C o [a] D' = 17,3° (C = 2, ,CH3OH).Dla wzoru C10H14N2O4H2O: obliczono: C — 49,17; H — 6,60; N — 11,74 znaleziono: C — 49,13; H — 6,74; N — 11,19.Przyklad II. 90,11 g (0,5 mola) mieszaniny racemicznej kwasu a-hydrazyno-p-fenylopropiono- wego rozpuszcza sie w 200 ml metanolu. Roztwór nasyca sie gazowym chlorowodorem w tempera¬ turze pokojowej (25°) i pozostawia mieszanine na 40 godzin. Roztwór racematu zateza sie do sucha pod zmniejszonym cisnieniem, przeplukuje raz me¬ tanolem i ponownie rozpuszcza w 200 ml metanolu.Do roztworu dodaje sie dwuetyloamine w takiej ilosci, by pH roztworu bylo równe 8. Nastepnie mieszanine oziebia sie szybko do 0°C, pozostawia na jedna godzine, saczy i wytracony osad suszy otrzymujac racemat a-hydrazyno-P-fenylopropionia- nu metylu.Do 83,09 g (0,5 mola) kwasu d-0-acetylo-2-hydro- ksy-2-fenylopropionowego dodaje sie 119,0 g (1,0 mol) chlorku tionylu, oziebiajac. Mieszanine ogrze¬ wa sie do wrzenia, mieszajac, i utrzymujac w sta- nie wrzenia w ciagu 2 godzin. Nastepnie miesza¬ nine zateza sie pod zmniejszonym cisnieniem w temperaturze 50°C w celu usuniecia nadmiaru chlorku tionylu i rozpuszczonego gazu.Do 97,12 g (0,5 mola) racematu a-hydrazyno-P-fe- nylopropionianu metylu dodaje sie, oziebiajac, 300 ml pirydyny a nastepnie, mieszajac i oziebiajac do —25°, dodaje sie chlorek kwasu d-0-acetylo-2- -hydroksy-2-fenylopropionowego z poprzedniego etapu. Otrzymana mieszanine pozostawia sie na noc w temperaturze 25°, zateza pod zmniejszonym cis^ nieniem i pozostalosc rekrystalizuje z mieszaniny metanol-woda. Otrzymuje sie a-(d-0-acetylo-2-hy- droksy -2 -fenylopropanoilohydrazo) - fenylopropio- nian metylu wzbogacony w izomer L. 38,44 g (0,1 mola) estru metylowego wzbogaco¬ nego w izomer L hydrolizuje sie pod chlodnica zwrotna w ciagu 2 godzin ze 150 ml 6n roztworu kwasu chlorowodorowego. Mieszanine oziebia sie do temperatury pokojowej i ekstrahuje eterem. Po wysuszeniu nad siarczanem magnezu roztwór ete¬ rowy zateza sie w celu odzyskania kwasu d-2-hy- droksy-2-fenylopropionowego. Faze wodna zateza sie do sucha, zawiesza w metanolu i dodaje dwu¬ etyloamine do pH = 6,0. Po 1 godzinie stania w pokojowej temperaturze wydzielony kwas L-a-hy- drazyno-P-fenylopropionowy odsacza sie i rekrysta¬ lizuje z wody zawierajacej 0,5 g kwasnego siarczy¬ nu sodowego. 40 Przyklad III. Do 7,5 g (0,05 mola) kwasu L-winowego w 50 ml metanolu dodaje sie w tem¬ peraturze 50°C 21,22 g (0,1 mola) kwasu L-P-(3,4- -dwuhydroksyfenylo)-a-hydrazynQpropionowego w 100 ml metanolu. Mieszanine pozostawia sie do oziebienia. Pobiera sie cala porcje roztworu, zateza ja, rozciencza eterem, ogrzewa, oziebia i pociera bagietka az do uzyskania zarodków krysztalów.Zarodki te uzywa sie do mieszaniny, która pozo¬ stawiono w temperaturze 25°C w ciagu 18 godzin.Mieszanine oziebia sie do temperatury 0°C, saczy, przemywa i suszy otrzymujac sól kwasu L-wino- wego i kwasu L-P-(3,4-dwuhydroksybenzylo)-a-hy- drazynopropionowego.Do 212,21 g (1,0 mol) kwasu D,L-p-(3,4-dwuhydro- 55 ksyfenylo)-a-hydrazynopropionowego dodaje sie 200 ml 2,5n roztworu kwasu chlorowodorowego i mie¬ szanine zateza sie do sucha pod zmniejszonym cis¬ nieniem. Pozostalosc zawiesza sie w 1,4 litra meta¬ nolu w temperaturze 60°G/, dodaje sie 37,5 g (0,25 60 mola) kwasu L-winowego, rozpuszcza sie go i mie¬ szanine pozostawia do oziebienia do temperatury °C. Mieszanine zaszczepia sie winianem sodowym otrzymanym poprzednio i pozostawia na noc w temperaturze 25°C. Nastepnie mieszanine oziebia 65 sie do temperatury 0—5°C, saczy, przemywa i su-9 96 933 szy. Pozostalosc rekrystalizuje sie dwukrotnie z wo¬ dy otrzymujac sól kwasu L-winowego i kwasu L- -0-0,4 -dwuhydroksyfenylo)-a -hydrazynopropiono- wego. 57,44 g (0,1 mola) Winianu z poprzedniego etapu zawiesza sie w 250 ml wody i mieszajac oraz ozie¬ biajac dodaje sie lOn roztwór wodorotlenku sodo¬ wego do pH — 6,4. Nastepnie mieszanine saczy sie, osad przemywa sie i suszy otrzymujac kwas L-ot- -hydrazyno-(3,4-dwuhydroksyfenylo)propionowy to¬ piacy sie z rozkladem w temperaturze 197°C, o [a] D 25° = —14° (C=l, 0,ln HCl) i X 0,lnHCl = = 280 m, log (3,44).Dla wzoru C9H12N204H20: obliczono: C — 46,95; H — 6,13; N — 12,17, znaleziono: C — 47,08; H — 5,84; N — 12,29.Przyklad IV. 212,21 g (1,0 mol) kwasu D,L-0- -(3,4-dwuhydroksyfenylo)-a -hydrazynopropionowe- go w 1 litrze metanolu nasyca sie w temperaturze 0—5°C gazowym chlorowodorem. Po nasyceniu mieszanine pozostawia sie na 24 godziny w tempe¬ raturze 20—25°C i zateza do sucha pod zmniejszo¬ nym cisnieniem. Pozostalosc zawiesza sie w 2 li¬ trach metanolu, dodaje sie 27,01 g (0,5 mola) me¬ tanolu sodowego, a nastepnie mieszanine saczy sie i przemywa. Uzyskany przesacz zateza sie do obje¬ tosci 2 litrów i dodaje 100,1 g (0,5 mola) kwasu d-kamforowego. Pobiera sie mala czesc miesza¬ niny, dodaje sie do niej eteru, ogrzewa a nastepnie oziebia skrobiac scianki naczynia dla wywolania krystalizacji. Pozostaly roztwór zateza sie do po¬ lowy objetosci i zaszczepia. Po zaszczepieniu pozo¬ stawia sie mieszanine na 18 godzin w temperaturze °C, potem sie ja oziebia do temperatury 0—5°C, saczy i osad przemywa zimnym metanolem. Po wy¬ suszeniu osad rekrystalizuje sie z izopropanolu otrzymujac sól d-kamfory i L-|3-(3,4- dwuhydro- ksyfenylo)-a-hydrazynopropionianu metylu. 63,94 g (0,15 mola) soli estrowej otrzymanej po¬ przednio gotuje sie w atmosferze azotu ze 100 ml 2n roztworu kwasu chlorowodorowego w ciagu 2 godzin. Nastepnie mieszanine oziebia sie do tem¬ peratury 10—15°C, alkalizuje do pH = 6,4 za po¬ moca lOn roztworu wodorotlenku sodowego, saczy i otrzymany osad przemywa i suszy. Pozostalosc rekrystalizuje sie z wody otrzymujac kwas L-|3- -(3,4-dwuhydroksyfenylo)-a-hydrazynopropionowy o temperaturze topnienia 197°C.Przyklad V. 45 g kwasu DL-a-(3,4-dwuhydro- ksybenzylo)-a-hydrazynopropionowego rozpuszcza sie w 115 ml In roztworu kwasu chlorowodorowego w temperaturze 45°C. Otrzymana mieszanine saczy sie i nasycony roztwór zaszczepia w temperaturze 45°G 5 g kwasu L-a-(3,4-dwuhydroksybenzylo)-a- -hydrazynopropionowego. Nastepnie nasycony roz¬ twór oziebia sie do temperatury 25°C w ciagu minut i pozostawia na 1 godzine w tej tempe¬ raturze. Wydzielony osad oddziela sie odsaczajac go, nastepnie sie go przemywa 2 porcjami po 15 ml wody o temperaturze 25°C i suszy pod zmniejszo¬ nym cisnieniem otrzymujac kwas L-a-(3,4-dwuhy- droksybenzylo)-a-hydrazynopropionowy topiacy sie z rozkladem w temperaturze 208°C.Roztwór macierzysty z poprzedniego etapu laczy sie z 5 g kwasu DL-a-(3,4-dwuhydroksybenzylo)-a- -hydrazynopropionowego, ogrzewa do temperatury 45°C i saczy. Nastepnie nasycony roztwór traktuje sie 4 g kwasu D-a-(3,4-dwuhydroksybenzylo)-a-hy- drazynopropionowego i oziebia do temperatury 25°C w ciagu 30 minut. Wytracony osad oddziela sie w sposób opisany powyzej.Roztwór macierzysty z ostatniego etapu zawraca sie z 5 g kwasu DL-a-(M-dwuhydrok^ybenzylo)-a- -hydrazynopropionowego i postepujac w sposób opisany w etapie pierwszym niniejszego przykladu otrzymuje sie kwas L- -a-hydrazynopropionowy. : Przyklad VI. Naczynie A napelnia sie 195 ml 0,ln kwasu chlorowodorowego i 19 g kwasu DL-a- -(3,4 -dwuhydroksybenzylo)-a -hydrazynopropiono- wego. Otrzymana mieszanine ogrzewa sie do tem¬ peratury 45°C na lazni wodnej i utrzymuje sie ja przez caly czas trwania operacji. Przewód z na¬ czynia A przechodzi przez filtr a nastepnie dzieli sie na dwie czesci prowadzace do naczyn B i C.Naczynia B i C sa napelnione 12 g kwasu DL-ct- -(3,4 -dwuhydroksybenzylo)-a -hydrazynopropiono- wego rozpuszczonego w 230 ml 0,ln kwasu chloro¬ wodorowego w temperaturze 25°C. Roztwór saczy sie w celu pozbycia sie zawieszonych czastek i 115 ml tego roztworu wlewa sie do naczynia B a reszte do naczynia C. Naczynia B i C utrzymuje sie w trakcie operacji w ^temperaturze 25°C. Do naczy¬ nia B dodaje sie 1,35 g kwasu L-a-(3,4-dwuhydro- 80 ksybenzylo)-a-hydrazynopropionowego, a do naczy¬ nia C dodaje sie 1,35 g kwasu D-a-(3,4-dwuhydro- ksybenzylo)- Roztwór z naczynia A przepompowuje sie do na¬ czyn B i C z szybkoscia 2 ml/min., aby naczynia 85 te napelnialy sie z szybkoscia 1 ml/min. Nadmiar cieczy z naczyn B i C zawraca sie do naczynia A odpowiednimi przewodami. W Tegularnych odste¬ pach czasu dodaje sie do naczynia A mieszanine recemiczna DL, aby utrzymac roztwór w stanie 40 nasycenia. Izomery D i L usuwa sie w regular¬ nych odstepach czasu, a kiedy to potrzebne, do¬ daje sie dodatkowe zarodki krysztalów. W ten spo¬ sób realizuje sie ciagle rozdzielanie mieszaniny ra- cemicznej na izomery Di L 45 Przyklad VII. 44 g (0,16 mola) chlorowodorku kwasu L-a-metylo-a-amino-0-(3,4-dwumetoksyfeny~ lo)propionowego rozpuszcza sie w 440 ml wody la¬ godnie ogrzewajac. Otrzymany roztwór gwaltownie sie oziebia do temperatury 5°C i dodaje malymi 50 porcjami 77,6 g (0,96 mola) cyjanianu potasowego.Otrzymana zawiesine ogrzewa sie do temperatury 60°C w ciagu 4 godzin i saczy. Przesacz oziebia sie i zakwasza do pH = 1 stezonym kwasem solnym.Otrzymany krystaliczny osad odsacza sie, prze- 55 mywa woda i suszy w temperaturze 50°C uzysku¬ jac 34,5 g kwasu L-a-metylo-a-ureido-P-(3,4-dwu- metoksyfenylo)propionowego. Po rekrystalizacji z mieszaniny etanol-woda otrzymuje sie produkt o temperaturze topnienia 205—207°C. 60 Dla wzoru C13H18N205: obliczono: C — 55,31; H — 6,43; N — 9,92, znaleziono: C — 55,56; H — 6,52; N — 9,99.Do roztworu 2,2 g (7,8 mmola) kwasu L-a-mety- lo-a- ureido-0-(3,4-dwumetoksyfenylo)propionowego e5 otrzymanego powyzej w 15,6 ml 2,5n roztworu wo-96 933 11 iz dorotlenku potasowego dodaje sie 13,7 ml 0,7In roz¬ tworu podchlorynu sodowego (9,75 mmoli). W 5 mi¬ nut po zakonczeniu dodawania roztwór ogrzewa sie do temperatury 80°C w ciagu póltorej godziny.Potem dodaje sie 45 ml toluenu i 0,8 ml wódziami hydrazyny i miesza sie energicznie dolewajac 8 ml stezonego kwasu solnego. Mieszanine miesza sie w temperaturze' 80°C w ciagu 30 minut, a nastepnie rozdziela sie warstwy i wodna warstwe ekstrahuje sie 25 ml toluenu. Roztwór wodny odparowuje sie do sucha i rozpuszcza w etanolu. Nastepnie roz¬ twór alkoholowy zobojetnia sie dwuetyloamina do pH = 6,4, wytracony osad odsacza sie, przemywa etanolem i suszy uzyskujac 1,25 g kwasu L-a-me- tylo-a -hydrazyno-P-(3,4- dwumetoksyfenylo)propio- nowego, co daje wydajnosc równa 60%. Po rekry¬ stalizacji z wody otrzymuje sie produkt topiacy sie z rozkladem w temperaturze 222—224°C o A1C13 rozt. = —24,6°C.Dla wzoru C12H1804N2: ,. obliczono: C — 52,93; H — 7,40; N — 10,29, znaleziono: C — 53,01; H — 7,46; N — 10,28.Przyklad VIII. Do roztworu 0,47 mola kwasu L-a-etylo-a -amino-p -(3,4-dwuhydroksyfenylo)pro- pionowego i 600 mg kwasnego siarczynu sodowego w 500 ml wody dodaje sie 57,6 g cyjanianu potaso¬ wego i calosc ogrzewa sie do temperatury 60°C w atmosferze azotu w ciagu 1 godziny. Nastepnie dodaje sie druga porcje 57,6 g cyjanianu potaso¬ wego i ogrzewa dalej w ciagu 2 godzin. Produkt reakcji metyluje sie dalej bez wydzielania z mie¬ szaniny reakcyjnej. W tym celu oddestylowuje sie wode z mieszaniny reakcyjnej do chwili kiedy amoniak przestanie byc wykrywalny. Pozostalosc rozciencza sie do poczatkowej objetosci, dodaje 20 ml 8n roztworu wodorotlenku potasowego i calosc oziebia do temperatury 15°C. Nastepnie dodaje sie 566 ml 8n roztworu wodorotlenku potasowego i 376 ml (3,6 mola) dwumetylosiarczanu dokladnie mie¬ szajac. Szybkosc dodawania obu skladników równo¬ czesnie ustala sie tak, by utrzymac temperature ponizej 20°C. Dodawanie trwa okolo 1 godzine.Roztwór zakwasza siey do pH = 2 kwasem chloro¬ wodorowym i wytracony osad usuwa sie przez sa¬ czenie. Po wymyciu woda i wysuszeniu otrzymuje sie kwas L-a-etylo-a-ureido-P-(3,4-dwumetoksyfe- nylo)propionowy z wydajnoscia 70°/o. Po rekrysta¬ lizacji z mieszaniny etanol-woda produkt ma tem¬ perature topnienia równa 218—220°C.Dla wzoru C14H2oN205: obliczono: C — 56,74; H — 6,80; N — 9,45, znaleziono: C — 56,71; H — 6,88; N — 9,53.Do oziebionego lodem roztworu 7,8 mmoli kwa¬ su L-a-etylo-ot-ureido-P -(3,4- dwumetoksyfenylo)- propionowego otrzymanego powyzej w 15,6 ml 2,5n roztworu wodorotlenku potasowego dodaje sie 13,7 ml 0,7 In roztworu podchlorynu sodowego (9,75 mmola) i po pieciu minutach od dodania calosc ogrzewa sie do temperatury 80°C w ciagu póltorej godziny. Nastepnie dodaje sie 45 ml toluenu i 0,8 min wódziami hydrazyny, oraz energicznie mieszajac, 8 ml stezonego kwasu solnego. Mie¬ szanine miesza sie w temperaturze 80°C w ciagu minut, rozdziela sie na warstwy i warstwe wodna ekstrahuje sie 25 ml woluenu. Warstwe wodna zateza sie do sucha i otrzymana mieszanine soli rozpuszcza sie w etanolu. Alkoholowy roztwór zobojetnia sie dwuetyloamina do pH = 6,4, a wy¬ tracony osad odsacza sie, przemywa alkoholem B etylowym i suszy otrzymujac kwas L-a-etylo-a-hy- drazyno-P(3,4-dwumetoksyfenylo)propionowego z wydajnoscia 53%. Po rekrystalizacji z wody otrzy¬ muje sie produkt o temperaturze topnienia 215— —220°C. lt Dla wzoru CuHjoC^Nj: obliczono: C — 58,19; H — 7,51; N — 10,44, znaleziono: C — 58,16; H — 7,60; N — 10,40 Przyklad IX. 119,1 g (0,5 mola) póltorawo- dzianu L-a-metylo-P, 4-dwuhydroksyfenyloaniny i w toluen umieszcza sie w kolbie i podgrzewa do wrzenia. Stosujac nasadke azeotropowa usuwa sie wode w postaci azeotropu, a toluen zawraca sie do kolby. Po oddestylowaniu teoretycznej ilosci wody pozostalosc odparowuje sie do sucha pod 2^ zmniejsznym cisnieniem. Pozostalosc miesza sie z 500 ml metanolu i mieszanine nasyca sie gazo¬ wym chlorowodorem w temperaturze 0—5°C.Otrzymana mieszanine pozostawia sie na 42 go¬ dziny w temperaturze 0°C, a nastepnie zateza sie do sucha uzyskujac ester metylowy L-a-3,4-dwu- hydroksyfenyloalaniny.Przez 67,58 g (0,3 mola) otrzymanego estru zmie¬ szanego z 1 litrem czterowodorofuranu przepuszcza sie fosgen z szybkoscia przez mieszanine azot so i oziebiajac do temperatury pokojowej. Po zate- zeniu roztworu pod zmniejszonym cisnieniem otrzy¬ muje sie ester metylowy L-a-chlorokarbonylo-a- -metylo-P-(3,4,-karbonylodwuoksyfenylo)-alaniny.Do tak otrzymanego estru zmieszanego z 500 ml dwumetoksyetanu dodaje sie 19,5 g (0,3 mola) sproszkowanego azydku sodowego i calosc gotuje sie, mieszajac, w ciagu trzech godzin. Nastepnie mieszanine saczy sie, przesacz zateza pod zmniej¬ szonym cisnieniem do sucha i pozostalosc krystali- 40 zuje z mieszaniny aceton-heksan otrzymujac ester metylowy L-a-N-azydokarbonylo-a-metylo-p-(3,4- -karbonylodwuoksyfenylo)alaniny. 32,03 g (0,1 mola) tak otrzymanego estru miesza sie ze 100 ml In roztworu kwasu chlorowodoro- 45 wego w temperaturze 25°C w ciagu 18 godzin.Mieszanine zateza sie do sucha pod zmniejszonym cisnieniem otrzymujac L-a-N-azydkokarbonylo-a- -metylo-p-(3,4-dwuhydroksyfenylo)alanine. Do po¬ zostalosci dodaje sie 300 ml wody, mieszanine 50 ogrzewa sie do temperatury 80°C, meiszajac, a na¬ stepnie chlodzi sie do temperatury 0°C. Mieszani¬ ne poddaje sie fotolizie w temperaturze 0°C przy uzyciu niskocisnieniowego luku rteciowego. Tak otrzymana mieszanine rozciencza sie woda, do obje- B5 tosci 1 litra, ogrzewa sie do temperatury 90°C, saczy a przesacz oziebia sie do temperatury po¬ kojowej. Oziebiony przesacz zostaje nastepnie za¬ absorbowany na zywicy jonowymiennej typu Amberlite IR-120 w postaci kwasnej. Po elucji In M roztworem wodorotlenku amonowego i zatezeniu eluatu do sucha pod zmniejszonym cisnieniem otrzymuje sie surowy produkt. Po rekrystalizacji otrzymuje sie kwas L-a-hydrazyno-a-metylo-P-(3,4- dwuhydroksyfenylo)propionowy o temperaturze 65 topnienia 222—224°C.13 96^33 14 Przyklad X. 112,6 g (0,5 mola) L-a-etylo-3,4- -dwuhydroksyfenyloalaniny miesza sie z 500 ml metanolu i mieszanine nasyca sie gazowym chlo¬ rowodorem w temperaturze 0—5°C. Mieszanine pozostawia sie na 42 godziny w temperaturze 0°C, a nastepnie zateza sie do sucha otrzymujac ester metylowy D-a-etylo-3,4-dwuhydroksyfenyloalaniny.Przez zawiesine 71,8 g (0,3 mola) tego estru w 1 litrze czterowodorofuranu przepuszcza sie fos- gen z szybkoscia 0,5 mola/godz. w temperaturze 55—70°C. Po dwóch godzinach przez mieszanine te przepuszcza sie azot i .tak chlodzi sie ja do tem¬ peratury pokojowej. Roztwór zateza sie pod zmniej¬ szonym cisnieniem otrzymujac ester metylowy L - a-chlorokarbonylo-a-etylo-|3-(3,4-karbonylodwu - oksyfenylo)alaniny.Do mieszaniny tak otrzymanego estru w 500 ml dwumetoksyetanu dodaje sie 19,5 g (0,3 mola) sproszkowanego azydku sodowego i mieszanine go¬ tuje sie, mieszajac, w ciagu 3 godzin. Nastepnie mieszanine saczy sie, przesacz zateza sie do sucha pod zmniejszonym cisnieniem i pozostalosc krys¬ talizuje sie z mieszaniny acetonu i heksanu otrzy¬ mujac ester metylowy L-a-N-azydokarbonylo-a- -etylo-(3-(3,4-karbonylodwuoksyfenylo)alaniny. 33,43 g (0,1 mola) tak otrzymanego estru miesza sie ze 100 ml In roztworu kwasu chlorowodorowego w ciagu 18 godzin w temperaturze 25°C. Mieszani¬ ne taka, zateza sie do sucha pod zmniejszonym cisnieniem otrzymujac L-a-N-azydokarbonylo-a- -etylo-p-(3,4-dwuhydroksyfenylo)alanine. Do po¬ zostalosci dodaje sie 300 ml wody, mieszanine ogrzewa sie, mieszajac, do temperatury 80°C, a na¬ stepnie chlodzi sie do temperatury 0°C. Te ochlo¬ dzona mieszanine rozciencza sie woda do objetos¬ ci 1 litra, ogrzewa sie do temperatury 90°C, saczy sie i przesacz chlodzi sie do temperatury pokojo¬ wej. Przesacz ten zostaje zaabsorbowany na zywicy jonowymiennej typu Amberlite IR-120R w postaci kwasnej. Po elucji In roztworem wodorotlenku amonowego i zatezeniu eluatu do sucha pod zmniej¬ szonym cisnieniem otrzymuje sie surowy produkt.Po rekrystalizacji otrzymuje sie kwas L-a-etylo-a- -hydrazyno-(3-(3,4-dwuhydroksyfenylo)propionowy o temperaturze topnienia 215—220°C.Przyklad XI. 250 mg 55% mieszaniny wo¬ dorku sodu (5,2 mmola) z olejem mineralnym prze¬ mywa sie heksanem i miesza z 6 ml dwumetylo- sulfotlenku. Do mieszaniny tej dodaje sie roztwór 1,05 g (4 mmole) nitrylu kwasu L-a-acetamido-a- -metylo-|3-(3,4-dwumetoksyfenylo)propionowego w ml dwumetylosulfotlenku. Po zakonczeniu wy¬ dzielania sie gazu (15 minut) roztwór chlodzi sie do temperatury 15°C i w ciagu 2 minut dodaje sie do niego roztwór chloraminy (4,5 mmola) w 12 ml suchego eteru. Po 12-godzinnym mieszaniu w temperaturze pokojowej do mieszaniny dodaje sie kilka kropli kwasu octowego i zateza ja pod zmniejszonym cisnieniem. Do pozostalosci dodaje sie wode i chloroform. Po rozdzieleniu warstwe organiczna suszy sie, rozpuszczalnik usuwa sie, a pozostalosc krystalizuje sie z octanu etylu lub eteru. Po rekrystalizacji z metanolu otrzymuje. sie nitryl kwasu L-a-(l-acetylohydrazyno)-a-metylo- -0)3,4-dwumetoksyfenylo)propionowego o tempera¬ turze topnienia 121—123°C.Dla wzoru C14H19N303: obliczono: C — 60,63; H — 6,91; N — 15,15 znaleziono: C — 60,82; H — 7,10; N — 15,21. 150 mg produktu rozpuszczonego w 2,5 ml stezo¬ nego kwasu chlorowodorowego ogrzewa sie w za¬ topionej probówce w temperaturze 120°C w ciagu 11/2 godziny. Otrzymana mieszanine odparowuje le sie do sucha pod zmniejszonym cisnieniem i-pro¬ dukt luguje sie etanolem. Dodajac dwuetyloamine do pH — 6,4 wytraca sie osad kwasu L-a-hydra- zyno - wego, który odsacza sie i przemywa etanolem. Po rekrystalizacji z wody zawierajacej niewielkie ilosci kwasnego siarczynu sodowego otrzymuje sie produkt topiacy sie z rozkladem w temperaturze 208°C o [a] D25 = —17,3° (C = 2,CH3OH).Przyklad XII. 250 mg 55% mieszaniny wo- dorku sodu (5,2 mmola) z olejem mineralnym prze¬ mywa sie heksanem i miesza z 6 ml dwumetylo¬ sulfotlenku. Do mieszaniny tej dodaje sie roztwór amidu kwasu L-a-benzamido-a-metylp-|3-(3,4-dwu- benzyloksyfenylo)propionowego (4 mmole) w 10 ml dwumetylosulfotlenku. Po zakonczeniu wydziela¬ nia sie gazu (15 minut) roztwór chlodzi sie do temperatury 15°C i w ciagu 2 minut dodaje sie roztwór chloraminy (4,5 mmola) w 12 ml suchego eteru. Po 12-godzinnym mieszaniu w temperatu- 80 rze pokojowej dodaje sie kilka kropli kwasu octo¬ wego i mieszanine zateza sie pod zmniejszonym cisnieniem. Do zageszczonej pozostalosci dodaje sie wode i chloroform. Po rozdzieleniu warstwe orga¬ niczna suszy sie, rozpuszczalnik usuwa sie, a po- zostalosc krystalizuje sie z octanu etylu i eteru.Roztwór otrzymanego tak amidu kwasu L-a-(l- - benzoilohydrazyno) - a - metylo-(J-(3;4-dwubenzylo- ksyfenylo)propionowego w 2,5 ml stezonego kwa¬ su chlorowodorowego # ogrzewa sie w zatopionej 40 rurce w temperaturze 100°C w ciagu 11/2 godziny.Postepujac w sposób opisany w przykladzie XI otrzymuje sie kwas L-a-hydrazyno-a-metylo-|3-(3,4- -dwuhydroksyfenylo)propionowy.Przyklad XIII. Do ochlodzonego w lodzie roz- 45 tworu 2,2 g (8 mmoli) chlorowodorku kwasu L-a- - amino - a - (3,4-dwumetoksybenzylo)propionowego (Ri=H, R2=R3=CH3) w 2,5n roztworze wodoro¬ tlenku sodowego dodaje sie 1,8 g (16 mmoli) kwa¬ su hydroksyamino-0-sulfonowego — mieszanine pozostawia sie na 10 minut, a nastepnie ogrzewa sie w temperaturze 90°C w ciagu 1 gbdziny. Roz¬ twór zakwasza sie kwasem chlorowodorowym i od¬ parowuje do sucha pod zmniejszonym cisnieniem.Pozostalosc rozpuszcza sie w etanolu. Dodajac dwuetyloamine do pH = 6,5 wytraca sie surowy produkt. Mieszanine oczyszcza sie chromatogra¬ ficznie na zelu krzemionkowym. Po rekrystalizacji z wody otrzymuje sie kwas L-a-(3,4-dwumetoksy- benzylo)-a-hydrazynopropionowy topiacy sie z roz¬ kladem w temperaturze 222—224°C.Dla wzoru C12H18N204 . H20: obliczono: C — 52,93; H — 7,40; N — 10,29 znaleziono: C — 53,01; H — 7,46; N — 10,28 65 Mieszanine 10 g (32,g (32,3 mmoli) tak otrzyma-15 96 933 16 nego kwasu i 150 ml stezonego kwasu chlorowo¬ dorowego ogrzewa sie w zatopionej rurce w tem¬ peraturze 120°C w ciagu 2 godzin. Otrzymana mie¬ szanine odparowuje sie do sucha pod zmniejszo¬ nym cisnieniem i produkt luguje sie etanolem. Do¬ dajac dwuetyloamine do pH=6,4 wytraca sie osad kwasu L-a-(3,4-dwuhydroksybenzylo)-a-hydrazyno- ppopionowego, który po odsaczeniu, przemyciu eta¬ nolem i wysuszeniu wazy 6,5 g. Po rekrystalizacji z wody zawierajacej niewielka ilosc kwasnego siar¬ czynu sodowego otrzymuje sie produkt topiacy sie z rozkladem w temperaturze 208°C o [ (C=2,CH3OH).Dla wzoru C10H14N2O4 . H20: obliczono: C — 49,17; H — 6,60; N — 11,47 znaleziono: C — 49,13; H — 6,74; N — 11,19 Przyklad XIV. 250 mg 55°/o mieszaniny wo¬ dorku sodu (5,2 mmola) z olejem mineralnym prze¬ mywa sie heksanem i miesza z 6 ml dwumetylo- sulfotlenku. Do mieszaniny tej dodaje sie roz¬ twór 1,05 g (4 mmole) nitrylu kwasu L-a-acetami- do-a-(3,4-dwumetoksybenzylo)propionowego w 10 ml dwumetylosulfotlenku. Po zakonczeniu wydzie¬ lania sie gazu (15 minut) roztwór chlodzi sie do temperatury 15°C i w ciagu 2 minut dodaje sie roztwór chloraminy (4,5 mmola) w 12 ml suchego eteru. Po 12-godzinnym mieszaniu w temperatu¬ rze pokojowej dodaje sie kilka kropli kwasu octo¬ wego i mieszanine zateza sie pod zmniejszonym cisnieniem. Do zageszczonego roztworu dodaje sie wode i chloroform. Po rozdzieleniu warstwe orga¬ niczna suszy sie, rozpuszczalnik usuwa sie, a po¬ zostalosc krystalizuje sie z octanem etylu i eteru.Na podstawie widma magnetycznego rezonansu ja¬ drowego stwierdzono, ze produkt jest mieszanina wlasciwego produktu i materialów wyjsciowych w stosunku 614. Z analizy chromatograficznej (na g zelu krzemionkowego H,. elucja chloroformem i 3% metanolem) wynikalo, ze produkt zawieral 570 mg (52%) nitrylu kwasu L-a-N^acetylohydra- zyno-a-(3,4-dwumetoksybenzylo)propionowego i 320 mg materialów wyjsciowych. Obliczona z tych da¬ nych wydajnosc produktu wynosi 56°/o, a selek¬ tywnosc reakcji (wydajnosc liczona na nieprze- reagowane substraty) wynosi 80°/o. Po rekrystaliza¬ cji z metanolu otrzymano próbke o temperaturze topnienia 121—123°C.Dla wzoru C14H19NsO,: obliczono: C — 60,63; H — 6,91; N — 15,15 znaleziono: C — 60,82; H — 7,10; N — 15,21. 150 mg tak otrzymanego produktu w 2,5 ml stezonego kwasu chlorowodorowego ogrzewa sie w zatopionej rurce w temperaturze 120°C w ciagu 11/2 godziny. Postepujac dalej w sposób opisany w poprzednich przykladach otrzymuje sie kwas L - a -,(3,4-dwuhydroksybenzylo)-a-hydrazynopropio- nowy topiacy sie z rozkladem w temperaturze 208°C o [a] D25 =—17,3? (C=2,CH8OH).Przyklad XV. Do mieszaniny 100 ml wody, 200 ml eteru, 36 ml stezonego kwasu chlorowo¬ dorowego i 70,3 g (0,25 mola) L-N-acetylo-a-(3,4- -dwumetoksybenzylo)alaniny wkrapla sie, energicz¬ nie mieszajac, w temperaturze 0—10°C 18 g (0,26 mola) azotanu sodowego w 36 ml wody. Po wkrop- leniu calosc miesza sie jeszcze 1 godzine utrzymu¬ jac caly czas temperature 0—10°C. Nastepnie od¬ dziela sie warstwe eterowa, warstwe wodna ekstra¬ huje sie 100 ml eteru a polaczone warstwy etero- B we przemywa ^ie nasyconym roztworem soli i su¬ szy nad siarczanem magnezu. Po zatezeniu pod zmniejszonym cisnieniem otrzymuje sie L-N-acety- lo-N-nitrozo-a(3,4-dwumetoksybenzylo)alanine.Mieszanine 65,5 g (1,0 mol) pylu cynkowego i 100 ml wody oziebia sie do temperatury 10°C. Do tej mieszaniny dodaje sie, mieszajac, 75 g (0,24 mola) zwiazku nitrozo otrzymanego w poprzednim etapie i 150 ml lodowatego kwasu octowego w tempera¬ turze 10—15°C. Nastepnie mieszanine pozostawia sie na godzine w temperaturze pokojowej, a po¬ tem ogrzewa sie do temperatury 80°C na lazni wodnej. Mieszanine odsacza sie w celu usuniecia nieprzereagowanego cynku i osad przemywa sie trzykrotnie porcjami cieplego 2n roztworu kwasu chlorowodorowego po 25 ml. Polaczone przesacze oziebia sie do temperatury pokojowej alkalizujac jednoczesnie do pH = 6,5. Tak otrzymana mieszanine saczy sie i osad suszy sie. Pozostalosc ekstrahuje sie trzema porcjami chloroformu po 200 ml. Osu- !5 szony nad siarczanem magnezu ekstrakt zateza sie pod zmniejszonym cisnieniem, a pozostalosc otrzymuje sie, po rekrystalizacji z metanolu, kwas L-a-N^acetylohydrazyno -a- (3,4-dwumetoksyben- zylo)propionowy.^ Postepujac dalej w sposób opisany w przykladzie XIV, po hydrolizie tego produktu otrzymuje sie kwas L-a-(3,4-dwuhydroksybenzylo)-a-hydrazyno- propionowy.Przyklad XVI. Zawiesine 56,2 g (0,20 mola) M kwasu L-a-N-acetyloamino-a-(3,4-dwumetoksyben- zylo)propionowego i 19,0 g (0,25 mola) tiocyjanianu amonowego w 100 ml bezwodnika octowego i 1,0 ml kwasu octowego ogrzewa sie na lazni wodnej, po¬ tem oziebia sie wlewa do wody w temperaturze m 10°C. Nastepnie mieszanine saczy sie, przemywa i suszy. Po rekrystalizacji z mieszaniny metanol- -woda otrzymuje sie czysta L-l-acetylo-5-(3'-4'- -dwumetoksybenzylo)-5-metylo-2-tiohydantoine.Tak otrzymany produkt rozpuszcza sie w 6n roz- 45 tworze kwasu chlorowodorowego ogrzewajac na lazni wodnej. Po odparowaniu otrzymuje sie L-5- -(3',4'-dwumetoksybenzylo)-5-metylo -2- tiohydan- toine która rekrystalizuje sie z wody. 28,0 g (0,1 mola) tak otrzymanego produktu roz- w puszcza sie w 600 ml wrzacego alkoholu amylowe- go i, energicznie mieszajac, dodaje sie 23,0 g sodu.Po rozpuszczeniu sie sodu mieszanine zateza sie, dodaje do pozostalosci ostroznie wode, neutralizuje do pH » 6,0n roztworem kwasu chlorowodorowego 55 i ekstrahuje chloroformem. Ekstrakt chloroformo¬ wy suszy sie nad siarczanem sodowym i zateza otrzymujac surowy L-5-(3',4'-dwumetoksybenzylo)- -5-metyloimidazolidon-4. Surowy produkt krysta¬ lizuje sie z mieszaniny aceton-heksan- 12,5 g (0,05 60 mola) imidazolidonu rozpuszcza sie w 300 ml 50% roztworu wodnego metanolu i dodaje sie 1,25 rów¬ nowaznika podchlorynu sodowego w temperaturze 0—5°C. Otrzymana mieszanine gotuje sie pod chlod¬ nica zwrotna w ciagu 1 godziny, a nastepnie za- « teza w celu usuniecia metanolu. Otrzymuje sie17 96 933 18 L-3-chloro-5-(3',4'-dwumetoksybenzylo) -5- metylo- imidazolidon-4. Otrzymany produkt alkalizuje sie 50% roztworem wodorotlenku sodowego i gotuje w ciagu 30 godzin w atmosferze azotu. Po oziebie¬ niu mieszaniny do temperatury pokojowej i za¬ kwaszeniu stezonym kwasem chlorowodorowym otrzymuje sie kwas L-a-(3,4-dwumetoksybenzylo)- -a-hydrazynopropionowy. Otrzymany kwas mozna hydrolizowac w sposób opisany poprzednio w celu otrzymania kwasu L-a-(3,4-dwuhydroksybenzylo)- -a-hydrazynopropionowego.Przyklad XVII. Do roztworu 100 g (0,47 mola) L-a-metylo-(3,4-dwuhydroksyfenylo)alaniny i 600 mg kwasnego siarczynu sodowego w 500 ml wody dodaje sie 57,6 g cyjanianu potasowego i roz¬ twór ogrzewa sie do temperatury 60°C w atmo¬ sferze azotu w ciagu 1 godziny. Nastepnie dodaje sie druga porcje 56,7 g cyjanianu potasowego i o- grzewa jeszcze 2 godziny. Z analizy wykonanej metoda magnetycznego rezonansu jadrowego wy¬ nika, ze w tym momencie okolo 90% aminokwasu przereagowalo na kwas L-4-(3,4-dwuhydroksyben- zylo)-4-metylohydantoinowy. 28,2 g (0,1 mola) tego kwasu i 69,5 g chlorowo¬ dorku hydroksyloaminy w 100 ml wody ogrzewa sie pod chlodnica zwrotna w atmosferze azotu w ciagu 18 godzin. Po oziebieniu krystalizuje kwas L-a-(3,4- -dwumetoksybenzylo) -a- hydroksybenzylo -a- hy¬ droksyureidopropionowy, który rekrystalizuje sie z mieszaniny metanol — woda.Do 14,9 g (0,05 mola) tego kwasu w 50 ml dwu- metoksyetanu dodaje sie równowaznikowe ilosci dwucykloheksylokarbodwuimidu w 50 ml dwu- metoksyetanu i calosc miesza sie w ciagu 2 godzin w pokojowej temperaturze. Po odsaczeniu osadu i zatezeniu przesaczu pod zmniejszonym cisnieniem otrzymuje sie L-5-(3',4'-dwumetoksybenzylo)-5-me- tylo-l,2,4-oksadiazyno[4H,5H]-dion-3,6. Otrzymany produkt rozpuszcza sie w 100 ml 50% roztworu wodnego metanolu i dodaje sie 0,062 równowaznika podchlorynu sodowego w temperaturze 0—5°C.Calosc gotuje sie nastepnie w ciagu 1 godziny i za- teza w celu usuniecia metanolu. Po zalkalizowaniu pozostalosci 50% roztworem wodorotlenku sodo¬ wego i ogrzewaniu pod chlodnica zwrotna w ciagu 2 godzin tworzy sie produkt posredni — kwas L-a- -(3,4-dwumetoksybenzylo) -a- dwuazirydynylopro- pionowy, którego sie nie wyodrebnia.Po zakwaszeniu surowego kwasu L-a-(3,4-dwu- metoksybenzylo)-a-hydrazynopropionowego ekstra¬ huje sie go chloroformem, ekstrakty suszy sie i roz¬ dziela chromatograficznie na zelu krzemionkowym.Oczyszczony produkt traktuje sie dalej w sposób opisany w przykladzie XIII w celu otrzymania kwasu L-a-(3,4-dwuhydroksybenzylo)-ct-hydrazyno- propionowego.Przyklad XVIII. 52,4 g (0,2 mola) nitrylu kwasu L-a-N-acetyloamino-a-(3,4-dwumetoksyben- zylo)propionowego miesza sie z 500 ml cztero- wodorofuranu i przez mieszanine przepuszcza sie fosgen w temperaturze 45—50°C tak dlugo, az w mieszaninie znajdzie sie nadmiar fpsgenu. Nadmiar Xea usuwa sie wraz. ze strumieniem azotu, a na¬ stepnie mieszanine zateza sie do polowy objetosci pod zmniejszonym cisnieniem. Do pozostalosci do¬ daje sie w pokojowej temperaturze 8,25 g (0,25 mola) hydroksyaminy i ll,2Tg (0,2 mola) wodoro¬ tlenku potasowego w 70 ml metanolu w taki spo¬ sób, aby zapobiec usuwaniu hydroksyloaminy w postaci chlorowodorku. Po zakonczeniu dodawania mieszanine ogrzewa sie w ciagu 30 minut do wrzenia i utrzymuje we wrzeniu jeszcze 30 minut.Nastepnie calosc zateza sie pod zmniejszonym cis¬ nieniem do sucha i pozostalosc krystalizuje z mie- io szaniny aceton-heksan. N-acetylominooksadiazynon ogrzewa sie dalej ze 100 ml 2n roztworu kwasu chlorowodorowego w ciagu 1 godziny w tempera¬ turze 100°C. Po oziebieniu do temperatury poko¬ jowej oksadiazynodion ekstrahuje sie chlorofor- mem, ekstrakt suszy sie i produkt odzyskuje sie na drodze zatezania pod zmniejszonym cisnieniem.Otrzymany L-5-(3',4'-dwumetoksybenzylo)-5-mety- lo-l,2,4-oksacliazyno-[4H,5H]-dion-3,6 rekrystalizuje sie z mieszaniny aceton-heksan. Po hydrolizie tego produktu prowadzonej w sposób opisany w przy¬ kladzie XIII otrzymuje sie kwas L-a-(3,4-dwu- hydroksybenzylo)-a-hydrazynopropionowy.Przyklad XIX. Mieszanine 23,0 g (0,1 mola) kwasu L-a-amino- nowego i 23 ml 4n roztworu NaOH (0,1 mola) o- ziebia sie do temperatury 5°C i dodaje sie do niej 30 ml 4n roztworu NaOH (0,12 mola) i 18,7 g (0,11 mola) chlorku karbobenzooksylowego, kolejno w 5 równych porcjach w ciagu 30 minut, wytrza- sajac energicznie i chlodzac w lodzie. W czasie trwania reakcji nalezy utrzymywac odczyn lekko alkaliczny. Po zakonczeniu reakcji roztwór ekstra¬ huje sie eterem w celu usuniecia nadmiaru chlor¬ ku kwasowego, a frakcje wodna zakwasza sie wo- bec czerwieni Kongo 5n roztworem HC1, chlodzac lodem. Nastepnie w ciagu 15 minut utrzymuje sie mieszanine w temperaturze 0°C, odsacza krysztaly kwasu N-karbobenzoksy-L-a-amino-a-(3,4-dwume- toksybenzylo)propionowego i suszy je. Otrzymany 40 produkt przejsciowy stosowany jest w opisany dalej sposób.Do 23,9 g (0,1 mola) kwasu L-a-amino-(3,4-dwu- metoksybenzylo)propionowego w 500 ml metanolu dodaje sie gazowy chlorowodór, az do osiagniecia 45 stanu nasycenia. Mieszanine miesza sie w tempe¬ raturze pokojowej w ciagu 24 godzin, a nastepnie odparowuje sie do sucha pod zmniejszonym cis¬ nieniem. Pozostalosc rekrystalizuje sie z mieszaniny metanol-octan etylu, a otrzymany chlorowodorek 50 estru metylowego kwasu L-a-amino-a-(3,4-dwu- hydroksybenzylo)propionowego stosuje sie w na¬ stepnym etapie.Do mieszaniny 37,3 g kwasu N-karbobenzoksy- -L-a-amino -a- (3,4-dwumetoksybenzylo)propiono- 55 wego, 25,3 g estru meblowego kwasu L-a-stmino- L-(3,4-dwumetoksybenzylo)propionowego oraz 14 ml trójetyloaminy w 600 ml chlorku metyle¬ nu dodaje sie 21,8 g N,N'-dwucykloheksylo¬ karbodwuimidu. Po 18 godzinach utrzymywania go mieszaniny, w temperaturze pokojowej dodaje sie 1 ml lodowatego kwasu octowego. Stracony dwu- cykloheksylomocznik oddziela sie na drodze sacze¬ nia, przesacz przemywa sie kolejno woda, rozcien¬ czonym roztworem chlorowodoru, woda, pólnasyco- 65 nym roztworem kwasnego weglanu sodowego,, na-96 933 19 20 syconym roztworem soli i suszy sie; nad bezwodnym siarczanem sodowym. Mieszanine odsacza sie i prze¬ sacz zateza sie pod zmniejszonym cisnieniem. Po¬ zostalosc suszy sie pod zmniejszonym cisnieniem nad pieciotlenkiem fosforu i rekrystalizuje z mie¬ szaniny acetonu i heksanu. 6,1 g (0,01 mola) estru metylowego karbobenzo- ksydwupeptydu w 150 ml metanolu zawierajacego 0,35 g wegla aktywnego z osadzonym na nim pal¬ ladem w ilosci 10% i 5 kropli kwasu octowego poddaje sie uwodornieniu w temperaturze poko¬ jowej i pod zmniejszonym cisnieniem do momentu wydzielenia sie okolo 0,01 mola dwutlenku wegla.Nastepnie mieszanine zateza sie do sucha i pozo¬ stalosc rekrystalizuje z mieszaniny aceton-heksan otrzymujac L-3,6-dwu-(3',4'-dwumetylopiperazyno) dion-2,5. Do mieszaniny 100 ml wody, 200 ml eteru, 28,8 ml stezonego kwasu chlorowodorowego i 44,25 g (0,1 mola) otrzymanego poprzednio piperazynó- nodionu-2,5 wkrapla sie w temperaturze 0—10°C 14,5 g (0,21 mola) azotynu sodowego w 30 ml wody.Calosc miesza sie godzine od dodania azotynu, utrzymujac stale temperature 0—10°C. Nastepnie oddziela sie warstwe eterowa, a warstwe wodna .ekstrahuje sie dwukrotnie porcjami eteru po 100 ml. Polaczone ekstrakty eterowe przemywa sie na¬ syconym roztworem soli, suszy nad siarczanem mognezu i zateza pod zmniejszonym cisnieniem otrzymujac l,4-dwunitrozopiperazynodion-2,5.Mieszanine 26,1 g (0,40 mola) pylu cynkowego i 100 ml wody oziebia sie do temperatury 10°C i mieszajac, dodaje sie 25,0 g (0,05 mola) 1,4-dwu- nitrozopiperazynodionu-2,5 w 150 ml lodowatego kwasu octowego, utrzymujac temperature —15°C. Nastepnie mieszanine pozostawia sie, az do momentu ogrzania sie jej do temperatury pokojowej w ciagu godziny i wreszcie ogrzewa sie ja do temperatury 80°C w lazni wodnej. Miesza¬ nine saczy sie w celu usuniecia cynku przemy¬ wajac osad trzema porcjami po 25 ml cieplego 2n roztworu kwasu chlorowodorowego. Polaczone prze¬ sacze oziebia sie do temperatury pokojowej i, chlo¬ dzac, alkalizuje^sie do pH = 6,5. Wytracony osad odsacza sie i suszy, a nastepnie ekstrahuje trzema porcjami po 200 ml chloroformu. Po wysuszeniu ekstraktu nad siarczanem magnezu, zatezeniu pod zmniejszonym cisnieniem i rekrystalizacji z meta¬ nolu otrzymanej pozostalosci uzyskuje sie L-1,4- -dwuamino-3,6-dwu-(3',4'-dwumetoksybenzylo)-3,6- -dwumetylopiperazynodion-2,5. 9,45 g (0,02 mola) tego produktu hydrolizuje sie w znany sposób w przykladzie XIII otrzymujac kwas L- hydroksybenzylo)-a-hydrazynopropionowy.Przyklad XX. 44,25 g (0,1 mola) piperazyno- dionu-2,5 otrzymanego sposobem opisanym w przy¬ kladzie XIX, rozpuszcza sie w 500 ml suchego dwu- metoksyetanu i do roztworu dodaje sie stopniowo 0,2 mola wodorku sodu uprzednio oddzielonego od oleju mineralnego na drodze przemywania heksa¬ nu i zmieszanego ze 120 ml dwumetoksyetanu. Po zakonczeniu wydzielania sie gazu mieszanine chlo¬ dzi sie do temperatury 50°C i dodaje sie roztwór chloraminy (0,23 mola) w 600 ml dwumetoksyetanu.Nastepnie miesza sie ja w temperaturze pokojowej w ciagu 2 godzin i w temperaturze 50°C, równiez w ciagu 2 godzin. Po ochlodzeniu do temperatury pokojowej mieszanine zakwasza sie lodowatym kwasem octowym do odczynu lekko kwasnego, a nastepnie zateza sie pod zmniejszonym cisnieniem otrzymujac produkt o konstystencji syropu. Do tego produktu dodaje sie chloroform i wode, od¬ dziela sie warstwe chloroformowa, przemywa, su¬ szy nad siarczanem magnezu i zateza pod zmniej¬ szonym cisnieniem otrzymujac pozostalosc,#z której io po rekrystalizacji z metanolu, przeprowadzonej spo¬ sobem opisanym w przykladzie XIX, uzyskuje sie L-l,4-dwuamino -3,6- dwu(3',4'-dwumetoksybenzy- lo)-3,6-dwumetylopiperazynodion-2,5. Po hydrolizie tego zwiazku w sposób opisany w przykladzie I otrzymuje sie kwas L-a-(3,4-dwuhydroksybenzylo)- -a-hydrazynopropionowy, topiacy sie z rozkladem w temperaturze 208°C.Przyklad XXI. 28,96 g (0,1 mola) chlorowo¬ dorku estru metylowego kwasu L-a-(3,4-dwumeto- ksybenzylo)propionowego miesza sie z 300 ml ben¬ zenu i wkrapla 10,1 g (0,1 mola) trójetyloaminy oziebiajac calosc do temperatury 10—15°C. Na¬ stepnie dodaje sie 10,6 g benzaldehydu, 20,6 g (0,1 mofa) dwucykloheksylokarbodwuimidu w 25 ml benzenu i calosc miesza sie w temperaturze poko¬ jowej w ciagu 18 godzin bez dostepu wilgoci. Otrzy¬ mana mieszanine saczy sie, osad przemywa a prze¬ sacz zateza pod zmniejszonym cisnieniem.Do tak otrzymanej zasady Schiffa w 100 ml eteru zawierajacego 0,1 mola amoniaku dodaje sie 0,1 mola chloraminy w postaci okolo 0,35 n roztworu eterowego. Po krótkim czasie zaczyna wydzielac sie chlorek amonu. Mieszanine pozostawia sie na 18 godzin, nastepnie saczy i osad przemywa eterem.Roztwór eterowy czesciowo zateza sie pod zmniej¬ szonym cisnieniem^ ekstrahuje woda, ekstrakt ete¬ rowy suszy nad weglanem potasu, saczy i znowu zateza pod zmniejszonym cisnieniem. Otrzymany ester metylowy kwasu L-a-(3,4-dwumetoksybenzy- 40 lo(-a-)3-fenylo-l-diazirydynylo)propinowego rekry¬ stalizuje sie z mieszaniny aceton-heksan i hydroli¬ zuje w sposób opisany w przykladzie XIII otrzy¬ mujac kwas L-a-(3,4-dwuhydroksybenzylo)-a-hydra- zynopropionowy topiacy sie z rozkladem w tempe- 45 raturze 208°C.Przyklad XXII. Do roztworu 23 g (0,1 mola) kwasu L-a-amino-a-(3,4-dwumetoksybenzylo)propio- nowego w 100 ml dwumetoksyetanu wkrapla sie 21 g (0,1 mola) bezwodnika kwasu trójfluoroocto- 50 wego, oziebiajac do temperatury 15—20°C. Na¬ stepnie mieszanine ogrzewa sie, mieszajac, do tem¬ peratury wrzenia w ciagu 30 minut i oziebia do temperatury pokojowej. Potem do mieszaniny do¬ daje sie 23,8 g (0,2 mola) chlorku tionylu i calosc 55 gotuje sie pod chlodnica zwrotna w ciagu 2 godzin.Mieszanine zateza sie z kolei pod zmniejszonym cisnieniem otrzymujac 2-trójfluorometylo-4-(3',4/- -dwumetoksybenzylo-4-metylooksazolon-5, który krystalizuje sie z toluenu. 60 Do roztworu 30,33 g (0,1 mola) tak otrzymanego oksazolonu i 10,69 g (0,11 mola) tiocyjanianu pota¬ sowego w 150 ml kwasu octowego dodaje sie, mie¬ szajac, 17,96 g (0,11 mola) chlorku jodu. Mieszanine ogrzewa sie, mieszajac, w temperaturze 85—90°C 65 w ciagu 2 godzin. Nastepnie mieszanine uwodornia21 96 933 22 sie uzywajac wodór pod cisnieniem 1—3 atm w obecnosci katalizatora platynowego, wystepujacego poczatkowo w postaci tlenku, w 1 litrze pirydyny.Otrzymana miszanine saczy sie, przemywa 100 ml pirydyny i zateza do sucha pod zmniejszonym cisnieniem otrzymujac L-3-amino-4-(3',4'-dwume- toksybenzylo)-4-metylo-2-trójfluorometylooksazoli- don-5. Do tego produktu dodaje sie 150 ml 6n roz¬ tworu kwasu chlorowodorowego i mieszanine ogrze¬ wa sie w autoklawie do temperatury 150°C w ciagu 2 godzin. Nastepnie autoklaw oziebia sie, odpreza i mieszanine zateza sie do sucha pod zmniejszonym cisnieniem. Otrzymana pozostalosc krystalizuje sie z wody zawierajacej 1% kwasnego siarczynu sodowego uzyskujac czysty kwas L-a- -(3,4-dwuhydroksybenzylo)-a-hydrazynopropinowy.Przyklad XXIII. Do mieszaniny 92,3 g (0,435 mola) nitrylu kwasu DL-a-hydrazyno-a-wanililopro- pionowego w 2 litrach dioksanu i 0,5 litrze cztero- wodorofuranu dodaje sie równoczesnie 100 g (0,43 mola) chlorku 1-mentoksyacetylu i 58 ml (0,415 mola) trójetyloaminy. Calosc miesza sie w poko¬ jowej temperaturze w ciagu 18 godzin. Nastepnie usuwa sie wytracone sole i rozpuszczalniki. Po¬ zostala mieszanine oleista krystalizuje sie^-z octanu etylu i heksanu etyl otrzymujac 66 g produktu za¬ wierajacego glównie Ll-diastereoizomer. Produkt rekrystalizuje sie trzykrotnie z mieszaniny octanu etylu i heksanu uzyskujac 12 g czystego nitrylu kwasu L- droksy-3-metoksybenzylo)propionowego o tempera¬ turze topnienia 126—126,5°C. Dla wzoru C23H35N304: obliczono: C — 66,16; H — 8,45; N — 10,06 znaleziono: C — 66,21; H — 8,68; N — 10,23. ml metanolu i 30 ml stezonego kwasu chloro¬ wodorowego nasyca sie gazowym chlorowodorem w temperaturze od 0 do —10°C. Do mieszaniny dodaje sie, mieszajac, w temperaturze 0°C 3 g (0,0072 mola) otrzymanego powyzej nitrylu i calosc miesza sie w ciagu 18 godzin w otoczeniu o tem¬ peraturze pokojowej. Nastepnie otrzymany roztwór zateza sie do sucha, a pozostalosc rozpuszcza sie w mieszaninie 45 ml stezonego kwasu chlorowodo¬ rowego i 5 ml kwasu octowego i ogrzewa sie w zatopionej rurce w temperaturze 120°C w ciagu 90 minut. Otrzymany ciemny roztwór zateza sie do sucha i z pozostalosci luguje sie produkt przy uzyciu 25 ml etanolu. Po dodaniu 5 ml benzenu i dwuetyloaminy do pH = 6,5 wytraca sie hydra- zynokwas. 1,1 g surowego produktu (56%) odbarwia sie na weglu aktywnym, saczy i krystalizuje z 50 ml wrzacej wody zawierajacej 5 mg Versene o- trzymujac kwas L-a-(3,4-dwuhydroksybenzylo-a-hy- drazynopropionowy, topiacy sie z rozkladem w tem¬ peraturze 208°C, o [a] h25= —17,3° (C = 2,CH3OH.Przyklad XXIV.9,6g (0,04mola) estrumetylo¬ wego kwasu L-a-(3,4-dwubenzyloksybenzylo)-a- -hydrazynopropionowego rozpuszcza sie w In roz¬ tworze kwasu chlorowodorowego i gotuje w ciagu 3 godzin. Mieszanine zateza sie do sucha pod zmniejszonym cisnieniem uzyskujac chlorowodorek kwasu L-a-(3,4-dwubenzyloksybenzylo)-a-hydrazy- nopropionowego. Wolny kwas otrzymuje sie po przepuszczeniu produktu przez zywice jonowy¬ mienne.Przyklad XXV. Mieszanine223,3 g (lmol) 1- metyloksyoctanu metylu w 300 ml metanolu i 125 ml 85% roztworu wodzianu hydrazyny gotuje sie w ciagu 4 godzin. Nastepnie mieszanie zateza sie do sucha pod zmniejszonym cisnieniem i pozostalosc rekrystalizuje sie z mieszaniny metanolu z woda otrzymujac mentyloksyacetylohydrazyne. Do 90,1 g w (0,5 mola) 4-hydroksy-3-metoksyfenyloacetonu w 1 litrze 50% roztworu wodnego metanolu dodaje sie 171,3 g (0,75 mola) 1-mentyloksyacetylohydra- zyny i 32 g (0,54 mola) cyjanku sodu i calosc mie¬ sza sie energicznie w temperaturze pokojowej w ciagu 18 godzin. Mieszanine zateza sie pod zmniej¬ szonym cisnieniem do okolo polowy objetosci i przechowuje w ciagu 48 godzin w temperaturze 0—5°C. Wykrystalizowany produkt odsacza sie, su¬ szy i rekrystalizuje z octanu etylu przez rozpusz- czenie w temperaturze 30°C i oziebienie do tem¬ peratury —20°C otrzymujac nitryl kwasu Ll-N2- -mentoksyacetylohydrazyno - a - (4-hydroksy-3- -metoksybenzylo)propionowego o temperaturze top¬ nienia 126—126,5°C. Tak otrzymany produkt hy- drolizuje sie w sposób opisany w przykladzie XIII uzyskujac kwas L-a-(3,4-dwuhydroksybenzylo)-a- -hydrazynopropionowy.Przyklad XXVI. 97,6 g (0,5 mola) L-a-metyio- tyrozyny, 153,1 g (1,5 mola) bezwodnika octowego i 200 ml pirydyny ogrzewa sie na lazni wodnej w tem¬ peraturze 90—95°C w ciagu 3 godzin, nastepnie oziebia sie do temperatury pokojowej, wylewa na 500 g lodu i ekstrahuje eterem. Ekstrakt eterowy przemywa sie woda, rozcienczonym kwasem i na- syconym roztworem soli. Po zatezeniu pod zmniej¬ szonym cisnieniem pozostalosc rekrystalizuje sie z mieszaniny acetonu z heksanem. 111,7 g (0,4 mola) L-0,N-dwuacetylo-a-metylo- tyrozyny gotuje sie pod chlodnica zwrotna z 1 lit- 40 rem In roztworu kwasu chlorowodorowego w cia¬ gu 2 godzin i mieszanine zateza sie do sucha pod zmniejszonym cisnieniem. Pozostalosc miesza sie z chloroformem i woda, i oddziela sie warstwe organiczna, która zateza sie do sucha pod zmniej- 45 szonym cisnieniem. Otrzymana L-N-acetylo-a-me- tylotyrozyne rekrystalizuje sie z mieszaniny me¬ tanolu i wody. 71,19 g (0,3 mola) tego produktu nitrozuje sie i redukuje cynkiem wedlug sposobu . opisanego w przykladzie XV otrzymujac kwas L- 50 -a-N^acetylohydrazyno -a- hydroksybenzylopropio- nowy. Do 50,45 g (0,2 mola) otrzymanego w po¬ przednim etapie zwiazku w 200 ml 50% wodnego roztworu metanolu dodaje sie, gotujac pod chlod¬ nica zwrotna w atmosferze azotu, 25,47 g (0,2 mola) 55 benzaldehydu w 50 ml metanolu (i calosc gotuje sie w ciagu 2 godzin. Nastepnie mieszanine zateza sie do sucha pod zmniejszonym cisnieniem, a otrzy¬ mana pozostalosc krystalizuje sie z mieszaniny acetonu z heksanem, uzyskujac kwas L-a-N1-ace- 60 tylo-N^-benzylidenohydrazyno -a- (4-hydroksyben- zylo)propionowy.Do 50,05 g (0,15 mola) tego produktu w 150 ml metanolu i 50 ml trójetyloaminy dodaje sie 33,3 g (0,17 mola) czteronitrometanu w 50 ml metanolu 65 i calosc miesza sie w ciagu 18 godzin w tempera-96 933 23 24 turze pokojowej. Po zatezeniu do sucha pod zmniejszonym cisnieniem miesza sie z chlorofor¬ mem i ekstrahuje rozcienczonym kwasem octowym.Wysuszony nad siarczanem sodowym ekstrakt za- teza sie do sucha pod zmniejszonym cisnieniem i rekrystalizuje z metanolu uzyskujac kwas L-a- -N^acet-ylo -N2- benzylidenohydrazyno -a- (4-hy- droksy-3-nitrobenzylo)propionowy.Do 38,44 g (0,1 mola) tego produktu w 100 ml dwumetoksyetanu wkrapla sie, mieszajac, eterowy roztwór dwuazometanu (0,22 mola) w temperaturze 0—5°C. Mieszanine pozostawia sie do ogrzania do temperatury pokojowej, w której utrzymuje sie ja w ciagu 18 godzin. Po zatezeniu do sucha i kry¬ stalizacji pozostalosci z mieszaniny acetonu i hek¬ sanu otrzymuje sie ester metylowy kwasu L-a-N1- -acetylo -N2- benzylidenohydrazyno-(4-metoksy-3- -nitrobenzylo)propionowego. ,62 g (0,05 mola) tak otrzymanego estru w 200 ml metanolu uwodornia sie w obecnosci pla¬ tyny wystepujacej poczatkowo jako 0,1 g tlenku, w temperaturze pokojowej i pod cisnieniem 3 atm tak dlugo, az zuzyje sie 5 moli wodoru na mol substratu. Katalizator usuwa sie przez odsaczenie, przesacz zateza sie i pozostalosc rekrystalizuje sie z mieszaniny metanolu z woda uzyskujac ester metylowy kwasu L-a-N1-acetylohydrazyno-a-(3- -amino-4-metoksybenzylo)propionowego. Do 28,13 g (0,1 mola) tego estru w 300 ml dwumetoksyetanu dodaje sie w temperaturze pokojowej 14,81 g (0,1 mola) bezwodnika ftalowego w 100 ml dwumetok¬ syetanu, nastepnie 1 g kwasu 2,4-dwunitrobenzeno- sulfonowego i mieszanine ogrzewa sie pod chlód- ' nica zwrotna w ciagu 5 godzin, oziebia sie i za¬ teza do sucha pod zmniejszonym cisnieniem. Po¬ zostalosc miesza sie z oziebionym lodem .chloro¬ formem i woda i warstwe wodna alkalizuje sie kwasnym wegalnem sodowym. Warstwe chlorofor¬ mowa przemywa sie woda, suszy nad siarczanem magnezu i zateza. Pozostalosc krystalizuje sie z mieszaniny metanolu i wody otrzymujac ester metylowy kwasu L-a-Ni-acetylo-NMitaloilohydra- zyno-(4-metoksy-3-aminobenzylo)propionowego. Do ,57 g (0,05 mola) tego estru w 22 ml 50% roz¬ tworu kwasu siarkowego dodaje sie w tempera¬ turze 0—5°C, 3,8 g (0,055 mola) azotynu sodowego w 15 ml wody. Meiszanine miesza sie na lazni lo¬ dowej w ciagu 1 godziny, nastepnie pozostawia sie do ogrzania do temperatury pokojowej i w koncu ogrzewa sie na lazni wodnej do zakonczenia wy¬ dzielania sie azotu. Otrzymana mieszanine oziebia sie, ekstrahuje octanem etylu, ekstrakt suszy nad siarczanem sodowym i zateza do sucha pod zmniej¬ szonym cisnieniem. Otrzymuje sie ester metylowy kwasu L-a-N1-acetylo-N2-ftaloilohydrazyno-(4-me- toksy-3-hydroksybenzoilo)propionowego. Tak otrzy¬ many ester hydrolizuje sie w sposób opisany w przykladzie XIII otrzymujac kwas L-a-(3,4-dwu- hydroksybenzylo)-a-hydrazynopropionowy, topiacy sie z rozkladem w temperaturze 208°C.Przyklad XXVII, o 20,63 g (0,1 mola) nitrylu kwasu L-a-amino-a-(4-hydroksy-3-metoksybenzylo) propionowego w 100 ml dwumetoksyetanu dodaje sie w temperaturze 5—10°C (0,15 mola) dwuazo¬ metanu w roztworze eterowym. Mieszanine miesza sie w ciagu 2 godzin utrzymujac te temperature^ a nastepnie pozostawia sie do ogrzania jej do tem¬ peratury pokojowej. Calosc zateza sie nieco pod zmniejszonym cisnieniem w celu usuniecia sladów dwuazometanu i rozciencza sie dwumetoksyetanem do objetosci poczatkowej. Nastepnie dodaje sie alkohol III-rzed.-butylowy w ilosci odpowiadajacej polowie objetosci mieszaniny i w temperaturze 0—5°C, energicznie mieszajac, dodaje sie 130 ml 2,5n roztworu podchlorynu sodowego. Utrzymujac energiczne mieszanie, mieszanine pozostawia sie do ogrzania do temperatury pokojowej i miesza jeszcze w ciagu 1 godziny. Wreszcie mieszanine zateza sie pod zmniejszonym cisnieniem w tern- peraturze 10—20°C.Pozostalosc ogrzewa sie w temperaturze 80—85°C w ciagu 1 godziny w 100 ml pirydyny, oziebia i znowu zateza pod zmniejszonym cisnieniem.Pozostalosc zawierajaca metylenomocznik i chlo- rowodorek pirydyny miesza sie z chloroformem i woda, przemywa rozcienczonym (0,ln) roztworem kwasu chlorowodorowego, 5% roztworem wodnym kwasnego weglanu sodowego i nasyconym roztwo¬ rem soli. Warstwe chloroformowa suszy sie nad siarczanem sodowym i zateza pod zmniejszonym cisnieniem otrzymujac L-4-(3',4'-dwumetoksyben^ zylo)-4-metylodiazetydynon-3, który rekrystalizuje sie z mieszaniny benzenu i n-heksanu. 7,09 g (0,03 mola) tego produktu hydrolizuje sie 25 ml wrza- cego kwasu bromowodorowego, poczatkowo w tem¬ peraturze pokojowej mieszajac w ciagu 1 godziny, a nastepnie gotujac pod chlodnica zwrotna w cia¬ gu nastepnej 1 godziny. Otrzymuje sie kwas L-a- -(3,4-dwuhydroksybenzylo) -a-hydrazynopropionowy topiacy sie z rozkladem w temperaturze 208°C.Przyklad XXVIII. 28,23 g (0,1 mola) kwasu L- go gotuje sie w ciagu 3 godzin w mieszaninie 150 ml etanolu i wody w stosunku 1:1 zakwaszonej do 40 pH = 2 stezonym kwasem chlorowodorowym. Mie¬ szanine zateza sie pod zmniejszonym cisnieniem, w celu usuniecia etanolu, do objetosci okolo 1/3 objetosci poczatkowej i pozostawia do ochlodzenia.Po pozostawieniu mieszaniny w temperaturze 0—5°C 45 w ciagu 1 godziny saczy sie ja i osad przemywa, a nastepnie suszy otrzymujac DL-5-(3',4'-dwume- toksybenzylo)-5-metylohydantoine, która rekrysta¬ lizuje sie z mieszaniny metanolu i wody.Do 13,21 g (0,05 mola) hydantoiny w 100 ml dwu- 50 metylosulfotlenku dodaje sie 2,3 g (0,10 mola) wo¬ dorku sodu w oleju mineralnym i calosc ogrze¬ wa sie do temperatury 50°C, mieszajac, do chwili calkowitego przereagowania wodorku sodu. Na¬ stepnie mieszanine oziebia sie do temperatury po- 55 kojowej i dodaje sie 0,1 mola chloraminy w eterze.Po 1 godzinie pozostawania w temperaturze poko¬ jowej mieszanine ogrzewa sie do temperatury 80°C, mieszajac, i utrzymujac w temperaturze 75—80°C w ciagu 1 godziny. Potem mieszanine za- 60 teza sie pod zmniejszonym cisnieniem do 1/4 obje¬ tosci poczatkowej, rozciencza równa objetoscia wo¬ dy i saczy. Po wysuszeniu na powietrzu w tempe¬ raturze 50°C osad rekrystalizuje sie z mieszaniny metanolu i wody otrzymujac L-l,3-dwuamino-5- 65 -(3',4'-dwumetoksybenzylo)-5-metylohydantoine. Po96 933 26 gotowaniu tego produktu z wrzacym kwasem bro- mowodorowym w ciagu 3 godzin otrzymuje sie surowy kwas L-a-3,4-dwuhydroksybenzylo-a-hydra- zynopropionowy, który oczyszcza sie sposobem opi¬ sanym w przykladzie iXXVII. 5 Przyklad XXIX. 131,15 g (0,5 mola) nitrylu kwasu D-a-N-acestyloaminu-a-(3,4-dwumetoksyben- zylo)propionowego miesza sie w temperaturze 0— —5°C z 1 litrem 45% roztworu kwasu chlorowodoro¬ wego. Mieszanine pozostawia sie do ogrzania do l0 temperatury pokojowej, a nastepnie gotuje w ciagu 2 godzin. Potem mieszanine zateza sie pod zmniejszo¬ nym cisnieniem do objetosci okolo 100 ml, saczy, osad przemywa woda, z lodem i suszy. Chloro¬ wodorek aminokwasu miesza sie z 200 ml wody 15 i dodaje dwuetyloamine do pH = 6,0. Po mieszaniu calosci w ciagu 1 godziny, mieszanine saczy sie, przemywa i suszy otrzymujac kwas D-a-amino-a- -(3,4-dwumetoksybenzylo)propinowy.Do mieszaniny 23,9 g (0,1 mola) tego kwasu w *° 200 ml kwasu octowego zawierajacego 10% wago¬ wych bromowodoru dodaje sie 10,35 g (0,15 mola) azotynu sodowego w 20 ml wody o temperaturze —10°C Mieszanine miesza sie nastepnie "w ciagu 2 godzin w temperaturze 5—15°C i ostroznie ogrze- u wa,. mieszajac, do temperatury 50°C, saczy przez lejek z filtrem ze spiekanego szkla i przesacz za¬ teza pod zmniejszonym cisnieniem. Pozostalosc mie¬ sza sie z chloroformem, przemywa woda, suszy nad siarczanem magnezu i zateza. Pozostalosc kry- 80 stalizuje sie z mieszaniny metanolu i wody otrzy¬ mujac kwas D-a-bromo(3,4-dwumetoksybenzylo)pro- pionowy. Do roztworu 30,3 g (0,1 mola) tego kwasu w 200 ml metanolu dodaje sie, oziebiajac, gazowy chlorowodór. K Mieszanine pozostawia sie w pokojowej tempe¬ raturze w ciagu 42 godzin. Po zatezeniu do sucha pod zmniejszonym cisnieniem pozostalosc miesza sie w wodzie z eterem, ekstrahuje 5% roztworem kwasnego weglanu sodowego, woda oraz nasyco¬ nym roztworem soli i ekstrakt eterowy suszy nad siarczanem magnezu. Po zatezeniu do sucha pod - zmniejszonym cisnieniem otrzymuje sie ester me¬ tylowy kwasu D-a-bromo-a-(3,4-dwumetoksybenzy- lo)propionowego. Ester ten, 12,1 g (0,09 mola) N- -aminoizoindoliny i 200 ml benzenu gotuje sie w atmosferze azotu w ciagu 3 godzin. Mieszanine oziebia sie i dodaje 2,07 g (0,09 mola) wodorku sodu, mieszajac i znowu gotuje sie w atmosferze azotu w ciagu 3 godzin. Po oziebieniu wkrapla sie wode i warstwe wodna zobojetnia lodowatym kwa¬ sem octowym. Warstwy rozdziela sie i warstwe benzenowa przemywa sie woda, roztworem soli i suszy nad siarczanem magnezu. Pozostalosc po zatezeniu do sucha krystalizuje sie trzykrotnie z mieszaniny benzenu i heksanu, otrzymujac L-l- -(N-ftalimido) - 2 - (3',4'-dwumetoksybenzylo)-2- -metyloazirydynon. Po potraktowaniu tego pro¬ duktu wrzacym kwasem bromowodorowym w spo¬ sób opisany w przykladzie XXVII otrzymuje sie kwas L- propionowy.Przyklad XXX. Do 97,12 g (0,5 mola) 3,4-dwu- metoksyfenyloacetonu w 1 litrze mieszaniny me¬ tanolu i wody w stosunku 1:1 dodaje sie 83,0 g (0,75 mola) chlorowodorku semikarbazydu oraz 32 g (0,54 mola) cyjanku sodu, calosc miesza sie energicznie w temperaturze pokojowej w ciagu id godzin i zateza pod zmniejszonym cisnieniem do polowy objetosci. Po 24 godzinach przechowywania w temperaturze 0—5°C zaczyna sie krystalizacja. 83,49 g (0,3 mola) nitrylu kwasu DL-a-(3,4-dwu- metoksyberizylo)-a-semikarbazydopropionowego roz¬ puszcza sie w 1 litrze 49% roztworu kwasu chloro¬ wodorowego w temperaturze 0—5°C. Mieszanine zateza sie pod zmniejszonym cisnieniem prawie do sucha, rozciencza 800 ml l,5n roztworu kwasu chlorowodorowego i gotuje pod chlodnica zwrotna w ciagu 2 godzin otrzymujac kwas DL-a-semikar- bazydopropionowy. 74,33 g (0,25 mola) tego kwasu w 150 ml metanolu miesza sie w temperaturze 60°C z 18,15 g (0,15 mola) L-fenetyloaminy w 100 ml metanolu.Mieszanine zateza sie pod zmniejszonym cisnie¬ niem do okolo polowy objetosci i pozostawia do wykrystalizowania. Wydzielona sól LL odsacza sie, przemywa mieszanina metanolu i eteru w stosunku 1:1 i suszy. Do zawiesiny tej soli w 500 ml wody dodaje sie 50 ml 2,5n roztworu kwasu chloro¬ wodorowego i calosc miesza sie w temperaturze 0—5°C w ciagu 1 godziny. Nastepnie dodaje sie 65 ml 2n roztworu kwasu chlorowodorowego i mie¬ sza sie dalej w temperaturze 0—5°C jeszcze* w ciagu 1 godziny. Potem mieszanine saczy sie i osad przemywa sie. Z przesaczu odzyskuje sie L-fene- tyloamine przez zalkalizowanie i ekstrakcje roz¬ puszczalnikiem organicznym, niemieszajacym sie z woda. 29,73 g (0,1 molajkwasu L-a-(3,4-dwumetoksyben- zylo)-a-semikarbazynopropionowego miesza sie z 200 ml benzenu i oddestykwuje sie z tego 20 ml.Mieszanine oziebia sie do temperatury 25°C, dodaje ,63 g (0,1 mola) dwucykloheksylokarbodwuimidu w 100 ml benzenu i calosc miesza sie w tempera¬ turze 25°C w ciagu 18 godzin. Otrzymana miesza¬ nine saczy sie i osad przemywa sie benzenem, a roztwór benzenowy ekstrahuje sie kolejno 5°/o roz¬ tworem kwasnego weglanu sodowego, woda i na¬ syconym roztworem soli. Nastepnie roztwór ben¬ zenowy suszy sie nad siarczanem sodowym i po zatezeniu, otrzymuje sie L-6-{3',4'-dwumetoksyben- • zylo)-6-metylo-l,2,4-triazynodion-3,5, który krysta¬ lizuje sie z mieszaniny metanolu z woda. Otrzy¬ many produkt hydrolizuje sie wrzacym kwasem bromowodorowym, gotujac pod chlodnica zwrotna w ciagu 3 godzin. Otrzymuje sie kwas L-or-(3,4- -dwuhydroksybenzylo)-a-hydrazynopropionowy.Przyklad XXXI. Do 101,6g (0,3mola)L-O-N- -dwuacetylo-a-metyloseryny w 500 ml pirydyny dodaje sie 90,79 g (0,5 mola) N-chloroftalimidu i calosc gotuje sie w ciagu 5 godzin. Otrzymana mieszanine zateza sie do sucha pod zmniejszonym cisnieniem, pozostalosc miesza sie z chloroformem i woda i przemywa rozcienczonym roztworem kwa¬ su chlorowodorowego, woda i nasyconym roztwo¬ rem soli. Warstwe chloroformowa suszy sie nad siarczanem sodowym, zateza do sucha pod zmniej¬ szonym cisnieniem i pozostalosc rekrystalizuje z mieszaniny metanolu i wody otrzymujac kwas 85 40 45 50 55 60< S7 L-a-N^acetylo-N^ftaloilohydrazyno -a- metylo-O- -acetoksypropionowy, 139,3 g (0,4 mola) tego kwasu gotuje sie w ciagu 3 godzin ze 100 ml kwasu octowego i 900 ml In roztworu kwasu chlorowodorowego. Mieszanine oziebia sie do temperatury pokojowej, przemywa i suszy w temperaturze 50°C pod zmniejszonym cisnieniem otrzymujac kwas L-a-N^acetylo-N2- -ftaloilohydrazyno-a-metylo-3-hydroksypropionowy. 92,0 g (0,3 mola) tego kwasu i 66 g (0,32 mola) dwucykloheksylokarbodwuimidu w 500 ml benzenu miesza sie w temperaturze pokojowej w ciagu 24 godzin. Otrzymana mieszanine saczy sie, do prze¬ saczu dodaje sie wode i warstwe benzenowa prze¬ mywa sie kolejno 5% roztworem kwasnego wegla¬ nu sodowego, woda i nasyconym roztworem soli.Nastepnie warstwe benzenowa suszy sie nad siar¬ czanem magnezowym, zateza pod zmniejszonym cisnieniem i pozostalosc rekrystalizuje sie z mie¬ szaniny octanu etylu i n-heksanu uzyskujac L-a- -N^acetylo-N^-ftaloilohydrazyno -a- metylopropio- lakton.Do 57,65 g (0,2 mola) laktonu i 182,3 g^(l,32 mola) weratrolu dodaje sie jednorazowo 100 g (0,75 mola) chlorku glinowego. Otrzymana mieszanine ogrze¬ wa sie w temperaturze 80°C w ciagu 4 godzin, wylewa na lód i ekstrahuje eterem. Roztwór ete¬ rowy ekstrahuje sie trzykrotnie zimnym In roz¬ tworem wodorotlenku sodowego. Warstwe wodna zakwasza sie stezonym kwasem chlorowodorowym i ekstrahuje eterem. Ekstrakt eterowy prze¬ mywa sie woda, suszy nad siarczanem so¬ dowym i zateza pod zmniejszonym cisnieneim.Otrzymana pozostalosc krystalizuje sie z miesza¬ niny metanolu i wody uzyskujac kwas L-a-fN1- -acetylo-N*-ftaloilohydrazyno) -a- (3,4-dwumetoksy- benzylo)propionowy. Kwas ten hydrolizuje sie w sposób opisany w przykladzie XIII otrzymujac kwas L-a-(3,4-dwuhydroksybenzyLo)-a-hydrazyno- propionowy, topiacy sie z rozkladem w tempera¬ turze 208°C.Przyklad XXXII. 10,75 g (0,03 mola) kwasu L-a-(3,4-dwumetoksybenzylo)-a-N1-benzylohydrazy- nopropionowego gotuje sie pod chlodnica zwrotna z 50 ml kwasu bromowodorowego w ciagu 2 go¬ dzin. Nastepnie mieszanine odparowuje sie do sucha pod zmniejszonym cisnieniem, a pozostalosc przemywa sie Illrzed.-butanolem i suszy otrzymu-. jac surowy bromowodorek kwasu L-a-(3,4-dwuhy- droksybenzyloJ-a-N^benzylohydrazynopropionowe- go.Sól te rozpuszcza sie w 200 ml kwasu octowego i uwodornia w obecnosci 1 g palladu naniesionego na wegiel aktywny w ilosci 5% w stosunku do wegla, w temperaturze pokojowej i pod cisnieniem 3 atm. Nastepnie mieszanine odpreza sie, saczy i osad przemywa sie, a polaczone przesacze odpa¬ rowuje sie do sucha pod zmniejszonym cisnieniem.Pozostalosc rozpuszcza sie w metanolu i dodaje sie dwuetyloamine do pH = 6,5. Po odsaczeniu i re¬ krystalizacji z 0,5% wodnego rozwtoru kwasnego siarczanu sodowego otrzymuje sie kwas L-a-(3,4- -dwuhydroksybenzylo)-a-hydrazynopropionowy, to¬ piejacy z rozkladem w temperaturze 208°C.Przyklad XXXIII.Do50,06g (0,15mola)kwasu 933 28 L-a-N^acetylo-N^benzylidenohydrazyno -a- mety- ló^P-(4-hydroksyfenylo)propionowego w 150 ml me¬ tanolu i 50 ml trójetyloaminy dodaje sie 33,3 g (0,17 mola) czteronitrometanu w 50 ml metanolu i mieszanine miesza sie w ciagu 18 godzin w tem¬ peraturze pokojowej. Po zatezeniu do sucha pod zmniejszonym cisnieniem mieszanine traktuje sie chloroformem i ekstrahuje rozcienczonym kwasem octowym. Po wysuszeniu ekstraktu nad siarczanem 19 sodowym, zatezeniu do sucha pod zmniejszonym cisnieniem i rekrystalizacji z metanolu otrzymuje sie kwas L-a-N^acetylo-NS-benzylidenohydrazyno- -a-metylo-P-(4-hydroksy-3-nitrofenylo)propionowy.Do 38,44 g (0,1 mola) tego zwiazku wkrapla sie, mieszajac, eterowy roztwór dwumetoksyetanu (0,22 mola) w temperaturze 0—5°C. Mieszanine pozosta¬ wia sie do ogrzania w temperaturze pokojowej i jeszcze na nastepne 18 godzin. Nastepnie miesza¬ nine zateza sie do sucha i po rekrystalizacji z rnie- *o szaniny acetonu i heksanu otrzymuje sie kwas L-a-N^acetylo-N^-benzylidenohydrazyno -a- mety- lo-|3-(4-metoksy-3-nitrofenylo)propionowy. 20,62 g (0,05 mola) estru z poprzedniego etapu w 200 ml metanolu uwodornia sie w obecnosci platyny, wy- stepujacej poczatkowo jako tlenek w ilosci 0,1 g, w temperaturze pokojowej i pod cisnieniem 3 atm.Po zuzyciu 5 moli wodoru na mol substratu odsa¬ cza sie katalizator, przesacz zateza i pozostalosc rekrystalizuje z mieszaniny metanolu i wody.Do 28,13 g (0,1 mola) otrzymanego estru metylo¬ wego kwasu L-a-N^acetylohydrazyno-a-metylo-P- -(3-amino-4-metoksyfenylo)propionowego w 300 ml dwumetoksyetanu dodaje sie w temperaturze po¬ kojowej 14,81 g (0,1 mola) bezwodnika ftalowego w 100 ml dwumetoksyetanu. Po dodaniu 1 g kwasu 2,4-dwunitrobenzenosulfonowego mieszanine ogrze¬ wa sie do wrzenia w ciagu 5 godzin. Nastepnie mieszanine oziebia sie, zateza do sucha pod zmniej¬ szonym cisnieniem, pozostalosc traktuje sie lodo- 40 watym chloroformem i woda i warstwe wodna al- kalizuje sie kwasnym weglanem sodowym. Warstwe chloroformowa przemywa sie woda, suszy nad siarczanem magnezu i zateza. Po krystalizacji po¬ zostalosci z metanolu i wody otrzymuje sie ester 45 metylowy kwasu L-a-N^acetylo-NMtaloilobydrazy- no-a-metylo -|3- (4-metoksy-3-aminofenylo)propio- nowego.Do 20,57 g (0,05 mola) tego estru w 22 ml 50% roztworu kwasu siarkowego dodaje sie, w tempe- 50 raturze 0—5°C, 3,8 g (0,55 mola) azotynu sodowego w 15 ml wody. Calosc miesza sie na lazni lodowej w ciagu 1 godziny, pozostawia do ogrzania do temperatury pokojowej, a nastepnie ogrzewa sie na lazni wodnej az do zakonczenia wydzielania sie 55 azotu. Otrzymana mieszanine oziebia sie, ekstra¬ huje octanem etylu i ekstrakt suszy sie nad siar¬ czanem sodowym, a nastepnie zateza sie do sucha pod zmniejszonym cisnieniem. Pozostalosc krysta¬ lizuje sie w sposób opisany uprzednio otrzymujac 60 kwas L-a-hydrazyno-a-metylo-P-(3,4-dwuhydroksy- fenylo)propionowy, topiacy sie z rozkladem w tem¬ peraturze 208°C.Przyklad XXXIV. Do roztworu 9,6 g (0,04 mo¬ la) estru metylowego kwasu L-a-(3,4-dwuhydroksy- 65 benzylo)-a-hydrazynopropionowego w 1 litrze 0,ln96 29 roztWoru chlorku potasowego dodaje sie z mikro- biurety wodorotlenek potasowy do pH = 8, a na¬ stepnie dodaje sie okolo 100 jednostek esterazy z watroby swinskiej utrzymujac temperature 37°C i dodajac, w razie potrzeby, wodorotlenek potaso¬ wy w celu utrzymania pH = 8. Po 4 godzinach dodaje sie kwas chlorowodorowy do pH = 6,4 i mieszanine zateza sie do sucha pod zmniejszo¬ nym cisnieniem. Pozostalosc ekstrahuje sie meta¬ nolem i rekrystalizuje z wody otrzymujac kwas L-a-hydrazynopropionowy, topniejacy z rozkladem w temperaturze 208°C.Przyklad XXXV.Postepujac w sposób opisany w przykladzie XXXIV, lecz zastepujac esteraze z watroby swinskiej enzymami otrzymanymi z jed¬ nego z mikroorganizmów: Aspegillus oryzae, Zygo- saccharomyces acidifiens, Streptomyces spheroides i Alcaligenes sp. otrzymuje sie kwas, który na¬ stepnie oczyszcza sie chromatograficznie przy uzy¬ ciu zywicy jonowymiennej typu Amberlite-IR-120 w postaci kwasnej.Przyklad XXXVI. Z50g jeczmienia ekstrahuje sie enzymnitrylaze 100 ml 0,ln buforu fosforano¬ wego pH = 7,5.Do tego enzymu dodaje sie nitryl kwasu L-a-(3,4- -dwuhydroksybenzylo)-a-hydrazynooctowego roz¬ puszczony w takiej ilosci metanolu, aby koncowe stezenie wynosilo 2%. Hydrolize prowadzi sie w temperaturze 25—37°C w ciagu 1—6 godzin utrzy¬ mujac pH = 7—8 dzieki dodawaniu rozcienczonych zasad. Pod koniec tego czasu mieszanine zakwasza sie do pH = 1—2 rozcienczonym kwasem solnym i ekstrahuje chloroformem. Wodna warstwe prze¬ mywa sie chloroformem i zateza do sucha pod zmniejszonym cisnieniem. Otrzymana pozostalosc rekrystalizuje sie z wody uzyskujac chlorowodorek kwasu L-p-(3,4-dwuhydroksyfenylo)-a-hydrazyno- propionowego topiacego sie z rozkladem w tempe¬ raturze 208°C.Przyklad XXXVII. Roztwór239,0 g(1,0mola) L-a-(3,4-dwumetoksybenzylo)alaniny w 500 ml me¬ tanolu nasyca sie gazowym chlorowodorem w tem¬ peraturze 20°C, a nastepnie miesza sie w tempe¬ raturze pokojowej w ciagu 42 godzin i zateza do sucha pod zmniejszonym cisnieniem. Do pozosta¬ losci rozpuszczonej w metanolu dodaje sie, ozie¬ biajac, 101 g (1,0 mol) trójetyloaminy i 96,1 g (1,0 mol) sulfamidu. Otrzymana mieszanine ogrzewa sie powoli, mieszajac, do wrzenia, utrzymuje we wrze¬ niu w ciagu 18 godzin i zateza do sucha pod zmniej¬ szonym cisnieniem. Pozostalosc krystalizuje sie z mieszaniny metanolu i wody otrzymujac ester metylowy kwasu L-a-(3,4-dwumetoksybenzylo)-a- -N-sulfamyloaminy.Do oziebionej lodem mieszaniny 160,2 g (0,5 mola) tego estru i 600 ml 2,5n roztworu wodorotlenku potasowego dodaje sie 892 ml (0,625 mola) 0,7In roztworu podchlorynu sodowego i, po 5 minutach utrzymywania mieszaniny w temperaturze 0—5°C 933 ogrzewa sie ja, mieszajac, do temperatury 80°C i utrzymuje w tej temperaturze w ciagu 1,5 godziny.Nastepnie mieszanine oziebia sie do temperatury °C, dodaje 2 litry toluenu i calosc zakwasza ste- zonym kwasem chlorowodorowym do pH = 2. Po¬ tem mieszanine miesza sie w ciagu 0,5 godziny, rozdziela sie warstwy i warstwe wodna przemywa sie 0,5 litra toluenu. Warstwe wodna zateza sie nastepnie do sucha pod zmniejszonym cisnieniem, l0 pozostalosc rozpuszcza sie w etanolu i suszy otrzy¬ mujac kwas L-a-(3,4-dwumetoksybenzylo)-a-hydra- zynipropionowy.Tak otrzymany kwas rozpuszcza sie w 150 ml sfe zonego kwasu chlorowodorowego i ogrzewa w za- l5 topionej rurce w temperaturze 120°C w ciagu 2 godzin. Otrzymana mieszanine zateza sie do su¬ cha pod zmniejszonym cisnieniem i pozostalosc luguje etanolem. Hydrazynokwas wytraca sie po dodaniu dwuetyloaminy do pH = 6,4, osad odsacza sie, przemywa etanolem i suszy. Po rekrystalizacji z wody zawierajacej niewielkie ilosci kwasnego siarczanu sodowego otrzymuje sie kwas L-a-(3,4- -dwuhydroksybenzylo)-a-hydrazynopropionowy. PL PL