PL70072B2 - - Google Patents

Description

Pierwszenstwo: Zgloszenie ogloszono: 05.05.1973 Opis patentowy opublikowano: 15.03.1974 70072 KI. 30h, 2/10 MKP A61k 17/04 Twórcy wynalazku: Arnold Adamiec, Janina Grzegorzewska, Mieczyslaw Lukaszewski, Kazimierz Samula, Irena Zarebska Uprawniony z patentu tymczasowego: Instytut Przemyslu Farmaceutycznego, Warszawa (Polska) Sposób wyodrebniania hormonów peptydowych z gruczolów trzustki Przedmiotem wynalazku jest sposób wyodrebniania hormonów peptydowych ze zwierzecych gruczolów trzustkowych. Hormony takie jak np. insulina i glukagen maja zastosowanie w medycynie jako srodki lecznicze.Znany sposób wyodrebniania tych hormonów polega na szybkim zamrozeniu swiezo wyjetych z zabitego zwierzecia gruczolów trzuskowych w temperaturze nizszej niz 0°C, np. w temperaturze -30°C, a nastepnie na rozdrobnieniu gruczolów w odpowiednich urzadzeniach rozdrabniajacych i uzyciu rozdrobnionych gruczolów bezposrednio po ekstrakcji rozpuszczalnikami organicznymi i dlaszego przerobu ekstraktu wedlug ogólnie zna¬ nych metod. Sposób ten nie prowadzi do calkowitego wyodrebienia hormonów peptydowych i pelnego wyko¬ rzystania tak cennego i deficytowego surowca, jakim sa trzustkowe gruczoly zwierzece.Inny korzystniejszy sposób opisany w opisie patentowym nr 67736 polega glównie na tym, ze gruczoly trzustkowe poddaje sie dzialaniu wodnego roztworu soli organicznych oraz nieorganicznych w temperaturze —5° - +5°C wciagu 10 minut do 5 godzin, a nastepnie w ogólnie znany sposób ekstrahuje sie rozpuszczalnikami organicznymi po uprzednim oziebieniu do temperatury -80° — +5°C.Stwierdzono obecnie, ze gruczoly trzustkowe mozna poddac dzialaniu wodnych roztworów soli w zakresie temperatur wygodniejszym niz -5°C - +5°C, a mianowicie w temperaturze pokojowej lub wyzszej, stosujac odpowiednio krótszy czas dzialania tych soli. Stwierdzono równiez, ze oziebienie gruczolów trzustki do tempe¬ ratury -80°C - +5°C przed ekstrakcja rozpuszczalnikami organicznymi jest zbedne. Unika sie w ten sposób kosztownych urzadzen chlodzacych i zwieksza przelotowosc aparatury, przy czym osiagane wydajnosci sa po¬ dobne lub nieco wyzsze niz w sposobie opisanym w opisie patentowym nr 67736.Wedlug wynalazku, swiezo wyjete z zabitych zwierzat gruczoly trzustkowe poddaje sie dzialaniu wodnego roztworu soli w temperaturze +5°C - +50°C w ciagu 1/2 minuty do 10 minut, po czym przygotowane w ten sposób gruczoly oddziela sie od roztworu soli, oziebia i przechowuje w temperaturze -80°C - +5°C. Nastepnie w dogodnym momencie gruczoly rozdrabnia sie, miele, doprowadza do temperatury -5°C - +50°C, pozostawia w tej temperaturze w ciagu 1/2 minuty do 5 godzin i w znany sposób poddaje sie je ekstrakcji rozpuszczalnikami organicznymi. W podanych zakresach temperatur czas jest tym krótszy, im wyzsza temperatura i wieksze stezenie roztworu soli.2 70 072 Do sporzadzania wodnego roztworu soli uzywa sie soli nieorganicznych oraz/lub organicznych, w których kationem jest pierwiastek nalezacy do I-III grupy ukladu okresowego lub amonu, w sklad anionu wchodzi pierwiastek nalezacy do V-VII grupy ukladu okresowego lub tworzy go reszta kwasu organicznego zawierajacego 1—3 grup karboksylowych w czasteczce, przy czym kwas ten nioze byc jedno- lub wielofunkcyjny, taki jak aminokwas lub hydroksykwas. Do sporzadzania roztworu wodnego soli moga wiec byc uzyte róznorodne sole, takie jak np. fosforan potasowy dwuzasadowy, fosforan jednoamonowy, chlorek potasowy, octan sodowy, gli- cynian sodowy, cytrynian amonowy, chlorek wapniowy, mleczan wapniowy, chlorek glinowy, siarczan bizmu- tawy, siarczan glinowo-potasowy, chlorek zelazowy, siarczan zelazawy, cytrynian zelazowy, octan olowiawy, mleczan olowiawy, przy czym w sklad roztworu soli moze wchodzic zarówno pojedyncza sól, jak i mieszanina soli nieorganicznych oraz/lub organicznych.Stezenie roztworu soli moze byc zawarte w szerokich granicach i wynosi 1—500 g/l, korzystnie 50—250 g/l.Stosuje sie przy tym 0,5—10 objetosci roztworu soli, korzystnie 2—4 objetosci roztworu soli na 1 objetosc swiezego gruczolu trzustkowego i 0,05-1 objetosci roztworu soli, korzystnie 0,1—0,3 objetosci roztworu soli na 1 objetosc zmielonego gruczolu trzustkowego.Bezposrednie traktowanie swiezo wyjetych gruczolów trzustkowych wodnym roztworem soli w praktycznej realizacji wynalazku moze napotykac trudnosci. W zwiazku z tym moze sie okazac korzystne' zastosowanie odmiany sposobu wedlug wynalazku polegajacej na tym, ze swiezo wyjete z zabitych zwierzat gruczoly trzustko¬ we najpierw oziebia sie i przechowuje w temperaturze — 80°C — +5°C, a nastepnie gruczoly rozdrabnia sie i miele i poddaje dzialaniu wodnego roztworu soli w temperaturze —5°C — +50°C wciagu 1/2 minuty do 10 minut, p.o czym zmacerowana w ten sposób tkanke gruczolów trzustkowych w znany sposób poddaje sie eks¬ trakcji rozpuszczalnikami organicznymi.Przyklad I. 2 kg swiezo wyjetych z zbitych zwierzat gruczolów trzustkowych zanurzono w51 10% roztworu o temperaturze 10°C, zawierajacego siarczan zelazawy i octan sodowy w stosunku molowym 0,05 : 1, na przeciag 9 minut, po czym oddzielono roztwór soli, a gruczoly oziebiono i przechowywano w temperaturze —25°C. Po uplywie 48 godzin gruczoly rozdrobniono na lamaczu szczekowym i zmielono w mlynku, po czym temperature ich doprowadzono do +5°C i pozostawiono w tej temperaturze wciagu 30 minut. Nastepnie tak zmacerowana tkanke gruczolów trzustkowych zadano w ekstraktorze 5 1 alkoholu etylowego z dodatkiem 20 ml 85% kwasu fosforowego. Ekstrakcje prowadzono w ciagu 3 godzin, po czym ekstrakt alkoholowy oddzielono przez odwirowanie. Pozostalosc ponownie ekstrahowano 70% alkoholem etylowym w ilosci 3,5 1 i odwirowano.Polaczone ekstrakty zalkalizowano 15% amoniakiem do wartosci pH = 7,8—8,2. Wydzielony osad szybko odsa¬ czono, a ekstrakt zakwaszono 10% kwasem solnym do wartosci pH = 3,5. Alkohol odparowano pod zmniejszo¬ nym cisnieniem w temperaturze, nie przekraczajacej 35°C. Wydzielony tluszcz usunieto przez saczenie za pomoca celitu. Surowa insuline wysolono, stosujac 20% nasycenia chlorkiem sodowym, po czym poddano ja oczyszczeniu i krystalizacji za pomoca buforu cytrynianowego. Uzyskano 280 mg czystej insuliny o mocy 24 j.m./mg.Przyklad II. 2 kg swiezo wyjetych z zabitych zwierzat gruczolów trzustkowych zamrozono szybko w temperaturze — 30°C i przechowano w tej temperaturze do nastepnego dnia. Nastepnie gruczoly trzustkowe rozdrobniono na lamaczu szczekowym, zmielono w mlynku przy równoczesnym dodaniu 200 ml 20% roztworu zawierajacego fosforan jednoamonowy, chlorek magnezowy, chlorek potasowy i glicynian sodowy w stosunku molowym 1:1:2:2, utrzymujac mieszanine w temperaturze +7°C wciagu 9 minut. Zmacerowana w ten spo¬ sób tkanke gruczolów trzustkowych zaladowano do ekstraktora i postepowano tak, jak podano w przykladzie I.Uzyskano 276 mg czystej insuliny o mocy 24,3 j.m./mg. PL PL

Claims (1)

1. Z a s t r z e z e n i e p a t e n t o w e Sposób wyodrebniania hormonów peptydowych ze zwierzecych gruczolów trzustkowych przez bezposrednie poddawanie gruczolów dzialaniu roztworu soli, oddzielenie roztworu soli, przechowywanie gruczolów w tempe¬ raturze -80°C - +5°C, rozdrobnienie i ekstrakcje rozpuszczalnikami organicznymi lub przechowywanie, gruczo¬ lów w temperaturze — 80°C — +5°C, rozdrobnienie, poddanie dzialaniu roztworu soli i ekstrakcje gruczolów rozpuszczalnikami organicznymi, znamienny tym, ze gruczoly poddaje sie dzialaniu roztworu soli w temperatu¬ rze + 5°C — +50°C wciagu 1/2 minuty do 10 minut, przy czym im wyzsza temperatura i wieksze stezenie roztworu, tym krótszy czas dzialania. Prac. Poligr. UP PRL. zam. 136/74. naklad 1:20+18 Cena 10 zl PL PL