PL64983B1 - - Google Patents

Description

Ponadto woda drozdzowa jest takze zródlem azotu, natomiast zródlem wegla w pozywce jest glukoza.Zastosowanie do hodowli Ashbya gossypii po¬ zywki stalej (szczepionej materialem pobranym z plynnej pozywki do otrzymywania askospor) po¬ zwala uzyskiwac kolonie grzyba pochodzace z je¬ dnej askospory. Ponadto umozliwia wybór kolonii o intensywnym pomaranczowym zabarwieniu cha¬ rakterystycznym dla kolonii grzyba posiadajacego zdolnosc do syntezy duzych ilosci ryboflawiny.Przeprowadzenie hodowli na tej pozywce wyklucza mozliwosc uzycia do dalszych pasazy kolonii bia¬ lych wzgledlnie z bialymi sektorami charakteryzu¬ jacych sie brakiem zdolnosci do syntezy rybofla¬ winy, wzglednie posiadajacych zdolnosc syntezy ryboflawiny lecz w niewielkiej ilosci.Zastosowanie do hodowli Ashbya gossypii plyn¬ nej pozywki posiewowej I (szczepionej jedna kolo¬ nia grzyba, wyhodowana na pozywce stalej) za¬ wierajacej dobrze przyswajalne substancje umo¬ zliwia namnozenie komórek i tym samym otrzy¬ manie materialu do szczepienia plynnej pozywki posiewowej II.Zastosowanie do hodowli Ashbya gossypii plyn¬ nej pozywki posiewowej II (szczepionej zawiesina grzybni wyhoidowana w plynnej pozywce posie¬ wowej I), zawierajacej jako zródlo wegla tluszcz pozelatynowy, powoduje wytworzenie przez ko¬ mórki grzyba enzymów adaptacyjnych (powstaja¬ cych w wyniku zetkniecia sie tych koniórek z sub- stratem — tluszczem pozelatynowym) umozliwia¬ jacych zuzywanie tluszczu pozelatynowego. Wy¬ tworzenie enzymów adaptacyjnych przez grzyb ma szczególnie duze znaczenie, poniewaz plynna po¬ zywka produkcyjna zawiera jako zródlo wegla tluszcz pozelatynowy w stosunkowo duzej ilosci.Zastosowanie plynnej pozywki produkcyjnej (szczepionej zawiesina grzybni wyhodowana w plynnej pozywce posiewowej II) zawierajacej jako zródlo wegla tluszcz pozelatynowy i jako zródlo azotu klej skórny i/lub klej kostny, umozli¬ wia otrzymanie wysokich wydajnosci ryboflawiny tylko wtedy, gdy hodowUa Ashbya gossypii dokar-64983 6 Glukoza czysta 2,0 °/o Agar 2,0 °/o Woda drozdzowa (0,5% suchej masy) do 100,0 °/o pH pozywki korygowano za pomoca wodorotlenku potasu do wartosci = 7,2 i wyjalawiano w tempe¬ raturze lli»°C wciagu 30 minut. Pozywke rozlewa¬ no do plytek Petri'ego po 20 iml. Pozywke stala szczepioino zawiesina askospar wyhodowana na po¬ zywce plynnej. Inkubacje przeprowadzano w tem¬ peraturze 28°C w ciagu 4—5 dni. Otrzymane w ten sposób kolonie grzyba stosowano do szczepienia plynnej pozywki posiewowej I.Przygotowywano plynna pozywke posiewowa I o okladzie: 10 miana jest tluszczem pozelatynowym dodawanym do pozywki w optymalnej ilosci i w odpowiedniej go¬ dzinie hodowli. Dodawany tluszcz pozelatynowy stymuluje drugi i trzeci cykl wzrostu grzybni i bio¬ synteze ryboflawiny. Klej skórny lub kostny wprowadza sie do pozywki w postaci stalej lub w postaci roztworu.Sposób prowadzenia hodowli Ashbya gossypii i wydajnosci ryboflawiny w plynnej pozywce pro¬ dukcyjnej zawierajacej tluszcz pozelatynowy i klej skórny lub .klej kostny przedstawiaja szczególowe przyklady, w których °/o oznaczaja procenty wagowe.P r z y k l a d I Przygotowano .plynna po¬ zywke do otrzymywania askospar grzyba Ashbya gossypii o skladzie: Glukoza czysta 1,0 °/o Tiamina HC1 .. 0,1 °/o Woda drozdzowa (0,5°/o suchej masy) do 100,0 °/o 20 pH pozywki korygowano do wartosci = 6,9 za po¬ moca wodorotlenku potasu, rozlewano po 10 ml do probówek i wyjalawiano w temperaturze 110°C w ciagu 30 minut.Probówki z pozywka szczepiono 4—5-dnicwa ko¬ lonia grzyba wyhodowana na pozywce stalej.Przygotowywano pozywke stala o nastepujacym skladzie: 25 30 35 40 45 Glukoza czysta 1,0 "/o Laktoza czysta 0,3 °/o Pepton 0,5 °/o 50 Ekstrakt drozdzowy 0,3 °/o Errata W glówce opisu patentowego mylnie wydrukowano nazwisko wspóltwórcy wynalazku jest: Maria Szczepanowska powinno byc: Maria Szczepankowska sowano do szczepienia plynnej pozywki posiewo¬ wej II. • Przygotowywano plynna pozywke posiewowa II o skladzie: Drozdze paszowe 2,0 % Tluszcz pozelatynowy 1,5 °/o Wyciag namokowy kukurydzy (50°/o su¬ chej masy) 3,0 °/o Woda wodociagowa ....... do 100,0 °/» pH pozywki korygowano do wartosci = 7,2, po¬ zywke rozlewano po 50 ml do kolb Erlenmeyarte o pojemnosci 500 ml i wyjalawiano w temperaturze 110°C w ciagu 30 minut.Kazda kolbe z plynna pozywka posiewowa II szczepioino 1 ml zawiesiny grzybni z plynnej po¬ zywki posiewowej I. Hodowle prowadzono w ciagu 24 godzin w takich samych warunkach jak na plynnej pozywce posiewowej I. Otrzymana w ten~ sposób zawiesina grzybni szczepiono plynna pozyw¬ ke produkcyjna.Przygotowywano plynna pozywke produkcyjna o skladzie: Klej skórny 3,0 °/o Wyciag namokowy kukurydzy (50% suchej masy) 6,0 °/o Glicyna 0,15 % KH2P04 0,15 °/o Mg++ l^g/ml Co++ 2/ig/ml Mn++ 5^g/ml Zn++ 10g/ml Woda wodociagowa do 100,0 °/o pH pozywki korygowano do wartosci —- 6,8 za po¬ moca wodorotlenku potasu. Pozywke rozlewano po 30 ml do kolb Erlenmeyer'a o pojemnosci 500 ml i do kazdej kolby dodawano tluszcz pozelatynowy w ilosci 4,0% objetosciowych. Pozywki wyjalawia¬ no w temperaturze 110°C w ciagu 3 godzin.Kazda kolbe z pozywka szczepiono 1 ml zawie¬ siny grzybni z plynnej pozywki posiewowej II. Ho¬ dowle prowadzono w zaciemnionym pomieszczeniu, na trzesawce obrotowej o 220 obrotach/min. i mi- 'mosrodzie 25 mm w temperaturze 28 °C w ciagu 192 godzin.Do poszczególnych partii kolb z plynnymi po¬ zywkami produkcyjnymi zawierajacymi tluszcz pozelatynowy w ilosci 4,0% objetosciowych w 72, qr 19Q oraz 72 i 120 godzinie hodowli Ashbya gos- Zawartosci ryboflawiny (witaminy B2) po ^dzinach hodowli Ashbya gossypii w pozyw- do których dodawano tluszcz pozelatynowy znych godzinach hodowli przedstawione sa licy 2.Tablica 2 I!zas dodawania tluszczu pozelatynowego 1dzina ^g/ml 3140 96 godzina /^g/rni 3100 120 godzina 2720 72 i 120 godzina ^g/ml 510064983 Jak wykazano wyzej najwieksza wydajnosc ry- baflawiny otrzymano w pozywce, do której dodano tluszcz pozelatynowy w 72 i 120 godzinie hodowli.Przyklad II Sklad jakosciowy i ilosciowy pozywek posiewowych, sposób ich przygotowywania oraz sposób przeszczepiania i warunki hodowli Ashbya gossypii byly takie same jak w przykla¬ dzie I. Ponadto przygotowywano plynne pozywki produkcyjne zawierajace klej skórny w ilosci 3,0% 3,5% i 4,0% objetosciowych.Do poszczególnych partii kolb z plynnymi po¬ zywkami produkcyjnymi zawierajacymi rózne ilos¬ ci kleju skórnego (3,0%, 3,5'%, 4,0%) dodawano tluszcz pozelatynowy w ilosci po 2,5% objetoscio¬ wych w 72 i 120 godzinie hodowli.Zawartosci ryboflawiny (witaminy B2) w po¬ zywkach z róznymi ilosciami kleju skórnego po 168 godzinach hodowli Ashbya gossypii przedsta¬ wione sa w tablicy 3.Tablica 3 Klej skóinny 3Vo /ig/ml 5780 Klej skórny 3,5% /ig/ml 5910 Klej skórny 4% jWg/ml 5850 Klej kostny 3,0% //g/ml 5180 Tablica 4 KIej kostny 3,5% /ig/ml 5060 Klej kostny | 4,0% tug/m\ 5040 8 zawierajacych tluszcz pozelatynowy, klej skórny lub klej kostny.Wytworzona ryboflawine znajdujaca sie w ply¬ nach hodowlanych izoluje sie jedna ze znanych metod chemicznych. PL PL

Claims (8)

1. Zastrzezenia patent o w e 10 15 20 Jak wykazano wyzej w pozywkach zawieraja¬ cych klej skórny otrzymuje sie wysokie wydajnos¬ ci ryboflawiny. Przyklad III Sklad jakosciowy i ilosciowy pozywek posiewowych, sposób ich przygotowywania oraz sposób przeszczepiania i warunki hodowli Ashbya gossypii byly takie same jak w przykla¬ dzie I. Ponadto przygotowywano plynne pozywki produkcyjne zawierajace klej kostny w ilosci 3,0%, 3,5% i 4,0% objetosciowych. Do poszczególnych kolb z plynnymi pozywkami produkcyjnymi zawierajacymi rózne ilosci kleju kostnego (3,0%, 3,5%, 4,0%) dodawano tluszcz po¬ zelatynowy w ilosci po 2,5% objetosciowych w 72 i 120 godzinie hodowli. Zawartosci ryboflawiny (witaminy B2) w pozywkach z róznymi ilosciami kleju kostnego po 192 gpdzinach hodowli Ashbya gossypii przedstawione sa w tablicy 4. Jak wykazano wyzej w pozywkach zawieraja¬ cych klej kostny otrzymuje sie wysokie wydaj¬ nosci ryboflawiny. W przykladach I, II, III, wykazano, ze sposo¬ bem wedlug wynalazku mozna otrzymac wysokie wydajnosci ryboflawiny w plynnych pozywkach 1. Sposób wytwarzania ryboflawiny metoda bio¬ syntezy w podpowierzchniowej hodowli grzyba Ashbya gossypii na pozywkach zawierajacych tluszcz pozelatynowy jako zródlo wegla, znamien¬ ny tym, ze grzyb Ashbya gossypii poddaje sie wstepnemu pasazowaniu przez odpowiednio" do¬ brane pozywki stale i plynne a nastepnie poddaje sie hodowli na plynnej pozywce produkcyjnej za¬ wierajacej jako zródlo azotu klej skórny i/lub kostny.

2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze pasazowanie prowadzi sie przez plynna pozywke, w której grzyb Ashbya gossypii wytwarza askcs- pory, nastepnie przez pozywke stala, na której grzyb wyrasta w postaci kolonii, przez plynna po- 25 zywlke posiewowa I, w której namnazaja sie ko- imórki grzyba, przez plynna pozywke posiewowa II, w której rosnacy grzyb wytwarza enzymy ada¬ ptacyjne oraz w plynnej pozywce produkcyjnej w której grzyb wytwarza ryboflawine.

3. Sposób wedlug zastrz. 1 i 2, znamienny tym, ze do otrzymania askospor stosuje sie plynna po¬ zywke zawierajaca 0,2—1,5% wagowych glukozy, 0,01—0,2% wagowych chlorowodorku tiaminy i do 100,0% wody drozdzowej.

4. Sposób wedlug zastrz. 1—3, znamienny tym, ze do otrzymania kolonii grzyba Ashbya gossypii stosuje sie pozywke stala zawierajaca 0,2—3,0% wagowych glukozy, okolo 2,0% wagowych agaru i do 100,0% wagowych wody drozdzowej.

5. Sposób wedlug zastrz. 1—4, znamienny tym, ze do namnazania komórek stosuje sie plynna po¬ zywke posiewowa I, zawierajaca 0,2—3,0% wago¬ wych glukozy, 0,1—0,5% wagowych laktozy, 0,1— 1,0% wagowych peptonu, 0,1—0,5% wagowych eks¬ traktu drozdzowego oraz do 100,0% wagowych wo¬ dy wodociagowej.

6. Sposób wedlug zastrz. 1—5, znamienny tym, ze dio wytwarzania enzymów adaptacyjnych sto¬ suje sie plynna pozywke posiewowa II zawieraja¬ ca 0,5—3,0% wagowych dlrozdzy paszowych, 0,5— 3,0% wagowych tluszczu pozelatynowego, 0,5—4,0% wagowych wyciagu namokowego kukurydzy (50% suchej masy) oraz do 100,0°/o wagowych wody wo¬ dociagowej.

7. Sposób wedlug zastrz, 1—6, znamienny tym, ze do biosyntezy ryboflawiny stosuje sie plynna pozywke produkcyjna zawierajaca jako zródlo we¬ gla 0,1—10,0% wagowych tluszczu pozelatynowego i jako zródlo azotu 0,5—7,0% wagowych kleju skór¬ nego i/lub kleju kostnego.

8. Sposób wedlug zastrz. 1—7, znamienny tym, ze klej skórny lub kostny wprowadza sie w po¬ staci stalej lub rozitworu. 30 35 40 45 50 55 60 KZG 1, z. 136/72 — 195 Cena zl 10.— PL PL