PL61298B1 - - Google Patents

Description

(alfa)DM=-51° w metanolu, (45 g Trit-(OTB) Glu-Trit(His-Phe-Arg-Try-Gly-(CTB)Lys-Pro-Val- HGly^(CTB)-Lys-(CTB)^Lys-Airg-Arg-Pro-Val- Lys-Val-Tyr-Pro-Vai-NH2. 3 Tos-OH rozpuszcza sie w 500 ml 80% kwasu octowego, po czym pozosta- 30 wia w temperaturze 30° w ciagu 2 godzin, do¬ daje sie 50 ml Amberlitu IRA 410 w postaci octanowej, przesacza, odparowuje w prózni, a po¬ zostalosc po odparowaniu rozpuszcza w metanolu.Po wytraceniu eteru uzyskuje sie 40 g H-(OTB)Glu- 35 -(Trit)His-Phe-Arg-Try - Gly - (CTB)Lys - Pro - Val- -Gly-(CTB)LysH(CTB)-Lys-(CTB)Lys-Arg-Arg-Pro- -Val-(CTB)Lys-Val-Tyr-Pro-Val^NH2. Rozklad na¬ stepuje w temperaturze 170°. (Alfa)D20=—49° w metanolu. 40 Przyklad III. Otrzymywanie estru metylo¬ wego L-tyrozylo-L-serylo-L-norleucyny. (H-Tyr- -Ser-Nle-OMe). 54 g H-Ser-Nle-OMe. HC1 i 63 g CBO-Tyr-OH rozpuszcza sie w 860 ml acetonitrylu, oziebia do 45 temperatury 0°, dodaje 28 ml Trójetyloaminy, oziebia do temperatury —10°C po czym dodaje 41 g karbodwuimidu dwucykloheksylu.Mieszanine miesza sie w ciagu 16 godzin w tem¬ peraturze 0°, po czym odsacza. Osad wymywa sie 1400 ml , pirydyny. Polaczone przesacze odparo¬ wuje sie, a pozostalosc wykrystalizowuje z octanu etyki. Uzyskuje sie 101 g CBO-Tyr-Ser-Nle-OMe o temperaturze topnienia 140—142°; (ailfa)D20= —15° w dwumetyloformamidzie). 51 g otrzymanego produktu rozpuszcza sie w 2 litrach 1 n roztworu HC1 w metanolu, po czym uwodarnia w (obecnosci 10 g wegla osadzonego na palladzie. Po uplywie okolo 2 godzin pobór wodo¬ ru przez roztwór zostaje ukonczony. Odsacza sie, odparowuje, a pozostalosc wykrystalizowuje z mie¬ szaniny metanol/eter (3:1). Uzyskuje sie 42 g N-Tyr-Ser-Nle-OMe-HCl. Temperatura topnienia 227° (alia)D20= —7° w dwumetylaformamidzie.Przyklad IV. Otrzymywanie hydrazydu kar-9 bo-III rzed. butoksy-D-serylo-L-tyrozylo-L-serylo- -L-aiorleucyny. 60 g chlorowodorku estru metylowego D-seryny rozpuszcza sie w 200 ml dwumetyloformamidu i 54 ml trójetyloaminy, oziebia do temperatury 0°, po czym chlorowodorek trójetyloaminy odsacza sie.Dwumetyloformamid odparowuje sie w wysokiej prózni a pozostalosc rozpuszcza w 150 ml pirydyny.Wkrapla sie 100 g azydku III rzed. butyioksy-kar- bonylu, po czym pozostawia w temperaturze 20° na. przeciag 2 dni. Rozpuszczalnik odparowuje sie, a pozostaly produkt rozpuszcza w octanie etylu. Po wymyciu woda rozcienczonego kwasem solnym oraz roztworem kwasnego weglanu potasu, suszy sie nad siarczanem sodu. Po odparowaniu octanu etylu pozostaje CTB-D-Ser-OMe w postaci oleju.Ester ten rozpuszcza sie w 500 ml metanolu, po czym pozostawia z 50 ml wodzianu hydrazyny w temperaturze 20° na przeciag 2 dni. Po odparowa¬ niu metanolu wykrystalizowuje hydrazyd. Przekry- stalizowany z goracego octanu etylu wyodrebnia sie 53 g CTB-D-Ser-iNHNH2 o temperaturze top¬ nienia 114°. (alfa)D21=—3° w dwuimetylafiormaani- dzie. 10 g hydrazydu CTB-D-seryny rozpuszcza sie w temperaturze —10°C w 136 ml 1 n kwasu solnego, zawierajacego 15 g chlorku sodu. W tej temperatu¬ rze dodaje sie 160 ml octanu etylu, a nastepnie w trzech porcjach 38 g azotynu sodu. Mieszanine po¬ zostawia sie do przereagowania, podczas mieszania w temperaturze —10°C jeszcze w ciagu 5 minut.Warstwe octanu etylu oddziela sie, przemywa zim¬ nym 10% roztworem kwasnego weglanu potasu, po czym suszy nad siarczanem sodu. Do osuszonego roztworu dodaje sie roztwór zlozony z 13 g chloro¬ wodorku H-Tyr-Ser-Nle-CMew 60 formamidu i w 6 ml trójetyloaminy.Nastepnie octan etylu odparowuje sie w prózni, a pozostalosc pozostawia w temperaturze 20° w ciajgu 16 godzin. Rozpuszczalnik odparowuje sie w prózni, a pozostalosc rozpuszcza w octanie etylu.Roztwór ten wymywa sie rozcienczonym kwasem fosforowym i roztworem kwasnego weglanu po¬ tasu, po czym suszy nad siarczanem sodu. Po od¬ parowaniu rozpuszczalnika i wytraceniu eterem otrzymuje sie 15 g CTB-D-Ser-Tyr-Ser-Mle-OMe o temperaturze topnienia 135°. .(alfa)D20=—6° w metanolu. 11 g CTB-D-Ser-Tyr-Ser-Nle-OMe rozpuszcza sie w 100 ml metanolu, po czym dodaje 45 ml wodzianu hydrazyny. Roztwór pozostawia sie w temperaturze 20° przez noc, w wyniku czego pro¬ dukt wykrystalizowuje. Wykrystalizowany produkt saczy sie i przemywa metanolem i eterem nafto¬ wym. Otrzymuje sie 7,7 g hydrazydu CTB-D-Ser- -Tyr-Ser-Nle o temperaturze topnienia 210° (alfa)D20O=+6,4° w dwumetyloformaimidzie.Przyklad V. Otrzymywanie amidu D-Sery- lo-L-tyrozylo-L-serylo-L-norleucylo-L - glutamylo- -L-histydylo-L-fenyloalanilo-L-arginylo-L-trypto- fanylo-Glicylo-L -lizylo-L-prolilo-L -walilo- glicylo- -L-lizylo-L-lizylo-L-arginylo-L-arginylo-L-prolilo- -L-walilo-L-lizylo-L-walilo-L-tyrozylo-L-prolilo-L- -waliny. (D-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-Fhe-Arg-Try- 10 -Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Arg-Arg - Pro-Val- -Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NH2) (Fig.2). 2,0 g CTB-D-Ser-Tyr-Ser-Nle-NHNH2 (przyklad IV) rozpuszcza sie w 12 ml dwumetyloformamidu, 5 dodaje 4 ml wody, oziebia do temperatury —10°, dodaje 2 ml 6 n kwasu solnego, po czym dodaje 280 mg azotynu sodu, miesza w ciagu 5 minut w temperaturze —5°, nastepnie dodaje 300 ml, 0,2 n roztworu kwasnego weglanu potasu i odwirowuje. 10 Otrzymany CTB-D-Ser-Tyr-Ser-Nle-N3 octanu rozpuszcza sie w 50 ml dwumetyloformamidu, do¬ daje 10,5 g H-Glu-(OTB)-Trit)-His-Phe-Arg-Try- -Gly-(CTB)Lys-Pro-Val-Gly-(CTB)Lys- (CTB)-Lys- -Arg-Arg - Pro-Val-(CTB)Lys-Val - Tyr - Pro- Val- 15 -NH2, pozostawia w spokoju, w temperaturze 0° w ciagu 12 godzin, dodaje dalsza ilosc azydku czte- ropeptydu, wytworzonego z 2,0 g CTB-D-Ser-Tyr- Ser-Nle-NHNH2, pozostawia w spokoju w tempe¬ raturze 0° w ciagu 6 godzin, odparowuje, miesza 20 z octanem etylu, wymywa goracym acetonem i octanem etylu po czym suszy w prózni.Uzyskany produkt rozpuszcza sie w 100 ml 90% kwasu trójfluorooctowego, pozostawia w atmosfe¬ rze azotu w temperaturze,20° przez 1 godzine,1 od- 25 parowuje, miesza z octanem etylu, odsacza i su¬ szy. Uzyskany produkt rozpuszcza sie w 500 ml 0,2 n kwasu octowego, przepuszcza roztwór przez amberlit IRA-410 w postaci octanowej, saczy i lio¬ filizuje. Po wysuszeniu nad wodorotlenkiem sodu 30 otrzymuje sie 7,5 g 10-cio wodnego siedmiooctanu H-D-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-Phe-Arg-Tyr-Gly- -Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Arg-Arg-Pro-Val - Lys- -Val-Tyr-Pro-Val-NH2,który przy przeprowadza¬ niu oznaczen chromatograficznych w czasie elek- 35 troforezy zachowuje sie jak substancja homoge¬ niczna. (W wyniku calkowitej hydrolizy ustala sie nastepujacy sklad aminokwasów: Ser-i,9 Tyr^g Nlei,i Glui,o His1H) Phelfl Arg3,! Gly2,0 Lys2,i Pro30 40 Val„9).Wyniki mikroanalizy: obliczono: C 51,9 H 7,5 N 16,2 O 24,4% znaleziono: C 52,1 H 7,5 N 15,6 O 24,8% Temperatura topnienia: 209° z rozkladem 45 (alfa)Df0=—80° .w 1 n kwasie octowym. PL PL

Claims (4)

1. Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania nowego pentakozapepty- du o wzorze amidu D-serylo-L-tyrozylo-L-serylo- -L-norleucylo-L-glutamylo-L-histydylo-L- fenylo - alanylo-L-arginylo-L-tryptofanylo-glicylo-L-lizylo- -L-prolilo-L-walilo-glicylo-L-lizylo-L - lizylo-L-ar- ginylo - L - arginylo-L-prolilo-L-walilo-L-lizylo-L- 55 -walilo-L-tyrozylo-L-prolilo-L-waliny, ewentualnie w postaci jego spli addycyjnych lub zwiazków kompleksowych z metalami ciezkimi znamienny tym, ze od amidu N-R'nDnserylo-L-tyrozyilo-L-se- rylo-L-norleucylo-Y-0-R"-L-glutamylo - Im ^R'"-L- 60 -histydylo-L-fenyloalanylo-L-arginylo- L-tryptofa - nylo-glicylo-e-N-R-L-lizylo-L-prolilo-L-walilo-gli- cylo-e-N-R-L-lizylo-e-N-R-L-lizylo-L-arginylo-L- arginylo-L-prolilo-L-walilo-e -N-R-L-lizylo-L-wa- lilo-L-tyrozylo-L-prolilo-L-waliny, w którym R i 65 R' oznaczaja grupy ochronne stosowane w chemii61298 11 peptydów do ochrony grup aminowych, R" i R'" oznaczaja karboksylowe ewentualnie imidazolowe grupy ochronne lub atom wodoru, a Im oznacza grupe imidazolilowa, odszczepia sie grupy ochron¬ ne w jednym lub w kilku stopniach, a nastepnie otrzymany pentakozapeptyd ewentualnie znanym sposobem przeprowadza w jego aktywne pod wzgledem terapeutycznym sole addycyjne z kwa¬ sami organicznymi lub nieorganicznymi, lub prze¬ prowadza w zwiazki kompleksowe z metalami ciezkimi.

2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze grupy ochronne w jednym lub kilku stopniach odszczepia sie od amidu N-R'-D-serylo-L-tyrozylo- -L-serylo-L-norleucylo-Y-O-III rzed. butylo-L- -glutamylo-IM-trójfenylometylo-L-histydylo-L-fe- nyloalanylo-L-arginylo-L-tryptofanylo-glicylo-e-N- -R-L-lizylo-L-prolilo-L-walilo^glicylo-e -N-R-L-li- zylo-e-N-R-L-lizylo-L-arginylo-L-arginylo-L-proli- lo-L-walilo-e-N-R-L-lizylo-L-walilo-L-tyrozylo-L- -prolilo-L-waliny, w którym R i R' oznaczaja grupy ochronne stosowane w chemii peptydów do ochrony grup aminowych.

3. Sposób wedlug zastrz. 1, 2 znamienny tym, ze grupy ochronne odszczepia sie od amidu N-R'- - D - serylo-L-tyrozylo-L-serylo-L-norleucylo-Y-O- -III rzed. butylo-L-glutamylo-IM-trójfenylomety- lo-L-histydylo-L-fenyloalanylo-L-arginylo-L-tryp- tofanyloglicylo-e-N-R-L-lizylo-L-prolilo-L-walilo- -glicylo-E-N-R-L-lizylo-e-N-R-L-lizylo-L-arginylo- -L-arginylo-L-prolilo-L-walilo-8 -N-R-L-lizylo-L- -walilo-L-tyrozylo-L-prolilo-L-waliny, w którym R i R' maja znaczenie wyzej podane, wytworzone¬ go na drodze kondensacji amidu L-walilo-e -N- - R-L-lizylo-L-walilo-L-tyrozylo-L-prolilo-L-wali- ny, w którym R ma wyzej podane znaczenie z N-karbobenzoksy-L-walilo-glicylo-e -N-R-L-lizylo- -E- N-R-L-lizylo-nitro-L-arginylo-nitro-L-arginy- lo-L-prolina, w której R ma wyzej podane zna- 12 czenie i nastepnej kondensacji otrzymanego ami¬ du N-karbobenzoksy-L-walilo-glicylo-E-N-R-L-li- zylo-E -N-R-L-lizylo-nitro-L-arginylo-nitro-L-ar- ginylo-L-prolilo-L-walilo-E-N-R-L-lizylo-L-walilo- 5 -L-tyrozylo-L-prolilo-L-waliny, w którym R ma wyzej podane znaczenie, po odszczepieniu grupy nitrowej oraz grupy karbobenzoksylowej z N-trój- fenylometylo-Y-O-III rzed. butylo-L-glutamylo- -Im-trójfenylometylo-L-histydylo-L-fenyloalanylo- 10 -L-arginylo-L-tryptofantylo-glicylo-E-N-R - L-lizy- lo-L-prolina, w której R ma wyzej podane zna¬ czenie i kondensacji otrzymanego amidu N-trój- fenylometylo-Y-O-rzed. buitylo-L-glutamylo-iIm- trójfenylometylo-L-histydylo-L-fenyloalanylo-L-ar- ginylo - L - tryptofanylo-glicylo-E-N-R-L-lizylo - L- -prolilo-L-walilo - glicylo -e-N-R-L-lizylo-£-N- -R-L-lizylo-L-arginylo-L-arginylo-L-prolilo-L-wa- li(lo-E-N-R-L-lizylo-L-walilo-L-tyTozylo-L-prolilo- -L-waliny, w którym R ma wyzej podane znacze- 20 nie, po odszczepieniu grupy a-N-trójfenylometylo¬ wej z azydkiem N-R'-D-Serylo-L-tyrozylo-L-sery- lo-L-norleucyny w którym R' ma wyzej podane znaczenie.

4. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze grupy ochronne odszczepia sie od amidu N-R'-D- 25 -serylo-L-tyrozylo-L-serylo-L-norleucylo - y jO-III rzed. butylo-L-glutamylo-Im-trójfenylometylo-L- -histydylo-L- fenyloalanylo- L-arginylo-L-tryptJo- fanyloglicylo-E-N-R-L-lizylo-L-jprolilo - L - walilo- -glicylo-E-N-R-L-lizylo-E-N-R-L-lizylo-L-arginylo- -L-arginylo-L-prolilo -L- walilo-E-N-R-L-lizylo-L- walilo-L-tyrozylo-L-prolilo-L-waliny, w którym grupe ochronna R stanowi grupa karbo-III rzed. butoksylowa, karbo-III rzed., amyloksylowa, kar- bobenzoksylowa, grupa toluenosulfonylowa, ftalilo- wa, formylowa i trójfluoroacetylowa, a grupe ochronna R' grupa trójfenylornetyIowa, karbo-III- rzed. butoksylowa, karbo-III rzed. amyloksylowa, karbobenzoksylowa, grupa trójfluoroacetylowa, acetylowa, chloroacetylowa i formylowa. 35KI. 12 q,6/01 61298 MKP C 07 c, 103/52 CBOH Vat Gti R R -I 1 NO, NO. f ' 1 i i—i 1 CBO -\ Vat Gti Lis Lis -|- N^ H-| Arg Arg Pro L- OH R R -I 1- Lis Lic + h NO, NO, Arg Arg Pro \- OH M-| ygt Lis Vo< Tur Pro \fed|-NHg R NO, + NO, + CBOJ Val Gti Lis Lis Arg Arg Pro VaL Lis Vat Tyr Pro Val h R R + ?M Vbl Gti Lis Lis Arg Arg Pro Figi Val Lis Va( Tyr Pro Mai hNH cbo- R'-|D-Ser Rl CBO -[ty |OH hfjser NU |OMe BOJTyr Ser We k)Me HHTyr Ser Nie WMe 0TB Trit 1 \~ ^A- -h D-Ser Tyr Ser Nte [pNe Tr<-|Ghi His Phe Arg Tvy Mi Lis Pro|-OH H-Wat Gti Lis Lis Arg Arg Pro Vot Lis \*U Tyr Pro NfatlflH, . ^ ? M 1 1 [Glu His Phe Arg TTy gU Lis Pto Vq< Gti Lis Lis Arg Arg Pro Vbl Lis Va{ Tyr P»o Mb*^ D-Ser Tyr Se* Nte |NHNH3 Tri- D-Ser Tur Ser Nte m, OTB Tfit 3 -M- Gtu Ht5 Phe Arg Ttj Gti Lis Pro Vq( Gti Lis Lis Arg Arg Pro Vgt Lis Vq( Tyr Pro W^H, OTB Tfit 1 1" + ¦+¦ RHD-Ser Tyr Ser Nte Gtu His Phe A/g Try Gti Lis Pro Vgt Gti Lis Lis Arg Arg Pro Vot Lis Vot Tyr Pro Vat[l W D-Ser Tyr Ser Nte Gtu His Phe Arg Try GtL Lis Prp Vat Gti Lis Lis Arg Arg Pro Vq( Lis Vbt Tyr Pro Mat^ n9.z PL PL