PL56820B1 - - Google Patents

Description

Pierwszenstwo: Opublikowano: 25.1.1969 56820 KI. 6 a, 22/07 MKP C 12 d FZYTELNfA JKD ;$|* I U.Wspóltwórcy wynalazku: dr Stefan Marcinkiewicz, mgr Jan Kruk, mgr Jerzy Gebski, mgr Helena Gawle, mgr Maria Budzynska Wlasciciel patentu: Tarchominskie Zaklady Farmaceutyczne, Warszawa (Polska) Sposób wydzielania enzymów proteolitycznych z pozostalosci trzustki po wyodrebnieniu insuliny i Przedmiotem wynalazku jest sposób wydziela¬ nia enzymów proteolitycznych z pozostalosci trzu¬ stki po wyodrebnieniu insuliny.Enzymy te stosuje sie jako pólprodukt do otrzy¬ mywania enzymów w czystej postaci przeznaczo- 5 nych dla lecznictwa oraz do obróbki niektórych artykulów przemyslowych, glównie do garbowania skór.Zagadnienie wykorzystania poinsulinowych osa¬ dów trzustkowych jest przedmiotem licznych pu- 10 blikacji np. opisów patentowych Nr 51230 i 52283.Znane metody postepowania sprawadzaja sie do obnizenia stezenia alkoholu w pozostalosci trzu¬ stki po wyodrebnieniu insuliny przez wyplukanie kilka lub kilkunastokrotna, w stosunku do wagi 15 osadu, iloscia wody, a nastepnie ekstrakcje wodna i wytracanie enzymów za pomoca rozpuszczalni¬ ków organicznych lub wysolenie za pomoca soli - mineralnych. Wedlug niektórych sposobów stosuje sie ekstrakcje wodna z dodatkiem soli mineral- 23 nych lub zwiazków organicznych.Sposoby powyzsze maja niewielkie znaczenie techniczne ze wzgledu na znaczna pracochlonnosc oraz duze straty rozpuszczalników i coli mineral¬ nych. ^ 25 Wedlug wyzej wspomnianych opisów patento¬ wych poinsulinowe pozostalosci trzustki przemywa sie w celu usuniecia alkoholu i kwasu mala iloscia wody lub rozpuszczalnika organicznego jak octan etylu, octan metylu, aceton, nastepnie otrzymany 30 produkt zobojetnia sie zwlaszcza amoniakiem i poddaje autolizie. Autolize przeprowadza sie w temperaturze pokojowej w ciagu kilku dni, a dla zapoczatkowania i przyspieszenia procesu dodaje sie do substratu autolizat trzustkowy. Po ukonczonej autolizie, autolizat ekstrahuje sie roz¬ puszczalnikiem mieszajacym sie z woda lub mie¬ szanina takich rozpuszczalników jak alkohole roz¬ puszczalne w wodzie, estry kwasów organicznych lub ketony. Pozostalosc po ekstrakcji stanowiaca koncentrat enzymów proteolitycznych poddaje sie suszeniu.Wedlug opisu patentowego Nr 52238 autolizat oczyszcza sie przez suszenie substratu w suszarni rozpylowej bezposrednio po autolizie, a nastepnie jego ekstrakcje rozpuszczalnikami organicznymi.Omawiany sposób wytwarzania wykazuje po¬ wazne niedogodnosci technologiczne. Metoda jest kosztowna i trudna do realizacji z powodu trwa¬ jacego kilka dni procesu autolizy oraz kosztownej i trudnej w zakupie i montazu aparatury do su¬ szenia rozpylowego.Wedlug wynalazku enzymy proteolityczne wy¬ dziela sie z pozostalosci trzustki po wyodrebnie¬ niu insuliny, uwolnionej od alkoholu, w ten spo¬ sób, ze pozostalosc te miesza sie z solami amono¬ wymi, korzystnie z siarczanem amonu w ilosci 5 do 15% wagowych w stosunku do ciezaru po¬ zostalosci oraz trzustka w ilosci 10 do 40% wago¬ wych w stosunku do ciezaru pozostalosci po czym 568203 doprowadza sie pH mieszaniny do wartosci 8,0— —8,5, korzystnie za pomoca wody amoniakalnej utrzymujac powyzsza mieszanine w temperaturze 25—50°C w ciagu 7—15 godzin. Otrzymany w ten sposób hydrolizat zawierajacy sole nieorganiczne 5 odwadnia sie przez zmieszanie z rozpuszczalnikiem organicznym mieszajacym sie z woda, korzystnie z acetonem lub etanolem, odwirowanie, a nastep¬ nie wysuszenie pod próznia. Odwodniony produkt w znany sposób rozdrabnia sie, nastepnie uwal- 10 nia od substancji balastowych na drodze ekstrakcji f rozpuszczalnikiem, korzystnie acetonem lub trój¬ chloroetylenem, po czym suszy sie, korzystnie pod próznia.Zastosowana w procesie technologicznym hydro- 15 liza ma na celu rozbicie polaczenia enzymu zwia¬ zanego z czescia strukturalna komórki i nadania mu aktywnej formy.Prowadzenie hydrolizy w srodowisku alkalicz¬ nym w podwyzszonej temperaturze, w obecnosci 2o soli amonowych, zamiast podanej w opisie paten¬ towym Nr 51 230 autolizy w srodowisku obojetnym w temperaturze pokojowej pozwolilo skrócic czas przebiegu procesu wydzielania enzymów z kilku dni do kilkunastugodzin. 25 Sposobem wedlug wynalazku otrzymuje sie po¬ nadto wyzsza wydajnosc oraz wzrost aktywnosci preparatu.Sposób wedlug wynalazku wyjasnia podany ni¬ zejprzyklad. 30 Przyklad. 50 kg wolnych od insuliny pozos¬ talosci gruczolu trzustkowego przemywa sie 2-krot- nie podwójna iloscia wody i odwirowuje. Osad wprowadza sie do podgrzewanego mieszalnika do¬ daje 5 kg trzustki, rozpuszczonej w 5 1 wody, 5 kg 35 siarczanu amonowego i doprowadza sie do war¬ tosci pH 8,'0—8,5 za pomoca wody amoniakalnej.Mieszanine podgrzewa sie, mieszajac, do tempera- 4 tury 25°—30°C, a nastepnie pozostawia w tej tem¬ peraturze w ciagu 7 godzin. Po ukonczonej hy¬ drolizie produkt zalewa sie 1,5 czesciami wago¬ wymi, w stosunku do wagi substratu, acetonu lub etanolu i dokladnie miesza. Mieszanine przenosi sie na wirówke w celu oddzielenia czesci uwod¬ nionego rozpuszczalnika.Osad z reszta rozpuszczalnika rozklada sie na tace i poddaje suszeniu w suszarni prózniowej w mozliwie niskiej temperaturze.Po wysuszeniu rozdrabnia sie i poddaje ekstrak¬ cji za pomoca acetonu lub trójchloroetylenu w ilos¬ ci 25 litrów. Wyekstrahowany osad suszy sie.Otrzymuje sie okolo 15 kg suchego proszku o aktywnosci powyzej 25000 jednostek Fuld-Gros- sa w 1 gramie. PL

Claims (1)

Zastrzezenie patentowe

1. Sposób wydzielania enzymów proteolitycznych z pozostalosci trzustki po wyodrebnieniu insuli¬ ny uwolnionych od alkoholu, znamienny tym, ze pozostalosc te miesza sie z solami amono¬ wymi, korzystnie z siarczanem amonu w ilosci 5—15% wagowych w stosunku do ciezaru po¬ zostalosci oraz z trzustka w ilosci 10—40% wa¬ gowych w stosunku do ciezaru pozostalosci, po czym doprowadza sie pH mieszaniny do war¬ tosci 7,5—9,5, korzystnie za pomoca wody amo¬ niakalnej, utrzymujac mieszanine w tempera¬ turze 25—50°C w ciagu 7—15 godzin, po czym otrzymany hydrolizat odwadnia sie przez zmie¬ szanie z rozpuszczalnikiem organicznym, mie¬ szajacym sie z woda, korzystnie z acetonem lub etanolem, odwirowanie i wysuszenie pod próz¬ nia, a z uzyskanego produktu usuwa sie sub¬ stancje balastowe w znany sposób przez eks¬ trakcje i suszenie. /PZG w Pab., zam. 1070-68, nakl. 220 c PL