PL49555B1 - - Google Patents

Description

Pierwszenstwo: Opublikowano: 14.VI.1965 49555 KI. 30h, 6 MKP C 12 d UKD $1.Twórca wynalazku: mgr inz. Zbigniew Kotula Wlasciciel patentu: Instytut Antybiotyków, Warszawa (Polska) BIBLIOTEK*- Urzedu Patentowegc HMm toiBl»qaHtsi LidlW Sposób oczyszczania antybiotyków zasadowych za pomoca jonitów Wynalazek dotyczy sposobu oczyszczania stezo¬ nych roztworów antybiotyków zasadowych takich jak streptomycyna, wiomycyna, kanamycyna, otrzymywanych na drodze fermentacyjnej.Dotychczasowe metody oczyszczania antybioty¬ ków zasadowych za pomoca jonitów polegaja na ich sorpcji na jonitach karboksylowych w for¬ mie sodowej, a nastepnie na elucji rozcienczonym kwasem lub zasada. Otrzymany elut poddaje sie nastepnie dalszemu oczyszczaniu np. przez odmi- neralizowanie go na kationicie sulfonowym. Do- wex 50 W w formie kwasnej. Uzyskany kwasny wyciek zobojetnia sie woda barowa lub anionitem i odbarwia sie weglem aktywnym. Wedlug metod opisanych w opisach patentowych Stanów Zjed¬ noczonych Ameryki nr 2765302 (1956) i nr 2868779 (1959) do eluatu zawierajacego obok znacznej ilos¬ ci kationów streptomycyny, niewielkie ilosci ka¬ tionów wapnia, magnezu i innych wielowartoscio¬ wych metali dodaje sie weglanu sodu i lugu sodo¬ wego doprowadzajac pH roztworu do wartosci 8,7 w celu wytracenia weglanu wapnia, a nastepnie sól sodowa kwasu etylenodwuaminoczterooctowe- go dla ilosciowego zwiazania jonów wapnia, mag¬ nezu i innych wielowartosciowych metali w forme kompleksowa, po czym ponownie adsorbuje sie na kationicie Amberlit IRC-50. Otrzymany drugi eluat odmineralizowuje sie na kationicie sulfo¬ nowym Amberlit IR-120i amonicie Amberlit IR-45.Wedlug opisu patentowego NRD nr 18098 (1960) eluat oczyszcza sie przepuszczajac go przez urza¬ dzenie, którego wypelnienie stanowi zarówno ka¬ tion!t sulfonowy w formie wodorowej, jak tez anionit w formie hydroksylowej, po czym po za- 5 geszczeniu eluatu w wyparce, odbarwia sie go woda chlorowa.We wszystkich wyzej opisanych metodach do oczyszczania roztworów stosuje sie odbarwianie za pomoca wegla aktywnego, wzglednie wody io bromowej lub chlorowej oraz odmineralizowanie za pomoca kationitów sulfonowych i anionitów.Odbarwianie za pomoca wegla prowadzi sie trzy do czterech razy, za kazdym razem tracac pew¬ na ilosc antybiotyków zasorbowana na weglu ak- 15 tywnym. Wegiel aktywny wykorzystywany jest jednorazowo bez regeneracji i aktywacji.W dotychczas opisanych metodach oczyszczania ogólna wydajnosc wyizolowanego gotowego pro¬ duktu wynosi 65—70% liczac na zawartosc anty- 20 biotyku w brzeczce.Stwierdzono, ze oczyszczanie roztworów antybio¬ tyków zasadowych od soli nieorganicznych, sub¬ stancji organicznych i zwiazków barwnych mozna przeprowadzic za pomoca jonitów typu adsorp- 25 cyjnego lub amfoterycznego. Powyzsze jonity po¬ zwalaja na prowadzenie oczyszczania roztworów antybiotyków zasadowych przy róznych wartos¬ ciach pH. Ilosc usunietych substancji barwnych wedlug oznaczen kolorymetrycznych wynosi 80— 30 —95% w stosunku do barwy poczatkowej roztworu, 4955549555 przy czym równoczesnie nastepuje podwyzszenie mocy uzyskanego antybiotyku o 10% w stosunku do produktu uzyskanego bezposrednio z eluatu przed oczyszczeniem jonitem amfoterycznym lub adsorpcyjnym. Równoczesnie przy stosowaniu tych jonitów do oczyszczania roztworów antybiotyków nie nastepuje sorpcja antybiotyków.Wedlug wynalazku postepuje sie w ten sposób, ze surowy eluat antybiotyku uzyskany w znany sposób przez sorpcje antybiotyku znajdujacego sie w brzeczce na jonicie karboksylowym w formie wodorowej i nastepnie przez wymycie go rozcien¬ czonym kwasem, przepuszcza sie przez zespól ko¬ lumn zawierajacych jonity amfoteryczne, lub ad¬ sorpcyjne, po czym oczyszczony juz eluat pod- geszcza sie w wyparkach prózniowych a nastep¬ nie zadaje sie metanolem w celu wytracenia an¬ tybiotyku.Jako jonity amfoteryczne stosuje sie np. Wofa- tyt E, Wofatyt EW, Decolorex AK 731, zas jako adsorpcyjne Asmit 259, Duolite S-30, Decolorite.Celem przygotowania jonitu amfoterycznego lub adsorpcyjnego do sorpcji zanieczyszczen obecnych w eluatach antybiotyków zasadowych regeneruje sie je najpierw 1 n kwasem solnym w ilosci 5 ob¬ jetosci roztworu kwasu w stosunku do Objetosci jonitu, nastepnie przemywa sie woda zdeminera- lizowana w ilosci 15 objetosci jonitu, po czym jo¬ nit regeneruje sie 0,5 n roztworu lugu sodowego, lub weglanu sodowego w ilosci równej dziesiecio¬ krotnej objetosci jonitu, a w koncu przemywa sie woda zdemineralizowana w ilosci 15 objetosci jo¬ nitu. Tak zregenerowany jonit aktywuje sie 1 n kwasem solnym, lub siarkowym w ilosci 0,5—1 objetosci jonitu. Rodzaj uzytego kwasu powinien byc zgodny z rodzajem anionu zawartego w roz¬ tworze poddawanym odbarwianiu. Nastepnie jonit przemywa sie woda zdemineralizowana w ilosci równej 1 objetosci jonitu.Sposób oczyszczania, wedlug wynalazku, pozwa¬ la na skrócenie czasu oczyszczania antybiotyków zasadowych do dwóch etapów, to jest do etapu usuwania zanieczyszczen organicznych i nieorga¬ nicznych oraz barwników podczas przeplywu elu¬ atu przez kolumny wypelnione odpowiednim jo¬ nitem amfoterycznym lub adsorpcyjnym oraz do krystalizacji z roztworu wodnoalkoholowego po uprzednim podgeszczeniu eluatu. W wyniku ta¬ kiego postepowania wzrasta ilosc otrzymanego go¬ towego produktu w stosunku do zawartosci w przesaczu brzeczki do okolo 75—80%, przy rów¬ noczesnym znacznym obnizeniu kosztów zuzycia surowców i zastosowaniu jednego rodzaju jonitu zamiast dwóch róznych jonitów.Przyklad I. Przesacz brzeczki w ilosci20m3, zawierajacy streptomycyne doprowadza sie do pH = 7,0—7,5 i podaje sie na zestaw kolumn za¬ wierajacych po 150 1 kationitu karboksylowego w formie sodowej. Przeplyw przesaczu brzeczki reguluje sie tak, zeby predkosc wynosila nie wie¬ cej niz 500 l/godzine. Po calkowitym nasyceniu jo¬ nitu streptomycyna, kolumne starannie przemywa sie woda odmineralizowana, a nastepnie eluuje antybiotyk kwasem siarkowym o stezeniu 0,5 n — 2,0 n. Otrzymuje sie 200—800 1 eluatu o stezeniu 5 200—50 mg streptomycyny/ml, który podaje sie na kolumne zawierajaca 100 1 Wofatytu E lub 150 1 jonitu Asmit 259, odpowiednio aktywowanego 1 n kwasem siarkowym, w ilosci 1 objetosc jonitu, z predkoscia 0,8 l/minute. Eluat po przejsciu przez io jonit amfoteryczny zawiera okolo 15% barwy po¬ czatkowej, wobec czego podaje sie go jeszcze raz na druga swieza kolumne z 70 1 Wofatytu E, lub 100 1 Asmitu 259. W ten sposób otrzymuje sie od¬ barwiony roztwór antybiotyku o stezeniu 40— 15 —160 mg stereptomycyny/ml. Otrzymany roztwór podgeszcza sie w wyparce prózniowej do stezenia 250 mg/ml i wkrapla do 1000 1 metanolu. Wytra¬ cony osad siarczanu streptomycyny, po odsaczeniu i wysuszeniu ma moc 710—740 mcg/mg. 20 Przyklad II. Przesacz brzeczki zawierajacej wiomycyne zobojetnia sie do pH = 6,3—6,8 po czym podaje sie na zastaw kolumn zawierajacych po 150 1 kationitu karboksylowego — Wofatytu CP-300 w formie sodowej. 25 Przeplyw brzeczki reguluje sie w ten sposób, zeby predkosc nie byla wieksza niz 2000 l/godzine.Po calkowitym nasyceniu jonitu wiomycyna, na¬ sycony jonit przemywa sie woda odmineralizowa¬ na, a nastepnie eluuje wiomycyne kwasem siarko- 3* wym o stezeniu 0,5 n—2,0 n. Otrzymuje sie 250 litrów do 1000 litrów eluatu o stezeniu 20— —80 mg wiomycyny/ml. Eluat wprowadza sie na kolumne zawierajaca 50 1 Wofatytu E lub 75 li¬ trów Asmitu 259 odpowiednio aktywowanego 1 n 35 kwasem siarkowym w ilosci 1 objetosc jonitu, z predkoscia 0,5 l/minute. Wyciek z kolumny jest bezbarwny i moze byc z niego krystalizowany siarczan wiomycyny z roztworu wodno-alkoholo- wego. Otrzymany krystaliczny siarczan wiomycyny 40 ma moc 700—750 mcg/mg. PL

Claims (2)

1. Zastrzezenia patentowe 1. Sposób oczyszczania antybiotyków zasadowych 45 za pomoca jonitów, znamienny tym, ze surowy eluat antybiotyku zasadowego jak streptomycy¬ ny, wiomycyny, kanamycyny i innych uzyskany w znany sposób przez sorpcje antybiotyku znaj¬ dujacego sie w brzeczce na jonicie karboksylo- 50 wym w formie sodowej i nastepnie przez wy¬ mycie go rozcienczonym kwasem, przepuszcza sie przez zespól kolumn zawierajacych jonity amfoteryczne jak Wofatyt E, Wofatyt EW, Decolorex AK 731 lub adsorpcyjne jak Asmit 259, 55 Dulite S-30, Decolorite po czym z oczyszczonego eluatu po podgeszczeniu go, wytraca sie anty¬ biotyk za pomoca metanolu.
2. 2. Sposób oczyszczania wedlug zastrz. 1, znamien¬ ny tym, ze jonity amfoteryczne lub adsorpcyj- 60 ne aktywuje sie roztworami kwasów nieor¬ ganicznych. PZG w Pab. 403-65 250 egz. f. A-4 PL