PL46302B1 - - Google Patents

Description

Wynalaizek dotyczy sposobu oczyszczania Choriongonadotropiny (HCG) wystepujacej w moczu ciezarnych w pierwszych miesiiacach ciazy;.Wiadomo, ze HCG otrzymuje sie z moczu z pierwszych miesiecy ciazy przez zastosowanie róznych adsorbentów. Poza tym znane isa spo¬ soby, w których isurowy hormon wiytraca sie kwasem benzoesowym. Oprócz licznych sposo¬ bów oczyszczania poslugujacych sie znanymi w 'chemii peptydów metodami znany jest poza tym sposób bezposredniej adsorpcji HCG przez filtracje moczu na permutycie. Do oczyszcza¬ nia surowych koncentratów znane sa dotych¬ czas wylacznie metody frakcjonowania za po¬ moca rozpuszczalników organicznych o róz- *) Wlasciciel patentu oswiadiczyl, ze wspól¬ twórcami wynalazku sa" inz. Reinhold Weide- maon i inz. Paul — Gerhard Schulze. nym stezeniu. Wszystkie td sjposoby sa jednak bardzo klopotJLiwe. Nie jest zwlaszcza mozliwe otrzymywanie czystego HCG w niewielu za¬ biegach roboczych, poniewaz w moczu obecne sa duze ilosci substancji balastowych i pig¬ mentów, które uporczywie towarzysza HCG we wszystkich stopniach oczyszczalnia.Otrzymanie czystego HCG za tym zwiazane jest z licznymi i pracochlonnymi manijpula- cjiaimi przez co powstaja straty w wydajnosci.W celu otrzymania róznych czystych gru¬ czolowych proteohormonów takich jak AC TH i IC SH, a takze kalikreiny znane sa sposoby, wedlug których hormony wytraca sie przez traktowanie zwiazkami akrydyny zasadowo podstawionymi W .pozycji 9, w postaci trudio rozpuszczalnych lub nierozpuszczalnych zwiaz¬ ków! adsorpcyjnych i w ten sposób zostaja wyosobnione.Celem wynalazku bylo opracowanie sposo¬ bu uwolnienia koncentratów HCG od pigmen¬ tów i innych substancji balastowych w sto¬ sunkowo niewielu zabiegach roboczych.Stwierdzono, ze mozliwe jest selektywne usuniecie uporczywie towarzyszacych HCG substancja balastowych z moczu, zwlaszcza bardzo przeszkadzajacych pliigmentów moczu przez zastosowanie zwiazków akrydyny,, zwlasz¬ cza mleczanu 2^etoksy — 6i,'9 - dwuaimilno- akrydyny. Nalezy przy tym podkreslic, ze HCG nie1 daje nierozpuszczalnego zwiazku adi- sorbcyjnego i pozostaje w roztworze w cza¬ sie frakcjonowania. Poza itynl stwierdizono, ze za pomoca tego sposobu, mozliwe jest równiez usuniecie toksyn pochodzacych z moczu i to¬ warzyszacych HCG, które prowadza do silnej- pimoigeimosci koncowego produktu.W polacz: ii u z frakcjonowaniem za pomoca acetonu tmozllw? jest uzyskariie w niewielu zabiegach z suro w; eh produktów zawieraja¬ cych HCGf HCG odipcwiiedniego do stosowania terapeutycznego.Przyklad I. 10 g surowego hormonu z moczu ciezarnych, otrzymanego metoda Katzr mana i1 Doisy za pomoca kwasu benzoesowego o stopniu czystosci 100 jm/m!g ekstrahuje sie dwukrotnie, po 100 mil, roztworem buforowani skladajacym sie z 30 ml 0,1 mol kwasu octo¬ wego i 70 ml 0,1 mol octanu sodowego o war¬ tosci' pH = 4,8, kazdorazowo mieszajac godzi¬ ne w kapieli z lodu. Brunatne ekstrakty zmet- niale na skutek opalesoenojli laczy sie i odwi¬ rowuje. Nastepnie dodaje sie ciagle mieszajac cienkim strumieniem lodowato - zimny aceton az do stezenia 45%. Mieszanine przechowuje sie w ciagu 1 godziny V chlodni, a nastepnie uwalnia od klaczkowaitego osadu przez odwi¬ rowanie.Z calkowicie juz klarownego roztworu wytraca sie substancje czynna przez podwyz¬ szenie stezenia acetonu do 70%. Calosc wsta¬ wia sie do chlodni na 15 minut po czym od¬ wirowuje osad, przemywa dwukrotnie lodowa- torzimnym acetonem, a substancje czynna su¬ szy w prózni. (Wydajnosc okolo 2,9 g).Substancje rozpuszcza sie w 5-cio krotnej ilosci wody rediestyiowarnej, nastawia wartosc pH na okolo 6,8 i wkrapla powoli 1%-owy wod¬ ny [roztwór mleczanu 2-etotosy — 8,9^dwuami- noakrydyny az do momentu, w którym juz nie powstaje osad. Po jednogodzinnym staniu w chlodni osacl osiada po czym odwirowuje sie go i odrzuca. Pozostaly roztwór zadaje sie lo- dewato-zimnym acetonem do stezenia 45%.Wytraca sie niewielka illosc osadu, który po¬ nownie odwirowuje sie i odrzuca. Przez pod¬ wyzszenie stezenia acetonu w pozostalym roz¬ tworze do 65% wytraca sia hormolL Mieszani¬ ne wstawia sie na noc do chlodni po czym osad hormonu odwirowuje sie, a nastepnie uwalnia od resztek akrydyny przez kilkakrot¬ ne przemywanie lodowato-zimnym acetonem w .szklanej wirówce, w1 koncu suszy w prózni.Substancje sucha rozpuszcza sie w 20 mai lo¬ dowatej wody redestylowanej,, saczy przez szklany lejek Schotfa G — 5, az do uwolnienia od bakterii i po 24-godzinnym zamrazaniu do temperatury — 30CC suszy w wysokiej prózni.Wydajnosc 0,69 g o 1250 jm/mg, co odpowiada w sumie 862000' j.m. (86,2%).Przyklad II. 4g choriongonadotropiny wstepnie oczyszczonej' przez frakcjonowanie etanolem zawierajacej 600 j.m/mg (razeni 2,4 miliona jednostek) rozpuszcza sie w lodowato- zimnej wodzie redestylowianej. Po doprowa¬ dzeniu wartosci pH do 6,8 — 7,2 dodaje sie kroplami 3%Howy roztwór mleczanu 2-etoksy -^- 6,9 dwuaminoakrydyny az do momentu, w którym nie powstaje juz osad. Po krótkim staniu w chlodni osad odwirowuje sie i od¬ rzuca.' ~ Do zólto zabarwionego roztworu od mlecza¬ nu dodaje sie chlodzac lodleni i (mieszajac me¬ chanicznie, bardzo powoli aceton do stezenia 45%. Powstaje niewielka iiosc osadu, który po 1-godzinnym staniu w chlodni odwirowuje sie i odlrzuca. Oddzielenie oczyszczonego hormonu przeprowadza sie taki, jak w przyjkladzie1 I.Wydajnosc wynosi l,8g oczyszczonego hormo¬ nu o 1000 j.m/mg, co stanowi 1,8 miliona j.m (75%).Przyklad! IIL 100 g surowego hormonu z moczu ciezarnych, otrzymanego metoda Katzmana i Doisy za pomoca kwasu benzoeso¬ wego, o stopniu czystosci 100 jm/mg ekstrahuje sie dwukrotnie po 100 ml roztworem buforo¬ wym z przykladu I, o wartosci jfH. = 4,8, kaz¬ dorazowo mieszajac godzine w kapieli z lo¬ du. Brunatne ekstrakty zmetniale na skutek opalescencji laczy sie i odwirowuje. Nastep¬ nie dodaje sie ciagle mieszajac cienkim stru¬ mieniem lodowato - zimny aceton az do ste¬ zenia 45%. Mieszanine przechowuje sie w cia¬ gu 1 godziny w chlodni, a nastepnie uwalnia od klaezkowatego osadu przez odwirowanie. - 2 -Z calkowicie juz Mairownego roztworu wy¬ traca sie substancje czynna /przez podwyzsze¬ nie! stezenia acetonu do 70%. Calosc wstawia sie do chlodni na 15 minut, po czym odwiro¬ wuje, osad przemywa dwukrotnie lodowato- zimunyim acetonem, a substancje czynna suszy w prózni (Wydajnosc okolo 2,9 g).Substancje rozpuszcza sie w 5-cio krotnej ilosci wody redestylowanej, nastawia wartosc pH na okolo 6,8 i wkrapla powoli 1%-owy wo¬ dny roztwór mleczanu 2-etoksy — 6,9 - dwuami- noakrydyny az do momentu, w którym nie po¬ wstaje juz osad. Po jednogodzinnym staniu w chlodni osad osiada, po czym odwirowuje sie go i odrzuca. Pozostaly roztwór zadaje sie lo¬ dowato - zimnym acetonem do stezenia 45%.Wytraca sie niewielka ilosc osadu, który po¬ nownie odwirowuje sie i odrzuca. Przez podwyz¬ szenie stezenia acetonu w pozostalym roztwo¬ rze do 65% wytraca sie hormon. Mieszanine wstawia sie ndeco do chlodni, po czym osad hormonu odwirowuje sie, a nastepnie uwalnia od resztek akrydyny przez kilkakrotne przemy¬ wanie lodowo - zimnym acetonem w szklanej wirówce, a w koncu suszy w prózni. Substancje sucha rozpuszcza sie w niewielkiej ilosci lodo¬ wato - zimnej wody redestylowanej, saczy przez szklany lejek Schotfa G—5 az do uwolnienia od bakterii i po 24-godzinnym zamrazaniu do temperatury — 30°C suszy w wysokiej próz¬ ni. Wydajnosc wynosi 4,5 g czystego hormonu o 2000 j.m/mg, co odpowiada 9,0 milionom jjm.Wydajnosc wynosi 90,0%. PL

Claims (1)

1. Zastrzezenie patentowe Sposób oczyszczania surowej choriongonado- tropiny z moczu ciezarnych, znamienny tym, ze wodne ekstrakty z surowych koncentratów HCG uwalnia sie od substancji balastowych i toksyn przez traktowania ich roztworami zwiazków akrydyny podstawionej w pozycji 9, korzystnie mleczanem 2-etbksy — dwuaminoakrydyny, przy czym substancje te wytraca sie jako nierozpusz¬ czalne w wodzie zwiazki adsorpcyjne i od¬ dziela przez odwirowanie. VEB Arzneimittelwerk Dr es den Zastepca: Józef Kaminski rzecznik patentowy 2053. RSW „Prasa", Kielce PL