PL446482A1 - Sposób utrwalania preparatu mikrobiologicznego - Google Patents

Abstract

Przedmiotem zgłoszenia jest sposób utrwalania preparatu mikrobiologicznego w jakim zawiesinę spor bakteryjnych uzyskanych po zakończeniu 72h hodowli prowadzonej w kolbach stożkowych umieszczonych na wytrząsarce lub w bioreaktorze wiruje się, a następnie pozyskany w ten sposób osad miesza się wysterylizowanymi termicznie roztworami: nośnika i formulacji, przy czym formulacja jako substancje indukujące kiełkowanie spor zawiera co najmniej L-alaninę w stężeniu od 4,45 g/L do 17,81 g/L, korzystnie 8,9 g/L oraz L-asparaginę w stężeniu od 6,06 g/L do 26,42 g/L, korzystnie 13,21 g/L, a nośnikiem formulacji jest roztwór maltodekstryny zawierającej w swoim w składzie od 80,5% do 97% polisacharydów, korzystanie 97%, stężenie roztworu maltodekstryny stosowanej w charakterze nośnika wynosi od 100 g/L do 300 g/L, korzystanie 200 g/L, przy czym hodowle produkcyjne w kolbkach jak i bioreaktorze prowadzi się przez 3 doby w temperaturze 30°C, jako inokulum stosuje się 24 godzinną hodowlę Peanibacillus polymyxa AW 2,12, 5% objętości hodowli właściwej, po zakończeniu hodowli płyn pohodowlany zawierający komórki w formie spor tj. 1 litr hodowli w kolbkach stożkowych i 2 L w hodowli bioreaktorowej, odwirowuje się na wirówce laboratoryjnej przy 5000xg przez 20 min, po zakończeniu wirowania zlewa się klarowny płyn pohodowlany znad osadu, po czym do naczynia wirówkowego zawierającego koncentrat biomasy komórek dodaje się dwukrotnie stężony roztwór nośnika - maltodekstryny o stężeniu 400 g/L, korzystnie o 97% zawartości polisacharydów, w ilości 0,25 L dla hodowli kolbkowych i 0,5 L dla hodowli bioreaktorowych oraz dwukrotnie stężony roztwór składników formulacji zawierającej substancje wspomagające kiełkowanie spor: L-alaninę w stężeniu 17.8 g/L, L-asparaginę w stężeniu 26,42 g/L oraz substancje promujące wzrost komórek: bulion odżywczy w stężeniu 60 g/L; pepton bakteriologiczny w stężeniu 10 g/L; chlorek sodu w stężeniu 16 g/L i glukozę krystaliczną w stężeniu 2 g/L - w ilości 0,25 L dla hodowli kolbkowych i 0,5 L dla hodowli bioreaktorowych, zawiesinę komórek miesza się z wymienionymi roztworami za pomocą mieszadła mechanicznego typu śruba okrętowa (10 min, temp. 20°C, 250 obr/min) i zawiesinę rozlewa się na tace wykonane ze stali nierdzewnej o głębokości 2,5 cm i grubości warstwy cieczy na tacy od 0,5 do 2 cm, korzystnie 1,5 cm, a przygotowany w ten sposób materiał poddaje się procesowi suszenia sublimacyjnego w urządzeniu Christ Beta 1 - 6 tak, że proces liofilizacji prowadzi się w kilku etapach: zamrażanie zawiesiny spor w temp. od -50°C do -20°C, korzystnie w -35°C, suszenie pod ciśnieniem 5 Pa i w temperaturze 0°C przez 12 h (I faza suszenia), suszenie pod próżnią i w temperaturze 15°C przez 24 h (II faza suszenia); dosuszanie pod próżnią i w temperaturze 20°C przez 12 h (III faza procesu suszenia), po zakończeniu procesu suszenia preparat pakuje się bez dalszej obróbki do zgrzewanego opakowania barierowego wykonanego z wielowarstwowego laminatu tworzyw sztucznych oraz folii aluminiowej, po czym produkt przechowuje się w temperaturze 20°C, aż do użycia.