PL443587A1 - Sposób identyfikacji osobników jęczmienia pod kątem występowania mutacji T4001C w obrębie fragmentu genu HvD53 jęczmienia, wpływającej na zmniejszenie rozkrzewienia części nadziemnej - Google Patents

Abstract

Przedmiotem zgłoszenia jest sposób identyfikacji osobników jęczmienia pod kątem występowania mutacji T4001C w obrębie fragmentu genu HvD53 jęczmienia, wpływającej na zmniejszenie rozkrzewienia części nadziemnej, obejmujący następujące etapy: a) z dowolnej tkanki badanego jęczmienia izoluje się DNA genomowe, stosując dowolną metodę ekstrakcji DNA genomowego; b) ustala się koncentrację DNA do poziomu od 20 do 500 ng/µl; c) prowadzi się amplifikację fragmentu genu HvD53 przeprowadzając reakcję PCR z użyciem starterów do amplifikacji fragmentu genu HvD53 jęczmienia obejmującego miejsce mutacji T4001C, przedstawionych w wykazie sekwencji: 1) Sekwencja nukleotydowa nr 1; 2) Sekwencja nukleotydowa nr 2; d) produkt amplifikacji dzieli się na dwie części o takiej samej objętości: próbę A oraz B, po czym do próby B dodaje się, w takiej samej objętości, fragment genu HvD53 amplifikowany w sposób opisany powyżej z wykorzystaniem DNA matrycowego pozbawionego mutacji T4001C; e) formuje się heterodupleksy dla próby A oraz B; f) przeprowadza się cięcie otrzymanych heterodupleksów dla próby A oraz B wykorzystując endonukleazę Mismatch Endonuclease I; g) przeprowadza się elektroforezę w żelu agarozowym i na podstawie obrazu żelu identyfikuje się jęczmień: nie posiadający mutacji T4001C — na niego wskazuje jeden prążek o długości 1225 pz w próbie A oraz B lub niosący mutację w stanie heterozygotycznym - na niego wskazują trzy prążki o długości 1225 pz, 1000 pz oraz 225 pz w próbach A oraz B lub niosący mutację w stanie homozygotycznym - na niego wskazuje jeden prążek o długości 1000 pz w próbie A i 2 prążki o długości 1000 pz oraz 225 pz w próbie B.