PL44018B1 - - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwa¬ rzania pewnego- i skutecznego* preparatu do ce¬ lów leczniczych i profilaktycznych^w chorobach infekcyjnych, wywolywanych przez rózne ro¬ dzaje patogenicznych mikiroorgamzmów (na przyklad wszystkie rodzaje mikrobów dezynte- rii i innych mikrobów z grupy Salmonella, Vi- 'brio cholerae, E coli i coli 111 B4, 55 B5 i 26 B6, gironkowce, Proteus itd.). Mikroby te zwal¬ czano dotychczas za pomoca srodków chemo- terapeutycznych i antybiotyków. Okazalo sie jednak, ze srodki te nie sa dostatecznie sku¬ teczne glównie w przypadkach schorzen chro¬ nicznych* lufr nosicieli bakterii.W przeciwienstwie do tych sposobów lecze¬ nia fagoterapia sranowi szczególnie odpowiednia droge ctta tych przypadków. * Wlasciciel patentu oswiadczyl, ze; wspól¬ twórcami wynalaatou sa; Mlroslav Meracek, Ernest Petera, Vaclav Houba, Jaroslav Mach i Antonin Stajskal.W" dotychczasowej literaturze fachowej nie ma wzmianek dotyczacych sposobu wytwarza¬ nia wysuszonych, oczyszczonych i dzialajacych terapeutycznie bakteriofagów na drodze hodo¬ wli glebinowej.Dotychczasowy sposób wytwarzania prepara¬ tów bakteriofagów polega na prowadzeniu w cieklej pozywce hodowli statycznej, przy czym postac lecznicza stanowi ciekly bakteriofag.Sposób ten wykazuje wiele wad, poniewaz nie pozwala na: wytworzenie wiekszej ilosci pre¬ paratu w krótkim czasie, przy czym preparat posiada niskie miano bakteriofagów i slabe dzialanie w organizmie. Ponadto otrzymuje sie preparat w niedogodnej postaci cieklej, w któ¬ rej jest nietrwaly i latwo ulega zakazeniu obca flora bakteryjna. Dozowanie tego preparatu nlstrecza równiez szereg drudnosci.Sposób wedlug wynalazku pozwala ma otrzy¬ manie preparatu w czasie krótszym i przy mniejszym nakladzie pracy anizeli dotychczas,przy czym preparat ten odznacza sie duza sku¬ tecznoscia dzialania i trwaloscia.Stopy$tfue pcej^al^w otrzymanych sposo¬ bem wectlug w^mittfekd umozliwia skrócenie czasu trwania choroby i rekonwalescencji o oko¬ lo 75%. Zaleta ich jest jeszcze to, ze przewyz¬ szaja w dzialaniu terapeutycznym antybiotyki i srodki chemoterapeutyczne, przy czym nie wykazuja one ujemnych cech tych ostatnich.Preparaty bakteriofagów (w mysl dotychcza¬ sowych doswiadczen epidemiologicznych) czynia zadosc wszystkim zalozeniom, stawianym sku¬ tecznej fagcterapii w odniesieniu do zakaznych chorób u ludzi.Przyklad epidemicznej dsezyinterii: typ Sonne Terapia za pomoca: Liczba leczonych osobników Liczba osobników wyleczonych po 24 godzinach Liczba osobników wyleczonych po 48 godzinach - Bakterio¬ fagów 27 21 6 Chlor ,- amteni- kulu 24 19 - Srodkom chemo- terapeu- tycznych 16 • - - Osobnicy dodatkowo traktowani bakterio¬ fagami i wyleczeni Sposobem wedlug wynalazku glebinowa ho¬ dowle wybranych szczepów bakteryjnych pro¬ wadzi sie na cieklych pozywkach, wytwarzanych z hydrolizatów cial bialkowych (imiesa, kazeiny, soji itp.), przygotowanych w specjalnych naczy¬ niach do hodowli i przewietrza za pomoca tlenu, mieszaniny tlenu z powietrzem lub powietrza mieszajac przy tym w warunkach scisle steryl¬ nych.Kulture matke szczepów bakteryjnych wytwo¬ rzonej w odpowiedni sposób, w cieklej pozywce, przenosi sie do naczynia hodowlanego, w któ¬ rym nastepuje rozmrozenie sie bakteryjnej za¬ wiesiny. Czas trwania rozmnazania jest charak¬ terystyczny dla kazdego rodzaju bakterii. Z za¬ wiesina • rozmnozonych bakterii miesza sie bak¬ teriofag w ilosci odpowladajacej jego mianu.Nastepujacy .potem proces lityczny przebiega w warunkach podobnych do warunków dotychcza¬ sowego rozmnazania bakteryjnej biomasy. Za¬ konczeniu procesu litycznego towarzyszy obnize¬ nie liczby mikrobów biomasy i sklarowanie, po¬ zywki, która dopiero po inaktywizacji i przesa¬ czeniu zageszcza sie za pomoca odpowiedniej soli nieorganicznej, na przyklad siarczanu amo¬ nowego. Wytracanie bakteriofagów przeprowa¬ dza sie w niskiej temperaturze, najczesciej w po¬ blizu temperatury 0CC, za pomoca stalego siar¬ czanu amonowego, az do calkowitego nasycenia roztworu. Wartosc pH nastawia sie na 6,9 i ca¬ losc pozostawia przez moc w lodówce w tempe¬ raturze 4CC. Otrzymany osad odwirowuje sie, nastepnie miesza z glukonianem wapniowym i suszy w prózni w temperaturze pokojowej.Wysuszona mieszanine przeprowadza sie w lek o odpowiedniej postaci, na przyklad dodaje sie srodków wypelniajacych i tabletkuje, a tabletki powleka warstewka odporna na kwasy, lub wy¬ suszona mieszanina napelnia sie kapsulki od¬ porne na kwasy. Do ewentualnego parenteral- nego stosowania usuwa sie sól z koncentratu pozywki przez dialize i liofilizuje.Preparaty bakteriofagów w postaci stalej d su¬ chej odznaczaja sie wybitnym, wlasciwym i szybkim dzialaniem w organizmie, nie wywo¬ luja niepozadanych dzialan ubocznych, nie nisz¬ cza potrzebnej flory jelit i nie powoduja roz¬ woju trwalych szczepów. Preparaty zachowuja swoja biologiczna aktywnosc przez dlugi czas.Duza korzysc dla chorych przedstawia nieklo- potliwy j wygodny sposób zazywania i dozowa¬ nia tych preparatów, nie wymagajacy scislej kontroli lekarskiej.Wysuszone preparaty z bakteriofagów mozna poza tym uzyc zawsze do dalszej hodowli bak¬ teryjnej.Przyklad. Wytwarzanie bakteriofagów de- zynterii, szczep Sonne: Do 8000 ml sterylnej po¬ zywki (pH = 7,6) w naczyniu do prowadzenia hodowli dodaje sie 350 — 400 ml zawiesiny de- zymteryjnego szczepu Sonne, który rozmnozono metoda statyczna, w czasie 5^godzinnej hodowli w temperaturze 37°C. Hodowle prowadzi sie w temperaturze 37°C mieszajac i przewietrzajac.Próbke kontrolna pobiera sie po 90 — 120 minu¬ tach od zaszczepienia. W próbkach oznacza sie wartosc pH i ewentualnie nastawia na 7,6. Po trzecn godzinach prowadzenia hodowli przy liczbie mikrobów wynoszacej okolo 2,5 miliar¬ da/l ml dodaje sie 400 - 500 ml wlasciwych bakteriofagów dezynterii typu Sonne, otrzyma¬ nych przez statyczna lub zanurzona fagolize szczepu Sonne w cieklej pozywce. Fagolize spjrawdza sie w dwugodzinnych odstepach. Ko- niiec fagolizy okresla sie z jednej strony wizual- - 2 -nie ze sklarowania sie pozywki hodowlanej, z drugiej strony z obnizenia liczby mikrobów w 1 ml, a takze przez biochemiczne sprawdzenie zawartosci azotu w 1 ml. Nastepnie kulture bak¬ teriofagów spuszcza sie z naczynia zachowujac warunki aseptyczne, inaktywuje w lazni wod¬ nej w temperaturze 56° C i odsacza przez Ailtf Seitza. Z kolei przeprowadza sie próbe na dzia¬ lanie rodzimych bakteriofagów wedlug obowia¬ zujacych norm. Rodzima pozywke steza sie i oczyszcza. Otrzymany koncentrat pozywki ozie¬ bna sie do temperatury 0°C i straca za pomoca stalego siarczanu anionowego (dodawanegodo cal¬ kowitego nasycenia).Wartosc pH nastawia sie za pomoca 4 n kwasu solnego na 6,9 i calosc pozosta¬ wia w lodówce w temperaturze 4°C przez noc.Utworzony osad odwirowuje sie w niskiej tempe¬ raturze. Do osadu dodaje sie 10% (na wage wilgot¬ nego osadu) glukonianu wapniowego i miesza¬ nine suszy sie w prózni w "temperaturze poko¬ jowej. Wysuszona mase po dodaniu srodków wypelniajacych tabletkuje sie i powleka kwaso- odporna warstwa lub wypelnia sie nia kwaso- odporne kapsulki. Optymalna liczbe bakteriofa¬ gów, zawartych w jednej tabletce oznacza sie w kazdej wyprodukowanej partii przez miarecz¬ kowanie. Zaleznie od liczby bakteriofagów w tabletce mozna odpowiednio regulowac dawko¬ wanie.W ten sam sposób mozna prowadzic hodowle i przerób bakteriofagów takze innych odmian mikrobów jak na przyklad dezynterii, tyfusu, paratyfusu i pozostalych mikrobów Salmonella, Vibrio cholerae, E coli 111 B4, 55 B5 i 26 B6 gronkowców, Proceus itp. \ ¦ . PL

Claims (3)

1. Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania preparatów bakteriofagów w .postaci stalej i suchej, znamienny tym, ze prowadzi sie hodowle glebinowa bakteriofa¬ gów w pozywce, wytworzonej z hydrolizatów cial bialkowych (miesa, kazeiny, soji itp), przy czym podloze zawiera odpowiednie mi¬ kroby, a otrzymana kulture inaktywuje sie przez Lagodne ogrzewanie i przesaczenie przez filtr bakteriologiczny, a bakteriofagi wytraca sie za pomoca nieorganicznej soli, korzystnie siarczanu amonowego, po czym osad oddziela sie i suszy.

2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze wytracanie bakteriofagów przeprowadza sie w niskiej temperaturze, korzystnie w poblizu temperatury 0°C.

3. Sposób wedlug zastrz. 1—2, znamienny tym, ze wytracone bakteriofagi przed suszeniem miesza sie z glukonianem wapniowym, Biogena, narodni podnik Zastepca: mgr Józef Kaminski, rzecznik patentowy 2246. RSW „Prasa", Kielce. PL