PL43414B1 - - Google Patents

Description

Tetracykline, wazny antybiotyk szeregu te- tracyklinowego wytwarza sie przewaznie na drodze chemicznej, a mianowicie przez kata¬ lityczne odchlorowanie tetracykliny, jak to opi¬ sano np. w opisie patentowym Stanów Zjed¬ noczonych Ameryki nr 2699054. Sposób ten wykazuje te wade, ze daje niska wydajnosc (okolo 60% teoretycznej), a material wyjsciowy i potrzebna aparatura sa drogie.Z tych powodów próbowano czesto wynalezc sposób, za pomoca którego moznaby przepro¬ wadzic fermentacje przy zastosowaniu mikro¬ organizmów, które normalnie tworza chloro- tetracykline. Jak wynika z literatury fachowej, pewien sukces osiagnieto przez to, ze z po- *) Wlasciciel patentu osiwadczyl, ze wspól¬ twórcami wynalazku sa Karel Culik, Eduard Belik, Milos Herold, Josef Palkoska i Jaro- slav Dasek. dloza fermentacyjnego usuwano jony chlorko- ' we albo tez wyrugowywano je przez nadmiar jonów bromkowych (porównaj np. Ogawa, Ito, J. Agr. Chem. Soc. Japonia 30, 123 - 125, bry¬ tyjskie opisy patentowe nr 773453, 781845 i 775115; szwajcarski opis patentowy nr 324085, opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 2734018).Usuwanie jonów chlorkowych z podloza fer¬ mentacyjnego, wzglednie ze skladników tego podloza, jest klopotliwe i drogie. Oprócz tego podloze zostaje przez to pozbawione waznych substancji, które konieczne sa do uzyskania wysokich wydajnosci pozadanego produktu.W innym przypadku jony chlorkowe' zostaja wyparte przez nadmiar jonów bromkowych z metabolizmu Streptomyces aureofaciens albo Streptomyces viridifaciens. Jony bromkowe dodaje sie w postaci rozpuszczalnych soli, w których brom jest zwiazany jonowo, jak bro-™*k #0*wr Pefc*d«iy t* wim ite Jednak tylko wtedy, jezeli te fizjologicznie obce jony znajduja Sie^ w podlozu w znacznej koncen¬ tracji. Tworzenie sie niepozadanej chlorotetra- cykliny zostaje wprawdzie zahamowane, rów¬ noczesnie jednak calkowita wydajnosc procesu fermentacji zostaje obnizona, przez inhibujace dzialanie jonów bromowych.Przedmiotem wynalazku jest nowy sposób, wedlug którego otrzymuje sie tetrakcykline z wydajnoscia powyzej 9&% w odniesieniu do wszystkich substancji czynnych, znajdujacych sie w podlozu fermentacyjnym przy zastoso¬ waniu normalnych mikroprganizmów. Wynala¬ zek polega na tym, ze do podloza, wzglednie do poszczególnych jego skladników, jak np, inaki sojowej dodaje sie albo brom elementar¬ ny albo bromowane, nietoksyczne organiczne zwiazki bromu z bromem zwiazanym kowa- Icntnie. Jako organiczne zwiazki bromu mozna fi losowac np. sól amonowa lub sodowa kwasu fcromometanosulfonowego, czterobromofenolfta- leine itp. w Ilosci najwyzej 0,5%.Organiczne zwiazki bromu, które dodaje sie jako takie, albo które same tworza sie przez dzialanie elementarnego bromu w podlozu, przeciwdzialaja metabolizmowi chlorków. W obecnosci organicznych zwiazków bromu w po¬ dlozu fermentacyjnym szczepy wytwarzajace normalnie - chlorotetracykline produkuja wy¬ lacznie tetracykline.Nowy sposób posiada te zalete, ze chlorków nie trzeba usuwac. Jest to korzysc nie tylko ze wzgledów ekonomicznych, poniewaz obec¬ nosc w pewnym okreslonym minimalnym ste¬ zeniu istotnie wplywa na wysoka wydajnosc.Zastosowanie elementarnego bromu jest szczególnie korzystne, poniewaz nie wymaga specjalnego zabiegu, poza tym brom jest naj¬ tanszym czystym surowcem bromowym, du¬ zo tanszym od czystego bromku sodowego lub potasowego.Przyklad I. 1000 litrów podloza o ponizej podanym skladzie zaszczepia sie w naczyniu z materialu nierdzewnego zarod¬ nikami szczepu produkcyjnego Streptomyces.Podloze zawiera: Sacharozy 4,0% maki sojowej 3,0% weglanu wapniowego Qfi% siarczanu sodowego 0,3% melasu 0,1% siarczanu amonowego 0,5% drozdzy piwnych namoku kukurydzy 0,2% ¦¦.-' : 0,2% (substancja sucha) oleju sojowego 0,2% Przed sterylizacja dodano 0,01% bromu i podloze sterelizowano przez 40 minut w tem¬ peraturze 115°C. Rozmnazanie przeprowadzono przy 29°C w ciagu 26 godzin w warunkach jalowych. Napowietrzanie 0,5 objetosci powie¬ trza na minute- Kultura ta zaszczepiono 9.000 litrów podloza o nastepujacym skladzie: Sacharozy maki sojowej siarczanu amonowego weglanu wapniowego siarczanu sodowego melasu odgoryczonych drozdzy piwnych namoku kukurydzy oleju sojowego chlorku kobaltowego bromu 5,0% 4,0% 0,5% 1,0% 0,1% 0,1% 0,3% 0,1% 0,2% 30 g 0,1% (substancja sucha) Podloze sterelizowano przez 40 minut w temperaturze 115°C. Napowietrzanie pod¬ czas rozmnazania trwajacego 72 godziny wy¬ nosilo 0,5 — 0,8 objetosci powietrza na minu¬ te, temperatura £8 - 30°C, obroty mieszadla 120/minute. Wydajnosc wyniosla 2400 jedno¬ stek na cm* z tego 91% tetracykliny i 9% chlorotetracykliny.Przyklad II. Postepuje sie jak w przykladzie I z ta róznica, ze zamiast bro- mu elementarnego do obydwu podlozy, dodaje sie make sojowa, która uprzednio zadano 10 kg bromu na 360 kg maki sojowej w cia^ gu 2 godzin w temperaturze 50°C w wodnej zawiesinie. Wydajnosc wynosila 2200 jedno- stek/cm3, z tego 89% tetracykliny i 11% chloro¬ tetracykliny.Przyklad III. Rozmnazanie i fer¬ mentacje przeprowadzono jak w przykla¬ dzie I, a elementarny brom zastapiono mie¬ szanina nienasyconych tluszczów z przemyslu tluszczowego (tran rybi, olej slonecznikowy, olej sojowy, olej lniany, olej z orzeszków ziemnych mniej wiecej w takim samym sto¬ sunku ilosciowym), która przedtem poddano reakcji z elementarnym bromem, Na 100 kg mieszaniny tluszczów uzyto 10 kg bromu,Zbromowany tluszcz rafinowano po reakcji przez wytrzasanie z zalkalizowanym metano¬ lem. Do podloza dodano 0,2% zbromowanej mieszaniny tluszczów, a nastepnie poczawszy od 10 godziny dodawano 5 kg na 5 godzin.Wydajnosc wynosila 3100 jednostek/cm3, z tego 92% tetracykliny i 8% chlorotetracy- kliny.Przyklad IV. Postepowano jak w przykladzie I, lecz zamiast dodawac brom elementarny do podloza fermentacyjnego, wprowadzono go w ilosci 0,08% do nastepuja¬ cych skladników: weglanu wapniowego 1,0% . namoku z kukurydzy 0,1% melasu 0,1% drozdzy 0,3% wody 10,0% Mieszanine gotowano przez 20 minut, a na¬ stepnie wprowadzono do pozostalych skladni¬ ków podloza. Wydajnosc wynosila 3040 jed¬ nostek/cm3, z tego 91% tetracykliny i 9% chlorotetracykliny.Przyklad V. W takim samym do¬ swiadczeniu podczas pierwszych 45 godzin fermentacji dodaje sie zamiast elementarne¬ go bromu wszystkiego 0,1% soli amonowej kwasu bromometanosulfonowego. Wydajnosc wynosila 3210 jednostek/cm3, z tego 93% te¬ tracykliny i 7% chlorotetracykliny. i Przyklad VI. W takim samym do¬ swiadczeniu zastosowano 0,05% czterobromo- ftaleiny- Wydajnosc wynosila 3050 jedno¬ stek/cm3, z tego 91,5% tetracykliny i 8,5% chlorotetracykliny.Przyklad VII. W takim samym doswiadczeniu, jak w przykladzie I, do podlo¬ za nie dodano bromu, wzglednie organicz¬ nego zwiazku bromu. Wydajnosc wynosila 2520 jednostek/cm3, z tego 91% chlorotetracy¬ kliny i 9% tetracykliny. t PL

Claims (1)

1. Zastrzezenie patentowe Sposób wytwarzania tetracykliny przez fer¬ mentacje odpowiedniego podloza z kultura Streptocymes aureofaciens, albo Streptomyces viridifaciens przy zastosowaniu zwiazków bromu jako antymetabolitów chlorków, zna¬ mienny tym, ze do samych podlozy fermen¬ tacyjnych albo ich skladników, jak maki so¬ jowej albo do mieszaniny skladników dodaje sie brom w postaci elementarnej albo w po¬ staci organicznych zwiazków bromu, nie dzia¬ lajacych toksycznie na szczep produkcyjny, jak np. sól kwasu bromometanosulfonowego, czterobromofenolftaleine albo tym podobne, w, ilosci najwyzej 0,5%. Spofa, sdruzeni pod ni ku pro zdravotnickou vyrobu i Zastepca: mgr Józef Kaminski rzecznik patentowyWzór jednoraz. Stól. Zakl. Graf. - WG. Zam. 789, IGI efz., Al pUm., ki. III, PL