PL40829B1 - - Google Patents

Description

OpuWik*»w»»o 4m* 21 kwMma 19&8 r. 5* Hf ^ 2K 7 '¦atentowego POLSKIEJ RZECZYPOSPOLITEJ LUDOWEJ OPIS PATENTOWY Nr 40829 VEB Arzneimittelujefk Dfesdefi*^ Radeheul, Niemiecka Republika Demokratyczna KI. 30 h, 2/04 Sposób wytwarzania wysokoaktywnych preparatów hormonu adrenokertikotropo- wego z przedniego piata przysadki mózgowej Patent trwa od dnia 3 lipca 1956 r.Wynalazek dotyczy sposobu otrzymywania wy- sokoaktywjiego preparatu hormonu adrenokor- tikotropowego z przedniego plata przysadki móz- Wiadomo, ze z przedniego plata ffflzy&adki mózgowej mozna izolowac bosman Emulujacy -kore nadnercza. Hojaaon ten znany pod nazwa ACTH, nabral w ostatofah (latach duzego zna¬ czenia w terapii i .diagnwt^ce. ^atazympHanfe preparatów j&CTH o wysokiej -czystosci wedlug jznaayoja sraetod jest uciazliwe i zwiazane z wysokimi jkosetstmi. Oprócz togo przy izolawaniu i procesie oczyszczania ACTH jaastejmja znaczne straty, które obnizaja wydaj¬ nosc produktukoncowego.Sposób wytwarzania tego hormonu opiera sie na nowoczesnych metodach frakcjonowania bia¬ lek. Wedlug tych metod material wyjsciowy, mianowicie przysadki mózgowe swin, owiec, wielorybów lub bydla, ekstrahuje sie kilkakrot¬ nie za pomoca silnie zakwaszonych wodnych ¦*) Wlasciciel patentu oswiadczyl, ze twórca wyna¬ lazku jest dr Gerhard Schafer. coe&woEÓw acetonu. Z polaczonych ekstraktów otrzymuje «*e nastepnie przez zwiekszenie ste¬ zenia acetonu fragcje zawierajaca ACTH. Tak otrzymany surowy hormon o przecietnej mocy ¦OyS lE/mg eswobadza sie od pozostalych hormo¬ nów przedniego plata przez przesuniecie pH albo przez frakcjonowane wysalanie. Z oczyszczonego i dializowanego ekstraktu straca sie acetonem ACTH o czystosci okolo 2 JE/mg. Zawiera on jednak jeszcze znaczne ilosci hormonów tytaego piata przysadki mózgowej oraz male ilosci hor¬ monu wzrostu, laktacji i gonadotoopowego. Za- meczyszc^enia inafctywuje sie za pomoca kwa¬ ków i podwyzszonej temperatury. Piscedura ta jest jednak niewskazana, gdyz nastepuje jedno¬ czesnie inaktywacja pewnej ilosci ACTH.Wiadomo, ze dalsze wzbogacenie produktu w ACTH mozna przeprowadzic róznymi sposobami, na przyklad przez adsorbcje na wymieniaczach kationów albo przez hydrolize ACTH kwasem lub pepsyna i nastepujaca po tym chromato¬ grafia. IPoza tym wiadoma, ze specjalnie dogodny jest sposób wzbogacania produktu w ACTH przez adsoybcje na oksycelulozie. Zastosowanie; tego sposobu *po procesie oczyszczania daje,, w rezul¬ tacie produkt o tak wysokim stopniu czystosci/ ze moze on byc bez szkody zastosowany nawet dozylnie.Celem wynalazku bylo opracowanie takiego; sposobu otrzymywania ACTH^ który zezwolilby na podwyzszenie wydajnosci czystego, hormonu.Stwierdzono, ze metoda adsorbcji na oksyce- lulozie nadaje sie do otrzymywania , wysoko- aktywnych preparatów ACTH, nie zawierajacych zanieczyszczen innych hormonów przysadki móz¬ gowej, bezposrednio z surowego hormonu bez zastosowania procesów oczyszczania. Metoda ta jest szczególnie dogodna dlatego, poniewaz nor¬ malnie odizolowanie ACTH od poszczególnych hormonów tylnego plata przysadki mózgowej przebiega bardzo trudno. Znane sposoby odizo- lowywania ACTH od innych hormonów sa bar¬ dzo skomplikowane (frakcjonowanie) i prowadza do otrzymania ACTH z mala wydajnoscia.Sposobem wedlug wynalazku mozna izolowac dalsze hormony przysadki mózgowej z pozosta¬ losci, nie zaadsorbowanej na oksycelulozie i zu¬ zytkowac je do celów terapeutycznych, podczas gdy wedlug dotychczasowych metod hormony te ulegaly zniszczeniu dzialaniem kwasów i tem¬ peratury (jak juz wyzej wspomniano), przy czym równiez ulegala inaktywacji znaczna czesc ACTH.Przyklad. 0,5 kg swiezych zamrozonych przysadek mózgowych miazdzy sie jak najdoklad¬ niej I zalewa dwoma litrami mieszaniny skladaja¬ cej sie z 21 acetonu, 0,251 wody i 50 ml stezonego kwasu solnego. Do tak otrzymanej zawiesiny wprowadza sie dwutlenek wegla w postaci sta¬ lej, w celu obnizenia temperatury do —«20« —250C. Nastepnie mieszanine doprowadzona w ciagu 20 minut do temperatury + 200C miesza sie intensywnie w ciagu godziny. Powstaly osad odsacza sie i ekstrahuje jeszcze raz 1 litrem 80%-ego acetonu. Polaczone ekstrakty wlewa sie do 15 1 acetonu ochlodzonego do —5*C, a wy¬ tracony osad przemywa dokladnie acetonem i suszy, w prózni. Otrzymany surowy ACTH w ilosci okolo 16 g, o wartosci 0,5 IE/mg, rozpusz¬ cza sie w 500 ml 0,1 molowegfr kwasu octowego o pH = 3-^4. Do roztworu dodaje sie 1,5 g oksy- celulozy (zawartosc karboksylu 11—12P/t), uprzed¬ nio przemytej 0,1 molowym kwasem solnym, woda i 0,1 molowym kwasem octowym. Miesza¬ nine pozostawia sie w ciagu 24 godzin w tempe¬ raturze pokojowej, stale mieszajac. Nastepnie odsacza sie oksyceluloze i przemywa dokladnie najpierw 0,1 molowym kwasem octowym, potem woda destylowana. Roztwór powtórnie zadaje sie 0,8 g oksycelulozy, mieszajac przez 12 godzin, nastepnie odsacza sie oksyceluloze i przemywac jak wyzej kwasem octowym i woda.Nastepnie oksyceluloze zawiesza sie w 250 ml 0,1 molowego kwasu solnego i ekstrahuje przez 12 godzin przy silnym mieszaniu. Z kolei mie¬ szanine odsacza sie, a przesacz wlewa sie do 12-krotnej ilosci acetonu, ochlodzonego uprzed¬ nio do —50C. Aceton zlewa sie z nad powstalego osadu, a osad uwalnia od resztek acetonu przez odwirowanie. Otrzymany hormon kilkakrotnie przemywa sie absolutnym acetonem, odwirowuje ' i suszy w prózni. Otrzymuje sie 0,29 g ACTH o mocy 25 IE/mg (w sumie 7250 IE). Opisanym sposobem otrzymano z surowego produktu 90,6Vt hormonu wysokoaktywnego. PL

Claims (1)

1. Zastrzezenie patentowe Sposób wytwarzania wysokoaktywnych prepa¬ ratów hormonu adrenokortikotropowego (ACTH) z przedniego plata przysadki mózgowej, przy czym jako produkt wyjsciowy stosuje sie surowy hormon adrenokortikotropowy, znamienny tym, ze hormon adsorbuje sie na oksycelulozie, a na¬ stepnie eluuje kwasem solnym, po czym z kwas* nego roztworu wytraca sie go acetonem w po¬ staci czystej, wysoko aktywnej. VEB Arzneimittelwerk Dres den Zastepca: Kolegium Rzeczników Patentowych. CWD. Bema 60. zam. 780/Wa Pl.Dr.Akc. zam. 327/58 nakl. 100x11 wz. druk. sat, 3/70 gr. B5 PL