PL404811A1 - Sposób wytwarzania podjednostek białka płaszcza wirusa nekrozy pomidora, ToTV, metodą nadekspresji w systemie prokariotycznym E.coli - Google Patents

Abstract

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania podjednostek białka płaszcza wirusa nekrozy pomidora, ToTV, metodą nadekspresji w systemie prokariotycznym E. coli mający zastosowanie: w produkcji przeciwciał, tym samym w diagnostyce wirusa nekrozy pomidora, a także w badaniach nad poznaniem jego struktury. Sposób wytwarzania podjednostek białka płaszcza wirusa nekrozy pomidora, ToTV, metodą nadekspresji w systemie prokariotycznym E. coli, składa się z sześciu etapów. W pierwszym etapie następuje izolacja RNA z preparatu wirusowego, w drugim etapie prowadzi się reakcję syntezy cDNA w celu uzyskania matrycy dla amplifikacji poszczególnych podjednostek wirusowego białka CP, w trzecim etapie dokonuje się amplifikacji podjednostek białka płaszcza CP wirusa ToTV, w czwartym etapie prowadzi się transformację komórek E.coli uzyskanym wektorem ekspresyjnym w celu propagacji, w piątym etapie przeprowadza się transformację komórek E.coli szczepu BL21 DE3 plazmidami niosacymi informację dla poszczególnych podjednostek białka CP w celu ich nadekspresji, w szóstym etapie przeprowadza się nadekspresje podjednostek białka płaszcza do wytworzenia podjednostek białka CP we frakcji rozpuszczalnej.