PL29542B1 - Sposób wytwarzania preparatów zawierajacych kallikreine. - Google Patents

Description

Wiadomo, ze preparaty kallikreinowe wytwarza sie w ten sposób, ze poddaje sie autolizie trzustke swinska w obecnosci kwasu octowego, produkt autolizy przesa¬ cza sie, dializuje, straca acetonem, na¬ stepnie stracony osad przemywa sie roz¬ tworem dwuweglanu sodowego i ponow¬ nie dializuje. Przy tym kallikreine uzysku¬ je sie z wydajnoscia wynoszaca co najwy¬ zej 18 000 jednostek/kg trzustki. Ten zna¬ ny sposób szesciostopniowy zajmuje wie¬ le czasu przede wszystkim z powodu bar¬ dzo wielkich trudnosci oddzielania produk¬ tu autolizy i koniecznosci dwukrotnej dia¬ lizy.Stwierdzono, ze w sposób prostszy i z o wiele lepsza wydajnoscia mozna wytw&- rzac preparaty hormonu krazenia, kalli- kreiny, przez autolize trzustek zwierze¬ cych, jezeli produkt autolizy — ewentu¬ alnie po rozcienczeniu — zada sie roztwo¬ rem koloidalnego tlenku zelaza, otrzyma¬ ny roztwór oddzieli sie od pozostalosci po autolizie oraz od osadu straconego tlen¬ kiem zelaza, po czym ewentualnie mozna zastosowac dialize.Jako material wyjsciowy stosuje sie najlepiej trzustki bydlece i swinskie. Auto¬ lize mozna przeprowadzac w obecnosci kwasów, np. rozcienczonego kwasu octowe¬ go lub solnego, albo zasad, jak lugu sodo¬ wego, weglanu sodowego lub wapniowe¬ go, substancji buforowych albo srodków dezynfekcyjnych.Okazalo sie, ze otrzymuje sie szczegól¬ nie duze wydajnosci, jezeli autolizewspomnianych rozdrobnionych trzustek bedzie sie przeprowadzac bez dodatku elektrolitów i rozpuszczalników. Wedlug tego sposobu uzyskuje sie wydajnosc wy¬ noszaca az do 80 000 jednostek kallikre- iny/kg trzustki.Nie jest konieczne poddawanie produk¬ tu autolizy bezposredniemu stracaniu tlenkiem zelaza, mozna bowiem zastoso¬ wac równiez i saczenie. Aby ulatwic sa¬ czenie, zakwasza sie produkt autolizy co najwyzej do wartosci pH = 4,0, a najle¬ piej = 5,0, i podczas saczenia dodaje sie ewentualnie jeszcze elektrolitów, np. soli kuchennej.Tak otrzymane preparaty sa odpowied¬ nie zarówno do podawania doustnego, jak i poza-jelitowego. W razie potrzeby moz¬ na je dalej oczyszczac, np. przez adsorp¬ cje za pomoca glinki.Podczas stracania koloidalnie roz¬ puszczonym tlenkiem zelaza kallikreina nie straca sie, lecz ilosciowo pozostaje w roztworze. Bylo to tym bardziej nieocze¬ kiwane, ze jak wiadomo, kallikreina jest pochlaniana prawie ilosciowo wodorotlen¬ kiem zelaza wytwarzanego w roztworze, np. z chlorku zelazowego i amoniaku, al¬ bo glinka wytwarzana z alunu i amoniaku.Dzieki niniejszemu wynalazkowi w po¬ równaniu ze znana metoda osiaga sie kalli- kreine o tym samym stopniu czystosci, prawie z czterokrotnie wieksza wydajnos¬ cia, przy czym czas trwania procesu po¬ zostaje skrócony do 1/10 czasu dotychczas stosowanego. Zamiast przeprowadzac pro¬ ces niniejszy, jak dotychczas, w szesciu stopniach, mozna niniejszy sposób prze¬ prowadzic w trzech istopniach.Przyklad I. Trzustke uwolniona od tluszczu przepuszcza sie przez maszynke do miesa. Z otrzymanej papki odwaza sie 5 kg i w 4 równych czesciach umieszcza sie w 4-ch slojach o pojemnosci 10 litrów kazdy. Do kazdego sloja wlewa sie 3,75 li¬ trów wody oraz 4,5 g lodowatego kwasu octowego i dobrze miesza. Kazdy slój za¬ myka sie przedziurawionym korkiem i po¬ zostawia w ciagu 72 godzin w temperatu¬ rze 37°C mieszajac kilka razy dziennie. Po skonczonej autolizie zawartosc slojów wprowadza sie do naczynia o pojemnosci w przyblizeniu 30 litrów i mocno miesza¬ jac dodaje ,sie stopniowo 6 litrów 10%- owego koloidalnego roztworu tlenku ze¬ laza (Ferrum oxydatum dialisatum in la- mellis). Wytraca sie obfity osad. Miesza¬ nine reakcyjna miesza sie w ciagu jednej godziny i przesacza. Saczenie odbywa sie nadzwyczaj szybko. Otrzymany przesacz zobojetnia sie lugiem sodowym i w wez- zach celofanowych pod toluenem dializuje sie w ciagu 72 godzin za pomoca szybko przeplywajacej wody wodociagowej. Uzy¬ skuje sie kallikreine z wydajnoscia wyno¬ szaca 300 000 jednostek, przy czym jedna jednostka odpowiada 50 y substancji organicznej.Przyklad II. Trzustke uwolniona od tluszczu przepuszcza sie przez maszynke do miesa. Z otrzymanej papki odwaza sie 5 kg i dzieli je na równe czesci, wprowa¬ dzajac do 2 slojów o pojemnosci 10 litrów kazdy. Papke w tych slojach poddaje sie autolizie w ciagu 72 godzin w temperatu¬ rze 37°C. Po skonczonej autolizie zawar¬ tosc slojów wprowadza sie do 25 litrowe¬ go naczynia i mocno mieszajac zadaje sie stopniowo 15 litrami destylowanej wody.Mieszanine reakcyjna miesza sie w ciagu okolo godziny az do dobrego zmieszania calej masy i stopniowo dodaje sie 4 litry 10°/o^owego koloidalnego roztworu tlenku zelaza. Nastepnie powstaly osad odsacza sie i otrzymany przesacz poddaje sie dia¬ lizie w ciagu 72 godzin. Uzyskuje sie kalli¬ kreine z wydajnoscia wynoszaca 350 000 jednostek, przy czym jedna jednostka od¬ powiada 110 y substancji organicznej.Przyklad IIL Trzustke uwolniona od — 2 —tluszczu przepuszcza sie przez maszynke do miesa; z otrzymanej papki odwaza sie 5 kg i w równych czesciach wprowadza do 4-ch slojów o pojemnosci 10 litrów kaz¬ dy. Do kazdego sloja wlewa sie 3,75 litra wody oraz 4,5 g lodowatego kwasu octo¬ wego i dobrze miesza, po czym kazdy slój zamyka sie przedziurawionym korkiem, pozostawia w ciagu 72 godzin w tempera¬ turze 37°C; zawartosc slojów miesza sie kilka razy dziennie. Po skonczonej auto- liaie zawartosc slojów wlewa sie do 25 li¬ trowego naczynia i mocno mieszajac na¬ stawia sie za pomoca HCl na wartosc Vh = 5,5.Nastepnie powstaly osad odsacza sie i mieszajac zadaje przesacz 5 litrami 10%- owego koloidalnego tlenku zelaza. Powsta¬ je obfity osad; przy czym pH osiaga war¬ tosc 4,8. Osad odsacza sie, a przesacz w wezach ze zregenerowanej celulozy pod toluenem dializuje sie za pomoca szybko przeplywajacej wody wodociagowej. Uzy¬ skuje sie kallikreine z wydajnoscia wyno¬ szaca 250 000 jednostek; jedna jednostka odpowiada 90 7 substancji organicznej.Przyklad IV. Trzustke uwolniona od tluszczu przepuszcza sie przez maszynke do miesa, z otrzymanej papki odwaza sie 5 kg i w równych czesciach wprowadza sie do 4-ch slojów o pojemnosci 10 litrów kazdy. Do kazdego sloja wlewa sie 3,75 li¬ tra wody nasyconej tymolem i dobrze miesza. Kazdy slój zamyka sie przedziu¬ rawionym korkiem, pozostawia sie w cia¬ gu 72 godzin w temperaturze 37°C i co¬ dziennie kilkakrotnie miesza. Po skonczo¬ nej autolizie zawartosc slojów wprowadza sie do 25 litrowego naczynia i mocno mie¬ szajac zadaje 5 litrami 10%-owego kolo¬ idalnego roztworu tlenku zelaza. Powsta¬ je obfity osad, który odsacza sie, a otrzy¬ many przesacz w wezach ze zregenerowa¬ nej celulozy pod toluenem dializuje sie w ciagu 72 godzin za pomoca szybko prze¬ plywajacej wody wodociagowej. Uzyskuje sie kallikreine z wydajnoscia wynoszaca 350 000 jednostek, przy czym jedna jed¬ nostka odpowiada 90 y substancji orga¬ nicznej. PL

Claims (3)

1. Zastrzezenia patentowe. 1. Sposób wytwarzania preparatów, zawierajacych kallikreine, z trzustek zwie¬ rzecych przez autolize, znamienny tym, ze produkt autolizy, ewentualnie po rozcien¬ czeniu, zadaje sie roztworem koloidalnego tlenku zelaza, po czym powstaly osad od¬ dziela sie, a otrzymany przesacz ewentual¬ nie poddaje sie dializie.
2. 2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamien¬ ny tym, ze poddaje sie autolizie rozdrob¬ nione gruczoly trzustkowe bez dodatku elektrolitów i rozpuszczalników, po czym produkt autolizy .poddaje sie stracaniu tlenkiem zelaza.
3. 3. Sposób wedlug zastrz. 1 i 2, zna¬ mienny tym, ze produkt autolizy przed saczeniem zakwasza sie do wartosci pH co najwyzej = 4,0, a najlepiej = 5,0, prze¬ sacza sie, ewentualnie z dodatkiem elek¬ trolitów, i przesacz straca sie tlenkiem ze¬ laza. I. G. Farbenindustrie Aktiengesellschaft. Zastepca: M. Skrzypkowski, rzecznik patentowy. DRUK. M. ARCT. CZERNIAKOWSKA 225 PL