PL246985B1 - Kombinacja zawierająca sulfotlenek 4-izoselenocyjanianobutylowo- 4’-fluorobenzylowy oraz lek przeciwnowotworowy do stosowania w zapobieganiu lub leczeniu nowotworu - Google Patents

Kombinacja zawierająca sulfotlenek 4-izoselenocyjanianobutylowo- 4’-fluorobenzylowy oraz lek przeciwnowotworowy do stosowania w zapobieganiu lub leczeniu nowotworu Download PDF

Info

Publication number
PL246985B1
PL246985B1 PL438343A PL43834321A PL246985B1 PL 246985 B1 PL246985 B1 PL 246985B1 PL 438343 A PL438343 A PL 438343A PL 43834321 A PL43834321 A PL 43834321A PL 246985 B1 PL246985 B1 PL 246985B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
combination
cancer
fluorobenzyl
sulfoxide
isoselenocyanatobutyl
Prior art date
Application number
PL438343A
Other languages
English (en)
Other versions
PL438343A1 (pl
Inventor
Tomasz Cierpiał
Piotr Kiełbasiński
Milena MAŁECKA-GIEŁDOWSKA
Milena Małecka-Giełdowska
Maciej Mazur
Małgorzata Milczarek
Katarzyna WIKTORSKA
Katarzyna Wiktorska
Original Assignee
Centrum Badan Molekularnych I Makromolekularnych Polskiej Akademii Nauk
Narodowy Inst Lekow
Univ Warszawski
Univ Warszawski Medyczny
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Centrum Badan Molekularnych I Makromolekularnych Polskiej Akademii Nauk, Narodowy Inst Lekow, Univ Warszawski, Univ Warszawski Medyczny filed Critical Centrum Badan Molekularnych I Makromolekularnych Polskiej Akademii Nauk
Priority to PL438343A priority Critical patent/PL246985B1/pl
Priority to PCT/PL2022/050042 priority patent/WO2023277717A1/en
Publication of PL438343A1 publication Critical patent/PL438343A1/pl
Publication of PL246985B1 publication Critical patent/PL246985B1/pl

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/095—Sulfur, selenium, or tellurium compounds, e.g. thiols
    • A61K31/10—Sulfides; Sulfoxides; Sulfones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/513—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. cytosine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/69—Boron compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Przedmiotem zgłoszenia jest kombinacja zawierająca: fluorowany izoselenocyjanian o wzorze ogólnym: w którym Ar<sub>F</sub> oznacza grupę polifluoroarylową o wzorze C<sub>6</sub>H<sub>k</sub>(CF<sub>3</sub>)F<sub>5-k-p</sub>, gdzie k oznacza liczbę naturalną od 0 do 4, p oznacza liczbę 0, 1 lub 2, x oznacza liczbę 0, 1 lub 2, z oznacza liczbę 0, 1 lub 2, a y oznacza liczbę naturalną od 3 do 6, oraz lek przeciwnowotworowy do stosowania w zapobieganiu lub leczeniu nowotworu, przy czym lek przeciwnowotworowy wybiera się spośród: leków onkologicznych do terapii celowanych, inhibitorów mitozy, antybiotyków o działaniu cytostatycznym, antymetabolitów lub ich mieszaniny.

Description

DZIEDZINA TECHNIKI
Przedmiotem wynalazku jest połączenie sulfotlenku 4-izoselenocyjanianobutylowo-4’-fluorobenzylowego z lekami przeciwnowotworowymi wykazujące zwiększone właściwości przeciwnowotworowe w porównaniu z właściwościami poszczególnych składników kompozycji, zwłaszcza wobec potrójnie ujemnego nowotworu sutka.
STAN TECHNIKI
Współcześnie w terapii nowotworu potrójnie ujemnego nowotworu piersi stosowana jest przede wszystkim chemioterapia. Jednak jej skuteczność wynosi około 30%, dlatego nadal poszukiwane są nowe, skuteczniejsze schematy leczenia, zwłaszcza takie, które wykorzystują efekt synergistyczny. W przypadku efektu synergistycznego występującego pomiędzy różnymi substancjami czynnymi stosowanymi łącznie, ich wspólne działanie przeciwnowotworowe jest silniejsze niż łączne działanie poszczególnych składników mieszaniny stosowanych oddzielnie.
W stanie techniki znane są właściwości przeciwnowotworowe fluorowanych izoselenocyjanianów o wzorze ogólnym 1 :
O
ArF(CHxF2.x)z-S-(CH2)y-N=C=Se
Wzór 1 w którym ArF oznacza grupę polifluoroarylową o wzorze C6Hk(CF3)pF5.k.p, gdzie k oznacza liczbę naturalną od 0 do 4, p oznacza liczbę 0, 1 lub 2, x oznacza liczbę 0, 1 lub 2, z oznacza liczbę 0, 1 lub 2, a y oznacza liczbę naturalną od 3 do 6, w tym sulfotlenku 4-izoselenocyjanianobutylowo-4’-fluorobenzylowego o wzorze 2:
O
II
CH2—S—(CH2)4-N=C=Se
Wzór 2
W modelu in vitro wykazano selektywne działanie przeciwnowotworowe tego związku względem linii komórkowych raka sutka i czerniaka. [T. Cierpiał et al., „Organofluorine Isoselenocyanate Analogues of Sulforaphane: Synthesis and Anticancer Activity”, ChemMedChem, vol. 11, no. 21, 2016.].
Dokumenty ze stanu techniki nie podają jednak żadnych przykładów wykorzystania kombinacji sulfotlenku 4-izoselenocyjanianobutylowo-4’-fluorobenzylowego 2 z innymi lekami przeciwnowotworowymi, ani nie sugerują możliwości uzyskania efektu synergistycznego dla szczególnych kombinacji.
ISTOTA WYNALAZKU
Celem niniejszego wynalazku jest dostarczenie synergistycznych w terapii przeciwnowotworowe] połączeń sulfotlenku 4-izoselenocyjanianobutylowo-4’-fluorobenzylowego o wzorze 2, z innymi lekami.
Nieoczekiwanie okazało się, że połączenia związku o wzorze 2, ze znanym lekiem przeciwnowotworowym wybranym spośród: leków onkologicznych do terapii celowanych, inhibitorów mitozy, antybiotyków o działaniu cytostatycznym, antymetabolitów lub ich mieszaniny, zwłaszcza takimi jak: bortezomib, paklitaksel, doksorubicyna lub 5-fluorouracyl, działają silniej względem potrójnie ujemnego nowotworu sutka niż poszczególne składniki osobno. W szczególności zaobserwowano ich silne działanie względem komórek nowotworu piersi MDA-MB-231 w badaniach in vitro. Badania przeprowadzono za pomocą testu cytotoksyczności MTT mierzącego zdolność związku do obniżania żywotności komórek. Wyniki badań wykazały istnienie silnego synergizmu działania fluorowanego izoselenocyjanianu, a w szczególności sulfotlenku 4-izoselenocyjanianobutylowo-4’-fluorobenzylowego z tymi lekami.
Przedmiotem wynalazku jest kombinacja zawierająca sulfotlenek 4-izoselenocyjanianobutylowo-4’-fluorobenzylowy o wzorze:
CH2-S-(CH2)4-N—C=Se oraz lek przeciwnowotworowy, do stosowania w zapobieganiu lub leczeniu nowotworu, przy czym lek przeciwnowotworowy wybiera się spośród: leków onkologicznych do terapii celowanych takich jak bortezomib, inhibitorów mitozy takich jak paklitaksel, antybiotyków o działaniu cytostatycznym takich jak doksorubicyna, antymetabolitów takich jak 5-fluorouracyl lub ich mieszaniny.
Korzystnie, lek przeciwnowotworowy wybiera się spośród: bortezomibu, paklitakselu, doksorubicyny, 5-fluorouracylu lub ich mieszaniny.
Korzystnie, sulfotlenek 4-izoselenocyjanianobutylowo-4’-fluorobenzylowy oraz lek przeciwnowotworowy podawane są jednocześnie.
Korzystnie, sulfotlenek 4-izoselenocyjanianobutylowo-4’-fluorobenzylowy oraz lek przeciwnowotworowy podawane są sekwencyjnie, korzystnie w odstępach 24 godzinnych, przy czym korzystnie najpierw podawany jest sulfotlenek 4-izoselenocyjanianobutylowo-4’-fluorobenzylowy.
Korzystnie, zdefiniowana powyżej kombinacja do stosowania według wynalazku jest stosowana w zapobieganiu lub leczeniu nowotworu piersi.
Korzystnie, zdefiniowana powyżej kombinacja do stosowania według wynalazku jest stosowana w zapobieganiu lub leczeniu potrójnie ujemnego nowotworu piersi (TNBC).
W kontekście wynalazku za „leki onkologiczne do terapii celowanych” należy uznać leki ukierunkowane na konkretne cele molekularne (białka lub szlaki sygnałowe), które są zmienione w komórce nowotworowej, tak że umożliwiają jej wzrost, podziały i rozprzestrzenianie się.
Przykładami takich leków są: vemurafenib, dabrafenib, panitumumab, bortezomib, cetuximat, imitinib, gefitinib, erlotynib, trastuzumab, lapatinib i pertuzumab. W korzystnej realizacji lekiem takim jest bortezomib.
W kontekście wynalazku za „inhibitory mitozy” należy uznać leki pochodzenia roślinnego lub syntetyczne pochodne, powodujące stabilizację lub zniszczenie wrzeciona mitotycznego i zahamowanie podziału komórkowego. Przykładami takich leków są: docetaksel, paklitaksel, winkrystyna, winblastyna, winorelbina. W korzystnej realizacji lekiem takim jest paklitaksel.
W kontekście wynalazku za „antybiotyki o działaniu cytostatycznym” należy uznać substancję wytwarzaną przez drobnoustrój, a także półsyntetyczne pochodne i całkowicie syntetyczne związki, naśladujące działanie antybiotyków naturalnych, które wykazują działanie przeciwnowotworowe. Przykładami takich leków są: doksorubicyna, mitotrakson, darubicyna, bleomycyna, mitomycyna, daktinomycyna. W korzystnej realizacji lekiem takim jest doksorubicyna.
W kontekście wynalazku za „antymetabolity” należy uznać leki działające poprzez zahamowanie aktywności enzymów uczestniczących w syntezie kwasów nukleinowych albo poprzez wbudowywanie się w miejsce prawidłowych elementów strukturalnych DNA i RNA. Przykładami takich leków są: metotreksat, 5-fluorouracyl, kapecytabina, arabinozyd cytozyny, fludarabina, kladrybina, gemcytabina, pemetreksed. W korzystnej realizacji lekiem takim jest 5-fluorouracyl.
W możliwej realizacji przewiduje się stosowanie w połączeniu z sulfotlenkiem 4-izoselenocyjanianobutylowo-4’-fluorobenzylowym jednego spośród wymienionych powyżej leków onkologicznych lub ich dowolnej mieszaniny.
Kombinacja według wynalazku wykazuje synergizm działania. W przykładowych realizacjach, lek przeciwnowotworowy oraz sulfotlenek 4-izoselenocyjanianobutylowo-4’-fluorobenzylowy mogą zostać podane zgodnie z jednym z dwóch schematów: konkurencyjnym (oba składniki połącznia podawane są jednocześnie) lub sekwencyjnym (najpierw podawany jest fluorowany izoselenocyjanian, a po około 24 h lek przeciwnowotworowy).
W przykładowej realizacji kombinacja do stosowania według wynalazku jest stosowana w zapobieganiu lub leczeniu nowotworu piersi, szczególnie korzystnie w zapobieganiu lub leczeniu potrójnie ujemnego nowotworu piersi.
Potrójnie ujemnym nowotworem piersi jest podtyp raka piersi, który charakteryzuje się brakiem receptorów steroidowych (tj. estrogenowego i progesteronowego) oraz jednocześnie brakiem receptorów HER-2.
Problem terapii nowotworów w Polsce i na świecie pozostaje wciąż nierozwiązany, wciąż szuka się bardziej skutecznych metod terapii o zmniejszonej toksyczności układowej. Nieoczekiwanie okazało się, że wskazane połączenia w badaniach in vitro wykazały lepsze własności cytotoksyczne względem komórek nowotworu piersi niż sam sulfotlenek 4-izoselenocyjanianobutylowo-4’-fluorobenzylowy czy sam jeden z testowanych leków, czy gdy są podawane łącznie.
Rutynowo, dawkę w leczeniu nowotworów ustala się uwzględniając drogę podania, stan wymagający leczenia lub profilaktyki, a także inne specyficzne okoliczności.
KRÓTKI OPIS FIGUR
W celu lepszego zrozumienia wynalazku, został on zilustrowany w przykładach wykonania oraz na załączonych figurach rysunku, na których:
Na Figurze 1 zaprezentowane zostały wykres kinetyki wzrostu guzów 4T1 (A) oraz histogram zahamowania wzrostu guzów TGI (B). Grupy kontrolne i grupy otrzymujące badane preparaty. *różnica istotna statystycznie względem grupy kontrolnej; Test U Manna-Whitneya; p<0.05 ISC-izoselenocyjanian, 5-fu-5-fluorouracyl.
Na Figurze 2 zaprezentowano wykres ubytku masy ciała (A) oraz histogram zmian mas narządów (B) u zwierząt przyjmujących badane preparaty. 5-fu-5-fluorouracyl, ISC-izoselenocyjanian.
Na Figurze 3 zaprezentowano mikroskopowy obraz komórek MDA-MB-231 inkubowanych z izoselenocyjanianem i a) paklitakselem, b) 5-fluorouracylem, c) bortezomibem, d) doksorubicyną.
Wynalazek przedstawiono bliżej w poniższych przykładach wykonania, które jednak nie ograniczają jego zakresu.
PRZYKŁADY
W poniższych przykładach, jeśli nie wskazano inaczej, stosowano standardowe materiały i metody biochemiczne in vitro lub postępowano zgodnie z zaleceniami producentów dla określonych materiałów i metod. Jako fluorowany izoselonocyjanian (w skrócie określany również jako izoselonocyjanian) we wszystkich opisanych przykładach zastosowano sulfotlenek 4-izoselenocyjanianobutylowo-4’-fluorobenzylowy.
Przykład 1. Badania interakcji cytostatyków z fluorowanym izoselenocyjanianem
Linia komórkowa MDA-MB-231
Linia komórkowa MDA-MB-231 to linia komórkowa raka piersi wywodząca się od 51-letniej kobiety rasy kaukaskiej. Komórki MDA-MB-231 nie wykazują ekspresji receptorów estrogenowych i progesteronowych oraz HER-2/Neu. Linię komórkową MDA-MB-231 zakupiono z banku komórek ATTC (American Type Culture Collection)
Prowadzenie hodowli komórkowej
Linie komórkowe MDA-MB-231 były przechowywane zamrożone w zbiorniku z ciekłym azotem w temperaturze -196°C. W celu rozpoczęcia hodowli ogrzano fiolkę zawierającą komórki strumieniem ciepłego powierza z suszarki, a następnie przeniesiono zawiesinę komórek do butelki hodowlanej. Hodowla była prowadzona w inkubatorze w atmosferze 5% CO2 i 37°C. Komórki inkubowano do osiągnięcia konfluencji 80%, a następne pasażowano. Komórki odklejano za pomocą 0,25% roztworu trypsyny w EDTA. Komórki rozcieńczano w świeżej pożywce w stosunku 1 : 4. Do doświadczenia zawiesinę komórek linii MDA-MB-231 o gęstości 40 000 tysięcy komórek na 1 mL pożywki wysiewano na płytki hodowlane 96-dołkowe. Następnie do dołków dodano roztwory zawierające sam fluorowany izoselonocyjanian w różnych stężeniach, sam lek przeciwnowotworowy (5-fluorouracyl, doksorubicyna, bortezomib lub paklitaksel) w różnych stężeniach oraz podawano kombinację związków w dwóch schematach: sekwencyjnym i konkurencyjnym. W schemacie konkurencyjnym podawano mieszaninę tych związków w odpowiednich stężeniach. W schemacie sekwencyjnym podano najpierw fluorowany izoselenocyjanian, po 24 h usuwano roztwory i komórki przepłukiwano. Następnie dodano lek w różnych stężeniach i inkubowano 72 h.
Test żywotności MTT (ang. methylthiazoltetrazolium salt)
Po przepłukaniu do każdego dołka z komórkami dodano po 50 μL roztworu soli tetrazolowej MTT (250 μg/mL) i wstawiono na 3 godziny do inkubatora. Po tym czasie płytki zalano izopropanolem (po 200 μL na każdy dołek). Absorbancję roztworu odczytywano przy λ = 570 nm używając spektrofotometru POWER WAVE XS.
W celu określenia typu interakcji składników kombinacji została zastosowana metoda Chou -Talalay’a. Rodzaj interakcji oceniano za pomocą indeksu CI (ang. Combination Index), który w przypadku gdy jest mniejszy od 0,9 oznacza występowanie synergizmu, gdy zawiera się między 0,9 a 1,1 - oznacza oddziaływania addytywne. Oddziaływanie synergistyczne oznacza, że efekt działania mieszaniny jest silniejszy niż efekty działania każdej z substancji osobno. Dzięki temu w podaniu łącznym możliwe jest stosowanie obniżonych dawek leków niż przy podaniu osobnym.
PL 246985 Β1
Tabela 1
Wartości współczynników Cl oraz efekt - obniżenie żywotności komórek po podaniu kombinacji: izoselenocyjanianu i A, E) bortezomibu, B, F) doksorubicyny, C, G) 5-fluorouracylu i D, H) paklitakselu wobec komórek MDA-MB-231 dla podania sekwencyjnego (A, B, C, D) i konkurencyjnego (E, F, G, H) dla kolejnych punktów pomiarowych kolejnych kombinacji rosnących stężeń obu składników kombinacji
A. Ci dla podania w schemacie sekwencyjnym imsefenocyprMafw i bortezomibu
Punkt pomiarowY Efekt > Cl
1 11 2,1
2. 22
3 29 M
4 49 0,8
5 62 0,7
B, Cl dla podania w sdheraAde sekwencyjnym hosetenocyjanfemi ł doksontbkyny
Punkt pomiarowy Efekt [%] Ci
1 35 10,2
2 51 3,2
3 72 M
4 79 1,1
5 86 0,9
C. Cl dla podania w schemacie sekwencyjnym izosełenocyianianu i 5-fiłuarouracylu
Punkt pomiarowy Efekt Ct
1 56 1,0
2 76 0,8
3 84 0,6
4 85 0,7
5 92 0,5
0. Cl dla podania w schemacie sekwencyjnym kosełenocyjanianu i pakhtaksełu
Punkt pomiarowy Efekt pg a
1 67 1,1
2 79 1,0
3 92 0,7
4 90 0,9
5 97 0,6
E C! da podania w schemacie faxikur«iqgnym Rosetenoc^i^ i bortezomibu
Punkt pomiarowe Efekt O
1 11 2,1
2 22 1,4
3 29 u
4 49 0,8
5 62 0,7
FX3 dla podania w schemacie konkurencyjnym izosefencKyjHónu i rloMorubkyny
Punkt pomiarowy Efekt PM a
1 35 0,9
2 55 OJ
3 56 1,1
4 66 1,2
5 74 1,3
G.Q dla podam w schemacie konkurencyjnym KKetehocrpnianu i 54łumroirac^
Punkt pc miarowy Efekt i%] a
1 37 1,2
2 53 1,1
3 54 M
4 61 M
5 74 1,2
« Cl cHa podania w schemscfe kmkurencyjny^ izoselenoc^anianu i pakliraksełu
Punkt pomiarowy Efekt j%j a
1 47 OJ
.2 64 0,5
3 66 0,5
4 6S OJ
5 72 OJ
Zebrane w Tabeli 1 wyniki wskazują, że łączne podanie izoselenocyjanianu z wybranymi cytostatykami wykazuje synergizm działania, a więc typ interakcji, korzystny z punktu widzenia strategii opracowywania połączeń dla terapii onkologicznej skojarzonej. Jednocześnie zaobserwowano, że
PL 246985 Β1 wraz z rosnącym efektem cytotoksycznym mieszaniny, współczynnik Cl maleje, a więc charakter oddziaływań między składnikami mieszaniny staje się coraz bardziej korzystny osiągając dla paklitakselu i 5-fluorouracylu charakter silnego synergizmu. Taki rodzaj oddziaływań pozwala znacząco obniżyć dawkę stosowanego cytostatyku. Jak pokazano w Tabeli 2 dla podań sekwencyjnych izoselenocyjanianu, 5-fluorouracylu i paklitakselu współczynniki DRI (dose reduction index, współczynnik redukcji dawki), mówiące ile razy można obniżyć dawkę leku i utrzymać ten sam efekt w przypadku mieszaniny, osiągnęły wartość w zakresie 2-20 dla 5-fluorouracylu i ponad 3000 dla paklitakselu. Zatem podanie izoselenocyjanianu pozwala znacząco obniżyć dawkę leku, co przekłada się na zwiększenie bezpieczeństwa terapii.
Tabela 2
Wartości współczynników Cl i DRI dla 5-fluorouracylu (5-fu) i izoseleonocyjanianu (ISC) oraz dla paklitakselu (ΡΑΧ) i ISC, uzyskane przy użyciu testu MTT wobec komórek MDA-MB-231, dla schematu sekwencyjnego doświadczeń
5-fu +ISC (schemat sekwencyjny) ΡΑΧ +ISC (schemat sekwencyjny)
Punkt pomiarowy Efekt (%) Cl DRI (ISC) DRI(5-fu) Efekt (%) Cl DRI (isc) DRI (ΡΑΧ)
1 66 1,0 2 1,9 67 1,1 0,9 3606,9
2 76 0,8 2 3,5 79 1,0 1 43614,3
3 84 0,6 2,2 7,7 92 0,7 1,4 2801340
4 85 0,7 2 6,0 90 0,9 1,2 39487,0
5 92 0,5 2,3 20,0 97 0,6 1,8 2919754
Przykład 2. Ocena zdolności połączenia 5-fluorouracylu z izoselenocyjanianem do zahamowania wzrostu guzów w modelu mysiego raka sutka 4T1 wszczepionego ortotopowo
Opis eksperymentu
Komórki 4T1 pochodzące z hodowli in vitro zostały wszczepione ortotopowo (dosutkowo) myszom szczepu Balb/c w liczbie 2 χ 1O5/ 0,05 mL PBSu/ mysz. Obserwowano wzrost guzów. W dniu 9 (D9) od wszczepienia komórek średnia objętość guzów wyniosła ok. 40 mm3. Myszy podzielono na 4 grup po 8 myszy/grupę i rozpoczęto podania co 7 dni przez 3 tygodnie (D9, D16 i D23) wg schematu:
Z Model 4T1
Nr . Rodzaj grupy ( częstotliwość podawania, przez 3tyg. daw ka i.p. liczba myszy
Gr9 Kontrola (woda do iniekcji) dootrzewnowe, lx rydz; D9, Dl6, D23 0.1 ml/lOg 8
Gr 11 5-FU (5-f!uorouracy!) dożylnie, 1 x tydz; D9, D23 100 mg/kgtn.c. 7
Gr 13 ISC (izosełenocyjanian) dootrzewnowe, lx tydz; D9, Dl6, D23 50 mgkg m.c. 8
Gr 14 ISC +5-FU Dootrzewnowe (lx tydz; D9, Dl6, D23) +dożylnie (1 x tydz; D9, D23 50+100 mg/kg 8
Wyniki badania przedstawiono na Figurze 1. Na panelu A zaprezentowano wykres kinetyki wzrostu guzów, a na panelu B histogram przedstawiający zahamowanie wzrostu guzów w zależności od dnia eksperymentu, dla podań pojedynczych oraz dla połącznia izoselenocyjanianu z 5-fluorouracylem.
Nieoczekiwanie okazało się, że połączenie izoselenocyjanianu z 5-fluorouracylem cechuje się najmniejszą kinetyką wzrostu oraz najsilniejszym zahamowaniem wzrostu guzów (TGI) w porównaniu do podań pojedynczych izoselenocyjanianu i 5-fluorouracylu. Porównanie wartości TGI rzeczywistej i hipotetycznej (Tabela 3) wskazało na addytywny, bądź synergistyczy (w dniu 24) charakter odziaływania związków podanych w połączniu.
PL 246985 Β1
Tabela 3
Hipotetyczne TGI dla połacznia izoselenotiocyjanianu (ISC) z 5-fluorouracylem (5-fu)
TGI ί%1 HIPOTETYCZNE
dzień ISC 5-Fu ISC+5-FU TGI
13 22,1 53,7 59,8 63,9
15 24 46,5 55 59,3
17 25,2 48,2 56,8 61,3
20 18,7 39,9 51,9 ^51 «1»
22 22,8 42,1 51,6 55,3
24 19,8 37 50,9 49,5
27 17 42,4 50,5 52,2
Wykonano badania, które wykazały niską toksyczność układową testowanego połączenia względem myszy (Fig. 2). Obserwowano niewielkie zmiany masy ciała myszy po podaniu łącznym izoselenocyjanianu i 5-fluorouracylu (max. 6%). Po zakończeniu badania wykonano sekcję myszy. Zaobserwowano mniejsze śledziony i mniejszą masę płuc w przypadku myszy z grupy otrzymującej 5-fluorouracyl i podanie łączne 5-fluorouracylu i izoselenocyjanianu (efekt działania 5-fluorouracylu).
Wyniki badań biochemicznych krwi oraz pełna morfologia (wyniki przedstawione w Tabeli 4) mieszczą się w granicach normy. Wszystkie powyższe wyniki wskazują na bezpieczeństwo stosowania opracowanej zgodnie z wynalazkiem formulacji.
Tabela 4
Pełna morfologia krwi myszy (A i B) oraz wyniki badań biochemicznych krwi myszy (C)
A. Morfologia krwi myszy
Grupa Leukocyty Limfocyty Monocyty Grannlocyty j
% % % 1
Myszy zdrowe (bez nowotworu) 5S9±1,5 80,3*5,4 4,4*1 15,3*6
Kontrola 216*95 14,4*3,6 7,540,6 78,2*4 |
5-FU 3,4±1,6 85±6,4 2,7±1 12,2*5,9 1
ISC 2Ó8±89 173±43 10.4*0,9 72,344,9 |
ISC + 5-FU 4,942,8 77,3*8,1 20,6±7,8 1
B. Morfologia krwi myszy cd.
Grupa Erytrocyty Hemoglobina Hematokryt MCV Płytki krwi
[KM/uL} % W [lO^i/uL]
3dyszy zdrowe (bez nowotworu) 8,1*1,4 13,840.7 39,2*1,6 48,3*0,9 482*26,8
Kontrola 8,7*0,6 18,6*1,3 46,4*2,5 53,3*2,6 680*123
5-FU 6,9*1 14,2*2,7 33,5*5 48,5*0,7 971*243
TSC 8,8+0.5 18,6*1,1 47.4*3,5 54*1.6 770497
ISC + 5-FU 6,3*1 12,8*1,8 30,4*4,2 48,744,2 1512*356
C. Parametry biochemiczne krwi myszy
Grapa ALT AST kreatynina mocznik Kinaz® kreatynowa (CK] CK-MB
UZŁ ί&Ι umol/L mmol/L UL U/L
Myszy zdrowe (bez nowotworu) 40,3±4,i 130,2±25,3 8,340,9 9,542,3 Brak danych Brak danych
Kontrola 27411,5 159,5*55,1 6,541,8 6*0,5 1137,74772,3 394*171,9
5-FU I7,4±3,2 95,5*27,6 5,6*2,9 6,7* i,4 983,64448,6 271,6460,5
ISC 23f2±6 154,9466,9 6,541,1 5,941 1428,2*1018,3 378,24109,8
ISC + 5-FU 17,6*2,9 80,9*15,9 6,442,1 6,441.4 785,34248,5 234,5452,7
PL 246985 Β1
Powyższe badania wskazują na wysoką selektywność opracowanej zgodnie z wynalazkiem kombinacji. Przedstawione wyniki badań in vivo potwierdzają, że wskazane w wynalazku połączenie związków jest efektywne w hamowaniu wzrostu nowotworu sutka, w szczególności potrójnie ujemnego raka sutka, jedocześnie wykazuje bezpieczeństwo stosowania - brak istotnych efektów ubocznych.
Przykład 3. Ocena zdolności mieszaniny cytostatyków z izoselenocyjanianem do indukcji apoptozy.
Po zakończonym czasie inkubacji wykonywano barwienie komórek ludzkiego raka sutka MDA-MB-231 roztworem barwiącym składającym się z 1 mL roztworu PBS, 20 μΙ FITC-aneksyny V oraz 20 μΙ roztworu jodku propidyny. Z każdego dołka odpipetowywano pożywkę, następnie przepłukiwano dwukrotnie buforem fosforanowym o objętości 400 pL i 200 pL. Do każdego dołka dodawano 100 pl roztworu barwiącego. Po dodaniu roztworu barwiącego płytki były inkubowane 10 minut w inkubatorze bez dostępu światła. Po dwukrotnym przepłukaniu do każdego dołka dodawano 150 pl roztworu PBS. Tak przygotowany preparat był oglądany przy użyciu mikroskopu konfokalnego.
Do wykonania zdjęć preparatów wykorzystano mikroskop konfokalny Olympus ΙΧ70 Fv500. Źródłem światła w mikroskopie są lasery: argonowy o długości fali 488 nm oraz helowo-neonowy o długości fali 543 nm. Fluorescencja była rejestrowana jednocześnie na dwóch kanałach przy użyciu filtrów 505-525 nm oraz 560-610 nm. Zdjęcia analizowano w programie Fluoview500.
Na Fig. 3 zaprezentowano zdjęcia mikroskopowe komórek MDA-MB-231 po inkubacji z izoselenotiocyjanianem i cytostatykami. Uwidoczniono komórki apoptotyczne, które w efekcie zachodzącego procesu eksternalizowały specyficzne białko fosfatydyloserynę-V na zewnątrz błony komórkowej (zielona fluorescencja). Uwidocznione komórki wykazywały też czerwoną fluorescencję pochodzącą od jodku propidyny, który ma zdolność wnikania tylko do komórek z uszkodzoną błoną komórkową. Taki obraz jest charakterystyczny dla późnej apoptozy, która jest procesem nieodwracalnie prowadzącym do samounicestwienia komórek nowotworowych. Obrazy mikroskopowe wskazują, że w przypadku paklitakselu efekt cytotoksyczny był najsilniejszy.
Nieoczekiwanie okazało się, że zastosowanie mieszaniny cytostatyku i izoselenocyjanianu charakteryzuje się lepszymi własnościami przeciwnowotworowymi niż pojedyncze składniki, co nie było do tej pory opisane ani sugerowane. Podanie łączne w komórkach nowotworowych sutka opornych na chemioterapię charakteryzuje się synergizmem lub addytywizmem działania co zwiększa efekt cytotoksyczny cytostatyku w tkance nowotworowej. Wykazany synergizm działania substancji czynnych jest efektem bardzo korzystnym, ponieważ pozwala obniżyć stężenie efektywne leku. Podanie wspólne związków umożliwia obniżenie stężenia cytostatyku nawet o kilka tysięcy razy. Okazało się również, że zastosowane kombinacje powodują śmierć komórki nowotworowej na drodze apoptozy. Leki przeciwnowotworowe powinny cechować się takimi właściwościami, dlatego formulacjefarmaceutyczne według wynalazku będą użyteczne w leczeniu nowotworów i wykazują lepsze własności niż cytostatyki podane pojedynczo.

Claims (6)

1. Kombinacja zawierająca sulfotlenek 4-izoselenocyjanianobutylowo-4’-fluorobenzylowy o wzorze:
== θ / \ ii F Ά >-CH2-S-(CH2)4-N=C=Se oraz lek przeciwnowotworowy, do stosowania w zapobieganiu lub leczeniu nowotworu, przy czym lek przeciwnowotworowy wybiera się spośród: leków onkologicznych do terapii celowanych takich jak bortezomib, inhibitorów mitozy takich jak paklitaksel, antybiotyków o działaniu cytostatycznym takich jak doksorubicyna, antymetabolitów takich jak 5-fluorouracyl lub ich mieszaniny.
2. Kombinacja do stosowania według zastrz. 1, znamienna tym, że lek przeciwnowotworowy wybiera się spośród: bortezomibu, paklitakselu, doksorubicyny, 5-fluorouracylu lub ich mieszaniny.
PL 246985 Β1
3. Kombinacja do stosowania według zastrz. 1, znamienna tym, że sulfotlenek 4-izoselenocyjanianobutylowo-4’-fluorobenzylowy oraz lek przeciwnowotworowy podawane są jednocześnie.
4. Kombinacja do stosowania według zastrz. 1, znamienna tym, że sulfotlenek 4-izoselenocyjanianobutylowo-4’-fluorobenzylowy oraz lek przeciwnowotworowy podawane są sekwencyjnie, korzystnie w odstępach 24 godzinnych, przy czym korzystnie najpierw podawany jest sulfotlenek 4-izoselenocyjanianobutylowo-4’-fluorobenzylowy.
5. Kombinacja do stosowania według zastrz. 1, znamienna tym, że jest stosowana w zapobieganiu lub leczeniu nowotworu piersi.
6. Kombinacja do stosowania według zastrz. 1, znamienna tym, że jest stosowana w zapobieganiu lub leczeniu potrójnie ujemnego nowotworu piersi (TNBC).
PL438343A 2021-07-02 2021-07-02 Kombinacja zawierająca sulfotlenek 4-izoselenocyjanianobutylowo- 4’-fluorobenzylowy oraz lek przeciwnowotworowy do stosowania w zapobieganiu lub leczeniu nowotworu PL246985B1 (pl)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL438343A PL246985B1 (pl) 2021-07-02 2021-07-02 Kombinacja zawierająca sulfotlenek 4-izoselenocyjanianobutylowo- 4’-fluorobenzylowy oraz lek przeciwnowotworowy do stosowania w zapobieganiu lub leczeniu nowotworu
PCT/PL2022/050042 WO2023277717A1 (en) 2021-07-02 2022-07-04 Combination containing fluorinated isoselenocyanates and anticancer drug for use in cancer prevention or treatment

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL438343A PL246985B1 (pl) 2021-07-02 2021-07-02 Kombinacja zawierająca sulfotlenek 4-izoselenocyjanianobutylowo- 4’-fluorobenzylowy oraz lek przeciwnowotworowy do stosowania w zapobieganiu lub leczeniu nowotworu

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL438343A1 PL438343A1 (pl) 2023-01-09
PL246985B1 true PL246985B1 (pl) 2025-04-22

Family

ID=83398177

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL438343A PL246985B1 (pl) 2021-07-02 2021-07-02 Kombinacja zawierająca sulfotlenek 4-izoselenocyjanianobutylowo- 4’-fluorobenzylowy oraz lek przeciwnowotworowy do stosowania w zapobieganiu lub leczeniu nowotworu

Country Status (2)

Country Link
PL (1) PL246985B1 (pl)
WO (1) WO2023277717A1 (pl)

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PL235779B1 (pl) * 2015-10-27 2020-10-19 Centrum Badan Molekularnych I Makromolekularnych Polskiej Akademii Nauk Nowe analogi sulforafanu, ich prekursory, sposób ich wytwarzania oraz zastosowanie

Also Published As

Publication number Publication date
PL438343A1 (pl) 2023-01-09
WO2023277717A1 (en) 2023-01-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US8822526B2 (en) Synergistic pharmaceutical combination for the treatment of cancer
KR100718946B1 (ko) 효과적인 항종양 치료
RU2438664C2 (ru) Синергическая фармацевтическая комбинация для лечения рака
JP2006523713A (ja) 薬剤併用物送達用組成物
RU2429838C2 (ru) Комбинированная химиотерапия
KR20010075348A (ko) 아세틸디날린과 겜시타빈, 카페시타빈 또는 시스플라틴을함께 사용하는 항암 화학요법
US20110070232A1 (en) Combination Therapy with an Antitumor Alkaloid
KR20040097237A (ko) 항종양성 인돌로피롤로카바졸 유도체와 기타 항암제의 병용
PT1432402E (pt) Composições para administração de combinações de fármacos
CA2559650A1 (en) Sns-595 and methods of using the same
US6699844B2 (en) Methods for treating cellular proliferative disorders
US5049396A (en) Pharmaceutical compositions with anti-cancer activity and method for the treatment of cancer sensitive to treatment
Sause et al. Phase II trial of combination chemotherapy and irradiation in non-small-cell lung cancer, Radiation Therapy Oncology Group 88–04
WO2019073296A1 (en) LIPOSOMAL FORMULATIONS OF BISANTRENE OR DERIVATIVES OR THE LIKE THEREOF
US10786505B2 (en) Administration of NEDD8-activating enzyme inhibitor and chemotherapeutic agents
US20090061022A1 (en) Pharmaceutical composition comprising arsenite for the treatment of malignancy
PL246985B1 (pl) Kombinacja zawierająca sulfotlenek 4-izoselenocyjanianobutylowo- 4’-fluorobenzylowy oraz lek przeciwnowotworowy do stosowania w zapobieganiu lub leczeniu nowotworu
ES2984592T3 (es) Procedimientos de tratamiento de cáncer de mama metastásico no tratado previamente positivo para HER2
KR20100131474A (ko) 개선된 항암치료
RU2284818C2 (ru) Комбинированная химиотерапия
Litterst et al. Clinical and experimental nephrotoxicity of cancer chemotherapeutic agents
Jones Clinical pharmacology of melphalan and its implications for clinical resistance to anticancer agents
US12042499B2 (en) Administration of aurora kinase inhibitor and chemotherapeutic agents
Oka et al. Phase I study of irinotecan and cisplatin with concurrent split-course radiotherapy in unresectable and locally advanced non-small cell lung cancer
CN110893189A (zh) 阿帕替尼与依托泊苷联合在制备治疗肺癌的药物中的用途