PL237807B1 - Sposób różnicowania zmian nowotworowych tarczycy oraz zastosowanie metalotioneiny (MT) do różnicowania zmian nowotworowych tarczycy - Google Patents
Sposób różnicowania zmian nowotworowych tarczycy oraz zastosowanie metalotioneiny (MT) do różnicowania zmian nowotworowych tarczycy Download PDFInfo
- Publication number
- PL237807B1 PL237807B1 PL393389A PL39338910A PL237807B1 PL 237807 B1 PL237807 B1 PL 237807B1 PL 393389 A PL393389 A PL 393389A PL 39338910 A PL39338910 A PL 39338910A PL 237807 B1 PL237807 B1 PL 237807B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- follicular
- expression
- carcinoma
- thyroid
- metallothionein
- Prior art date
Links
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 title claims description 48
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 title claims description 48
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 title claims description 46
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 14
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 title claims description 9
- 230000003902 lesion Effects 0.000 title description 17
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 title description 16
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 title description 7
- 208000003200 Adenoma Diseases 0.000 claims description 26
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 26
- 201000004260 follicular adenoma Diseases 0.000 claims description 24
- 208000030878 follicular thyroid adenoma Diseases 0.000 claims description 24
- 208000030901 thyroid gland follicular carcinoma Diseases 0.000 claims description 21
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 claims description 13
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 claims description 13
- UAHFGYDRQSXQEB-PWPYQVNISA-N 4-nle-α-msh Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(C)=O)C1=CC=C(O)C=C1 UAHFGYDRQSXQEB-PWPYQVNISA-N 0.000 claims description 7
- 101710201354 Metallothionein A Proteins 0.000 claims description 7
- 101710094503 Metallothionein-1 Proteins 0.000 claims description 7
- 102100031347 Metallothionein-2 Human genes 0.000 claims description 7
- 101710201349 Metallothionein B Proteins 0.000 claims description 5
- 101710094505 Metallothionein-2 Proteins 0.000 claims description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 3
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 claims description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 claims description 2
- JDKLPDJLXHXHNV-MFVUMRCOSA-N (3s,6s,9r,12s,15s,23s)-15-[[(2s)-2-acetamidohexanoyl]amino]-9-benzyl-6-[3-(diaminomethylideneamino)propyl]-12-(1h-imidazol-5-ylmethyl)-3-(1h-indol-3-ylmethyl)-2,5,8,11,14,17-hexaoxo-1,4,7,10,13,18-hexazacyclotricosane-23-carboxamide Chemical compound C([C@@H]1C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)C[C@@H](C(N[C@@H](CC=2NC=NC=2)C(=O)N1)=O)NC(=O)[C@@H](NC(C)=O)CCCC)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 JDKLPDJLXHXHNV-MFVUMRCOSA-N 0.000 claims 4
- 208000004463 Follicular Adenocarcinoma Diseases 0.000 claims 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 16
- 201000010198 papillary carcinoma Diseases 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 108010020437 Ki-67 Antigen Proteins 0.000 description 9
- 102000009875 Ki-67 Antigen Human genes 0.000 description 9
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 9
- 208000007054 Medullary Carcinoma Diseases 0.000 description 8
- 201000008494 nodular goiter Diseases 0.000 description 8
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 6
- 208000023356 medullary thyroid gland carcinoma Diseases 0.000 description 6
- 102100037512 Metallothionein-1G Human genes 0.000 description 5
- 208000030045 thyroid gland papillary carcinoma Diseases 0.000 description 5
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 206010033701 Papillary thyroid cancer Diseases 0.000 description 4
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 4
- 208000013076 thyroid tumor Diseases 0.000 description 4
- 101001027938 Homo sapiens Metallothionein-1G Proteins 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 208000001446 Anaplastic Thyroid Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101001027945 Homo sapiens Metallothionein-1E Proteins 0.000 description 2
- 101001027943 Homo sapiens Metallothionein-1F Proteins 0.000 description 2
- 101710196491 Metallothionein-1G Proteins 0.000 description 2
- 229910052793 cadmium Inorganic materials 0.000 description 2
- BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N cadmium atom Chemical compound [Cd] BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 230000006607 hypermethylation Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000019179 thyroid gland undifferentiated (anaplastic) carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 206010001233 Adenoma benign Diseases 0.000 description 1
- 206010002240 Anaplastic thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000003170 Bronchiolo-Alveolar Adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100038503 Cellular retinoic acid-binding protein 1 Human genes 0.000 description 1
- JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N Cu2+ Chemical compound [Cu+2] JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 230000010190 G1 phase Effects 0.000 description 1
- 102100022893 Histone acetyltransferase KAT5 Human genes 0.000 description 1
- 101001099865 Homo sapiens Cellular retinoic acid-binding protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001046996 Homo sapiens Histone acetyltransferase KAT5 Proteins 0.000 description 1
- 101001014059 Homo sapiens Metallothionein-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000945496 Homo sapiens Proliferation marker protein Ki-67 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000019149 MAP kinase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040008097 MAP kinase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 101150029661 MT1C gene Proteins 0.000 description 1
- 238000000585 Mann–Whitney U test Methods 0.000 description 1
- 102100037510 Metallothionein-1E Human genes 0.000 description 1
- 102100037514 Metallothionein-1F Human genes 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037168 Papillary Follicular Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 102100034836 Proliferation marker protein Ki-67 Human genes 0.000 description 1
- 230000018199 S phase Effects 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 210000004404 adrenal cortex Anatomy 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 229940045799 anthracyclines and related substance Drugs 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012568 clinical material Substances 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 229910001431 copper ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000000750 endocrine system Anatomy 0.000 description 1
- 208000017333 follicular variant thyroid gland papillary carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012333 histopathological diagnosis Methods 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 230000002390 hyperplastic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 238000013188 needle biopsy Methods 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000011165 process development Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 201000008440 thyroid gland anaplastic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000013066 thyroid gland cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- -1 zinc (Zn) ions Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/825—Metallothioneins
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Oncology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób różnicowania zmian nowotworowych tarczycy obejmujących gruczolaka pęcherzykowego i raka pęcherzykowego oraz zastosowanie metalotioneiny do różnicowania zmian nowotworowych tarczycy ww. typów. Przedmiotowy wynalazek należy do dziedziny diagnozowania i różnicowania nowotworów tarczycy z wykorzystaniem metod im munohistochemicznych.
Raki tarczycy są najczęstszymi nowotworami układu endokrynnego. Z komórek pęcherzyków tarczycy rozwijają się raki wysokozróżnicowane (brodawkowaty i pęcherzykowy), występujące naj częściej u osób młodych, oraz niskozróżnicowane raki anaplastyczne, występujący zwykle u ludzi po 60. roku życia. Rak brodawkowaty stanowi 70-80% nowotworów tarczycy i jest uważany za najłagodniejszą postać spośród raków tego narządu. Z kolei rak pęcherzykowy stanowi 5-15% raków gruczołu tarczowego. Z powodu trudności w odróżnieniu go od gruczolaka pęcherzykowego, który jest zmianą łagodną, stosuje się względem obu opisanych zmian termin guza pęcherzykowego. Ich różnicowanie możliwe jest wyłącznie w preparacie pooperacyjnym, natomiast zmiany te są nie do odróżnienia w celowanej biopsji cienkoigłowej.
Do grupy najczęściej oznaczanych markerów proliferacyjnych należy Ki-67. Wykazano wysoką ekspresję Ki-67 w rakach m.in. gruczołu sutkowego, płuc, prostaty, guzach tkanek miękkich oraz mózgu, jednak jego biologiczna funkcja nadal pozostaje nie do końca poznana. W wielu dotychczas opublikowanych pracach porównywano ekspresję metalotioneiny (MT) i antygenu Ki-67 w różnych typach nowotworów. Badano dotychczas nowotwory jelita grubego, kory nadnerczy, jamy ustnej, prostaty, gruczołu piersiowego, jajnika, mięsaki tkanek miękkich oraz niedrobnokomórkowe raki płuc. W większości badań zaobserwowano wyraźną korelację między ekspresją MT a antygenem Ki-67. Niemniej jednak dotychczasowe prace nad ekspresją MT i jej izoform w łagodnych i złośliwych zmianach gruczołu tarczowego prezentują często niejednoznaczne wyniki.
Ze stanu techniki znana jest publikacja Fenario i wsp. (Fenario C, Lavagni P, Gariboldi M, Miranda C, Losa M, Cleris L, Formelli F, Pilotti S, Pierotti MA and Greco A: Metallothionein IG acts as an oncosupressor in papillary thyroid carcinoma. Lab Invest 88: 474-481, 2008, w której autorzy wykazali spadek ekspresji funkcjonalnych izoform MT w raku brodawkowatym (MT1E, MT1C, MT1F oraz MT2A) oraz w oparciu o model komórkowy wskazali na możliwą rolę MT-1G jako supresora rozwoju procesu nowotworowego. Publikacja odnosiła się jednie do problemu różnicowania zmian złośliwych typu rak brodawkowaty i rak pęcherzykowy, natomiast nie poruszała problemu diagnostycznego gruczolaka pęcherzykowego i raka pęcherzykowego. Praca Huang Y. ujawnia, iż do spadku ekspre sji MT-1G w raku brodawkowatym gruczołu tarczowego dochodzi na skutek hipermetylacji promotora tego genu (Huang Y, de la Chapelle A and Pellegata NS: Hypermethylation, but not LOH, is associated with the low expression of MT1G and CRABP1 in papillary thyroid carcinoma. Int J Cancer 104: 735-744, 2003). W pracy Huang Y. przedstawiono wyniki badań na tkankach zdrowych tarczycy oraz raku brodawkowatym i jego wariancie pęcherzykowym (FVPTC), nie dostarczono jakkolwiek obserwacji na temat gruczolaka pęcherzykowego oraz możliwości diagnozowania tego typu względem raka pęcherzykowego. Badania Liu i wsp. dowodzą, iż każda z 8 funkcjonalnych izoform MT może ulec ekspresji pod wpływem stymulującego działanie kadmu oraz aktywacji kinaz ERK1/2 w komórkach raka brodawkowatego tarczycy. Komórki, w których ekspresji uległy te izoformy cechowały się krótszą fazą G1 oraz szybszym przejściem w fazę S oraz M cyklu komórkowego (Liu ZM, Hasselt CA, Song FZ, Vlantis AC, Cherian MG, Koropatnick I and Chen GG: Expression of functional metallothionein isoforms in papillary thyroid cancer. Mol Cell Endocrinol 302: 92-98, 2009). Badania przeprowadzone przez Liu i wsp. w zakresie ekspresji metalotioneiny w nowotworze tarczycy zostały przeprowadzone jedynie na jednej linii komórkowej raka brodawkowatego (KAT5) wyizolowanej z materiału pochodzącego od jednego pacjenta. Praca nie dostarcza wyników z badań na materiale klinicznym od różnych pacjentów, co mogłoby zapewnić różnorodność przypadków i zobrazować stan faktyczny. Autorzy publikacji nie poruszają także problemu diagnostycznego gruczolaka pęcherzykowego w odniesieniu do raka pęcherzykowego i skupiają się na analizie mechanizmów regulujących poziom ekspresji MT w linii raka brodawkowatego.
Do indukcji izoform MT dochodzi również w komórkach raka anaplastycznego tarczycy pod wpływem jonów wapnia, gdzie ich zwiększona ekspresja skutkowała również skróceniem bazy G1 cyklu (Liu ZM, Chen GG, Shum CK, Vlantis AC, Cherian MG, Koropatnick J and van Hasselt CA: Induction of functional MT1 and MT2 isoforms by calcium in anaplastic thyroid carcinoma cells.
PL 237 807 B1
FEBS Lett. 581: 2465-2472, 2007). Badania przeprowadzone w tym zakresie również nie poruszają kwestii możliwości różnicowania raka pęcherzykowego względem gruczolaka pęcherzykowego z wykorzystaniem pomiaru poziomu ekspresji MT.
Istnieje więc potrzeba dostarczenia efektywnego markera dla zmian nowotworowych tarczycy typu gruczolak pęcherzykowy i rak pęcherzykowy ułatwiającego postawienie trafnej diagnozy i podjęcie odpowiednich działań terapeutycznych. Pomimo wieloletnich badań nad funkcją białka metalotioneiny w różnych typach nowotworów złośliwych nie potwierdzono jednoznacznie jej wysokiej wartości prognostycznej i rokowniczej dla rzeczonych typów nowotworów tarczycy.
Przedmiotem wynalazku jest sposób różnicowania gruczolaka pęcherzykowego i raka pęcherzykowego tarczycy prowadzony w warunkach in vitro, charakteryzujący się tym, że w próbce tkanki nowotworowej pochodzącej od pacjenta bada się ekspresję białka metalotioneiny (MT) metodą immunohistochemiczną z użyciem przeciwciał monoklonalnych anty-MT-I/-II, ocenia się stopień nasilenia ekspresji metalotioneiny w mikroskopie świetlnym półilościową metodą IRS wg Remmele, przy czym gdy stopień nasilenia ekspresji metalotioneiny jest równy lub większy 8 na półilościowej skali IRS stwierdza się wówczas obecność raka pęcherzykowego.
Korzystnie, bada się ekspresję izoform metalotioneiny MT-I i MT-II.
Korzystnie, ekspresję metalotioneiny bada się w materiale od pacjenta po zabiegu usunięcia gruczołu tarczowego wraz z guzem.
W innej korzystnej realizacji wynalazku obecność raka pęcherzykowego lub gruczolaka pęcherzykowego stwierdza się przy jednoczesnym adekwatnym obrazie histopatologicznym dla ww. zmian.
Innym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie metalotioneiny do różnicowania nowotworów tarczycy typu rak pęcherzykowy i gruczolak pęcherzykowy.
Korzystnie, izoformy metalotioneiny oznaczają MT-I i MT II.
Metalotioneiny (MT) są rodziną białek o małej masie cząsteczkowej, a ich obecność wykazano głównie w organizmach zwierzęcych. Są one wysoko konserwatywne i występują w postaci 4 głównych izoform o różnym umiejscowieniu zarówno w tkankach zdrowych i nowotworowych. Łańcuch polipeptydowy MT jest zbudowany z 61 do 68 aminokwasów (zależnie od izoformy), z których 30% reszt aminokwasowych stanowią reszty cysteiny. Cząsteczka MT składa się z dwóch domen połączonych dimerem lizynowym. Fizjologiczną rolą MT jest wiązanie i transport jonów cynku i miedzi oraz detoksykacja organizmu (poprzez wiązanie) z metali ciężkich, np. kadmu, rtęci i ołowiu. W komórkach intensywnie dzielących się (m.in. komórkach nowotworowych) zaobserwowano wzrost ekspresji MT dostarczających jonów cynku (Zn) dla enzymów biorących udział w procesie replikacji DNA, a także wzrost ekspresji MT chroniących komórki przed apoptozą. MT mogą wpływać również na działanie niektórych chemioterapeutyków (dezaktywują wolne rodniki tworzone w wyniku metabolizmu niektórych cytostatyków np. antracyklin, a z innymi mogą się wiązać jak np. cisplatyna). Różnica w ekspresji MT między gruczolakiem pęcherzykowym i rakiem pęcherzykowym wskazuje na możliwość wykorzystania MT jako pomocniczego markera w różnicowaniu ww. zmian. MT jest też o wiele lepszym markerem diagnostycznym różnicującym zmiany typu gruczolak pęcherzykowy oraz rak pęcherzykowy w porównaniu do Ki-67, gdyż między tymi guzami występuje istotna statystycznie różnica w ekspresji MT. Brak natomiast takich istotnych różnic w ekspresji antygenu Ki-67. Zastosowanie przedmiotowej metody diagnostycznej stanowi pomocniczą metodę dla trudnej diagnostyki histopatologicznej tych dwóch zmian rozrostowych tarczycy.
Przedmiot wynalazku w przykładzie realizacji uwidoczniono na figurach, gdzie Fig. 1 przedstawia ekspresję jądrowo-cytoplazmatyczną MT w gruczolaku pęcherzykowym (1A) i raku pęcherzykowym (1B) oraz ekspresję jądrową antygenu Ki-67 w gruczolaku pęcherzykowym (1C) i raku pęcherzykowym (1D). Fig. 2 przedstawia nasilenie ekspresji MT w różnych typach zmian tarczycy. Znaczącą statystycznie różnicę wykazano pomiędzy rakiem pęcherzykowym a rakiem brodawkowatym (p < 0,001) oraz gruczolakiem pęcherzykowym (p < 0,05). Istotna statystycznie wyższa ekspresja wykazana została również pomiędzy rakiem pęcherzykowym oraz rakiem rdzeniastym (Fig. 2; p < 0,0001). Istotnie statystycznie mniejszą ekspresję w stosunku do wola guzowatego zaobserwowano dla raka brodawkowatego (p < 0,0001) oraz raka rdzeniastego (p < 0,005). Fig. 3 przedstawia nasilenie ekspresji antygenu Ki-67 w różnych typach zmian tarczycy. Znaczącą statystyczne różnicę zaobserwowano między rakiem rdzeniastym a gruczolakiem pęcherzykowym (p < 0,05) oraz rakiem rdzeniastym a wolem guzowatym (p < 0,05).
Wynalazek ilustruje niżej podany przykład.
PL 237 807 B1
Do badań wykorzystano 186 bloczków parafinowych różnych zmian tarczycy otr zymanych z Zakładu Patomorfologii Akademii Medycznej we Wrocławiu. Badane bloczki zawierały 92 przypadki raków, w tym: 48 raków brodawkowatych, 35 raków pęcherzykowych, 9 raków rdzeniastych, 31 gruczolaków oraz 63 przypadki wola guzowatego tarczycy.
A. Immunohistochemia
Wycinki z guzów zostały utrwalone w roztworze 10% zbuforowanej formaliny, odwodnione a następnie zatopione w bloczkach parafinowych. Wszystkie reakcje immunohistochemiczne (IHC) zostały przeprowadzone na skrawkach parafinowych o grubości 4 μm, odparafinowanych w ksylenie i nawodnionych. W przypadku reakcji IHC anty-Ki-67 skrawki były inkubowane w buforze cytrynianowym (pH 6, 10 mM) w temperaturze 95-98°C przez 20 minut celem odsłonięcia epitopów. Aktywność endogennej peroksydazy została zablokowana przez 5-minutową inkubację z 3% roztworem H2O2. Ekspresja MT-I/-II (Klon E9) i Ki-67 (Klon MIB-1) została wykazana przy użyciu mysich przeciwciał monoklonalnych firmy DakoCytomation (Glostrup, Dania). Badane antygeny zostały uwidocznione przy użyciu biotynylowanych przeciwciał oraz streptawidyny koniugowanej z peroksydazą chrzanową (DakoCytomation LSAB+ System-HRP). Jako substratu użyto diaminobenzydyny (DAB, DakoCytomation). Wszystkie reakcje zostały przeprowadzone z zastosowaniem kontroli negatywnej. Wszystkie preparaty zostały poddane barwieniu kontrastującemu hematoksyliną.
B. Ocena nasilenia reakcji IHC
Do oceny nasilenia ekspresji MT wykorzystano półilościową metodę IRS wg Remmele, w której brano pod uwagę intensywność reakcji barwnej oraz odsetek pozytywnych komórek nowotworowych w preparacie. Skala ta ma zakres 0-12 punktów: 0 - brak reakcji, 1-2 - słaba reakcja, 3-4 - umiarkowanie silna reakcja, 6-12 - silna reakcja. Nasilenie ekspresji antygenu Ki-67 w komórkach nowotworowych było ocenione wg skali określającej odsetek pozytywnych komórek nowotworowych w stosunku do wszystkich komórek nowotworowych. Skala ta przyjmuje następujące wartości: 0 pkt - brak reakcji, 1 pkt - 1-10%, 2 pkt - 11-25%, 3 pkt - 26-50%, 4 pkt - >50%.
C. Analiza statystyczna
Uzyskane wyniki zostały poddane analizie statystycznej z użyciem programu Prism 5.0 (GraphPad, CA, USA). Zastosowane zostały testy korelacji Spearmana, test Kiuskall-Wallis’a oraz test U Mann-Whitney’a. Różnice istotne statystycznie uznano dla p < 0,05.
Spośród badanych 186 zmian gruczołu tarczowego, w 180 (96,79c) stwierdzono jądrowo-cytoplazmatyczną ekspresję MT (Fig. 1A, 1B). Wysoka ekspresja MT (6-12 pkt) została wykazana w: 73% przypadków zmian typu wola guzowatego, 70,9% przypadków gruczolaka pęcherzykowego (Fig. 1A), 45,8% przypadków raka brodawkowatego oraz 85,7% raka pęcherzykowego (Fig. 1B). Wysoką ekspresję MT stwierdzono w 33% przypadków raka rdzeniastego.
Największa ekspresja MT została odnotowana w rakach pęcherzykowych (9,14±3,32), niższa, lecz wciąż znacząca w wolu guzowatym (7,25±3,41), gruczolaku pęcherzykowym (6,54±3,40) natomiast najniższa w raku brodawkowatym (4,47±3,14) oraz raku rdzeniastym (3,22±2,54). Zaobserwowano istotną statystycznie różnicę ekspresji MT między poszczególnymi zmianami tarczycy (Fig. 2).
Zauważono istotną statystycznie różnicę pomiędzy nasileniem ekspresji MT w rakach pęcherzykowych (Fig. 1B) oraz gruczolakach pęcherzykowych (Fig. 1A), które są trudne w różnicowaniu histopatologicznym (Fig. 2; p < 0,05). Istotna statystycznie wyższa ekspresja wykazana została pomiędzy rakiem brodawkowatym a rakiem pęcherzykowym (Fig. 2; p < 0,0001) oraz rakiem rdzeniastym (Fig. 2; p < 0,0001). Istotnie statystycznie mniejszą ekspresję w stosunku do wola guzowatego zaobserwowano dla raka brodawkowatego (Fig. 2; p < 0,0001) oraz raka rdzeniastego (Fig. 2; p < 0,005).
Pośród 131 zbadanych zmian, w 118 wykryto jądrową ekspresję antygenu Ki-67. Najwyższą ekspresję (Figura 3) odnotowano w raku pęcherzykowym (1,13±0,92), niewiele niższe w gruczolaku pęcherzykowym (1,08±0,4), raku brodawkowatym (1,05±0,52) i wolu guzowatym (1,05±0,22) oraz najniższą w raku rdzeniastym (0,56±0,53).
Nie zaobserwowano różnicy istotnej statystycznie w stopniu nasilenia ekspresji antygenu Ki-67 między gruczolakiem pęcherzykowym (Fig. 1C) i rakiem pęcherzykowym (Fig. 1D). Istotną statystycznie różnicę ekspresji dla tego antygenu wykryto pomiędzy rakiem rdzeniastym i wolem guzowatym (p < 0,05), oraz między rakiem rdzeniastym a gruczolakiem pęcherzykowym (p < 0,05) (Fig. 3).
Zależność ekspresji metalotioneiny i antygenu Ki-67 w zmianach typu adenoma folliculare oraz carcinoma folliculare zbadana testem Speaimana wykazała brak korelacji ww. antygenów (r = 0,12; p > 0,05).
Claims (4)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób różnicowania gruczolaka pęcherzykowego od raka pęcherzykowego tarczycy, prowadzony w warunkach in vitro, znamienny tym, że:a) w próbce tkanki nowotworowej pochodzącej od pacjenta mierzy się ekspresję izoform MT-I i MT-II białka metalotioneiny (MT) za pomocą metod immunohistochemicznych z użyciem przeciwciał monoklonalnych anty-MT,b) stopień ekspresji MT-I i MT-II mierzy się w mikroskopie świetlnym stosując metodę IRS Remmele, przy czym gdy stopień nasilenia ekspresji metalotioneiny jest równy lub większy 8 na skali IRS stwierdza się obecność raka pęcherzykowego.
- 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że ekspresję MT-I i MT-II bada się w materiale od pacjenta.
- 3. Sposób według zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, że obecność raka pęcherzykowego lub gruczolaka pęcherzykowego stwierdza się przy jednoczesnym adekwatnym obrazie histopatologicznym dla ww. zmian.
- 4. Zastosowanie izoform MT-I i MT-II metalotioneiny do różnicowania in vitro raka pęcherzykowego od gruczolaka pęcherzykowego tarczycy jak określono w zastrz. od 1 do 3.
Priority Applications (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL393389A PL237807B1 (pl) | 2010-12-22 | 2010-12-22 | Sposób różnicowania zmian nowotworowych tarczycy oraz zastosowanie metalotioneiny (MT) do różnicowania zmian nowotworowych tarczycy |
| JP2013546062A JP2014505866A (ja) | 2010-12-22 | 2011-12-21 | 甲状腺の癌様の変化を識別する方法、方法を具体化するためのキットおよび甲状腺の癌様の変化を識別するためのメタロチオネイン（ｍｔ）の使用 |
| US13/996,999 US20130316372A1 (en) | 2010-12-22 | 2011-12-21 | Method of Differentiating Oncogenic Changes of the Thyroid, A Kit to Embody the Method and the Use of Metallothionein (MT) for Differentiating Oncogenic Changes of the Thyroid |
| CN201180062178.3A CN103562722A (zh) | 2010-12-22 | 2011-12-21 | 一种区分甲状腺癌变的方法、实施该方法的试剂盒以及金属硫蛋白在区分甲状腺癌变中的用途 |
| CA2821904A CA2821904A1 (en) | 2010-12-22 | 2011-12-21 | A method of differentiating oncogenic changes of the thyroid, a kit to embody the method and the use of metallothionein (mt) for differentiating oncogenic changes of the thyroid |
| AU2011345464A AU2011345464A1 (en) | 2010-12-22 | 2011-12-21 | A method of differentiating oncogenic changes of the thyroid, a kit to embody the method and the use of metallothionein (MT) for differentiating oncogenic changes of the thyroid |
| EP11819026.3A EP2656078B1 (en) | 2010-12-22 | 2011-12-21 | A method of differentiating oncogenic changes of the thyroid, a kit to embody the method and the use of metallothionein (mt) for differentiating oncogenic changes of the thyroid |
| PCT/PL2011/050052 WO2012087170A1 (en) | 2010-12-22 | 2011-12-21 | A method of differentiating oncogenic changes of the thyroid, a kit to embody the method and the use of metallothionein (mt) for differentiating oncogenic changes of the thyroid |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL393389A PL237807B1 (pl) | 2010-12-22 | 2010-12-22 | Sposób różnicowania zmian nowotworowych tarczycy oraz zastosowanie metalotioneiny (MT) do różnicowania zmian nowotworowych tarczycy |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL393389A1 PL393389A1 (pl) | 2012-07-02 |
| PL237807B1 true PL237807B1 (pl) | 2021-05-31 |
Family
ID=45688218
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL393389A PL237807B1 (pl) | 2010-12-22 | 2010-12-22 | Sposób różnicowania zmian nowotworowych tarczycy oraz zastosowanie metalotioneiny (MT) do różnicowania zmian nowotworowych tarczycy |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20130316372A1 (pl) |
| EP (1) | EP2656078B1 (pl) |
| JP (1) | JP2014505866A (pl) |
| CN (1) | CN103562722A (pl) |
| AU (1) | AU2011345464A1 (pl) |
| CA (1) | CA2821904A1 (pl) |
| PL (1) | PL237807B1 (pl) |
| WO (1) | WO2012087170A1 (pl) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP4317458A4 (en) * | 2021-03-30 | 2025-03-05 | Nippon Medical School Foundation | FOLLICULAR THYROID CANCER-SPECIFIC MARKER |
| CN113265428B (zh) * | 2021-06-11 | 2023-03-14 | 东北林业大学 | 一种利用金属硫蛋白构建活细胞内铜变化的检测系统及应用 |
| KR102665392B1 (ko) * | 2021-08-23 | 2024-05-10 | 충남대학교병원 | 무증상 갑상선 저하증 진단용 조성물 및 이를 포함하는 키트 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1314966C (zh) * | 2004-12-03 | 2007-05-09 | 湖南农业大学 | 一种猪金属硫蛋白的检测方法 |
| WO2007093177A2 (en) * | 2006-02-14 | 2007-08-23 | Vladimir Berezin | Metallothionein-derived peptide fragments |
| WO2009108860A2 (en) * | 2008-02-28 | 2009-09-03 | The Ohio University Rasearch Foundation | Microrna-based methods and compositions for the diagnosis, pronosis and treatment of prostate related disorders |
| JP2011088866A (ja) * | 2009-10-23 | 2011-05-06 | Nakajima Associates:Kk | 生体成分中（血中、尿中その他組織中）の微量メタロチオネイン濃度測定のために開発された，高感度メタロチオネイン測定用酵素免疫定量法（ｅｌｉｓａ）キットの発明 |
-
2010
- 2010-12-22 PL PL393389A patent/PL237807B1/pl unknown
-
2011
- 2011-12-21 CA CA2821904A patent/CA2821904A1/en not_active Abandoned
- 2011-12-21 JP JP2013546062A patent/JP2014505866A/ja active Pending
- 2011-12-21 CN CN201180062178.3A patent/CN103562722A/zh active Pending
- 2011-12-21 EP EP11819026.3A patent/EP2656078B1/en active Active
- 2011-12-21 US US13/996,999 patent/US20130316372A1/en not_active Abandoned
- 2011-12-21 AU AU2011345464A patent/AU2011345464A1/en not_active Abandoned
- 2011-12-21 WO PCT/PL2011/050052 patent/WO2012087170A1/en not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20130316372A1 (en) | 2013-11-28 |
| EP2656078B1 (en) | 2016-10-26 |
| CN103562722A (zh) | 2014-02-05 |
| WO2012087170A1 (en) | 2012-06-28 |
| PL393389A1 (pl) | 2012-07-02 |
| CA2821904A1 (en) | 2012-06-28 |
| AU2011345464A1 (en) | 2013-07-11 |
| EP2656078A1 (en) | 2013-10-30 |
| JP2014505866A (ja) | 2014-03-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Jiang et al. | Discovery and clinical application of a novel prostate cancer marker: α-methylacyl CoA racemase (P504S) | |
| CA2670522C (en) | Activated her3 as a marker for predicting therapeutic efficacy | |
| KR101976219B1 (ko) | 유방암의 바이오마커 | |
| Platt et al. | Vascular endothelial growth factor expression in canine intracranial meningiomas and association with patient survival | |
| CN102625849B (zh) | 侦测致死细胞的方法与材料及其应用 | |
| Meert et al. | Correlation of different markers (p53, EGF-R, c-erbB-2, Ki-67) expression in the diagnostic biopsies and the corresponding resected tumors in non-small cell lung cancer | |
| US8574914B2 (en) | Methods for mobile zinc measurement | |
| JP4628365B2 (ja) | 免疫組織化学的方法 | |
| PL237807B1 (pl) | Sposób różnicowania zmian nowotworowych tarczycy oraz zastosowanie metalotioneiny (MT) do różnicowania zmian nowotworowych tarczycy | |
| JP5413818B2 (ja) | 蛍光多重染色による蛋白定量法 | |
| Preusser et al. | Survivin expression in intracranial ependymomas and its correlation with tumor cell proliferation and patient outcome | |
| US10816478B2 (en) | Urinary polyamines as prostate cancer detection biomarkers | |
| US20140273016A1 (en) | Device and method for the detection and diagnosis of aggressive and metastatic cancer and cancer stem cells employing podocalyxin and tra biomarkers | |
| TWI686395B (zh) | 作為前列腺癌偵測生物標記的尿液聚胺 | |
| Chang et al. | Prognostic significance of p27, Ki-67, and topoisomerase IIα expression in clinically nonfunctioning pancreatic endocrine tumors | |
| WO2020184550A1 (ja) | がんマーカーおよびその用途 | |
| JP6935883B2 (ja) | 蛍光画像診断の前処理方法 | |
| Navas et al. | Measuring phospho-MET by multiplex immunofluorescence to aid in selection of patients with MET activation in tumors | |
| TASHIRO | BRAF gene status and the expression of growth factor signaling molecules in oral epithelial precursor lesions and squamous cell carcinoma | |
| Selvam et al. | Nanochannel electrical immunosensor for cancer stem cell proteomic biomarker based classification of breast cancer | |
| AU2013203603A1 (en) | Activated HER3 as a marker for predicting therapeutic efficacy | |
| AU2017346940A1 (en) | Prognostic method and kits useful in said method |