PL237330B1 - Sposób wytwarzania 3-O-β-D-glukopiranozylo-3’,4’,5,7- tetrahydroksyflawonu - Google Patents

Sposób wytwarzania 3-O-β-D-glukopiranozylo-3’,4’,5,7- tetrahydroksyflawonu Download PDF

Info

Publication number
PL237330B1
PL237330B1 PL424952A PL42495218A PL237330B1 PL 237330 B1 PL237330 B1 PL 237330B1 PL 424952 A PL424952 A PL 424952A PL 42495218 A PL42495218 A PL 42495218A PL 237330 B1 PL237330 B1 PL 237330B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
hours
glucopyranosyl
organic solvent
water
substrate
Prior art date
Application number
PL424952A
Other languages
English (en)
Other versions
PL424952A1 (pl
Inventor
Monika Dymarska
Edyta Kostrzewa-Susłow
Tomasz Janeczko
Original Assignee
Wrocław University Of Environmental And Life Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Wrocław University Of Environmental And Life Sciences filed Critical Wrocław University Of Environmental And Life Sciences
Priority to PL424952A priority Critical patent/PL237330B1/pl
Publication of PL424952A1 publication Critical patent/PL424952A1/pl
Publication of PL237330B1 publication Critical patent/PL237330B1/pl

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/02Oxygen as only ring hetero atoms
    • C12P17/06Oxygen as only ring hetero atoms containing a six-membered hetero ring, e.g. fluorescein
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/44Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
    • C12P19/60Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin

Landscapes

  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Przedmiotem zgłoszenia jest związek o nazwie: 3-O-ß-D-glukopiranozylo-3',4',5,7-tetrahydroksyflawonu o wzorze 2 oraz sposób jego wytwarzania. Przedmiotowy sposób polega na tym, że do podłoża odpowiedniego dla grzybów strzępkowych wprowadza się szczep Isaria fumosorosea KCH J2. Po upływie co najmniej 72 godzin do hodowli wprowadza się substrat, którym jest 3,3',4',5,7-pentahydroksyflawon (kwercetyna) o wzorze 1, rozpuszczony w rozpuszczalniku organicznym mieszającym się z wodą. Transformację prowadzi się w temperaturze od 20 do 30 stopni Celsjusza, przy ciągłym wstrząsaniu co najmniej 96 godzin. Kolejno produkt ekstrahuje się rozpuszczalnikiem organicznym niemieszającym się z wodą i oczyszcza chromatograficznie.

Description

Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania 3- O-^-D-glukopiranozylo-3’,4’,5,7-tetrahydroksyflawonu (izokwercetyny) o wzorze 2, przedstawionym na rysunku.
Związek ten może znaleźć zastosowanie jako antyoksydant w przemyśle spożywczym oraz jako składnik środków farmaceutycznych i kosmetycznych, a także dodatek do pasz.
Większość prozdrowotnych korzyści ze spożywania związków flawonoidowych wynika z ich aktywności przeciwutleniającej i zdolności do chelatowania jonów metali (Heim, K. E.; Tagliaferro, A. R.; Bobilya, D. J. Flavonoid antioxidants: Chemistry, metabolism and structure-activity relationships. J. Nutr. Biochem. 2002, 13, 572-584). Szereg badań dowodzi wagi obecności w cząsteczce związku flawonoidowego grupy hydroksylowej w pozycji 3, a także ugrupowania katecholowego w pierścieniu B, szczególnie w przypadku wyłapywania wolnych rodników tlenowych, czy chelatowaniu jonów żelaza (Cotelle, N.; Bernier, J.L.; Henichart, J.P.; Catteau, J.P.; Gaydou, E.; Wallet, J.C.: Scavenger and antioxidant properties of ten synthetic flavones. Free Radic Biol Med. 1992, 13, 211-219).
Wiele badań dotyczy szerokiego spektrum aktywności biologicznych wykazywanych przez izokwercetynę (3-O-^-D-glukopiranozylo-3’,4’,5,7-tetrahydroksyflawon). Glukozyd ten działa przeciwwirusowo, przeciwcukrzycowo, jest antyoksydantem (Wang C, Li J, Zhang L, Zhang X, Yu S, Liang X, et al. Neurochemistry International Isoquercetin protects cortical neurons from oxygen - glucose deprivation - reperfusion induced injury via suppression of TLR4 - NF- r B signal pathway. Neurochem Int [Internet]. 2013; 63(8):741-9).
Izokwercetyna wykazywała silniejszą aktywność antyproliferacyjną w stosunku do pięciu linii komórek nowotworowych (m.in. jelita grubego, piersi, wątroby i płuc) niż kwercetyna - aglikon, z którego się wywodzi (2). Badania prowadzone na wirusie grypy wykazały, że izokwercetyna hamuje replikację wirusa grypy A i B. Po serii pasaży wirusa nie zaobserwowano wytwarzania się oporności w stosunku do izokwercetyny (Kim Y, Narayanan S, Chang K. Inhibition of influenza virus replication by plantderived isoquercetin. Antiviral Res [Internet]. 2010; 88(2): 227-35). Opisywany związek wykazywał również działanie neuroprotekcyjne w stosunku do szczurzych komórek nerwowych w modelu ischemii in vitro (Wang C, Li J, Zhang L, Zhang X, Yu S, Liang X, et al. Neurochemistry International Isoquercetin protects cortical neurons from oxygen - glucose deprivation - reperfusion induced injury via suppression of TLR4 - NF- r B signal pathway. Neurochem Int [Internet], 2013; 63(8): 741-9).
Uważa się, że glikozydy flawonoidowe przed absorpcją w układzie pokarmowym muszą zostać poddane hydrolizie przez mikroflorę jelitową do odpowiednich aglikonów. Dowiedziono jednak, że częściowa absorpcja połączeń cukrowych flawonoidów również jest możliwa.
Cząsteczka glukozy przyłączona w pozycji 3 kwercetyny (3,3’,4’,5,7-pentahydroksyflawon) zwiększała absorpcję tego glukozydu w jelicie cienkim do 52%, w porównaniu z 24% absorpcją aglikonu kwercetyny i 17% rutynozydu kwercetyny (Heim, K. E.; Tagliaferro, A. R.; Bobilya, D. J. Flavonoid antioxidants: Chemistry, metabolism and structure-activity relationships. J. Nutr. Biochem. 2002, 13, 572584, Hollman, P. C.; Bijsman, M. N.; van Gameren, Y.; Cnossen, E. P; de Vries, J. H.; Katan, M. B. The sugar moiety is a major determinant of the absorption of dietary flavonoid glycosides in man. Free Radic. Res. 1999, 31, 569-573).
Flawonoidy w roślinach występują wyłącznie w połączeniu z jednostkami cukrowymi. Glikozylacja skutkuje wzrostem rozpuszczalności cząsteczki flawonoidu w wodzie i wzrostem jego stabilności. Dzięki temu zwiększa się przyswajalność przyjmowanych z pokarmem związków. (J. Xiao, T.S. Muzashvili, M.l. Georgiev, Biotechnology Advances, 2014, 32, 1145-1156, Plaza, M.; Pozzo, T.; Liu, J.; Gulshan Ara, K. Z.; Turner, C.; Nordberg Karlsson, E. Substituent effects on in vitro antioxidizing properties, stability, and solubility in flavonoids. J. Agric. Food Chem. 2014, 62, 3321-3333).
Znana jest metoda chemicznej syntezy 3-O-^-D-glukopiranozylo-3’,4’,5,7-tetrahydroksyflawonu przy wykorzystaniu soli potasowej kwercetyny (0,2 g) i acetobromoglukozy (0,4 g) jako substratów. Opisaną metodą otrzymuje się 25 mg izokwercetyny (Ice C. H., Wender S. H. The Synthesis of Isoquercitrin. CONTRIBUTION FROM THE DEPARTMENT OF CHEMISTRY OF THE UNIVERSITY OF OKLAHOMA. 1952; 74:4606).
Znana jest metoda otrzymywania izokwercetyny na drodze biotransformacji wykorzystując rutynę jako substrat i α-ramnozydazę uzyskaną z Aspergillus niger jako biokatalizator. W ciągu 4-godzinnej reakcji przereagowało 99% substratu (Chem F. Transformation of Rutin to Antiproliferative Quercetin3-glucoside by Aspergillus niger. J Agric Food Chem. 2010; 58:10886-92). Wykorzystując szczep Ba
PL 237 330 B1 cillus litoralis C44 w ciągu 72-godzinnej biotransformacji uzyskano izokwercetynę z ok. 10% wydajnością (stopień przereagowania rutyny wynosił 50,36%) (Lu Z, Wang J, Lin S, Zhang Y. Degradation of Rutin into Isoquercitrin by Bacillus litoralis strain C44. IOSR J Eng. 2012; 2(5):1154-61).
W ostatnich latach w leczeniu i prewencji chorób coraz większe znaczenie zyskują związki pochodzenia naturalnego i ich odpowiedniki uzyskane na drodze biotransformacji. Dlatego istotne jest poszukiwanie nowych sposobów wytwarzania związków aktywnych biologicznie, które mogą być wykorzystane w przemyśle farmaceutycznym, ale też kosmetycznym i spożywczym.
Istota wynalazku polega na tym, że do podłoża odpowiedniego dla grzybów strzępkowych wprowadza się szczep Isaria fumosorosea KCH J2. Po upływie co najmniej 72 godzin do hodowli wprowadza się substrat, którym jest 3,3’,4’,5,7-pentahydroksyflawon (kwercetyna) o wzorze 1, rozpuszczony w rozpuszczalniku organicznym mieszającym się z wodą. Transformację prowadzi się w temperaturze od 20 do 30 stopni Celsjusza, przy ciągłym wstrząsaniu co najmniej 96 godzin. Kolejno produkt ekstrahuje się rozpuszczalnikiem organicznym niemieszającym się z wodą i oczyszcza chromatograficznie.
Korzystnie jest, gdy stosunek masy dodawanego substratu do objętości hodowli wynosi 0,1 mg : 1 mL.
Korzystnie także jest, gdy proces prowadzi się w temperaturze 25 stopni Celsjusza.
Dodatkowo, korzystnie jest, gdy transformację prowadzi się przez 240 godzin.
Postępując zgodnie z wynalazkiem, w wyniku działania układu enzymatycznego zawartego w komórkach szczepu Isaria fumosorosea KCH J2, następuje przyłączenie ^-D-glukozy do C-3. Uzyskany w ten sposób produkt wydziela się z wodnej kultury mikroorganizmu, znanym sposobem, przez ekstrakcję rozpuszczalnikiem organicznym niemieszającym się z wodą (octan etylu).
Zasadniczą zaletą wynalazku jest otrzymanie 3- O-^-D-glukopiranozylo-3,’4’,5,7-tetrahydroksyflawonu w temperaturze pokojowej i przy pH naturalnym dla szczepu wykorzystując mikroorganizm niebędący patogenem ludzkim.
Wykorzystanie biotransformacji, zamiast syntezy chemicznej, umożliwia, w sposób przyjazny dla środowiska, uzyskanie związków o wyższej biodostępności i aktywności biologicznej, niż użyte substraty (E. Kostrzewa-Susłow, J. Dmochowska-Gładysz, J. Oszmiański, Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic, 2007, 49 (1-4), 113-117, W A. Loughlin, Bioresource Technology, 2000, 74, 49-62).
Wynalazek jest bliżej objaśniony na przykładzie wykonania.
P r z y k ł a d. Do kolby Erlenmajera o pojemności 2000 cm3, w której znajduje się 500 cm3 sterylnej pożywki zawierającej 10 g aminobaku i 30 g glukozy, wprowadza się szczep Isaria fumosorosea KCH J2 ujawniony w zgłoszeniu patentowym o numerze P.416996. Po 96 godzinach jego wzrostu dodaje się 50 mg 3,3’,4’,5,7-pentahydroksyflawonu (kwercetyny) o wzorze 1, rozpuszczonego w 1 cm3 tetrahydrofuranu. Transformację prowadzi się w 25 stopniach Celsjusza przy ciągłym wstrząsaniu przez 10 dni. Następnie mieszaninę poreakcyjną ekstrahuje się trzykrotnie octanem etylu, osusza bezwodnym siarczanem magnezu i odparowuje rozpuszczalnik. Otrzymany ekstrakt oczyszcza się chromatograficznie, używając jako eluentu mieszaniny chloroformu i metanolu w stosunku 9:1. 3-O-^-D-glukopiranozylo-3’,4’,5,7-tetrahydroksyflawon znajduje się we frakcji o wyższej polarności.
Na tej drodze otrzymuje się 9,3 mg 3-O-^-D-glukopiranozylo-3’,4’,5,7-tetrahydroksyflawonu (wydajność 12,1%). Stopień konwersji substratu według HPLC >99%.
Uzyskany produkt charakteryzuje się następującymi danymi spektralnymi.
Opis sygnałów pochodzących z widma 1H NMR (600 MHz, Aceton-d6): δ = 8,04 ppm (1H, d, J2’,6=2.1 Hz, H-2’); δ = 7,62 ppm (1H, dd, J6,5=8.4 Hz, J6,2=2.2 Hz, H-6’); δ = 6,99 ppm (1H, d, J5,6=8.4 Hz, H-5’); δ = 6,55 ppm (1H, d, J8,6=2.1 Hz, H-8); δ = 6,32 ppm (1H, d, J6,8=2.0 Hz, H-6); δ = 5,30 ppm (1H, d, J=7,4 Hz, H-1”); δ = 3,78 ppm (1H, d, J =10.7 Hz, H-6”a); δ = 3,64 ppm (1H, m, H-6”b); δ = 3,52 ppm (2H, m, C-2”, C-3”); δ = 3,44 ppm (1H, t, J= 8.8 Hz, H-4”); δ = 3,37 ppm (1H, m, H-5”).

Claims (4)

1. Sposób wytwarzania 3-O-^-D-glukopiranozylo-3’,4’,5,7-tetrahydroksyflawonu, znamienny tym, że do podłoża odpowiedniego dla grzybów strzępkowych wprowadza się szczep Isaria fumosorosea KCH J2, następnie po upływie co najmniej 72 godzin do hodowli wprowadza się substrat, którym jest 3,3’,4’,5,7-pentahydroksyflawon (kwercetyna) o wzorze 1, rozpuszczony w rozpuszczalniku organicznym mieszającym się z wodą, transformację prowadzi się w temperaturze od 20 do 30 stopni Celsjusza, przy ciągłym wstrząsaniu, co najmniej 96 godzin, po
PL 237 330 Β1 czym produkt ekstrahuje się rozpuszczalnikiem organicznym niemieszającym się z wodą i oczyszcza chromatograficznie.
2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosunek masy dodawanego substratu do objętości hodowli wynosi 0,1 mg : 1 mL.
3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że proces prowadzi się w temperaturze 25 stopni Celsjusza.
4. Sposób według zastrzeżenia 1, znamienny tym, że transformację prowadzi się przez 240 godzin.
PL424952A 2018-03-19 2018-03-19 Sposób wytwarzania 3-O-β-D-glukopiranozylo-3’,4’,5,7- tetrahydroksyflawonu PL237330B1 (pl)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL424952A PL237330B1 (pl) 2018-03-19 2018-03-19 Sposób wytwarzania 3-O-β-D-glukopiranozylo-3’,4’,5,7- tetrahydroksyflawonu

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL424952A PL237330B1 (pl) 2018-03-19 2018-03-19 Sposób wytwarzania 3-O-β-D-glukopiranozylo-3’,4’,5,7- tetrahydroksyflawonu

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL424952A1 PL424952A1 (pl) 2019-09-23
PL237330B1 true PL237330B1 (pl) 2021-04-06

Family

ID=67979702

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL424952A PL237330B1 (pl) 2018-03-19 2018-03-19 Sposób wytwarzania 3-O-β-D-glukopiranozylo-3’,4’,5,7- tetrahydroksyflawonu

Country Status (1)

Country Link
PL (1) PL237330B1 (pl)

Also Published As

Publication number Publication date
PL424952A1 (pl) 2019-09-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL246773B1 (pl) Sposób wytwarzania 3-hydroksy-2-metylo-2’-O-β-D-(4’’-Ometyloglukopiranozylo)- dihydrochalkonu
PL246768B1 (pl) Sposób wytwarzania 2’-hydroksy-2-metylo-3’-O-β-D-(4’’-Ometyloglukopiranozylo)- dihydrochalkonu
PL237330B1 (pl) Sposób wytwarzania 3-O-β-D-glukopiranozylo-3’,4’,5,7- tetrahydroksyflawonu
PL237327B1 (pl) 3’-hydroksy-4’-O-β-D-(4’’-O-metyloglukopiranozylo)-flawon i sposób wytwarzania 3’-hydroksy-4’-O-β-D-(4’’-O-metyloglukopiranozylo)- flawonu
PL238968B1 (pl) 2’-O-β-D-(4’’-O-metyloglukopiranozylo)-flawan-4-ol i sposób wytwarzania 2’-O-β-D-(4”-O-metyloglukopiranozylo)-flawan-4-olu
PL238969B1 (pl) 3’-O-β-D-(4”-O-metyloglukopiranozylo)-flawan-4-ol i sposób wytwarzania 3’-O-β-D-(4”-O-metyloglukopiranozylo)-flawan-4-olu
PL237329B1 (pl) 3-O-β-D-(4’’-O-metyloglukopiranozylo)-3’,4’,5,7-tetrahydroksyflawon i sposób wytwarzania 3-O-β-D-(4’’-O-metyloglukopiranozylo)- 3’,4’,5,7-tetrahydroksyflawonu
PL238785B1 (pl) Sposób wytwarzania 4’-hydroksy-6-O-β-D-(4”-O-metyloglukopiranozylo)- flawanonu
PL234610B1 (pl) Sposób wytwarzania 7-O-β-D-4"-metoksyglukopiranozyloflawanonu
PL241533B1 (pl) 2-Fenylo-6-metylo-4-O-β-D-(4’’-O-metyloglukopiranozylo)- chroman i sposób wytwarzania 2-fenylo-6-metylo-4-O-β-D-(4’’-Ometyloglukopiranozylo)- chromanu
PL237325B1 (pl) 2’-O-β-D-(4’’-O-metyloglukopiranozylo)-flawon i sposób wytwarzania 2’-O-β-D-(4’’-O-metyloglukopiranozylo)-flawonu
PL237326B1 (pl) 4’-O-β-D-(4’’-O-metyloglukopiranozylo)-flawon i sposób wytwarzania 4’-O-β-D-(4’’-O-metyloglukopiranozylo)-flawonu
PL237324B1 (pl) 5-hydroksy-4’-O-β-D-(4’’-O-metyloglukopiranozylo)-flawon i sposób wytwarzania 5-hydroksy-4’-O-β-D-(4’’-O-metyloglukopiranozylo)- flawonu
PL235025B1 (pl) 4’-O-β-D-(4’’-O-metyloglukopiranozylo)-3-metoksyflawon i sposób wytwarzania 4’-O-β-D-(4’’-O-metyloglukopiranozylo)-3- metoksyflawonu
PL237708B1 (pl) 3’-Hydroksy-4’-O-β-D-(4”-O-metyloglukopiranozylo)-flawanon i sposób wytwarzania 3’-hydroksy-4’-O-β-D-(4”-O-metyloglukopiranozylo)- flawanonu
PL237704B1 (pl) 6-Metoksy-4’-O-β-D-(4”-O-metyloglukopiranozylo)-flawon i sposób wytwarzania 6-metoksy-4’-O-β-D-(4”-O-metyloglukopiranozylo)- flawonu
PL237705B1 (pl) 3’-Hydroksy-6-metoksy-4’-O-β-D-(4”-O-metyloglukopiranozylo)- flawon i sposób wytwarzania 3’-hydroksy-6-metoksy- 4’-O-β-D-(4”-O-metyloglukopiranozylo)-flawonu
PL237333B1 (pl) 8-hydroksy-7-O-β-D-(4’’-O-metyloglukopiranozylo)-flawon i sposób wytwarzania 8-hydroksy-7-O-β-D-(4’’-O-metyloglukopiranozylo)- flawonu
PL237706B1 (pl) 3’-Hydroksy-6-metoksy-4’-O-β-D-(4”-O-metyloglukopiranozylo)- flawanon i sposób wytwarzania 3’-hydroksy-6- metoksy-4’-O-β-D-(4”-O-metyloglukopiranozylo)-flawanonu
PL237702B1 (pl) 3’-Hydroksy-6-O-β-D-(4”-O-metyloglukopiranozylo)-flawanon i sposób wytwarzania 3’-hydroksy-6-O-β-D-(4”-O-metyloglukopiranozylo)- flawanonu
PL237707B1 (pl) 6-Metoksy-4’-O-β-D-(4”-O-metyloglukopiranozylo)-flawanon i sposób wytwarzania 6-metoksy-4’-O-β-D-(4”-O-metyloglukopiranozylo)- flawanonu
PL237701B1 (pl) 2’-Metoksy-5’-O-β-D-(4”-O-metyloglukopiranozylo)-flawanon i sposób wytwarzania 2’-metoksy-5’-O-β-D-(4”-O-metyloglukopiranozylo)- flawanonu
PL238534B1 (pl) Sposób wytwarzania 4’-O-β-D-(4”-O-metyloglukopiranozylo)- flawanonu
PL237703B1 (pl) 6-Metoksy-3’-O-β-D-(4’’-O-metyloglukopiranozylo)-flawon i sposób wytwarzania 6-metoksy-3’-O-β-D-(4’’-O-metyloglukopiranozylo)- flawonu
PL238533B1 (pl) Sposób wytwarzania 3’,4’-dihydroksy-6-O-β-D-(4”-O-metyloglukopiranozylo)- flawanonu