PL228645B1 - Bromki 1,4-ditlenku-3- podstawionych pochodnych 1,2,4-benzo triazyny oraz sposób ich otrzymywania oraz ich zastosowanie - Google Patents

Abstract

Ujawniono bromki 1,4-ditlenku-3-podstawionych pochodnych-1,2,4-benzotriazyny, o wzorze ogólnym 1, gdzie X oznacza podstawnik alifatyczny odpowiednio etyl, butyl, heksyl, oktyl, dodecyl oraz sposób ich otrzymywania. Związki o wzorze ogólnym 1, otrzymuje się w reakcji utleniania odpowiednich bromków 1-tlenku-3-podstawionych pochodnych-1,2,4-benzotriazyny w wyniku reakcji utleniania 30% nadtlenkiem wodoru. Reakcję prowadzi się w środowisku lodowatego kwasu octowego początkowo w temperaturze 50 °C, a następnie w temperaturze pokojowej przez 9 - 10 godzin. Po zakończeniu reakcji, wytrącony osad krystalizuje się korzystnie z propan-2-olu. Bromki 1-tlenku-3-podstawionych pochodnych-1,2,4-benzotriazyny o wzorze ogólnym 1, do zastosowania w leczeniu chorób nowotworowych, a zwłaszcza raka żołądka.

Description

(12)OPIS PATENTOWY ₍i₉₎PL ₍n)228645 (13) B1 (51) Int.CI.

(21) Numer zgłoszenia: 410676 C07F 9/6521 (2006.01)

A61K 31/675 (2006.01) A61P 35/00 (2006.01) (22) Data zgłoszenia: 19.12.2014

Bromki 1,4-ditlenku-3-podstawionych pochodnych 1,2,4-benzotriazyny oraz sposób ich otrzymywania oraz ich zastosowanie (73) Uprawniony z patentu:

UNIWERSYTET MEDYCZNY W LUBLINIE, Lublin, PL (43) Zgłoszenie ogłoszono:

20.06.2016 BUP 13/16 (45) O udzieleniu patentu ogłoszono:

30.04.2018 WUP 04/18 (72) Twórca(y) wynalazku:

MARZENA RZĄDKOWSKA, Lublin, PL ELŻBIETA SZACOŃ, Lublin, PL DARIUSZ MATOSIUK, Lublin, PL JAROSŁAW DUDKA, Lublin, PL MAGDALENA IWAN, Wola Puławska, PL AGNIESZKA KORGA, Łuszczów Drugi, PL (74) Pełnomocnik:

rzecz, pat. Anna Bełz m

co oo

CM

CM

Q_

PL 228 645 B1

Opis wynalazku

Przedmiotem wynalazku są bromki 1,4-ditlenku-3-podstawionych pochodnych 1,2,4-benzotriazyny, o wzorze ogólnym 1, gdzie X oznacza podstawnik alifatyczny odpowiednio etyl, butyl, heksyl, oktyl, dodecyl oraz sposób ich otrzymywania i ich zastosowanie.

W znanym stanie techniki opisany jest układ heterocykliczny 1-tlenku-1,2,4-benzotriazyny zawierający w pozycji 3 grupę aminową [Fuchs T.D. et al. J. Org. Chem. 2001, 107-114].

Będące przedmiotem wynalazku nowe związki stanowią bromki 1,4-ditlenku-3-(2-trifenylofosfinoalkiloamino)-1,2,4-benzotriazyny o wzorze ogólnym 1, gdzie X ma wyżej podane znaczenie.

Sposób otrzymywania związków o wzorze ogólnym 1, gdzie X ma wyżej podane znaczenie polega na tym, że odpowiednie bromki 1-tlenku-3-(2-trifenylofosfinoalkiloamino)-1,2,4-benzotriazyny o wzorze ogólnym 2, gdzie X ma wyżej podane znaczenie poddaje się reakcji utleniania 30% nadtlenkiem wodoru. Reakcję prowadzi się w środowisku lodowatego kwasu octowego początkowo w temperaturze 50°C, a następnie w temperaturze pokojowej przez 7-10 godzin. Po zakończeniu reakcji, wytrącony osad krystalizuje się korzystnie z propan-2-olu.

Związki o wzorze ogólnym 1, gdzie X oznacza podstawnik alifatyczny odpowiednio etyl, butyl, heksyl, oktyl, dodecyl nadają się do zastosowania w leczeniu chorób nowotworowych, a zwłaszcza raka żołądka.

Korzystnie, gdy wydzielony osad oczyszcza się przez krystalizację z rozpuszczalnika polarnego propan-2-olu lub mieszaniny metanol:propan-2-ol w stosunku 1:1.

Otrzymane według wynalazku związki były poddane ocenie cytotoksyczności w stosunku do komórek nowotworowych. Badania prowadzono w warunkach hipoksji i normoksji przez 24 i 48 h na linie komórek raka żołądka linie te oznaczone są symbolami MKN74, MKN78, MKN7.

Substraty stosowane w sposobie otrzymywania przedstawione w sposobie otrzymywania związków o wzorze 1 w przedmiotowym zgłoszeniu P-410676- odpowiednie bromki 1-tlenku-3(2-trifenylofosfinoalkiloamino)-1,2,4-benzotriazyny i sposób ich otrzymywania przedstawione są w polskim zgłoszeniu wynalazku P-410675.

P r z y k ł a d 1: W kolbie trójszyjnej o pojemności 100 cm³, zaopatrzonej w chłodnicę zwrotną i mieszadło umieszczono 2.65 g (5 mmoli) bromek 1-tlenku-3-(2-trifenylofosfinoalkiloamino)-1,2,4-benzotriazyny oraz 54 cm³ lodowatego kwasu octowego i ogrzano do temperatury 50°C. Następnie powoli wkroplono 26.87 cm³ 30% nadtlenku wodoru. Zawartość kolby mieszano przez 9-10 godzin w temperaturze pokojowej. W ciągu 24 h dodano dwie dodatkowe porcje 30% nadtlenek wodoru (6.71 cm³). Po tym czasie wypadł osad bromku 1,4-ditlenku-3-(2-trifenylofosfinoetyloamino)-1,2,4-benzotriazyny o wzorze ogólnym 1. Otrzymany osad bromku 1,4-ditlenku-3-(2-trifenylofosfinoetyloamino)benzotriazyny oczyszczono przez krystalizację z propan-2-olu.

Otrzymano 0.82 g (30% wydajności) osadu o t.t. 135-136°C

Analiza elementarna dla wzoru C27H24BrN4O2P (m.cz. 547.42) obliczono: %C = 59.24 %H = 4.60 %N = 10.24 oznaczono: %C = 59.38 %H = 4.81 %N = 10.32 Widmo ¹H NMR ( DMSO-d6, δ, ppm)

9.31 (s, 1H, NH), 7.01-7.51 (m, 19H, H-Ar), 1.48-1,70 (m, 4H, CH2),

Dane fizykochemiczne pozostałych bromków 1,4-ditlenku-3-podstawionych pochodnych 1,2,4-benzotriazyny zamieszczono w Tabeli Nr 1.

Otrzymane według wynalazku związki bromki 1,4-ditlenku-3-podstawionych pochodnych-1,2,4-benzotriazyny, o wzorze ogólnym 1 były przebadane pod kątem cytotoksyczności na wybranych liniach nowotworowych. Badania prowadzono w normoksji i dwóch stanach hipoksji 50% i 90% przez 24 i 48 h na liniach komórek raka żołądka. Badane związki testowano w odpowiednich stężeniach 100 μM, 50 μM, 25 μ^ 10 μ^ 5 μM.

Działanie związków na komórki oceniono przy użyciu mikroskopu kontrastowo-fazowego z odwróconą optyką. Uwzględniono zmiany morfologiczne komórek tj. obecność odklejonych i martwych komórek, obkurczanie komórek, zahamowanie wzrostu i proliferacji. Obserwację porównywano z kontrolą. Następnie w teście MTT określono żywotność komórek poprzez pomiar ich aktywności metabolicznej. Z otrzymanych danych wyliczono % żywotność komórek w obecności badanego związku, przyjmując absorpcję roztworu komórek kontrolnych za 100%.

PL 228 645 Β1

Wyniki badań przedstawiono w tabelach. Wyniki badań bromku 1,4-ditlenku-3-(2-trifenylofosfinoetyloamino)-1,2,4-benzotriazyny w Tabeli Nr 2 i 3; bromek 1,4-ditlenku-3-(2-trifenylofosfinobutyloamino)-1,2,4-benzotriazyny w Tabeli Nr 4 i 5.

W wyniku badań stwierdzono, że związki według wynalazku wykazują potencjalną aktywność przeciwnowotworową i mogą mieć zastosowanie w leczeniu, a zwłaszcza w raku żołądka.

Tabela Nr 1 Dane fizykochemiczne otrzymanych bromków 1,4-ditlenku-3-podstawionych pochodnych 1,2,4-benzotriazyny.

Lp	X	Wzór sumar. Masa cząst.	Wyd. [%] t.topn.[ °C]	Widma Ή NMR (8, ppm, DMSO-dó)
C	H	N
1.	(CH2)4	CzyFhsBrNłChP 575.47	36 142-143	60.53 60.48	5,08 5.19	9.74 9.86	9.15 (s, 1H, NH), 6.98-7.49 (m, 19H, H-Ar), 1.32-1.60 (m,8H, CII2)
2.	(CH2)ó	C3iH32BrN4O2P 603.50	41 159-160	61.66 61.71	5.34 5.50	9.28 9.34	9.02 (s, 1H, NH), 7.09-7.63 (m, 19H, H-Ar), 1.44-1.68 (m, 12H, CH2)
3.	(CH2)8	C33H36BrN4O2P 631.56	34 198-199	62.75 62.90	5.74 5.89	8.87 8.67	9.36 (s, ΙΗ,ΝΗ), 7.16-7.65 (m, 19H, H-Ar), 1.39-1.55 (m, 16H, CH2)
4.	(CH2)io	C35H4oBrN402P 659.68	42 210-212	63.72 63.83	6.11 6.16	8.49 8.60	8.97 (s, ΙΗ,ΝΗ), 9.31-7.85 (m, 19H, H-Ar), 1,49-1.63 (m, 20H, CII2)

PL 228 645 B1

Tabela Nr 2 Wyniki badań farmakologicznych bromku 1,4-ditlenku-3-(2-trifenylofosfinoetyloamino)-1,2,4-benzotriazyny.

t z S	s i® * 0\	-H	+ +	+	> N ί^Ί T. -T t\ <O <N — UD so ri O· 5C — OO Os θ' oo Os	— xr o — n r~ Os 0s o^ Os
TO 4= 'ói1 -a: 'Τ' O ·,.& Cl c X ud	Ψ	+ +	+ + +	— ud oO 00 — rj πγ sd νγ r^ Tt O> Os” -t” rr rD ud so oo
to oo £ tt o 2	+ 4-	+ + +	+	r~ Os SO OO τ}· UD O O s© rr tt” 00 os- oc o UD s© oo O —	CD SO D- os CD OO OO OO OO Os
« _c tfł1 '’Τ rt 2.^ s S	+	+	+ +	s© TT o cs ~ ud —oo s© os 5© s© cd i> ud r- o* so oo oo	o ud -e o so — Os θ' — Os Os
TO 4= 'i?-T 4Z <n O <3 Cł. 5“ o U, V)	+ +	+ +	+ + +	oo Ό r- oo — rD —r —~ oo ri o s© ri — τΤ \© s© s© Oo
TO 1# c o Z	+ +	4-	i	rr — rl — O O 's© cD —-T UD cd tt s© UD SO 00 00 00	os UD —· Γ- C4 00 Os θ' OS >
MKN74	w? 00 O x® .e-g X Os	+	+	+	CN — SD CN sO SD cD CO TT 90 OO OO 00 Os 00	sd τ ··© m C9 oo oo oo Os Os
n jz J1 g.£ UC o >J_ UD	+	+ +	+ +	CD r~. tj- — so tt oO cl Os O ud o TO O so r— s© oo —	·ν® X® cc· ęs ς ' q>, CD O θ' Tl- t— oo θ' oo r- oo
TO *o -C C ©O C O 2	+	+	+	Ό O — t)· cD UD s© CD SO CO o- © — D- Os © ~ r- so tt —	o -T -Γ n rt Φ θ' O OO OS —
« £”* ri O <p O. o- X Os	+	+	+	cd ud O r- co ©Ό n m n OS CD o o co r- oo Os O\ co	OOMDiD — r- i> r> oo os
TO 4= ‘gz O s.o Cu©' ' — o X ud	+	+	+	r- CD O O UD rt «— so ri, cn cn © ud τΤ m SO 00 Os Os r-	SO UD OO UD 00 Os Os 00 05 00
TO ’Ελ1 1 c Z	+		+	η τ o>. oo π — cd r- oo oo** CDOUD© so 00 OS Os —	CD 00 ©O θ' UD OO OO OO 00 oo
3 o c = 1 o C -T Ξ o *CJ = SD w — Z Ę fc- e ‘ΰ V U “ - E T o H β d £-. c L i ©· U Δ ID D -3	Rodzaj wykonanych testów	CJ *3 s c -g to e 2 £	Komórki obkurczone	Zahamowa ny wzrost i proliferacja	P s s IsΞ s5 v? o 3. —- Λ U o o ID O -*- c—’ — u-s rf — ud	u 2 c-2 tJ £ o A =Ł IZ •D O O O UD O =- :—1 — u-, rJ — sn
Morfologia	Żywotność %

+++ - ponad 50%, ++ - 25%, + - 10%

PL 228 645 Β1 o

N c

Φ _Q

C\f

E ω

_o

-I—»

Φ o

c

M— ω

o

M— _O có =3

C _Φ

O) o

o ω

ω

Ό ω

_Ω ’c

Φ .Ω

CS — —, s 5 5 ε '£

Ιέ S S Σ2&Ϊ

Tt

O'

O

O 'ίΛ* c

c.

TT £

o o

Cl o

'u?

O

O.

-=r ci x

ο>

O

Jai

Φ

[X

VCpq

Tf

S o -α Λ o ^uj di s 2 — '2 >·. « £ Έ t

rt c ϋ

c o

N £

-O o

-l· c ·

P3 £

O

E cj

Έ

N

Morfologia f- — <N — 00 o i—' oi ©o rrt — i> o’ r-f r- ό σ·* oo σ* <?\ tj

ΙΛ, kTi > l·- (? °8-. *r? 'Ą. r. X <o o r- Tt o 0φ — θ'- 00 *r-1 c un en os c>

\o

Tj O Γ~- θ'. O r-~ στ oo ™ co o Ί fN θ' <7 ’ί

Άι C Cl J' vk oo <T o o

O*» Q\ o. — —·

OO <N 00 O\ cn tJ °ę, ”1.

o< Tt —' un oC \O oo <0 O. Cs

O> κι O· rO O © oo » » x C τ m 50 O Os oo ch _o i =L Σ3.5 o o »n o - ιλ n ™ in

Żywotność %

- ponad 50%

- 25%

- 10%

PL 228 645 Β1

Ν ω

Μ—<

Ο

Ν

C

Φ _Ω c\i

Ε ω

_ο

Μ—<

=3 _Ω

Ο

C

Μ— (Λ £

_Ο có =3 c

_Φ σ>

ο ο

ω ω

Ό ω

_Ω ’c >»

Φ ,Ω

- ponad 50%

- 25%

- 10%

PL 228 645 Β1

V.	oo	©\	’Τ	Ό σ-
oo		’-ζ.	o_	ri
o	sC	VI	ri	ν·
r-	00	σ-	©s	Μ

ο

Ν

C φ

Ω c\i

Ε ω

_ο =3 _Ω

Ο

Ο

Μ— _Ο có =3 c

Φ σι _o o

ω

E ω

Ό ω

_Ω ’c

Φ .Ω (U je oo

T ss o

l/ł o

ε o

Z

4=

Tt

CM £

O

o.

£ o

1/1

Λ 4=

Ja* cm o

o.

O ε

— o

z c

Λ >.

Ϊ « N , o . o ai .

t-	m	o		-rf
	in	en	00^	w
Tf	©\		en	rn
00	©\	00	©s	©1

\© — o oo r- ® i—·

Ϊ 2 £ r Ό s ε S J§

L·

-o o s o N W U <= 3

W Λ fi

C3 w > 75 > β

-rr ir, r- rσ' in en oo os ©»

R·!	ΓΜ	CM	CM	IZ>
00		S©	S©	®
00	ri	CM	ri	CS
r-	©\	Cs	Cs	00

® os σ> ci m oo oo^ ® ©γ en rn ©Γ so cm v? r- ifi cc θ' Φ

	r-	CM	CM	oe
UT	CM		SO	00
	00	CS	©Γ	ri
Cs	Γ-	Cs	00	oo

Λ

SI

Morfologia

Is S S s = — =4

O O 1/1 o ^Ł Τ—I 1/1 CM — V)

Żywotność %

- ponad 50%

- 25%

- 10%

-J- + zp + + +

PL 228 645 Β1

Claims (5)

1. Zastrzeżenia patentowe

   1. Bromki 1,4-ditlenku-3-podstawionych pochodnych-1,2,4-benzotriazyny, o wzorze ogólnym 1, gdzie X oznacza podstawnik alifatyczny odpowiednio etyl, butyl, heksyl, oktyl, dodecyl.
2. 2. Sposób wytwarzania związków o wzorze ogólnym 1 określonych w zastrzeżeniu 1, znamienny tym, że odpowiednie bromki 1-tlenku-3-podstawionych pochodnych- 1,2,4-benzotriazyny o wzorze ogólnym 2, gdzie X ma znaczenie jak określono powyżej, poddaje się reakcji utleniania 30% nadtlenkiem wodoru, reakcję prowadzi się w środowisku lodowatego kwasu octowego początkowo w temperaturze 50°C, a następnie w temperaturze pokojowej przez 9-10 godzin, po czym po zakończeniu reakcji, wytrącony osad krystalizuje się korzystnie z propan-2-olu.
3. 3. Sposób według zastrzeż. 2, znamienny tym, że wydzielony osad oczyszcza się przez krystalizację z rozpuszczalnika polarnego propan-2-olu lub mieszaniny metanol:propan-2-ol w stosunku 1:1.
4. 4. Bromki o wzorze ogólnym 1, określone w zastrzeżeniu 1 do zastosowania w leczeniu chorób nowotworowych.
5. 5. Bromki według zastrz. 4 do zastosowania w leczeniu raka żołądka.

   Rysunki