PL222830B1 - Preparat kosmetyczny zawierający diosgeninę i sukralfat, zastosowanie tego preparatu kosmetycznego oraz sposób ochrony skóry przed procesem starzenia wewnątrzpochodnego - Google Patents

Description

Opis wynalazku

Przedmiotem wynalazku jest preparat kosmetyczny zawierający diosgeninę i sukralfat, zastosowanie tego preparatu kosmetycznego oraz sposób ochrony skóry przed procesem starzenia wewnątrzpochodnego.

Starzenie się jest procesem naturalnym dotyczącym w różnym stopniu wszystkich organów naszego ciała. Jest to zespół zmian postępujących w czasie, które polegają na zmniejszeniu biologicznej aktywności komórek, spowolnieniu procesów regeneracyjnych, obniżeniu odporności i odpowiedzi na stres oraz obniżeniu właściwości adaptacyjnych organizmu. Zmiany zachodzące w skórze są wypadkową dwóch głównych procesów: starzenia wewnątrzpochodnego - czyli procesu związanego z mechanizmami wrodzonymi oraz starzenia zewnątrzpochodnego, czyli procesu uwarunkowanego wpływem środowiska zewnętrznego.

W wyniku starzenia wewnątrzpochodnego w skórze człowieka zachodzą procesy, których m echanizm nie jest do końca poznany. Wpływa na nie szereg czynników genetycznych, hormonalnych oraz środowiskowych, które powodują zmiany we wszystkich warstwach skóry (naskórku, skórze właściwej oraz tkance podskórnej). Zmiany zachodzące w naskórku to:

• zanik warstwy kolczystej i ziarnistej oraz ścieńczenie warstwy komórek podstawnych, • spadek liczby komórek Langerhansa (skutkuje zaburzeniami odporności), • zmniejszenie liczby melanocytów i tworzenie się ich skupisk (zaburzenia pigmentacji), • redukcja liczby gruczołów potowych (prowadzi do wysuszenia skóry), • negatywne zmiany w obrębie lipidów naskórka oraz składników NMF (prowadzą do nasilenia suchości skóry, a także jej odwodnienia), • zwiększona wrażliwość na działanie czynników zewnętrznych (np. mydeł, detergentów, promieniowania UV), • spadek zdolności do hamowania przeznaskórkowej utraty wody (TEWL), • zmniejszenie syntezy witaminy D3, • spłaszczenie granicy między naskórkiem a skórą właściwą, • zanik filamentów i włókien zakotwiczających warstwę podstawną.

Zmiany w obrębie skóry właściwej obejmują natomiast:

• zaburzenia w budowie (degeneracja oraz wzrost sztywności włókien podporowych a także spadek gęstości ich ułożenia), • zmniejszenie ilości włókien kolagenu (głównie typu III, w mniejszym stopniu typu I), • zmniejszenie ilości włókien elastycznych, • zmniejszenie metabolicznej aktywności fibroblastów, • zmiany w obrębie macierzy zewnątrzkomórkowej (zmniejszenie ilości proteoglikanów, glik ozaminoglikanów - w tym kwasu hialuronowego), • zmniejszenie liczby mastocytów, • redukcję liczby naczyń włosowatych i zaburzenia mikrokrążenia, • zmniejszenie gęstości włosów oraz spadek ilości barwnika we włosach (1), (B. Raszeja-Kotelba. M. Wilk, K. Zakrzewska, Z. Adamski. Dermatologia dla kosmetologów. Poznań : Wydawnictwo Naukowe Uniwersytetu Medycznego im. Karola Marcinkowskiego w Poznaniu, 2008. (73-74)).

Na proces starzenia ogromny wpływ ma także gospodarka hormonalna. Po 50 roku życia obniżeniu ulega funkcja gruczołów wydzielania wewnętrznego, co przejawia się w formie menopauzy, andropauzy, adrenopauzy lub somatopauzy. U kobiet w okresie menopauzy w wyniku zaburzeń hormonalnych i braku pobudzania receptorów estrogenowych w obrębie skóry twarzy nie następuje pobudzenie fibroblastów i dochodzi do obniżenia stężenia glikozaminoglikanów, zwłaszcza odpowiedzialnego za optymalne nawilżenie kwasu hialuronowego. Spłaszczeniu ulega granica skórno-naskórkowa w wyniku zmniejszenia ilości kolagenu IV i VII, co prowadzi do gorszego odżywienia naskórka. Konsekwencją zaburzeń hormonalnych jest zahamowanie produkcji kolagenu, elastyny, kwasu hialuronowego, a także spowolnienie różnicowania i regeneracji keratynocytów. Ścieńczeniu ulegają wszystkie warstwy naskórka, a komórki dzielą się wolniej i luźniej przylegają do siebie. Zaburzenia te doprowadzają do obniżenia ilości ziaren keratohialinowych oraz lipidów, co wpływa na skład płaszcza ochronnego naskórka. Stwierdzono, że ilość lipidów spada aż o 57%. Zatem brak pobudzenia estrogenowego receptorów nie tylko zwiększa deficyt wody w naskórku, ale również zmniejsza stopień jej nawilżenia oraz nasila procesy starzenia się skóry. Zaburzenia bariery naskórkowej zwiękPL 222 830 B1 szają skłonność do zmian wypryskowych i podrażnień. Dodatkowo zwiększa się liczba komórek zapalnych i wolnych rodników, które nasilają procesy degeneracyjne.

Głównym objawem klinicznym okresu menopauzy jest tzw. zmniejszenie gęstości skóry. Skóra staje się cienka, mało elastyczna, wiotka, pojawiają się na niej bruzdy oraz zmarszczki. Zmienia się owal twarzy, a skóra staje się sucha, łuszcząca, z przebarwieniami i teleangiektazjami o zwiększonej wrażliwości na działanie czynników zewnętrznych.

Fitoestrogeny to grupa niesteroidowych związków pochodzenia roślinnego o budowie i funkcji podobnej do naturalnych estrogenów. Fitoestrogeny szczególnie korzystnie wpływają na zdrowie k obiet w okresie menopauzy, ze względu na ich wyjątkowe powinowactwo do receptorów estrogenowych. Dzięki temu w znacznym stopniu zastępują działanie naturalnych estrogenów.

Fitoestrogeny stosowane są w kosmetologii, gdzie wykorzystywane jest ich działanie przeciwrodnikowe. Substancje te neutralizują rodnik nadtlenkowy utleniający białka i fosfolipidy błon komórkowych. Reaktywne formy tlenu, powstając w reakcjach wolnorodnikowych w skórze mogą wpływać na uszkodzenie fibroblastów, odpowiedzialnych za produkcję włókien kolagenowych. Takie uszkodzenie może powodować spadek produkcji kolagenu i wytwarzanie kolagenu nieprawidłowego. Przeszkody w syntezie i odnawianiu kolagenu są jedną z przyczyn tworzenia się zmarszczek. Drugim istotnym elementem skóry właściwej są włókna elastyczne. Fitoestrogeny wpływają hamująco na nadmierny rozpad włókien elastycznych poprzez hamujący wpływ na rozkładający je enzym - elastazę. Uszkodzenie włókien kolagenowych i elastycznych może przyczyniać się do szybszego powstawania zmarszczek i mniejszej elastyczności skóry. Fitoestrogeny działają również przeciwzapalnie poprzez zahamowanie produkcji IL-1 i IL-6. Dodatkowo pobudzają fibroblasty do produkcji kolagenu i kwasu hialuronowego (H. Rotsztejn, Znaczenie fitoestrogenów w świetle obecnej wiedzy. PRZEGLĄD MENOPAUZALNY 4/2005, 47-50; B. Zegarska, M. Wożniak, Gerontologia Polska, 2006, tom 14, nr 4, 153-159; B. Zegarska, Dermatologia Estetyczna 2013, tom 15 nr 1, Skóra w menopauzie i kosmaceutyki nowej generacji).

Diosgenina to sterydowy hormon roślinny, wykazujący strukturalne podobieństwo do dehydroepiandrosteronu (DHEA). W warunkach laboratoryjnych można przeprowadzić proces przekształcenia jej w dehydroepiandrosteron. Diosgenina jest składnikiem ekstraktu z korzeni dzikiego pochrzynu (Wild Yam, Dioscorea villosa). Stosowanie wyciągu z korzenia dzikiego pochrzynu jako środka zwiększającego zasoby energii i regenerującego ma swoją długą tradycję w Ameryce Południowej, a obecnie ekstrakt taki stosuje się także w Europie. Diosgenina prawdopodobnie pełni funkcje regulacyjne w komórkach, hamując procesy związane ze starzeniem. Jej ochronne działanie sprzyja utrzymaniu właściwego nawilżenia oraz elastyczności i napięcia skóry. Pobudza produkcję łoju, zwiększa grubość naskórka. Ekstrakt z Dioscorea villosa ma także działanie przeciwzapalne, ochronne, naprawcze i regulacyjne, zwiększające odporność komórek na stres.

Sukralfat (uwodniona sól glinowa ośmiosiarczanu sacharozy) jest stosowana przede wszystkim w lekach o działaniu osłaniającym błonę śluzową żołądka. Uniemożliwia on wsteczną dyfuzję jonów wodorowych przez tworzenie silnie spolaryzowanych cząsteczek o dużym powinowactwie do białek w wysiękach zapalnych. Wiąże pepsynę i kwasy żółciowe. Działa głównie miejscowo, chroniąc niszę wrzodową przed działaniem kwasu solnego, pepsyny i kwasów żółciowych. Sukralfat wpływa także na wytwarzanie endogennych prostaglandyn, śluzu i wodorowęglanów.

Początkowo stosowany w leczeniu wrzodów żołądka i dwunastnicy, obecnie sukralfat jest zal ecany do pielęgnacji skóry w przypadku jej podrażnienia, ponieważ sprzyja regeneracji naskórka. Sukralfat przywraca komfort, łagodzi (Brian K Yeh i in. Structural Basis for Activation of Fibroblast Growth Factor Signaling by Sucrose Octasulfate. Molecular and Cellular Biology, October 2002, str. 71847192, tom 22, nr. 20.). Sukralfat znajduje zastosowanie w kremach pielęgnacyjnych i leczniczych np.

• ZINALFAT Pierre Fabre, w którym występuje łącznie z tlenkiem cynku, siarczanem cynku i alantoiną;

• AVENE MEN - nawilżający i kojący balsam po goleniu do skóry suchej, w którym sukralfat występuje w połączeniu z triklosanem i bisabololem;

• Avene CICALFATE - antybakteryjny krem gojący, w którym sukralfat występuje w połączeniu z siarczanem miedzi, siarczanem cynku i tlenkiem cynku;

• Koenzym Q10 Krem regeneracyjno-nawilżający na dzień, Producent: Jemo-Pharm, w którym sukralfat występuje w połączeniu z koenzymem Q10, wit. E i alantoiną.

Produkty z sukralfatem mogą być stosowane na podrażnioną skórę po zabiegach z zakresu dermatologii estetycznej, laserowej lub chirurgicznej oraz po depilacji.

PL 222 830 B1

Sukralfat stosowany jest w postaci mikronizowanych proszków o granulacji (d50) 30-40 mikronów oraz 4 mikrony, a także w postaci wodnej zawiesiny zawierającej 8-13% mikronizowanego sukralfatu o granulacji (d50) od 4 do 6 mikronów.

Jakkolwiek znanych jest szereg preparatów przeznaczonych do profilaktyki i leczenia starzenia się skóry, to nadal istnieje potrzeba opracowania skutecznych środków do ochrony skóry i spowolnienia procesów starzenia wewnątrzpochodnego.

Spółka Laboratorium Kosmetyczne Dr Irena Eris Sp. z o.o. od lat zajmuje się nie tylko wytwarzaniem kosmetyków do stosowania zarówno przez salony kosmetyczne jak i do stosowania osobistego, ale także prowadzi sieć salonów kosmetycznych oraz salonów SPA, w których oferuje szeroką gamę zabiegów z użyciem tych kosmetyków.

Wynalazek dotyczy preparatu kosmetycznego zawierającego substancję czynną oraz kosmetycznie dopuszczalne zaróbki, nośniki i substancje dodatkowe, który to preparat jako substancję czynną zawiera diosgeninę i sukralfat w synergicznie skutecznej ilości od 1:5 do 1:80.

Korzystny jest preparat kosmetyczny, który zawiera diosgeninę i sukralfat w proporcji korzystniej od 1:10 do 1:40. a zwłaszcza 1:21.

Korzystniejszy jest preparat kosmetyczny, który zawiera diosgeninę w ilości od 0,0001% do 0,1% wagowych, w przeliczeniu na całość preparatu i sukralfat w ilości od 0,001% do 1% wagowych, w przeliczeniu na całość preparatu.

Najkorzystniejszy jest preparat kosmetyczny, który zawiera diosgeninę w postaci ekstraktu z Dioscorea villosa.

Korzystnie preparat kosmetyczny jest w postaci kremu, balsamu, logionu, aerozolu, fluidu, korektora, emulsji W/O, toniku, żeli myjących, szamponów, pianek, a także mleczek, galaretek, past, maści, plastrów i systemów transdermalnych.

Wynalazek dotyczy także preparatu kosmetycznego zdefiniowanego powyżej do zastosowania w spowalnianiu, przeciwdziałaniu i zapobieganiu procesowi starzenia wewnątrzpochodnego.

Korzystny jest preparat kosmetyczny do zastosowania w ochronie skóry przed jej starzeniem związanym ze zmianami hormonalnymi.

Korzystniejszy jest preparat kosmetyczny do zastosowania w pielęgnacji skóry cienkiej, starzejącej się, przesuszonej, suchej, łuszczącej się, odwodnionej, wrażliwej, z wyraźnymi bruzdami i zmarszczkami, ścieńczonym naskórkiem, wiotkiej, z obniżoną elastycznością, przebarwieniami i teleangieklazjami, o zwiększonej wrażliwości na działanie czynników zewnętrznych.

Wynalazek dotyczy ponadto sposobu kosmetycznego spowalniania, przeciwdziałania, zapobiegania procesowi starzenia wewnątrzpochodnego skóry polegającego na tym, że skórę traktuje się skuteczną ilością preparatu kosmetycznego zdefiniowanego powyżej.

Wynalazek stanowi zatem mieszanina kosmetyczna, która spowalnia procesy starzenia wewnątrzpochodnego, a w szczególności starzenia związanego ze zmianami hormonalnymi, tzw. starzenia hormonalnego. Preparat według wynalazku znajduje zastosowanie w pielęgnacji skóry cienkiej, starzejącej się, przesuszonej, suchej, łuszczącej się, odwodnionej, wrażliwej, z wyraźnymi bruzdami i zmarszczkami, ścieńczonym naskórkiem, wiotkiej, z obniżoną elastycznością, przebarwieniami i teleangiektazjami, o zwiększonej wrażliwości na działanie czynników zewnętrznych.

Preparat kosmetyczny według wynalazku wykazuje liczne zalety na tle znanych ze stanu techniki preparatów.

Z uwagi na synergiczne działanie składników możliwe jest użycie w preparacie mniejszej ilości diosgeniny i sukralfatu, a więc zmniejszenie prawdopodobieństwa wystąpienia nietolerancji, takich jak reakcja podrażnienia czy alergia.

Mieszaninę diosgeniny i sukralfatu można podawać w połączeniu z kosmetycznie dopuszczalnymi nośnikami lub rozcieńczalnikami w wielu różnych postaciach dawkowanych do stosowania miejscowo. Można je łączyć z wieloma różnymi kosmetycznie dopuszczalnymi, chemicznie obojętnymi nośnikami, w postać kremu, balsamu, lotionu, emulsji W/O, żeli myjących, itp., zgodnie ze standard ową praktyką kosmetyczną.

Kremy i żele myjące można np. formułować z olejowym podłożem, z dodatkiem odpowiednich środków zagęszczających i/lub żelujących i/lub rozpuszczalników. Takie podłoża mogą zawierać np. wodę i/lub olej, taki jak ciekła parafina lub dowolny olej roślinny, albo rozpuszczalnik, taki jak glikol polietylenowy. Do środków zagęszczających i środków żelujących, które można stosować w zależności od charakteru podłoża, należą miękka parafina, stearynian glinu, alkohol cetostearylowy, glikole

PL 222 830 B1 polietylenowe, tłuszcz z wełny owczej, wosk pszczeli, karboksypolimetylen i pochodne celulozy i/lub monostearynian glicerylu i/lub niejonowe środki emulgujące.

Emulsje W/O zawierają fazę wodną, fazę tłuszczową i środek powierzchniowo czynny lub mieszaninę środków powierzchniowo czynnych (emulgatorów), które umożliwiają powstanie emulsji. Stosunek ilościowy zależy od wymaganej konsystencji, od właściwości składników fazy tłuszczowej i właściwości emulgatora. Można je formułować poprzez połączenie fazy wodnej z fazą olejową z odpowiednimi emulgatorami. Faza wodna może zawierać ekstrakty roślinne wodne lub/i alkoholowe, faza olejowa - oleje roślinne naturalne (oleinowy, linolowy, linolenowy), parafinowe (wazelinowe, białe, mineralne, płynne parafiny), masła, oleje syntetyczne.

Lotiony można formułować z użyciem olejowego podłoża np. etanolu lub alkoholu oleilowego.

W razie potrzeby środki kosmetyczne według wynalazku można buforować przez dodanie odpowiednich środków buforujących.

Zazwyczaj preparaty zawierają również jeden lub większą liczbę środków emulgujących, stabilizatorów, środków dyspergujących, środków zagęszczających, środków barwiących, substancji zapachowych, środków konserwujących środków nawilżających itp.

Nośniki odpowiednie do stosowania zgodnie z wynalazkiem obejmują stałe rozcieńczalniki lub wypełniacze, ośrodki wodne i różne nietoksyczne rozpuszczalniki organiczne i nieorganiczne.

W preparatach kosmetycznych można stosować diosgeninę w postaci czystej, jak i zawartą w ekstraktach z surowców pochodzenia naturalnego, takich jak w Wild Yam Extract z Crodarom, Francja (ekstrakt z kłączy Dioscorea villosa). Podobnie w preparatach kosmetycznych można stosować sukralfat w postaci czystej, jak i w postaci handlowych preparatów, np. Sucralfate Powder S225 z BK Giulini, Niemcy, zawierający 33,9% sukralfatu. W preparatach kosmetycznych stosuje się taką ilość tych surowców, aby uzyskać właściwą proporcję diosgeniny i sukralfatu wynoszącą od 1:4 do 1:100, korzystnie od 1:5 do 80, korzystniej od 1:10 do 1:40, a zwłaszcza 1:21.

Poniżej przedstawiono przykładowe ramowe receptury środków kosmetycznych oraz preparatów według wynalazku.

Receptura ramowa szamponów i żelów myjących

Nazwa składnika	Maksymalnie %
Anionowe/amfoteryczne/niejonowe związki powierzchniowo czynne (np. sól sodowa oksyetylenowanego siarczanu laurylowego)	30,00
Składniki zagęszczające (np. karbomer, eter celulozy, estry poliolo kwasu tłuszczowego, NaCl)	10,00
Środki wiążące wilgoć (np. gliceryna, glikol propylenowy, betaina)	7,00
Kationowe związki powierzchniowo czynne i polimery (np. polyquaterium-10)	5,00
Środki konserwujące	1,00
Substancje pomocnicze (np. EDTA, allantoina)	1,00
Emolienty (np. emolienty hydrofilowe)	2,00
Regulator pH (np. TEA, kwas cytrynowy, węglan sodu)	1,10
Zmętniacz	1,00
Diosgenina np. w postaci ekstraktu z Dioscorea villosa (składnik czynny)	0,1
Sukralfat (składnik czynny)	0,5
Woda	do 100

Receptura ramowa emulsji (mleczko tłuste) w/o

Nazwa składnika	Maksymalnie %
Emolienty (np. oleje roślinne, mineralne, silikonowe), woski	35,00
Środki emulgujące	5,00
Środki wiążące wilgoć (np. gliceryna, glikol propylenowy)	5,00

PL 222 830 B1 ciąg dalszy tabeli

Dodatkowe substancje (np. wyciągi roślinne, witaminy)	5,00
Środki konserwujące	1,00
Substancje pomocnicze (np. EDTA, antyoksydanty, allantoina)	1,00
Stabilizatory (np. chlorek sodu, siarczan magnezu)	1,00
Diosgenina np. w postaci ekstraktu z Dioscorea villosa (składnik czynny)	0,05
Sukralfat (składnik czynny)	0,5
Woda	do 100

Receptura ramowa kremów tłustych W/O

Nazwa składnika	Maksymalnie %
Emolienty (np. oleje roślinne, mineralne, silikonowe), woski	25,00
Środki emulgujące	5,00
Środki wiążące wilgoć (np. gliceryna, glikol propylenowy)	7,00
Dodatkowe substancje (np. wyciągi roślinne, witaminy)	5,00
Środki konserwujące	2,80
Substancje pomocnicze (np. EDTA, antyoksydanty, allantoina)	1,00
Stabilizatory (np. chlorek sodu, siarczan magnezu)	1,10
Diosgenina np. w postaci ekstraktu z Dioscorea villosa (składnik czynny)	0,05
Sukralfat (składnik czynny)	0,5
Woda	do 100

Poniżej przedstawiono przykłady ilustrujące przedmiot wynalazku. W tabelach podano składy preparatów według wynalazku zawierających kompozycję według wynalazku.

P r z y k ł a d 1 - szampon

Nazwa składnika	zawartość (% wag.)
Sodium Laureth Sulfate (anionowy związek powierzchniowo czynny 70%)	15,000
Cocamidopropyl Betaine (amfoteryczny związek powierzchniowo czynny)	10,000
Coco-Glucoside (niejonowy związek powierzchniowo czynny)	1,500
Betaine (składnik dodatkowy)	1,000
Polyquaternium-10 (polimer)	0,500
PEG-7 Glyceryl Cocoate (emolient)	1,000
Dicaprylyl Ether & Lauryl Alcohol (emolient)	0,500
Gliceryna (środek wiążący wilgoć)	2,000
Disodium EDTA (substancja pomocnicza)	0,040
Acrylates Copolymer (zagęstnik)	3,000
Sodium Carbonate (substancja pomocnicza)	0,115
Methylisothiazolinone (środek konserwujący)	0,100
Panthenol (składnik dodatkowy)	0,500
Ethalkonium Chloride Acrylate/HEMA/Styrene Copolymer (zmętniacz)	0,500
PEG-18 Glyceryl Oleate/Cocoate (zagęstnik)	0,500

PL 222 830 B1 ciąg dalszy tabeli

Citric Acid (substancja pomocnicza)	0,020
Kompozycja zapachowa K. Marine AR146008	0,800
Wild Yam Extract z Crodarom (składnik czynny)	2,000
SUCRALFATE POWDER S225 (składnik czynny)	0,100
Woda	do 100,000

P r z y k ł a d 2 - żel myjący

Nazwa składnika	zawartość (% wag.)
Sodium Laureth Sulfate (anionowy związek powierzchniowo czynny 70%)	12,000
Cocamidopropyl Betaine (amfoteryczny związek powierzchniowo czynny)	10,000
Coco-Glucoside (niejonowy związek powierzchniowo czynny)	1,500
PEG-7 Glyceryl Cocoate (emolient)	1,000
Gliceryna (środek wiążący wilgoć)	5,000
Disodium EDTA (substancja pomocnicza)	0,040
Acrylates Copolymer (zagęstnik)	5,000
Sodium Carbonate (substancja pomocnicza)	0,200
Methylisothiazolinone (środek konserwujący)	0,100
Ethalkonium Chloride Aceylate/HEMA/Styrene Copolymer (zmętniacz)	1,000
PEG-18 Glyceryl Oleate/Cocoate (zagęstnik)	0,500
Citric Acid (substancja pomocnicza)	0,020
Kompozycja zapachowa K. Marine AR146998	0,800
Wild Yam Extract z Crodarom (składnik czynny)	2,000
SUCRALFATE POWDER S225 (składnik czynny)	0,100
Woda	do 100,000

P r z y k ł a d 3 - mleczko

Nazwa składnika	zawartość (% wag.)
Cetyl PEG/PPG-10/1 Dimethicone (emulgator)	2,000
Polyglyceryl-4 Isostearate (emulgator)	0,500
Wosk pszczeli (składnik nadający konsystencję)	0,300
Candelilla Cera (składnik nadający konsystencję)	0,150
Olej silikonowy Cyclopentasiloxane & Cyclohexasiloxane (emolient)	7,000
Olej Mineralny (emolient)	6,000
Caprylic/Capric Triglyceride (emolient)	6,000
Olej naturalny Rzepakowy (emolient)	3,000
Gliceryna (środek wiążący wilgoć)	2,000
Glikol butylenowy (środek wiążący wilgoć)	3,000
Siarczan magnezu (stabilizator emulsji)	0,850
Allantoina (składnik dodatkowy)	0,200
Phenoxyethanol & Ethylhexylglycerin (środek konserwujący)	0,900

PL 222 830 B1 ciąg dalszy tabeli

Witamina E (składnik dodatkowy)	0,050
Wild Yam Extract z Crodarom (składnik czynny)	0,100
SUCRALFATE POWDER S225 (składnik czynny)	0,050
Woda	do 100,000

P r z y k ł a d 4 - krem tłusty 1

Nazwa składnika	zawartość (% wag.)
Cetyl PEG/PPG-10/1 Dimethicone (emulgator)	2,000
Polyglyceryl-4 Isostearate (emulgator)	1,000
Wosk pszczeli (składnik nadający konsystencję)	0,100
Candelilla Cera (składnik nadający konsystencję)	0,300
Olej silikonowy Cyclopentasiloxane & Cyclohexasiloxane (emolient)	12,000
Caprylic/Capric Triglyceride (emolient)	4,000
Pentaerythrityl Tetraisostearate (emolient)	3,000
Olej naturalny Avocado (emolient)	1,000
Gliceryna (środek wiążący wilgoć)	2,000
Glikol butylenowy (środek wiążący wilgoć)	3,000
Siarczan magnezu (stabilizator emulsji)	1,000
Allantoina (składnik dodatkowy)	0,200
Phenoxyethanol & Ethylhexylglycerin (środek konserwujący)	0,800
Pentylene Glycol (substancja wspomagająca układ konserwujący)	2,000
Witamina E (składnik dodatkowy)	0,500
Wild Yam Extract z Crodarom (składnik czynny)	1,000
SUCRALFATE POWDER S225 (składnik czynny)	0,500
Woda	do 100,000

P r z y k ł a d 5 - krem tłusty 2

Nazwa składnika	zawartość (% wag.)
Cetyl PEG/PPG-10/1 Dimethicone (emulgator)	2,000
Polyglyceryl-4 Isostearate (emulgator)	1,000
Wosk pszczeli (składnik nadający konsystencję)	0,100
Candelilla Cera (składnik nadający konsystencję)	0,300
Olej silikonowy Cyclopentasiloxane & Cyclohexasiloxane (emolient)	7,000
Cyclohexasiloxane & Cyclopentasiloxane (emolient)	5,000
Caprylic/Capric Triglyceride (emolient)	4,000
Pentaerythrityl Tetraisostearate (emolient)	2,000
Olej naturalny Avocado (emolient)	2,000
Gliceryna (środek wiążący wilgoć)	2,000
Glikol butylenowy (środek wiążący wilgoć)	3,000
Siarczan magnezu (stabilizator emulsji)	1,000
Allantoina (składnik dodatkowy)	0,200

PL 222 830 B1 ciąg dalszy tabeli

Phenoxyethanol & Ethylhexylglycerin (środek konserwujący)	0,900
witamina E (składnik dodatkowy)	0,500
Wild Yam Extract z Crodarom (składnik czynny)	0,002
SUCRALFATE POWDER S225 (składnik czynny)	0,001
Woda	do 100,000

P r z y k ł a d 6 - fluid

Nazwa składnika	zawartość (% wag.)
Cetyl PEG/PPG-10/1 Dimethicone (emulgator)	2,000
Polyglyceryl-4 Isostearate (emulgator)	1,000
Candelilla Cera (składnik nadający konsystencję)	0,300
C12-15 Alkyl Benzoate (emolient)	5,000
Ethylhexyl Methoxycinnamate (filtr UV)	3,000
Butyl Methoxydibenzoylmethane (filtr UV)	1,000
Octocrylene (filtr UV)	2,000
Olej silikonowy Cyclopentasiloxane (emolient)	3,000
Di-C12-13 Alkyl Tartrate (emolient)	4,000
Olej silikonowy Cyclohexasiloxane (emolient)	9,000
CI 77491 & CI 77492 & CI 77499 & CI 77891 & Triethoxycaprylylsilane (mieszanina pigmentów w osłonie emolientu)	11,000
Methyl Methacrylate Crosspolymer (substancja błonotwórcza matująca)	4,000
Gliceryna (środek wiążący wilgoć)	2,000
Glikol butylenowy (środek wiążący wilgoć)	3,000
Siarczan magnezu (stabilizator emulsji)	1,000
Phenoxyethanol & Ethylhexylglycerin (środek konserwujący)	0,800
Pentylene Glycol (substancja wspomagająca układ konserwujący)	3,000
Wild Yam Extract z Crodarom (składnik czynny)	1,000
SUCRALFATE POWDER S225 (składnik czynny)	0,500
Woda	do 100,000

Próby biologiczne

W poniższych próbach stosowano następujące składniki czynne:

diosgenina ekstrakt z Dioscorea villosa, Wild Yam Extract z Crodarom, Francja, o zawartości diosgeniny 0,8%, oraz sukralfat Sucralfate Powder S225 z BK Giulini, Niemcy, zawierający 33,9% sukralfatu

1. Połączenie sukralfatu i diosgeniny wykazuje efekt synergii na proliferację komórek naskórka linii KB (ATCC)

Żywotność komórek oceniono spektrofotometrycznie, testem MTT. Test MTT (test redukcji pobranej przez komórki soli tetrazolowej MTT) - jest to test kolorymetryczny służący do ilościowej oceny proliferacji komórek w odpowiedzi na różnorodne czynniki oraz potencjalnego efektu cytotoksycznego i cytostatycznego tych czynników. Test MTT jest metodą powszechnie stosowaną np. przy ocenie cytotoksyczności substancji aktywnych o potencjalnym zastosowaniu w kosmetyce.

Zasada oznaczenia: MTT jest solą diazolową pobieraną przez komórki najprawdopodobniej drogą pinocytozy i redukowaną przez obecną w mitochondriach dehydrogenazę bursztynianową jeden z enzymów łańcucha oddechowego aktywny tylko w żywych komórkach. MTT ulega redukcji do nierozpuszczalnego w wodzie formazanu, który gromadzi się we wnętrzu komórek.

PL 222 830 B1

Komórki naskórka (keratynocyty) linii KB (oral epidermoid carcinoma, ATCC) hodowano w warunkach standardowych (RPMI, 10% FCS, GIBCO) na płytkach 96-cio studzienkowych (około 50000 komórek/studzienkę) w obecności odpowiednich stężeń w/w surowców i ich mieszanin. Kontrolę st anowiły komórki nie poddane działaniu żadnego surowca.

Po okresie stymulacji (24 godziny) usuwano pożywkę znad komórek i dodawano roztwór MTT (100 μl/studzienkę) sporządzony w płynie hodowlanym DMEM w stężeniu 0,5 mg/ml (Sigma). Następnie komórki umieszczano na 2 godziny w 37°C, 5% CO₂. Po tym czasie usuwano roztwór MTT znad komórek i dodawano do studzienki po 100 μl izopropanolu zakwaszonego 5 mM HCl w celu upłynnienia błon komórkowych oraz kryształków formazanu. Intensywność pojawiającego się fioletowego zabarwienia jest wprost proporcjonalna do ilości wytworzonego formazanu, która koreluje z ilością metabolicznie aktywnych komórek w hodowli. Pomiaru ilości formazanu dokonuje się spektrofotometrycznie na czytniku do mikropłytek przy długości fali świetlnej 595 nm względem próby kontrolnej (izopropanol zakwaszony 5 mM HCl).

T a b e l a 1

Keratynocyty, linia KB	Żywotność komórek (test MTT) Wartość gęstości optycznej (OD) przy długości fali 595 nm	% zwiększenia proliferacji w stosunku do kontroli
Komórki kontrolne	0,678	100%
Komórki poddane działaniu sukralfatu 0,339 μ9 na 100 μl	0,736	108,55%
Komórki poddane działaniu diosgeniny 0,016 μg na 100 μl	0,694	102,36%
Komórki poddane działaniu połączenia 0,339 μg sukralfatu i 0,016 μg diosgeniny na 100 μl	0,849	125,22%

Zarówno sukralfat, jak i diosgenina stosowane samodzielnie wywołują korzystny wpływ na proliferację komórek naskórka. Stwierdzono wzrost liczby komórek o 8,55% po 24 godz. hodowli w obecności sukralfatu w stężeniu 0,339 μg na 100 μl oraz wzrost liczby komórek o 2,36% po 24 godzinach hodowli obecności 0,016 μg na 100 μl diosgeniny.

Diosgenina nie ma istotnie dużego wpływu na zdolności proliferacyjne keratynocytów. Natomiast mieszanina diosgeniny z sukralfatem wzmaga synergicznie zdolności komórek naskórka do podziałów. Hodowla komórek przez 24 godziny w obecności obydwu substancji spowodowała wzrost liczby komórek naskórka o 25,22%, co wskazuje na efekt synergiczny, a wyliczona przy zastosowaniu równania Kulla wartość wynosi 1,157. W poniższym wzorze stosowane są następujące oznaczenia: surowiec 1 = sukralfat; surowiec 2 = diosgenina; P1 = stężenie surowca 1 w stosunku do stężeń wszystkich surowców; P2 = stężenie surowca 2 w stosunku do stężeń wszystkich surowców; E (1) = 0,736 (efekt po zastosowaniu surowca 1); E (2) = 0,694 (efekt po zastosowaniu surowca 2); E (1+2) = 0,849 (efekt po zastosowaniu obydwu surowców):

PlxE(l + 2) , P2xE(l + 2) £(ϊ) ⁺ £(2) ^>1

Efekt synergii równy 1,157 wyliczono przy użyciu równania Kulla.

Wyliczona na podstawie równania Kulla wartość większa od 1 wskazuje na działanie synergiczne.

Efekt synergii, wynoszący powyżej 1 wg równania Kulla, uzyskano także przy użyciu diosgeniny w postaci czystej (Sigma-Aldrich, nr kat. D1634) w połączeniu z sukralfatem, w zakresie stężeń, w proporcjach:

3,39 μg sukralfatu : diosgeniny 0,16 μg na 100 μΕ

0,339 μg sukralfatu : diosgeniny 0,016 μg na 100 μ!; oraz

0,0339 μg sukralfatu : diosgeniny 0,0016 μg na 100 μΕ

Największy efekt synergii uzyskano w proporcji 21:1, odpowiednio sukralfat : diosgenina.

2. Połączenie sukralfatu i diosgeniny wykazuje efekt synergii na proliferację komórek skóry właściwej.

Badania prowadzono na komórkach pobranych od kobiety 16-letniej (M16) oraz na komórkach dojrzałych wyizolowanych ze skóry kobiety 70-letniej (L70). Doświadczenia prowadzono w standardoPL 222 830 B1 wej pożywce DMEM (w podłożu zawierającym 10% surowicę FCS, Sigma) oraz w pożywce pozbawionej składników odżywczych (Kosmetische Medizin nr 2, 2007, 72-75, R. Debowska, C. Vincent, K. Bazela, M. Kruszewski, B. Winkler-Spytkowska, A. Maciejszyk, K. Rogiewicz, I. Eris).

Ocenę stopnia proliferacji komórek przeprowadzono w hodowli wzbogaconej diosgeniną (0,016 μg na 100 μΓ> i/lub sukralfatu (0,339 μg na 100 μθ, każde doświadczenie przeprowadzono w trzech powtórzeniach biologicznych. Na płytki zawierające 24 studzienki hodowlane wysiewano równe ilości komórek (4x10⁴/ml/studzienkę). Po 48 godzinach (czas potrzebny do przylegania komórek do dna studzienki hodowlanej) zmieniano pożywkę na świeżą, uzupełnioną odpowiednim stężeniem diosg eniny i sukralfatu. Badania prowadzono wobec próby kontrolnej - komórek hodowanych w tych samych warunkach, ale w podłożu nie zawierającym badanej substancji.

Komórki inkubowano przez 21 dni, w temp. 37°C, w atmosferze 5% CO₂ w standardowych warunkach hodowlanych. W trakcie inkubacji co 7 dni w płytkach hodowlanych zmieniano pożywkę na świeżą uzupełnioną odpowiednim stężeniem diosgeniny i sukralfatu. Komórki liczono w komorze Burkera w mikroskopie świetlnym po 7, 14 i 21 dniach hodowli.

T a b e l a 2. Wiek komórek - młode komórki M16 (liczba fibroblastów x 10⁴/ml)

	Pożywka -FCS	Pożywka -FCS
14 dni hodowli	21 dni hodowli
Kontrola	10 (100%)	8,5 (100%)
diosgenina 0,016 μg na 100 μl	11 (110%)	11,5 (135,3%)
sukralfat 0,339 μg na 100 μl	13,8 (138%)	9,8 (115,3%)
połączenie sukralfatu 0,339 μg i diosgeniny 0,016 μg na 100μl	13,8 (138%)	13,8 (162,4%)
Synergia:	1,01	1,4

Zarówno sukralfat, jak i diosgenina stosowane samodzielnie wywołują korzystny efekt na proliferację komórek skóry właściwej w linii młodych fibroblastów. Stwierdzono wzrost liczby komórek o 38% po 14 dniach hodowli w obecności sukralfatu w stężeniu 0,339 μg na 100 μl oraz wzrost liczby komórek o 10% po 14 dniach hodowli obecności 0,016 μg na 100 μl diosgeniny w podłożu pozbawionym surowicy FCS.

Hodowla komórek przez 14 dni w podłożu bez surowicy FCS w obecności obydwu substancji spowodowała wzrost liczby komórek skóry właściwej o 38%, co wskazuje na efekt synergiczny, a wyl iczona przy zastosowaniu równania Kulla wartość wynosi 1,01. Efekt synergii wrasta do wartości 1,4 w trakcie kolejnych 7 dni hodowli.

T a b e l a 3. Wiek komórek - dojrzałe komórki L70 (liczba fibroblastów x 10⁴/ml)

	Pożywka+FCS	Pożywka -FCS
21 dni hodowli
Kontrola	22,6 (100%)	6,8 (100%)
diosgenina 0,016 μg na 100 μl	24,6 (108,8%)	7,3 (107,4%)
sukralfat 0,339 μg na 100 μl	26,1 (115,5%)	9,4 (138,2%)
połączenie sukralfatu 0,339 μg i diosgeniny 0,016 μg na 100μl	30 (132,3%)	9,6 (141,2%)
Synergia:	1,153	1,034

Zarówno sukralfat, jak i diosgenina stosowane samodzielnie wywołują korzystny efekt na proliferację komórek skóry właściwej w linii dojrzałych fibroblastów. Stwierdzono wzrost liczby komórek o 38,2% po 21 dniach hodowli w obecności sukralfatu w stężeniu 0,339 μg na 100 μl oraz wzrost liczby komórek o 7,4% po 21 dniach hodowli obecności 0,016 μg na 100 μl diosgeniny w podłożu pozbawionym surowicy FCS.

Hodowla komórek przez 21 dni w podłożu bez surowicy FCS w obecności obydwu substancji spowodowała wzrost liczby komórek skóry właściwej o 41 ,2%, co wskazuje na efekt synergiczny, a wyliczona przy zastosowaniu równania Kulla wartość wynosi 1,034.

Stwierdzono również efekt synergii działania obydwu substancji w hodowli zawierającej surowicę FCS po 21 dniach hodowli. W podłożu pełnym zaobserwowano wzrost liczby komórek o 15,5%

PL 222 830 B1 w obecności sukralfatu w stężeniu 0,339 gg na 100 gl oraz wzrost liczy komórek o 8,8% w obecności 0,016 gg na 100 gl diosgeniny. W obecności obydwu substancji stosowanych łącznie liczba komórek wzrosła o 32,3%, co wskazuje na efekt synergiczny, a wyliczona przy zastosowaniu równania Kulla wartość wynosi 1,153.

3. Badania in vivo

Preparaty według wynalazku wykazują korzystne działanie w badaniach in vivo. W szczególności wstępne badania z użyciem kremu tłustego według wynalazku z przykładu 4 wykazały korzystny wpływ preparatu na skórę pod względem redukcji głębokości i objętości zmarszczek; redukcji cieni i przebarwień oraz opuchnięć pod oczami; nawilżania, poprawy elastyczności i wygładzania skóry; rozświetlania skóry pod oczami.

We wstępnych badaniach na ludziach stwierdzono, że preparaty według wynalazku są łagodne dla skóry wrażliwej i alergicznej, a także nie powodują podrażnień.

Nanoszony na skórę preparat wykazał zatem korzystny wpływ na spowalnianie, przeciwdziałanie i zapobieganie procesowi starzenia wewnątrzpochodnego.

Claims (9)

1. Zastrzeżenia patentowe

   1. Preparat kosmetyczny zawierający substancję czynną oraz kosmetycznie dopuszczalne zaróbki, nośniki i substancje dodatkowe, znamienny tym, że jako substancję czynną zawiera diosgeninę i sukralfat w synergicznie skutecznej ilości w proporcji od 1:5 do 1:80.
2. 2. Preparat kosmetyczny według zastrz. 1, znamienny tym, że zawiera diosgeninę i sukralfat w proporcji korzystniej od 1:10 do 1:40, a zwłaszcza 1:21.
3. 3. Preparat kosmetyczny według któregokolwiek z zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, że zawiera diosgeninę w ilości od 0,0001% do 0,1% wagowych, w przeliczeniu na całość preparatu i sukralfat w ilości od 0,001% do 1% wagowych, w przeliczeniu na całość preparatu.
4. 4. Preparat kosmetyczny według któregokolwiek z zastrz. 1-3, znamienny tym, że zawiera diosgeninę w postaci ekstraktu z Dioscorea villosa.
5. 5. Preparat kosmetyczny według któregokolwiek z zastrz. 1-4, znamienny tym, że jest w postaci kremu, balsamu, lotionu, aerozolu, fluidu, korektora, emulsji W/O, toniku, żeli myjących, szamponów, pianek, a także mleczek, galaretek, past, maści, plastrów i systemów transdermalnych.
6. 6. Preparat kosmetyczny zawierający diosgeninę i sukralfat zdefiniowany w zastrz. 1 do zastosowania w spowalnianiu, przeciwdziałaniu i zapobieganiu procesowi starzenia wewnątrzpochodnego.
7. 7. Preparat kosmetyczny według zastrz. 6 do ochrony skóry przed jej starzeniem związanym ze zmianami hormonalnymi.
8. 8. Preparat kosmetyczny według zastrz. 6 do pielęgnacji skóry cienkiej, starzejącej się, przesuszonej, suchej, łuszczącej się, odwodnionej, wrażliwej, z wyraźnymi bruzdami i zmarszczkami, ścieńczonym naskórkiem, wiotkiej, z obniżoną elastycznością, przebarwieniami i teleangiektazjami, o zwiększonej wrażliwości na działanie czynników zewnętrznych.
9. 9. Sposób kosmetycznego spowalniania, przeciwdziałania, zapobiegania procesowi starzenia wewnątrzpochodnego skóry, znamienny tym, że skórę traktuje się skuteczną ilością preparatu kosmetycznego zdefiniowanego w zastrz. 1.