PL221522B1

PL221522B1 - Zastosowanie kaliny koralowej lub jej tkanek lub ich wytworów

Info

Publication number: PL221522B1
Application number: PL393515A
Authority: PL
Inventors: Andrzej W. Lipkowski; Bogumiła Litwińska
Original assignee: Inst Medycyny Doświadczalnej I Klinicznej Im M Mossakowskiego Polskiej Akademii Nauk; Narodowy Inst Zdrowia Publicznego Państwowy Zakład Higieny
Priority date: 2010-12-30
Filing date: 2010-12-30
Publication date: 2016-04-29
Also published as: PL393515A1; WO2012091589A1

Description

W etiopatogenezie zakażeń wirusowych istotne znaczenie odgrywają wirusy należące do rodziny Herpesviridae. Wywołują one u ludzi wiele zespołów chorobowych począwszy od pospolitych zmian skórno-śluzowych, aż do zagrażających życiu zakażeń ośrodkowego układu nerwowego. Wirusy te powodują zakażenia, które należą do jednych z najczęstszych zakażeń u ludzi na wszystkich kontynentach. Brak skutecznej immunoprofilaktyki przeciwko zakażeniom HSV powoduje, że jedynym obecnie dostępnym sposobem leczenia zakażeń wirusem opryszczki jest chemioterapia. Preparatem stosowanym na szeroką skalę w przypadku zakażeń HSV-1 jest odkryty w latach 70 dwudziestego wieku acyklowir. Jest to analog guanozynowy, który powoduje terminację syntezy DNA. Obecność wirusowego enzymu - kinazy tymidynowej jest niezbędna do aktywacji acyk lowiru, przez co jest on mało toksyczny dla komórek niezakażonych. Bardzo istotnym zagadnieniem w chemioterapii przeciwwirusowej jest powstawanie szczepów opornych na stosowane leki. Przypuszcza się, że wraz z ro zpowszechnieniem preparatów przeciwwirusowych problem ten, podobnie jak w przypadku antybiotykoterapii, może nabrać jeszcze większego znaczenia. I chociaż szczepy HSV-1 oporne na acyklowir są najczęściej mniej patogenne, to stanowią poważne zagrożenie dla pacjentów z obniżoną odporn ością, zwłaszcza u tych z rozwiniętym AIDS, u których długotrwała terapia lekami przeciwko wirusom herpes może prowadzić do selekcji szczepów opornych. Zgodnie z danymi literaturowymi, obecność szczepów HSV-1 opornych na acyklowir wśród osób z zaburzeniami odporności wynos i 5%, natomiast u biorców szpiku procent tych szczepów rośnie do 14% (Nugier F, Colin JN, Aymard M, et al, Occurrence and characterization of acyclovir-resistant5 herpes simplex virus isolates: report on a 2-year sensitivity screening survey. J Med Virol 36 (1992) 1-12). Wzrastająca liczba osób z zaburzeniami odporności, szczególnie chorych z AIDS i osób po przeszczepach, postuluje intensywny rozwój badań nad chemioterapią przeciw zakażeniom powodowanym przez wirusy HSV.

Na świecie wiele preparatów otrzymywanych z roślin jest stosowanych w medycynie niekonwencjonalnej jako środki przeciw zakażeniom wirusowym. Ostatnio opisano kilka substancji wyizolowanych z wyciągów roślinnych, które wykazują właściwości przeciwwirusowe w stosunku do HSV-1 (Cheng H-Y, Yang C-M, Lin T-C, et al. (2006). Ent-Epiafzelechin-(4a- -8)-epiafzelechin extracted from Cassia javanica inhibits herpes simplex virus type 2 replication. J Med Microbiol 55, 201-206, Kuo YC, Lin LC, Tsai WJ, et al., Samarangenin B from Limonium sinense suppresses herpes simplex virus type 1 replication in Vero cells by regulation of viral macromolecular synthesis. Antimicrob Agents Chemother 46 (2002) 2854-2864). Przykładem takiej substancji jest n-docosanol, który został zatwierdzony do stosowania w przypadku opryszczki wargowej (Pope, LE, Marcelletti JF, Katz LR, et al., Anti-herpes simplex virus activity of n-docosanol correlates with intracellular metabolic conversion of the drug. J Lipid Res 37 (1996) 2167-2216). Odkrycia te wykazują, że substancje wyizolowane z roślin mogą być w przyszłości alternatywą do obecnie stosowanej chemioterapii.

Celem wynalazku jest zaproponowanie nowego leku do zapobiegania lub leczenia infekcji wirusami herpes oraz wskazanie składnika, który może być wykorzystany do wytwarzania takiego leku.

Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie kaliny koralowej lub jej tkanek lub ich wytworów do wytwarzania leku do zapobiegania lub leczenia infekcji wirusami herpes. Korzystnie, do wytwarzania leku stosuje się owoce kaliny koralowej lub ich przetwory, zwłaszcza sok z owoców lub jego ekstrakt, korzystnie liofilizat. Korzystnie do wytwarzania leku w postaci preparatu do stosowania zewnętrznego, zwłaszcza kremu, maści lub płynu do przemywania, stosuje się ekstrakt z owoców w stężeniu od 0,5% do 5,0% wagowych preparatu natomiast do wytwarzania leku w postaci preparatu do podawania doustnego stosuje się ekstrakt z owoców w stężeniu od 0,5% do 50% wagowych preparatu.

W wyniku prowadzonych przez nas badań nad kaliną koralową (Viburnum opulus) niespodziewanie okazało się, że ekstrakt z owoców ma działanie przeciwwirusowe przeciwko wirusowi opryszc zki (HSV-1). Badania wykazały bardzo selektywne działanie otrzymanego ekstraktu na mechanizm zakażenia HSV. Jednocześnie wykazano, że preparat ma działanie wieloczynnikowe obniżając zarówno replikację wirusa w komórkach zakażonych jak również działając ochronnie na komórki i tym samym obniżając ich wrażliwość na zakażenie HSV. Właściwości preparatów pozwalają na zastosowanie ich jako aktywnych komponentów maści lub kremów do stosowania zewnętrznego jak również jako aktywny składnik pigułek do podawania doustnego. Dla lepszego zilustrowania przedmiotowego wynalazku, polegającego na przeciwwirusowym działaniu preparatów z owoców kaliny, załączono przykłady, które pokazują hamujące działanie preparatów na replikację HSV w hodowli komórkowej

PL 221 522 B1 w różnych wariantach zakażania komórek. Nie należy jednak ograniczać zakresu wynalazku jedynie do treści poniższych przykładów.

P r z y k ł a d 1. Z owoców kaliny koralowej wyciskano sok, który następnie filtrowano przez filtr bibułowy. Przesącz liofilizowano. Otrzymany suchy preparat stosowano do dalszych badań. Hodowlę ciągłą wyprowadzoną z komórek nerki małpiej, CV-1, zakażano HSV-1, inkubowano 1,5 godz. w 37°C, a następnie wlewano płyn utrzymujący - MEM-A zawierający 0.5% lub 1% suchego ekstraktu owoców kaliny koralowej. Równolegle prowadzono hodowle w identycznych warunkach z dodatkiem płynu utrzymującego bez dodatku ekstraktu roślinnego. Po 24 godz. i po 48 godz. zbierano wirusa i określano jego miano infekcyjne. Dane uzyskane i przedstawione w tabeli pokazują, że otrzymano silny efekt przeciwwirusowego działania preparatu kaliny koralowej (spadek o ponad 100 000 cząstek infekcyjnych wirusa w 1 ml).

T a b e l a 1

Miano wirusa (wartości uśrednione, z dwóch powtórzeń).

	Wartość miana infekcyjnego
Hodowla bez preparatu po 24 godz. po 48 godz.	10'⁴’² TClD50
10'⁴’³ TClD50
Hodowla z 0,5% zawartością preparatu po 24 godz. po 48 godz.	10'²’⁰ TClD50
10'²’¹ TClD50
Hodowla z 1,0% zawartością preparatu po 24 godz. po 48 godz.	10^-2,2 TClD50
10'¹’⁹ TClD50

P r z y k ł a d 2. Preparat otrzymano według przykładu 1. Hodowlę komórek CV-1 zakażano HSV-1, inkubowano 1,5 godz. w 37°C, a następnie wlewano płyn utrzymujący - MEM-A. Po 2 godz. zlewano płyn z nad hodowli i dodawano płyn utrzymujący zawierający badany roztwór preparatu o stężeniu 0,5 lub 1,0%. Wirusy zbierano po 24 godz. i po 48 godz. i określano ich miano infekcyjne. P odobnie jak w przykładzie 1 uzyskano spadek o ponad 100 000 cząstek infekcyjnych wirusa w 1 ml)

T a b e l a 2

Miano wirusa (wartości uśrednione, z dwóch powtórzeń).

	Wartość miana infekcyjnego
Hodowla bez preparatu po 24 godz. po 48 godz.	10'⁴’² TClD50
10'⁴’³ TClD50
Hodowla z 0,5% zawartością preparatu po 24 godz. po 48 godz.	10'²’³ TClD50
10·¹'⁸ TClD50
Hodowla z 1,0% zawartością preparatu po 24 godz. po 48 godz.	10·²'⁰ TClD50
10·¹'⁶ TClD50

P r z y k ł a d 3. Preparat otrzymano według przykładu 1. Z nad wyrośniętej hodowli komórek V-1 usuwano płyn wzrostowy i dodawano badany roztwór preparatu w stężeniu 0,5% lub 1,0% w płynie utrzymującym. Hodowlę inkubowano 2 godziny, usuwano badany roztwór preparatu i przepłukiwano hodowlę płynem utrzymującym MEM-A. Następnie hodowlę zakażano HSV-1, inkubowano 1,5 godz. w 37°C i po inkubacji dodawano MEM-A. Wirusa zbierano po 24 godz. i po 48 godz. i określano miano infekcyjne.

PL 221 522 B1

T a b e l a 3

Miano wirusa dla poszczególnych wariantów (wartości uśrednione, z dwóch powtórzeń).

	Wartość miana infekcyjnego
Hodowla bez preparatu po 24 godz. po 48 godz.	10^-4,2 TClD50
10^-4,3 TClD50
Hodowla z 0,5% zawartością preparatu po 24 godz. po 48 godz.	10^-3,25 TClD50
10^-2,9 TClD50
Hodowla z 1,0% zawartością preparatu po 24 godz. po 48 godz.	10^-3,4 TClD50
10^-3,6 TClD50

Zastrzeżenia patentowe

Claims

1. Zastosowanie kaliny koralowej lub jej tkanek lub ich wytworów do wytwarzania leku do zapobiegania lub leczenia infekcji wirusami herpes.

2. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że do wytwarzania leku stosuje się owoce kaliny koralowej lub ich przetwory, zwłaszcza sok z owoców lub jego ekstrakt, korzystnie liofilizat.

3. Zastosowanie według zastrz. 1 albo 2, znamienne tym, że do wytwarzania leku w postaci preparatu do stosowania zewnętrznego, zwłaszcza kremu, maści lub płynu do przemywania, stosuje się ekstrakt z owoców w stężeniu od 0,5% do 5,0% wagowych preparatu.

4. Zastosowanie według zastrz. 1 albo 2, znamienne tym, że do wytwarzania leku w postaci preparatu do podawania doustnego stosuje się ekstrakt z owoców w stężeniu od 0,5% do 50% wagowych preparatu.