PL213216B1 - Przeciwcialo monoklonalne, sposób jego wytwarzania, jego zastosowanie, wytwarzajaca je linia komórek hybrydoma, pojemnik je zawierajacy, zestaw terapeutyczny, DNA kodujacy przeciwcialo, wektor zawierajacy DNA, komórki gospodarza zawierajace wektor i kompozycja farmaceutyczna - Google Patents

Przeciwcialo monoklonalne, sposób jego wytwarzania, jego zastosowanie, wytwarzajaca je linia komórek hybrydoma, pojemnik je zawierajacy, zestaw terapeutyczny, DNA kodujacy przeciwcialo, wektor zawierajacy DNA, komórki gospodarza zawierajace wektor i kompozycja farmaceutyczna

Info

Publication number
PL213216B1
PL213216B1 PL372803A PL37280303A PL213216B1 PL 213216 B1 PL213216 B1 PL 213216B1 PL 372803 A PL372803 A PL 372803A PL 37280303 A PL37280303 A PL 37280303A PL 213216 B1 PL213216 B1 PL 213216B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
antibody
tenascin
seq
fragments
cheese
Prior art date
Application number
PL372803A
Other languages
English (en)
Other versions
PL372803A1 (pl
Inventor
Santis Rita De
Anna Maria Anastasi
Original Assignee
Sigma Tau Ind Farmaceuti
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sigma Tau Ind Farmaceuti filed Critical Sigma Tau Ind Farmaceuti
Publication of PL372803A1 publication Critical patent/PL372803A1/pl
Publication of PL213216B1 publication Critical patent/PL213216B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin, cold insoluble globulin [CIG]
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/81—Packaged device or kit
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/975—Kit

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

Niniejszy wynalazek dotyczy przeciwciał monoklonalnych skierowanych przeciwko ludzkiej tenascynie, metod i materiałów do ich otrzymywania, zastosowania wspomnianych przeciwciał do wytwarzania środków diagnostycznych i leków używanych odpowiednio do diagnozowania i leczenia nowotworów ekspresjonujących tenascynę oraz materiałów zawierających wzmiankowane przeciwciała, odpowiednich do zastosowania w medycynie.
Tło wynalazku
Specyficzność terapii przeciwnowotworowej stanowi często czynnik decydujący o powodzeniu leczenia. Istotnie, pojawienie się efektów toksycznych oraz obniżonej tolerancji wobec określonych środków przeciwnowotworowych ogranicza ich zastosowanie i jakość życia pacjentów.
Spadek toksyczności jest bezpośrednio związany z selektywnością leczenia w stosunku do komórek nowotworowych. Przeciwciała monoklonalne stanowią idealny sposób selektywnego wyboru komórek nowotworowych, a w zestawieniu z systemem amplifikacji awidyna-biotyna tworzą niezwykle skuteczną i wybiórczą drogę dostarczania cząstek aktywnych do miejsca nowotworu.
Tenascyna jest jednym z białek macierzy zewnątrzkomórkowej, charakteryzuje się miejscowo-specyficzną ekspresją podczas rozwoju zarodkowego, a w tkankach dorosłych może występować podczas gojenia się ran i onkogenezy, jak również w nowo powstałych naczyniach krwionośnych nowotworu. Tenascyna nie występuje w zdrowych tkankach dorosłych, jest natomiast wytwarzana w zrębie wielu nowotworów litych, takich jak: glejaki (Burdon, et al., Cancer Res. 43:2796-2805, 1983), nowotwory sutka (Chiquet-Ehrismann, et al., 1986), płuc (Natali et al., Intl. J. Cancer 54:56-68, 1989), włókniakomięsaki oraz nowotwory płaskokomórkowe (Ramos D.M. et al., Int. J. Cancer 75:680-687, 1998). Tenascyna jest wykrywana w glejakach, natomiast nie występuje normalnej tkance mózgowej. Dyskusję na temat tenascyny można znaleźć w WO 92/04464, Wistar i podobnych odnośnikach literaturowych.
W oparciu o informacje z EP 0 496 074, G. Paganelli et al. stworzyli metodę trzyetapowego wstępnego ukierunkowania (ang. three-step pre-targeting approach) ogólnoustrojowego i miejscowego leczenia nowotworów (Cremonesi M. et al., Eur. J. Nuci. Med. 26(2):110-120, 1999: Paganelli G. et al., Eur. J. Nucl. Med. 26(4):348-357, 1999; Paganelli G. et al., Cancer Biother. & Radiopharm. 16(3):227-235, 2001).
Innymi odnośnikami dotyczącymi metody trzyetapowego wstępnego ukierunkowania są WO 94/04702 oraz US 5,578,287.
Leczenie metodą trzyetapowego wstępnego ukierunkowania jest oparte na dożylnym podawaniu kolejno: biotynylowanych przeciwciał monoklonalnych skierowanych przeciwko tenascynie, streptawidyny i biotyny znakowanej 90Y, po którym następują dwie dawki awidyny i biotynylowanej albuminy, poprzedzające odpowiednio dawkę streptawidyny i biotyny znakowanej za pomocą 90Y, mające na celu ograniczenie niespecyficznego tła. Selektywność trzyetapowej metody wstępnego ukierunkowania Paganellego wynika z zastosowania przeciwciał monoklonalnych skierowanych przeciwko tenascynie. Ukierunkowanie na macierz zewnątrzkomórkową posiada w porównaniu z ukierunkowaniem na antygeny komórek nowotworowych taką zaletę, że jest niezależne od modulacji antygenowej komórek nowotworowych, dzięki czemu stanowi idealny cel terapii przeciwnowotworowej.
Dawki i sposób dawkowania podczas leczenia metodą trzyetapowego wstępnego ukierunkowania zostały ustalone w celu uzyskania optymalnego stosunku rozmieszczenia nowotwór/tkanka nienowotworowa. Zawarte w pracy Paganellego dane, pochodzące z 48 przypadków glejaków (GBM) lub gwiaździaków anaplastycznych (AA), wykazały znaczący brak toksyczności z wyjątkiem kilku przypadków alergicznej reakcji na streptawidynę (której można uniknąć używając awidyny) oraz wstępnych oznak skuteczności terapeutycznej. Istotnie, 2 miesiące po zakończeniu leczenia u 25% pacjentów stwierdzono zmniejszenie rozmiarów nowotworu Pełna Odpowiedź (Zmniejszenie rozmiarów nowotworu >50%)=6%; Częściowa Odpowiedź (Zmniejszenie rozmiarów nowotworu <50%)= 11%; Nieznaczna Odpowiedź (Zmniejszenie rozmiarów nowotworu <25%)=8%), a u 52% pacjentów brak postępów choroby, co daje ogólny poziom odpowiedzi powyżej 77%. U niektórych z tych pacjentów, w przypadku których przewidywana długość życia wynosiła poniżej sześciu miesięcy, odpowiedź utrzymywała się dłużej niż przez rok (Paganelli et al., 1999).
Rola biotynylowanych przeciwciał przeciwko tenascynie polega na zlokalizowaniu miejsca nowotworu oraz prezentowaniu cząsteczek biotyny, pośredniczących w następującej potem akumulacji cząsteczek awidyny oraz 90-Y-biotyny.
PL 213 216 B1
Przeciwciała przeciwko tenascynie zostały ujawnione na przykład w: US 5,624,659, Duke University, JP 2219590, Rikagaku oraz wspomnianej powyżej publikacji WO 92/04464. Przeciwciało przeciwko tenascynie zostało opisane w: Siri A. et al, Nucl. Acid Res. 19(3):525-531, 1991; Balza E. et al., FEBS 332:39-43, 1993, a jego zastosowanie do celów terapeutycznych we wspomnianych powyżej: Cremonesi M. et al., Eur. J. Nucl. Med 26(2):110-120. 1999; Paganelli G. et al., Eur. J. Nucl. Med 26(4):348-357, 1999; Paganelli G. et al., Cancer Biother. & Radiopharm. 16(3):227-235, 2001. Klon używany do otrzymywania przeciwciał przeciwko tenascynie znany jest w dziedzinie jako BC4. Twórcy wynalazku stwierdzili, iż klon BC4 nie nadaje się do zastosowania na skalę przemysłową i do celów regulacji, ze względu na wytwarzanie dodatkowego, niefunkcjonalnego łańcucha lekkiego (najprawdopodobniej pochodzącego z macierzystych komórek szpiczakowych), którego poziom ekspresji wzrastał w wyniku zwiększenia rozmiarów hodowli, uniemożliwiając w ten sposób oczyszczanie przeciwciał na dużą skalę.
Streszczenie wynalazku
Stwierdzono, że można otrzymać przeciwciała monoklonalne skierowane przeciwko ludzkiej tenascynie pozwalające na uniknięcie powyższych problemów, a mianowicie przeciwciała monoklonalne nie wytwarzające niefunkcjonalnego łańcucha lekkiego.
Dlatego też, przeciwciała te są przedmiotem niniejszego wynalazku, wraz z metodą otrzymywania wzmiankowanych przeciwciał, ich zastosowaniem w terapii, w szczególności do otrzymywania środka używanego w terapii chorób charakteryzujących się wytwarzaniem tenascyny, takich jak nowotwory.
Opis wynalazku
W niniejszym wynalazku ujawniono przeciwciała i fragmenty przeciwciał, które mogą zawierać również dodatkowe znaczniki lub czynniki diagnostyczne, preparaty zawierające te przeciwciała i fragmenty przeciwciał, zawierające je zestawy diagnostyczne i terapeutyczne, ich zastosowanie w diagnostyce i terapii oraz metody otrzymywania tych przeciwciał i fragmentów przeciwciał.
Przedmiotem wynalazku jest przeciwciało monoklonalne przeciwko ludzkiej tenascynie, charakteryzujące się tym, że jego regiony zmienne łańcuchów lekkiego i ciężkiego posiadają sekwencje odpowiednio SEQ ID NO:1 i SEQ ID NO:2 oraz którego fragmenty proteolityczne wiążą epitop antygenowy w obrębie powtórzenia typu EGF-podobnego ludzkiej tenascyny C.
Przedmiotem wynalazku jest również przeciwciało monoklonalne przeciwko ludzkiej tenascynie C, znamienne tym, że jego zmienny region łańcucha lekkiego zawiera sekwencję aminokwasową SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11 oraz SEQ ID NO: 13 i jego zmienny region łańcucha ciężkiego zawiera sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17 oraz SEQ ID NO: 19 lub fragment wspomnianego przeciwciała monoklonalnego, przy czym przeciwciało lub jego fragment ulega wiązaniu z epitopem antygenowym w obrębie powtórzenia typu EGF-podobnego ludzkiej tenascyny C.
Korzystnie, przeciwciało lub jego fragmenty według wynalazku zawiera dodatkowo znaczniki i/lub czynniki diagnostyczne.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto biotynylowane przeciwciało lub jego fragment, które charakteryzuje się tym, że ulega wiązaniu z epitopem antygenowym w obrębie powtórzenia typu EGF-podobnego ludzkiej tenascyny C.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest linia komórek hybrydoma wytwarzająca przeciwciało monoklonalne przeciwko ludzkiej tenascynie ulegającej wiązaniu z epitopem antygenowym w obrębie powtórzenia typu EGF-podobnego ludzkiej tenascyny C, zdeponowana na mocy Traktatu Budapesztańskiego w dniu 29 stycznia 2002 r., w Międzynarodowym Organie Depozytowym Centrum Zaawansowanych Biotechnologii, pod numerem dostępu PD02003.
Przedmiotem wynalazku jest również przeciwciało monoklonalne wyprodukowane przez komórki hybrydoma według wynalazku.
Innym przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania przeciwciała według wynalazku charakteryzujący się tym, że obejmuje hodowlę powyższych komórek hybrydoma 5 oraz izolację wspomnianego przeciwciała.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie przeciwciała lub jego fragmentów według wynalazku lub biotynylowanego przeciwciała lub jego fragmentu według wynalazku do wytwarzania środka diagnostycznego do wykrywania chorób związanych z ekspresją tenascyny.
Korzystnie, zastosowanie według wynalazku dotyczy choroby nowotworowej.
PL 213 216 B1
Korzystnie, zastosowanie według wynalazku charakteryzuje się tym, że nowotwór jest wybrany z grupy składającej się z: nowotworów torbielowatych mózgu, glejaków, nowotworów sutka, płuc, włókniakomięsaków oraz nowotworów płaskokomórkowych.
W zastosowaniu według wynalazku środek diagnostyczny jest stosowany w technikach obrazowania in vivo.
Innym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie przeciwciała lub jego fragmentów według wynalazku lub biotynylowanego przeciwciała lub jego fragmentu według wynalazku do wytwarzania leku do leczenia chorób nowotworowych związanych z ekspresją tenascyny.
Korzystnie, w powyższym zastosowaniu nowotwór jest wybrany z grupy składającej się z nowotworów torbielowatych mózgu, glejaków, nowotworów sutka, płuc, włókniakomięsaków oraz nowotworów płaskokomórkowych.
W zastosowaniu według wynalazku lek ma postać zestawu odpowiedniego do przeprowadzenia trzyetapowego wstępnego ukierunkowania.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zestaw terapeutyczny składający się z 5 ampułek, charakteryzujący się tym, że pierwsza ampułka zawiera biotynylowane przeciwciało lub jego fragment według wynalazku, druga ampułka zawiera awidynę, trzecia ampułka zawiera biotynylowaną albuminę, czwarta ampułka zawiera streptawidynę, piąta ampułka zawiera znakowaną izotopowo biotynę lub pochodną biotyny.
Korzystnie, w zestawie terapeutycznym według wynalazku wspomniane ampułki są odpowiednie do podawania w postaci zastrzyków ludziom.
Innym przedmiotem wynalazku jest DNA kodujący przeciwciało lub jego fragmenty określone powyżej.
Kolejnym przedmiotem wynalazku są białka obejmujące regiony wiązania CDR z epitopem antygenowym w obrębie powtórzenia typu EGF-podobnego ludzkiej tenascyny C, charakteryzujące się tym, że posiadają sekwencję aminokwasową SEQ ID NO:9, SEQ ID NO: 11 oraz SEQ ID NO: 13 oraz sekwencję aminokwasową SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17 oraz SEQ ID NO: 19.
Innym przedmiotem wynalazku jest wektor zawierający DNA według wynalazku.
Jeszcze innym przedmiotem wynalazku są komórki gospodarza zawierające wektor według wynalazku.
Innym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie przeciwciała lub jego fragmentów według wynalazku w zestawieniu z drugim przeciwciałem specyficznym wobec tenascyny w teście podwójnego wiązania, do otrzymywania zestawu diagnostycznego do określania poziomu cyrkulującej tenascyny.
Korzystnie, zestaw diagnostyczny zawiera przeciwciało lub jego fragmenty według wynalazku.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest pojemnik charakteryzujący się tym, że zawiera biotynylowane przeciwciało, lub jego fragmenty według wynalazku, bufory oraz odczynniki odpowiednie do zastosowania w zestawie terapeutycznym do trzyetapowej metody wstępnego ukierunkowania.
Pojemnik według wynalazku korzystnie zawiera wiele przedziałów.
Pojemnik według wynalazku korzystnie zawiera dodatkowo oddzielne przeciwciało specyficzne wobec tenascyny, korzystnie skierowane przeciwko fragmentowi A-D.
Pojemnik według wynalazku korzystnie zawiera dodatkowo oddzielne przeciwciało specyficzne wobec nowotworu.
Korzystnie, przeciwciało według wynalazku charakteryzuje się tym, że występuje zestawieniu z drugim przeciwciałem swoistym wobec tenascyny w teście podwójnego wiązania ELISA in vitro w warunkach, w których wspomniane drugie przeciwciało wiąże się z drugim epitopem antygenowym tenascyny, przy czym wspomniany test ELISA in vitro jest użyteczny do określania poziomu cyrkulującej tenascyny.
Innym przedmiotem wynalazku jest kompozycja farmaceutyczna zawierająca przeciwciało i/lub jego fragment według wynalazku charakteryzująca się tym, że zawiera przynajmniej jedną farmaceutycznie dopuszczalną zaróbkę i/lub nośnik.
Niniejszy wynalazek jest również poświęcony DNA kodującemu przeciwciało i jego fragmenty, wektorom zawierającym DNA, komórkom gospodarza zawierającym wektory, kodowanemu przez DNA białku o sekwencji SEQ ID NO: 1 i 2; DNA kodującemu białko i jego fragmenty, specyficznym regionom CDR i białkom zawierającym lub składającym się z regionów CDR.
Zgodnie z niniejszym wynalazkiem, w jednej z jego realizacji, wspomniane przeciwciało charakteryzuje się tym, że regiony zmienne łańcucha lekkiego i ciężkiego posiadają odpowiednio sekwencje: SEQ ID NO 1 i SEQ ID NO 2. Sekwencje te przedstawiono na Figurach 10 i 11. Dla uproszczenia,
PL 213 216 B1 korzystne przeciwciało według niniejszego wynalazku będzie określane skrótem ST2146. Mimo iż niniejszy wynalazek skupiony jest na ST2146, jako przykładowym dla niniejszego wynalazku, każdy specjalista posiadający standardową wiedzę w dziedzinie potwierdzi, iż posiadając niniejszy opis można otrzymać i stosować w duchu niniejszego wynalazku inne podobne przeciwciała, fragmenty przeciwciała ST2146, jak również fragmenty podobnych przeciwciał. Tego typu podobne przeciwciała mogą być otrzymane przy umiarkowanym nakładzie pracy doświadczalnej przez specjalistów w dziedzinie.
Dlatego też, w niniejszym wynalazku ujawniono przeciwciało lub fragment przeciwciała, lub przeciwciało chimeryczne (takie jak, na przykład, przeciwciało chimeryczne przeciwciała mysiego i ludzkiego), lub cząsteczki immunoglobuliny, które specyficznie wiążą tenascynę.
W niniejszym wynalazku przedstawiono przeciwciało lub fragment przeciwciała, lub przeciwciało chimeryczne, lub cząsteczki immunoglobuliny zawierające przynajmniej jeden z regionów: CDR części zmiennej łańcucha lekkiego ST2146 i/lub CDR części zmiennej łańcucha ciężkiego ST2146. Przeciwciało lub fragment przeciwciała, lub przeciwciało chimeryczne, lub cząsteczka immunoglobuliny według niniejszego wynalazku mogą być przeciwciałem, fragmentem Fv, fragmentem Fab, fragmentem F(ab)2, przeciwciałem jednołańcuchowym lub przeciwciałem multimerycznym. Przeciwciało lub fragment przeciwciała, lub przeciwciało chimeryczne, lub cząsteczka immunoglobuliny według niniejszego wynalazku mogą być cząsteczką IgM, IgD, IgG, IgA lub IgE.
W niniejszym wynalazku ujawniono przeciwciała lub fragmentu przeciwciała, lub przeciwciała chimerycznego, lub cząsteczki immunoglobuliny zawierających przynajmniej jedną z sekwencji o numerach identyfikacyjnych (SEQ ID NOs): 1, 2, 9, 11, 13, 15, 17 lub 19.
W niniejszym wynalazku ujawniono również sekwencje nukleotydowe kodujące sekwencje aminokwasowe według niniejszego wynalazku, takie jak SEQ ID NOs: 1, 2, 9, 11, 13, 15, 17 lub 19. Dlatego też, w niniejszym wynalazku przedstawiono sekwencję DNA kodujące przeciwciało lub fragment przeciwciała, lub przeciwciało chimeryczne, lub cząsteczkę immunoglobuliny według niniejszego wynalazku. Takie sekwencje DNA zawierają przynajmniej jedną sekwencję lub podsekwencję DNA wybraną spośród SEQ ID NO: 3, 4, 10, 21, 14, 16, 18 lub 20.
Kolejna część wynalazku jest poświęcona oczyszczonej cząsteczce kwasu nukleinowego kodującej przeciwciało lub fragment przeciwciała, lub przeciwciało chimeryczne, lub cząsteczkę immunoglobuliny będącą produktem niniejszego wynalazku. Cząsteczka kwasu nukleinowego kodująca immunoglobulinowy produkt wynalazku może zostać otrzymana z użyciem technik standardowych. Na przykład, oligonukleotydy mogą być syntetyzowane z użyciem syntetyzatorów oligonukleotydów i łączone razem tak, aby tworzyły funkcjonalną otwartą ramkę odczytu kodującą immunoglobulinowy produkt niniejszego wynalazku. Zsyntetyzowana cząsteczka kwasu nukleinowego może być wprowadzana do wektora DNA. Wektory DNA, takie jak plazmid, kosmid, fagemid, plazmid drożdżowy, wektory fagowe, plazmid TI i tym podobne, są znane w dziedzinie. Wektor może być wektorem ekspresyjnym. Wektory ekspresyjne i systemy ekspresyjne są komercyjnie dostępne u dostawców takich jak Stratagene (La Jolla, Kalif.).
Kolejna część wynalazku jest poświęcona komórce zawierającej kwas nukleinowy według wynalazku. Komórka może być otrzymana poprzez transfekcję. Metody transfekcji są znane, a zestawy do transfekcji komórek prokariotycznych i eukariotycznych mogą być uzyskane ze źródeł komercyjnych (np. Stratagene, La Jolla, Kalif.).
Kolejna część wynalazku jest poświęcona zastosowaniu przeciwciała lub fragmentu przeciwciała, lub przeciwciała chimerycznego, lub immunoglobulinowego produktu wynalazku jako środka używanego w wykrywaniu lub diagnozowaniu zaburzeń, obejmującym etapy kontaktu próbki tkanki pacjenta z wyżej wymienionymi w warunkach, w których możliwe jest utworzenie kompleksu pomiędzy wzmiankowanym przeciwciałem lub fragmentem przeciwciała, lub przeciwciałem chimerycznym, lub produktem immunoglobulinowym a antygenem tenascyny oraz oznaczania powstania wspomnianego kompleksu.
Kolejna część wynalazku jest poświęcona zastosowaniu przeciwciała lub fragmentu przeciwciała, lub przeciwciała chimerycznego, lub immunoglobulinowego produktu wynalazku lub kwasu nukleinowego według wynalazku do otrzymywania leku stosowanego w terapii chorób powodujących wytwarzanie tenascyny, w szczególności nowotworów. Metody immunoterapii nowotworów są znane. Patrz na przykład Old, L. J. Immunotherapy for Cancer, Scientific American, September 1996.
Kolejna część wynalazku jest poświęcona zestawowi terapeutycznemu zawierającemu przeciwciało lub fragment przeciwciała, lub przeciwciało chimeryczne, lub immunoglobulinowy produkt wynalazku.
PL 213 216 B1
Immunoglobulinowe produkty wynalazku mogą być dostarczane w formie zestawu zawierającego przeciwciało lub fragment przeciwciała, lub przeciwciało chimeryczne, lub produkt immunoglobulinowy oraz farmaceutycznie dostępny nośnik lub rozcieńczalnik. Zestaw terapeutyczny może być używany do leczenia zaburzeń u ssaków takich jak człowiek. Lek powinien być podawany ssakowi w terapeutycznie skutecznej dla niego dawce przeciwciała lub fragmentu przeciwciała, lub przeciwciała chimerycznego, lub immunoglobulinowego produktu wynalazku.
W ramach ich zastosowania w charakterze czynników terapeutycznych, przeciwciało lub fragment przeciwciała, lub przeciwciało chimeryczne, lub immunoglobulinowy produkt wynalazku mogą być połączone z substancją aktywną. Połączenie może mieć postać wiązań kowalencyjnych lub wiązań przeciwciało-epitop. Na przykład, przeciwciało lub fragment przeciwciała, lub przeciwciało chimeryczne, lub produkt immunoglobulinowy mogą być połączone krzyżowo z drugim przeciwciałem, przy czym drugie przeciwciało może wykazywać powinowactwo do czynnika aktywnego. Substancja aktywna może być środkiem cytotoksycznym. W znaczeniu tu używanym, określenie „środek cytotoksyczny” odnosi się do substancji, która hamuje lub zapobiega funkcjonowaniu komórek i/lub powoduje ich rozpad. Termin ten ma w zamierzeniu obejmować izotopy radioaktywne (np. I, Y, Pr), czynniki chemoterapeutyczne, toksyny, takie jak enzymatycznie aktywne toksyny pochodzenia bakteryjnego, grzybowego, roślinnego lub zwierzęcego, lub ich fragmenty. Substancja aktywna może być czynnikiem chemoterapeutycznym. Czynnik chemoterapeutyczny jest związkiem chemicznym stosowanym w leczeniu nowotworów. Do przykładowych czynników chemoterapeutycznych należą: Adriamycyna, Doksorubicyna, 5-Fluorouracyl, Arabinozyd cytozyny („Ara-C”), Cyklofosfamid, Tiotepa, Busulfan, Cytoksan, Taksol, Metotreksat, Cisplatyna, Melfalan, Winblastyna, Bleomycyna, Etopozyd, Ifosfamid, Mitomycyna C, Mitoksantron, Winkrystyna, Winorelbina, Karboplatyna, Tenipozyd, Daunomycyna, Karminomycyna, Aminopteryna, Daktynomycyna, Mitomycyny, Esperamycyny (patrz U.S. Pat. No. 4,675,187), Melfalan i tym podobne iperyty azotowe. Substancja aktywna może być cytokiną. Termin cytokina jest ogólnym określeniem białek uwalnianych przez pewną populację komórek, które oddziałują na inną komórkę jako przekaźniki międzykomórkowe. Przykładowymi cytokinami tego typu są limfokiny, monokiny oraz tradycyjne hormony polipeptydowe. Do cytokin zalicza się hormony wzrostu, takie jak: ludzki hormon wzrostu, N-metionylowany ludzki hormon wzrostu, bydlęcy hormon wzrostu; hormon przytarczyc; tyroksyna; insulina; proinsulina; relaksyna; prorelaksyna; hormony glikoproteinowe, takie jak: hormon folikulotropowy (FSH), tyreotropina (TSH), hormon luteinizujący (LH); wątrobowy czynnik wzrostu; czynnik wzrostu fibroblastów; prolaktyna; laktogen łożyskowy; czynnik martwicy nowotworów; substancja hamująca Mullera; mysi peptyd związany z gonadotropiną; inhibina; aktywina; naczyniowo-śródbłonkowy czynnik wzrostu; integryna; trombopoetyna (TPO); czynniki wzrostu nerwów, takie jak NGF; płytkowy czynnik wzrostu; transformujące czynniki wzrostu (czynniki TGF); insulinopodobne czynniki wzrostu I i II; erytropoetyna (EPO); czynniki osteoinduktywne; interferony, takie jak: interferon-alfa, -beta i -gamma, czynniki pobudzające powstawanie kolonii (czynniki CSF); granulocytarno-makrofagowy CSF (GM-CSF) oraz granulocytarny CSF (G-CSF); interleukiny (IL), takie jak IL-1, IL-1.alfa., IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-11, IL-12, czynnik martwicy nowotworów oraz inne czynniki polipeptydowe, włączając LIF oraz zestaw ligandu (KL). W stosowanym w niniejszym opisie znaczeniu, określenie cytokina obejmuje białka pochodzące ze źródła naturalnego lub z rekombinowanych kultur komórkowych oraz biologicznie aktywne odpowiedniki cytokin o sekwencji natywnej.
Do celów diagnostycznych, przeciwciało lub fragment przeciwciała, lub przeciwciało chimeryczne, lub produkt immunoglobulinowy według wynalazku, mogą być połączone ze znacznikiem, takim jak wykrywalny związek lub zestawienie sprzężone bezpośrednio lub pośrednio z przeciwciałem. Znacznik może być wykrywalny jako taki (np. znaczniki radioizotopowe lub fluorescencyjne) lub, w przypadku znacznika enzymatycznego, może katalizować wykrywalną chemiczną modyfikację związku lub kompozycji stanowiących substrat.
Wynalazek dotyczy również wytwarzania mutantów przedstawionych regionów CDR poprzez wymianę jednego lub więcej aminokwasów w sekwencji regionów CDR. Wiadomo, że podstawienie pojedynczego aminokwasu w odpowiednim miejscu regionu CDR może być wystarczające do zwiększenia powinowactwa. Techniką ukierunkowanej mutagenezy uzyskano około 10-krotny przyrost powinowactwa niektórych produktów immunoglobulinowych. Opisana metoda zwiększania lub zmniejszania powinowactwa przeciwciał za pomocą wprowadzania mutacji w regionach CDR jest powszechnie znana (patrz np.: Rozdział 23, Paul, W. E., Fundamental Immunology, Raven Press, NY, N.Y. 1993). Stąd też wymiana, usunięcie lub wprowadzenie aminokwasów w regionach CDR według wynalazku,
PL 213 216 B1 mające na celu zwiększenie lub zmniejszenie powinowactwa lub specyficzności oddziaływania, objęte jest również zakresem niniejszego wynalazku. Kolejnym aspektem niniejszego wynalazku jest zapewnienie środka służącego do leczenia osobnika cierpiącego na nowotwór taki jak: nowotwory torbielowate mózgu, glejaki, nowotwory sutka, płuc, włókniakomięsaki oraz nowotwory płaskokomórkowe, obejmujące podawanie podmiotowi ludzkiemu dotkniętemu nowotworem, takim jak nowotwór torbielowaty mózgu (np. wytwarzający tenascynę), przeciwciała, fragmentu przeciwciała, przeciwciała chimerycznego lub immunoglobulinowego produktu niniejszego wynalazku, które wiąże się z tenascyną w ilości skutecznej terapeutycznie. Etap podawania może być przeprowadzony poprzez umieszczenie przeciwciała w jamie nowotworu.
Niniejszy wynalazek dotyczy również metody leczenia guza litego, obejmującej w pierwszym etapie usunięcie guza litego (np. wytwarzającego tenascynę) ze zbudowanego z tkanki litej organu (np. mózgu) podmiotu ludzkiego dotkniętego nowotworem; następnie utworzenie w organie podmiotu ograniczonej jamy po resekcji w miejscu, z którego usunięto guz lity; a następnie podawanie podmiotowi czynnika przeciwnowotworowego, takiego jak przeciwciało, fragment przeciwciała, przeciwciało chimeryczne lub immunoglobulinowy produkt niniejszego wynalazku (np. przeciwciało wiążące się do tenascyny), który jest w ilości terapeutycznie skutecznej selektywnie toksyczny dla komórek guza litego. W jednej z postaci niniejszego wynalazku etap podawania przeprowadza się poprzez umieszczenie czynnika przeciwnowotworowego w jamie resekcyjnej.
Kolejnym przedmiotem niniejszego wynalazku są fragmenty proteolityczne wspomnianego przeciwciała wiążące się z epitopem antygenowym należącym do powtórzeń typu EGF ludzkiej tenascyny C. W ramach opisu niniejszego wynalazku, fragmentami przeciwciała określa się fragmenty wiążące się z epitopem antygenowym należącym do powtórzeń typu EGF ludzkiej tenascyny C.
W kolejnej realizacji niniejszego wynalazku przeciwciało i jego fragmenty mogą również zawierać dodatkowe znaczniki i/lub czynniki diagnostyczne. Wzmiankowane znaczniki i/lub czynniki diagnostyczne są dobrze znane specjaliście w dziedzinie, której poświęcony jest niniejszy wynalazek.
W korzystnej realizacji niniejszego wynalazku wspomniane przeciwciało lub jego proteolityczne fragmenty są biotynylowane.
Innym przedmiotem niniejszego wynalazku jest linia komórek hybrydoma, nazywana tu cST2146, wytwarzająca wspomniane przeciwciała.
Linię komórek hybrydoma zdeponowano w Centrum Zaawansowanych Biotechnologii, L.go Rosanna Benzi, 10 16132 w Genui, we Włoszech w dniu 29 stycznia 2002 r. na mocy postanowień Traktatu Budapeszteńskiego i uzyskała ona numer dostępu PD02003.
Niniejszy wynalazek obejmuje również DNA kodujący przeciwciało lub jego fragmenty, specyficzne regiony CDR oraz białka zawierające lub składające się z regionów CDR, wektory zawierające wspomniany DNA oraz komórki gospodarza zawierające wspomniane wektory.
Innym przedmiotem niniejszego wynalazku są rekombinowane pochodne wspomnianego przeciwciała. W szczególności, korzystnymi rekombinowanymi pochodnymi są te, w których mysi region stały został zastąpiony odpowiednikiem ludzkim (Ferrer C. et al., J. Biotechnol. 52: 51-60, 1996) lub te, w których mysi region stały został zastąpiony cząsteczką o aktywności biologicznej, taką jak na przykład białko z rodziny awidyny (Manuel L. et al., J. Immunol., 163, 4421-4426, 1999), czynnik wzrostu używany do stymulowania efektorów immunologicznych skierowanych przeciw nowotworowi (taki jak, na przykład G-CSF, GM-CSF), lub takich, w których mysi region stały został zastąpiony cząsteczką o aktywności farmakologicznej, taką jak na przykład toksyna, superantygen, cytokina lub jakiekolwiek inne białko stosowane do zwiększania skuteczności terapii przeciwnowotworowej (Di Massimo A.M. et al, British J. Cancer 75(6):822-828, 1997; Parente D. et al, Anticancer Research 17(6A):4073-4074, 1997). Metody otrzymywania wspomnianych pochodnych rekombinowanych są dobrze znane w dziedzinie.
Kolejnym przedmiotem niniejszego wynalazku są sprzężone pochodne (koniugaty) wspomnianego przeciwciała.
W szczególności, korzystnymi pochodnymi sprzężonymi są takie, w których cząsteczka biologicznie aktywna jest połączona z przeciwciałem za pomocą standardowych metod. Przykładowymi cząsteczkami biologicznie aktywnymi są: białko z rodziny awidyny, czynnik wzrostu używany do stymulowania efektorów immunologicznych skierowanych przeciw nowotworowi (taki jak np. G-CSF, GM-CSF), cząsteczki farmakologicznie aktywne, takie jak na przykład toksyna, superantygen, cytokina lub jakiekolwiek inne białko stosowane do zwiększania skuteczności terapii przeciwnowotworowej, leki przeciwnowotworowe, radioizotopy.
PL 213 216 B1
Według niniejszego wynalazku, rekombinowane lub sprzężone pochodne monoklonalnego przeciwciała przeciwko ludzkiej tenascynie lub jego fragmentów są również określane jako „pochodne”.
W szczególnie korzystnej realizacji niniejszego wynalazku, obok przeciwciała i jego fragmentów, również ich pochodne są biotynylowane.
Dalszym przedmiotem niniejszego wynalazku jest linia komórek hybrydoma wytwarzająca zdefiniowane wyżej przeciwciało. Wspomniana linia hybrydoma została zdeponowana w Centrum Zaawansowanych Biotechnologii, L.go Rosanna Benzi, 10 16132, w Genui, we Włoszech, w dniu 29 stycznia 2002 r. na mocy postanowień Traktatu Budapeszteńskiego, pod numerem dostępu PD02003.
Jako kolejny przedmiot niniejszego wynalazku przedstawiono proces otrzymywania przeciwciała monoklonalnego, który to proces obejmuje hodowlę powyższej linii komórek hybrydoma oraz izolację przeciwciał.
Kolejnym przedmiotem niniejszego wynalazku jest zastosowanie monoklonalnych przeciwciał przeciw ludzkiej tenascynie do otrzymywania środka używanego w terapii choroby powodującej wytwarzanie tenascyny, w szczególności nowotworu.
Lista przykładowych, ale nie wyłącznych, chorób powodujących wytwarzanie tenascyny obejmuje: glejaki, nowotwory sutka i płuc, wlókniakomięsaki oraz nowotwory płaskokomórkowe.
Dalszym aspektem niniejszego wynalazku jest środek używany w radioimmunoterapii nowotworów, który jest podawany podmiotowi cierpiącemu na nowotwór wytwarzający tenascynę i zawiera wspomniane przeciwciało monoklonalne lub jego fragmenty proteolityczne, lub pochodne. W korzystnej realizacji, wspomniane przeciwciało monoklonalne lub jego fragmenty proteolityczne, lub pochodne są biotynylowane, w bardziej korzystnej postaci środek jest właściwy do radioimmunoterapii, w szczególności do zastosowania w metodzie trzyetapowego wstępnego ukierunkowania, jak opisano w pracach z tej dziedziny, na przykład w EP 0 496 074, European Journal od Nuclear Medicine Vol.26, No 4; April 1999; 348-357 oraz US 5,968,405. W tej ostatniej postaci, środek według niniejszego wynalazku powinien mieć postać zestawu, przy czym wspomniany zestaw składa się z 5 ampułek, z których pierwsza ampułka zawiera biotynylowane przeciwciało lub jego fragment, lub pochodną, druga ampułka zawiera awidynę, trzecia ampułka zawiera biotynylowaną albuminę, czwarta ampułka zawiera streptawidynę, piąta ampułka zawiera znakowaną izotopowo biotynę lub pochodną biotyny. Przykładowy zestaw tego typu przedstawiono w European Journal of Nuclear Medicine Vol.26, No 4; April 1999; 348-357. Termin awidyna obejmuje awidynę, streptawidynę, PEG-awidynę, PEG-streptawidynę, di- lub poliawidynę, bądź też di- lub polistreptawidynę. Znakowana izotopowo biotyna zawiera nuklid promieniotwórczy, taki jak opisane w EP 0 496 074, w korzystnej postaci 90Y. Pochodne biotyny opisane zostały na przykład w WO 02/066075. Zestaw tego typu ujawniono w European Journal of Nuclear Medicine Vol.26, nr 4; kwiecień 1999; 348-357. W korzystnej postaci, fiolki są odpowiednie do podawania zastrzyków ludziom.
Rekombinowane pochodne przeciwciała według niniejszego wynalazku, jak również ich koniugaty, są także konwencjonalnie stosowane w terapii przeciwnowotworowej. Mimo iż przeciwciało według niniejszego wynalazku, jak również jego fragmenty, pochodne i koniugaty, są odpowiednie do zastosowania w leczeniu nowotworów związanych z tenascyną, w szczególności do immunoterapii, korzystną realizacją niniejszego wynalazku jest radioimmunoterapia.
Kolejnym przedmiotem niniejszego wynalazku jest specjalny pojemnik, w korzystnej realizacji w postaci fiolki odpowiedniej do zastrzyków, zawierającej przeciwciało lub jego fragmenty w formie biotynylowanej.
W innej postaci niniejszego wynalazku, biotynylowane przeciwciało w zestawie terapeutycznym jest w kombinacji z innymi przeciwciałami specyficznymi wobec tenascyny, w korzystnej realizacji skierowanymi przeciwko fragmentowi A-D. Alternatywnie, biotynylowane przeciwciało jest w kombinacji z innymi przeciwciałami specyficznymi wobec nowotworów. Ogólnych wiadomości na temat tego typu zestawów dostarczono w EP 0 496 074, European Journal od Nuclear Medicine Vol.26. nr 4; kwiecień 1999; 348-357 oraz US 5,968,405.
W szczególności, niniejszy wynalazek obejmuje również pojemnik, opcjonalnie podzielony na wiele części, zawierający biotynylowane przeciwciało lub jego fragmenty, lub pochodne, bufory oraz odczynniki odpowiednie do zastosowania w zestawie terapeutycznym do trzyetapowej metody wstępnego ukierunkowania.
Innym przedmiotem niniejszego wynalazku jest zastosowanie wspomnianego przeciwciała monoklonalnego lub jego fragmentów, lub rekombinowanych pochodnych, lub koniugatów, lub ich biotyPL 213 216 B1 nylowanych pochodnych do otrzymywania środków diagnostycznych do wykrywania chorób powodujących wytwarzanie tenascyny, w szczególności do obrazowania nowotworów in vivo.
W szczególnej postaci niniejszego wynalazku, wspomniane przeciwciało monoklonalne lub jego fragmenty lub pochodne są stosowane w zestawieniu z drugim przeciwciałem specyficznym wobec tenascyny w teście podwójnego wiązania (ang. sandwich assay) do otrzymywania zestawu diagnostycznego do określania poziomu pozostającej w obiegu tenascyny. Testem podwójnego wiązania jest na przykład test ELISA in vitro w warunkach, w których wspomniane drugie przeciwciało wiąże się z drugim epitopem antygenowym tenascyny, przy czym wspomniany test ELISA in vitro może być stosowany do określania poziomu pozostającej w obiegu tenascyny.
Zestawy diagnostyczne i terapeutyczne zawierające przeciwciało lub jego fragmenty, lub pochodne są kolejnym przedmiotem niniejszego wynalazku.
Te i inne aspekty niniejszego wynalazku wyjaśniono szczegółowo w poniższym opisie, jak również w przykładach i na figurach.
Krótki opis figur
Figura 1: przedstawiono schematyczny obraz ludzkiej tenascyny C, rekombinowanych fragmentów antygenowych i odpowiadających im reagentów, jak również procedury zastosowanej do otrzymywania przeciwciała typu BC-4.
Figura 2: przedstawiono potwierdzenie zmienności łańcucha ciężkiego o glikozydowym charakterze ST2146 poprzez trawienie przeciwciała przy pomocy neuraminidazy.
Figura 3: przedstawiono ogólną homogenność ST2146 w stosunku do BC4.
Figura 4: przedstawiono wyniki techniki Western blot wiązania ST2146 z epitopem ludzkiej tenascyny porównanym z epitopem antygenowym BC4 (ścieżka D jest pusta).
Figura 5: przedstawiono kompetycyjny test ELISA, w którym ST2146 silnie konkuruje z BC4 podczas wiązania ludzkiej tenascyny, natomiast ST2077 wykazuje jedynie częściową kompetycyjność. ST2077 jest przeciwciałem monoklonalnym swoistym wobec tenascyny uzyskanym metodą otrzymywania ST2146. ST2077 wykazuje swoistość podobną do ST2146 (region powtórzeń typu EGF ludzkiej tenascyny), ale jest skierowane przeciwko epitopowi antygenowemu, który jedynie częściowo nakłada się z epitopem BC4/ST2146.
Figura 6: przedstawiono immunoreaktywność ST2146 w teście ELISA, w porównaniu z pikiem BC4 dla pełnej aktywności.
Figura 7: przedstawiono protokół analizy biodystrybucji ST2146.
Figura 8: przestawiono biodystrybucję ST2146 w porównaniu z BC4 (biot=biotynylowany; IR= Immunoreaktywność wyrażona jako ilość przeciwciała do otrzymania 1.0 O.D. w teście ELISA).
Figura 9: przedstawiono rozkład nowotwór/tkanka nienowotworowa dla ST2146 w porównaniu z BC4.
Figura 10: przedstawiono sekwencję części zmiennej łańcucha lekkiego (VL) ST2146 (SEQ ID NO: 1 (aminokwasową pełnej długości), 3 (DNA kodującego sekwencję aminokwasową), 9 (aminokwasową CDR1 łańcucha lekkiego), 10 (DNA CDR1 łańcucha lekkiego), 11 (aminokwasową CDR2 łańcucha lekkiego), 12 (DNA CDR2 łańcucha lekkiego). 13 (aminokwasową CDR3 łańcucha lekkiego), 14 (DNA CDR3 łańcucha lekkiego), 21 (DNA pełnej długości)).
Figura 11: przedstawiono sekwencję części zmiennej łańcucha ciężkiego (VH) ST2146 (SEQ ID NO: 2 (aminokwasową pełnej długości), 4 (DNA kodującego sekwencję aminokwasową), 15 (aminokwasową CDR1 łańcucha ciężkiego), 16 (DNA CDR1 łańcucha ciężkiego), 17 (aminokwasową CDR2 łańcucha ciężkiego), 18 (DNA CDR2 łańcucha ciężkiego), 19 (aminokwasową CDR3 łańcucha ciężkiego), 20 (DNA CDR3 łańcucha ciężkiego), 22 (DNA pełnej długości)).
Szczegółowy opis wynalazku
ST2146 jest otrzymywane z odpowiedniego klonu komórek hybrydoma cST2146, jak przedstawiono szczegółowo w poniższym przykładzie.
Odnośnie przemysłowych aspektów niniejszego wynalazku, przeciwciało przedstawione w niniejszym wynalazku powinno być odpowiednio przygotowane w kompozycjach farmaceutycznych lub zestawach diagnostycznych, jakie zazwyczaj stosuje się w dziedzinie.
Kompozycje farmaceutyczne są konwencjonalnie stosowane w dziedzinie i mogą być otrzymane przez specjalistę w oparciu o wiedzę ogólną. Przykłady kompozycji farmaceutycznych ujawniono w odnośnikach wspomnianych w niniejszym wynalazku. To samo stosuje się do zestawów diagnostycznych. Szczególnie korzystny zestaw do radioimmunoterapii nowotworów przedstawiono we wspomnianych powyżej pracach Paganellego et al. oraz EP 0 496 074.
PL 213 216 B1
Kompozycje farmaceutyczne zawierające przeciwciało i/lub jego fragment i/lub rekombinowaną pochodną i/lub jego koniugat z domieszką przynajmniej jednej farmaceutycznie dopuszczalnej zaróbki lub nośnika włączone są w zakres niniejszego wynalazku.
W poniższym przykładzie szerzej zilustrowano niniejszy wynalazek.
P r z y k ł a d 1
W celu otrzymania nowego klonu komórek hybrydoma wykazujących specyficzność BC4, ale nie ekspresjonujących niefunkcjonalnego łańcucha lekkiego, myszy Balb/c immunizowano lizatem fagów pTn28 E. coli. pTn28 jest rekombinowanym klonem Xgt11 kodującym fragment powtórzenia typu EGF ludzkiej tenascyny zawierającym, jak uprzednio wykazano, epitop BC4 (Balza E. et al., 1993). Schematyczny obraz ludzkiej tenascyny C, rekombinowanych fragmentów antygenowych i odpowiadających im reagentów, jak również procedury używanej do otrzymywania przeciwciał typu BC-4 przedstawiono na figurze 1. Limfocyty śledzionowe immunizowane pTn28 poddawano fuzji z nieproduktywnymi komórkami szpiczakowymi Sp2/0Ag14 za pomocą standardowych metod (Cianfriglia M. et al.. Methods Enzymol. 121:193210, 1986), a populację komórek hybrydoma przeszukiwano stosując test ELISA z użyciem tenascyny oczyszczonej z SK-MEL-28 (linia ludzkich komórek czerniaka). Komórki hybrydoma swoiste wobec tenascyny namnażano metodą ograniczających rozcieńczeń dwa razy w pożywce zawierającej FCS i trzy razy w pożywce pozbawionej białka (Pożywka WolR na od Składników Pochodzenia Zwierzęcego, HyClone, HyQR Perbio). Do otrzymania Banku Komórek Macierzystych (MCB) oraz Banku Komórek Roboczych (WCB) cST2146 wybrano ostatecznie podklon cST2146/D3d/F6e.
Materiał odnośnikowy ST2146 otrzymywano w wyniku hodowli komórek hybrydoma cST2146 w Bioreaktorze 2L, a stabilność Poprodukcyjnego Banku Komórek cST2146 (PPCB) potwierdzono za pomocą analizy FACS oraz ograniczających rozcieńczeń.
ST2146 jest mysią immunoglobuliną o izotypie IgG2b/k.
ST2146 okazało się być homogenne pod względem składu łańcucha lekkiego, co wykazano za pomocą analizy SDS-PAGE w warunkach redukujących, która wykazała również pewien stopień heterogenności łańcucha ciężkiego. Obserwacja ta była zgodna ze zmiennością O-glikozylacji, opisaną wcześniej dla mysiego izotypu IgG2b (Kim H. et al, J. Biol. Chem. 269(16): 12345-12350, 1994). Układ prążków łańcucha ciężkiego ST2146 był zgodny dla trzech różnych partii otrzymanych z pożywki hodowlanej zawierającej FCS lub pożywki pozbawionej białka. Potwierdzenie glikozydowego charakteru zmienności łańcucha ciężkiego ST2146 uzyskano poprzez trawienie przeciwciała z użyciem neuraminidazy. Bufor zawierający ST2146 wymieniono na 10 mM bufor fosforanowy zawierający 150 mM NaCl, pH 6.4 za pomocą kolumny odsalającej HiTrap (Amersham-Pharmacia). Mab zagęszczono z użyciem filtrów Centricon 100 000 MWCO (Millipore) do ostatecznego stężenia około 1 mg/ml i trawiono stosując 1.5 U/ml neuraminidazy (Sigma) przez 24 godziny w 37°C. Próbki poddawano elektroforezie w 12% żelu poliakrylamidowym. Barwienie żelu wykonywano przy pomocy Coomasie Brilliant Blue. Zgodnie z przypuszczeniami, trawienie prowadziło do eliminacji prążka o wyższej masie molowej (Figura 2). Ogólną homogenność ST2146 potwierdzono również przy użyciu chromatografii hydroksyapatytowej, która wykazała obecność pojedynczego piku dla ST2146, w odróżnieniu od trzech pików obserwowanych dla BC4 (Figura 3, pik 3 odpowiada w pełni funkcjonalnemu BC4).
ST2146 wiąże się z epitopem ludzkiej tenascyny bardzo bliskim, jeżeli nie identycznym z antygenowym epitopem BC4, co wykazano przy pomocy techniki Western Blot (Figura 4) oraz testu kompetycyjnego ELISA (Figura 5). Na Figurze 5 przedstawiono doświadczenie, w którym biotynylowane BC4 mieszano z dodawanymi we wzrastającym stężeniu BC4, ST2077 lub ST2146 w charakterze związków kompetycyjnych i nakładano na płytki opłaszczone tenascyną. Oddziaływanie mierzono po dodaniu HRP-streptawidyny i odpowiedniego substratu do reakcji barwnej. ST2077 jest przeciwciałem rozpoznającym epitop tenascyny należący do powtórzeń typu EGF, nakładający się częściowo z epitopem BC4.
Immunoreaktywność ST2146 określano przy pomocy testu ELISA w porównaniu ze pikiem dla w pełni aktywnego BC4 (pik 3). Wyniki na Figurze 6 dowodzą, że ilość ST2146 niezbędna do otrzymania 1.0 OD w teście ELISA przy optymalnym stężeniu antygenu (wykres A) jest około 20 razy niższa niż ilość w pełni reaktywnego BC4 (pik 3) i około 100 razy niższa niż ilość BC4. Różnica ta bardzo znacznie wzrasta w warunkach ograniczonego dostępu antygenu, jak widać na wykresie B, na którym jedynie ST2146 zachowuje dobrą immunoreaktywność.
PL 213 216 B1
Powinowactwo ST2146 określano przy pomocy BIAcore. Wartość KD dla ST2146 wynosiła
1.4x10-9 (Ka 3.0x105; kd 4.1x10-4). Powinowactwo ST2146 porównano z BC4, który wykazuje KD równą 4.9x10-9 (Ka 1.9x105; kd 9.3x10-4).
Zachowywanie immunoreaktywności po biotynylacji jest podstawową cechą przeciwciała monoklonalnego, które ma być stosowane do wstępnego ukierunkowania. W celu określenia właściwości biotynylowanego ST2146, testowano różne wartości stosunku przeciwciało:biotyna, a immunoreaktywność biotynylowanego przeciwciała mierzono przy pomocy testu ELISA w porównaniu do BC4 i ST1897, z których to ostatnie jest monoklonalnym przeciwciałem specyficznym wobec tenascyny o niższym powinowactwie. Wyniki przedstawione w tabeli 1 dowodzą, iż niski poziom biotynylacji (2-3 biotyn/mol) nieznacznie wpływa na immunoreaktywność przeciwciał monoklonalnych niezależnie od ich powinowactwa. Wyższy stopień biotynylacji, do 20 biotyn/mol, jest związany ze spadkiem immunoreaktywności. Ten spadek jest tym wyższy im niższe jest powinowactwo przeciwciała.
T a b e l a 1
Analiza biotynylacji ST2146
% Immunoreaktywności Liczba mol biotyny/przeciwciała
Mab Powinowactwo (nM) 2-3 3.5-5 7-10 15-20
ST1897 10 84.8+/-1.3 62.3+/-12.4 26.65+/-13.8 9.45+/-9.26
BC4 4.9 82.4+/-11.5 74.4+/-9.3 67.2+/-12.3 12.6
ST2146 1.4 100 89.6+/-4.39 77.63+/-8.59 52.37+/-3.95
% immunoreaktywności jest średnią z 2-3 niezależnych eksperymentów +/- odchylenie standardowe.
Powinowactwo biotynylowanego ST2146 mierzono przy pomocy BIAcore i było ono w znacznym stopniu zachowane niezależnie od ilości przyłączonych cząsteczek biotyny. Immunohistochemia różnych nowotworów (piersi, gleju, okrężnicy) wykazała podobną selektywność BC4 i ST2146.
Analiza farmakologicznego zachowania biotynylowanego ST2146 miała na celu określenie jego zdolności do lokalizowania nowotworu. Badania biodystrybucji biotynylowanych przeciwciał ST2146 125 oraz BC4 znakowanych 125I, przeprowadzano u nagich myszy, którym wszczepiano ludzki nowotwór wytwarzający tenascynę, według protokołu przedstawionego na Figurze 7. Myszom podawano podskórnie 4x106 komórek ludzkiego nowotworu okrężnicy HT29 w 0.1 ml sterylnego roztworu. Po 15 dniach, kiedy masa nowotworu wynosiła około 100 mg, grupie 5 myszy podawano dożylnie znakowa125 ne przy pomocy 125I BC4, ST2146 lub normalne mysie przeciwciała (nMIg), w stężeniach 10, 2, 0.5 lub
0.1 μg/mysz w 0.1 ml sterylnego PBS. Wszystkie przeciwciała były biotynylowane (7-10 biotyny/mol), przy czym zarówno biotynylowane przeciwciała monoklonalne (Mabs) ST2146, jak i BC4 wykazywały immunoreaktywność wynoszącą około 80%.
Każde ze zwierząt otrzymało następującą ilość CPM:
Dawka BC4 ST2146 NMIg
10 μg 632.000 570.000 577.000
2 μg 555.000 639.000 624.000
0.5 μg 310.000 401.000 382.000
0.1 μg 186.000 211.000 174.000
Wyniki przedstawione na Figurze 8 wskazują, że zarówno BC4, jak i ST2146 specyficznie lokalizują masę nowotworu. Ilość obu przeciwciał w miejscu nowotworu (wyrażana jako % wstrzykiwanej dawki/gram tkanki) jest zależna od dawki, z tendencją do wyższej akumulacji ST2146. Co więcej, ST2146 wykazuje lepszy niż BC4 rozkład nowotwór/tkanka nienowotworowa, co przedstawiono na
Figurze 9.
Region zmienny łańcucha lekkiego kappa powielano z cyklizowanego cDNA przy użyciu dwóch starterów (5'-TGTCAAGAGCTTCAACAGGA (SEQ ID NO:5), 5'-AAGATGGATACAGTTGGTGC (SEQ ID NO:6)), które łączą się z rejonem stałym przeciwciała jak opisano w M Sassano et al. Nucl. Ac. Res. (1994) 22, 1768-1769.
PL 213 216 B1
Region zmienny łańcucha ciężkiego gamma powielano z cyklizowanego cDNA przy użyciu następujących starterów: mysi oligonukleotyd Y2bCH1 GTCACTGACTCAGGGAAGTAGCC (SEQ ID NO:7), mysi oligonukleotyd Y2bCH3 GCAACGTGAGACACGAGGGTCTG (SEQ ID NO:8), które łączą się z rejonem stałym przeciwciała jak opisano w M. Sassano et al. Nucl Ac. Res. (1994) 22, 1768-1769.
PCR prowadzono w następujących warunkach: 1 min w 94°C, 1.5 min w 60°C, 2 min, w 72°C, w 30 cyklach.
Powielone fragmenty wprowadzano bezpośrednio do plazmidu pUC18 trawionego za pomocą Smal. Dwa klony zawierające regiony zmienne łańcucha lekkiego kappa i cztery klony zawierające regiony zmienne łańcucha ciężkiego gamma poddano sekwencjonowaniu.
Sekwencjonowanie wykonano w MWG Biotech, Niemcy. Zsekwencjonowano obie nici.
Nie stwierdzono żadnych niejednoznaczności.
Na Figurze 10 przedstawiono sekwencję części zmiennej łańcucha lekkiego (VL) ST2146
Na Figurze 11 przedstawiono sekwencję części zmiennej łańcucha ciężkiego (VH) ST2146
Ogólna analiza porównawcza ST2146 w odniesieniu do BC4 wskazuje, iż ST2146 posiada następującą charakterystykę:
- przeciwciało monoklonalne typu BC4 pod względem specyficzności epitopowej;
- homogenne pod względem składu łańcucha ciężkiego i lekkiego;
- heterogenne pod względem glikozylacji łańcucha ciężkiego;
- przewyższa BC4 pod względem immunoreaktywności, jak przewidywano na podstawie heterogenności BC4;
- przewyższa BC4 w przybliżeniu trzykrotnie pod względem powinowactwa;
- przewyższa BC4 pod względem zachowywania immunoreaktywności po biotynylacji;
- podobne do BC4 pod względem selektywności i immunohistochemii;
- przewyższa BC4 pod względem zdolności do lokalizowania nowotworu.
LISTA ODNOŚNIKÓW LITERATUROWYCH
Balza E., Siri A., Ponassi M., Caocci F., Linnala A., Virtanen I., Zardi L. Production and characterization of monoclonal antibodies specific for different epitopes of human tenascin. FEBS 332:39-43, 1993.
Chinol M., Casalini P., Maggiolo M., Canevari S., Omodeo E.S., Caliceti P., Veronese F.M., Cremonesi M., Chiolerio F., Nardone E., Siccardi A.G., Paganelli G. Biochemical modifications of avidin improve pharmacokinetics and biodistribution, and reduce immunogenicity. British Journal of Cancer 78(2): 189-197, 1998.
Cianfriglia M., Mariani M., Armellini D., Massone A., Lafata M., Presentini L. and Antoni G. Methods for high frequency production of soluble antigen-specific hybridomas; specificities and affinities of monoclonal antibodies obtained. Methods Enzymol 121:193210, 1986.
Cremonesi M., Ferrari M., Chinol M., Stabin M. G., Grana C., Prisco G., Robertson C., Tosi G., Paganelli G. Three-step radioimmunotherapy with yttrium-90 biotin: dosimetry and pharmacokinetics in cancer patients. Eur J Nucl Med 26(2): 110-120, 1999.
Di Massimo AM., Di Loreto M., Pacilli A., Raucci G., D'Alatri L., Mele A., Bolognesi A., Polito L., Stirpe F. and De Santis R. Immunoconjugates made of an anti EGF-receptor Monoclonal Antibody and Type 1 RIPs from Saponaria ocymoides or Vaccaria pyramidata. British J. Cancer 75(6):822-828, 1997
Parente D., D'Alatri L., Di Massimo AM., Saccinto MP., Novelli S., Pacilli A., Mele A. and De Santis R. Production and in vitro characterization of a recombinant immunotoxin made of a single chain anti-EGF receptor antibody and a type ribosome-inactivating protein (RIP) from filamentous fungus Aspergillus clavatus. Anticancer Research 17(6A):4073-4074, 1997
Kim H, Yamaguchi Y, Masuda K, Matsunage C, Yamamoto K, Irimura T, Takahashi N, Kato K, Arata Y. O-glycosylation in hinge region of mouse immunoglobulin G2b. J Biol Chem 269(16):12345 -12350, 1994.
Ferrer C., Anastasi A.M., Di Massimo A.M., Bullo A., Di Loreto M., Raucci G., Pacilli A., Rotondaro L., Mauro S., Mele A., De Santis R. Expression and characterization of a mouse/human chimeric antibody specific for EGF receptor. J. Biotechnol. 52: 51-60, 1996
Manuel L. Penichet,* Young-Sook Kang, | William M. Pardridge, φ Sherie L. Morrison,* and Seung-Uon Shin. An Antibody-Avidin Fusion Protein Specific for the Transferrin Receptor serves as a
PL 213 216 B1
Delivery Vehicle for Effective Brain Targeting: Initial Applications in Anti-HIV Antisense Drug Delivery to the Brain 1. J Immunol 163: 4421-4426, 1999.
Paganelli G., Grana C., Chinol M., Cremonesi M., De Cicco C., De Braud F., Robertson C., Zurrida S., Casadio C., Zoboli S., Siccardi A. G., Veronesi U. Antibody-guided three step therapy for high grade glioma with yttrium-90 biotin. Eur J Nucl Med 26(4):348-357, 1999.
Paganelli G., Bartolomei M., Ferrari M., Cremonesi M., Broggi G., Maira G., Sturiale C., Grana C., Prisco G., Gatti M., Caliceti P., Chinol M. Pre-targeted locoregional radioimmunotherapy with 90Y-biotin in glioma patients: Phase I study and preliminary therapeutic results. Cancer Biother & Radiopharm 16(3): 227-235, 2001.
Parente D., D'Alatri L., Di Massimo AM., Saccinto MP., Novelli S., Pacilli A., Mele A. and De Santis R. Production and in vitro characterization of a recombinant immunotoxin made of a single chain anti-EGF receptor antibody and a type ribosome-inactivating protein (RIP) from filamentous fungus Aspergillus clavatus. Anticancer Research 17(6A):4073-4074, 1997
Ramos D.M. Chen B, Regezi J, Zardi L, Pytela R Tenascin-C matrix assembly in oral squamous cell carcinoma. Int J Cancer 75:680-687, 1998.
Siri A., Carnemolla B., Saginati M., Leprini A., Casari G., Baralle F. and Zardi L. Human tenascin: primary structure, pre-mRNA splicing patterns and localization of the epitope recognized by two monoclonal antibodies. Nucl Acid Res 19(3):525-531, 1991.
Wszystkie odnośniki, które zostały zacytowane lub na które się powoływano w niniejszym opisie, włączono tytułem odniesienia w całości.
PL 213 216 B1
Wykaz sekwencji <110> DE SANTIS, RITA
ANASTASI, ANNA MARIA <120> Przeciwciało monokionalne, sposób jego wytwarzania, jego zastosowanie, wytwarzające je iinie komórek hybrydoma, pojemnik je zawierający, zestaw terapeutyczny, DNA kodujący przeciwciało, wektor zawieraja.cy DNA, komórki gospodarza zawierające wc-ktor i kompozycja farmaceutyczna <130> 2818-141 <140>
<141>
<150> SO/359,299 <151> 2002-02-26 <160> 22 <170> Patentln Ver. 2.1 <210> 1 <211> 142 <212> PRT <213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> Opis sztucznej sekwencji: syntetyczna
ST2146 sekwencja regionu zmiennego łańcucha lekkiego
<400> 1 Phe Leu Gly Leu 10 Leu Vai Leu Trp Ile 15 Pro
Met 1 Arg Cys Leu Ala 5 Glu
Gly Ala Ile Gly Asp ile Val Met Thr Gin Ala Ala Pro Ser Val Pro
20 25 30
Val Thr Pro Gly Glu Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser
35 40 45
Leu ajGU. His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Arg
50 55 60
Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala
65 70 75 80
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser ciy Thr Ala Phe
85 90 95
Thr Leu Arg Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr
100 105 110
Cys Met Gln His Leu Glu Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Al s ciy Th r Lys
115 120 125
Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile
130 135 140
<210> 2
<211> 120
<232> PRT
<213> Sekwencja sztuczna
<220>
<223> Opis sztucznej sekwencji : syntetyczna
PL 213 216 B1
ST2146 sekwencja regionu zmiennego łańcucha ciężkiego <400> 2
Lys Val Lys Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Al a
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Al a Ser Giy Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Asn Met Tyr Trp Vai Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 4 5
Gly Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe
50 55 €0
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met His Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser a Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Giy Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gin
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 3
<211> 426
<212> DNA
<213> Sekwencja sztuczna
<220>
<223> Opis sztucznej sekwencji: syntetyczna
ST2146 sekwencja cDNA regionu zmiennego łańcucha lekkiego <220>
<221> CD3 <222> (1)..(4263 <400> 3 atg agg tgc eta get gag ttc ctg ggg ctg ctt gtg ctc tgg atc cct 48
Met Arg Cys Leu Ala Glu Phe Leu Gly Leu Leu Val Leu Trp Ile Pro
5 10 15 gga gee att ggg gat att gtg atg act cag get gca ccc tet gta cct 36
Gly Ala Ile Gly Asp Ile Val Met Thr Gin Ala Ala Pro Ser Val Pro
25 30 gtc act cct gga gag tea gta tcc atc tcc tgc agg tet agt aag agt 144
Val Thr Pro Gly Glu Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser
40 45 ctc ctg cat agt aat ggc aac act tac ttg tat tgg ttc eta cag agg 192
Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gin Arg
55 60 cca ggc cag tet cct cag ctc ctg ata tat cgg atg tcc aac ctt gee 240
Pro Gly Gin Ser Pro Gin Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala
70 75 S0 tea gga gtc cca gac agg ttc agt ggc agt ggg tea gga act get ttc 288
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe
PL 213 216 B1
90 95 aca ctg aga atc agt aga gtg gag gct gag gat gtg ggt gtt tat tac 336
Thr Len Arg Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Vai Tyr Tyr
100 105 110 tgt atg caa cat eta gaa tat ccg etc acg ttc ggt gct ggg acc aag 384
Cys Met Gin His Leu Giu Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys
115 120 125 ctg gag ctg saa cgg gct gat gct gca cca act gta tcc atc 426
Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile
130 135 140 <210> 4 <211> 360 <212> DNA <213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> Opis sztucznej sekwencji: syntetyczna
ST2146 sekwencja cDNA regionu <220>
<221> CDS <222> ;i) - - (360) <400> 4 zmiennego łańcucha ciężkiego
aag gtg a a a ctg cag cag tet gga cct
Lys Vai Lys Leu Gin 5 Gin Ser Gly Pro
tes gtg aag gta tcc tgc aag gct tet
Ser Val Lys Val 20 Ser Cys Lys Ala Ser 25
ęl Ϊ3, L3 atg tac tgg gtg aag cag age cat
Asn Met Tyr 35 Trp Val Lys Gin Ser 40 His
gga tat att gat cct tac aat ggt gtt
Gly Tyr 50 11 e Asp Pro Tyr Asn 55 Gly Val
aag ggc aag gee aca ttg act gtt gac
Lys 65 Gly Lys Ala Thr Leu 70 Thr Val Asp
atg cat ctc aac age ctg aca tet gag
Met His Leu Asn Ser 85 Leu Thr Ser Glu
gca aga ggg ggc ggt agt atc tac tat
Ala Arg Gly Gly 100 Gly Ser Ile Tyr Tyr 105
ggg acc acg gtc acc gtc tcc tea
Gly Thr Thr 115 <210> 5 <211> 20 Val Thr Val Ser Ser 120
gag Glu 10 ctg Leu gtg Val aag Lys cct Pro ggg Gly 15 gct Ala 48
ggt tat gca ttc act age tac 96
Gly Tyr Al a Phe Thr 30 Ser Tyr
gga aag age ctt gag tgg att 144
Gly Lys Ser Leu 45 Glu Trp Ile
act age tac aac cag aag ttc 192
Thr Ser Tyr 60 Asn Gin Lys Phe
aag tcc tcc age aca qcc ™ 3.C 240
Lys Ser 75 Ser Ser Thr Ala Tyr 80
gac tet gca gtc tat tac tgt 288
Asp 90 Ser Ala Val Tyr Tyr 95 Cys
gct atg gac tac tgg ggc caa 336
Al a Met Asp Tyr Trp 110 Gly Gin
360
PL 213 216 B1 <212> DNA <213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> Opis sekwencji sztucznej: Primer <400> 5 tgtcaagagc ttcaacagga <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> Opis sekwencji sztucznej: Primer <400> 6 aagatggata cagttggtgc <210> 7 <211> 23 <212> DNA <213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> Opis sekwencji sztucznej: Primer <400> 7 gtcactgact cagggaagta gcc <210> 8 <211> 23 <212> DNA <213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> Opis sekwencji sztucznej: Primer <400> 8 gcaacgtgag acacgagggt ctg <210> 9 <2il> 16 <212> PRT <213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> Opis sztucznej sekwencji: syntetyczna
ST2146 łańcuch lekki region zmienny CDR1 sekwencja białkowa <400> 9
Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Len Tyr 15 10 15 <21Q> 10 <211> 43 <212> DNA <213> Sekwencja sztuczna
PL 213 216 B1 <220>
<223> Opis sztucznej sekwencji: syntetyczna
ST2146 łańcuch lekki region zmienny CDR1 sekwencja nukłeotydowa <220>
<221> CDS <222> (1) .. <48) <400> 10 agg tct agt aag agt ctc ctg cat agt aat ggc aac act tac ttg tat 48
Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr
5 10 15 <210> 11 <211> 7 <212> PRT <213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> Opis sztucznej sekwencji: syntetyczna
ST2146 łańcuch lekki region zmienny CDR2 sekwencja białkowa <400> 11
Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser
5 <2I0> 12 <2U> 21 <212> DNA <213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> Opis sztucznej sekwencji: syntetyczna
ST2146 łańcuch lekki region zmienny CDR2 sekwencja nukłeotydowa <220>
<221> CDS <222> (il..{21?
<400> 12 cgg atg tcc aac ctt gcc tca 2i
Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser
5 <210> 13 <2I1> 9 <212> PRT <213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> Opis sztucznej sekwencji: syntetyczna
ST2146 łańcuch lekki region zmienny CDR3 sekwencja białkowa <400> 13
Met Gin His Leu Glu Tyr Pro Leu Thr 1 5 <2ł0> 14 <2łł> 27 <212> DNA
PL 213 216 B1
<213> Sekwencja sztuczna
<220
<22 3> Opis sztucznej sekwencji: syntetyczna
ST2146 łańcuch lekki region zmienny CDR3 sekwencja nukleotydowa
<220
<221> CDS
<222> (1)..(27)
<400> 14
atg caa cat eta gaa tat ccg etc acg Met Gin His Leu Glu Tyr Pro Leu Thr
5 <210 15 <211> 5 <212> PRT <213> Sekwencja sztuczna <220 .
<223> Opis sztucznej sekwencji: syntetyczna
ST2146 łańcuch ciężki region zmienny CDR1 sekwencja białkowa <400> 15
Ser Tyr Asn Met Tyr 1 5
<210> <210 <212> <213> 16 15 DNA Sekwencja sztuczna
<220> <223> Opis sztucznej sekwencji: syntetyczna
ST2146 łańcuch ciężki region zmienny CDR1 sekwencja nukleotydowa
<220 <22 0 CDS <222> (1).,(15) <400 16 age tac aac atg tac 15
Ser Tyr Asn Met Tyr ł 5 <210 17 <210 17 <212> PRT <213> Sekwencja sztuczna <220 <223> Opis sztucznej sekwencji: syntetyczna . <
ST2146 łańcuch ciężki region zmienny CDR2 sekwencja białkowa <400> 17 _
Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gin Lys riie Lys 'i 5 10 15
Gly
PL 213 216 B1 <21C> 18 <211> 51 <212> DMA <213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> Opis sztucznej sekwencji: syntetyczna
ST2146 łańcuch ciężki region zmienny CDR2 sekwencja nukleotydowa <220>
<221> CDS <222> (1).. {51} <400> 18 tat att gat cct tac aat ggt gtt act. agc tac aac cag aag ttc aag 48
Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gin. Lys Phe Lys
5 10 15 ggc 51
Gly <210> 19 <211> 11 <212> PRT <213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> Opis sztucznej sekwencji: syntetyczna
3T2146 łańcuch ciężki region zmienny CDR3 sekwencja białkowa <400> 19
Gly Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <2I0> 20 <211> 33 <212> DNA <213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> Opis sztucznej sekwencji: syntetyczna
ST2146 łańcuch ciężki region zmienny CDR3 sekwencja nukleotydowa <220>
<221> COS <222> ¢1} . . ¢33) <400> 20 ggg ggc ggt agt atc tac tat gct atg gac tac 33
Gly Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
5 10 <210> 21 <211> 773 <212> DNA <213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> Opis sztucznej sekwencji: syntetyczna
ΞΤ2146 łańcuch lekki, region zmienny sekwencja nukleotydowa
PL 213 216 B1 <220> <221> CDS
<222> ¢292) . . (717)
<400> 21 cgaggatccc ctgtcaagag cttcaacagg aatgagtgtt agagacaaag gtcctgagac 60
gccaccacca ąctccccagc tccatcctat cttcccttct aaggtcttgg aggcttcccc 120
acaagcgacc taccactgtt gcggtgctcc aaacctcctc cccacctcct tctcct.cctc 180
ctccctttcc ttggctttta tcatgctaat atttgcagaa aatattcaat aaagtgagtc 240
tctgcaaaaa aaaataaccc cttgataagg sagttctcag a atg agg 297
Met Arą
tgc Cys eta Leu get Al a 5 gag ttc Phe ctg Leu ggg Gly ctg Leu 10 ctt Leu gtg Val ctc Leu tgg Trp atc Ile 15 cct Pro gga Gly gcc Ala 345
att ggg gat att gtg atg act cag get gca ccc tet gta cct gtc act 393
Ile Gly As 0 Ile Val Met Thr Gin Ala Ala Pro Ser Val Pro Val Thr
20 25 30
cct gga gag tea gta tcc atc tcc tgc agg tet aqt aag agt ctc ctg 441
Pro Gly Glu Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser by s Ser Lc u
35 40 4 5 50
cat agt aat ggc aac act. tac ttg tat tgg ttc eta cag agg cca ggc 489
His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gin Arg Pro Gly
55 60 65
cag tet cct cag ctc ctg ata tat cgg atg tcc aac ctt gcc tea gga 537
Gin Ser Pro Gin Leu Leu I le Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly
70 75 80
gtc cca gac agg ttc agt ggc agt ggg tea gga act get ttc aca ctg 585
Val Pro Asp Arg Phe Ser dy Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Lfili
85 90 95
aga atc agt aga gtg gag get gag gat gtg ggt CfHt tat tac tgt atg 633
Arg Ile Ser Arg Val -j 1. tu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met
100 105 110
caa cat eta ę33 tat ccg ctc acg ttc ggt get ggg acc aag ctg gag 681
Gin His Leu Glu Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu
115 120 125 130
ctg aaa cgg get gat get gca cca act gta tcc atc ttgggtaccg 727
Leu Lys Arg Ala Asp Al 3 J31 a Pro Thr Val Ser Ile
135 140
agct.cgaatt cgtaatcatg tcatagctgt : ttcctgtgtg aaat ;tg 773
<210> 22 <211> 360 <2Ι2> DNA <213> Sekwencja sztuczna <220>
<223> Opis sztucznej sekwencji: syntetyczna
PL 213 216 B1
ST2146 łańcuch ciężki region zmienny sekwencja nukłeotydowa <220>
<221> CDS <222> (1)..(360) <400> 22
aag Lys 1 gtg Val aaa Lys ctg Leu cag Gin 5 cag Gin tct Ser gga Gly cct Pro gag Glu 10 ctg Leu gtg Val aag Lys cct Pro ggg Gly 15 gct Ala 48
tca gtg aag gta tcc tgc aag gct tct ggt tat gca ttc act agc tac 96
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
aac atg tac tgg gtg aag cag agc cat gga aag agc ctt gag tgg att 144
Asn Met Tyr Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
gga tat att gat cct tac aat ggt gtt act agc tac aac cag aag ttc 192
Gly Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe
50 55 60
aag ggc aag gcc aca ttg act gtt gac aag tcc tcc agc cłCcl gcc tac 240
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
atg cat ctc aac agc ctg aca tct gag gac tct gca gtc tat tac tgt 288
Met His Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
gca aga ggg ggc ggt agt a t c tac tat gct atg gac tac tgg ggc caa 336
Ala Arg Gly Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gin
100 105 110
ggg acc acg gtc acc gtc tcc tca 360
Gly Thr Thr Va 1 Thr Val Ser Ser
115 120
PL 213 216 B1

Claims (30)

1. Przeciwciało monoklonalne przeciwko ludzkiej tenascynie, znamienne tym, że jego regiony zmienne łańcuchów lekkiego i ciężkiego posiadają sekwencje odpowiednio SEQ ID NO: 1 i SEQ ID NO:2 oraz którego fragmenty proteolityczne wiążą epitop antygenowy w obrębie powtórzenia typu EGF-podobnego ludzkiej tenascyny C.
2. Przeciwciało monoklonalne przeciwko ludzkiej tenascynie C, znamienne tym, że jego zmienny region łańcucha lekkiego zawiera sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11 oraz SEQ ID NO: 13 i jego zmienny region łańcucha ciężkiego zawiera sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 15. SEQ ID NO: 17 oraz SEQ ID NO: 19 lub fragment wspomnianego przeciwciała monoklonalnego, przy czym przeciwciało lub jego fragment ulega wiązaniu z epitopem antygenowym w obrębie powtórzenia typu EGF-podobnego ludzkiej tenascyny C.
3. Przeciwciało lub jego fragmenty według zastrz. 1, znamienne tym, że zawiera dodatkowo znaczniki i/lub czynniki diagnostyczne.
4. Przeciwciało lub jego fragmenty według zastrz. 2, znamienne tym, że zawiera dodatkowo znaczniki i/lub czynniki diagnostyczne.
5. Biotynylowane przeciwciało lub jego fragment jak określono w dowolnym z zastrz. od 1 do 4, znamienne tym, że ulega wiązaniu z epitopem antygenowym w obrębie powtórzenia typu EGF-podobnego ludzkiej tenascyny C.
6. Linia komórek hybrydoma wytwarzająca przeciwciało monoklonalne przeciwko ludzkiej tenascynie ulegającej wiązaniu z epitopem antygenowym w obrębie powtórzenia typu EGF-podobnego ludzkiej tenascyny C, znamienna tym, że zdeponowana na mocy Traktatu Budapesztańskiego w dniu 29 stycznia 2002 r., w Międzynarodowym Organie Depozytowym Centrum Zaawansowanych Biotechnologii, pod numerem dostępu PD02003.
7. Przeciwciało monoklonalne, znamienne tym, że wyprodukowane przez komórki hybrydoma określone w zastrz. 6.
8. Sposób otrzymywania przeciwciała określonego w zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, że obejmuje hodowlę komórek hybrydoma określonych w zastrz. 6 oraz izolację wspomnianego przeciwciała.
9. Zastosowanie przeciwciała lub jego fragmentów określonych w dowolnym z zastrz. od 1 do 4 lub biotynylowanego przeciwciała lub jego fragmentu określonych w zastrz. 5 do wytwarzania środka diagnostycznego do wykrywania chorób związanych z ekspresją tenascyny.
10. Zastosowanie według zastrz. 9, znamienne tym, że choroba jest nowotworem.
11. Zastosowanie według zastrz. 10, znamienne tym, że nowotwór jest wybrany z grupy składającej się z: nowotworów torbielowatych mózgu, glejaków, nowotworów sutka, płuc, włókniakomięsaków oraz nowotworów płaskokomórkowych.
12. Zastosowanie według dowolnego z zastrz. od 9 do 11, znamienne tym, że środek diagnostyczny jest stosowany w technikach obrazowania in vivo.
13. Zastosowanie przeciwciała lub jego fragmentów określonych w dowolnym z zastrz. od 1 do 4 lub biotynylowanego przeciwciała lub jego fragmentu określonych w zastrz. 5 do wytwarzania leku do leczenia chorób nowotworowych związanych z ekspresją tenascyny.
14. Zastosowanie według zastrz. 13, znamienne tym, że nowotwór jest wybrany z grupy składającej się z nowotworów torbielowatych mózgu, glejaków, nowotworów sutka, płuc, włókniakomięsaków oraz nowotworów płaskokomórkowych.
15. Zastosowanie według dowolnego z zastrz. od 13 do 14, znamienne tym, że lek ma postać zestawu odpowiedniego do przeprowadzenia trzyetapowego wstępnego ukierunkowania.
16. Zestaw terapeutyczny składający się z 5 ampułek, znamienny tym, że pierwsza ampułka zawiera biotynylowane przeciwciało lub jego fragment określone w zastrz. 5, druga ampułka zawiera awidynę, trzecia ampułka zawiera biotynylowaną albuminę, czwarta ampułka zawiera streptawidynę, piąta ampułka zawiera znakowaną izotopowo biotynę lub pochodną biotyny.
17. Zestaw terapeutyczny według zastrz. 16, znamienny tym, że wspomniane ampułki są odpowiednie do podawania w postaci zastrzyków ludziom.
18. DNA kodujący przeciwciało lub jego fragmenty określone w zastrz. 1 albo 2.
19. Białka zawierające regiony wiązania CDR z epitopem antygenowym w obrębie powtórzenia typu EGF-podobnego ludzkiej tenascyny C, znamienne tym, że posiadają sekwencję aminokwasową
PL 213 216 B1
SEQ ID NO:9, SEQ ID NO: 11 oraz SEQ ID NO: 13 oraz sekwencję aminokwasową SEQ ID NO: 15,
SEQ ID NO: 17 oraz SEQ ID NO: 19.
20. Wektor zawierający DNA określony w zastrz. 18.
21. Komórki gospodarza zawierające wektor określony w zastrz. 20.
22. Zastosowanie przeciwciała lub jego fragmentów określonych w dowolnym z zastrz. od 1 do 4, w zestawieniu z drugim przeciwciałem specyficznym wobec tenascyny w teście podwójnego wiązania, do otrzymywania zestawu diagnostycznego do określania poziomu cyrkulującej tenascyny.
23. Zestaw diagnostyczny zawierający przeciwciało lub jego fragmenty określone w dowolnym z zastrz. od 1 do 4.
24. Pojemnik, znamienny tym, że zawiera biotynylowane przeciwciało, lub jego fragmenty określone w zastrz. 5, bufory oraz odczynniki odpowiednie do zastosowania w zestawie terapeutycznym do trzyetapowej metody wstępnego ukierunkowania.
25. Pojemnik według zastrz. 24, znamienny tym, że zawiera wiele przedziałów.
26. Pojemnik według dowolnego z zastrz. od 24 do 25, znamienny tym, że zawiera dodatkowo oddzielne przeciwciało specyficzne wobec tenascyny, korzystnie skierowane przeciwko fragmentowi A-D.
27. Pojemnik według dowolnego z zastrz. od 24 do 25, znamienny tym, że zawiera dodatkowo oddzielne przeciwciało specyficzne wobec nowotworu.
28. Przeciwciało według zastrz. 1, znamienne tym, że w zestawieniu z drugim przeciwciałem swoistym wobec tenascyny w teście podwójnego wiązania ELISA in vitro w warunkach, w których wspomniane drugie przeciwciało wiąże się z drugim epitopem antygenowym tenascyny, przy czym wspomniany test ELISA in vitro jest użyteczny do określania poziomu cyrkulującej tenascyny.
29. Przeciwciało według zastrz. 2, znamienne tym, że w zestawieniu z drugim przeciwciałem swoistym wobec tenascyny w teście podwójnego wiązania ELISA in vitro w warunkach, w których wspomniane drugie przeciwciało wiąże się z drugim epitopem antygenowym tenascyny, przy czym wspomniany test ELISA in vitro jest użyteczny do określania poziomu cyrkulującej tenascyny.
30. Kompozycja farmaceutyczna zawierająca przeciwciało i/lub jego fragment określone w dowolnym z zastrz. od 1 do 4, znamienna tym, że zawiera przynajmniej jedną farmaceutycznie dopuszczalną zaróbkę i/lub nośnik.
PL372803A 2002-02-26 2003-02-20 Przeciwcialo monoklonalne, sposób jego wytwarzania, jego zastosowanie, wytwarzajaca je linia komórek hybrydoma, pojemnik je zawierajacy, zestaw terapeutyczny, DNA kodujacy przeciwcialo, wektor zawierajacy DNA, komórki gospodarza zawierajace wektor i kompozycja farmaceutyczna PL213216B1 (pl)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US35929902P 2002-02-26 2002-02-26

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL372803A1 PL372803A1 (pl) 2005-08-08
PL213216B1 true PL213216B1 (pl) 2013-01-31

Family

ID=27766061

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL372803A PL213216B1 (pl) 2002-02-26 2003-02-20 Przeciwcialo monoklonalne, sposób jego wytwarzania, jego zastosowanie, wytwarzajaca je linia komórek hybrydoma, pojemnik je zawierajacy, zestaw terapeutyczny, DNA kodujacy przeciwcialo, wektor zawierajacy DNA, komórki gospodarza zawierajace wektor i kompozycja farmaceutyczna

Country Status (19)

Country Link
US (3) US7438908B2 (pl)
EP (1) EP1478667B1 (pl)
JP (1) JP4488746B2 (pl)
KR (1) KR101048894B1 (pl)
CN (1) CN1317303C (pl)
AR (1) AR038700A1 (pl)
AT (1) ATE480564T1 (pl)
AU (1) AU2003215900B2 (pl)
BR (1) BR0307994A (pl)
CA (1) CA2475395C (pl)
CY (1) CY1111108T1 (pl)
DE (1) DE60334076D1 (pl)
DK (1) DK1478667T3 (pl)
ES (1) ES2352180T3 (pl)
MX (1) MXPA04008216A (pl)
PL (1) PL213216B1 (pl)
PT (1) PT1478667E (pl)
SI (1) SI1478667T1 (pl)
WO (1) WO2003072608A1 (pl)

Families Citing this family (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ITRM20040105A1 (it) * 2004-02-27 2004-05-27 Tecnogen Scpa Anticorpo monoclonale antitenascina umana.
WO2008019326A2 (en) * 2006-08-04 2008-02-14 Novartis Ag Ephb3-specific antibody and uses thereof
EP2235536A4 (en) 2007-12-20 2011-05-04 Lab Corp America Holdings HER-2-DIAGNOSTIC PROCEDURE
FR2930036B1 (fr) * 2008-04-11 2010-05-07 Assist Publ Hopitaux De Paris Procede de diagnostic d'une hypertension arterielle pulmonaire.
EP2313435A4 (en) * 2008-07-01 2012-08-08 Aveo Pharmaceuticals Inc FIBROBLAST GROWTH FACTOR RECEPTOR 3 (FGFR3) BINDING PROTEINS
ES2637411T3 (es) 2008-12-01 2017-10-13 Laboratory Corporation Of America Holdings Métodos y ensayos para medir p95 Y/O p95 en una muestra y anticuerpos específicos para p95
JP5746051B2 (ja) * 2009-01-15 2015-07-08 ラボラトリー コーポレイション オブ アメリカ ホールディングス Ｈｅｒ−３の測定による患者の反応を判定する方法
JP2012515353A (ja) * 2009-01-15 2012-07-05 ラボラトリー コーポレイション オブ アメリカ ホールディングス Ｈｅｒ−２発現の測定による患者の反応を判定する方法
US10266585B2 (en) 2009-08-28 2019-04-23 The Board Of Regents Of The Univerity Of Texas System Methods of treating brain injury
US20120269814A1 (en) * 2009-11-10 2012-10-25 Amgen Inc. Anti-c mpl antibodies
WO2012051498A2 (en) * 2010-10-15 2012-04-19 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Antibodies that bind amyloid oligomers
US9032525B2 (en) 2011-03-29 2015-05-12 Mcafee, Inc. System and method for below-operating system trapping of driver filter attachment
US8925089B2 (en) 2011-03-29 2014-12-30 Mcafee, Inc. System and method for below-operating system modification of malicious code on an electronic device
US9087199B2 (en) 2011-03-31 2015-07-21 Mcafee, Inc. System and method for providing a secured operating system execution environment
US9317690B2 (en) 2011-03-28 2016-04-19 Mcafee, Inc. System and method for firmware based anti-malware security
US8959638B2 (en) 2011-03-29 2015-02-17 Mcafee, Inc. System and method for below-operating system trapping and securing of interdriver communication
US9262246B2 (en) 2011-03-31 2016-02-16 Mcafee, Inc. System and method for securing memory and storage of an electronic device with a below-operating system security agent
US8813227B2 (en) 2011-03-29 2014-08-19 Mcafee, Inc. System and method for below-operating system regulation and control of self-modifying code
US9038176B2 (en) 2011-03-31 2015-05-19 Mcafee, Inc. System and method for below-operating system trapping and securing loading of code into memory
US8966624B2 (en) 2011-03-31 2015-02-24 Mcafee, Inc. System and method for securing an input/output path of an application against malware with a below-operating system security agent
US8966629B2 (en) 2011-03-31 2015-02-24 Mcafee, Inc. System and method for below-operating system trapping of driver loading and unloading
US8863283B2 (en) 2011-03-31 2014-10-14 Mcafee, Inc. System and method for securing access to system calls
US9255595B2 (en) * 2011-04-29 2016-02-09 Bae Systems Information And Electronic Systems Integration Inc. Optical dome bezel
EP2791686B1 (en) * 2011-12-12 2017-02-15 Oxford University Innovation Limited Tenascin-c and use thereof in rheumatoid arthritis
JP6463331B2 (ja) 2013-03-15 2019-01-30 イントリンシック ライフサイエンシズ リミテッド ライアビリティ カンパニー 抗ヘプシジン抗体およびその使用
GB201414021D0 (en) * 2014-08-07 2014-09-24 Nascient Ltd Biological materials and uses thereof
AU2015321462B2 (en) 2014-09-22 2020-04-30 Intrinsic Lifesciences Llc Humanized anti-hepcidin antibodies and uses thereof
GB201602413D0 (en) * 2016-02-10 2016-03-23 Nascient Ltd Method

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4687732A (en) 1983-06-10 1987-08-18 Yale University Visualization polymers and their application to diagnostic medicine
US5859205A (en) * 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
WO1994021293A1 (en) * 1993-03-19 1994-09-29 Duke University Method of treatment of tumors with an antibody binding to tenascin
US5482698A (en) 1993-04-22 1996-01-09 Immunomedics, Inc. Detection and therapy of lesions with biotin/avidin polymer conjugates
CA2163976C (en) 1993-05-28 2010-06-29 Didier J. Leturcq Methods and compositions for inhibiting cd14 mediated cell activation
US6335014B1 (en) 1998-06-17 2002-01-01 The Institute Of Physical And Chemical Research Medicament for suppressing cancer metastasis
ITRM20020128A1 (it) 2002-03-08 2003-09-08 Sigma Tau Ind Farmaceuti Dimeri di avidina efficaci nell'incrementare la concentrazione di biotina radioattiva nella immunoterapia con "pretargeting".

Also Published As

Publication number Publication date
US7438908B2 (en) 2008-10-21
AR038700A1 (es) 2005-01-26
EP1478667A1 (en) 2004-11-24
CA2475395C (en) 2011-08-02
ES2352180T3 (es) 2011-02-16
CN1639192A (zh) 2005-07-13
SI1478667T1 (sl) 2010-12-31
BR0307994A (pt) 2004-12-07
JP2005534615A (ja) 2005-11-17
US8048417B2 (en) 2011-11-01
DE60334076D1 (de) 2010-10-21
EP1478667B1 (en) 2010-09-08
US20110020219A1 (en) 2011-01-27
ATE480564T1 (de) 2010-09-15
AU2003215900A1 (en) 2003-09-09
CY1111108T1 (el) 2015-06-11
WO2003072608A1 (en) 2003-09-04
KR101048894B1 (ko) 2011-07-13
PT1478667E (pt) 2010-12-09
JP4488746B2 (ja) 2010-06-23
HK1078589A1 (en) 2006-03-17
DK1478667T3 (da) 2010-12-20
CN1317303C (zh) 2007-05-23
AU2003215900B2 (en) 2008-09-25
US20040005643A1 (en) 2004-01-08
KR20040086426A (ko) 2004-10-08
MXPA04008216A (es) 2004-11-26
US20050106145A1 (en) 2005-05-19
CA2475395A1 (en) 2003-09-04
PL372803A1 (pl) 2005-08-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL213216B1 (pl) Przeciwcialo monoklonalne, sposób jego wytwarzania, jego zastosowanie, wytwarzajaca je linia komórek hybrydoma, pojemnik je zawierajacy, zestaw terapeutyczny, DNA kodujacy przeciwcialo, wektor zawierajacy DNA, komórki gospodarza zawierajace wektor i kompozycja farmaceutyczna
KR101683884B1 (ko) 항-ＥｐＣＡＭ 항체 및 이의 용도
KR101971770B1 (ko) 이중특이성 항체 및 이의 용도
KR20000015893A (ko) 특이적으로 암세포를 검출하는 항원 결합 단편, 상기 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 및 암의 예방 및 검출에 사용되는 이들의 용도
CN104105708A (zh) PDGF受体β结合多肽
WO2016112855A1 (zh) 抗cd19单克隆抗体及其制备方法
CN117279950B (zh) 一种靶向il-18bp的抗体及其应用
CN120554514B (zh) 一种靶向人的叶酸受体α的单克隆抗体
JP5191036B2 (ja) 抗ヒトテネイシンモノクローナル抗体
CN113272322A (zh) 神经内分泌癌靶向治疗
CN116836281A (zh) B7h3抗体及包含其的双功能抗体
CN120842412B (zh) 一种靶向人的叶酸受体α的单克隆抗体及其应用
CN113321730B (zh) Cldn18.2抗体及其应用
US20250136695A1 (en) Development of novel pdl1 single-domain antibody
WO2025031098A1 (zh) 一种分拣蛋白1特异性的纳米抗体、含有其的重组aav及应用
CN120271709A (zh) 一种抗cldn18.2纳米抗体及其制备方法和应用
CN118184785A (zh) Cea抗体及其应用
HK40069791A (en) Nano-antibody targeting caix antigen and application thereof
HK1100848B (en) Anti-human tenascin monoclonal antibody