PL196531B1 - Sposób otrzymywania preparatu peptydowego o działaniu przeciwbakteryjnym z naturalnego surowca przez enzymatyczną hydrolizę białka - Google Patents
Sposób otrzymywania preparatu peptydowego o działaniu przeciwbakteryjnym z naturalnego surowca przez enzymatyczną hydrolizę białkaInfo
- Publication number
- PL196531B1 PL196531B1 PL347652A PL34765201A PL196531B1 PL 196531 B1 PL196531 B1 PL 196531B1 PL 347652 A PL347652 A PL 347652A PL 34765201 A PL34765201 A PL 34765201A PL 196531 B1 PL196531 B1 PL 196531B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- hydrolyzate
- peptide
- separated
- endosperm
- milk thistle
- Prior art date
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Sposób otrzymywania preparatu peptydowego o działaniu przeciwbakteryjnym z naturalnego
surowca przez enzymatyczną hydrolizę białka, znamienny tym, że bielmo nasion ostropestu plamistego
(Silybum rnarianum) poddaje się hydrolizie przez 4-12 godzin, w temperaturze 30-50°C, przy pH
roztworu wynoszącym 7,4-8,3, z zastosowaniem jako katalizatora pankreatyny lub mieszaniny enzymów
zawierającej trypsynę i chymotrypsynę, po czym z hydrolizatu wydziela się frakcję peptydową
o przeciętnym ciężarze cząsteczkowym od 1000 do 2500, zawierającą peptydy posiadające od 6 do 25
reszt aminokwasowych w cząsteczce.
Description
(12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 196531 (13) B1 (21) Numer zgłoszenia: 347652 (51) Int.Cl.
A61K 36/28 (2006.01) A61P 31/04 (2006.01) C07K 1/12 (2006.01) (22) Data zgłoszenia: 21.05.2001
Sposób otrzymywania preparatu peptydowego o działaniu przeciwbakteryjnym z naturalnego surowca przez enzymatyczną hydrolizę białka
(73) Uprawniony z patentu: Instytut Chemii Przemysłowej im. Prof. Ignacego Mościckiego,Warszawa,PL | |
(43) Zgłoszenie ogłoszono: 02.12.2002 BUP 25/02 | (72) Twórca(y) wynalazku: |
(45) O udzieleniu patentu ogłoszono: | Bożenna Baranowska,Warszawa,PL Andrzej W. Lipkowski,Warszawa,PL Aleksandra Szczucińska,Warszawa,PL Halina Niziołek,Warszawa,PL |
31.01.2008 WUP 01/08 | (74) Pełnomocnik: Anna Królikowska, Instytut Chemii Przemysłowej, im.Prof Ignacego Mościckiego |
(57) 1. Sposób otrzymywania preparatu peptydowego o działaniu przeciwbakteryjnym z naturalnego surowca przez enzymatyczną hydrolizę białka, znamienny tym, że bielmo nasion ostropestu plamistego (Silybum rnarianum) poddaje się hydrolizie przez 4-12 godzin, w temperaturze 30-50°C, przy pH roztworu wynoszącym 7,4-8,3, z zastosowaniem jako katalizatora pankreatyny lub mieszaniny enzymów zawierającej trypsynę i chymotrypsynę, po czym z hydrolizatu wydziela się frakcję peptydową o przeciętnym ciężarze cząsteczkowym od 1000 do 2500, zawierającą peptydy posiadające od 6 do 25 reszt aminokwasowych w cząsteczce.
PL 196 531 B1
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania, z surowca naturalnego, peptydowego preparatu o działaniu przeciwbakteryjnym, hamującego rozwój bakterii Gram dodatnich i Gram ujemnych.
W ostatnich latach otrzymano wiele peptydów antybakteryjnych z róż nych tkanek organizmów żywych, głównie zwierzęcych. Znane są peptydy lub grupy peptydów posiadające działanie biobójcze, a uzyskane:
- z białek skorupiaków i mięczaków (opis patentowy WO 0104294)
- ze skóry ż ab (magaininy) (Nature 404,565 (2000))
- ze skóry ż ab żyjących w Ameryce Północnej (Rana luteiventris, Rana berlandieri, Rana pipiens) (J.Eur.Biochem. (267(3);894-900(2000))
- z ludzkiej skóry (Nature 387 (6606);861(1997)
- z hemoglobiny wołowej (J.Biol.Chem 274(36);25330-4(1999)
- z leukocytów owiec i kóz (Infect.Immunol. 67(8);4106-11(1999)
- z koziej serwatki (Prep.Biochem.Biotechnol., 29(2),189-202(1999)
Występujące w świecie roślinnym peptydy nie są jeszcze dobrze poznane, choć prawdopodobnie odgrywają znaczną rolę fizjologiczną. Peptydy jako takie rzadko znajdowano w tkankach roślinnych. Wiadomo jednak o peptydach przeciwbakteryjnych otrzymanych z białek kukurydzy (opis patentowy US 5905187).
Znany jest sposób hydrolizy surowców białkowych pochodzenia zwierzęcego przy użyciu pankreatyny. Polega on na traktowaniu substratu wodnym roztworem enzymów pankreatynowych (mieszanina trypsyny i chymotrypsyny), przy czym optymalne rezultaty dla znanych procesów (hydroliza kazeiny, żelatyny, hemoglobiny) otrzymuje się przy pH 8,5 - 9,0 w temperaturze 30 - 40°C. Można użyć tychże enzymów przy pH 7,5 w temperaturze 45 - 50°C powodując hydrolizę białka, lecz z nie zadowalającymi rezultatami (Ed.W.Gerhartz „Enzymes in Industry” Weinheim 1990, 86).
Niniejszy wynalazek dotyczy otrzymywania peptydów z białek nasion ostropestu plamistego.
Ostropest plamisty (Silybum marianum) jest cennym surowcem zielarskim, a wyciągi z tej rośliny znane są z działania przeciwzapalnego, antydepresyjnego, przeciwwirusowego, detoksykacyjnego i w związku z tym chroniącego narządy miąższowe takie jak wątroba i nerki przed uszkodzeniem powodowanym przez kontakt z substancjami trującymi. Badania dotyczące białek z ostropestu plamistego oraz peptydów, jakie można z tych białek otrzymać nie są znane.
W trakcie badań prowadzonych nad hydrolizą białek nasion ostropestu plamistego stosowano różne enzymy proteolityczne. Stwierdzono, że tylko niektóre frakcje peptydowe uzyskane w wyniku hydrolizy z zastosowaniem pankreatyny hamują wzrost bakterii Gram dodatniej - gronkowca złocistego (Staphylococcus aureus) oraz bakterii Gram ujemnej - pałeczki okrężnicy (Escherichia coli). Peptydy i frakcje peptydowe otrzymane z tego samego surowca z zastosowaniem innych enzymów nie wykazywały działania przeciwbakteryjnego. W postępowaniu według wynalazku istotne są zarówno warunki hydrolizy protein prowadzonej w celu otrzymania określonych peptydów biobójczych jak i wydzielenie frakcji peptydów posiadających właściwości biobójcze.
Sposób otrzymywania preparatu peptydowego o działaniu przeciwbakteryjnym, według wynalazku polega na tym, że bielmo nasion ostropestu plamistego poddaje się hydrolizie przez 4-12 godzin, w temperaturze 30-50°C, przy pH roztworu wynoszącym 7,4-8,3, z zastosowaniem pankreatyny lub mieszaniny enzymów zawierającej trypsynę i chymotrypsynę jako katalizatora, po czym z hydrolizatu wydziela się frakcję peptydową o przeciętnym ciężarze cząsteczkowym od 1000 do 2500 Da, zawierającą peptydy posiadające od 6 do 25 reszt aminokwasowych w cząsteczce
Stwierdzono, że korzystnie jest prowadzić hydrolizę przez 6-10 godzin, w temperaturze 35-40°C.
Korzystnie jest jeśli stosunek wagowy woda : bielmo nasion ostropestu plamistego wynosi odpowiednio 5-12 : 1.
Frakcję peptydową o działaniu przeciwbakteryjnym korzystnie wydziela się przez frakcjonowanie hydrolizatu z zastosowaniem żywic stanowiących sita molekularne.
Jako sito molekularne stosuje się Sephadex LH20.
Korzystnie z hydrolizatu otrzymanego sposobem według wynalazku wydziela się frakcję peptydową zawierającą peptydy posiadające od 6 do 15 grup aminokwasowych w cząsteczce.
Stwierdzono, że preparat peptydowy otrzymany sposobem według wynalazku stanowi frakcjapeptydów zawierająca zwłaszcza reszty aminokwasowe asparginy, glutaminy, seryny, argininy, waliny, tryptofanu, lizyny, leucyny i izoleucyny.
PL 196 531 B1
Frakcja peptydowa o podanej wyżej charakterystyce stanowi produkt finalny procesu prowadzonego sposobem według wynalazku. Jej roztwór wodny o stężeniu nie niższym niż 0,01% powoduje zahamowanie rozwoju bakterii zarówno Gram ujemnych, jak i Gram dodatnich.
Sposób otrzymywania preparatu peptydowego o działaniu przeciwbakteryjnym przedstawiono w przykł adach, które ilustrują korzystne formy realizacji wynalazku.
P r z y k ł a d I.
Do 64 g odtłuszczonego, mielonego bielma z nasion ostropestu plamistego dodano 386 g wody i mieszają c doprowadzono pH zawiesiny do warto ś ci 7,5 stosują c do tego celu 3n roztwór wodorotlenku sodowego. Doprowadzono temperaturę masy reakcyjnej do 37,5°C, po czym dodano 0,2 g pankreatyny. Reakcję prowadzono przez 8 godzin utrzymując powyższe warunki. Następnie dokonano dezaktywacji enzymu przez ogrzanie mieszaniny reakcyjnej do 90°C, hydrolizat odsączono i zliofilizowano. Liofilizat rozdzielono na frakcje na kolumnie wypełnionej żywicą do filtracji żelowej marki Sephadex LH 20, nanosząc na wierzchołek kolumny metanolowy roztwór hydrolizatu. Pierwsza otrzymana z kolumny frakcja, po usunię ciu metanolu na wyparce obrotowej, charakteryzował a się przecię tnym ciężarem cząsteczkowym 1980 zawierała średnio 15 grup aminokwasowych w cząsteczce peptydu i posiadał a skł ad aminokwasowy przedstawiony w tabeli.
T a b e l a
Skład aminokwasowy preparatu.
Lp | Związek | Stężenie (mmol/gr próbki) | Stężenie (% wag.) |
1 | Asp | 0,686 | 9,13 |
2 | Glu | 0,405 | 5,96 |
3 | Ser | 0,367 | 3,54 |
4 | His | 0,104 | 1,61 |
5 | Gly | 0,315 | 2,36 |
6 | Thr | 0,455 | 5,42 |
7 | Ala | 0,428 | 3,81 |
8 | Arg | 0,394 | 6,86 |
9 | Tyr | 0,007 | 1,29 |
10 | Val | 0,447 | 5,24 |
11 | Met | 0,0178 | 2,66 |
12 | Trp | 0,350 | 7,15 |
13 | Ile | 0,337 | 4,42 |
14 | Phe | 0,129 | 2,13 |
15 | Leu | 0,354 | 4,64 |
16 | Lyz | 0,423 | 6,18 |
Preparat o powyższym składzie badano metodą rozcieńczeniową. Stwierdzono, że jego roztwór wodny o stężeniu 0,03% wagowych hamował wzrost drobnoustrojów testowych (Staphyloccocus aureus i Escherichia coli).
P r z y k ł a d II.
g odtłuszczonego bielma z nasion ostropestu plamistego hydrolizowano przy użyciu 0,05% wagowych pankreatyny w stosunku do białka zawartego w bielmie nasion ostropestu, stosując następujące parametry procesu: pH - 8,0, temperatura 40°C, proporcja wagowa woda : bielmo ostropestu = 6:1, czas hydrolizy 6 godzin. Po dezaktywacji enzymu przez ogrzanie mieszaniny reakcyjnej do 90°C, odwirowaniu i wysuszeniu hydrolizatu przeprowadzono rozdział peptydów na frakcje w sposób opisany w przykładzie 1. Preparat biobójczy wyodrębniono z kolumny jako pierwszą frakcję peptydów o przeciętnej zawartości 8 reszt aminokwasowych w cząsteczce.
Preparat biobójczy, otrzymany w powyższy sposóbj stanowiła frakcja hydrolizatu peptydowego posiadająca średni ciężar cząsteczkowy 1055 Da, o przeciętnej zawartości reszt aminokwasowych
PL 196 531 B1 w cząsteczce peptydu wynoszącej 8 i zawierająca w składzie aminokwasowym znaczne ilości asparginy, glutaminy, seryny, argininy, waliny, tryptofanu, lizyny oraz leucyny.
Produkt ten badany metodą rozcieńczeniową hamował wzrost drobnoustrojów testowych (Staphylococcus aureus i Escherichia coli) w roztworze wodnym o stężeniu 0,06% wagowych.
Claims (6)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób otrzymywania preparatu peptydowego o działaniu przeciwbakteryjnym z naturalnego surowca przez enzymatyczną hydrolizę białka, znamienny tym, że bielmo nasion ostropestu plamistego (Silybum rnarianum) poddaje się hydrolizie przez 4-12 godzin, w temperaturze 30-50°C, przy pH roztworu wynoszącym 7,4-8,3, z zastosowaniem jako katalizatora pankreatyny lub mieszaniny enzymów zawierającej trypsynę i chymotrypsynę, po czym z hydrolizatu wydziela się frakcję peptydową o przecię tnym ciężarze czą steczkowym od 1000 do 2500, zawierając ą peptydy posiadają ce od 6 do 25 reszt aminokwasowych w cząsteczce.
- 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że z hydrolizatu wydziela się frakcję peptydową zawierającą peptydy posiadające od 6 do 15 grup aminokwasowych w cząsteczce.
- 3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że hydrolizę prowadzi się przez 6-10 godzin. w temperaturze 35-40°C.
- 4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, stosunek wagowy woda : bielmo nasion ostropestu plamistego wynosi odpowiednio 5-12 : 1.
- 5. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że frakcję peptydową o działaniu przeciwbakteryjnym wydziela się przez frakcjonowanie hydrolizatu z zastosowaniem sit molekularnych.
- 6. Sposób według zastrz. 4, znamienny tym, że jako sito molekularne stosuje się Sephadex LH20.Departament Wydawnictw UP RP
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
PL347652A PL196531B1 (pl) | 2001-05-21 | 2001-05-21 | Sposób otrzymywania preparatu peptydowego o działaniu przeciwbakteryjnym z naturalnego surowca przez enzymatyczną hydrolizę białka |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
PL347652A PL196531B1 (pl) | 2001-05-21 | 2001-05-21 | Sposób otrzymywania preparatu peptydowego o działaniu przeciwbakteryjnym z naturalnego surowca przez enzymatyczną hydrolizę białka |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
PL347652A1 PL347652A1 (en) | 2002-12-02 |
PL196531B1 true PL196531B1 (pl) | 2008-01-31 |
Family
ID=20078803
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PL347652A PL196531B1 (pl) | 2001-05-21 | 2001-05-21 | Sposób otrzymywania preparatu peptydowego o działaniu przeciwbakteryjnym z naturalnego surowca przez enzymatyczną hydrolizę białka |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
PL (1) | PL196531B1 (pl) |
-
2001
- 2001-05-21 PL PL347652A patent/PL196531B1/pl not_active IP Right Cessation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
PL347652A1 (en) | 2002-12-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2818056B2 (ja) | 抗菌性ペプチドおよび抗菌剤 | |
JP3323226B2 (ja) | 抗菌性ペプチドおよび抗菌剤 | |
KR100862979B1 (ko) | 화장품용 콜라겐 펩타이드 조성물 및 그 제조방법 | |
Ozuna et al. | Cucurbitaceae seed protein hydrolysates as a potential source of bioactive peptides with functional properties | |
CN101305017A (zh) | 奶酪蛋白的酶水解产物中鉴定的生物活性肽及其生产方法 | |
KR20050044758A (ko) | 시스테인 프로테아제 억제제 | |
JP2007523045A (ja) | 酵素加水分解による卵白タンパク質由来の生理活性ペプチド | |
JP3261175B2 (ja) | 抗菌剤とこの抗菌剤を用いて物品を処理する方法 | |
WO2023192711A1 (en) | Compositions and methods for delivering bioactive agents | |
PL196531B1 (pl) | Sposób otrzymywania preparatu peptydowego o działaniu przeciwbakteryjnym z naturalnego surowca przez enzymatyczną hydrolizę białka | |
KR102240111B1 (ko) | 나노콜라겐펩타이드 킬레이트 미네랄을 함유하는 피부 주름 개선 및 피부 보습 화장품 조성물 | |
JPH06205640A (ja) | 便性を改善する育児用調製粉乳 | |
JPH05255109A (ja) | 抗菌剤とこの抗菌剤を用いて物品を処理する方法 | |
JPH08143468A (ja) | 抗潰瘍剤 | |
CN101146819B (zh) | 增加胶原或透明质酸生产的肽 | |
JPH07196527A (ja) | ペプチドまたはその誘導体と、細胞増殖賦活化剤 | |
JP3173858B2 (ja) | 抗菌性ペプチドおよび抗菌剤 | |
KR100370883B1 (ko) | 대장균에 대해 항균활성을 갖는 한국산 흑염소 락토페린 유래 가수분해물 및 펩타이드 | |
JPH03280835A (ja) | 卵白分解物およびそれを含有する食品 | |
JP2771068B2 (ja) | 抗菌性ペプチドおよび抗菌剤 | |
JP3173857B2 (ja) | 抗菌性ペプチドおよび抗菌剤 | |
Jamhari et al. | Comparative study on angiotensin converting enzyme inhibitory activity of hydrolysate of meat protein of Indonesian local livestocks | |
JP3645282B2 (ja) | ヘパリン中和剤 | |
JPH04187643A (ja) | 血圧降下剤 | |
JPS62501291A (ja) | 精製セリンプロテアーゼインヒビターおよびこれを含有する医薬組成物 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20110521 |