PL189756B1

PL189756B1 - Polipeptyd ludzkiego agonisty receptora erytropoetyny (EPO), sposób jego wytwarzania i zastosowanie, cząsteczka kwasu nukleinowego, kompozycja, sposób selektywnego namnażania ex vivo erytroidalnych komórek progenitorowych

Info

Publication number: PL189756B1
Application number: PL97332960A
Authority: PL
Inventors: Charles A. Mcwherter; Yiqing Feng; Neena Summers
Original assignee: Searle & Co
Priority date: 1996-10-25
Filing date: 1997-10-23
Publication date: 2005-09-30
Also published as: NO991906L; CN1234073A; PL332960A1; JP2001503266A; CZ130199A3; BR9712675A; KR20000052807A; NO991906D0; EP0939816A1; AU5081098A; WO1998018926A1; AU721196B2; NZ334546A; US20060172932A1; CA2268001A1

Abstract

1 Polipeptyd ludzkiego agorasty receptora EPO, znamienny tym, ze zawiera zmodyfikowana sekwencje aminokwasowi o wzorze A laProProArgLeuIleCysAspSerArgValLeuGluArgTyrLeuLeuGluAlaLys 10 20 GluAlaGluAsnlleThrThrGlyCysAJaGluHisCysSerLeuAsnGluAsnlleThr 30 40 ValProAspThrLysVaIAsnPheTyrAlaTrpLysArgMetGluValGlyGlnGInAla 50 60 ValGluValTrpGlnGlyLeuAlaLeuLeuSerGIuAlaValLeuArgG)yGlnAlaLeu 70 80 LeuValAsnSerSerGlnProTrpGluProLeuGlnLeuHisValAspLysAlaValSer 90 100 GlyLeuArgSerLeuThrThrLeuLeuArgAlaLeuGlyAlaGlnLysGluAlalleSer 110 120 ProProAspAlaAlaSerAlaAlaProLeuArgThrlleThrAlaAspThrPheArgLys 130 140 LeuPheArgValTyrSerAsnPheLeuArgGlyLysLeuLysLeuTyrThrGlyGluAla 150 160 CysArgThrGlyAspArg SEQ ID NO 121 166 w którym to polipeptydzie agonisty receptora EPO ewentualnie od 1 do 6 aminokwasów od oryginalnego N-konca i od 1 do 5 a m i n o k w a s ó w o o r y g i n a l n e g o C - k o n c a j e s t u s u n i e t y c h , 2 Polipeptyd agonisty receptora EPO wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze sekwencja laczaca wybrana jest z grapy zawierajacej: GlyGlyGlySer (SEQ ID NO . 123); GlyGJyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 124); GlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO 125), SerGIyGlySerGlyGlySer (SEQ ID NO 126); GluPheGlyAsnMet (SEQ ID NO : 127), GluPhcGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 128); GiuPheGlyGlyAsnGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO 129) i GlyGlySerAspMetAlaGIy (SEQ ID NO : 130) PL PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazku jest polipeptyd ludzkiego agonisty receptora erytropoetyny (EPO), sposób jego wytwarzania i zastosowanie, cząsteczka kwasu nukleinowego, kompozycja, sposób selektywnego namnażania ex vivo ertroidalnych komórek progenitorowych.

Agonistą ludzkiego receptora EPO według wynalazku zachowuje jedną lub więcej aktywności natywnego receptora EPO, a dodatkowo wykazuje lepszą aktywność stymulującą komórki krwiotwórcze i/lub ulepszony profil aktywności, obejmujący zmniejszenie niepożądanych aktywności biologicznych związanych z natywną EPO i/lub ma polepszone właściwości fizyczne, obejmujące zwiększoną rozpuszczalność, stabilność i lepszą zdolność ponownego przyjmowania konformacji.

Czynniki stymulujące wzrost kolonii, które stymulują różnicowanie i/lub namnażanie się komórek szpiku kostnego znajdują się w centrum zainteresowania ze względu na ich potencjalne zastosowanie do leczenia obniżonego poziomu komórek krwi. Erytropoetyna jest występującym w naturze hormonem glikoproteinowym o masie cząsteczkowej około 39 000 Daltonów (T. Miyaki i wsp., J. Biol. Chem. 252:5558-5564 (1977)). Dojrzały hormon składa się z 166 aminokwasów, a forma „prepro” hormonu, która jest peptydem wiodącym, ma 193 aminokwasy fF. T,in. Dokument Patentowy Stanów Ziednoczonvch Nr 47030081. Masa cza------- - ' J \ s * a steczko wa dojrzałego hormonu obliczona na podstawie sekwencji aminokwasowej wynosi 18399 daltonów (K. Jacobs i wsp., Nature 313:806-810 (1985); J. K. Browne i wsp., Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 5:1693-702 15 (1986)).

Pierwsza zmutowana erytropoetyna (to znaczy analog erytropoetyny) wytworzony przez zastąpienia i delecje aminokwasowe, posiadały zmniejszoną lub niezmienioną aktywność. Jak opisano w Dokumencie Patentowym Stanów Zjednoczonych Nr 4703008 zastąpienie reszt tyrozynowych w pozycji 15, 40 i 145 resztami fenyloalaniny, zastąpienie reszty cysteiny

189 756 w pozycji 7 histydyną zastąpienie proliny w pozycji ; asparaginą, usunięcie reszt usunięcie reszt 863-166, usunięcie reszt ;7-55, nie wpływa znacząco na aktywność biologiczną erytropoetyny. Mutacja Cys do His7 eliminuje aktywność biologiczną. Seria mutantów erytropoetyny mających jednoaminokwasowe podstawienia reszt asparaginy w pozycjach ;4, .;; lub ;; cechuje się bardzo obniżoną aktywnością (podstawienie w pozycji ;4) lub bardzo szybką degradacją wewnątrzkomórkową, co powoduje zanik wydzielania hormonu przez komórki (podstawienie reszt ;; i 882). Usunięcie miejsca O-glikozylacji na serynie 1¾ powoduje gwałtowną degradację lub brak wydzielania analogu erytropoetyny (S. Dube i wsp., J. Biol. Chem., 33:87586-87521 (19;;)). Autorzy ci uważają, że miejsca glikozylacji w pozycjach ;;, ;; i 826 są konieczne do właściwego wydzielania hormonu, a miejsca glikozylacji w pozycjach ;4 i ;; biorą udział w biologicznej aktywności dojrzałej erytropoetyny.

Erytropoetyna pozbawiona reszt glikozylowych zachowuje całkowitą aktywność w testach in vitro (M. S. Dorsal i wsp., Endocrinology 116:2292-2299 (19;5); Dokument Patentowy Stanów Zjednoczonych nr 4702008; E. Tsuda i wsp., Eur J. Biochem. 266.:20929-20929 (1991)). Jednakże powszechnie uważa się, że glikozylacja erytropoetyny pełni krytyczną rolę dla aktywności hormonu in vivo (P. H. Łowy i wsp., Nature 1;5:10;-105 (19;0); E. Goldwasser i C. K. H., Kung, Ann. N.Y. Acad. Sciense 849:99-53 (8968); W. A. Lukowsky i R. H., Painter, Ban. J. Biochem. :909-917 (197;); D.W. Briggs i wsp., Amer. J. Phys. 2O8:8385B;; (1974); J.C., Schooley, Exp. Hematol. 83:994-998; N. Imai i wsp., Eur J. Biochem. 894:457-962 (1990); M.S. Dordal i wsp., Endocrinology 116:2293-2;99 (19;5); E. Tsuda i wsp., Eur. J. Biochem. 188:405-481 (1990); Dokument Patentowy Stanów Zjednoczonych nr 4703008; J. K. Brown i wsp., Cold Spring Harbor Symposia on Quant. Biol. Μ^;^; (19^^ i K. Yamaguchi i wsp., J. Biol. Chem. ;66:20434-20439 (1991)). Brak aktywności biologicznej in vivo pozbawionych reszt glikozylowych analogów erytropoetyny przypisuje się gwałtownemu klirensowi, pozbawionego reszt glikozylowych hormonu z układu krwionośnego, traktowanych nim zwierząt. Pogląd ten poparty jest przez bezpośrednie porównanie czasu półtrwania w surowicy erytropoetyny pozbawionej reszt glikozylowych i erytropoetyny zawierającej reszty glikozylowe (J.C. Spivak i B.B. Hoyans, Blood 7;:90-99 (19;9), i M. N. Fukuda i wsp., Blood 72:89-89 (19;9)).

Rolę reszt glikozylowych w miejscach glikozylacji erytropoetyny zbadano metodą mutagenezy ukierunkowanej na oligonukleotydy, jednakże metodą tą nie udało się znaleźć wydajnej strategii pozwalającej na wydajne poprawienie charakterystyki hormonu pod kątem zastosowań leczniczych.

Wytworzono serie mutantów zawierających jedno podstawienie lub delecje obejmujące reszty aminokwasowe 15, ;4, 49, 7;, 7;, ;;, 14;, 145, ^0, 862, 864, 865 i 866. Mutanty te mają zmieniony koniec karboksylowy, miejsca glikozylacji i reszty tyrozynowe. Mutanty te podawano zwierzętom i mierzono poziom hemoglobiny, hematokryt i poziom retikulocytów (EP Nr O4O9883). Chociaż wiele z tych mutantów zachowało aktywność biologiczną in vivo, żaden nie wykazywał w porównaniu z natywną erytropoetyną znaczącego zwiększenia zdolności do podniesienia poziomu hemoglobiny, hematokrytu lub poziomu retikulocytów (komórek pośrednich w czasie powstawania erytrocytów).

Inny zestaw mutantów skonstruowano w celu zbadania reszt 99-119 (domena 1) i reszt 11 ^1;9 (domena ;) (Y. Chem i wsp., Eur J. Biochem. (1991)). Mutanty ze zmienioną domeną 1 ulegały gwałtownej degradacji i były nieaktywne in vitro. Mutanty ze zmienioną domeną ; w najlepszym wypadku zachowywały niezmienioną aktywność in vitro. Mutanty te nie wykazywały zwiększonej aktywności biologicznej in vivo w porównaniu do erytropoetyny ludzkiej typu dzikiego. Autorzy ci uważają, że reszty 99-119 mają decydujące znaczenie w utrzymywaniu struktury erytropoetyny.

Cząsteczka erytropoetyny ludzkiej zawiera dwa mostki dwusiarczkowe, jeden łączący reszty cysteiny w pozycjach 7 i 1;1, a drugi łączący reszty cysteiny w pozycjach ;9 i ;; (P.H. Lai i wsp., J. Biol. Chem. 268:;l16-;821 (19;;)). Metodą mutagenezy ukierunkowanej na oligonukleotydy zbadano funkcję mostku dwusiarczkowego łączącego reszty cysteiny w pozycjach ;9 i h erytropoetyny ludzkiej. Cysteinę w pozycji ;; zmieniono w prolinę, co naśladuje w tym miejscu strukturę mysiej erytropoetyny. Powstały mutant wykazywał bardzo zmniejszoną aktywność in vitro. Utrata aktywności była tak duża, że autorzy uważają, że

189 756 mostek dwusiarczkowy łączący reszty cysteiny w pozycjach 29 i 33 jest niezbędny dla prawidłowego działania erytropoetyny (F.K. Lin, Mołecular and Cellular Aspects of Erythropoietin and Erythropoiesis, str. H-D, ed. Rich, Springer-Verlag, Berlin (1987)).

Dokument Patentowy Stanów Zjednoczonych Nr 4700008 dla F-K. Lin (oznaczony dalej jako „patent 008”) spekuluje na temat różnych modyfikacji EPO, włączając analogi EPO zawierające addycje, delecje i podstawienia.

„Patent 008” nie stwierdza, że jakakolwiek z sugerowanych modyfikacji zwiększa aktywność biologiczną per se, chociaż stwierdza się, że usunięcie miejsca glikozylacji może zwiększyć aktywność EPO wytwarzanej w drożdżach (Patrz „Patent 008” kolumna 37, wiersz 56-28). W „Patencie 008” spekuluje się także, że analogi EPO, które mają jedną lub więcej reszt tyrozynowych zastąpionych przez fenyloalaninę mogą wykazywać zwiększoną lub zmniejszoną zdolność wiązania receptora.

Australijskie zgłoszenie patentowe Nr AU-A-69145/90 złożone przez Fibi, M i wsp., także opisuje liczne modyfikacje białka EPO (muteiny EPO). Opisuje się w nim zmianę aminokwasów 10-55, 70-85 i mu;;. Szczególnie dodanie dodatnio naładowanych aminokwasów zasadowych w karboksylowym końcu cząsteczki zwiększa aktywność biologiczną EPO.

Dokument Patentowy Stanów Zjednoczonych Nr 4836230 dla Shomakera, C.B. opisuje modyfikacje białka EPO przez podstawienia aminokwasowe metioniny w pozycji H i asparaginy w pozycji 38. Uważa się, że takie mutanty EPO mają polepszoną stabilność ale nie wykazują żadnego zwiększenia aktywności biologicznej w stosunku do EPO typu dzikiego.

WO 91/05837 opisuje analogi ludzkiej erytropoetyny mające większą liczbę miejsc wiązania węglowodanów niż natywna ludzka erytropoetyna, takie jak EPO (Asn;⁹), EPO (Asn^ , Ser¹²⁷), EPO (Th^l²l), EPO (Pro1²⁴, 1^).

WO 94/24130 opisuje analogi erytropoetyny mające większą aktywność, szczególnie mające podstawione aminokwasy w pozycjach 20, ;9, 73, M0, m, W), 1;7 i m.

WO 94/26066 opisuje analogi erytropoetyny obejmujące EPO (X , Cysⁿ9, des-Arg¹^) i EPO (Cys^B9, des-Arg^).

Przekształcenia struktury białka

W ewolucji, przekształcenia sekwencji DNA pełnią ważną rolę w tworzeniu różnorodności struktury i funkcji białek. Duplikacja genów i przesunięcia egzonów stanowią ważne mechanizmy gwałtownego powstawania różnorodności, w ten sposób zapewniając organizmowi przewagę ewolucyjną, szczególnie w warunkach niskiej częstości mutacji (Doolittle, Protein Science 1:191-200, 1992).

Rozwój metod rekombinacji DNA umożliwił badanie wpływu zmian sekwencji na fałdowanie się białek, ich strukturę i funkcję. Podejście wykorzystywane przy wytwarzaniu nowych sekwencji przypomina, to występujące w naturalnie występujących parach białek, których pokrewieństwo wynika z liniowej reorganizacji sekwencji aminokwasowej (Cunningam i wsp., Proc. Natl. Acad. Sei. U.S. A. 73:0518-0222, 1979; Teather i Erfle, J. Bacteriol. ;72:0837-3841, 1990; Schimming i wsp., Eur. J. Biochem. 204:;0-19, 1992; Yamiuchi i Minamikawa, FEBS Lett. 078:230-233, ;993). Pierwsze zastosowanie tego typu przekształcenia w odniesieniu do białek zastało opisane przez Goldenberga i Creightona (J. Mol. Biol. ;65:407-4;0, 1983). W wybranym miejscu wewnątrz oryginalnej sekwencji tworzy się nowy N-koniec (miejsce przerwania). Nowa sekwencja ma ten sam porządek aminokwasów jak oryginalna sekwencja od miejsca przerwania do aminokwasu leżącego blisko C-końca. W tym miejscu do aminokwasu, który znajduje się w, lub blisko oryginalnego N-końca przyłącza się nową sekwencję, albo bezpośrednio, albo stosując dodatkowe sekwencje łączące (linkery). Nowa sekwencja rozciąga się tak samo jak oryginalna sekwencja aż do aminokwasu będącego lub leżącego blisko aminokwasu, który był N-końcem miejsca przerwania oryginalnej sekwencji. Reszta ta tworzy nowy C-koniec łańcucha.

Podejście takie było stosowane do białek różniących się wielkością od 58 do 432 aminokwasów (Goldenberg i Creighton, J. Mol. Biol. 135:407-4l0, 1983; Li i Cofino, Mol. Celi. Biol. 13:^377-2380, 1993). Zbadane białka reprezentowały szeroki wachlarz klas struktural14

189 756 nych, włączając białka zawierające głównie α-helisy (interleukina-4; Kreitman i wsp., Cytokine 7:811-818, 1995), strukturę β (pofałdowanej kartki) (irterleukina-1, Horlick i wsp., Protein Eng. 5:057-481, 1992), lub mieszaninę obu struktur (drożdżowa izomeraza fosforybozyloantranilatu; Luger i wsp., Science 248:206-210, 1989). Badania reorganizacji sekwencji obejmowały białka o szerokim zakresie działania:

Enzymy

Lizozym T4

Reduktaza dihydrofoliarowa

Rybonukleaza Tl β-glukanaza z Bacillus Transkarbamoilara asparaginowa

Zhang i wsp., Biochemistry 82:1211-15818 (199;); Zhang i wsp., Nature Struct. Biol. 1:080-438 (1995) Buchwalder i wsp., Biochemistry ;1:1621-16;0 (1994); Protasova i wsp., Prot. Eng. 7:1;7;-1;77 (1995)

Mullins i wsp., J. Am. Chem. Soc. 116:0559-5533 (1994); Garrett i wsp., Protein Science 5:204-211 (1996)

Hahn i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91:10417-10421 (1994)

Yang i Schachman, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A 90:1198^-11^^4(199;)

Izomeraza fosforybozyloartramlatu pepsyra/pepsyrogen dehydrogenaza ;-fosforanu dekarboksylaza omityny drożdżowa dehydrogenaza fosfogliceroloaldehydu

Luger i wsp., Science 543:206-210 (1989); Luger i wsp., Prot. Eng. ;:249-258 (1990)

Lin i wsp., Protein Science 4:159-166 (1995) Vignais i wsp., Protein Science 4:994-1000 (1995)

Li i Coffrno, Mol. Cell. Biol. 1;:2;77-2;8; (199;) Ritco-Vorsovici i wsp., Biochemistry 80:16543-16551(1995)

Inhibitory enzymów

Podstawowy trzustkowy inhibitor trypsyny

Goldenberg i Creighton, J.Mol. Biol. ^^5.O07-41; (198;)

Cytokiny irterleukira-1β

Domena rozpoznająca kinazę tyrozynową

Domena SH; α-spektryny

Horlick i WSP., Protein Eng. 5:427-4;1 (1992) Kreitman i wsp., Cytokine 7:;n-31 8(1995)

Viguera i wsp., J. Mol. Biol. 247-670-681 (1995)

Białka przezbłonowe Omp A

Koebnik i Kramer, J. Mol. Biol. 250:617-626 (1995)

Białka chimerowe

Biako połączone irterleukira-0-egzotosyna Pseudomonas mtrniian

91:6889-6898 ; χτ~*ι a .„4 o~; tto a

j. nw. nau. /ivau.uvi.

Wyniki tych badań były bardzo zmienne. W wielu przypadkach obserwowano znaczące obniżenie się aktywności, rozpuszczalności lub stabilności termodynamicznej (reduktaza dihydrofolianowa E.coli, transkarbamoilaza asparaginowa, izomeraza fosforybozyloartrarilatu, dehydrogenaza aldehydu ;-fosfoglicerolowego, dekarboksylaza omityny, omp A, drożdżowa

189 756 dehydrogenaza aldehydu fosfoglicerolomrgo). W innych przypadkach białka o przekształconej sekwencji wydawały się mieć prawie identyczne właściwości jak naturalne białka wyjściowe (podstawowy trzustkowy inhibitor trypsyny, lizozym T4, rybonuklryza T1, β-glukanyza z Bacillus, interleuk.ina-ip, domena SH3 a-spaktryny, pepsynogen, intrrleukina-4). W szczególnych przypadkach obserwowano niespodziewaną poprawę niektórych właściwości nowego białka w stosunku do białka o naturalnej sekwencji.

N_a p_rzykł_ad, _ob_ser_WoWano niespodziewaną poprawę rozpuszczalności i tempa fałdo_wam_a pi^k^tałconej d_ome ^wy SHⁿ αyspektrynyi lub powinowactwa do receptora i ygtywfności Wrzeciwnowotworowej bi.h.a połączonego mSarlaukioa^m-3 agzotosyna Pseudomonas (Kraitman i wnow Proc. ^wat^-. z\cad. ^pci. U.S.A. 9UeSSy-kSD-⁴ 599g; Krełtmtn i ws°>., Caiser Res. 33:n337-3363, 1995).

Głó^y. _motore_m tego typu badań było badanie roli oddziaływań krótkiego zasięgu i _oddzi_ały_Wań d^mgiego zasięgu w fałdowamu i sSdbilnośc^| bidłek. Przestawienia tego typu zy^cdieniają oddziaływani^ długiego zasięgu, występujące w oryginalnej sekwencji, w oddziaiymynia kró^tgieg_{0 za}sięgu w nowe.j sakwancji i odmroSn^re. Fakt, że w-ide z tych przeksatdiconych sekwencji tcs^t zdolnych do a^jrzyatyktyoia konformacji o prżynąjmniej pemnat aktywności wskazuje, żr. fałdow/anie białek możw następować różnymi sposobami ^tyuera ^s wsp., J. Mol. Biol. 247:670-681, Di 995). W ptżypydgu domeny SH3 α -s^khy^ wybranie nowe^po końca W miejsru odpowiadaj ącymi załamamu w gsaSyirie β-szpilki do wło sów, powodowało pows^yaąi e białka o nircą moiejsżaa stabilności, która pomimo tego ulegało ^całdomaniu.

Pozyrtr watąnętrzoago miejsca pozrrwynia_i użyte w opis anych pomyżąt badaniach, znąjdowzły się ąry^torzoia nai pawierzchm białka i rozmiesączone były w hmowej sekwencji bez żadaych ocąymistych wskawiń w girranku końrem lub śnodka s akwancty (reżoiąe we względnej odległości yd otyginalńe^ko N-końca do miwj sca przerwania wynosiły około o^{a w}0 do 80% całkowiset długości sekwencji). Eegmrncj a łącząca orygiwalna N- i C-końra w tyoh badaniach ahały od 0 do 9 reszt W jndnym ptzypadgu (Yang i Schorjonani Proc. Nrtl. Acad. Sci. U.SA. 90:11980-119884) rzęś^e sakwanęji id>anięto r orygioyiorgo srgmeota C-tedmioainego i połączono obcięty C-koniar z oryginalnym N-końcem. Jako sekwencja łączące czę^ο używona są reszty hżdro^żilowri takie jak Gly lub Err_i Vigaera i w^:sp. (J. Mol. Biok 247670-68 W 1995) pos^zsyoaj^d łączenie oryginalnych N- i C-końców sekwencjami i^ńcoącyati o d^;ugości 3 lub 4 reszt. Są^oweorja łącząra aytaieratąca 3 reszty jest .μ.W s^tabilaa Sermr^yanamicaria. Protaeova i wsp. (Protein Eng. 7:13734377, 1994) użyła sekwencji łącznych, o długości 3 lub 5 reszt, do pkłączenia oryginalnych N-końrów redu^aeyay di^kkdrofblianamrj E. coli, z dobrą wydatoośdą wytworzono białko, tylko przy aeyrik sekwencji łączącej, o d^iwści 3 reszt.

Poarda^WoSem ą^conalazku jzst poh^yeptyd luda^wiago agooisty receptora arjrSropoatyoy (EPO) azą^darąjąc^a zmodyfikowaną sakwⁱaorję ymmogmysomą o wziorzei

AlaProProArgLaaIleCż^,sAspSer6rrgYalLaaGłuArgTyrLaa8auGluAla8ys r0 ^g 2ż

GiaAiaGluAsnIlaThrΊ'hzGlyCysAlaGlaHisCysEarLaaAsnGluAsoIlaThr 30 40

ValProAspThzLysValAsnPhaTyrAlaTztLysArgMetGluValGlyGlnGloAly 50 60

ValGlaVaΓίrpGlnGlyLeuAiaLaaLaaEarGiuAia'ValLeuArgGiyGinAiy[,ea 70 8.

LauValAsnSarSarGlnProTrpGlaProLauGlnLauHisValAspLysAiaValS_ar 90 100

Gly8auArgSarLauThrThzLauLauAzgAla8aaGiyAlaGlnLysGίuAlaIlaSar nr mar

HU

ProProAspAlyAlyEarAlaAlaPro8ai.6rgT0rllaThrAlaAspTjzP0aAzgLys 130 140

8a_UP0aArgValTyrSarAsoP0aLaaA9^oGlyLys8au8ysLeuTżIThrGlyGlaA⁾a A50 160

CysArgT0rGlyAspArg SnQIDNO:121

Arg

189 756 w; którym to polipeptydzie agonisty receptora EPO ewentualnie od 1 do 6 aminokwasów od oryginalnego N-końca i od 1 do 5 aminokwasów od oryginalnego C-końca jest usuniętych;

i w którym oryginalny N-koniec jest połączony z oryginalnym C-końcem bezpośrednio lub ; przez sekwencję łączącą zdolną do połączenia N-końca z C-końcem i posiadającym nowe C- i N-końce odpowiednio przy amninokwasach:

23-74	48-49	m-u;
74l24	40l41	112-113
75-26		M-D;
76-27	57l52	m-m
77-28	nu	115-116
28-29	44-55	116-117
29-20	55-56	117-118
30-41	56-57	118-119
hb;	57-58	119-170
32-33	77-78	120-121
	78-79	md;;
34-34	79-80	122-123
	80-81
36-37	81-87	124-175
37-38		124l176
38l49	84-85	126-177
40-41	85-86	127-128
41-42	86-87	128-129
43-44	87-88	129-130
44-45	88-89	131-137
45-46	^08-109
46-47	109-110
47-48	660-111

przy czym ten polipeptyd agonisty receptora EPO może być ewentualnie poprzedzony przy N-końcu przez (metioninę '*), aakminę'') lub przez (metioninę'! alaninę '1).

Korzystnie przedmiotem wynalazku jest polipeptyd agonisty receptora EPO zawierający sekwencję łączącą wybraną z grupy składającej się z:

GlyGlyGlySer (SEQ ID NO : ^j;

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 124); GlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 175);

SerGlyGlySerGlyGlySer (SEQ ID NO : 126);

GluPheGlyAsnMet (SEQ ID NO : 127);

GluPheGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 128);

GlupheGlyGlyAsnGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 129) i GlyGlySerAspMetAlaGly (SEQ ID NO : 130).

Przedmiotem wynalazku jest również korzystnie polipeptyd agonisty receptora EPO o sekwencji wybranej z grupy składającej się z:

SEQ ID NO; 1 SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO:

; SEQ ID 7; SEQ 12; SEQ 17; Sb(Q 22; SEQ 27; SEQ 3^2 SEQ 33; SEQ 442 SEQ 4^; SEQ

NO: 2; SEQ

ID NO IID NO IID Nu IID NO IID NO IID NO IID NO IID NO ID NO

8;

13;

18;

23;

28;

33;

38;

43;

48;

ID NO: 3; SEQ SEQ ID NO: SEQ IID NO: SbQ II» No: SEQ DD NO: SEQ DD NO: SEQ DD NO: SEQ DD NO: SEQ DD NO: SEQ IID NO:

ID NO: 4; SEQ ID 9; SEQ ID NO: 14; SEQ ID NO: 19; SbQ ID NO: 24; SEQ ID NO: 29; SEQ ID NO: 34; SEQ ID NO: 39; SEQ ID NO: 44; SEQ ID NO: 49; SEQ ID NO:

NO: 5; SEQ ID NO: 6; 10; SEQ ID NO: 11; 15; SEQ IłD NO: 16;

20; c>JtSQ ud ino z.1-, 75; SEQ IłD NO: 26; 30; SEQ IłD NO: 31; H; SEQ DD NO: 36; 40; SEQ DD NO: 41; 45; SEQ DD NO: 4(5; 50; SEQ ID NO: 51;

189 756

SEQ TD NO: 52; SEQ ID NO: 53; SEQ TD NO: 54; SEQ TD NO: 55; SEQ TD NO: 5;; SEQ TD NO: 57; SEQ TD NO: 58; SEQ TD NO: 59; SEQ TD NO: 122.

Korzystniej przedmiotem wynalazku jest polipeptyd agonisty receptora EPO, w którym sekwencja łącząca (GlyGTyGlySer SEQ TD NO : 123) jest zastąpiona przez sekwencję łączącą wybraną z grupy składającej się z:

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ TD NO : 124);

(SEQ TD NO : 125);

SerGlyGlySerGlyGlySer (SEQ TD NO : 12;);

GluPheGlyAsnMet (SEQ TD NO : 127);

GluPheGlyGlyAsnMet (SEQ TD NO : 128);

GluPheGlyGlyAsnGlyGlyAsnMet (SEQ iD NO : 129) i

GlyGlySerAspMetAlaGly (SEQ TD NO : 130).

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest cząsteczka kwasu nukleinowego zawierająca sekwencję DNA kodującą polipeptyd ludzkiego agonisty receptora EPO jak określono powyżej.

Innym przedmiotem wynalazku jest cząsteczka kwasu nukleinowego zawierająca sekwencję DNA kodującą polipeptyd ludzkiego agonisty receptora EPO jak określono powyżej, w którym sekwencja łącząca wybrana jest spośród:

GlyGTyGlySer (SEQ TD NO : 123);

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ TD NO : 124);

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SE— ID NO : 125);

SerGlyGlySerGlyGlySer (SEQ ID NO : 12;);

GluPheGlyAsnMet (SEQ ID NO : 127);

GluPheGlyGlyAsnMet (SEQ TD NO : 128);

GiuPheGiyGiyAsnGlyGlyAs^<^t (SEQ TD NO : 129) i

GlyGlySerAspMetAlaGly (SEQ ID NO : 130).

Przedmiotem wynalazku jest też cząsteczka kwasu nukleinowego zawierająca sekwencję DNA kodującą polipeptyd ludzkiego agonisty receptora EPO jak określono powyżej o sekwencji aminokwasowej wybranej z grupy składającej się z:

14; SEQ ID NO 19; SEQ ID NO

SEQ ID NO: 1; SED TD NO: 2; SEQ ID NO: 3; SEQ ID NO: 4; SEQ ID NO: 5; SEQ ID NO: ó; SEQ ID NO: 7; SEQ ID NO: 8; SEQ ID NO: 9; SEQ ID NO: 10; SEQ TD NO: 11; SEQ ID NO: 12; SEQ ID NO: 13; SEQ ID NO:

SEQ ID NO: 17; SEQ ID NO: 18; SEQ ID NO:

SEQ ID NO: 22; SEQ ID NO: 23; SEQ ID NO: 24; SEQ ID NO ;

SEQ ID NO: 27; SEQ ID NO: 28; SEQ ID NO: 29; SEQ ID NO ;

SEQ ID NO: 32; SEQ ID NO: 33; SEQ ID NO: 34; SEQ D NO ;

SEQ ID NO: 37; SEQ ID NO: 38; SEQ ID NO: 39; SEQ ID NO ;

SEQ ID NO: 42; SEQ ID NO: 43; SEQ ID NO: 44; SEQ ID NO ;

SEQ ID NO: 47; SEQ ID NO: 48; SEQ ID NO: 49; SEQ ID NO ;

SEQ ID NO: 52; SEQ ID NO: 53; SEQ ID NO: 54; SEQ D NO ;

SEQ ID NO: 57; SEQ TD NO: 58; SEQ TD NO: 59; SEQ TD NO: 122.

Przedmiotem wynalazku jest także cząsteczka kwasu nukleinowego zawierająca sekwencję DNA, kodującą określony powyżej polipeptyd ludzkiego agonisty receptora EPO o sekwencji aminokwasowej jak określono powyżej, wybraną z grupy składającej się z:

15; SEQ ID NO: 11; 20; SEQ ID NO: 22; 25; SEQ ID NO: 22; 30; SEQ ID NO: 31; 35; SEQ ID NO: 36; 40; SEQ ID NO: 44; 45; SEQ ID NO: 44; 50; SEQ ID NO: 51; 55; SEQ ID NO: 56;

SEQ ID NO: ;0; SEQ ID NO: ;1; SEQ ITD NO: 62; SEQ D NO

SEQ ID NO: 66l SEQ ID NO: ββ; SEQ ID NO: 6Ί; SEQ D NO

SEQ TD NO: 70; SEQ ID NO; 71; SEQ ID NO: Ί2; SED ID NO

SEO ID NO: 75: SEO TD NO: 7;: SEO TD NO: Tl· SEO ID NO

SEQ ID NO: 80; SEQ ID NO: 81; SEQ ID NO: 82; SEQ ID NO

SEQ ID NO: 85; SEQ Π0 NO: 8;; SEQ ID NO: 87; SEQ D NO

SEQ TD NO: 90; SEQ ID NO: 91; SEQ ID NO: 92; SEQ D NO

SEQ ID NO: 95; SEQ ITD NO: 96l SEQ ID NO: 9Ί; SEQ ID NO ;3; SEQ Π0 NO: 6;; 68; SEQ ID NO: 6;; 73; SED ID NO: 74; 78: SEO ID NO: 77; 83; SEQ ID NO: 84; 88; SEQ ID NO: 88; 93; SEQ ID NO: 99; 38l SEQ ID NO: 99;

SEQ ID NO: 100; SEQ ID NO: 101; SEQ ID NO: 102; SEQ ID NO: 103; SEQ ID NO: 104; SEQ ID NO: SEQ TD NO: 10;; SEQ ID NO: 107; SEQ TD NO: 108; SEQ ID NO: 109;

189 756

SEQ ID NO: 110; SEQ ID NO: 111; SEQ ID NO: 112; SEQ ID NO: 113; SEQ ID NO: m; SEQ ID NO: 115; SEQIDNO: ID; SEQ ID NO: 117; SEQ ID NO: 118; SEQ ED NO: 119.

Przedmiotem wynalazku jest też cząsteczka kwasu nukleinowego zawierająca sekwencję DNA kodującą polipeptyd ludzkiego agonisty receptora EPO jak określono powyżej o sekwencji wybranej z grupy składającej się z:

SEQ ID NO: 1; SEQ ID NO: 2; SEQ ID NO: 3; SEQ ID NO: ;; SEQ ID NO: 5; SEQ ID NO: ;; SEQ ID NO: 7; SEQ ID NO: 8; SEQ ID NO: 9; SEQ ID NO: 10; SEQ ID NO: 11; SEQ ID NO: 12; SEQ ID NO: 13; SEQ ID NO: M; SEQ ID NO: 15; SEQ ID NO: 16;

SEQ ID NO: 17; SEQ ID NO: 18; SEQ ID NO: 99 ; SEQ ID NO: 20; SEQ ID NO: 21;

SEQ ID NO: 22; SEQ ID NO: 23; SEQ ID NO: 24; SEQ ID NO: 25; SEQ ID NO: 2;;

SEQ ID NO: 27; SEQ ID NO: 28; SEQ ID NO: 29; SEQ ID NO: 30; SEQ ID NO: 31; SEQ ID NO: 32; SEQ ID NO: 33; SEQ ID NO: 34 ; SEQ ID NO: 35; SEQ ID NO: 36;

SEQ ID NO: 37; SEQ ID NO: 38; SEQ ID NO: 39 ; SEQ ID NO: H; SEQ ID NO: 41;

SEQ ID NO: 42; SEQ ID NO: H; SEQ ID NO: 44; SEQ ID NO: H; SEQ ID NO: 4;;

SEQ ID NO: 47; SEQ ID NO: ;8; SEQ LD NO: 49 ; SEQ ID NO: 50; SEQ UD NO: 51;

SEQ ID NO: 52; SEQ ID NO: 53; SEQ ID NO: 54; SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO: 56;

SEQ ID NO: 57; SEQ ID NO: 58; SEQ ID NO: 59; SEQ ID NO: 122, w którym sekwencja łącząca (GlyGlyGlySer SEQ ID NO : 123) jest zastąpiona przez sekwencję łączącą wybraną z grupy składającej się z:

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : m);

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 125);

SerGlyGlySerGlyGlySer (SEQ ID NO : 12;);

GluPheGlyAsnMet (SEQ ID NO : 127);

GluPheGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 128);

GluPheGlyGlyAsnGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 129) i

GlyGlySerAspMetAlaGly (SEQ ID NO : 130).

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania polipeptydu ludzkiego agonisty receptora EPO polegający na hodowli w odpowiednich warunkach odżywczych komórki gospodarza transformowanej lub transfekowanej wektorem replikacyjnym zawierającym cząsteczkę kwasu nukleinowego obejmującą sekwencję DNA kodującą polipeptyd agonistyk receptora EPO jak określono powyżej.

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest też sposób wytwarzania polipeptydu agonisty receptora EPO polegający na hodowli w odpowiednich warunkach odżywczych komórki gospodarza transformowanej lub transfekowanej wektorem replikacyjnym zawierającym cząsteczkę kwasu nukleinowego obejmującą sekwencję DNA kodującą polipeptyd agonisty receptora EPO jak określono powyżej, w którym sekwencja łącząca wybrana jest z grupy składającej się z:

GlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 123);

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : m);

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 125);

SerGlyGlySerGlyGlySer (SEQ ID NO : 12;);

GluPheGlyAsnMet (SEQ ID NO :127);

GluPheGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 128);

GluPheGlyGlyAsnGlyGlyAsnMet (SEQ iD NO : 129) i

GlyGlySerAspMetAlaGly (SEQ ID NO : 130).

Przedmiotem wynalazku jest również sposób wytwarzania polipeptydu agonisty receptora EPO polegający na hodowli w odpowiednich warunkach odżywczych komórki gospodarza transformowanej lub transfekowanej wektorem replikacyjnym zawierającym cząsteczkę kwasu nukleinowego obejmującą sekwencję DNA kodującą polipeptyd agonisty receptora EPO jak określono powyżej o sekwencji aminokwasowej wybranej z grupy składającej się z: SEQ ID NO: 1; SEQ ID NO: 2 ; SEQ ID NO : 3 ; SEQ HD NO :4: SEQ ID NO: 5: SEQ ID NO : 6;

SEQ ID NO: 77 SEQ ID NO: 8; SEQ D NO : 9>: SEQ ID NO: 10: SEQ ID NO : 11;

SEQ ID NO: 12; SEQ ID NO: 13 ; SEQ D NO : 14; SEQ UD NO : 15 ; SEQ ID NO : 16;

SEQ ID NO: Π; SEQ ID NO: 18 ; SEQ E> NO : 19 ; SEQ ID NO : 20 ; SEQ DD NO : 21;

189 756

SEQ ID NO: 22; SEQ ID NO: 23; SEQ ID NO: ;4; SEQ ED NO: 25; SEQ ED NO: 26;

SEQ ID NO: 27; SEQ ED NO: 28; SEQ ID NO: ;9; SEQ ED NO: 30; SEQ ED NO: 31;

SQQ ID NO: 32; SEQ ED NO: 33; SEQ ID NO: 39; SEQ ED NO: 35; SEQ IID NO: 36;

SEQ ID NO: 37; SeQ ED NO: 38; SEQ ID NO: ;9; SEQ ED NO: 40; SEQ ED NO: 41;

SEQ ID NO: 42; SEQ DD NO: 4^; SEQ ID NO: 44; SEQ ED NO: 45; SEQ ID NO: 46; SEQ ID NO: 47; SEQ UD NO: 48; SEQ ID NO: 49; SEQ I]D NO: 50; SEQ ED NO: 51;

SEQ ID NO: 52; SE^ ED NO: 53; SEQ ID NO: 54; SEQ IID NO: 55; SEQ ED NO: 56;

SEQ ID NO: 57; SEQ ID NO: 5;; SEQ ID NO: 59; SEQ ID NO: 822.

Przedmiotem wynalazku jest także sposób wytwarzania polipeptydu agonisty receptora EPO polegający na hodowli w odpowiednich warunkach odżywczych komórki gospodarza transformowanej lub transfekowanej wektorem replikacyjnym zawierającym cząsteczkę kwasu nukleinowego obejmującą sekwencję DNA, kodującą określony powyżej polipeptyd agonisty receptora EPO o sekwencji aminokwasowej określonej powyżej, wybraną z grupy składającej się z:

SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO

60; SEQ ED NO: 611 SEQ ID NO: ;;; SEQ ED NO: 63; SEQ IID NO:

65; SEQ ED NO: 66; SEQ ID NO: ;7; SEQ ID NO: 68; SEQ IID NO:

70; SEQ ED NO: 711 SEQ ID NO: H; SEQ ID NO: 73; SEQ IID NO:

75; SEQ ED NO: 76; SEQ ID NO: 77; SEQ ID NO: 7!?; SEQ ID NO:

64;

69;

77^;

79;

84;

89;

94;

99;

80; SEQ ED NO: 8I1 SEQ ID NO: ;;; SEQ ID NO: 83; SEQ ID NO:

85; SEQ ED NO: 86; SEQ ID NO: ;7; SEQ ID NO: 88; SEQ ID NO:

90; SEQ ED NO: 9E SEQ ID NO: 9;; SEQ ID NO: 93; SEQ ID NO:

95; SEQ ED NO: 96; SEQ ID NO: 97; SEQ ID NO: 98; SEQ ID NO:

SEQ ID NO: 100; SEQ ID NO: 101; SEQ ID NO: 10;; SEO ID NO: 10;; SEQ ID NO: 104;

SEQ ID NO: 105; SEQ ID NO: 106; SEQ ID NO: 107; SEQ IID NO: 108; SEQ ID NO: 110;

SEQ ID NO: 1101 S EQ QD NO: 1111 SEQ ID NO: 112; SEQ IID NO: 111; SEQ ID NO: 114;

SEQ ID NO: 115; SEQ ID NO: 11;; SEQ ID NO: 117; SEQ ID NO: D;; SEQ ID NO: 119.

Przedmiotem wynalazku jest też sposób wytwarzania polipeptydu agonisty receptora EPO polegający na hodowli w odpowiednich warunkach odżywczych komórki gospodarza transformowanej lub transfekowanej wektorem replikacyjnym zawierającym cząsteczkę kwasu nukleinowego obejmującą sekwencję DNA, kodującą określony powyżej polipeptyd agonisty receptora EPO o sekwencji aminokwasowej wybranej z grupy składającej się z:

SEQ ID NO: 1; SEQ ID NO: ;; SEQ ID NO: ;; SEQ ID NO: 4; SEQ ID NO: 5; SEQ ID NO: ó;

SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO:

7;

121

171

22;

27;

32;

37;

424

47;

525

SEQ ID NO S EQ ED NO ;eq ED NO S EQ ED NO S EQ ED NO ;eq ED NO ;EQ ED NO ;eq ud no ;eq ud no ;eq ud no ;; SEQ ID NO: 11; SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO:

11;

2;;

28;

3;;

10; SEQ ID NO: 115 SEQ IID NO: SEQ IID NO: SEQ ID NO: SEQ IID NO: SEQ ID NO:

20;

2;;

30;

3^5

11;

211

26;

3^1

36;

441

44;

551

5^;

9; SEQ ID NO:

14; SEQ IID NO:

19; SEQ ID NO:

;4; SEQ ID NO:

;9; SEQ ID NO:

34; SEQ ID NO:

3;; SEQ ID NO: ;9; SEQ ID NO: 40; SEQ ID NO:

4^; SEQ ID NO: 44; SEQ ID NO: 44; SEQ ID NO:

44; SEQ ID NO: 49; SEQ ID NO: 50; SEQ IID NO:

55; SEQ ID NO: 54; SEQ ID NO: 555 SEQ IID NO:

SEQ ID NO: 57; SEQ ID NO: 5;; SEQ ID NO: 59; SEQ ID NO: m, w którym sekwencja łącząca (GlyGlyGlySer SEQ ID NO : 823) jest zastąpiona przez sekwencję łączącą wybraną z grupy składającej się z:

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : H;); GlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : m);

SerGlyGlySerGlyGlySer (SEQ ID NO : H;);

GluPheGlyAsnMet (SEQ ID NO : 127);

GluPheGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : H;);

GlupheGlyGlyAsnGlyGlyAsnMet (SEQ iD NO : H9) i GlyGlySerAspMetAlaGly (SEQ ID NO : 1 ;0).

Przedmiotem wynalazku jest również kompozycja zawierająca polipeptyd agonisty receptora EPO jak określono powyżej i farmaceutycznie akceptowalny nośnik.

189 756

Przedmiotem wynalazku jest również kompozycja zawierająca polipeptyd agonisty receptora EPO jak określono powyżej; czynnik wybrany z grupy: GM-CSG, G-CSF, ligand c-mpl, M-CSF, IL-1, IL-4, IL-2, IL-3, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, 10 IŁ-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, LIF, ligand flt3/flk2, ludzki hormon wzrostu, czynnik wzrostu limfocytów B, czynnik różnicowania limfocytów B, czynnik różnicowania eozynofili i czynnik wzrostu komórek macierzystych, warianty IL-3, białka fuzyjne, agoniści receptora G-CSF, agoniści receptora c-mpl, agoniści receptora IL-3 i wielofunkcyjni agoniści receptora; oraz farmaceutycznie akceptowalny nośnik.

Przedmiotem wynalazku jest też kompozycja zawierająca polipeptyd agonisty receptora EPO jak określono powyżej, w którym sekwencja łącząca wybrana jest z grupy składającej się z:

GlyGlyGlySer (SEQ EI NO : 123);

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 124);

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SeQ ID NO :

SerGlyGlySerGlyGlySer (SEQ ID NO : 126);

GluPheGlyAsnMet (SEQ ID NO : 127);

GluPheGlyGlyAsnMet (SEQ ID NN : 128);

GlupheGlyGlyAsnGlyGlyAsnMet (SEQ iD NN : 129) i

GlyGlySerAspMetAlaGly (SEQ ID NO : 130).

Przedmiotem wynalazku jest także kompozycja zawierająca polipeptyd agonisty receptora EPO jak określono powyżej i farmaceutycznie akceptowalny nośnik, przy czym polipeptyd agonisty receptora EPO wybrany jest z grupy składającej się z:

SEQ ID ON: 1; SEQ ID NO: 2; SEQ ID NO: 3; SEQ ID NO: 4; SEQ ID NN: 5; SEQ ID NO: 6; SEQ ID NN: 7; SEQ ID NO: 8; SEQ ID NO: 9; SSE ID NO: 10; SEQ ID NO: 11; SEQ ID NO: 12; SEQ ID NO: 13 i SEQ ID NO i 1^; SEQ ID NO: 15; SEQ ID NO: 16;

SEQ ID NO: 17; SEQ ED NO: 18 i SEQ ID NO i 19; SEQ ID NO: 20; SEQ ID NO: 21;

SEQ ID NO: 22; SEQ ID NO: 23i SEQ ID NO i 24; SEQ ID NO: 25; SEQ ID NO: 26;

SEQ ID NO: 27; SEQ ID NO: 28i SEQ ID NO i 29; SEQ ID NO: 30; SEQ ID NO: 31;

SEQ ID NO: 32; SEQ ID NO: 33i SEQ ID NO i 34; SEQ ID NO: 35; SEQ ID NO: 3(5;

SEQ ID NO: 37; SEQ ID NO: 38i SEQ ID NO i 39; SEQ ID NO: 40; SEQ ID NO: 41;

SEQ ID NO: 42; SEQ ID NO: 43 i SEQ ID NOi 44; SEQ ID NO: 45; SEQ ED NO: 46; SEQ ID NO: 47; SEQ ED NO: 48i SEQ ID NO i 49; SEQ ID NO: 50; SEQ ED NO: 51;

SEQ ID NO: 52; SEQ ED NO: 53i SEQ ID NO i 54; SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO: 56;

SEQ ID NO: 57; SEQ ID NO: 58; SEQ ID NO: 59; i SEQ ID NO: 122.

Przedmiotem wynalazku jest też kompozycja zawierająca polipeptyd agonisty receptora EPO jak określono powyżej i farmaceutycznie akceptowalny nośnik, przy czym polipeptyd agonisty receptora EPO wybrany jest z grupy składającej się z:

SEQ ID OO: 1; SEQ ID NN: 2; SEQ ID NN: 3; SEQ

SEQ ID OO: SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO

8; SEQ ID NO:

7; SEQ ID NN 12; SEQ ED NO 17; SEQ ID NO 22; SEQ ED NO 27; SEQ ID NN 32; SEQ ED NO 37; SEQ ID NO 42; SEQ ID NO 47; SEQ ID NO 52; SEQ ID NO SEQ ID ON: 57; SEQ ID NN: 58; SEQ ID NO: 59; i i przy czym sekwencja łącząca (SEQ ID NO wybraną z grupy składającej się z:

18!

SEQ ID NOi SEQ ID NO i

23i SEQ ID NO i

SEQ ID NO i SEQ ID NO i SEQ ID NO i SEQ ID NO i SEQ ID NOi SEQ ID NOi

ID NO: 4; SEQ ID NO: 9; SEQ ID NO: 10; 1^; SEQ ID NO: 15; 1^; SEQ ID NO: 20; 24; SEQ ID NO: 25; 29; SEQ ID NO: 30; 34; SEQ ID NO: 35; 39; SEQ ID NO: 40; 44; SEQ ID NO: 45; 49; SEQ ID NO: 50; 54; SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO: 122 : 123) jest zastąpiona

5; SEQ ID NO: 6;

SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ED NO SEQ ED NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO

11;

16;

21;

26;

31;

36;

41;

46;

51;

56;

sekwencją łączącą

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NN:

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NN : 722); SerGlyGlySerGlyGlySer (SEQ ID NO : 126); GluPheGlyAsnMet (SEQ ID NN : 127);

189 756

GluPheGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 128);

GluPheGlyGlyAsrGlyGlyAsrMet (SEQ ID NO : 129) i

GlyGlySerAspMetAlaGly (SEQ ID NO : 1;0).

Przedmiotem wynalazku jest również kompozycja zawierająca polipeptyd agonisty receptora EPO jak określono powyżej; czynnik wybrany z grupy składającej się z: GM-CSG, G-CSF, ligand c-mpl, M-CSF, IL-1, IL-4, IL-2, IL-;, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-1;, IL-15, LIF, ligand 1^3/:1^, ludzki hormon wzrostu, czynnik wzrostu limfocytów B, czynnik różnicowania limfocytów B, czynnik różnicowania eozynofili i czynnik wzrostu komórek macierzystych, warianty IL-;, białka fuzje, agoniści receptora G-CSF, agoniści receptora c-mpl, agoniści receptora IL© i wielofunkcyjni agoniści receptora; oraz farmaceutycznie akceptowalny nośnik, przy czym sekwencja łącząca w tym polipeptydzie wybrana jest z grupy składającej się z:

GlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 12;);

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 124);

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 125);

SerGlyGlySerGlyGlySer (SEQ ID NO : 126);

GluPheGlyAsnMet (SEQ ID NO : 127);

GluPheGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 128);

G^eG^^^^^^ct (SEQ ID NO : 129) i

GlyGlySerAspMetAlaGly (SEQ ID NO : B0).

Przedmiotem wynalazku jest także kompozycja zawierająca polipeptyd agonisty receptora EPO jak określono powyżej; czynnik wybrany z grupy składającej się z: GM-CSG, GCSF, ligand c-mpl, M-CSF, IL-1, IL-4, IL-2, IL-;, IL-5, IL-6, IL-1, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-1;, IL-15, LIF, ligand flt;/flk2, ludzki hormon wzrostu, czynnik wzrostu limfocytów B, czynnik różnicowania limfocytów B, czynnik różnicowania eozynofili i czynnik wzrostu komórek macierzystych, warianty IL-;, białka fuzyjne, agoniści receptora G-CSF, agoniści receptora c-mpl, agoniści receptora IL© i wielofunkcyjni agoniści receptora; i farmaceutycznie akceptowalny nośnik, przy czym polipeptyd agonisty receptora EPO wybrany jest z grupy składającej się z:

SEQ ID NO: 1; SEQ ID NO: 2; SEQ ID NO: ;; SEQ ID NO: 4; SEQ ID NO: 5; SEQ ID NO: 6 :

SEQ ID NO: 7; SEQ ID NO: SEQ ID NO: 12; SEQ ID NO: SEQ ID NO: 17; SEQ ID NO:

8; SEQ ID NO: 9; SEQ ID NO: 13; SEQ ID NO: 14; SEQ ID NO :

10; SEQ ID NO: 11 ; 15; SEQ ID NO: 16;

11; SEQ ID NO: 19; SEQ ID NO : 20; SEQ IID NO: 21;

SEQ ID NO: 22; SEQ ID NO: 22; SEQ ID NO: 24; SEQ ID NO : 25; SEQ ID NO: 2(5;

SEQ ID NO: 27; SEQ ID NO: 22; SEQ ID NO: 29; SEQ ID NO : 30; SEQ ID NO: 3^;

SEQ ID NO: 32; SEQ ID NO: 3;; SEQ ID NO: ;4; SEQ ID NO : 35; SEQ ID NO: 3(6;

SEQ ID NO: 37; SEQ ID NO: 3^; SEQ ID NO: ;9; SEQ ID NO : 40; SEQ ID NO: 41;

SEQ ID NO: 42; SEQ ID NO: 43; SEQ ID NO: 44; SEQ ID NO : 45; SEQ ID NO: 4(6;

SEQ ID NO: 47; SEQ ID NO: 44; SEQ ID NO: 49; SEQ ID NO : 50; SEQ ID NO: 55;

SEQ ID NO: 52; SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO: 54; SEQ ID NO : 515; SEQ ID NO: 5(6;

SEQ ID NO: 57; SEQ ID NO: 58; SEQ ID NO: 59; i SEQ ID NO: 122.

Przedmiotem wynalazku jest też kompozycja zawierająca polipeptyd agonisty receptora EPO jak określono powyżej; czynnik wybrany z grupy składającej się z: GM-CSG, G-CSF, ligand c-mpl, M-CSF, IL-1, IL-4, IL-2, IL-;, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-1;, IL-15, LIF, ligand flt3/flk5, ludzki hormon wzrostu, czynnik wzrostu limfocytów B, czynnik różnicowania limfocytów B, czynnik różnicowania eozynofili i czynnik wzrostu komórek macierzystych, warianty IL-;, białka fuzyjne, agoniści receptora G-CSF, agoniści re.................o/T:\d ήΛΐ

WplAZŁU UgUillOWl

Por*»- ooi :_D ν»ινινιαιιι\ν^ιιι ivvvjjtviu_? viuzj luiiiiuwu tycznie akceptowalny nośnik, przy czym polipeptyd agonisty receptora EPO wybrany jest z grupy składającej się z:

SEQ ID NO: 1; SEQ ID NO: 2; SEQ ID NO: ;; SEQ ID NO : 4: SEQ ID NO : 5: SEQ ID NO : 6;

SEQ ID NO: 7; SEQ ID NO: 8; 8EQ ID NO: 9: SEQ ID NO: 10; SEQ IDNOi 11;

SEQ ID NO: 12; SSE UD NO: 13; SEQ IO NO: 14; SEQ ID NO: B; SEQ IS QO:

SEQ ID NO: 17; SHę UD NO: 18; SEQ H NO: B; SEQ ID NO: 20; SEQ IS QO: 21;

189 756 mę ID NO: 22; SEQ ID NO: 23; SEQ ID NO: 24; SEQ ID NO:

SEQ ID NO: 27; SEQ ID NO: 28; SEQ ID NO: 29; SEQ ID NO:

mQ ID NO: 32; SEQ ID NO: 33; SEQ ID NO: 34; SEQ ID NO:

SEQ ID NO: 33; SEQ ID NO: 38; SEQ ID NO: 39; SEQ ID NO:

SEQ ID NO: 42; SEQ ID NO: 43; SEQ ID NO: 44; SEQ ID NO:

SEQ ID NO: 44; SEQ ID NO: 48; SEQ IID NO: 49; SEQ ID NO:

SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO: 53; SEQ ID NO: 54; S1^Q ID NO:

SEQ ID NO: 57; SEP ID NO: 58; mQ ID NO: 59; i SEQ ID NO: 122;

przy czym sekwencja łącząca (SEQ ID NO: 123) jast zastąpiona sekwencją łączącą wybraną z grupy sgiadąjąret się z:

25; SEQ Dt NO: 26; 30; mQ Dt NO: 31; 35; mQ Dt NO: 36; 40; SEQ Dt NO: 41; 45; mQ D> NO: 46; 50; mQ Dt NO: 51; 55; SEQ Dt NO: 56;

GiyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 124);

GlyGlżGlyEerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SeQ ID NO : 125);

EarGiyGlySerGlyGlySer (SEQ ID NO : 126);

GiuP0aGlyAsoMat (mQ ID NO : 127);

GlaP0aGlyGlyAsnMat (SEQ ID NO : 128);

GluP0eGlyGlyAsnGlyGlyAsnMeS (SEQ ID NO : 129) i

GlyGlySarAspMatAlaGly (SEQ ID NO : 130).

Kolejnym przedmiotem mżoalyaku jest zaetosomaoia polipaptyda agooisSy receptora EPO jak określono powyżej do wytwarzania leku do sSymuiow'yoia mySmarayoia komórek krwiotwórczych u pacjanty.

Iooym przedmiotem wynalazku jest zaeSosomyoia określonego powyżej polipeptyda do wytwarzania leku do leczenia zaburzeń 0amatopoezy na drodze modyfikacji pobranych od pacjenta arytroidaioyc0 komórek progenitorcmyc0 przez irh hodowlę ze mspomoiaoym polipeptydem. zebranie i przeszczapianie pacjaoSomi.

Następnym przedmiotem myoylyaga jest zasSosomyoie określonego powyżej polipapSżda według w'żo'ylaaku do mżSmyrzyoia leku do leczenia zabarzań hamatopoezy na drodze modyfikacji pobryoyr0 od pacjaoSai cddzielooyc0 od innych komórek, arytzoidaioyc0 komórek progaoitorowych pztnz ich 0odomię ze wspomnianym polipapSydem, zebranie i przeszrzepieoia pycjeoSomi.

Korzystnie te arytroidalne komórki macierzyste izolowane są z krwi obwodowej.

Remniaż korzystnie te erySroidyloa komórki mariaztysSe izolowane są z krwi obwodowej.

Kolejnym praedmiotem wynalazku jest sposób selagtymoego namoażaoia ex vivo arytroidalnyr0 komórek proganisoromyrh polegający na:

(a) hodowli arySroidaloyc0 komórek progenitoromyr0 w podłożu 0odomlyoym zamiaryjąrym określony powyżej polipaptyd według wynalazku;

(b) zebraniu hodowanych komórki.

Innym przadmiotem wynalazku jest sposób selektywnego namoażyoia ex vivo erytroidalnyrh komórek proganisoromyr0 poiagający na:

(a) oddzielaniu erytrcidalnyc0 komórek progeoisoromyrh od iooych komórek;

(b) hodowli oddzialooych erytroidaloych komórek proganitoromżch w wybranym podłożu 0odomlaożm zawierającym określony powyżej poiipepSżd wadłag wynalazku; i (c) zebraniu hodowanych komórek.

Korzystnie te erytroidaloe komórki mariarzysSe izoluje się z krwi obwodowej.

Również korzystnie te erytroidaloe komórki macierzyste izoluje się z krwi obwodowej.

Iooym przedmiotem wynalazku jest sposób namoażaoia ex vivo erZtroidaloych komórek progeoitorcmyc0 polegąjąry oa:

(a) 0odomii erySroidaloyc0 komórek progenisoromyr0 w podłożu hodomlyoym zawierajątym określony powyżej polipeptyd mediag wynalazku; i (b) zebraniu hodowaoyrh komórek, przy rzym sekwencja łącząca w tym polipaptydzia wybrana jest z grupy sgiadąjąręj się z:

G^G^G^w (SEQ ID NO : 123);

GlyGlyGlySarGlyGlyGlySar (SEQ ID NO : 124);

GlyGlyGlyEerGlyGlyGlySarGlyGlyGlyEer (SEQ ID NO : 125);

EerGlyGlyEerGlyGlySer (SEQ ID NO : 126);

GluaheGlyAsoMeS (SEQ ID NO : 127);

189 756

GluPheGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 128);

GluPheGlyGlyAsnGlyGlyAsnMet (SEQ łD NO : 179) i GlyGlySerAspMetAlaGly (SEQ ID NO : 130).

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest sposób selektywnego namnażania ex vivo erytroidalnych komórek progenitorowych polegający na:

(a) hodowli erytroidalnych komórek progenitorowych w podłożu hodowlanym zawierającym określony powyżej polipeptyd według wynalazku;

(b) zebraniu hodowanych komórek, przy czym polipeptyd agonisty receptora EPO wybrany jest z grupy składającej się z:

SEQ ID NO: 1; SEQ ID NO: 2; SEQ ID NO: 3; SEQ ID NO: 4; SEQ ID NO: 5; SEQ ID NO: 6; SEQ ID NO: 7; SEQ ID NO: 8; SEQ ID NO: 9; SEQ ID NO: 10; SEQ ID NO: 11; SEQ ID NO: 12; SEQ ID NO: 13; SEQ ID NO: 14; SEQ ID NO: 15; SEQ ID NO: 16;

SEQ ID NO: 11; SEQ ID NO: 18; SEQ ID NO: 19; SEQ ID NO: 20; SEQ IID NO: 21;

SEQ ID NO: 22; SEQ ID NO: 23; SEQ ID NO: 24; SEQ ID NO: 25; SEQ ED NO: 26;

SEQ ID NO: 27; SEQ ID NO: 28; SEQ ID NO: 29; SEQ ID NO: 30; SEQ ID NO: 31;

SEQ ID NO: 33^; SEQ ID NO: 33; SEQ ID NO: 34; SEQ ID NO: 35; SEQ IID NO: 36;

SEQ ID NO: 33; SEQ ID NO: 38; SEQ ID NO: 39; SEQ ID NO: 40; SEQ ID NO: 41;

SEQ ID NO: 42; SEQ ID NO: 43; SEQ ID NO: 44; SEQ ID NO: 45; SEQ ID NO: 46;

SEQ ID NO: 447; SEQ ID NO: 48; SEQ ID NO: 49; SEQ ID NO: 50; SEQ IID NO: 51;

SEQ ID NO: 52; SEQ ID NO: 53; SEQ ID NO: 54; SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO: 56;

SEQ ID NO: 57; SEQ ID NO: 58; SEQ ID NO: 59; i SEQ ID NO: 122

Jeszcze innym przedmiotem wynalazku jest sposób selektywnego namnażania ex vivo erytroidalnych komórek progenitorowych polegający na:

(a) hodowli erytroidalnych komórek progenitorowych w podłożu hodowlanym zawierającym określony powyżej polipeptyd według wynalazku 1;

NO: 5; SEQ ID NO: 6; 10; SEQ ID NO: 11; 15; SEQ ED NO: 16; 20; SEQ I]D NO: 21; 25; SEQ ED NO: 26; 30; SEQ IID NO: 31; 35; SEQ IID NO: 36; 40; SEQ IID NO: 4^; 45; SEQ IID NO: 46; 50; SEQ IID NO: 5^; 55; SEQ ED NO: 5^; tym polipeptydzie jest

SEQ ID NO: 1; SEQ ID NO: 7; SEQ ID NO: 3; SEQ ID NO: 4; SEQ ID SEQ ID NO: 7; SEQ ID NO: 8; SEQ ID NO: 9; SEQ ID NO: SEQ ID NO: 11; SEQ ID NO: 13; SEQ ID NO: 14; SEQ ID NO

SEQ ID NO: 11; SEQ ID NO: 18; SEQ ID NO: 19; SEQ ID NO

SEQ ID NO: 22; SEQ ID NO: 23; SEQ ID NO: 24; SEQ ID NO

SEQ ID NO: 27; SEQ ID NO: 28; SEQ ID NO: 29; SEQ ID NO

SEQ ID NO: 3^; SEQ ID NO: 33; SEQ ID NO: 34; SEQ ID NO

SEQ ID NO: 33; SEQ ID NO: 38; SEQ ID NO: 39; SEQ ID NO

SEQ ID NO: 42; SEQ ID NO: 43; SEQ ID NO: 44; SEQ ID NO

SEQ ID NO: 47; SEQ ID NO: 418; SEQ ID NO: 49; SEQ ID NO

SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO: 53; SEQ ID NO: 54; SEQ ID NO

SEQ ID NO: 57; SEQ ID NO: 58; SEQ ID NO: 59; i SEQ ID NO: 122;

i przy czym przy czym sekwencja łącząca (SEQ ID NO: 122) w zastąpiona sekwencją łączącą wybraną z grupy składającej się z:

SerGlyGlySerGlyGlySer (SEQ ID NO : 126);

GluPheGlyAsnMet (SEQ ID NO : 127);

GluPheGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 128);

GlupheGlyGlyAsnGlyGlyAsnMet (SEQ łD NO : 179) i GlyGlySerAspMetAlaGly (SEQ ID NO : 140).

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest również sposób selektywnego namnażania ex vivo erytroidalnych komórek progenitorowych polegający na:

(a) oddzielaniu erytroidalnych komórek progenitorowych od innych komórek;

(b) hodowli oddzielonych erytroidalnych komórek progenitorowych w wybranym podłożu hodowlanym zawierającym określony powyżej polipeptyd; i (c) zebraniu hodowanych komórek,

189 756 przy czym przy czym sekwencja łącząca w tym polipeptydzie wybrana jest z grupy składającej się z:

GlyGlyGlySer SEQ TD NO : 123;

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 124); GlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlyStr (SE— ID NO : 125);

SerGlyGlySeirGlyGlySer (SEQ TD NO : 12;);

GluPheGlyAsnMet (SEQ TD NO : 127);

GluPhtGlyGlyAsnMtt (SEQ TD NO : 128);

GluPheGlyGlyAsnGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 129) i GlyGlyStrAspMttAlaGly (SEQ TD NO : 130).

Przedmiotem wynalazku jest też sposób selektywnego namnażania ex vivo erytroidalnych komórek progenitorowych polegający na:

(a) oddzielaniu erytroidalnych komórek progenitorowych od innych komórek;

(b) hodowli erytroidalnych komórek progenitorowych w podłożu hodowlanym zawierającym określony powyżej polipeptyd według wynalazku; i (c) zebraniu hodowanych komórek, przy czym polipeptyd agonisty receptora EPO wybrany jest z grupy składającej się z:

SEQ ID NO: 1; SEQ ID NO: 2; SEQ ID NO: 3; SEQ ID NO: 4; SEQ ID NO: 5; SEQ ID NO: ά; SEQ TD NO: 7; SEQ ID NO: 8·; SEQ TD NO: 9; SEQ ID NO: 10·; SEQ ID NO: 11; SEQ ID NO: 12; SSE ID NO: 13; SEQ ID NO: 14; SEQ TD NO: 15 ; SEQ ID NO: 16;

SEQ ID NO: 17; S ID NO: 18; SEQ ID NO: 19; SEQ ID NO: 20; SEQ ID NO: 21;

SEQ ID NO: 22; SE( ID NO: 23; SEQ ID NO: 24; SEQ ID NO: 25; SEQ ID NO: 2;;

SEQ ID NO: 27; S E( ID NO: 28; SEQ ED NO: 29; SEQ ID NO: 30; SEQ ID NO: 31;

SEQ ID NO: 32;SE( ID NO: 33; SEQ ID NO: 34; SEQ ID NO: 35; SEQ ID NO: 3;; SEQ ID NO: 37; HE ID NO: 38; SEQ ID NO: 39; SEQ ID NO: 40; SEQ ID NO: 41;

SEQ ID NO: 42; HE ID NO: 43; SEQ Π NO: 44; SEQ ID NO: 45; SEQ ID NO: 4;;

SEQ ID NO: 47; S E( ID NO: 48; SEQ ID NO: 49; SEQ ID NO: 550 ; SEQ ID NO: 51;

SEQ TD NO: 525SEE ID NO: 53; SEQ ID NO: 64; SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO: 56; SEQ TD NO: 57; SEQ TD NO: 58; SEQ TD NO: H; i SEQ TD NO: 122.

Przedmiotem wynalazku jest również sposób selektywnego namnażania ex vivo erytroidalnych komórek progenitorowych polegający na:

(a) oddzielaniu erytroidalnych komórek progenitorowych od innych komórek;

SEQ ID NO: 1; SEQ ID NO: 2; SEQ ID NO: 3; SEQ ID NO: 4 ; SEQ ID NO

SEQ TD NO: 7; SEQ TD NO SEQ TD NO: 22; SDQ ID NO SEQ TD NO: 77; SDQ D) NO SEQ TD NO: 22; SEQ ID NO SEQ ID NO: 77; SEQ 1D NO SEQ ID NO: 22; SDQ D) NO SEQ ID NO: 77; SEQ ID NO SEQ TD NO: 22; SEQ ID NO SEQ ID NO: 77; SDQ 0D NO SEQ TD NO: 22; SQQ 0D NO

8; SEQ ID NO: 9; SEQ ID NO: 11; SEQ ID NO: 14; SEQ ID NO 11; SEQ UD NO: 19; SEQ ID NO 23; SEQ ID NO: 24; SEQ ID NO 28; SEQ ID NO: H; SEQ ID NO 33; SEQ ID NO: 34; SEQ ID NO 38; SEQ ID NO: 39; SEQ ID NO 44; SEQ ID NO: 44; SEQ ID NO 48; SEQ ID NO: 49; SEQ ID NO

10; 15 ; 20; 25; 30; 35; 40; 45; 50; 55;

55; SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO SEQ ID NO: H; Seq ID NO: 58, SEQ ID NO. 59, i SEQ TD NO. 122, i przy czym przy czym sekwencja łącząca (SEQ iD NO: 123) w tym zastąpiona sekwencją łączącą wybraną z grupy składającej się z:

: 5; SEQ ID NO: h; SEQ TD NO: 11; SEQ ID NO: 16; SEQ ID NO: 21; SEQ ID NO: 26; SEQ ID NO: 31; SEQ ID NO: 36; SEQ ID NO: 41; SEQ ID NO: 46; SEQ ID NO: 51; SEQ ID NO: 56; polipeptydzie jest

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ TD NO : H;);

GlyGlyGlyStrGlyGlyGlyStrGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : m); StrGlyGlyStrGlyGlySer (SEQ ID NO : 12;); GluPheGlyAsnMtt (SEQ TD NO : 127);

189 756

GluPheGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 128);

Zmodyfikowany agonista ludzkiego receptora EPO według wynalazku może być również opisany następującym wzorem:

χ1 - (L)a - χ: w którym, a wynosi 0 lub 1,

X oznacza peptyd zawierający sekwencję aminokwasową, odpowiadającą sekwencji reszt n+1 do J;

X oznacza peptyd zawierający sekwencję aminokwasową odpowiadającą sekwencji reszt od 1 do n;

n oznacza liczbę całkowitą od 1 do J-1;

L oznacza sekwencję łączącą

We wzorze powyższym stałe reszty aminokwasowe ludzkiej EPO numerowane są kolejno od 1 do J, od końca aminowego do końca karboksylowego. Para dwóch przylegających aminokwasów może być oznaczona odpowiednio n i n+1, przy założeniu, ze n jest liczbą całkowitą od 1 do J-1. Reszta n+1 staje się nowym N-końcem nowego agonisty receptora EPO a reszta n staje się nowym C-końcem nowego agonisty receptora EPO.

Stwierdzono, że bardziej zalecane miejsca przerwania w których można stworzyć nowy C-koniec i N-koniec obejmują: H-H, 25-2;, 27-28, 28-29, 29-30, 00-01, U-H,

H-H, H-H, 06-0;, 03-37, 37-38, 38-39, H-H, H-H, 52-53, H-H, H-H,

H-D, 77-78, 78-79, 79-80, 80-81, 81-82, 82-83, 80-84, 84-86, 85-8;, 8;-87, 87-88, 88-89, ! ΠΟ ! 1 Π 11 fl ¹11 111 1i 7 11 n 11 α 1 η 11 λ 11 λ i 1 c iiciix 109-110, ;;O-;;;, l4;*465, 1^^-113, ;;3-;;4, ui-m, ll6“;;3, iu 11 n

11^-117,

-118, 118-119, ;;9-;50, 120-121, 121-122, 122-123, ;23-;24, 124-125, ^25-12;, 12;-127,127-128,128-129, 129-130, ^30-131 i 131-132.

Najbardziej zalecane miejsca przerwania, w których można stworzyć nowy C-koniec i N-koniec obejmują: H-H, 24-26, U-H, H-H, 37-38, 38-39, 82-83, 83-8;, 85-8;, 8;-87, 87-88, 125-12;, 453-457 i 131-132.

Najbardziej zalecane miejsca przerwania obejmują miejsca glikozylacji, przeciwciała nie-nuetralizujące i miejsca cięcia proteolitycznego.

Agonistą ludzkiego receptora EPO według wynalazku może zawierać delecje, wstawienia i/lub podstawienia aminokwasowe, tak jak opisano w WO 94/54l;0, jedno lub więcej miejsc ozylacji na aminokwasach Asn^, Asn ³ i Asn^ zmieniono na inne aminokwasy, takie jak, ale nie wyłącznie, Asp lub Glu. Agonistą receptora EPO według wynalazku może także zawierać delecje na jednym lub obu N- i C-końcu oryginalnego białka i/lub delecje na nowych N- i/lub C-końcach zmienionej sekwencji białka przedstawionego na powyższych wzorach.

Polipeptydy zrekombinowanego agonisty ludzkiego receptora EPO według wynalazku mogą być podawane także jednocześnie lub kolejno razem z jednym lub więcej dodatkowych czynników stymulujących wzrost kolonii (CSF) włączając cytokiny, limfokiny, interleukiny hematopetyczne, czynniki wzrostowe, obejmujące ale bez ograniczania GM-CSG, G-CSF, ligand c-mpl (znany także jako TPO lub MGDF), M-CSF, IL-1, IL-;, IL-2, IL-3, IL-5, IL-;, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, LIF, ludzki hormon wzrostu, czynnik wzrostowy limfocytów B, czynnik różnicujący limfocytów B, czynnik różnicujący eozynofili i czynnik wzrostowy komórek szpiku (SCF) znany także jako czynnik stalowy lub ligand zestawu c (oznaczone tu i dalej jako „czynniki”). Podawane razem mieszaniny cechują się posiadaniem normalnej aktywności obu peptydów lub mieszanina może dodatkowo cechować się biologiczną lub fizjologiczną aktywnością większą, niż wynikająca z prostego dodania aktywności, obecnych w mieszaninie agonisty receptora EPO iub drugiego czynnika stymulującego wzrost kolonii. Wspólne podanie mieszaniny może powodować także wystąpienie większego efektu lub wywoływać efekt inny niż spodziewany na podstawie obecności w mieszaninie EPO lub drugiego czynnika stymulującego wzrost kolonii. Wspólne podanie mieszaniny może powodować także wystąpienie lepszego profilu aktywności obejmującego zmniejszenie niepożądanych aktywności biologicznych związanych z natywną ludzką EPO. W dodatku do powyższej listy razem z polipeptydami wytworzonym sposobem według wynalazku

189 756 można podawać warianty IL-3 opisane w WO 94/12639 i WO 94/12638, białko połączone opisane w WO 95/21197 i WO 95/21254, agonistów receptora G-CSF opisanych w WO 97/12977, agonistów receptora c-mpl opisanych w WO 97/12978, agonistów receptora IL-3 opisanych w WO 97/12979 i wielofunkcyjnych agonistów receptora opisanych w WO 97/12985. Użyty tu termin „warianty IL-3” oznacza warianty IL-3 opisane w WO 94/12639 i WO 94/12638. Użyty tu termin „białko fuzyjne” oznacza białko fuzyjne opisane w WO 95/21197 i WO 95/21254. Użyty tu termin „agoniści receptora G-CSF” oznacza agonistów receptora G-CSF opisanych w WO 97/12978. Użyty tu termin „agoniści receptora c-mpl” oznacza agonistów receptora c-mpl opisanych w WO 97/12978. Użyty tu termin „agoniści receptora IL-3” oznacza agonistów receptora IL-3 opisanych w WO 97/12979. Użyty tu termin „wielofunkcyjni agoniści receptora” oznacza wielofunkcyjnych agonistów receptora opisanych w WO 97/12985.

Ponadto, zastosowanie in vitro obejmuje zdolność do stymulowania aktywacji szpiku kostnego oraz wzrostu komórek krwi, przed podaniem namnożonych komórek pacjentom.

Zastosowanie agonisty receptora EPO według wynalazku może obejmować także zastosowanie w bankowaniu krwi, podczas którego agonistę receptora EPO podaje się pacjentowi, w celu zwiększenia liczby czerwonych komórek krwi i komórki krwi pobiera się od pacjenta przed pewnymi zabiegami medycznymi. Pobrane komórki krwi przechowuje się, a następnie ponownie podaje pacjentowi po zabiegu medycznym. Ponadto, agonista receptora EPO według wynalazku, może być także padawany dawcy krwi, przed pobraniem krwi, w celu zwiększenia liczby czerwonych komórek krwi, co pozwala dawcy na bezpieczne oddanie większej objętości krwi.

Opis figur

Figura 1 schematycznie przedstawia sekwencję przekształconego białka. N-koniec (N) i C-koniec (C) natywnego białka łączy się za pomocą sekwencji łączącej iub łączy się bezpośrednio. Białko otwiera się w miejscu przerwania tworząc nowy N-koniec (nowy-N) i nowy C-koniec (nowy-C) i otrzymując białko o nowej sekwencji liniowej sekwencji aminokwasowej. Przekształcona cząsteczka może być syntetyzowana de novo jako cząsteczka liniowa i nie musi przechodzić przez etapy łączenia oryginalnego N-końca i C-końca i otwierania białka w miejscu przerwania.

Figura 2 przedstawia schemat Metody I, według której wytwarza się nowe białka, w których oryginalny N-koniec i C-koniec natywnego białka łączy się za pomocą sekwencji łączącej i tworzy się inny N-koniec i C-koniec białka. W pokazanym przykładzie przekształcenie sekwencji powoduje powstanie nowego genu kodującego białko, mające nowy N-koniec, utworzony przy aminokwasie 97 oryginalnego białka, oryginalny C-koniec (aminokwas 174) połączony za pomocą sekwencji łączącej z aminokwasem 11 (aminokwasy 1-10 usuwa się) i nowy C-koniec utworzony przy aminokwasie 96 oryginalnej sekwencji.

Figura 3 przedstawia schemat Metody II, według której wytwarza się nowe białka, w których oryginalny N-koniec i C-koniec natywnego białka łączy się bez sekwencji łączącej i tworzy się inny N-koniec i C-koniec białka. W pokazanym przykładzie przekształcenie sekwencji powoduje powstanie nowego genu kodującego białko mające nowy N-koniec utworzony przy aminokwasie 97 oryginalnego białka, oryginalny C-koniec (aminokwas 174) połączony z oryginalnym N-końcem i nowy C-koniec utworzony przy aminokwasie 96 oryginalnej sekwencji.

Figura 4 przedstawia schemat Metody ΙΠ, według której wytwarza się nowe białka, w których oryginalny N-koniec i C-koniec natywnego białka łączy się za pomocą sekwencji łączącej i tworzy się inny N-koniec i C-koniec białka. W pokazanym przykładzie przekształcenie sekwencji powoduje powstanie nowego genu kodującego białko mające nowy N-koniec utworzony przy aminokwasie 97 oryginalnego białka, oryginalny C-koniec (aminokwas 174) połączony za pomocą sekwencji łączącej z aminokwasem 1 i nowy C-koniec utworzony przy aminokwasie 96 oryginalnej sekwencji.

Figura 5 pokazuje sekwencję DNA kodującą dojrzałą ludzką EPO w oparciu o sekwencję opublikowaną przez Lin i wsp. (PNAS 82:7580-7584, 1985).

Agoniści receptora według wynalazku są użyteczni w leczeniu chorób cechujących się zmniejszeniem liczby czerwonych komórek krwi w układzie krwionośnym.

189 756

Agoniści receptora EPO według wynalazku są użyteczni w leczeniu lub zapobieganiu niedokrwistości. Wiele leków może hamować rozwój szpiku kostnego lub powodować niedobory hematopoezy. Przykłady takich leków to AZT, DDI, związki alkilujące i antymetabolity używane w chemioterapii, antybiotyki, takie jak chloramfenikol, penicylina, gancyclovir, daunomycyna i sulfonamidy, fenotiazolina, leki uspokajające, takie jak meprobamate, leki przeciwbólowe, takie jak aminopiryna i dipyron, leki przeciwdrgawkowe, takie jak fenytoina lub karbamazepina, leki przeciwtarczycowe, takie jak propylotiouracyl i metimazol i leki moczopędne. Agoniści receptora EPO według wynalazku są użyteczni w leczeniu lub zapobieganiu zahamowanie rozwoju szpiku kostnego lub niedoborów hematopoezy, które często występują u pacjentów leczonych tymi lekami.

Niedobory hematopoezy występują także w wyniku przebytych infekcji wirusowych, bakteryjnych lub grzybowych i w wyniku leczenia chorób nerek i niewydolności nerek, na przykład dializy. Polipeptyd według wynalazku jest użyteczny w leczeniu takich niedoborów hematopoezy.

Do wytwarzania polipeptydów według wynalazku można wykorzystać plazmidowe wektory DNA użyteczne w metodzie ekspresji nowych agonistów receptora EPO. Wektory te mogą zawierać nowe, opisane powyżej sekwencje DNA kodujące nowe polipeptydy według wynalazku. Odpowiednie wektory, które mogą transformować komórki gospodarza i ekspresja których powoduje wytworzenie agonistów receptora EPO obejmują wektory ekspresyjne zawierające sekwencje nukleotydowe kodujące agonistów receptora EPO połączone z sekwencjami regulacji transkrypcji i translacji, które wybiera się w zależności od użytych komórek gospodarza. Wektory zawierające zmodyfikowane sekwencje opisane powyżej są użyteczne w wytwarzaniu zmodyfikowanych polipeptydów agonistów receptora EPO. Wektor wykorzystany w metodzie zawiera także wybrane sekwencje regulacji transkrypcji i translacji połączone funkcjonalnie z DNA sekwencji kodujących według wynalazku i zdolne do kierowania replikacją i ekspresją tych sekwencji w wybranych komórkach gospodarza.

Wynalazek może być również wykorzystywany do wytwarzania nowej rodziny agonistów ludzkiego receptora EPO. Polipeptydy tego rodzaju można otrzymywać sposobem obejmującym hodowanie odpowiednich komórek lub linii komórkowych, które transformuje się wektorem zawierającym kodującą sekwencję DNA umożliwiającą ekspresję nowych polipeptydów agonistów receptora EPO. W sposobach według wynalazku można używać odpowiednich komórek lub linii komórkowych, obejmujących różne szczepy bakterii, takie jak E. coli, drożdże, komórki ssaków lub komórki owadów.

Kompozycje według wynalazku zawierają terapeutycznie efektywne ilości jednego lub więcej agonistów receptora EPO według wynalazku, zmieszane z farmaceutycznie akceptowanym nośnikiem. Kompozycję taką podaje się dootrzewnowe, dożylnie lub podskórnie. Kompozycja terapeutyczna według wynalazku, jeżeli ma być podana, korzystnie ma formę wolnego od pyrogenów, akceptowanego przy podaniu dootrzewnowym roztworu wodnego. Przygotowanie takiego akceptowanego przy podaniu dootrzewnowym roztworu białka, mając na uwadze jego pH, izotoniczność, stabilność i tym podobne leży w możliwościach specjalistów w dziedzinie.

Podawanie powinno być zgodne z reżimem dawkowania, który powinien być określony przez biegłego lekarza, w oparciu o aktywność właściwą in vivo analogów wytworzonych sposobem według wynalazku, w porównaniu z ludzką erytropoetyną i w oparciu o to co wiadomo specjalistom w dziedzinie o dawkowaniu ludzkiej erytropoetyny w celu wywołania erytropoezy i leczeniu różnych schorzeń, takich jak niedokrwistość u ludzi, włączając niedokrwistość u pacjentów z niewydolnością nerek. Dawkowanie polipeptydów według wynalazku może się jednak różnić od pacjenta do pacjenta, w zależności od rodzaju polipeptydu i jego aktywności właściwej in vivo, sposobu podawania, stanu medycznego, wieku, masy ciała i płci pacjenta, wrażliwości pacjenta na te polipeptydy lub inne składniki kompozycji i inne czynniki, które lekarz prowadzący jest zdolny rozpoznać i wziąć pod uwagę. Na temat terapeutycznego zastosowania polipeptydów według wynalazku można się więcej dowiedzieć z Dokumentu Patentowego Stanów Zjednoczonych Nr 4703008 i 4835260, patrz także rozdział dotyczący (zrekombinowanej) [des-Arg¹⁶⁶] ludzkiej erytropoetyny na stronach 591-595 podręcznika Phisicians Desk. Dostępne w handlu preparaty zrekombinowanej [des-Arg ⁶⁶]

189 756 iadzkiet arytropoatyoy mają 2000, 3000, 40000 lub 1)000 jedoostek gligo0crmonu oa mililitr w wolnym od goosazmyotem roztworze wodnym zawierającym 2,5 mg/ml albuminy surowicy ladzgieti 5,8 mg/ml cytrynianu sodowego, 5,8 mg/ml NaCl i 0,06 mg/ml kwasu cytrynowego, pH 6,9 (±0,3).

Wytworzona metodą rekombinacji EPO okazała się szrzegeinie użyteczna do lerzenia pacjentów cierpiących na apcśladzaoia wytwarzania czerwonych komórek krwi (a0ysician Desk Rafereoca (PDR). 1993 wyd., str. 602-605). Wytworzona metodą rekombinacji EPO okazała się skuterzna w leczeniu oiedogzmistośri u pacjentów z niewydolnością nerek i u parjaotem zarażonych mizasem HIV, mająryrh obniżony poziom eodoganoęj EPO w wyniku leczenia Zidovudioe (AZT) (Patrz PDR, 1993 wyd., oa str. 6002).

Modyfikacje białka EPO, które poprawiają jego użyteczność tyko narzędzia diagnostycznego lub do leczenia chorób krwi, są szrzegelnie pożądyoa. W szczególności, zmodyfikowaoe formy EPO wykazujące zwiększoną ygSżmoość biologiczną są bardziej wydajne niż natywoa EPO w rzasie terapii, kiedy kooiarzoe jest podawanie EPO pacjentowi. Umożliwiają mniej częste podamaoia i/lub w mnięjszyc0 dawkach. Podawanie mniejszych ilości EPO powiooo tacraSyczoie zmniejszyć ryzyko oiekorzystoyrh skutków aborzoyc0, związanych z podamaoiam EPO, takich jak nadciśnienie, ataki padaczkowe i bóle głowy (patrz PDR, 1993 wyd., oa str. 603-604). Agoniści receptora EPO wytworzeni sposobem według myoalyaga mogą mieć także polepszoną stabilność i dzięki temu, zwiększony czas peitrmyoiai co pozwala oa wytwarzanie oiegligozylomaoyr0 form EPO, w bakteryjnych systemach akspresyjoyc0, co bardzo obniża koszty. Dzięki zwiększonemu czasowi półtrwaoia takie oiagiigozylomyne formy EPO, mają zwiększoną aktywność in vivo w porómoynia z de-giigozylowanąnPm.

Kompozycja może być również podawana razem z ionym czynoigiam hamaSopcetżczoymi. Lista ionych odpowiednich hamatopoeSyn, czynników stymulujących wzrost kolonii (CSF) i iotarleakin do tadoocaesoago albo kolejnego podawania z polipapSydami wytworzonymi sposobem według myoalyaka, obejmuje ale bez ogranirzaoia GM-CSG, G-CSF, ligand r-mpl (znany także jako TPO lub MGDF), M-CSF, IL-1, IL-4, IL-2, IL-3, Ł-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, LIL, ludzki hormon mzrosSa, czynnik wzrostowy limfocytów B, czynnik różnicujący limfocytów B, czynnik różoicująry eozynofili i czynnik marostowy komórek szpiku (SCF), zoany także jako czynnik staiow'y'. lub ligaod zestawu c (oznaczone tu i dalej jako „czynniki”) lub ich kombinacje. W dodatku do powyższej listy razem z polipeptydami według wynalazku możoa podawać warianty IL-3 opisane w WO 94/12639 i WO 93/13638, białko faayjoa opisane w WO 95/21197 i WO 93/21234, agooisSem rereptora G-CSF opisaoyc0 w WO 97/12977, agooistów receptora c-mpl opisanych w WO 97/12978, agooistów receptora IL-3 opisanyr0 w WO 97/12979 i mielofankcytoych agonistów receptora opisyoyc0 w WO 97/12C33.

Agoniści receptora EPO według wynalazku mogą być remoiaż użyteczni także w mobiliaomyniu 0amatopoetycznych komórek proranitoromyc0 i komórek macierzystych do krwi obwodowej. Wykazano, że pochodzące z krwi obwodowej komórki progaoiSoroma są bardzo użyteczne w pomzaryoia do zdrowia pacjentów po aaSologirzoyc0 przeszrzapych szpiku kostnego.

Agoniści receptora EPO według myoylazka są także użyteczni w oamoażaoia ex vivo 0ematopcrSycznych komórek progaoitoromych. W celu leczenia niadogzmistościi oeatropeoii i tromborytopaoii często związanych z pcdamaoiam dużych dawek c0amioterapeaSykóm, po c0emiotazapii podaje się czynniki stymulujące wzrost kolonii (CSF), takie jak G-CSF, pojedynczo lub w połączeniu z innymi rzyonikami stymulującymi wzrost kolonii, lub tedooczaśnie z przeszczepem szpiku.

Niniejszy myoylazak wykorzystać można rówoiaż w sposobie utrzymywania i/lub namoażyoia 0amatopoeSyrznych komórek prekursorowych krwi, obejmującym wysianie tygic0 komórek do narzyń hodomlaoyr0 zawierająrych podłoże do hodowli ulepszone przez koośaki z lioią komórek zrębu, Sagic0 jak HS-5 (WO 96/02662, Roeckieio i Torok-Strob, Blood 85:997-1105, 1995) i do którego dodaje się agooistę receptora EPO według myoalyaka.

Określenie sekwencji łączącej

Długość sekwencji amiookmyeomej łączącej (liokera) wybiera się doświadczalnie lub w oparciu o wiadomości o strukturze, lub wykorzystując oba te sposoryl

189 756

Jeżeli wiadomości o strukturze nie są dostępne, w celach badawczych wytwarza się małą serię sekwencji łączących starając się, żeby ich długość różniła się tak, aby obejmowała zakres od 0 do 50 Λ i żeby ich sekwencja była zgodna z przewidywanym narażeniem powierzchni (hydrofilowość Hopp i Woods, Mol. Immunol. 20: 483-483, 1983; Kyte i Doolittle, J. Mol. Biol. 157: 105-163, 1982), narażenie obszaru powierzchniowego na rozpuszczalniki, Lee i Richards, J. Mol. Biol. 55: 379-500, 1971) i zdolność przyjmowania niezbędnej konformacji bez zaburzenia konfiguracji agonisty receptora EPO (zmienność konformacyjna, Karplus i Schulz, Naturwissenschaften H:;;;-;;;, I386). Zakładając średnią translacji od 2,0 do 3,8 Λ na resztę to znaczy, że średnia długość testowanych sekwencji łączących, powinna wynosić od 0 do 30 reszt, przy czym zaleca się od 0 do 15 reszt. Przykładem takiej serii doświadczalnej jest skonstruowanie sekwencji łączących, przy użyciu sekwencji kasetowej, takiej jak Gly-Gly-Gly-Ser powtórzonej n razy, gdzie n wynosi 1, 2, 5 3 lub 4. Specjaliści w dziedzinie wiedzą, że istnieje wiele takich różniących się długością lub składem, które mogą służyć jako sekwencje łączące. Pamiętając żeby nie były ani szczególnie długie, ani szczególnie krótkie (c.f., Sandhu, Critical Rev. Biotech. 12: 464-5;2, 1992). Jeśli są zbyt długie, wpływ entropii prawdopodobnie zaburzy stabilność fałdowania trójwymiarowego, lub może spowodować, że fałdowanie jest kinetycznie niepraktyczne. Jeśli są zbyt krótkie, prawdopodobnie destabilizują cząsteczkę w wyniku działania sił torsyjnych lub efektów przestrzennych.

Specjaliści w dziedzinie wiedzą, że analiza informacji o strukturze białka dostarcza także wiadomości o odległości pomiędzy końcami cząsteczki, określonej jako odległość pomiędzy c-alfa atomami węgla, które można wykorzystać do określenia długości użytej sekwencji lub przynajmniej do ograniczenia liczby możliwości, które należy zbadać doświadczalnie przy wybieraniu sekwencji łączących. Dostarcza ona także w niektórych przypadkach informacji, że położenie końców łańcucha polipeplydowego zostało źle przewidziane w modelu strukturalnym określonym na podstawie wyników otrzymanych metodą dyfrakcji promieni X lub spektroskopii jądrowego rezonansu magnetycznego. Jeśli taka sytuacja zachodzi naprawdę, należy ją wziąć pod uwagę w celu właściwego określenia długości sekwencji łączącej. Z reszt, których pozycja jest dobrze znana, wybiera się dwie reszty leżące blisko końców łańcucha, a odległości pomiędzy ich c-alfa węglami używa się do wyliczenia przybliżonej długości sekwencji łączącej pomiędzy nimi. Stosując obliczoną długość jako wartość odniesienia, można skonstruować serię sekwencji łączących (zakładając 2 do 3,8 Λ na resztę). Sekwencje łączące mogą składać się z oryginalnej sekwencji, skróconej lub wydłużonej w razie potrzeby. Jeżeli sekwencję łączącą wydłuża się, dodatkowe reszty wybiera się tak, żeby się łatwo dopasowały i były hydrofitowe, tak jak opisano powyżej. Oryginalną sekwencję można także zastąpić serią sekwencji łączących, na przykład za pomocą wspomnianej powyżej kasety „Gly-Gly-Gly-Ser”. Ewentualnie, można użyć połączenia oryginalnej sekwencji i nowej sekwencji pod warunkiem, że mają odpowiednią długość całkowitą.

Określenie aminowego i karboksylowego końca agonisty receptora EPO

Sekwencje agonistów receptora EPO zdolne do pofałdowania się w struktury aktywne biologicznie, wytwarza się stosując odpowiednią selekcję początkowych (koniec aminowy) i końcowych (koniec karboksylowy) pozycji oryginalnego łańcucha polipeptydowego i użyciu sekwencji łączącej opisanej powyżej. Końce aminowy i karboksylowy wybiera się w pewnym wspólnym obszarze sekwencji, zwanym regionem przerwania, stosując wskazówki zamieszczone poniżej. Nową sekwencję aminokwasową wytwarza się więc przez wybranie końca aminowego i karboksylowego z regionu przerwania. W wielu przypadkach wybór nowych końców będzie taki, że oryginalna pozycja końca karboksylowego bezpośrednio poprzedza pozycję końca aminowego. Jednakże, specjaliści w dziedzinie wiedzą, że możliwe jest wybranie końców gdziekolwiek w regionie i że będzie to prowadziło do delecji lub wstawień w aminowej lub karboksylowej części nowej sekwencji.

Jedną z głównych przesłanek w biologii molekularnej jest założenie, że pierwotna sekwencja aminokwasową białka narzuca fałdowanie białka do trójwymiarowej struktury koniecznej dla wyrażenia jego biologicznego działania. Specjaliści w dziedzinie znają sposoby uzyskiwania i interpretacji informacji dostarczonych przez trójwymiarową strukturę białka, uzyskaną przez pomiar dyfrakcji promieniowania X na pojedynczym krysztale białka lub metodą spektroskopii jądrowego rezonansu magnetycznego roztworów białka. Przykłady struktur

189 756 trójwymiarowych przydatnych do identyfikacji regionów przerwania, obejmują określenie położenia i typu struktury drugorzędowej białka (alfa i 3-10 helisy, równoległe i przeciwrównoległe struktury typu beta-kartki, zagięcia i odwrócenia łańcucha, pętle (Kabsch i Sander, Biopolymers 22: 2577-2637, 1983), stopień narażenia reszt aminokwasowych na rozpuszczalnik, wielkość i rodzaj interakcji pomiędzy resztami (Chothia, Ann. Rew Biochem. 53: 537-572; 1984) oraz statyczny i dynamiczny rozkład konformacji wzdłuż łańcucha polipeptydowego (Alber i Mathews, Methods Enzymol. 154: 511-533, 1987). W pewnych przypadkach znane są pewne dodatkowe informacje o narażeniu reszt aminokwasowych na rozpuszczalnik, na przykład jeśli dane miejsce jest miejscem post-translacyjnego przyłączenia węglowodanu, który jest niezbędny na powierzchni białka. Jeżeli brak jest doświadczalnych informacji strukturalnych lub nie można ich uzyskać, znane są też sposoby analizy pierwotnej sekwencji aminokwasowej umożliwiające przewidzenie trzeciorzędowej i drugorzędowej struktury białka, dostępności rozpuszczalnika i występowania zagięć i pętli. Jeżeli bezpośrednie metody strukturalne nie są dostępne, w celu doświadczalnego określenia narażenia powierzchni można użyć czasami metod biochemicznych, na przykład, znajdując miejsca cięcia łańcucha po częściowej proteolizie, co daje informacje o narażeniu powierzchni (Gentile i Salvatore, Eur. J. Biochem. 218:603-621, 1993).

Wykorzystując informacje uzyskane doświadczalnie lub metody prognostyczne (na przykład, Strinivisan i Rosę, Proteins: Struct., Funct. I Genetics, 22: 81-99, 1995), bada się wyjściową sekwencję w celu pogrupowania regionów pod kątem ich przydatności w utrzymywaniu struktury drugorzędowej i trzeciorzędowej. Powinno się unikać ingerencji w występujące w tych regionach sekwencje, o których wiadomo, że biorą udział w tworzeniu struktury drugorzędowej (alfa i 3-10 helisy, równoległe i przeciwrównoległe struktury typu beta-kartki). Podobnie, jeżeli stwierdza się lub przewiduje występowanie regionów sekwencji aminokwasowej o małym stopniu narażenia na działanie rozpuszczalnika, to są to prawdopodobnie części tak zwanego rdzenia hydrofobowego białka. Takich regionów także powinno się unikać, przy wyborze końców aminowych i karboksylowych. Korzystnymi miejscami lokalizacji końców łańcucha polipeptydowego są natomiast regiony, o których wiadomo lub przewiduje się, że występują w obrębie zagięcia lub pętli powierzchni, szczególnie jeżeli są to regiony, o których wiadomo, że nie są konieczne dla biologicznej aktywności białka. Ciągłe obszary sekwencji aminokwasowej, najlepiej spełniające powyższe kryteria określa się jako miejsca przerwania.

Materiały i metody

Metody rekombinacji DNA

Jeżeli nie zaznaczono inaczej, wszystkie związki chemiczne pochodzą z Sigma Co., (St. Luis, Mo). Enzymy restrykcyjne i ligaza DNA faga T4 pochodzi z New England Biolabs (Beverly, MA) luB Boehringer Mannheim (Indianapolis, IN) .

Transformacja szczepów E. coli

Do transformacji DNA uzyskanego w reakcji łączenia używa się szczepów E. coli, takich jak DH5a ™ (Life Technologies, Gaithersburg, MD) i TG1 (Amersham Corp., Arlington Heights, IL). Transformowane szczepy są następnie używane jako źródło DNA plazmidowego do transfekowania komórek ssaków. Do uzyskania ekspresji agonisty receptora EPO według wynalazku w cytoplazmie lub przestrzeni peryplazmatycznej używa się szczepów E. coli MON 105 i JM101.

MON105 ATCC#55204: F-, lamda-, IN(rmD, rrE)l, rpoD+, rpoH358

DH5a : F-, phi80dlacZdeltaM15, delta(lacZYA-argF)U169, deoR, recAl, endAl, hsdR17(rk-, mk+), phoA, supE44 lamda-, thi-1, gyrA96, rei Al

TG1 : delta(lac-pro), supE, thi-1, hsdD5/F'(traD36, proA+B+, laclg, lacZdeltaM15)

Komórki DH5a ™ Subcloning efficiency kupuje się jako komórki kompetentne, gotowe do transformacji, stosując protokół wytwórcy. Szczepy E. coli TG1 i MON105 trzeba uczynić kompetentnymi do pobierania DNA metodą CaCl₂. Typowo, 20 do 50 ml komórek hoduje się w podłożu LB (1% Bacto-tryptone, 0,5% ekstrakt drożdżowy, 150 mM NaCl) do gęstości około 1,0 jednostek gęstości optycznej przy długości fali 600 nm (OD600), którą mierzy się na spektrofotometrze Baush & Lomb Spectronic (Rochester, NY). Komórki wiruje się, zawiesza w roztworze CaCl₂ (50 mM CaCl₂, 10 mM Tris-Cl, pH 7,4) o objętości jednej piątej wyj189 756 ściowej objętości podłoża do hodowli i inkubuje w temperaturze 4°C przez 30 minut. Komórki ponownie wiruje się i zawiesza w roztworze CaCh o objętości jednej piątej wyjściowej objętości podłoża do hodowli. DNA dodaje się do 0,2 ml tych komórek i próbki inkubuje w temperaturze 4°C przez 1 godzinę. Następnie próbki inkubuje się w temperaturze 42°C przez 2 minuty, dodaje się 1 ml podłoża LB i wytrząsa w temperaturze 37°C przez 1 godzinę. Po inkubacji komórki nanosi się na płytki (z podłożem LB z dodatkiem 1,5% agaru) zawierające ampicylinę (100 mikrogramów/ml, pl/ml), jeżeli selekcjonuje się transformanty oporne na ampicylinę lub spektynomycynę (75 pg/ml), jeżeli selekcjonuje się transformanty oporne na spektomycynę. Płytki inkubuje się przez noc w temperaturze 37°C. Pobiera się pojedynczą kolonię i hoduje się ją wytrząsając przez 6-16 godzin w temperaturze 37°C w podłożu LB z dodatkiem odpowiedniego antybiotyku (100 pg/ml ampicyliny lub 75 pg/ml spektomycyny). Przed zebraniem komórek 1 pl komórek analizuje się metodą PCR pod kątem obecności genu agonisty receptora EPO. Reakcję PCR prowadzi się stosując kombinację starterów, które przyłączają się do genu agonisty receptora EPO i/lub wektora. Po ukończeniu reakcji PCR, do próbki dodaje się barwnika i prowadzi się elektroforezę, tak jak opisano wcześniej. Jeżeli uzyskany produkt PCR ma odpowiednią wielkość, oznacza to, że gen połączył się z wektorem.

Sposoby wytwarzania genów z nowym N-końcem

Sposób I. Wytwarzanie genów z nowym N-końcem zawierających region łączący.

Geny _z nowym Nakońcem/C-końcem zawierające region łączący rozdzielający oryginalny C-koniec od N-końca eeytwarza się postępując dokładnie według spdsobu opisanego pazez L. S. Mullins i wsp., J. Am. Chem. Soc. 116: 5529-5533 (1 99/4). Wieloetapowej renkcji łańeachomej polⁱmeraey DNA (PGR) używa się do przekształcenia sekwencji DNA kod4aącej pie5ee5stsić^e sekwencję aminokwasomą białka. Etapy tp przedstaeeiisne są na fig. 2.

W czasie plerwsażgo etapu z4staeao starteróm („poe/y saart” i „start sekwencji łączącej”) używa si^c do utmorzspia i nampożenie z oryginelpęj se^Deeepcji fragmenta DNA („Fcagmen) Start”), który zawiera sekwencję kodującą część nowego N-końca nowego białka, za którą znajduj e się s4kwep5te łącząca, która ^ζζ' C-kapte5 i Nskomec orygmelnego białka. W dru gim etapie zestawu s^jart45/w („nomy stop” i „stop S4kweri5ii łączącej”) używa aię do utwoα^ριι i napmażema z orycimalnei s4kw4Pjji fragmentu DNA („Fragment Stop”), który kodu-je rę samą co poseyżej sekwencję łączącą, za którą znajduje Nię nowa, C-końcowa część c.ow4^ro białkr. Starter^e „nowsy s^mrt” i „noiez stozp” p/s)j4kiuj) się tak, oe zawierają miejcca rozpoznawane przez odpowiednie enzymy eestrykcyjna, co paaeeala na klonaDiini4 genu do mektoea eksprejzi4eco. Typowe Decon^pt reakcji pGr są naatę^Dojąc4, jeden wyk - d4netoreeja mci DNA przez 2 minuty w tempere^torze 95°C^P; 25 cykli s depe^ąu4acje przez 1 minutę w temperaDrze 94°C, prpyⁱączaDi4 starterów przez C minutę w temperaturze 50^, s-nton DNA przez 1 minutę w t4mperetprze 72°C, na koniec reakcji JoIżp cykl syntezy DNA prze_z 7 mimit w t4mperaeurze 72^οϋ. Do prowadzema reakcji PCR używa się z4steeeo ssd5ayppik^aw Trrkin Elmer Gen4Amp PCR Gtore Reagenta.

100 pl piesaapipy reekcyanei zawiera 100 pmoli każdego startera i _ok_oł_o 0,5 pg DNA, 1 _x PCR buf^- 200 pM dGTP, 200 pM dATP, 200 pM dTTlP, 200 pM dCTP, ⁰,5 .jedoionA AmphTaą polim4reay DNA i 2 mM MgLlA Produkty reakcji PCR oczysCC-za się za p_om_ocą aePteedl Wtaard PCR TrepA (Prom4^pa).

Sposób II. Wytmaraepte g4PÓD z nowym N-końcem nie zaDierejących regirnw

G_eny z poeezm N-końc4Pó^ed-końeem nie zawieżają54 regionu łączą^go, reKckrelająt^ go oryginalny C-kopt4a od N-końca, evytee^,araa się metodą dwo4tapa wej ą^cj i (PCR) i reakcji łączenie ^pych końców Etapy te przedstawione są na fi g. 3^u

W czasie pierwszego etapu zestawu sterter^pD („nowy start” i „P_-bl _stop”) _oży_{ma s}ię d_olrt-wm-zpnin i namnnwnia 7 ητνσΐηηΐηρί ępkwpnrii fracrmpntn DRA ( Fratrment Stajrt”V ktÓrv t τ « o r ^^4.*ρα^ι i _Pe^_P^-._{a teiite z} w^zc*^—--*₄j _s,₄a_m4p«j. _fr._ec-_P----- - ---(7?----cg----------- ), j uwiera sekwencję kodującą część poDego N-końca nowego białka. W dragim e^pte irest^ wów starterów („nowy stop” i „P-bl stop”) u^ayma się do utworzema i naimtoż^ta ^a aryg^tnaⁱraj ^kwwicji fregmeyto —NA („Fragment Stop”), który zawtera noDp C-ⁿoń^eow_a (^ęść n_ow_eg_o bie^tn5. Startery „now^p start” i „poery stop” projekⁱuje eię tak, żeCz ^wtorały miejsca ^,ΌZp_Oan^awene przez odpoDt4dptte 4ρζζργζ restiykcyjn4, co pozwala na klopowanie gePU do wektora eksptesyjpego· Tj^D0D4 wemnk^- reakcj PCR są następująca, naden ąkl -d^tarn^j mci DNA p_rzez 2 minuty w tempeee0rra4 95°^ 25 cykli - denatm-acja przez 1 minutę w tem32

189 756 peraturze 94°C, przyłączanie starterów przez 45 sekund w temperaturze 50°C, synteza DNA przez 45 sekund w temperaturze 7;°C. W celu ograniczenia powstawania wystających końców DNA do prowadzenia reakcji PCR używa się polimerazy DNA Deep Vent z (New England Biolabs), według zaleceń producenta. Startery „P-bl start” i „P-bl stop” fosforyluje się na 0'-końcach w celu ułatwienia połączenia ze sobą „Fragmentu Start” i „Fragmentu Stop” metodą łączenia tępych końców.

100 μΐ mieszaniny reakcyjnej zawiera 150 pmoli każdego startera i około 1 pg matrycowego DNA, 1 x Vent bufor (New England Biolabs), ;00 pM dGTP, ;00 pM dATP, ;00 pM dTTP, ;00 pM dCTP, 1 jednostkę Deep Vent polimerazy DNA. Reakcję PCR prowadzi się w termocyklerze DNA, Model 4;0 (Perkin Elmer Corporation, Norwalk, CT). Produkty reakcji PCR oczyszcza się za pomocą zestawu Wizard PCR Preps (Promega).

Startery projektuje się tak, żeby zawierały miejsca rozpoznawane przez odpowiednie enzymy restrykcyjne, co pozwala na klonowanie genu do wektora ekspresyjnego. Typowo „Fragment Start” projektuje się tak, żeby zawierał miejsce rozpoznawane przez enzym restrykcyjny Ncol, a „Fragment Stop” projektuje się tak, żeby zawierał miejsce rozpoznawane przez enzym restrykcyjny Hindiii. Produkty trawienia enzymami restrykcyjnymi oczyszcza się zestawem Magie DNA Clean-Up System (Promega). Fragmenty Start i Stop rozdziela się na 1% żelu TAE, wybarwionym bromkiem etydyny i izoluje za pomocą zestawu do ekstrakcji Qiaex Gel Extraction (Qiagen). Fragmenty te miesza się ze sobą i łączy się z końcami fragmentu NcoEHindlll wektora pMON;;;; o wielkości około ;;00 par zasad. Reakcję przyłączania prowadzi się przez 10 minut w temperaturze 50°C, po czym pozwala się mieszaninie powoli ostygnąć. Te trzy fragmenty łączy się razem za pomocą ligazy DNA faga T4 (Boehringer Mannheim). W wyniku tych reakcji powstaje plazmid zawierający pełnej długości gen nowy N-koniec/C-koniec. Częścią mieszaniny reakcyjnej transformuje się szczep E. coli DHScc (Life Technologies, Gaithersburg, MD). Plazmid oczyszcza się a zgodność sekwencji potwierdza się tak, jak opisano poniżej.

Sposób III. Wytwarzanie genów z nowym N-końcem metodą tandem-duplikacja.

Geny z nowym N-końcem/C-końcem można wytwarzać też metodą opisaną przez R. A. Horlick i wsp., Protein Eng. 0:427-431 (199;). Namnażanie genów z nowym N-końcem/C-końcem metodą reakcji łańcuchowej polimerazy DNA (PCR), prowadzi się używając tandemowo zduplikowanego matrycowego DNA. Etapy te przedstawione są na fig. 4.

Tandemowo zduplikowany matrycowy DNA wytwarza się przez klonowanie i zawiera on dwie kopie genu, oddzielone przez sekwencję DNA, kodującą sekwencję łączącą która łączy oryginalne C-koniec i N-koniec, dwóch kopii genu. Do wytworzenia pełnej długości genu nowy N-koniec/C-koniec z tandemowo zduplikowanego matrycowego DNA, używa się specyficznego zestawu starterów. Startery te projektuje się tak, że zawierają miejsca rozpoznawane przez odpowiednie enzymy restrykcyjne, co pozwala na klonowanie genu do wektora ekspresyjnego. Typowe warunki reakcji PCR są następujące, jeden cykl - denaturacja nici DNA przez ; minuty w temperaturze 95°C; H cykli - denaturacja przez 1 minutę w temperaturze 94°C, przyłączanie starterów przez 1 minutę w temperaturze 50°C, synteza DNA przez 1 minutę w temperaturze 7;°C, na koniec reakcji jeden cykl syntezy DNA przez 7 minut w temperaturze 7;°C. Do prowadzenia reakcji PCR używa się zestawu odczynników Perkin Elmer GeneAmp PCR Core Reagents.

100 pl mieszaniny reakcyjnej zawiera 100 pmoli każdego startera i około 1 pg DNA, 1 x PCR bufor, ;00 pM dGTP, KW pM dATP, ;00 pM dTTP, ;00 pM dCTP, ;,5 jednostki AmpliTaq polimerazy DNA i 2 mM MgCl; Reakcję PCR prowadzi się w termocyklerze DNA, Model 4;0 (Perkin Elmer Corporation, Norwalk, CT). Produkty reakcji PGR oczyszcza się za pomocą zestawu Wizard PGR Preps (Promega).

Izolacja i charakteryzacja DNA

Plazmidowy DNA można izolować wieloma różnymi metodami przy użyciu dostępnych w handlu zestawów znanych specjalistom w dziedzinie. Kilka takich metod pokazano poniżej. Plazmidowy DNA izoluje się zestawem firmy Promega Wizard™ Miniprep Madison, WI), zestawem firmy Qiagen QIAwell Plasmid isolation (Chatsworth, CA) lub zestawem firmy Qiagen Plasmid Midi. Zestawy te opierają się na tej samej procedurze izolacji plazmidowego DNA. W skrócie, komórki zbiera się przez wirowanie (5000 x g), plazmidowy DNA uwalnia

189 756 się działaniem kolejno NaOH i kwasu, a pozostałości komórkowe usuwa się przez wirowanie (10000 x g). Nadsącz (zawierający plazmidowy DNA) nakłada się na kolumnę zawierając żywicę wiążącą DNA. Następnie kolumnę przemywa się i plazmidowy DNA wymywa się buforem TE. Po znalezieniu kolonii zawierającej interesujący plazmid, komórkami E. coli zaszczepia się 50-100 ml podłoża LB zawierającego odpowiednie antybiotyki i hoduje przez noc w temperaturze 37°C, w inkubatorze powietrznym z wytrząsaniem. Oczyszczonego plazmidowego DNA używa się do oznaczenia sekwencji DNA, późniejszych reakcji trawienia enzymami restrykcyjnymi, dodatkowego klonowania fragmentów DNA i transfekcji do komórek ssaków, E. coli lub innych komórek.

Potwierdzenie sekwencji DNA

Oczyszczony plazmidowy DNA rozpuszcza się w dH₂O i określa się jego ilość mierząc absorbancję przy długościach fali 2;0 i 280 nm w spektrofotometrze Baush & Lomb Spectronic ;01 UV. Próbki DNA sekwencjonuje się w oparciu o metodę terminacji reakcji sekwencjonowania przy użyciu zestawu ABI PRTSM™ DyeDeoxy™ (Numer zestawu 401388 lub 143074, Applied Biosystems Division, Perkin Elmer Corporation, Lincoln City, CA), według zaleceń producenta, zmodyfikowanych przez dodanie do mieszaniny reakcyjnej 5% DMSO. Reakcję sekwencjonowania prowadzi się w termocyklerze DNA, Model 480 (Perkin Elmer Corporation, Norwalk, CT), w warunkach amplifikacji DNA zalecanych przez producenta. Próbki oczyszcza się od nadmiaru barwników kończących reakcję amplifikacji, przy użyciu kolumienek Centri-Prep™ (Princeton Separations, Adelphia, NJ) i liofilizuje. Produkty reakcji sekwencjonowania, znakowane barwnikiem fluorescencyjnym rozpuszcza się w dejonizowanym formamidzie i sekwencjonuje na denaturującym 5,45% żelu poliakrylamidowym z dodatkiem 8M mocznika, w automatycznym sekwenatorze DNA, ABI Model HA. Nakładające się fragmenty sekwencji DNA analizuje się i porównuje z macierzystą sekwencją DNA przy pomocy programu komputerowego umożliwiającego analizę DNA Sequencher v2.1 (Gene Codes Corporation, Ann Arbor, MI).

Ekspresja agonistów receptora EPO w komórkach ssaków

Transfekcja komórek ssaków/wytwarzanie wzbogaconego podłoża

Komórki linii BHK-21 uzyskuje się z ATCC (Rockville, MD). Komórki te hoduje się w podłożu Eagla w modyfikacji Dulbecco (DMEM z wysoką zawartością glukozy) z dodatkiem 2 mM (mM) L-glutaminy i 10% płodowej surowicy bydlęcej (FBS). Podłoże takie oznacza się jako podłoże BHK. Podłoże s^^onujące to podłoże bHK, wzbogacone o 453 jednostki/ml higromycyny B (Calbiochem, San Diego, CA). Komórki są komórkami stabilnie transfekowanymi białkiem transaktywującym VP1; wirusa HSV, które transaktywuje promotor TE110 znajdujący się na plazmidzie p^ONUH (Patrz Hippenmeyer i wsp., Bio/Technology, str. 1037-1041, 1993).

Białko VP1; powoduje ekspresję genów wstawionych za promotorem TE 110. Komórki linii BHK-21 wytwarzające białko VP1; oznacza się BHK-VP1;. Plazmid pMON6359 (patrz Highkin i wsp., Poultry Sei., 70:970-981, 1991) posiada gen oporności na higromycynę z promotora SV40. Podobny plazmid dostępny jest w ATCC, pSV2-hph.

godziny przed transfekcją, komórki BHK-YP1; wysiewa się do gęstości 3 x komórek na płytkę do hodowli komórkowych o średnicy ;0 milimetrów (mm). Komórki transfekuje się przez 1; godz. w 3 ml „OPTTMEM”™ (Gibco-BRL, Gaithersburg, MD) zawierającym 10 pg plazmidowego DNA niosącego interesujący gen, 3 pg plazmidu oporności na higromycynę, pMON1118 i 80 pg „LIPOFECTAMINE”™ firmy Gibco-BRL na płytkę. Podłoże to następnie usuwa się i zamienia się na 3 ml podłoża do hodowli. 48 godzin po transfekcji zbiera się podłoże z każdej płytki i bada pod kątem aktywności (przejściowe podłoże wzboga-----\ τ/---—.....u s i *-»/-. ««Kr+LJ

WUCj. jmjihuhu u^wa ΰΐφ λ jn nawiać ι^,ν^ιιν^ i ρίΜζηυαιιια pijtru hodowli komórkowych o średnicy 100 mm zawierające 10 ml podłoża selekcjonującego. Po około 7 dniach hodowli w podłożu selekcjonującym, oporne komórki rosną, tworząc kolonie o średnicy kilku milimetrów. Kolonie zdejmuje się z płytek za pomocą filtrów papierowych (przyciętych do wielkości kolonii i nasączonych roztworem trypsyna/SDTA) i przenosi do pojedynczych studzienek, w ;4-studzienkowej płytce do hodowli zawierającej 1 ml podłoża

189 756 selekcjonującego. Gdy kolonie rozrosną się, wzbogacone podłoże ponownie się sprawdza, a pozytywne klony namnaża się w podłożu do hodowli.

Ekspresja agonistów receptora EPO w komórkach ssaków

Szczepy E. coli ΜΘΝ105 lub JM101 niosące interesujący plazmid hoduje się w temperaturze 37°C, w podłożu M9, wzbogaconego podłożem z kwasami kazamino, w inkubatorze powietrznym z wytrząsaniem, Model G25, firmy New Bruswick Scientific (Edison, New Jersey). Wzrost hodowli bada się mierząc OD600, do momentu gdy jej wartość wyniesie 1 jednostkę. W tym momencie dodaje się kwasu nalidiksowego (10 miligramów/ml) w 0,1 N NaOH do stężenia końcowego 50 pg/ml.

Hodowle wytrząsa się jeszcze przez następne 4 godziny w temperaturze 37°C. W celu uzyskania maksymalnego wytwarzania pożądanego produktu, w czasie inkubacji utrzymuje się wysoki stopień natlenienia hodowli. Komórki bada się w mikroskopie świetlnym pod kątem obecności ciał inkluzyjnych (IB), Z hodowli pobiera się jeden mililitr i prowadzi się analizę zawartości białka. Komórki wiruje się (5000 x g) i osad komórek gotuje się, traktuje buforem redukującym i prowadzi się elektroforezę SDS-PAGE (patrz Maniatis i wsp., Molecular Cloning: A Laboratory Manuał, 1982). Hodowlę wiruje się (5000 x g) do otrzymania osadu komórkowego.

Dodatkowe strategie postępowania umożliwiające osiągnięcie wysokiej ekspresji genów w komórkach E. coli opisane są w Sawas C. M. (Microbiological Reviews 60:512-538,1996).

Otrzymywanie ciał inkluzyjnych, ekstrakcja, ponowne fałdowanie, dializa, chromatografia DEAE i charakteryzacja agonistów receptora EPO, które akumulują się w postaci ciał inkluzyjnych w komórkach E. coli

Izolowanie ciał inkluzyjnych'.

Komórki z 330 ml hodowli E. coli zbiera się przez wirowanie, zawiesza w 15 ml buforu do sonifikacji (10 mM chlorowodorku 2-amino-2-(hydroksymetylo)-l,3-propanodiolu (TrisHC1), pH 8,0 + 1 mM kwasu etylenodiaminotetraoctowego (EDTA)). Zawieszone komórki sonifikuje się używając końcówki typu mikrotip sonifikatora Sonicator Cell Disruptor (Model W-375, Heat System-Ultrasonics, Inc., Farmingdale, New York). Do rozbicia komórek i wymycia ciał inkluzyjnych (IB) stosuje się trzy rundy sonifikacji w buforze do sonifikacji i wirowanie. Pierwsza runda sonifikacji jest to sonifikacja przez 3 minuty, po której następuje następna sonifikacja przez 1 minutę. Dwie końcowe rundy trwają po 1 minucie każda.

Ekstrakcja i ponowne fałdowanie białek z ciał infuzyjnych:

Po końcowym etapie wirowania, osad ciał infhzyjnych rozpuszcza się w 10 ml roztworu 50 mM Tris-HCl, pH 9,5, 8 M mocznik i 5 mM ditiotreitol (DTT) i miesza się w temperaturze pokojowej przez około 45 minut w celu umożliwienia denaturacji białek, które uległy ekspresji.

Roztwór do ekstrakcji przenosi się do zlewki zawierającej 70 ml roztworu 5 mM TrisHCl, pH 9,5, 2,3 M mocznik i w celu umożliwienia białku ponownego pofałdowania, delikatnie miesza się w temperaturze 4°C, przez 18 do 48 godzin, zapewniając dostęp powietrza. Fałdowanie śledzi się za pomocą analizy, metodą wysokociśnieniowej chromatografii cieczowej z odwróconymi fazami (HR-HPLC) stosując kolumnę Vydac (Hesperia, Ca) Cl8 Q, 46x25 cm). Do monitorowania fałdowania stosuje się liniowy gradient 40% do 65% acetonitrylu, zawierającego 0,1% kwasu trójfluorooctowego (TFA). Gradient ten rozwija się przez 30 minut przy szybkości przepływu 1,5 ml na minutę. Zdenaturowane białka ogólnie wymywają się później niż białka, które uległy ponownemu pofałdowaniu.

Oczyszczanie:

Po ponownym pofałdowaniu, usuwa się metodą strącania kwasowego, zanieczyszczające białka E. coli. PH roztworu pofałdowanych białek doprowadza się do wielkości pomiędzy pH 5,0 a 5,2, za pomocą 15% (objęrościowo/objętościowy) kwasu octowego (HOAc). Roztwór ten miesza się przez 2 godziny w temperaturze 4°C. Następnie w celu wytrącenia nierozpuszczalnych białek, mieszaninę wiruje się przez 20 minut, przy 12 000 x g.

Nadsącz pozostający po etapie wytrącania kwasowego dializuje się przez błonę Spectra/Por 3 o wielkości odcinania (MWCO) 3500 daltonów. Dializę prowadzi się wobec 2 zmian, po 4 litry (50-krotny nadmiar) 10 mM Tris-HCl, pH 8,0 w czasie całkowitym 18 godzin. Dializa obniża przewodnictwo próbki i usuwa mocznik przed chromatografią DEAE. Próbkę

189 756 wiruje się przez (20 minut przy 12 000 x g) w celu wytrącenia wszystkich nierozpuszczalnych białek pozostających po dializie.

Chromatografię jonowymienną prowadzi się na kolumnie Bio-Rad Bio-Scale DEAE2 (7 x 52 mm). Kolumnę równoważy się buforem zawierającym 10 mM Tris-HCl, pH 8,0. Białko wymywa ponad 45 objętościami kolumny, gradientem od 0 do 500 mM chlorku sodowego (NaCl) w buforze do równoważenia. W czasie wymywania, ustawia się szybkość przepływu 1 ml na minutę. Zbiera się frakcje o objętości 2 ml i analizuje metodą RP-HPLC stosując kolumnę Vydac (Hesperia, Ca) Cl8 (),46 x 25 cm). Do monitorowania stosuje się liniowy gradient 40% do 65% acetonitrylu, zawierającego 0,1% kwasu trójfluorooctowego (TFA). Gradient ten rozwija się przez 30 minut, przy szybkości przepływu 1,5 ml na minutę. Połączone frakcje dializuje się następnie wobec 2 zmian, po 4 litry (50 do 500-krotny nadmiar) 10 mM octanu amonowego (NH4A.C, pH 4,0 w czasie całkowitym 18 godzin. W czasie dializy stosuje się błonę Spectra/Por 3 o wielkości odcinania (MWCO) 3500 daltonów. Następnie próbkę filtruje się sterylnie przez filtr strzykawko wy o wielkości porów 0,22 pm pStar LB syringe filter, Costar, Cambridge, Ma) i przechowuje w temperaturze 4°C.

W niektórych przypadkach oczyszczanie pofałdowanych białek prowadzi się metodą powinowactwa, stosując odczynniki wykazujące powinowactwo, takie jak przeciwciała lub podjednostki receptora przyłączone do odpowiedniego podłoża. Ewentualnie (lub dodatkowo) oczyszczanie prowadzi się jedną z wielu znanych metod chromatograficznych, takich jak : chromatografia jonowymienna, filtracja na żelu lub hydrofobowa HPLC lub HPLC z odwróconą fazą.

Te i inne metody oczyszczania białka są szczegółowo opisane w Methods in Enzymology, 182 'Guide to Protein Purification' ed. Murray Deutscher, Academic Press, San Diego, CA (1990) .

Charakteryzacja białka:

Oczyszczone białko analizuje się metodą RP-HPLC, spektrometrią masową z rozpylaniem elektrycznym i SDS-PAGE. Ocena ilościowa białka obejmuje określenie składu aminokwasowego, RP-HPLC i określenie ilości metodą Bradforda. W pewnych przypadkach w celu potwierdzenia identyczności białka prowadzi się mapowanie trój peptydów w połączeniu ze spektrometrią masową z rozpylaniem elektrycznym.

Test metylocelulozy

Test ten odzwierciedla zdolność czynnika stymulującego wzrost kolonii do stymulacji normalnych komórek szpiku kostnego do wytwarzania różnych typów kolonii krwiotwórczych in vitro (Bradley i wsp., Aust. Exp Biol. Sci. 44:287-15 300,1966; Pluznik i wsp., J. Celi Comp. Physiol. 66:319-324, 1965).

Metody

Około 30 ml świeżej, normalnej biopsji szpiku kostnego, pobiera się od zdrowego dawcy, poinformowanego o celu badania. W sterylnych warunkach, próbki umieszcza się w 50 ml probówce ze stożkowatym dnem (#25339-50 Corning, Comong, MD), dodaje się roztwór lx PBS (#14040.059 Life technologies, Gaithersburg, MD) w stosunku 1:5. Pod rozcieńczoną próbkę wprowadza się Ficoll (Histopaąue 1077 Sigma H-8889) i wiruje, 300 x g przez 30 minut. Zbiera się warstwę komórek jednojądrzastych i przemywa się ją lx PBS i jeszcze raz 1% BSA PBS (Cell Pro Co., Bothel, WA). Komórki jednojądrzaste liczy się i selekcjonuje się komórki CD34+, za pomocą kolumny Ceprate LC (CD34) Kit (Cell Pro Co., Bothel, WA). Frakcjonowanie prowadzi się aż do odzyskania wszystkich występujących w szpiku kostnym komórek posiadających antygen powierzchniowy CD34.

Na płytkach Petriego 35x10 mm (Nunc #174926) nastawia się w trzech powtórzeniach hodowle komórkowe o objętości 1,0 ml. Podłoże do hodowli uzyskuje się od Terry Fox Labs, (podłoże HCC-4230, Terry Fox Labs., Vancouver, B.C. Canada). Do podłoża dodaje się erytropoetynę (Amgen, Tnousand Oaks, CA). Na płytkę Petriego wysiewa się 3000-10000 komórek CD34+. Następnie do podłoża na płytkach dodaje się białka agonisty receptora EPO, w postaci wzbogaconego podłoża, w którym hodowano transfekowane komórki ssaków lub białka oczyszczonego ze wzbogaconego podłoża, w którym hodowano transfekowane komórki ssaków lub E. coli, do stężenia końcowego od 0,001 nM do 10 nM. Hodowle zawiesza się za pomocą strzykawki o objętości 3 cm³ i 1,0 ml przenosi się na szalkę. Do szalek zawierających kolonie kontrolne (odpowiedź bazowa) nie dodaje się żadnych czynników stymulujących

189 756 wzrost kolonii. Do szalek zawierających kolonie kontroli pozytywnej dodaje się wzbogaconego podłoża (komórki ludzkie stymulowane PHA: Terry Fox Labs. H2400). Hodowle inkubuje się w temperaturze 37°C, w wilgotnej atmosferze zawierającej 5% C0;.

Kolonie komórek krwiotwórczych większe niż 50 komórek, liczy się w dniu największej odpowiedzi (dni 10 - 11) za pomocą odwróconego mikroskopu fazowego firmy Nikon, wyposażonego w obiektyw 40x. Grupy komórek zawierające mniej niż 50 komórek oznacza się jako klastry. Alternatywnie w celu zidentyfikowania kolonii, można je nanieść na szkiełko mikroskopowe i wybarwić lub można je pobrać, zawiesić w podłożu, wirować w cytowirówce na szkiełko mikroskopowe i wybarwić.

Test czynników wzrostowych ludzkich komórek krwiotwórczych z krwi pępowinowej

Komórki szpiku kostnego są tradycyjnie używane w testach in vitro do oceny aktywności krwiotwórczej czynnika stymulującego wzrost kolonii (CSF). Jednakże ludzki szpik kostny nie zawsze jest dostępny, a poza tym występują znaczące różnice pomiędzy dawcami. Krew pępowinowa jest porównywalna ze szpikiem kostnym jako źródło komórek krwiotwórczych i macierzystych (Broxmeyer i wsp. PNAS USA 89: 4109-110, 1992; Mayani i wsp. Blood 81: 0252-3268, 1993). W przeciwieństwie do szpiku kostnego krew pępowinowa jest łatwiej dostępna. Można także zmniejszyć zmienność próbek przez połączenie świeżych próbek uzyskanych od kilku dawców lub tworząc bank zamrożonych komórek. Modyfikując warunki hodowli i badając markery specyficzne dla linii rozwojowych można specyficznie badać aktywność gwałtownego tworzenia kolonii (BFU-E).

Metody

Z krwi pępowinowej izoluje się komórki jednojądrzaste w ciągu U godzin od pobrania, za pomocą standardowej metody wirowania w gradiencie gęstości (1,077 g/ml Histopaque). Komórki jednojądrzaste krwi pępowinowej wzbogaca się w komórki pnia i komórki macierzyste kilkoma sposobami, włączając selekcję immunomagnetyczną komórek CD M- i CDUł, wyłapywanie frakcji SBA-, ΥΥ za pomocą opłaszczonych butelek do hodowli z firmy Applied Immune Science (Santa Barbara, CA) lub selekcję komórek CDUł na kolumnach sprzężonych z awidyną CellPro (Bothell, WA). Świeżo wyizolowanej lub zamrożonej frakcji wzbogaconej o komórki CDUł używa się do testu. Dla każdego rozcieńczenia próbki, nastawia się podwójne hodowle (zakres stężeń od 1 pM do EM pM) zawierające 1 x 10⁴ komórek w 1 mililitrze podłoża zawierającego 0,9% metylocelulozy, bez dodatkowych czynników wzrostowych (Methocult HHH z Stem Cell Technologies, Vancouver, BC). Kolonie zawierające >30 komórek liczy się po 7-9 dniach hodowli.

Transfekowane linie komórkowe

Linie komórkowe, takie jak BHK lub linia mysich komórek przed B - Baf/3 transfekuje się DNA receptora czynnika stymulującego wzrost kolonii, takiego jak receptor EPO, którego te linie nie posiadają. Transfekowanych linii komórkowych używa się do określenia aktywności proliferacyjnej komórek i/lub wiązania receptora.

Przykład 1

Geny kodujące sekwencję zmienionych ligandów EPO konstruuje się stosując jedną z metod opisanych powyżej lub innymi metodami rekombinacji DNA znanymi specjalistom w dziedzinie. Dla celów tego przykładu miejsce zmiany występuje pomiędzy resztami 131 (Arg) i 132 (Thr) Epo. Miejsce to jest wrażliwe na cięcie proteolityczne, co wskazuje na położenie na powierzchni i stosunkowo duży stopień giętkości.

W tym przykładzie nowy N-koniec i nowy C-koniec wytwarza się bez sekwencji łączącej oba oryginalne końce. Robi się to tak jak opisano w Sposobie II, za pomocą dwuetapowego PCR i łączenia tępych końców.

W pierwszym etapie PCR używając jako matrycy wektora zawierającego sekwencję DNA SEQ ID NO: 120 i zestawu starterów („nowy start” i „tępy start”) tworzy się fragment DNA zawierający nowy N-koniec. Ten fragment nazywa się „fragment start”. Podkreślona sekwencja startera nowy start to miejsce rozpoznawane przez enzym restrykcyjny Ncol.

Starter Nowy start = gcgcgcCCATGGACAATCACTGCTGAC SEQ ID

NOTH:

Starter Tępy start = TCTGTCCCCTGTCCT SEQ ID NO: 132

189 756

W drugim etapie PCR używając jako matrycy wektora zawierającego sekwencję DNA EQQ ID NO: 120 i zestawu starterów („nowy stop” i „tępy stop”) tworzy się fragment DNA zawierający nowy C-koniec. Ten fragment nazywa się „fragment stop”. Podkreślona sekwencja startera nowy stop to miejsce rozpoznawane przez enzym restrykcyjny HindIII.

Starter Nowy stop = gcgcgcAAGCTTATTATCCiGAGTGGAGCAGCTGAGGCCGCATC SQD ID NO:^:

Starter Tępy stop = GCCCCACCACGCCTCATCTGT SEQ ID NO:

W etapie łączenia otrzymane dwa fragmenty w opisanych reakcjach PCR łączy się ze sobą, trawi enzymami restrykcyjnymi NcoI i HindlII, klonuje do wektora ekspresyjnego. Klony analizuje się metodą analizy restrykcyjnej i potwierdza się wierność sekwencji DNA. W celu wklonowania w inny wektor ekspresyjny, startery można zaprojektować tak, że zawierają inne miejsce rozpoznawane przez enzymy restrykcyjne inne niż Ncol i HindlII.

Przykład 2

Sekwencję zmienionych agonistów receptora EPO według wynalazku bada się pod kątem aktywności biologicznej stosując jedną z metod opisanych powyżej lub innymi metodami znanymi specjalistom w dziedzinie. Dodatkowe sposoby konstruowania wariantów genów, ekspresji zrekombinowanych białek, oczyszczania białek, charakteryzowania białek i określania aktywności biologicznej, opisane są w WO H/^;^ WO H/^;;, WO 95/20976, WO 95/21197 i WO 90/50977, które są tu w całości włączone przez cytowanie.

LISTA SEKWENCJI (1)

INFORMACJE OGÓLNE:

(i) APPLIKANT: G. D. Searle and Company (ii) TYTUŁ WYNALAZKU: Nowi agoniści receptora erytropoetyny (iii) LICZBA SEKWENCJI:

(iv) ADRES DLA KORESPONDENCJI:

(A) NAZWA: G. D. Searle and Company (B) ULICA: P.O. Box 5110 (C) MIASTO: Chicago (D) STAN: IL (D) KRAJ: USA (F) KOD POCZTOWY: 60680 (v) FORMA NOŚNIKA KOMPUTEROWEGO:

(A) TYP NOŚNIKA: dyskietka (B) KOMPUTER: IBM PC kompatybilny (C) SYSTEM OPERACYJNY: PC-DOS/MS-DOS (D) OPROGRAMOWANIE: FastSQD for Windows Version 2.0 (vi) BIEŻĄCE INFORMACJE O ZGŁOSZENIU:

(A) NUMER ZGŁOSZENIA:

(B) DATA ZŁOŻENIA: 21 października 1997 (C) KLASYFIKACJA:

(vii) INFORMACJE O WCZEŚNIEJSZYM ZGŁOSZENIU:

(A) NUMER ZGŁOSZENIA: 60/084,040 (B ) DA A T' A ZŁ Oż ΟΊΠ’ A: 25 paźd m ernka 1006

ŹjJUkźŁjlJi ^11 k. 1XXX\.U X S S \J (viii) RZECZNIK/ZASTĘPCA:

(A) NAZWISKO: Bennett, Dennis A.

(B) NUMER REJESTRACJI: 33547 (C) NUMER REJESTR.U/SPRAWY: 2 99 1/1 (ix) INFORMACJE TELECOMUNIKACYJNE:

189 756 (A) TELEFON: 314-737-6986 (B) TELEFAX: 214l737l6972 (C) TELEX:

(2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 1:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (b) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 1:

Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile

10 15

Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu

25 30

Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser

40 45

Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro

55 60

Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80

Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile

90 95

Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala

100 105 110

Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly

115 120 175

Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly

130 115 H4

Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu 145 150 m 160

Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu

165 U0 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 2:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (b) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 2:

Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr 15 10 15

17; 1 O;~ . TK.. T «5 ; Tk 1 A ;; *-; Ό ; ;; T; rf Λ ; ; 0ł»ł^ T x;c ; ;ΓΓ

Vcu I IU nsp I 1U ναι non I US. ijl i liu np .......... ....

25 30

Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu 35 40 45

Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp 50 55 60

Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser 65 70 75 80

189 756

8eu T0r T0r Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile Ser 85 90 95

Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg T0z Ile Thr Ala Asp 100 105 110

Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Aso Phe Leu Arg Gly Lys 115 120 125

8eu Lys Leu Tyr T0z Gly Glu Ala Cys Arg T0z Gly Asp Arg Gly Gly

130 135 140

Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val 8eu Glu Arg 145 150 155 160

Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn

165 170 (2) INFORMACJA O mQ ID NO: 3:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 ymincgmaeóm (b) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 3:

Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Aso Ile Thr Val 15 10 15

Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp 8ys Arg Met Glu Val Gly

25 30

Gln Glo Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala

40 45

Val Leu Arg Gly Glo Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu

55 60

Pro Leu Glo Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu 65 70 75 80

Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile Ser Pro

90 95

Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp T0r

100 105 110

P0e Arg Lys Leu P0e Arg Val Tyr Ser Aso Phe 8eu Arg Gly Lys Leu

115 120 125

Lys Leu Tyr T0r Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly

130 135 140

Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr 145 150 155 160

Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Aso Ile

165 117 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 4:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEÓ ID NO: 4:

189 756

Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro 15 10 15

Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln κ n ;0

Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val

H 40 45

Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro

55 ;0

Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr ;5 70 75 ;0

Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro

95

Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe 100 105 110

Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys m ek m

Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser

H0 m 140

Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu 145 150 m ^0

Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr

1;5 170 (;) INFORMACJA O SEQ ID NO: 5:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (b) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 5:

Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp 15 10 15

Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln ;0 25 ;o

Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu ;5 40 45

Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu

55 ;0

Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr ;5 70 75 ;0

Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp ;5 90 95

Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg

100 105 110

Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu

115 1;0 1;5

Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala

H0 m 140

Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu 145 150 m 1;0

Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr

1;5 170

189 756 (2) INFORMACJA O SEQ TD NO: β:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: ;:

Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Tle Thr Val Pro Asp Thr 15 10 15

Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala

25 30

Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg

40 45

Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln

55 ;0

Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu ;5 70 75 80

Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Tle Ser Pro Pro Asp Ala

90 95

Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys

100 105 110

Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr

115 120 125

Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro

130 135 140

Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu 145 150 155 1;0

Ala Lys Glu Ala Glu Asn Tle Thr Thr Gly

1;5 170 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 7:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 7:

Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys 15 10 15

Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val

25 30

Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly

40 45

Gin Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu

55 ;0

His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu 66 70 75 80

Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Tle Ser Pro Pro Asp Ala Ala

90 95

189 756

Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu 100 105 110

Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr 115 120 125

Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro

130 135 140

Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala 145 150 155 160

Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys

165 170 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 8:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 8:

Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val 15 10 15

Asn Phe Tyr Ala Tm Lys Arg Met Glu Val Glv Gln Gln Ala Val Glu

25 ' 30

Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln

40 45

Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His

55 60

Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg 65 70 75 80

Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser

90 95

Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe

100 105 110

Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly

115 120 125

Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg

130 135 140

Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys 145 150 155 160

Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala

165 170 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 9:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas fi~''\ Τ T/^^Z Li Λ Τ A (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 9:

His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Vał Asn 15 10 15

189 756

Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val 20 25 30

Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala 35 40 45

Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val

55 ;0

Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala ;5 70 75 80

Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Tle Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala

90 95

Ala Pro Leu Arg Thr Tle Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg

100 105 111

Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu

115 120 125

Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu

130 135 140

Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu 145 150 155 110

Ala Glu Asn Tle Thr Thr Gly Cys Ala Glu

1;5 170 (2) INFORMACJA O SEQ TD NO: 10:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 17u aminokwasów (b) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 10:

Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe 1 5 10 15

Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp

25 30

Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu

40 45

Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp

555 60

Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu ;5 70 75 80

Gly Ala Gln Lvs Glu Ala Tle Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala ' 85 90 95

Pro Leu Arg Thr Tle Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val

100 105 110

Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala

115 120 125

Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Tle

130 135 140

Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala 145 150 155 1;0

Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His

170 (2) INFORMACJA O SEQ TD NO: 11:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

189 756 (A) DŁUGOŚĆ: 170 ymiookmasem (B) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: lioiowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: mQ ID NO: 11:

Ser 8eu Aso Glu Aso Ile T0r Val Pro Asp Thr Lys Val Asn P0e Tyr 1 5 10 15

Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Glo Ala Val Glu Val Trp Gln

25 33

Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Glo Ala Leu Leu

40 44

Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro 8eu Glo Leu His Val Asp Lys

55 60

Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr T0r Leu Leu Arg Ala Leu Gly 65 70 75 80

Ala Gln Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro

90 95

8eu Arg T0r Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr

100 115 111

Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys 8eu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys

115 259 1125

Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu lle Cys

130 135 140

Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu 145 150 155 160

Aso Ile Thr T0r Gly Cys Ala Glu His Cys

165 170 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 12:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (b) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: lioiowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: móIDNO: 12:

Leu Aso Glu Aso Ile T0r Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala 15 10 15

Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Glo Glo Ala Val Glu Val Trp Gn Gly

225 33>

Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Glo Ala Leu Leu Val

40 45

Asn Ser Ser Glo Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala

55 60

Yal Ser Glv Leu Are Ser Leu T0r T0r Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala 65 ' “ 70 75 80

Gln Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu

90 95

Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser

100 115 111

Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys 8eu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg

115 120 125

189 756

Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp 1;0 m 140

Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn 145 150 m 860

Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser

1;5 170 (;) INFORMACJA O SEQ ID NO: U:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (b) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: U:

Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp 15 10 B

Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu

K H K

Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn

H 40 45

Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val

55 ;0

Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln ;5 70 75 ;0

Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg ;5 90 95

Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn

100 105 110

Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr

115 1;0 m

Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser tk m 140

Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile

150 m 1;0

Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu

170

¢) INFORMACJA O SEQ ID NO: 14:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (b) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 14:

Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys 15 10 15

Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala

K H K

Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser

H 40 45

189 756

Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Vt^l Asp Lys Ala Val Ser

55 60

Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys 65 70 75 80

Glu Ala lie Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr

90 95 lie Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe

100 105 110

Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly

115 120 175

Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Re Cys Asp Ser Arg

130 135 H4

Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn lie Thr 145 150 m 160

Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn

165 170 (7) INFORMACJA O SEQ ID NO: 15:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (b) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 15:

Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg 15 10 15

Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu

55 30

Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser

40 45

Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly

55 60

Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu 65 70 75 80

Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile

90 95

Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu

100 105 110

Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp

115 120 175

Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val

130 113 U0

Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr 145 150 m 160

Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu

165 170 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 16:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas , (c) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy

189 756 (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 1;:

Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met 15 10 15

Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu

25 30

Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln

40 45

Pro Trp Glu Pro Leu Gln/Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu

55 ;0

Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gin Lys Glu Ala ;5 70 75 80

Tle Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Tle Thr

90 95

Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg

100 105 110

Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu

130 135 140

Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly 145 _ 150 155 1;0

Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn

1;5 170 (2) INFORMACJA O SEQ TD NO: 17:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 17:

Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val

10 15

Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu

25 30

Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp

40 45

Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser

55 ;0

Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Tle Ser 06 70 75 80

Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp

90 95

Thr Phe Are Lvs Leu Phe Arg Val Tvr Ser Asn Phe Leu Are Glv Lvs “lSO ~ 1Ó5 110 ' '

Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg

130 135 140

Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala 145 150 155 11;

189 756

Glu His Cys Ser Leu Aso Glu Aso Ile Thr 165 175 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 18:

(ί) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (c) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQIDNO: 18:

Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly 15 11 11

Glo Glo Ala Val Glu Val Trp Gln Gly 8eu Ala Leu Leu Ser Glu Ala

25 30

Val Leu Arg Gly Glo Ala 8eu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu

40 45

Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu

55 60

Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Glo Lys Glu Ala Ile Ser Pro 65 70 75 80

Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg T0r Ile Thr Ala Asp Thr 85 95 95

Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Aso Phe Leu Arg Gly Lys Leu 105 105 110

Lys 8eu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly 115 120 125

Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr

130 135 140

Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu 145 155 155 160

His Cys Ser Leu Aso Glu Aso Ile Thr Val

165 117 (2) INFORMACJA O mQ ID NO: 19:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 175 aminokwasów (b) TYP: aminokwas , (c) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedzoczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQIDNO: 19:

Asp Thr Lys Val Aso Phe Tyr Ala Trp 8ys Arg Met Glu Val Gly Glo

10 15

Gin Ala yal Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu 8eu Ser Glu Ala Val

25 30

Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Glo Pro Trp Glu Pro

40 45

Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr

55 60

Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro 65 70 75 80

189 756

Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr lie Thr Ala Asp Thr Phe 85 90 95

Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys 100 105 110

Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser 115 120 125

Ala Pro Pro Arg Leu Ue Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu

1;0 140

Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn He Thr Thr Gly Cys Ala Glu His 145 150 155 160

Cys Ser Leu Asn Glu Asn lie Thr Val Pro

165 170 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 20:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (b) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 20:

Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Tro Gln Glv Leu Ala 15 10 15

Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser

25 3;

Ser Gin Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser ;5 40 45

Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys

55 60

Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr 65 70 75 80

Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe

00 95

Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly

100 105 111

Asp Arg Gly Giy Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg

115 120 125

Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr

38O 135 110

Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro 145 150 155 160

Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys

165 170 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 21:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A ηϊ TU-GĆó.

νυν. no (B) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: EQD ID NO: 21:

189 756

Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu 15 10 15

Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser

25 30

Gin Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly

40 45

Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu

55 60

Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile 65 70 75 80

Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu

90 95

Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp

100 105 110

Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val

115 120 125

Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr

130 135 140

Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp 145 150 155 160

Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg

165 170 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 22:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 22:

Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu 15 10 15

Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln

25 30

Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu

40 45

Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala

55 60

Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr 65 70 75 80

Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg

90 95

Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg

100 105 110

Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu 11c inn ιος

HJ 1Z-V Ιϋ.Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly

130 135 140

Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Głu Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr 145 150 155 160

Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met

165 170

189 756 (;) INFORMACJA O SEQ ID NO: H:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: H:

Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser 15 10 15

Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro

K 25 30

Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg

H 4(0 45

Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile

H ;0

Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala ;5 70 75 ;0

Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly ;5 90 95

Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly

100 H5 lH

Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu

115 120 115

Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys

130 m 140

Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys 145 150 m 1;0

Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu i65 170 (;) INFORMACJA O SEQ ID NO: K:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (b) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: K:

Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu 15 0 0 15

His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu

K H K

Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala

H 40 45

Ser Ala A la Pro Ϊ eu Am Thr: lip Tlrr Ala Aen Thr Phe Arg Ϊ vs Leu

X 11U X XIV* x X t-f V* X * *·*^*· χ χχχ x χ χ xxx x χχ-ν χ “Ό J “--50 55 ;0

Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr ;5 70 75 ;0

Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro ;5 90 95

Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala

100 105 110

189 756

Lys Glu Ala Glu Asn He Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu H5 170 125

Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp

130 m 140

Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu 105 150 m 160

Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly

165 170 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 25:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 25:

Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His 15 10 U

Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg

75 30

Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser

00 05

Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe

55 66

Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly 65 70 75 80

Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg

9; 95

Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys

100 105 110

Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn

115 120 125

Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys

520 135 HO

Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala 105 150 155 160

Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln

165 170 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 26:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas _f (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 26:

Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val 15 10 11 Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala

75 30

Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala

00 45

189 756

Ala Pro Leu Arg Thr lie Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg 50 55 6;

Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu ;5 70 75 80

Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu

90 95 lie Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu

100 105 110

Ala Glu Asn lie Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu

115 120 125

Asn lie Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg

130 135 114

Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu 145 150 155 Kto

Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala

1;5 170 (2) INFORMACJA O SEQ TD NO: 27:

(ΐ) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (b) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ TD NO: 27:

Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp 15 10 15

Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu

25 30

Gly Ala Gln Lys Glu Ala Tle Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala

40 45

Pro Leu Arg Thr Tle Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val

55 ;0

Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala ;5 70 75 80

Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Tle

90 95

Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala

100 105 110

Glu Asn Tle Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn

115 120 125

Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met

130 135 140

Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu 145 150 155 1;0

Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu

166 170 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 28:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (b) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy

189 756 (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 28:

Val Aso Ser Ser Glo Pro Trp Glu Pro Leu Glo Leu His Val Asp Lys 15 10 15

Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly

25 30

Ala Gln Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro

40 45

Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr

55 60

Ser Aso Phe Leu Arg Gly Lys 8eu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys 65 70 75 85

Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys

90 95

Asp Ser Arg Val 8eu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu

100 105 110

Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Aso Ile

115 120 125

Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Aso Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu

130 135 11^0

Val Gly Gio Glo Ala Val Glu Val Trp Glo Gly Leu Ala Leu Leu Ser 145 150 155 165

Glu Ala Val Leu Arg Gly Glo Ala Leu Leu

165 170 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 29:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (b) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: potedzorzż (D) TOPOLOGIA: lioiowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 29:

Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Glo 8eu His Val Asp Lys Ala 15 10 15 'Yal Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr 8eu Leu Arg Ala Leu Gly Ala

255 33

Gln Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu

40 45

Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser

55 66

Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg 65 70 75 80

Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp

90 99

Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn

100 105 111

Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Aso Glu Asn Ile Thr

115 120 125

Val Pro Asp Thr Lys Val Aso Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val

130 135 114

Gly Glo Glo Ala Val Glu Val Trp Glo Gly Leu Ala Leu 8eu Ser Glu 145 150 155 160

189 756

Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val 1;5 170 (2) INFORMACJA O SEQ TD NO: 30:

(;) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ TD NO: 30:

Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val 15 10 15

Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gin

25 30

Lys Glu Ala Tle Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg

40 45

Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn

55 60

Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr ;5 70 75 80

Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu He Cys Asp Ser

90 95

Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile

100 105 110

Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn He Thr Val

115 120 125

Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly

130 D5 114

Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala 145 150 155 1;0

Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn

1;5 170 (2) INFORMACJA O SEQ TD NO: 31:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 31:

Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser 15 10 15

Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys

25 30

Glu Ala Tle Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr

40 45

Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe

55 ;0

Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly ;5 70 75 80

189 756

Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Tro Arg Leu lie Cys Asp Ser Arg 85 90 95

Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn lie Thr 100 105 110

Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu asp lie Thr Val Pro 115 120 125

-sp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln

130 135 140

Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu -la Val 145 150 155 160

Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val -sn Ser

165 100 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 32:

(1) CH—RAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokDasÓD (b) TYP: emipoaDes (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: aoJ4dzPcay (D) TOPOLOGIA: ltpioDy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 32:

Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys —la Val Ser Gly 1 5 10 15

Leu —rg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu

25 30

Ala Ile Ser Pro Pro —sp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu —rg Thr Ile

40 45

Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu The Arg Val Tyr Ser Asn The Leu

55 66

Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu —la Cys Arg Thr Gly —sp 65 70 75 80

Arg Gly Gly Gly Ser —la Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val

90 95

Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr

100 115 110

Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu —sn Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp

115 120 125

Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln

130 135 140 —la Val Glu Val Trp Gln Gly Leu —la Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu 145 150 152 160

Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val —sn Ser Ser

165 170 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 33:

(i) CHAR—KTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 apinokwasÓD (B) TYP: aminoamas _r (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (—) TOPOLOGIA: lipiaDy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID OO: 33:

189 756

Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu 15 10 15

Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala

25 ;0

He Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr He Thr ;5 40 45

Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg

55 60

Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg 65 70 75 80

Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu He Cys Asp Ser Arg Val Leu

90 95

Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn lie Thr Thr Gly

100 105 110

Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn lie Thr Val Pro Asp Thr

115 120 125

Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala

B0 B5 140

Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg 145 150 155 160

Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln

165 170 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 30:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (b) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: ;4:

Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg 15 10 15

Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile

25 ;0

Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala ;5 40 45

Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly

55 60

Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly 65 70 75 80

Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu

90 95

Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys

100 105 110

Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys ii« nn

XXV X X x^v

Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val 1;0 B5 140

Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly 145 150 155 160

Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro

165 170

189 756 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 35:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (c) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 35:

Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser 15 10 15

Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile Ser

25 30

Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp

H H

Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys

55 60

Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly ;5 70 75 80

Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg

90 95

Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala

100 105 110

Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val

115 120 125

Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu

130 135 HO

Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln m 150 m 1;0

Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp

170 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 3;:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 03:

Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala 15 10 15

Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala ASP Thr Phe Arg Lys

25 30

Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr

H H

Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro n ;0

Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu ;5 70 75 80

Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser

90 95

Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala

100 105 110

189 756

Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly m 120 175

Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val

130 m 140

Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gin Leu His Val Asp Lys Ala 145 150 155 160

Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu

165 170 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 37:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 37:

Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala 1 5 10 U

Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu

25 30

Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Glv Lvs Leu Lys Leu Tyr Thr ’ 35 ' 40 ' ' 45

Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro

55 60

Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala 65 70 75 80

Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu

90 95

Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp

100 105 110

Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu

115 120 125

Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn

130 m U0

Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val TH 540 m 160

Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu

165 170 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 38:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 38:

Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser 1 5 10 15

Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe

25 30

189 756

Arg Val Tyr Ser Aso Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly 35 40 45

Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg

55 60

8eu lie Cys Asp Ser Arg Val Leu GluArg Tyr Leu Leu Gln Ala Lys 65 70 75 80

Glu Ala Glu Asn lie Thr T0r Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn

90 95

Glu Asn lie Thr Val ProAsp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys

100 105 115

Arg Met Glu Val Gly Glo Gln Ala Val Glu Val Trp Glo Gly Leu Ala

115 120 125

Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser

130 135 140

Ser Glo Pro Trp Glu Pro Leu Glo Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser 145 150 155 160

Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg

165 175 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 39:

(ł) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 ymiookmasem (b) TYP: ymioogmae (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: lioiowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 39:

Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala 1 5 10 15

Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg

25 35

Val Tyr Ser Aso Phe Leu Arg Gly Lys 8eu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu

44 44

Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu

55 60

Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu 65 70 75 80

Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Aso Glu

90 95

Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Aso Phe Tyr Ala Trp Lys Arg

100 105 110

Met Glu Val Gly Glo Gln Ala Val Glu Val Trp Glo Gly Leu Ala Leu

115 120 112 Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Aso Ser Ser

130 113 110

Gln Pro Trp Glu Pro 8eu Glo Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly 145 150 155 160

Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu 8eu Arg Ala

165 175 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 45:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas

189 756 (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ TD NO: 40:

Gly Ala Gln Lys Glu Ala Tle Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala 1 5 10 15

Pro Leu Arg Thr Tle Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val

25 30

Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala

40 45

Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile

55 ;0

Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala ;5 70 75 80

Glu Asn Tle Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn

90 95

Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met

100 105 110

Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu

115 120 115

Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln

130 135 140

Pro irp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu 145 150 155 1;0

Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu

166 170 (2) INFORMACJA O SEQIDNO: 41:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (b) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ TD NO: 41:

Ala Gln Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro 15 10 15

Leu Arg Thr Tle Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr

25 3ΰ

Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys

40 45

Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Tle Cys

55 ;0

Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu ;5 70 75 80

Asn Tle Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Tle ' 90~.......95

Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu

100 105 111

Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser

115 120 m

Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro

130 135 140

189 756

Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg 145 150 155 160

Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly

165 170 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 42:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 42:

Gln Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu 15 10 15

Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser

25 30

Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg

40 45

Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp

55 60

Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn 65 70 75 80

Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr

90 95

Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val

100 105 110

Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu

115 120 125

Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp

130 135 140

Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser 145 150 155 160

Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala

165 170 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 43:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 43:

Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg 15 10 15

Thr Ile Thr Ala Asd Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn ‘ 25 30

Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr

40 45

Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser

55 60

Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile 65 70 75 80

189 756

Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val ;5 00 95

Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly 100 105 110

Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala 115 1;0 m

Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu LK m 140

Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu 145 150 m 1;0

Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln i65 1.70 ((2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 44:

(ó) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 44:

Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr 1 5 10 15

Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe

K H K

Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly

H 44 45

Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg

55 ;0

Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr (U 70 75 ;0

Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro ;5 9: 95

Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln

100 105 110

Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val m HO 125

Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro i20 m 140

Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr 145 150 m 1;0

Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys

T70 (D INFORMACJA O SEQ ID NO: 45:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (b) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 45:

189 756

Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile 15 10 15

Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu

25 30

Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp

40 45

Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val

55 60

Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr 65 70 75 80

Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp

90 95

Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln

100 105 110

Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu

115 120 125

Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu

130 135 140

Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr 145 150 155 160

Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu

165 170 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 46:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 46:

Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr 15 10 15

Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg

25 30

Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg

40 45

Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu

55 60

Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly 65 70 75 80

Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr

90 95

Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala

100 105 110

Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg

115 120 125

Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln

130 135 140

Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu 145 150 155 160

Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala

165 170

189 756 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: ;7:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: ;7:

Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala 15 10 15

Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly

25 30

Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly

H H

Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu

55 ;0

Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys ;5 70 75 80

Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys

90 95

Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val

100 105 110

Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly

115 120 125

Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu

130 135 M0

His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu m 150 155 1;0

Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile

136 170 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: ;8:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: ;8:

Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp 15 W 11

Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys

25 30

Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly _ 35 H H

Giy Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Giu Arg

55 ;0

Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala ;5 70 75 80

Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val

90 95

189 756

Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu 100 105 110

Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln H5 170 524

Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His

130 m 140

Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg 145 150 m 160

Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala lie Ser

164 170 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 49:

(1) CHARAKTERYS TYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 49:

Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr 15 11 15

Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu

25 30

Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly

00 05

Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr

H 60

Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu 65 70 75 80

His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn

90 95

Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Glin Gln Ala Val Glu Val

100 105 110

Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala

115 120 175

Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val

130 m 140

Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala 145 140 m 160

Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala He Ser Pro

164 HO (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 50:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas , (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy ztd\ KmA,™_T \yf l LUIWWITI, IUUU w J (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 50:

Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe 15 10 15

Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys

75 30

189 756

Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser 35 40 45

Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu

55 60

Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His 65 70 75 80

Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe

90 95

Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp

100 105 110

Gin Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu

115 120 125

Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp

130 135 140

Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu 145 150 155 160

Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro

165 170 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 51:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 51:

Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg 15 10 15

Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu

25 30

Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala

40 45

Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu

55 60

Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys 65 70 75 80

Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr

90 95

Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln

100 105 110

Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu

115 120 125

Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys

130 135 140

Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly 145 150 155 160

Ala Gin Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp

165 170 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 52:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas

189 756 (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 52:

Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Tle Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys 1 5 10 15

Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr

H 30

Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro

44 44

Pro Arg Leu Tle Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu

55 ;0

Ala Lys Glu Ala Glu Asn Tle Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser ;5 70 75 80

Leu Asn Glu Asn Tle Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala

90 95

Trp Lys Arg Met Glu Val Glv Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly

100 ' 105 110

Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val

115 120 m

Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala

130 135 140

Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala 145 150 155 ^0

Gln Lys Glu Ala Tle Ser Pro Pro Asp Ala

1;5 170 (2) INFORMACJA O SEQTDNO: 53:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ TD NO: 53:

Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu 1 5 10 15

Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr

25 30

Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro

45 45

Arg Leu Tle Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala

55 ;0

Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu ;5 70 75 80

Asn Glu Asn Tle Thr Val Pro Asd Thr Lvs Val Asn Phe Tvr Ala Tro ‘ 90 95

Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu

100 105 110

Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn

115 1^0 125

Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val

130 135 140

189 756

Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln 145 150 160

Lys Glu Ala lie Ser Pro Pro Asp Ala Ala

165 170 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 54:

(1) CHARAKTERYSTYK— SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminoawesÓD (b) TYP: emipokwas (C) LICZB— ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID OO: 54:

Ala —la Tro Leu —rg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe 1 5 10 15

Arg Val Tyr Ser —sn Phe Leu —rg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly

25 30

Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg

40 45

Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys

55 60

Glu Ala Glu —sn Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn 65 70 75 80

Glu Asn Ile Thr Val Pro —sp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys

90 95 —rg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala

100 105 110

Leu Leu Ser Glu —la Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser

115 120 125

Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser

130 MO

Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu —rg Ala Leu Gly Ala Gln Lys 145 150 155 160

Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser

165 170 (2) IOFORM-CJA O SEQ ID NN: 55 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(—) DŁUGOŚĆ: 170 emtpokwasÓD (b) TYP: aminokwas (c) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (—) TOPOLOGIA: ltpioDy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 22:

Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg 1 5 10 15

Val Tyr Ser —sn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu

25 30

Ala Cys Arg Thr Gly Asp —rg Gly Gly Gly Ser Ala Tro Pro —rg Leu

40 45

Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu

55 60

189 756

Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu 65 70 75 80

Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg

90 95

Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu

100 105 110

Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser

115 120 125

Gin Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly

130 135 140

Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu 145 150 155 160

Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala

165 170 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 56:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 56:

Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val 15 10 15

Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala

25 30

Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile

40 45

Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala

55 60

Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn 65 70 75 80

Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met

90 95

Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu

100 105 110

Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln

115 120 125

Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu

130 135 140

Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala 145 150 155 160

Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala

165 170 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 57:

ζ·\ Z-^T-r * -r\ * Τ-Γ,ΓΙ * ΠηΤΛΠΤΙ-'ΧΤΛΙΓΤ (l) UlAKAMDKIdl ϊ 3EKWDIN (A) DŁUGOŚĆ: 171 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 57:

189 756

Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Ty 15 UH

Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys ;0 H K

Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys ;5 4(0 45

Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu

55 ;0

Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile

75 ;0

Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu ;5 90 9ó

Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Glv Leu Ala Leu Leu Ser

100 105 ' 110

Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro

1H 120 125

Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg

1;0 m 140

Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Ala Lys Glu Ala l40 150 m 1;0

Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro

1;5 170 (;) INFORMACJA O SEQ ID NO: 5;:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (b) TYP: aminokwas (C) LICZBA Ł-AŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 5;:

Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser 15 10 15

Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg

K H ;0

Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp ;5 44 44

Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn

55 ;0

Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr ;5 70 75 ;0

Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val ;5 90 95

Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu

100 105 110

Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp

115 no m

Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser

1;0 m 140

Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile Ser

150 155 H0

Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu

170

189 756 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 59:

(ί) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 59:

Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn 15 10 15

Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr

25 30

Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser

H H

Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile

55 ;0

Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val ;5 70 75 80

Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly

90 95

Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala

100 115 111

Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu

115 120 125

Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu

130 m m

Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile Ser Pro m 150 155 1;0

Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg

136 170 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: ;0:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 512 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: ;0:

AATATCACGA CGGGCTGTGC TGAACACTGC AGCTTGAATG AGAATATCAC TGTCCCAGAC 60 ACCAAAGTTA ATTTCTATGC CTGGAAGAGG ATGGAGGTCG GGCAGCAGGC CGTAGAAGTC 110 TGGCAGGGCC TGGCCCTGCT GTCGGAAGCT GTCCTGCGGG GCCAGGCCCT GTTGGTCAAC 110 TCTTCCCAGC CGTGGGAGCC CCTGCAGCTG CATGTGGATA AAGCCGTCAG TGGCCTTCGC 240 AGCCTCACCA CTCTGCTTCG GGCTCTGGGA GCCCAGAAGG AAGCCATCTC CCCTCCAGAT 300 GCGGCCTCAG CTGCTCCACT CCGAACAATC ACTGCTGACA CTTTCCGCAA ACTCTTCCGA 360 GTCTACTCCA ATTTCCTCCG GGGAAAGCTG AAGCTGTACA CAGGGGAGGC CTGCAGGACA 420 GGGGACAGAT GAGGCGGCGG CTCCCCCCAC CACGCCTCAT CTGTGACAGC CGAGTCCTGG 45^0 AGAGGTACCT CTTGGAGGCC AAGGAGGCCG AG 5 52

TF TnNTF F < O T R ZM^T-Ά I^C F Τ/Ί f Ί

CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 512 par zasad (b) TYP: kwas nukleinowy (c) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy

OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: ;1:

(2;

(i)

189 756

ATCACGACGG GCTGTGCTGA ACACTGCAGC TTGAATGAGA ATATCACTGT CCCAGACACC 60 AAAGTTAATT TCTATGCCTG GAAGAGGATG GAGGTCGGGC AGCAGGCCGT AGAAGTCTGG 120 CAGGGCCTGG CCCTGCTGTC GGAAGCTGTC CTGCGGGGCC AGGCCCTGTT GGTCAACTCT 180 TCCCAGCCGT GGGAGCCCCT GCAGCTGCAT GTGGATAAAG CCGTCAGTGG CCTTCGCAGC 240 CTCACCACTC TGCTTCGGGC TCTGGGAGCC CAGAAGGAAG CCATCTCCCC TCCAGATGCG 300 GCCTCAGCTG CTCCACTCCG AACAATCACT GCTGACACTT TCCGCAAACT CTTCCGAGTC 900 TACTCCAATT TCCTCCGGGG AAAGCTGAAG CTGTACACAG GGGAGGCCTG CAGGACAGGG 420 GACAGATGAG GCGGCGGCTC CCCCCACCAC GCCTCATCTG TGACAGCCGA GTCCTGGAGA 480 GGTACCTCTT GGAGGCCAAG GAGGCCGAGA AT 512 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 62:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 512 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojadzorzy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: mQ ID NO: 62:

ACGACGGGCT GTGCTGAACA CTGCAGCTTG AATGAGAATA TCACTGTCCC AGACACCAAA 60 GTTAATTTCT ATGCCTGGAA GAGGATGGAG GTCGGGCAGC AGGCCGTAGA AGTCTGGCAG 120 GGCCTGGCCC TGCTGTCGGA AGCTGTCCTG CGGGGCCAGG CCCTGTTGGT CAACTCTTCC 180 CAGCCGTGGG AGCCCCTGCA GCTGCATGTG GATAAAGCCG TCAGTGGCCT TCGCAGCCTC 240 ACCACTCTGC TTCGGGCTCT GGGAGCCCAG AAGGAAGCCA TCTCCCCTCC AGATGCGGCC 300 TCAGCTGCTC CACTCCGAAC AATCACTGCT GACACTTTCC GCAAACTCTT CCGAGTCTAC 900 TCCAATTTCC TCCGGGGAAA GCTGAAGCTG TACACAGGGG AGGCCTGCAG GACAGGGGAC 420 AGATGAGGCG GCGGCTCCCC CCACCACGCC TCATCTGTGA CAGCCGAGTC CTGGAGAGGT 480 ACCTCTTGGA GGCCAAGGAG GCCGAGAATA TC 512 (2) INFORMACJA O mQ ID NO: 63:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 512 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: potedyoczy (D) TOPOLOGIA: iioiomy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 63:

ACGGGCTGTG CTGAACACTG CAGCTTGAAT GAGAATATCA CTGTCCCAGA CACCAAAGTT 60 AATTTCTATG CCTGGAAGAG GATGGAGGTC GGGCAGCAGG CCGTAGAAGT CTGGCAGGGC 120 CTGGCCCTGC TGTCGGAAGC TGTCCTGCGG GGCCAGGCCC TGTTGGTCAA CTCTTCCCAG 180 CCGTGGGAGC CCCTGCAGCT GCATGTGGAT AAAGCCGTCA GTGGCCTTCG CAGCCTCACC 240 ACTCTGCTTC GGGCTCTGGG AGCCCAGAAG GAAGCCATCT CCCCTCCAGA TGCGGCCTCA 300 GCTGCTCCAC TCCGAACAAT CACTGCTGAC ACTTTCCGCA AACTCTTCCG AGTCTACTCC 360 AATTTCCTCC GGGGAAAGCT GAAGCTGTAC ACAGGGGAGG CCTGCAGGAC AGGGGACAGA 420 TGAGGCGGCG GCTCCCCCCA CCACGCCTCA TCTGTGACAG CCGAGTCCTG GAGAGGTACC 480 TCTTGGAGGC CAAGGAGGCC GAGAATATCA CG 512 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 64:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 512 par zasad (b) TYP: kwas nukiainomy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: potadyoczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: mQ ID NO: 64:

GGCTGTGCTG AACACTGCAG CTTGAATGAG AATATCACTG TCCCAGACAC CAAAGTTAAT 60 TTCTATGCCT GGAAGAGGAT GGAGGTCGGG CAGCAGGCCG TAGAAGTCTG GCAGGGCCTG 120 GCCCTGCTGT CGGAAGCTGT CCTGCGGGGC CAGGCCCTGT TGGTCAACTC TTCCCAGCCG 180 TGGGAGCCCC TGCAGCTGCA TGTGGATAAA GCCGTCAGTG GCCTTCGCAG CCTCACCACT 240 CTGCTTCGGG CTCTGGGAGC CCAGAAGGAA GCCATCTCCC CTCCAGATGC GGCCTCAGCT 300 GCTCCACTCC GAACAATCAC TGCTGACACT TTCCGCAAAC TCTTCCGAGT CTACTCCAAT 360

189 756

TTCCTCCGGG GAAAGCTGAA GCTGTACACA GGGGAGGCCT GCAGGACAGG GGACAGATGA 420 GGCGGCGGCT CCCCCCACCA CGCCTCATCT GTGACAGCCG AGTCCTGGAG AGGTACCTCT 480 TGGAGGCCAA GGAGGCCGAG AATATCACGA CG 512 (2) INFORMACJA O SEQ TD NO: ;5:

(ί) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 512 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: ;5:

TGTGCTGAAC ACTGCAGCTT GAATGAGAAT ATCACTGTCC CAGACACCAA AGTTAATTTC 60 TATGCCTGGA AGAGGATGGA GGTCGGGCAG CAGGCCGTAG AAGTCTGGCA GGGCCTGGCC 120 CTGCTGTCGG AAGCTGTCCT GCGGGGCCAG GCCCTGTTGG TCAACTCTTC CCAGCCGTGG 180 GAGCCCCTGC AGCTGCATGT GGATAAAGCC GTCAGTGGCC TTCGCAGCCT CACCACTCTG 240 CTTCGGGCTC TGGGAGCCCA GAAGGAAGCC ATCTCCCCTC CAGATGCGGC CTCAGCTGCT 300 CCACTCCGAA CAATCACTGC TGACACTTTC CGCAAACTCT TCCGAGTCTA CTCCAATTTC 660 CTCCGGGGAA AGCTGAAGCT GTACACAGGG GAGGCCTGCA GGACAGGGGA CAGATGAGGC 420 GGCGGCTCCC CCCACCACGC CTCATCTGTG ACAGCCGAGT CCTGGAGAGG TACCTCTTGG 480 AGGCCAAGGA GGCCGAGAAT ATCACGACGG GC 512 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: ;;:

(;) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: m par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: ;;:

GCTGAACACT GCAGCTTGAA TGAGAATATC ACTGTCCCAG ACACCAAAGT TAATTTCTAT ;0 GCCTGGAAGA GGATGGAGGT CGGGCAGCAG GCCGTAGAAG TCTGGCAGGG CCTGGCCCTG 120 CTGTCGGAAG CTGTCCTGCG GGGCCAGGCC CTGTTGGTCA ACTCTTCCCA GCCGTGGGAG 180 CCCCTGCAGC TGCATGTGGA TAAAGCCGTC AGTGGCCTTC GCAGCCTCAC CACTCTGCTT 240 CGGGCTCTGG GAGCCCAGAA GGAAGCCATC TCCCCTCCAG ATGCGGCCTC AGCTGCTCCA 300 CTCCGAACAA TCACTGCTGA CACTTTCCGC AAACTCTTCC GAGTCTACTC CAATTTCCTC 660 CGGGGAAAGC TGAAGCTGTA CACAGGGGAG GCCTGCAGGA CAGGGGACAG ATGAGGCGGC 420 GGCTCCCCCC ACCACGCCTC ATCTGTGACA GCCGAGTCCT GGAGAGGTAC CTCTTGGAGG 480 CCAAGGAGGC CGAGAATATC ACGACGGGCT GT 512 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: ;7:

(;) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: m par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: ;7:

GAACACTGCA GCTTGAATGA GAATATCACT GTCCCAGACA CCAAAGTTAA TTTCTATGCC ;0 TGGAAGAGGA TGGAGGTCGG GCAGCAGGCC GTAGAAGTCT GGCAGGGCCT GGCCCTGCTG 120 TCGGAAGCTG TCCTGCGGGG CCAGGCCCTG TTGGTCAACT CTTCCCAGCC GTGGGAGCCC 180 CTGCAGCTGC ATGTGGATAA AGCCGTCAGT GGCCTTCGCA GCCTCACCAC TCTGCTTCGG 240 GCTCTGGGAG CCCAGAAGGA AGCCATCTCC CCTCCAGATG CGGCCTCAGC TGCTCCACTC 300 CGAACAATCA CTGCTGACAC TTTCCGCaaa C1C11CGTAT 1C1AC1CCAA ni cci CCGG 600 GGAAAGCTGA AGCTGTACAC AGGGGAGGCC TGCAGGACAG GGGACAGATG AGGCGGCGGC 420 TCCCCCCACC ACGCCTCATC TGTGACAGCC GAGTCCTGGA GAGGTACCTC TTGGAGGCCA 480 AGGAGGCCGA GAATATCACG ACGGGCTGTG CT 512 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: ;8:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 512 par zasad

189 756 (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 68:

CACTGCAGCT TGAATGAGAA TATCACTGTC CCAGACACCA AAGTTAATTT CTATGCCTGG 60 AAGAGGATGG AGGTCGGGCA GCAGGCCGTA GAAGTCTGGC AGGGCCTGGC CCTGCTGTCG 120 GAAGCTGTCC TGCGGGGCCA GGCCCTGTTG GTCAACTCTT CCCAGCCGTG GGAGCCCCTG 180 CAGCTGCATG TGGATAAAGC CGTCAGTGGC CTTCGCAGCC TCACCACTCT GCTTCGGGCT 240 CTGGGAGCCC AGAAGGAAGC CATCTCCCCT CCAGATGCGG CCTCAGCTGC TCCACTCCGA 300 ACAATCACTG CTGACACTTT CCGCAAACTC TTCCGAGTCT ACTCCAATTT CCTCCGGGGA 360 AAGCTGAAGC TGTACACAGG GGAGGCCTGC AGGACAGGGG ACAGATGAGG CGGCGGCTCC 420 CCCCACCACG CCTCATCTGT GACAGCCGAG TCCTGGAGAG GTACCTCTTG GAGGCCAAGG 480 AGGCCGAGAA TATCACGACG GGCTGTGCTG AA 512 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 69:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 512 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 69:

TGCAGCTTGA ATGAGAATAT CACTGTCCCA GACACCAAAG TTAATTTCTA TGCCTGGAAG 60 AGGATGGAGG TCGGGCAGCA GGCCGTAGAA GTCTGGCAGG GCCTGGCCCT GCTGTCGGAA 120 GCTGTCCTGC GGGGCCAGGC CCTGTTGGTC AACTCTTCCC AGCCGTGGGA GCCCCTGCAG 180 CTGCATGTGG ATAAAGCCGT CAGTGGCCTT CGCAGCCTCA CCACTCTGCT TCGGGCTCTG 240 GGAGCCCAGA AGGAAGCCAT CTCCCCTCCA GATGCGGCCT CAGCTGCTCC ACTCCGAACA 300 ATCACTGCTG ACACTTTCCG CAAACTCTTC CGAGTCTACT CCAATTTCCT CCGGGGAAAG 360 CTGAAGCTGT ACACAGGGGA GGCCTGCAGG ACAGGGGACA GATGAGGCGG CGGCTCCCCC 420 CACCACGCCT CATCTGTGAC AGCCGAGTCC TGGAGAGGTA CCTCTTGGAG GCCAAGGAGG 480 CCGAGAATAT CACGACGGGC TGTGCTGAAC AC 512 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 70:

(ί) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 512 par zasad (b) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 70:

AGCTTGAATG AGAATATCAC TGTCCCAGAC ACCAAAGTTA ATTTCTATGC CTGGAAGAGG 60 ATGGAGGTCG GGCAGCAGGC CGTAGAAGTC TGGCAGGGCC TGGCCCTGCT GTCGGAAGCT 120 GTCCTGCGGG GCCAGGCCCT GTTGGTCAAC TCTTCCCAGC CGTGGGAGCC CCTGCAGCTG 180 CATGTGGATA AAGCCGTCAG TGGCCTTCGC AGCCTCACCA CTCTGCTTCG GGCTCTGGGA 240 GCCCAGAAGG AAGCCATCTC CCCTCCAGAT GCGGCCTCAG CTGCTCCACT CCGAACAATC 300 ACTGCTGACA CTTTCCGCAA ACTCTTCCGA GTCTACTCCA ATTTCCTCCG GGGAAAGCTG 360 AAGCTGTACA CAGGGGAGGC CTGCAGGACA GGGGACAGAT GAGGCGGCGG CTCCCCCCAC 420 CACGCCTCAT CTGTGACAGC CGAGTCCTGG AGAGGTACCT CTTGGAGGCC AAGGAGGCCG 080 AGAATATCAC GACGGGCTGT GCTGAACACT GC 517 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 71:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 512 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 71:

TTGAATGAGA ATATCACTGT CCCAGACACC AAAGTTAATT TCTATGCCTG GAAGAGGATG 60 GAGGTCGGGC AGCAGGCCGT AGAAGTCTGG CAGGGCCTGG CCCTGCTGTC GGAAGCTGTC 120

189 756

CdGCGG0GCC AGGCCCTGTT GGTCAACTCT TCCCAGCCGd GGGAGCCCCT GCAGCTGCAT 180 GTGGATAAAG CCGTCAGTGG CCTTCGCAGC CTCACCACTC TGCTTCGGGC TCTGGGAGCC 240 CAGa-GG-aG CCATCTCCCC TCCAGATGCG GCCdCAGCTG CdCCACTCCG AACAATCACT 300 GCTGACACTT TCCGCAAACT CddCCGAGdC dACdCCAATT TCCTCCGGGG AAAGCTGAAG 3 60 CTGTACACAG GGGAGGCCTG CAGGACAGGG GACAGATGAG GCGGCGGCTC CCCCCACCAC 420 GCCdCAdCdG TGACAGCCGA GTCCTGGAGA GGdACCdCTd GGAGGCCAAG GAGGCCGAGA 480 AT-TC-CGAC GGGCTGTGCT GA—CACTGCA GC 512 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 72:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 512 par zasad (B) TYP: kwas nukl4ipoDy (c) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: lintODy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 72:

AATGAGAATA dCACdGdCCC AGACACCAAA GTdAAdTdCd ATGCCTGGAA GAGGATGGAG 60 GTCGGGCAGC AGGCCGTAGA AGTCTGGCAG GGCCdGGCCC TGCTGTCGGA AGCdGTCCTG 120 CGGGGCCAGG CCCdGddGGT CAACdCdTCC CAGCCGTGGG AGCCCCTGCA GCTGCATGTG 180 GATA—AGCCG TCAGTGGCCT TCGCAGCCTC ACCACdCTGC dTCGGGCTCT GGGAGCCCAG 240 AAGGAAGCCA TCTCCCCTCC AGATGCGGCC TCAGCdGCTC CACdCCGAAC —ATCACTGCT 300 GACACTTTCC GCA-ACTCTT CCGAGTCTAC dCCAAdTTCC dCCGGGG—AA GCTGAAGCTG 360 TACACAGGGG AGGCCTGCAG GACAGGGGAC AGATGAGGCG GCGGCTCCCC CCACCACGCC 420 TCATCTGTGA CAGCCGAGTC CTGGAGAGGT ACCTCTTGGA GGCCA—GGAG GCCGAGAATA 480 dCACGAC0GG CTGTGCTGAA CACTGCAGCT TG 512 (2) INFORMACJA N SEQ ID NO: 73:

(1) CHARAKTERYSTYK— SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 512 aer zasad (B) TYP: kwas nukleipoDy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (—) TOPOLOGIA: lipioDy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 73:

GAGAATATCA CTGTCCCAGA CACCAAAGTT AATTTCTATG CCTGGAAGAGGATGGAGGTC 60 GGGCAGCAGG CCGTAGAAGT CTGGCAGGGC CTGGCCCTGC TGTCGGAAGC TGTCCTGCGG 120 GGCCAGGCCC TGTTGGTCAA CTCTTCCCAG CCGTGGGAGC CCCTGCAGCT GCATGTGGAT 180 AAAGCCGTCA GTGGCCTTCG CAGCCTCACC ACTCTGCTTC GGGCTCTGGG AGCCCAGA—G 240 GAAGCCATCT CCCCTCCAGA TGCGGCCTCA GCTGCTCCAC TCCGAACAAT CACTGCTGAC 300 ACTTTCCGCA —ACTCTTCCG AGTCTACTCC AATTTCCTCC GGGGAAAGCT GAAGCTGTAC 360 ACAGGGGAGG CCTGCAGGAC AGGGGACAGA TGAGGCGGCG GCTCCCCCCA CCACGCCTCA 420 TCTGTGACAG CCGAGTCCTG GAGAGGTACC TCTTGGAGGC CAAGGAGGCC GAGAATATCA 480 CGACGG0CTG TGCTGAACAC TGCAGCTTGA AT 512 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 74:

(i) CHARAKTERYSTYK— SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 214 par aesed (b) TYP: kwas nukleipomz (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: ltnioDy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 74:

Λ ΛΤΑΤΓΑΓΤΓ. ΤΓΓΓΑΓ.ΑΓΛΓ ΓΔΑ ΔΠΤΤΔ AT ΤΤΓΤΔΤΓ.ΓΓΤ Γ,Γ,Λ ΔΠΔΓ,Γ,ΔΤ Γ,Π Δ Γ,Γ,ΤΓΓ,Γ,Γ, 6(Ί

ΖΛΖ^-! X ZA X XVI X IVJ Λ χ xjx^x*-»x**xaxx

CAGCAGGCCG TAGAAGTCTG GCAGGGCCTG GCCCTGCTGT CGGAAGCTGT CCTGCGGGGC 120 CAGGCCCTGT TGGTCAACTC TTCCCAGCCG TGGGAGCCCC TGCAGCTGCA TGTGGATAAA 180 GCCGTCAGTG GCCTTCGCAG CCTCACCACT CTGCTTCGGG CTCTGGGAGC CCAGAAGGAA 240 GCCATCTCCC CTCCAGATGC GGCCTCAGCT GCTCCACTCC GAACAATCAC TGCTGACACT 300 TTCCGCAAAC TCTTCCGAGT CTACTCCAAT TTCCTCCGGG GAAAGCTG—A GCTGTACACA 360 GGGGAGGCCT GCAGGACAGG GGACAGATGA GGCGGCGGCT CCCCCCACCA CGCCTCATCT 420 GTGACAGCCG AGTCCTGGAG AGGTACCTCT TGGAGGCCAA GGAGGCCGAG —ATATCACGA 480 CGGGCTGTGC TGAA ACATGC AGAOCG A ΑΤΑ AG 512

189 756 (2) INFORMACJA O SQD ID NO: 75:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 512 par zasad (b) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 75:

ATCACTGTCC CAGACACCAA AGTTAATTTC TATGCCTGGA AGAGGATGGA GGTCGGGCAG 60 CAGGCCGTAG AAGTCTGGCA GGGCCTGGCC CTGCTGTCGG AAGCTGTCCT GCGGGGCCAG 120 GCCCTGTTGG TCAACTCTTC CCAGCCGTGG GAGCCCCTGC AGCTGCATGT GGATAAAGCC 180 GTCAGTGGCC TTCGCAGCCT CACCACTCTG CTTCGGGCTC TGGGAGCCCA GAAGGAAGCC 500 ATCTCCCCTC CAGATGCGGC CTCAGCTGCT CCACTCCGAA CAATCACTGC TGACACTTTC ;00 CGCAAACTCT TCCGAGTCTA CTCCAATTTC CTCCGGGGAA AGCTGAAGCT GTACACAGGG ;60 GAGGCCTGCA GGACAGGGGA CAGATGAGGC GGCGGCTCCC CCCACCACGC CTCATCTGTG 420 ACAGCCGAGT CCTGGAGAGG TACCTCTTGG AGGCCAAGGA GGCCGAGAAT ATCACGACGG 480 GCTGTGCTGA ACACTGCAGC TTGAATGAGA AT 512 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 76:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 51; par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 76:

ACTGTCCCAG ACACCAAAGT TAATTTCTAT GCCTGGAAGA GGATGGAGGT CGGGCAGCAG 60 GCCGTAGAAG TCTGGCAGGG CCTGGCCCTG CTGTCGGAAG CTGTCCTGCG GGGCCAGGCC 120 CTGTTGGTCA ACTCTTCCCA GCCGTGGGAG CCCCTGCAGC TGCATGTGGA TAAAGCCGTC 180 AGTGGCCTTC GCAGCCTCAC CACTCTGCTT CGGGCTCTGG GAGCCCAGAA GGAAGCCATC 240 TCCCCTCCAG ATGCGGCCTC AGCTGCTCCA CTCCGAACAA TCACTGCTGA CACTTTCCGC ;00 AAACTCTTCC GAGTCTACTC CAATTTCCTC CGGGGAAAGC TGAAGCTGTA CACAGGGGAG ;60 GCCTGCAGGA CAGGGGACAG ATGAGGCGGC GGCTCCCCCC ACCACGCCTC ATCTGTGACA 050 GCCGAGTCCT GGAGAGGTAC CTCTTGGAGG CCAAGGAGGC CGAGAATATC ACGACGGGCT 480 GTGCTGAACA CTGCAGCTTG AATGAGAATA ATC 51;

(2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 77:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 77:

GTCCCAGACA CCAAAGTTAA TTTCTATGCC TGGAAGAGGA TGGAGGTCGG GCAGCAGGCC 60 GTAGAAGTCT GGCAGGGCCT GGCCCTGCTG TCGGAAGCTG TCCTGCGGGG CCAGGCCCTG 120 TTGGTCAACT CTTCCCAGCC GTGGGAGCCC CTGCAGCTGC ATGTGGATAA AGCCGTCAGT 180 GGCCTTCGCA GCCTCACCAC TCTGCTTCGG GCTCTGGGAG CCCAGAAGGA AGCCATCTCC 500 CCTCCAGATG CGGCCTCAGC TGCTCCACTC CGAACAATCA CTGCTGACAC TTTCCGCAAA ;00 CTCTTCCGAG TCTACTCCAA TTTCCTCCGG GGAAAGCTGA AGCTGTACAC AGGGGAGGCC ;60 TGCAGGACAG GGGACAGATG AGGCGGCGGC TCCCCCCACC ACGCCTCATC TGTGACAGCC 050 GAGTCCTGGA GAGGTACCTC TTGGAGGCCA AGGAGGCCGA GAATATCACG ACGGGCTGTG 480 ctgaacactg cagcttgaat gagaataatc act u;

(2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 78:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 51; par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy

189 756 (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 78\

CCAGACACCA AAGTTAATTT CTATGCCTGG AAGAGGATGG AGGTCGGGCA GCAGGCCGTA GAAGTCTGGC AGGGCCTGGC CCTGCTGTCG GAAGCTGTCC TGCGGGGCCA GGCCCTGTTG GTCAACTCTT CCCAGCCGTG GGAGCCCCTG CAGCTGCATG TGGATAAAGC CGTCAGTGGC CTTCGCAGCC TCACCACTCT GCTTCGGGCT CTGGGAGCCC AGAAGGAAGC CATCTCCCCT CCAGATGCGG CCTCAGCTGC TCCACTCCGA ACAATCACTG CTGACACTTT CCGCAAACTC TTCCGAGTCT ACTCCAATTT CCTCCGGGGA AAGCTGAAGC TGTACACAGG GGAGGCCTGC AGGACAGGGG ACAGATGAGG CGGCGGCTCC CCCCACCACG CCTCATCTGT GACAGCCGAG TCCTGGAGAG GTACCTCTTG GAGGCCAAGG AGGCCGAGAA TATCACGACG GGCTGTGCTG AACACTGCAG CTTGAATGAG AATAATCACT GTC (;) INFORMACJA O SEQ ID NO: 79:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: m par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 79:

GACACCAAAG TTAATTTCTA TGCCTGGAAG AGGATGGAGG TCGGGCAGCA GGCCGTAGAA GTCTGGCAGG GCCTGGCCCT GCTGTCGGAA GCTGTCCTGC GGGGCCAGGC CCTGTTGGTC AACTCTTCCC AGCCGTGGGA GCCCCTGCAG CTGCATGTGG ATAAAGCCGT CAGTGGCCTT CGCAGCCTCA CCACTCTGCT TCGGGCTCTG GGAGCCCAGA AGGAAGCCAT CTCCCCTCCA GATGCGGCCT CAGCTGCTCC ACTCCGAACA ATCACTGCTG ACACTTTCCG CAAACTCTTC CGAGTCTACT CCAATTTCCT CCGGGGAAAG CTGAAGCTGT ACACAGGGGA GGCCTGCAGG ACAGGGGACA GATGAGGCGG CGGCTCCCCC CACCACGCCT CATCTGTGAC AGCCGAGTCC TGGAGAGGTA CCTCTTGGAG GCCAAGGAGG CCGAGAATAT CACGACGGGC TGTGCTGAAC ACTGCAGCTT GAATGAGAAT AATCACTGTC CCA (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: ;0:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 51; par zasad (b) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: ;0:

AGGATGGAGG TCGGGCAGCA GGCCGTAGAA GTCTGGCAGG GCCTGGCCCT GCTGTCGGAA GCTGTCCTGC GGGGCCAGGC CCTGTTGGTC AACTCTTCCC AGCCGTGGGA GCCCCTGCAG CTGCATGTGG ATAAAGCCGT CAGTGGCCTT CGCAGCCTCA CCACTCTGCT TCGGGCTCTG GGAGCCCAGA AGGAAGCCAT CTCCCCTCCA GATGCGGCCT CAGCTGCTCC ACTCCGAACA ATCACTGCTG ACACTTTCCG CAAACTCTTC CGAGTCTACT CCAATTTCCT CCGGGGAAAG CTGAAGCTGT ACACAGGGGA GGCCTGCAGG ACAGGGGACA GATGAGGCGG CGGCTCCCCC CACCACGCCT CATCTGTGAC AGCCGAGTCC TGGAGAGGTA CCTCTTGGAG GCCAAGGAGG CCGAGAATAT CACGACGGGC TGTGCTGAAC ACTGCAGCTT GAATGAGAAT AATCACTGTC CCAGACACCA AAGTTAATTT CTATGCCTGG AAG (;) INFORMACJA O SEQ ID NO: M:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 51; par zasad (b) TYP: kwas nukleinowy (c) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: ;1:

ATGGAGGTCG GGCAGCAGGC CGTAGAAGTC TGGCAGGGCC TGGCCCTGCT GTCGGAAGCT GTCCTGCGGG GCCAGGCCCT GTTGGTCAAC TCTTCCCAGC CGTGGGAGCC CCTGCAGCTG CATGTGGATA AAGCCGTCAG TGGCCTTCGC AGCCTCACCA CTCTGCTTCG GGCTCTGGGA

189 756

GCCCAGAAGG AAGCCATCTC CCCTCCAGAT GCGGCCTCAG CTGCTCCACT CCGAACAATC 240 ACTGCTGACA CTTTCCGCAA ACTCTTCCGA GTCTACTCCA ATTTCCTCCG GGGAAAGCTG 300 AAGCTGTACA CAGGGGAGGC CTGCAGGACA GGGGACAGAT GAGGCGGCGG CTCCCCCCAC 900 CACGCCTCAT 'CTGTGACAGC CGAGTCCTGG AGAGGTACCT CTTGGAGGCC AAGGAGGCCG 420 AGAATATCAC GACGGGCTGT GCTGAACACT GCAGCTTGAA TGAGAATAAT CACTGTCCCA 480 GACACCAAAG TTAATTTCTA TGCCTGGAAG AGG 513 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 82:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (B) TYP: kwas naklaioowż (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: potedynrzy (D) TOPOLOGIA: lioiowy (xi) OPIS SEKWENCJI: mQ ID NO: 82:

GAGGTCGGGC AGCAGGCCGT AGAAGTCTGG CAGGGCCTGG CCCTGCTGTC GGAAGCTGTC 60 CTGCGGGGCC AGGCCCTGTT GGTCAACTCT TCCCAGCCGT GGGAGCCCCT GCAGCTGCAT 120 GTGGATAAAG CCGTCAGTGG CCTTCGCAGC CTCACCACTC TGCTTCGGGC TCTGGGAGCC 180 CAGAAGGAAG CCATCTCCCC TCCAGATGCG GCCTCAGCTG CTCCACTCCG AACAATCACT 240 GCTGACACTT TCCGCAAACT CTTCCGAGTC TACTCCAATT TCCTCCGGGG AAAGCTGAAG 300 CTGTACACAG GGGAGGCCTG CAGGACAGGG GACAGATGAG GCGGCGGCTC CCCCCACCAC 900 GCCTCATCTG TGACAGCCGA GTCCTGGAGA GGTACCTCTT GGAGGCCAAG GAGGCCGAGA 420 ATATCACGAC GGGCTGTGCT GAACACTGCA GCTTGAATGA GAATAATCAC TGTCCCAGAC 480 ACCAAAGTTA ATTTCTATGC CTGGAAGAGG ATG 513 (2) INFORMACJA O mQ ID NO: 83:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (B) TYP: kwas oaklaioowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: lioiowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 83:

GTCGGGCAGC AGGCCGTAGA AGTCTGGCAG GGCCTGGCCC TGCTGTCGGA AGCTGTCCTG 60 CGGGGCCAGG CCCTGTTGGT CAACTCTTCC CAGCCGTGGG AGCCCCTGCA GCTGCATGTG 120 GATAAAGCCG TCAGTGGCCT TCGCAGCCTC ACCACTCTGC TTCGGGCTCT GGGAGCCCAG 180 AAGGAAGCCA TCTCCCCTCC AGATGCGGCC TCAGCTGCTC CACTCCGAAC AATCACTGCT 240 GACACTTTCC GCAAACTCTT CCGAGTCTAC TCCAATTTCC TCCGGGGAAA GCTGAAGCTG 300 TACACAGGGG AGGCCTGCAG GACAGGGGAC AGATGAGGCG GCGGCTCCCC CCACCACGCC 360 TCATCTGTGA CAGCCGAGTC CTGGAGAGGT ACCTCTTGGA GGCCAAGGAG GCCGAGAATA 420 TCACGACGGG CTGTGCTGAA CACTGCAGCT TGAATGAGAA TAATCACTGT CCCAGACACC 480 AAAGTTAATT TCTATGCCTG GAAGAGGATG GAG 513 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 84:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (b) TYP: kwas naklaioomy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: mQ ID NO: 84:

CAGGCCCTGT TGGTCAACTC TTCCCAGCCG TGGGAGCCCC TGCAGCTGCA TGTGGATAAA 60 GCCGTCAGTG GCCTTCGCAG CCTCACCACT CTGCTTCGGG CTCTGGGAGC CCAGAAGGAA 120 GCCATCTCCC CTCCAGATGC GGCCTCAGCT GCTCCAC1 CC GAACAA1 8AC lut i uACACT 180 TTCCGCAAAC TCTTCCGAGT CTACTCCAAT TTCCTCCGGG GAAAGCTGAA GCTGTACACA 240 GGGGAGGCCT GCAGGACAGG GGACAGATGA GGCGGCGGCT CCCCCCACCA CGCCTCATCT 300 GTGACAGCCG AGTCCTGGAG AGGTACCTCT TGGAGGCCAA GGAGGCCGAG AATATCACGA 900 CGGGCTGTGC TGAACACTGC AGCTTGAATG AGAATAATCA CTGTCCCAGA CACCAAAGTT 420 AATTTCTATG CCTGGAAGAG GATGGAGGTC GGGCAGCAGG CCGTAGAAGT CTGGCAGGGC 480 CTGGCCCTGC TGTCGGAAGC TGTCCTGCGG GGC 513

189 756 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 85:

(Ϊ) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ TD NO: 85:

GCCCTGTTGG TCAACTCTTC CCAGCCGTGG GAGCCCCTGC AGCTGCATGT GGATAAAGCC GTCAGTGGCC TTCGCAGCCT CACCACTCTG CTTCGGGCTC TGGGAGCCCA GAAGGAAGCC ATCTCCCCTC CAGATGCGGC CTCAGCTGCT CCACTCCGAA CAATCACTGC TGACACTTTC CGCAAACTCT TCCGAGTCTA CTCCAATTTC CTCCGGGGAA AGCTGAAGCT GTACACAGGG GAGGCCTGCA GGACAGGGGA CAGATGAGGC GGCGGCTCCC CCCACCACGC CTCATCTGTG ACAGCCGAGT CCTGGAGAGG TACCTCTTGG AGGCCAAGGA GGCCGAGAAT ATCACGACGG gctgtgctga acactgcagc ttgaatgaga ataatcactg tcccagacac caaagttaat ttctatgcct ggaagaggat ggaggtcggg cagcaggccg tagaagtctg gcagggcctg gccctgctgt cggaagctgt cctgcggggc CAG (2) INFORMACJA O SEQ TD NO: 8;:

(;) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ TD NO: 8;:

atgttggtaa aatcttccca gacgtgggag caaatgcagc tgaatgtgga taaagaagtc AGTGGCCTTC GCAGCCTCAC CACTATGCTT AGGGCTCTGG GAGAACAGAA GGAAGCCATC tcccctcaag atgaggccta agctgataca atacgaaaaa tcactgctga caatttcaga AAAATCTTAC GAGTCTACTA CAATTTCCTC CGGGGAAAGA TGAAGCTGTA AAAAGGGGAG GACTGCAGGA CAGGGGAAAG ATGAGGCGGC GGCTCAACCA ACCAAGCATC ATCTGTGAAA GCCGAGTCCT GGAGAGGTAA CTCTTGGAGG CCAAGGAGGC CGAGAATATA AAGAAGGGAT gtgctgaaaa ctgaagcttg aatgagaata ataactgtcc cagacaaaaa agttaattta TATGCATGGA AGAGGATGGA GGTCGGGCAG CAGGCAGTAG AAGTATGGCA GGGAATGGAC CTGATGTAGG AAGCTGTCCT GCGGGGCCAG GCA (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 87:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (a) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ TD NO: 87:

ttggtcaaat cttcccagcc gtgggagaac ctgaagctga atgtggataa agacgtcagt GGCCTTAGCA GCATCAACAA TCTGCTTCGG GCTATGGGAG CCCAGAAGGA AGACATCTAA ACTCCAGATG AGGACTCAGC TGCTCCACTC CGAACAATCA CTGCTGACAC TTTAAGCAAA CTCTTCCGAG TCTACTCCAA TTTCCTCCGG GGAAAGCTGA AGCTGTACAC AGGGGAGGCA TGCAGGACAG GGGACAGATG AGGCGGCGGC TCCCCCAACC ACGCCTCATC TGTGACAGAC gagtcatgga gaggtacctc ttggaggcca aggaggacga gaatatcacg aagggctgtg CTGAACACTG CAGATTGAAT GAGAATAATC ACTGTCAAAG ACACCAAAGT TAATTTCTAT GCCTGGAAGA GGATGGAGGT CGGGCAGCAG GCCGTAGAAG TCTGGAAGGG AATGGCCCTG CTGTCGGAAG ATGTACTGCG GGGCCAGGCC ATG (2) INFORMACJA O SEQ TD NO: 88:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (b) TYP: kwas nukleinowy (A) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy

189 756 (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 88:

GTCAACTCTT CCCAGCCGTG GGAGCCCCTG CAGCTGCATG TGGATAAAGC CGTCAGTGGC 60 CTTCGCAGCC TCACCACTCT GCTTCGGGCT CTGGGAGCCC AGAAGGAAGC CATCTCCCCT 120 CCAGATGCGG CCTCAGCTGC TCCACTCCGA ACAATCACTG CTGACACTTT CCGCAAACTC 180 TTCCGAGTCT ACTCCAATTT CCTCCGGGGA AAGCTGAAGC TGTACACAGG GGAGGCCTGC 240 AGGACAGGGG ACAGATGAGG CGGCGGCTCC CCCCACCACG CCTCATCTGT GACAGCCGAG 300 TCCTGGAGAG GTACCTCTTG GAGGCCAAGG AGGCCGAGAA TATCACGACG GGCTGTGCTG 360 AACACTGCAG CTTGAATGAG AATAATCACT GTCCCAGACA CCAAAGTTAA TTTCTATGCC 070 TGGAAGAGGA TGGAGGTCGG GCAGCAGGCC GTAGAAGTCT GGCAGGGCCT GGCCCTGCTG 480 TCGGAAGCTG TCCTGCGGGG CCAGGCCCTG TTG 5 5 3 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 89:

(ί) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: m par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 89:

AACTCTTCCC AGCCGTGGGA GCCCCTGCAG CTGCATGTGG ATAAAGCCGT CAGTGGCCTT 60 CGCAGCCTCA CCACTCTGCT TCGGGCTCTG GGAGCCCAGA AGGAAGCCAT CTCCCCTCCA 120 GATGCGGCCT CAGCTGCTCC ACTCCGAACA ATCACTGCTG ACACTTTCCG CAAACTCTTC 180 CGAGTCTACT CCAATTTCCT CCGGGGAAAG CTGAAGCTGT ACACAGGGGA GGCCTGCAGG 200 ACAGGGGACA GATGAGGCGG CGGCTCCCCC CACCACGCCT CATCTGTGAC AGCCGAGTCC 300 TGGAGAGGTA CCTCTTGGAG GCCAAGGAGG CCGAGAATAT CACGACGGGC TGTGCTGAAC 360 ACTGCAGCTT GAATGAGAAT AATCACTGTC CCAGACACCA AAGTTAATTT CTATGCCTGG 070 AAGAGGATGG AGGTCGGGCA GCAGGCCGTA GAAGTCTGGC AGGGCCTGGC CCTGCTGTCG 480 GAAGCTGTCC TGCGGGGCCA GGCCCTGTTG GTC 513 (7) INFORMACJA O SEQ ID NO: 90:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 90:

TCTTCCCAGC CGTGGGAGCC CCTGCAGCTG CATGTGGATA AAGCCGTCAG TGGCCTTCGC 60 AGCCTCACCA CTCTGCTTCG GGCTCTGGGA GCCCAGAAGG AAGCCATCTC CCCTCCAGAT 120 GCGGCCTCAG CTGCTCCACT CCGAACAATC ACTGCTGACA CTTTCCGCAA ACTCTTCCGA 180 GTCTACTCCA ATTTCCTCCG GGGAAAGCTG AAGCTGTACA CAGGGGAGGC CTGCAGGACA 240 GGGGACAGAT GAGGCGGCGG CTCCCCCCAC CACGCCTCAT CTGTGACAGC CGAGTCCTGG 300 AGAGGTACCT CTTGGAGGCC AAGGAGGCCG AGAATATCAC GACGGGCTGT GCTGAACACT 360 GCAGCTTGAA TGAGAATAAT CACTGTCCCA GACACCAAAG TTAATTTCTA TGCCTGGAAG 470 AGGATGGAGG TCGGGCAGCA GGCCGTAGAA GTCTGGCAGG GCCTGGCCCT GCTGTCGGAA 480 GCTGTCCTGC GGGGCCAGGC CCTGTTGGTC AAC 513 (7) INFORMACJA O SEQ ID NO: 91:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: m par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 91:

TCCCAGCCGT GGGAGCCCCT GCAGCTGCAT GTGGATAAAG CCGTCAGTGG CCTTCGCAGC 60 CTCACCACTC TGCTTCGGGC TCTGGGAGCC CAGAAGGAAG CCATCTCCCC TCCAGATGCG 120 GCCTCAGCTG CTCCACTCCG AACAATCACT GCTGACACTT TCCGCAAACT CTTCCGAGTC 180

189 756

TACTCCAATT TCCTCCGGGG AAAGCTGAAG CTGTACACAG GGGAGGCCTG CAGGACAGGG m GACAGATGAG GCGGCGGCTC CCCCCACCAC GCCTCATCTG TGACAGCCGA GTCCTGGAGA 300 GGTACCTCTT GGAGGCCAAG GAGGCCGAGA ATATCACGAC GGGCTGTGCT GAACACTGCA 0;0 GCTTGAATGA GAATAATCAC TGTCCCAGAC ACCAAAGTTA ATTTCTATGC CTGGAAGAGG m ATGGAGGTCG GGCAGCAGGC CGTAGAAGTC TGGCAGGGCC TGGCCCTGCT GTCGGAAGCT 485 GTCCTGCGGG GCCAGGCCCT GTTGGTCAAC TCT 551 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 92:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 92:

CAGCCGTGGG AGCCCCTGCA GCTGCATGTG GATAAAGCCG TCAGTGGCCT TCGCAGCCTC ;0 ACCACTCTGC TTCGGGCTCT GGGAGCCCAG AAGGAAGCCA TCTCCCCTCC AGATGCGGCC 120 TCAGCTGCTC CACTCCGAAC AATCACTGCT GACACTTTCC GCAAACTCTT CCGAGTCTAC 180 TCCAATTTCC TCCGGGGAAA GCTGAAGCTG TACACAGGGG AGGCCTGCAG GACAGGGGAC m AGATGAGGCG GCGGCTCCCC CCACCACGCC TCATCTGTGA CAGCCGAGTC CTGGAGAGGT 300 ACCTCTTGGA GGCCAAGGAG GCCGAGAATA TCACGACGGG CTGTGCTGAA CACTGCAGCT 030 TGAATGAGAA TAATCACTGT CCCAGACACC AAAGTTAATT TCTATGCCTG GAAGAGGATG m GAGGTCGGGC AGCAGGCCGT AGAAGTCTGG CAGGGCCTGG CCCTGCTGTC GGAAGCTGTC 485 CTGCGGGGCC AGGCCCTGTT GGTCAACTCT TCC 5 5 3 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 93:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (b) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 93:

CCGTGGGAGC CCCTGCAGCT GCATGTGGAT AAAGCCGTCA GTGGCCTTCG CAGCCTCACC ;0 ACTCTGCTTC GGGCTCTGGG AGCCCAGAAG GAAGCCATCT CCCCTCCAGA TGCGGCCTCA 120 GCTGCTCCAC TCCGAACAAT CACTGCTGAC ACTTTCCGCA AACTCTTCCG AGTCTACTCC 180 AATTTCCTCC GGGGAAAGCT GAAGCTGTAC ACAGGGGAGG CCTGCAGGAC AGGGGACAGA m TGAGGCGGCG GCTCCCCCCA CCACGCCTCA TCTGTGACAG CCGAGTCCTG GAGAGGTACC 300 TCTTGGAGGC CAAGGAGGCC GAGAATATCA CGACGGGCTG TGCTGAACAC TGCAGCTTGA 3;0 ATGAGAATAA TCACTGTCCC AGACACCAAA GTTAATTTCT ATGCCTGGAA GAGGATGGAG m GTCGGGCAGC AGGCCGTAGA AGTCTGGCAG GGCCTGGCCC TGCTGTCGGA AGCTGTCCTG 485 CGGGGCCAGG CCCTGTTGGT CAACTCTTCC CAG 5 51 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 9;:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 9;:

TGGGAGCCCC TGCAGCTGCA TGTGGATAAA GCCGTCAGTG GCCTTCGCAG CCTCACCACT ;0 CTGCTTCGGG CTCTGGGAGC CCAGAAGGAA GCCA i ciCcCciuAuAI Gc GGCCi CAGCT HO GCTCCACTCC GAACAATCAC TGCTGACACT TTCCGCAAAC TCTTCCGAGT CTACTCCAAT 180 TTCCTCCGGG GAAAGCTGAA GCTGTACACA GGGGAGGCCT GCAGGACAGG GGACAGATGA m GGCGGCGGCT CCCCCCACCA CGCCTCATCT GTGACAGCCG AGTCCTGGAG AGGTACCTCT 300 TGGAGGCCAA GGAGGCCGAG AATATCACGA CGGGCTGTGC TGAACACTGC AGCTTGAATG 3;0 AGAATAATCA CTGTCCCAGA CACCAAAGTT AATTTCTATG CCTGGAAGAG GATGGAGGTC m GGGCAGCAGG CCGTAGAAGT CTGGCAGGGC CTGGCCCTGC TGTCGGAAGC TGTCCTGCGG ;80 GGCCAGGCCC TGTTGGTCAA CTCTTCCCAG CCG 5 H

189 756 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 95:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: lioiowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 95:

GAGCCCCTGC AGCTGCATGT GGATAAAGCC GTCAGTGGCC TTCGCAGCCT CACCACTCTG 60 CTTCGGGCTC TGGGAGCCCA GAAGGAAGCC ATCTCCCCTC CAGATGCGGC CTCAGCTGCT 120 CCACTCCGAA CAATCACTGC TGACACTTTC CGCAAACTCT TCCGAGTCTA CTCCAATTTC 180 CTCCGGGGAA AGCTGAAGCT GTACACAGGG GAGGCCTGCA GGACAGGGGA CAGATGAGGC 240 GGCGGCTCCC CCCACCACGC CTCATCTGTG ACAGCCGAGT CCTGGAGAGG TACCTCTTGG 300 AGGCCAAGGA GGCCGAGAAT ATCACGACGG GCTGTGCTGA ACACTGCAGC TTGAATGAGA 900 ATAATCACTG TCCCAGACAC CAAAGTTAAT TTCTATGCCT GGAAGAGGAT GGAGGTCGGG 420 CAGCAGGCCG TAGAAGTCTG GCAGGGCCTG GCCCTGCTGT CGGAAGCTGT CCTGCGGGGC 480 CAGGCCCTGT TGGTCAACTC TTCCCAGCCG TGG 513 (2) INFORMACJA O mQ ID NO: 96:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (B) TYP: kwas ouklaioomż (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: lioiowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 96:

CTTCGGGCTC TGGGAGCCCA GAAGGAAGCC ATCTCCCCTC CAGATGCGGC CTCAGCTGCT 60 CCACTCCGAA CAATCACTGC TGACACTTTC CGCAAACTCT TCCGAGTCTA CTCCAATTTC 120 CTCCGGGGAA AGCTGAAGCT GTACACAGGG GAGGCCTGCA GGACAGGGGA CAGATGAGGC 180 GGCGGCTCCC CCCACCACGC CTCATCTGTG ACAGCCGAGT CCTGGAGAGG TACCTCTTGG 240 AGGCCAAGGA GGCCGAGAAT ATCACGACGG GCTGTGCTGA ACACTGCAGC TTGAATGAGA 300 ATAATCACTG TCCCAGACAC CAAAGTTAAT TTCTATGCCT GGAAGAGGAT GGAGGTCGGG 360 CAGCAGGCCG TAGAAGTCTG GCAGGGCCTG GCCCTGCTGT CGGAAGCTGT CCTGCGGGGC 420 CAGGCCCTGT TGGTCAACTC TTCCCAGCCG TGGGAGCCCC TGCAGCTGCA TGTGGATAAA 480 GCCGTCAGTG GCCTTCGCAG CCTCACCACT CTG 513 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 97:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (B) TYP: kąąye oaklainomz (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: potadzoczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEÓ ID NO: 97:

CGGGCTCTGG GAGCCCAGAA GGAAGCCATC TCCCCTCCAG ATGCGGCCTC AGCTGCTCCA 60 CTCCGAACAA TCACTGCTGA CACTTTCCGC AAACTCTTCC GAGTCTACTC CAATTTCCTC 122 CGGGGAAAGC TGAAGCTGTA CACAGGGGAG GCCTGCAGGA CAGGGGACAG ATGAGGCGGC 180 GGCTCCCCCC ACCACGCCTC ATCTGTGACA GCCGAGTCCT GGAGAGGTAC CTCTTGGAGG 240 CCAAGGAGGC CGAGAATATC ACGACGGGCT GTGCTGAACA CTGCAGCTTG AATGAGAATA 300 ATCACTGTCC CAGACACCAA AGTTAATTTC TATGCCTGGA AGAGGATGGA GGTCGGGCAG 900 CAGGCCGTAG AAGTCTGGCA GGGCCTGGCC CTGCTGTCGG AAGCTGTCCT GCGGGGCCAG 420 GCCCTGTTGG TCAACTCTTC CCAGCCGTGG GAGCCCCTGC AGCTGCATGT GGATAAAGCC 480 GTCAGTGGCC TTCGCAGCCT CACCACTCTG CTT 513 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 98:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (B) TYP: kwas oakieioomż (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: potedzoczy

189 756 (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 98:

GCTCTGGGAG CCCAGAAGGA AGCCATCTCC CCTCCAGATG CGGCCTCAGC TGCTCCACTC 60 CGAACAATCA CTGCTGACAC TTTCCGCAAA CTCTTCCGAG TCTACTCCAA TTTCCTCCGG 120 GGAAAGCTGA AGCTGTACAC AGGGGAGGCC TGCAGGACAG GGGACAGATG AGGCGGCGGC 180 TCCCCCCACC ACGCCTCATC TGTGACAGCC GAGTCCTGGA GAGGTACCTC TTGGAGGCCA 740 AGGAGGCCGA GAATATCACG ACGGGCTGTG CTGAACACTG CAGCTTGAAT GAGAATAATC 300 ACTGTCCCAG ACACCAAAGT TAATTTCTAT GCCTGGAAGA GGATGGAGGT CGGGCAGCAG 360 GCCGTAGAAG TCTGGCAGGG CCTGGCCCTG CTGTCGGAAG CTGTCCTGCG GGGCCAGGCC 420 CTGTTGGTCA ACTCTTCCCA GCCGTGGGAG CCCCTGCAGC TGCATGTGGA TAAAGCCGTC 080 AGTGGCCTTC GCAGCCTCAC CACTCTGCTT CGG 513 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 99:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 99:

CTGGGAGCCC AGAAGGAAGC CATCTCCCCT CCAGATGCGG CCTCAGCTGC TCCACTCCGA 60 ACAATCACTG CTGACACTTT CCGCAAACTC TTCCGAGTCT ACTCCAATTT CCTCCGGGGA 120 AAGCTGAAGC TGTACACAGG GGAGGCCTGC AGGACAGGGG ACAGATGAGG CGGCGGCTCC 180 CCCCACCACG CCTCATCTGT GACAGCCGAG TCCTGGAGAG GTACCTCTTG GAGGCCAAGG 200 AGGCCGAGAA TATCACGACG GGCTGTGCTG AACACTGCAG CTTGAATGAG AATAATCACT 300 GTCCCAGACA CCAAAGTTAA TTTCTATGCC TGGAAGAGGA TGGAGGTCGG GCAGCAGGCC 360 GTAGAAGTCT GGCAGGGCCT GGCCCTGCTG TCGGAAGCTG TCCTGCGGGG CCAGGCCCTG 020 TTGGTCAACT CTTCCCAGCC GTGGGAGCCC CTGCAGCTGC ATGTGGATAA AGCCGTCAGT 480 GGCCTTCGCA GCCTCACCAC TCTGCTTCGG GTC 513 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 100:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 100:

GGAGCCCAGA AGGAAGCCAT CTCCCCTCCA GATGCGGCCT CAGCTGCTCC ACTCCGAACA 60 ATCACTGCTG ACACTTTCCG CAAACTCTTC CGAGTCTACT CCAATTTCCT CCGGGGAAAG 120 CTGAAGCTGT ACACAGGGGA GGCCTGCAGG ACAGGGGACA GATGAGGCGG CGGCTCCCCC 180 CACCACGCCT CATCTGTGAC AGCCGAGTCC TGGAGAGGTA CCTCTTGGAG GCCAAGGAGG 240 CCGAGAATAT CACGACGGGC TGTGCTGAAC ACTGCAGCTT GAATGAGAAT AATCACTGTC 300 CCAGACACCA AAGTTAATTT CTATGCCTGG AAGAGGATGG AGGTCGGGCA GCAGGCCGTA 360 GAAGTCTGGC AGGGCCTGGC CCTGCTGTCG GAAGCTGTCC TGCGGGGCCA GGCCCTGTTG 070 GTCAACTCTT CCCAGCCGTG GGAGCCCCTG CAGCTGCATG TGGATAAAGC CGTCAGTGGC 080 CTTCGCAGCC TCACCACTCT GCTTCGGGCT CTG 513 (7) INFORMACJA O SEQ ID NO: 101:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (c) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (d) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 101:

GCCCAGAAGG AAGCCATCTC CCCTCCAGAT GCGGCCTCAG CTGCTCCACT CCGAACAATC 60 ACTGCTGACA CTTTCCGCAA ACTCTTCCGA GTCTACTCCA ATTTCCTCCG GGGAAAGCTG 120 AAGCTGTACA CAGGGGAGGC CTGCAGGACA GGGGACAGAT GAGGCGGCGG CTCCCCCCAC 180

189 756

CACGCCTCAT CTGTGACAGC CGAGTCCTGG AGAGGTACCT CTTGGAGGCC AAGGAGGCCG 240 AGAATATCAC GACGGGCTGT GCTGAACACT GCAGCTTGAA TGAGAATAAT CACTGTCCCA 300 GACACCAAAG TTAATTTCTA TGCCTGGAAG AGGATGGAGG TCGGGCAGCA GGCCGTAGAA 360 GTCTGGCAGG GCCTGGCCCT GCTGTCGGAA GCTGTCCTGC GGGGCCAGGC CCTGTTGGTC 420 AACTCTTCCC AGCCGTGGGA GCCCCTGCAG CTGCATGTGG ATAAAGCCGT CAGTGGCCTT 480 CGCAGCCTCA CCACTCTGCT TCGGGCTCTG GGA 513 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 102:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 102:

CAGAAGGAAG CCATCTCCCC TCCAGATGCG GCCTCAGCTG CTCCACTCCG AACAATCACT 60 GCTGACACTT TCCGCAAACT CTTCCGAGTC TACTCCAATT TCCTCCGGGG AAAGCTGAAG 120 CTGTACACAG GGGAGGCCTG CAGGACAGGG GACAGATGAG GCGGCGGCTC CCCCCACCAC 180 GCCTCATCTG TGACAGCCGA GTCCTGGAGA GGTACCTCTT GGAGGCCAAG GAGGCCGAGA 240 ATATCACGAC GGGCTGTGCT GAACACTGCA GCTTGAATGA GAATAATCAC TGTCCCAGAC 300 ACCAAAGTTA ATTTCTATGC CTGGAAGAGG ATGGAGGTCG GGCAGCAGGC CGTAGAAGTC 360 TGGCAGGGCC TGGCCCTGCT GTCGGAAGCT GTCCTGCGGG GCCAGGCCCT GTTGGTCAAC 420 TCTTCCCAGC CGTGGGAGCC CCTGCAGCTG CATGTGGATA AAGCCGTCAG TGGCCTTCGC 480 AGCCTC ACC A CTCTGCTTCG GGCTCTGGG A GCC 513 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 103:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 103:

AAGGAAGCCA TCTCCCCTCC AGATGCGGCC TCAGCTGCTC CACTCCGAAC AATCACTGCT 60 GACACTTTCC GCAAACTCTT CCGAGTCTAC TCCAATTTCC TCCGGGGAAA GCTGAAGCTG 120 TACACAGGGG AGGCCTGCAG GACAGGGGAC AGATGAGGCG GCGGCTCCCC CCACCACGCC 180 TCATCTGTGA CAGCCGAGTC CTGGAGAGGT ACCTCTTGGA GGCCAAGGAG GCCGAGAATA 240 TCACGACGGG CTGTGCTGAA CACTGCAGCT TGAATGAGAA TAATCACTGT CCCAGACACC 300 AAAGTTAATT TCTATGCCTG GAAGAGGATG GAGGTCGGGC AGCAGGCCGT AGAAGTCTGG 360 CAGGGCCTGG CCCTGCTGTC GGAAGCTGTC CTGCGGGGCC AGGCCCTGTT GGTCAACTCT 420 TCCCAGCCGT GGGAGCCCCT GCAGCTGCAT GTGGATAAAG CCGTCAGTGG CCTTCGCAGC 480 CTCACCACTC TGCTTCGGGC TCTGGGAGCC CAG 513 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 104:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 104:

GAAGCCATCT CCCCTCCAGA TGCGGCCTCA GCTGCTCCAC TCCGAACAAT CACTGCTGAC 60 ACTTTCCGCA AACTC1TCCG AGTC1 AC 1 CC AArTTCCTCC GGGGAAAGC l <jAA(jC i GTAC 120 ACAGGGGAGG CCTGCAGGAC AGGGGACAGA TGAGGCGGCGGCTCCCCCCA CCACGCCTCA 180 TCTGTGACAG CCGAGTCCTG GAGAGGTACC TCTTGGAGGC CAAGGAGGCC GAGAATATCA 240 CGACGGGCTG TGCTGAACAC TGCAGCTTGA ATGAGAATAA TCACTGTCCC AGACACCAAA 300 GTTAATTTCT ATGCCTGGAA GAGGATGGAG GTCGGGCAGC AGGCCGTAGA AGTCTGGCAG 360 GGCCTGGCCC TGCTGTCGGA AGCTGTCCTG CGGGGCCAGG CCCTGTTGGT CAACTCTTCC 420 CAGCCGTGGG AGCCCCTGCA GCTGCATGTG GATAAAGCCG TCAGTGGCCT TCGCAGCCTC 480 ACCACTCTGC TTCGGGCTCT GGGAGCCCAG AAG 513

189 756 ((2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 105:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 105:

GCCATCTCCC CTCCAGATGC GGCCTCAGCT GCTCCACTCC GAACAATCAC TGCTGACACT 60 TTCCGCAAAC TCTTCCGAGT CTACTCCAAT TTCCTCCGGG GAAAGCTGAA GCTGTACACA 120 GGGGAGGCCT GCAGGACAGG GGACAGATGA GGCGGCGGCT CCCCCCACCA CGCCTCATCT 180 GTGACAGCCG AGTCCTGGAG AGGTACCTCT TGGAGGCCAA GGAGGCCGAG AATATCACGA 240 CGGGCTGTGC TGAACACTGC AGCTTGAATG AGAATAATCA CTGTCCCAGA CACCAAAGTT 300 AATTTCTATG CCTGGAAGAG GATGGAGGTC GGGCAGCAGG CCGTAGAAGT CTGGCAGGGC 360 CTGGCCCTGC TGTCGGAAGC TGTCCTGCGG GGCCAGGCCC TGTTGGTCAA CTCTTCCCAG 420 CCGTGGGAGC CCCTGCAGCT GCATGTGGAT AAAGCCGTCA GTGGCCTTCG CAGCCTCACC 480 ACTCTGCTTC GGGCTCTGGG AGCCCAGAAG GAA 513 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 106:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 106:

ATCTCCCCTC CAGATGCGGC CTCAGCTGCT CCACTCCGAA CAATCACTGC TGACACTTTC 60 CGCAAACTCT TCCGAGTCTA CTCCAATTTC CTCCGGGGAA AGCTGAAGCT GTACACAGGG 120 GAGGCCTGCA GGACAGGGGA CAGATGAGGC GGCGGCTCCC CCCACCACGC CTCATCTGTG 180 ACAGCCGAGT CCTGGAGAGG TACCTCTTGG AGGCCAAGGA GGCCGAGAAT ATCACGACGG 240 GCTGTGCTGA ACACTGCAGC TTGAATGAGA ATAATCACTG TCCCAGACAC CAAAGTTAAT 300 TTCTATGCCT GGAAGAGGAT GGAGGTCGGG CAGCAGGCCG TAGAAGTCTG GCAGGGCCTG 360 GCCCTGCTGT CGGAAGCTGT CCTGCGGGGC CAGGCCCTGT TGGTCAACTC TTCCCAGCCG 420 TGGGAGCCCC TGCAGCTGCA TGTGGATAAA GCCGTCAGTG GCCTTCGCAG CCTCACCACT 480 CTGCTTCGGG CTCTGGGAGC CCAGAAGGAA GCC 513 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 107:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 107:

TCCCCTCCAG ATGCGGCCTC AGCTGCTCCA CTCCGAACAA TCACTGCTGA CACTTTCCGC 60 AAACTCTTCC GAGTCTACTC CAATTTCCTC CGGGGAAAGC TGAAGCTGTA CACAGGGGAG 120 GCCTGCAGGA CAGGGGACAG ATGAGGCGGC GGCTCCCCCC ACCACGCCTC ATCTGTGACA 180 GCCGAGTCCT GGAGAGGTAC CTCTTGGAGG CCAAGGAGGC CGAGAATATC ACGACGGGCT 240 GTGCTGAACA CTGCAGCTTG AATGAGAATA ATCACTGTCC CAGACACCAA AGTTAATTTC 300 TATGCCTGGA AGAGGATGGA GGTCGGGCAG CAGGCCGTAG AAGTCTGGCA GGGCCTGGCC 360 CTGCTGTCGG AAGCTGTCCT GCGGGGCCAG GCCCTGTTGG TCAACTCTTC CCAGCCGTGG 420 GAGCCCCTGC AGCTGCATGT GGATAAAGCC GTCAGTGGCC TTCGCAGCCT CACCACTCTG 480 CTTCGGGCTC TGGGAGCCCA GAAGGAAGCC ATC 513 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 108:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy

189 756 (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 10;:

CCTCCAGATG CGGCCTCAGC TGCTCCACTC CGAACAATCA CTGCTGACAC TTTCCGCAAA 6(0 CTCTTCCGAG TCTACTCCAA TTTCCTCCGG GGAAAGCTGA AGCTGTACAC AGGGGAGGCC i20 TGCAGGACAG GGGACAGATG AGGCGGCGGC TCCCCCCACC ACGCCTCATC TGTGACAGCC 1 ;0 GAGTCCTGGA GAGGTACCTC TTGGAGGCCA AGGAGGCCGA GAATATCACG ACGGGCTGTG 540 CTGAACACTG CAGCTTGAAT GAGAATAATC ACTGTCCCAG ACACCAAAGT TAATTTCTAT ;00 GCCTGGAAGA GGATGGAGGT CGGGCAGCAG GCCGTAGAAG TCTGGCAGGG CCTGGCCCTG ;60 CTGTCGGAAG CTGTCCTGCG GGGCCAGGCC CTGTTGGTCA ACTCTTCCCA GCCGTGGGAG 4;0 CCCCTGCAGC TGCATGTGGA TAAAGCCGTC AGTGGCCTTC GCAGCCTCAC CACTCTGCTT 4;0 CGGGCTCTGG GAGCCCAGAA GGAAGCCATC TCC 5 U

¢) INFORMACJA O SEQ ID NO: 109:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: m par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 109:

CCAGATGCGG CCTCAGCTGC TCCACTCCGA ACAATCACTG CTGACACTTT CCGCAAACTC 60 TTCCGAGTCT ACTCCAATTT CCTCCGGGGA AAGCTGAAGC TGTACACAGG GGAGGCCTGC 1;0 AGGACAGGGG ACAGATGAGG CGGCGGCTCC CCCCACCACG CCTCATCTGT GACAGCCGAG 1 ;0 TCCTGGAGAG GTACCTCTTG GAGGCCAAGG AGGCCGAGAA TATCACGACG GGCTGTGCTG ;40 AACACTGCAG CTTGAATGAG AATAATCACT GTCCCAGACA CCAAAGTTAA TTTCTATGCC ;00 TGGAAGAGGA TGGAGGTCGG GCAGCAGGCC GTAGAAGTCT GGCAGGGCCT GGCCCTGCTG ;60 TCGGAAGCTG TCCTGCGGGG CCAGGCCCTG TTGGTCAACT CTTCCCAGCC GTGGGAGCCC 4;0 CTGCAGCTGC ATGTGGATAA AGCCGTCAGT GGCCTTCGCA GCCTCACCAC TCTGCTTCGG 4;0 GCTCTGGGAG CCCAGAAGGA AGCCATCTCC CCT 51;

(;) INFORMACJA O SEQ ID NO: 110:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 51; par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 110:

GATGCGGCCT CAGCTGCTCC ACTCCGAACA ATCACTGCTG ACACTTTCCG CAAACTCTTC 60 CGAGTCTACT CCAATTTCCT CCGGGGAAAG CTGAAGCTGT ACACAGGGGA GGCCTGCAGG 1K ACAGGGGACA GATGAGGCGG CGGCTCCCCC CACCACGCCT CATCTGTGAC AGCCGAGTCC 1 ;0 TGGAGAGGTA CCTCTTGGAG GCCAAGGAGG CCGAGAATAT CACGACGGGC TGTGCTGAAC 270 ACTGCAGCTT GAATGAGAAT AATCACTGTC CCAGACACCA AAGTTAATTT CTATGCCTGG ;00 AAGAGGATGG AGGTCGGGCA GCAGGCCGTA GAAGTCTGGC AGGGCCTGGC CCTGCTGTCG ;60 GAAGCTGTCC TGCGGGGCCA GGCCCTGTTG GTCAACTCTT CCCAGCCGTG GGAGCCCCTG 450 CAGCTGCATG TGGATAAAGC CGTCAGTGGC CTTCGCAGCC TCACCACTCT GCTTCGGGCT 4;0 CTGGGAGCCC AGAAGGAAGC CATCTCCCCT CCA 51;

(2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 111:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

z a \ τ>τ ττηηόό, cn ~~~ „„„„j υυυυινον. jij pai zaoau (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 111:

GCGGCCTCAG CTGCTCCACT CCGAACAATC ACTGCTGACA CTTTCCGCAA ACTCTTCCGA 6(0 GTCTACTCCA ATTTCCTCCG GGGAAAGCTG AAGCTGTACA CAGGGGAGGC CTGCAGGACA 1K

189 756

GGGGACAGAT GAGGCGGCGG CTCCCCCCAC CACGCCTCAT CTGTGACAGC CGAGTCCTGG 180 AGAGGTACCT CTTGGAGGCC AAGGAGGCCG AGAATATCAC GACGGGCTGT GCTGAACACT 240 GCAGCTTGAA TGAGAATAAT CACTGTCCCA GACACCAAAG TTAATTTCTA TGCCTGGAAG 300 AGGATGGAGG TCGGGCAGCA GGCCGTAGAA GTCTGGCAGG GCCTGGCCCT GCTGTCGGAA 900 GCTGTCCTGC GGGGCCAGGC CCTGTTGGTC AACTCTTCCC AGCCGTGGGA GCCCCTGCAG 420 CTGCATGTGG ATAAAGCCGT CAGTGGCCTT CGCAGCCTCA CCACTCTGCT TCGGGCTCTG 480 GGAGCCCAGA AGGAAGCCAT CTCCCCTCCA GAT 513 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 112:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: potedynrzy (D) TOPOLOGIA: Hoiowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 112:

GCCTCAGCTG CTCCACTCCG AACAATCACT GCTGACACTT TCCGCAAACT CTTCCGAGTC 60 TACTCCAATT TCCTCCGGGG AAAGCTGAAG CTGTACACAG GGGAGGCCTG CAGGACAGGG 120 GACAGATGAG GCGGCGGCTC CCCCCACCAC GCCTCATCTG TGACAGCCGA GTCCTGGAGA 180 GGTACCTCTT GGAGGCCAAG GAGGCCGAGA ATATCACGAC GGGCTGTGCT GAACACTGCA 240 GCTTGAATGA GAATAATCAC TGTCCCAGAC ACCAAAGTTA ATTTCTATGC CTGGAAGAGG 300 ATGGAGGTCG GGCAGCAGGC CGTAGAAGTC TGGCAGGGCC TGGCCCTGCT GTCGGAAGCT 900 GTCCTGCGGG GCCAGGCCCT GTTGGTCAAC TCTTCCCAGC CGTGGGAGCC CCTGCAGCTG 420 CATGTGGATA AAGCCGTCAG TGGCCTTCGC AGCCTCACCA CTCTGCTTCG GGCTCTGGGA 480 GCCCAGAAGG AAGCCATCTC CCCTCCAGAT GCG 513 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 113:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (B) TYP: kwas nagleioowż (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 113:

TCAGCTGCTC CACTCCGAAC AATCACTGCT GACACTTTCC GCAAACTCTT CCGAGTCTAC 60 TCCAATTTCC TCCGGGGAAA GCTGAAGCTG TACACAGGGG AGGCCTGCAG GACAGGGGAC 120 AGATGAGGCG GCGGCTCCCC CCACCACGCC TCATCTGTGA CAGCCGAGTC CTGGAGAGGT 180 ACCTCTTGGA GGCCAAGGAG GCCGAGAATA TCACGACGGG CTGTGCTGAA CACTGCAGCT 240 TGAATGAGAA TAATCACTGT CCCAGACACC AAAGTTAATT TCTATGCCTG GAAGAGGATG 300 GAGGTCGGGC AGCAGGCCGT AGAAGTCTGG CAGGGCCTGG CCCTGCTGTC GGAAGCTGTC 360 CTGCGGGGCC AGGCCCTGTT GGTCAACTCT TCCCAGCCGT GGGAGCCCCT GCAGCTGCAT 420 GTGGATAAAG CCGTCAGTGG CCTTCGCAGC CTCACCACTC TGCTTCGGGC TCTGGGAGCC 480 CAGAAGGAAG CCATCTCCCC TCCAGATGCG GCC 513 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 114:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (B) TYP: kwas nakieinomż (c) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynrzy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 114:

GCTGCTCCAC TCCGAACAAT CACTGCTGAC ACTTTCCGCA AACTCTTCCG AGTCTACTCC 60 AATTTCCTCC GGGGAAAGCT GAAGCTGTAC ACAGGGGAGG CCTGCAGGAC AGGGGACAGA 120 TGAGGCGGCG GCTCCCCCCA CCACGCCTCA TCTGTGACAG CCGAGTCCTG GAGAGGTACC 180 TCTTGGAGGC CAAGGAGGCC GAGAATATCA CGACGGGCTG TGCTGAACAC TGCAGCTTGA 240 ATGAGAATAA TCACTGTCCC AGACACCAAA GTTAATTTCT ATGCCTGGAA GAGGATGGAG 300 GTCGGGCAGC AGGCCGTAGA AGTCTGGCAG GGCCTGGCCC TGCTGTCGGA AGCTGTCCTG 900 CGGGGCCAGG CCCTGTTGGT CAACTCTTCC CAGCCGTGGG AGCCCCTGCA GCTGCATGTG 420

189 756

GATAAAGCCG TCAGTGGCCT TCGCAGCCTC ACCACTCTGC TTCGGGCTCT GGGAGCCCAG 485 AAGGAAGCCA TCTCCCCTCC AGATGCGGCC TCA 513 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 115:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 115:

GCTCCACTCC GAACAATCAC TGCTGACACT TTCCGCAAAC TCTTCCGAGT CTACTCCAAT ;0 TTCCTCCGGG GAAAGCTGAA GCTGTACACA GGGGAGGCCT GCAGGACAGG GGACAGATGA 120 GGCGGCGGCT CCCCCCACCA CGCCTCATCT GTGACAGCCG AGTCCTGGAG AGGTACCTCT 180 TGGAGGCCAA GGAGGCCGAG AATATCACGA CGGGCTGTGC TGAACACTGC AGCTTGAATG m AGAATAATCA CTGTCCCAGA CACCAAAGTT AATTTCTATG CCTGGAAGAG GATGGAGGTC 300 GGGCAGCAGG CCGTAGAAGT CTGGCAGGGC CTGGCCCTGC TGTCGGAAGC TGTCCTGCGG 3;0 GGCCAGGCCC TGTTGGTCAA CTCTTCCCAG CCGTGGGAGC CCCTGCAGCT GCATGTGGAT m AAAGCCGTCA GTGGCCTTCG CAGCCTCACC ACTCTGCTTC GGGCTCTGGG AGCCCAGAAG ;80 GAAGCCATCT CCCCTCCAGA TGCGGCCTCA GCT 513 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 11;:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 11;:

CCACTCCGAA CAATCACTGC TGACACTTTC CGCAAACTCT TCCGAGTCTA CTCCAATTTC ;0 CTCCGGGGAA AGCTGAAGCT GTACACAGGG GAGGCCTGCA GGACAGGGGA CAGATGAGGC 120 GGCGGCTCCC CCCACCACGC CTCATCTGTG ACAGCCGAGT CCTGGAGAGG TACCTCTTGG 180 AGGCCAAGGA GGCCGAGAAT ATCACGACGG GCTGTGCTGA ACACTGCAGC TTGAATGAGA m ATAATCACTG TCCCAGACAC CAAAGTTAAT TTCTATGCCT GGAAGAGGAT GGAGGTCGGG 300 CAGCAGGCCG TAGAAGTCTG GCAGGGCCTG GCCCTGCTGT CGGAAGCTGT CCTGCGGGGC 0;0 CAGGCCCTGT TGGTCAACTC TTCCCAGCCG TGGGAGCCCC TGCAGCTGCA TGTGGATAAA m GCCGTCAGTG GCCTTCGCAG CCTCACCACT CTGCTTCGGG CTCTGGGAGC CCAGAAGGAA ;80 GCCATCTCCC CTCCAGATGC GGCCTCAGCT GCT 513 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 117:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: m par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 117:

CTCCGAACAA TCACTGCTGA CACTTTCCGC AAACTCTTCC GAGTCTACTC CAATTTCCTC ;0 CGGGGAAAGC TGAAGCTGTA CACAGGGGAG GCCTGCAGGA CAGGGGACAG ATGAGGCGGC120 GGCTCCCCCC ACCACGCCTC ATCTGTGACA GCCGAGTCCT GGAGAGGTAC CTCTTGGAGG 180 CCAAGGAGGC CGAGAATATC ACGACGGGCT GTGCTGAACA CTGCAGCTTG AATGAGAATA m ATCACTGTCC CAGACACCAA AGTTAATTTC TATGCCTGGA AGAGGATGGA GGTCGGGCAG 300 CAGGCCGTAG AAGTCTGGCA GGGCCTGGCC CTGCTGTCGG AAGCTGTCCT GCGGGGCCAG 3;0 GCCCTGTTGG TCAACTCTTC CCAGCCGTGG GAGCCCCTGC AGCTGCATGT GGATAAAGCC m GTCAGTGGCC TTCGCAGCCT CACCACTCTG CTTCGGGCTC TGGGAGCCCA GAAGGAAGCC 485 ATCTCCCCTC CAGATGCGGC CTCAGCTGCT CCA 513 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 118:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad

189 756 (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 118:

CGAACAATCA CTGCTGACAC TTTCCGCAAA CTCTTCCGAG TCTACTCCAA TTTCCTCCGG GGAAAGCTGA AGCTGTACAC AGGGGAGGCC TGCAGGACAG GGGACAGATG AGGCGGCGGC TCCCCCCACC ACGCCTCATC TGTGACAGCC GAGTCCTGGA GAGGTACCTC TTGGAGGCCA AGGAGGCCGA GAATATCACG ACGGGCTGTG CTGAACACTG CAGCTTGAAT GAGAATAATC ACTGTCCCAG ACACCAAAGT TAATTTCTAT GCCTGGAAGA GGATGGAGGT CGGGCAGCAG GCCGTAGAAG TCTGGCAGGG CCTGGCCCTG CTGTCGGAAG CTGTCCTGCG GGGCCAGGCC CTGTTGGTCA ACTCTTCCCA GCCGTGGGAG CCCCTGCAGC TGCATGTGGA TAAAGCCGTC AGTGGCCTTC GCAGCCTCAC CACTCTGCTT CGGGCTCTGG GAGCCCAGAA GGAAGCCATC TCCCCTCCAG ATGCGGCCTC AGCTGCTCCA CTC (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 119:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 513 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 119:

ACAATCACTG CTGACACTTT CCGCAAACTC TTCCGAGTCT ACTCCAATTT CCTCCGGGGA AAGCTGAAGC TGTACACAGG GGAGGCCTGC AGGACAGGGG ACAGATGAGG CGGCGGCTCC CCCCACCACG CCTCATCTGT GACAGCCGAG TCCTGGAGAG GTACCTCTTG GAGGCCAAGG AGGCCGAGAA TATCACGACG GGCTGTGCTG AACACTGCAG CTTGAATGAG AATAATCACT GTCCCAGACA CCAAAGTTAA TTTCTATGCC TGGAAGAGGA TGGAGGTCGG GCAGCAGGCC GTAGAAGTCT GGCAGGGCCT GGCCCTGCTG TCGGAAGCTG TCCTGCGGGG CCAGGCCCTG TTGGTCAACT CTTCCCAGCC GTGGGAGCCC CTGCAGCTGC ATGTGGATAA AGCCGTCAGT GGCCTTCGCA GCCTCACCAC TCTGCTTCGG GCTCTGGGAG CCCAGAAGGA AGCCATCTCC CCTCCAGATG CGGCCTCAGC TGCTCCACTC CGA (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 120:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 501 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 120:

GCCCCACCAC GCCTCATCTG TGACAGCCGA GTCCTGGAGA GGTACCTCTT GGAGGCCAAG GAGGCCGAGA ATATCACGAC GGGCTGTGCT GAACACTGCA GCTTGAATGA GAATATCACT GTCCCAGACA CCAAAGTTAA TTTCTATGCC TGGAAGAGGA TGGAGGTCGG GCAGCAGGCC GTAGAAGTCT GGCAGGGCCT GGCCCTGCTG TCGGAAGCTG TCCTGCGGGG CCAGGCCCTG TTGGTCAACT CTTCCCAGCC GTGGGAGCCC CTGCAGCTGC ATGTGGATAA AGCCGTCAGT GGCCTTCGCA GCCTCACCAC TCTGCTTCGG GCTCTGGGAG CCCAGAAGGA AGCCATCTCC CCTCCAGATG CGGCCTCAGC TGCTCCACTC CGAACAATCA CTGCTGACAC TTTCCGCAAA CTCTTCCGAG TCTACTCCAA TTTCCTCCGG GGAAAGCTGA AGCTGTACAC AGGGGAGGCC TGCAGGACAG GGGACAGATG A (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 121:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 166 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 121:

189 756

Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu 15 10 15

Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His

25 30

Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Pne

40 45

Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp

55 60

Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu 65 70 75 80

Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp

90 95

Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu

100 105 110

Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala

115 120 125

Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val

130 135 140

Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala 145 150 155 160

Cys Arg Thr Gly Asp Arg

165 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 122:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 170 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 122:

Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu 15 10 15

Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser

25 30

Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro

40 45

Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg

55 60

Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile 65 70 75 80

Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala

90 95

Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly

100 105 110

Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu

130 135 140

Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys 145 150 155 160

Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile

165 170

189 756 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 123:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 4 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (c) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: lioiowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 123:

Gly Gly Gly Ser 1 ' (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 124:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 8 aminokwasów (b) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pcjadyoczy (D) TOPOLOGIA: lioiowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 124:

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 1 5 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 125:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 12 aminokwasów (b) TYP: aminokwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: potedyoczy (D) TOPOLOGIA: lioiowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 125:

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 15 10 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 126:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 7 aminokwasów (b) TYP: amiookwas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynrzy (D) TOPOLOGIA: lioiowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 126:

Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 127:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 5 ammogmyeem (tb\ tty.

itr. .ιιιιΐϋηνζαο (c) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: potedyoczy (D) TOPOLOGIA: lioiowy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 127:

Glu Phe Gly Aso Met 15

189 756 (2) INFORMACJA O SEQ ID NN: 128:

(1) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 6 aminokDesów (b) TYP: emtpokmes (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: poj4dzP5ay (—) TOPOLOGIA: ltptoDy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 128:

Glu Phe Gly Gly Asn Met 1 5 (2) INFORMACJA O SEQ ID NN: 129:

(1) CHARAKTERYSTYK— SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 9 apipokwasÓD (b) TYP: emipoaDas (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (—) TOPOLOGIA: ltpioDy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 129:

Glu Phe Gly Gly Asn Gly Gly Asn Met 1 5 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 130:

(1) CH—RAKTERYSTYK— SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 7 amtpoaDesów (b) TYP: amtnokDes (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: lipiaDy (ii) TYP CZĄSTECZKI: brak (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 130:

Gly Gly Ser Asp Met Ala Gly 1 5 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 131:

(1) CHARAKTERYSTYK— SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 27 amtnoawesÓD (B) TYP: kwas PukleinoDy (C) LICZB— ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (—) TOPOLOGIA: ltpioDy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 131: GCGCGCCC—T GGAC——TC—C TGCTGAC (2) (1)

INFORMACJA O SEQ ID NO: 132: CHARAKTERYSTYK— SEKWENCJI: (A) DŁUGOŚĆ: 15 par zasad (B) TYP: kDes PukleinoDy

OKADZI ND .

pojedyncdsy (xⁱ⁾ (—) TOPOLOGIA: li—owy OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 132:

TCTGTCCCCT GTCCT (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 133:

(i) CHARAKTERYSTYK— SEKWENCJI:

189 756 (A) DŁUGOŚĆ: 43 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQIDNO: 133:

GCGCGCAAGC TTATTATCGG AGTGGAGCAG CTGAGGCCGC ATC 43 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 134:

(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:

(A) DŁUGOŚĆ: 21 par zasad (B) TYP: kwas nukleinowy (C) LICZBA ŁAŃCUCHÓW: pojedynczy (D) TOPOLOGIA: liniowy (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQIDNO: 134:

GCCCCACCAC GCCTCATCTG T 21

FIG.2

nowy start

Pierwszy etap PCR

trzeci etap PCR łączenie fragmentów

174 sekwencja łąciąca

Sekwencja łącząca 11 dodanie oligonukletydów nowy start i nowy stop

HZ sekwenc-ia

174frącząca | 11

96]

189 756

FIG.3

pierwszy etap PCR nowy start

97 1741

łączenie fragmentów

174 | 1 |

189 756 fks.;

I. KONSTRUKCJA POWTÓRZONEJ TANDEMOWO MATRYCY

1_174 1_174

I pierwsza kopia genu /—[ druga kopia genu i sekwencja łącząca

II. NAMNOŻENIE METODĄ PCR TANDEMOWO POWTÓRZONEJ MATRYCY nowy start

1_ | f-sza kopia 97

174

ZZl·^ sekwencja

1_

-yj2~U^a kopia 96 łącząca ————— nowy start

174 [ start 197

174 ftekwenc ja łącząca )stop|

189 756

GCCCCACCACGCCTCATCTGTGACAGCCGAGTCCTGGAGAGGTACCTCTTGCAGGCCAAG 1---------+---------+---------+-------+---------+--- —+ 60

CGGGGTGGTGCGGAGTAGACACTGTCGGCTCAGGACCTCTCCATGGAGAACCTCCGGTTC

AlaProProArgIieuIleCysAspSerArgValLeuGluArgTyrLeuLeuGluAlaLys

GAGGCCGAGAATATCACGACGGGCTGTGCTGAACACTGCAGCTTGAATGAGAATATCACT 61---------+--- —+---------+---------+---------+---------+ 120

CTCCGGCTCTTATJV3TGCTGCCCGACACGACTTGTGACGTCGAACTTACTCTTATAGTGA

GluAlaGluAsnlleThrThrGlyCysAlaGluHisCysSerLeuAsnGluAsnlleThr

GTCCCAGACACCAAAGTTAATTTCTATGCCTGGAAGAGGATGGAGGTCGGGCAGCAGGCC

121 --------4-------—-H----------+---------+-----»---+---------+ 180

CAGGGTCTGTGGTTTCAATTAAAGATACGGACCTTCTCCTACCTCCAGCCCGTCGTCCGG

ValProAspThrLysValAsnPheTyrAlaTrpLysArgMetGluValGlyGlnGlnAla

GTAGAAGTCTGGCAGGGCCTGGCCCTGCTGTCGGAAGCTGTCCTGCGGGGCCAGGCCCTG 131 240

CATCTTCAGACCGTCCCGGACCGGGACGACAGCCTTCGACAGGACGCCCCGGTCCGGGAC ValGluValTrpGlnGlyLeuAlaLieuLeuSerGluAlaValLeuArgGlyGlnAlaLeu

TTGGTCAACTCTTCCCAGCCGTGGGAGCCCCTGCAGCTGCATGTGGATAAAGCCGTCAGT

241 ---------+---------+---------+---------₊---------τ---------+ 300

AACCAGTTGAGAAGGCTCGGCACCCTCCGGGACGTCGACGTACACCTATTTCGGCAGTCA

LeuValAsnSerSerGlnProTrpGluProLeuGlnLeuHisValAspLysAlaValSer

GGCCTTCGCAGCCTCACCACTCTGCTTCGGGCTCTGGGAGCCCAGAAGGAAGCCATCTCC

301---------+---------+---------*---------+---------+---------+ 360

CCGGAAGCGTCGGAGTGGTGAGACGAAGCCCGAGACCCTCGGGTCTTCCTTCGGTAGAGG

GlyLeuArgSerLeuThrThrLeuLeuArgAlaLeuGlyAlaGlnLysGluAlalleSer

CCTCCAGATGCGGCCTCAGCTGCTCCACTCCGAACAATCACTGCTGACACTTTCCGCAAA 361 ---------+---------+---------+---------+—— -_--+ 420

GGAGGTCTACGCCGGAGTCGACGAGGTGAGGCTTGTTAGTGACGACTGTGAAAGGCGTTT

ProProAspAlaAlaSerAlaAlaProLeuArgThrlleThrAlaAspThrPheArgLys

CTCTTCCGAGTCTACTCCAATTTCCTCCGGGGAAAGCTGAAGCTGTACACAGGGGAGGCC

421--------------------_k_—- — *_--------+-------—p 480 gagaaggctcagatgaggttaaaggaggcccctttcgacttcgacatgtgtcccctccgg

LeuPheArgValTyrSerAsnPhsLeuArgGlyLysLeuLysLeuTyrThrGlyGluAla

TGCAGGACAGGGGACAGATGA 481---------+---------+ . soi

ACGTCCTGTCCCCTGTCTACT CysArgThrGlyAspArg

FIG. 5

189 756

FIG.1

KLUCZ ll | POWTARZALNA STRUKTURA DRUGORZĘDOWĄ _x SEKWENCJA ŁA.CZACA

Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 50 egz.

Cena 6,00 zł.

Claims

Zastrzeżenia patentowe

1; SEQ ID NO: 2; SEQ ID NO: 3; SEQ 7; SEQ ID NO: 8; SEQ ID NO: 2; SEQ ID NO: 11; SEQ ID NO: 17; SEQ ID NO: 11; SEQ ID NO: 22· SEQ ID NO: 23; SEQ ID NO: 27i SEQ ID NO: 28; SEQ ID NO:

m χτη

IE NE

37 · SEQ Di NO : 42; SEQ ID NO : 47; SEQ ID NO : 52; SEQ ID NO 57; SEQ ID NO: 58 ss. crQ τη _D} i_FO\^ U./

38 i SEQ ID 43; SEQ ID 48; SEQ ID 53; SEQ ID ; SEQ ID NO:

M·

i. 1 5

NO: NO: NO: NN: 59; i

ID NO: 4; SEQ ID NO: 9; SEQ ID OO: 10; 114 SEQ ID NO: 11; U; SEQ ID NO: 20; 24^4 SEQ ID NO: 25; 22; SEQ ID NO: 30;

;1;

;;;

71;

1. Polipeptyd ludzkiego zgon is ty reneptore EPO, znamienny tym, że zawiera amodyfikowaną sekwencję aminogmasomą o mzorzr:

AiaaroaroArgLeuIlrCzsAspSerAr^gValLruGluArgTzrLeuLeuGluAlyLzs 10 20

GluAlaGluAsnIleThrThrGłżCysAlaGluHisCysSerLeuAsnGluAsnIieThr 30 40

VaiaroAspThrLysValAs:maheTyrAlaTrpLysArgMetGluV£aGlyGlnGlnAla 50 00

ValGluValTrpGlnGlyLeuAlaLeuLeuSerGhlAlaValLeuArgGlyCJinAiaLeu 70 00

LruValAsnSerSerGlnProTrpGluaroLeuGlnLruHisVaiAspLżsAlaValSer 90 100

GlyLeuArgSerLeuThrThrLeuLeuArgAiaLeuGlyAiaGlnLysGluAlylleSrr 110 120 aroaroAspAiyAlaSerAlaAlaProLruArgThriirThrAiyAspThrahrAI'gLys

130 140

LeuPheArgValTyrSerAsnPheLeuArgGtyLysLeuLysLeuTyrThrCdyGiuAia 150 160

CzsArgThrGtyAspArg SEQ ID NO: 121

166 w którym to polipeptydzie agonisty receptora EPO ewentualnie od 1 do 6 aminokwasów od oryginalnego N-końca i od 1 do 5 aminokwasów od oryginalnego C-końca jest usuniętych;

i w którym oryginalny N-koniec jest połączony z oryginalnym C-końcem bezpośrednio lub przez sekwencję łączącą zdolną do połączenia N-końca z C-końcem i posiadającym nowe

C- i N-końce odpowiednio przy amninokw'ysach:

2. Polipeptyd agonisty receptora EPO według zastrz. 1, znamienny tym, że sekwencja łącząca wybrana jest z grupy zawierającej:

GlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 123);

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SeQ ID NO : 124);

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SeQ ID NO : 125);

SerGlyGlySerGlyGlySer (SEQ ID NO : 126);

GluPheGlyAsnMet (SEQ ID NO : 127);

GluPheGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 128);

GluPheGlyGlyAsnGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 129) i

GlyGlySerAspMetAlaGly (SEQ ID NO : 130).

3. Polipeptyd agonisty receptora EPO według zastrz. 1, znamienny tym, że wybrany jest z grupy zawierającej:

SEQ ID NO: 1; SEQ ID NO: 2; SEQ ID NO: 3; SEQ ID NO: 4; SEQ ID NO: 5; SEQ ID NO: 6; SEQ ID NO: 7; SEQ ID NO: 8; SEQ ID NO: 9; SEQ ID NO: 10; SEQ ID NO: 11; SEQ ID NO: 12; SEQ ID NO: 13; SEQ ID NO: 14; SEQ ID NO: 15; SEQ ID, NO: 16;

SEQ ID NO: 17; SEQ IID NO: 18; SEQ ID NO ; 11; SEQ ID NO: 20; SEQ ID NO: 21;

SEQ ID NO: 22; SEQ ID NO: 23; SEQ ID NO ; 24; SEQ ID NO: 25; SEQ ED NO: 26; SEQ ID NO: 22; SEQ ^NO: 28; SEQ D NO ; 22; SEQ ID NO: 30; SEQ ID NO: 311

SEQ Id NO: 32; bblg ID NO: 33; SbQ ID No ; 34; SEQ ID NO: 35; SEQ ID NO: 36;

SEQ ID NO: 37; SEQ IID NO: 38; SEQ ID NO; 33; SEQ ID NO: 40; SEQ ID NO: 41;

SEQ ID NO: 42; SEQ IID NO: 43; SEQ ID NO: 44; SEQ ID NO: 45; SEQ ID NO: 46; SEQ ID NO: 47; SEQ IID NO: 48; SEQ ID NO ; 44; SEQ ID NO: 50; SEQ IID NO: 511

SEQ ID NO: 52; SEQ ID NO: 53; SEQ ID NO ; 544 SEQ ID NO: 55; SEQ IID NO: 56;

SEQ ID NO: 57; SEQ ID NO: 58; SEQ ID NO: 59; SEQ ID NO: 122.

4. Polipeptyd agonisty receptora EPO według zastrz. 3, znamienny tym, że sekwencja łącząca (GlyGlyGlySer SEQ ID NO : 123) jest zastąpiona przez sekwencję łączącą wybraną z grupy składającej się z:

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 124); GlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 125);

SerGlyGlySerGlyGlySer (SEQ ID NO : 126);

GluPheGlyAsnMet (SEQ ID NO :127);

GluPheGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 128);

5; SEQ ID NN: 6;

N OF.Q TT3 NO·

SS·

919; SEQ ID OO: 40; 444 SEQ ID NN: 45; 49; SEQ ID NN: 50; 5^4 SEQ ID NO: 55; SEQ ID NN: 122.

SEQ ID NN SEQ ID NO SEQ ID NN SEQ ID NO SEQ ID NO NEΓi 3Γ6 DfO

SEQ Id No

SEQ id NO SEQ ID NO SEQ ID NN

5. Cząsteczka kwasu nukleinowego, znamienna tym, że zawiera sekwencję DNA kodującą polipeptyd ludzkiego agonisty receptora EPO jak określono w zastrz. 1.

6. Cząsteczka kwasu nukleinowego, znamienna tym, że zawiera sekwencję DNA kodującą polipeptyd ludzkiego agonisty receptora EPO jak określono w zastrz. 1, w którym sekwencja łącząca wybrana jest z grupy zawierającej:

GlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 123);

SerGlyGlySerGlyGlySer (SEQ ID NO : 126);

GluPheGlyAsnMet (SEQ ID NO : 127);

GluPheGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 128);

7^<9;

84;

89;

94;

99;

SEQ ID NO:

SEQ ID NO: 100; SEQ ID NO: 10 1; SEQ ID NO: 102 ; SEQ ID ND; 003; SEQ IDNO: SEQ SEQ ID NO: 105; SEQ IQ NO: 106; SEQ ID NO: 107 ND; D8; SEQ IDN O: SI9;

td no: im. ccn iq nn· m· wn eq un· in m sed ; 11 : sfo τηΝΩ· 1(4SEQ ID NO: 115; SEQ ID NO: Π1; SEQIDNO: 117; SEQn0NO: Π18 SEQIDNO: Π1.

7;;

81;

7. Cząsteczka kwasu nukleinowego, znamienna tym, że zawiera sekwencję DNA kodującą polipeptyd ludzkiego agonistyk receptora EPO jak określono w zastrz. 1 o sekwencji wybranej z grupy składającej się z:

189 756

SEQ ID NO: 1; SEQ ID NO: 2; SEQ ID NO: 3; SEQ ID NO: 4; SEQ ID NO: 5; SEQ ID NO: 6;

SEQ ID NO: 7; SEQ ID NO: 8; SEQ ID NO: 9; SEQ ID NO: 10; SEQ ID NO: 11; SEQ ID NO: 12;

SEQ ID NO: 13; SEQ ID NO : 14; SEQ ID NO: 15; SEQ ID NO: 16; SEQ ID NO: 17;

SEQ ID NO: 18; SEQ ID NO : 19; SEQ ID NO: 20; SEQ ID NO: 21; SEQ ID NO: 22;

SEQ ID NO: 23; SEQ ID NO : 2-4; SEQ ID NO: 25; SEQ ID NO: 26; SEQ ID NO: 27;

SEQ ID NO: 28; SEQ ID NO : 29; SEQ ID NO: 30; SEQ ID NO: 311 SEQ ID NO: 32;

SEQ ID NO: 33; SEQ ID NO : 34; SEQ ID NO: 35; SEQ ID NO: 33; SEQ ID NO: 37;

SEQ ID NO: 38; SEQ ID NO : 39; SEQ ID NO: 40; SEQ ID NO: 4E SEQ ID NO: 42;

SEQ ID NO: 43; SEQ ID NO : 4-4; SEQ ID NO: 45; SEQ ID NO: 44; SEQ ID NO: 47;

SEQ ID NO: 48; SEQ ID NO : 49; SEQ ID NO: 50; SEQ ID NO: 511 SEQ ID NO: 55^;

SEQ ID NO: 53; SEQ ID NO : 5-4; SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO: 56; SEQ ID NO: 57;

SEQ ID NO: 58; SEQ ID NO: 59; SEQ ID NO: 122.

8;;

91;

i;;

SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO:

62;

67;

72;

77;

82;

87;

92;

97;

SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO

63; SEQ ID NO 68; SEQ ID NO 73; SEQ ID NO 78; SEQ ID NO 83; SEQ ID NO 881; SEQ ID NO 93; SEQ ID NO 98; SEQ ID NO

64;

69;

74;

8. Cząsteczka kwasu nukleinowego, znamienna tym, że zawiera sekwencję DNA kodującą polipeptyd ludzkiego agonisty receptora EPO jak określono w zastrz. 3, wybraną z grupy składającej się z:

SEQ ID NO: 60; SEQ ID NO : 61; SEQ ID NO: 62; SEQ ID NO: 63; SEQ ID NO: 64;

SEQ ID NO: 65; SEQ ID NO : 66; SEQ ID NO: 67; SEQ ID NO: 68; SEQ ID NO: 69;

SEQ ID NO: 70; SEQ ID NO : 71; SEQ ID NO: 72; SEQ ID NO: 773 SEQ ID NO: 74;

SEQ ID NO: 75; SEQ ID NO : 76; SEQ ID NO: 77; SEQ ID NO: 77; SEQ ID NO: 79;

SEQ ID NO: 80; SEQ ID NO : 81; SEQ ID NO: 82; SEQ ID NO: 883 SEQ ID NO: 84;

SEQ ID NO: 85; SEQ ID NO : 86; SEQ ID NO: 87; SEQ ID NO: 88; SEQ IID NO: 89;

SEQ ID NO: 90; SEQ ID NO : 91; SEQ ID NO: 92; SEQ ID NO: 993 SEQ BD NO: 94;

SEQ ID NO: 95; SEQ ID NO : 96; SEQ ID NO: 97; SEQ ID NO: 998 SEQ ID NO: 99;

SEQ ID NO: 100; SEQ ID NO: 1111 SEQ ID NO: 102; SEQ ID NO: 103; SEQ ID NO: 114; SEQ ID NO: 105; SEQ ID NO: 110; SEQ ID NO: 107; SEQ DD NO: 108: SEQ ID NO: 119; SEQ ID NO: 110; SEQ ID NO: 1111 SEQ UD NO: 112; SEQ BD NO: 113: SEQ ID NO : 114; SEQ ID NO: 115; SEQIDNO: 1^ SEQ ID NO: 117; SEQIDNO: 118; SEQ ID NO: 119.

9. Cząsteczka kwasu nukleinowego, znamienna tym, że zawiera sekwencję DNA kodującą polipeptyd ludzkiego agonisty receptora EPO jak określono w zastrz. 1, o sekwencji wybranej z grupy składającej się z:

SEQ ID NO: 1; SEQ ID NO: 2; SEQ ID NO: 3; SEQ ID NO: ;; SEQ ID NO: 5; SEQ ID NO: ;; SEQ ID NO: 7; SEQ ID NO: 8; SEQ ID NO: 9; SEQ ID NO: 10; SEQ ID NO: 11; SEQ ID NO: 12; SEQ ID NO : 13; SEQ ID NO: 14; SEQ ID NO: 115 SEQ BD NO: 11;

SEQ ID NO: 17; SEQ ID NO : 18; SEQ ID NO: 19; SEQ ID NO: 220 SEQ BD NO: 211

SEQ ID NO: 22; SEQ ID NO : 23; SEQ ID NO: 24; SEQ ID NO: 255 SEQ BD NO: 26;

SEQ ID NO: 27; SEQ ID NO : 28; SEQ ID NO: 29; SEQ ID NO: 300 SEQ BD NO: 3^1

SEQ ID NO: 32; SEQ ID NO : 33; SEQ ID NO: 34; SEQ ID NO: 335 SEQ BD NO: 36;

SEQ ID NO: 37; SEQ ID NO : 38; SEQ ID NO: 39; SEQ ID NO: 4^0 SEQ BD NO: 411

SEQ ID NO: 42; SEQ ID NO : 43; SEQ ID NO: 44; SEQ ID NO: 455 SEQ BD NO: 4^;

SEQ ID NO: 47; SEQ ID NO : 48; SEQ ID NO: 49; SEQ ID NO: 550 SEQ BD NO: 5^1

SEQ ID NO: 52; SEQ ID NO : 53; SEQ ID NO: 54; SEQ ID NO: 555 SEQ ID NO: 56;

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : m); GlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 125);

SerGlyGlySerGlyGlySer (SEQ ID NO : H;);

GIuPheGlyAsnMet (SEO ID NO : 127):

GluPheGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 128);

GluPheGlyGlyAsnGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 129) i

GlyGlySerAspMetAlaGly (SEQ ID NO : 130). .

10. Sposób wytwarzania polipeptydu ludzkiego agonisty receptora EPO, znamienny tym, że: hoduje się w odpowiednich warunkach odżywczych komórkę gospodarza transformowaną lub transfekowaną wektorem replikacyjnym zawierającym cząsteczkę kwasu nukle189 756 inowego obejmującą sekwencję DNA kodującą polipeptyd agonisty receptora EPO jak określono w zastrz. 1.

11;

116;

11. Sposób wytwarzania polipeptydu agonisty receptora EPO, znamienny tym, że: hoduje się w odpowiednich warunkach odżywczych komórkę gospodarza transformowaną lub transfekowaną wektorem replikacyjnym zawierającym cząsteczkę kwasu nukleinowego obejmującą sekwencję DNA kodującą polipeptyd agonisty receptora ePo jak określono w zastrz. 1, w którym sekwencja łącząca wybrana jest z grupy zawierającej:

GlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 123);

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 124);

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SeQ ID NO : 125);

SerGlyGlySerGlyGlySer (SEQ ID NO : 126);

GluPheGlyAsnMet (SEQ ID NO : 127);

GluPheGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 128);

GluPheGlyGlyAsnGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 129) i

GlyGlySerAspMetAlaGly (SEQ ID NO : 130).

12. Sposób wytwarzania polipeptydu agonisty receptora EPO, znamienny tym, że: hoduje się w odpowiednich warunkach odżywczych komórkę gospodarza transformowaną lub transfekowaną wektorem replikacyjnym zawierającym cząsteczkę kwasu nukleinowego obejmującą sekwencję DNA kodującą polipeptyd agonisty receptora ePo jak określono w zastrz. 1, o sekwencji wybranej z grupy składającej się z:

SEQ ID NO: 1 ; SEQ ID NO:2 ; SEQ ID NO: 3 ; SEQD) NO:4 ; SEQ ID NO: 5 ; SEQ ID NO:6; SEQ ID NO: 7; SEQ ID NO: 8; SEQ ID NO: 9; SEQ ID NO: 10; SEQ ID NO: 11;

SEQ ID NO: 12; SEQ ID NO: 13; SEQ ID NO: 14; SEQ ID NO: 15 ; SEQ D NO : 16;

SEQ ID NO: 17; SEQ ID NO: 18; SEQ ID NO: 19; SEQ ID NO: 20; SEQ ID NO; 21;

SEQ ID NO: 22; SEQ ID NO: 23; SEQ ID NO: 24 ; SEQ ID NO: 25; SEQ ID NO: 26;

SEQ ID NO: 27; SEQ ID NO: 28; SEQ ID NO: 2; ; SEQ ID NO: 30; SEQ ID NO : 31;

SEQ ID NO: 32; SEQ ID NO: 33; SEQ ID NO: H ; SEQ ID NO: 35; SEQ ID NO : 36;

SEQ ID NO: 37; SEQ ID NO: 38; SEQ ID NO: 3; ; SEQ ID NO: 40; SEQ ID NO ; 41;

SEQ ID NO: 42; SEQ ID NO: 43; SEQ ID NO: 44; SEQ ID NO: 45; SEQ ID NO ; 46;

SEQ ID NO: 47; SEQ ID NO: 48; SEQ ID NO: 49 ; SEQ ID NO: 50; SEQ ID NO ; 51;

SEQ ID NO: 52; SEQ ID NO: 53; SEQ ID NO: 54; SEQ ID NO: 55; SEQ D NO ; 56;

SEQ ID NO: 57; SEQ ID NO: 58; SEQ ID NO: 59; SEQ ID NO: 122.

13. Sposób wytwarzania polipeptydu agonisty receptora EPO, znamienny tym, że: hoduje się w odpowiednich warunkach odżywczych komórkę gospodarza transformowaną lub transfekowaną wektorem replikacyjnym zawierającym cząsteczkę kwasu nukleinowego obejmującą sekwencję DNA kodującą polipeptyd agonisty receptora EPO jak określono w zastrz. 3, wybraną z grupy składającej się z:

SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID NO:

60;

65;

70;

75;

80;

85;

90;

95;

14. Sposób wytwarzania polipeptydu agonisty receptora EPO, znamienny tym, że: hoduje się w odpowiednich warunkach odżywczych komórkę gospodarza transformowaną lub transfekowaną wektorem replikacyjnym zawierającym cząsteczkę kwasu nukleinowego obejmującą sekwencję DNA kodującą polipeptyd agonisty receptora EPO jak określono w zastrz. 1, o sekwencji wybranej z grupy składającej się z:

189 756

SEQ ID NO: 1; SEQ ED NO: 2; SEQ ID NO: 3; SEQ ID NO: 4; SEQ ID NO: 5; SEQ ID NO: 6;

SEQ ID NO: 7; SEQ ID NO: 8; SEQ ID NO: 9; SEQ ID NO: 10; SEQ ID NO: 11*

SEQ ID NO: 12; SEQ ED NO: 13; SEQ D NO : 14; SEQ ID NO: 15; SEQ ID NO: 16·

SEQ ID NO: 17; SEQ ED NO: 18; SEQ D NO : 19; SEQ ED NO: 20; SEQ ID NO: 21;

SEQ ID NO: 22; SEQ DD NO: 23; SEQ D NO : 24; SEQ ED NO: 25; SEQ ID NO: 26;

SEQ ID NO: 27; SEQ ID NO: 28; SEQ D NO : 29; SEQ ED NO: 30; SEQ IID NO: 3E

SEQ ID NO: 32; SEQ IID NO: 33; SEQ D NO : 34; SEQ ED NO: 35; SEQ ID NO: 36;

SEQ ID NO: 37; SEQ ID NO: 38; SEQ ID NO : 39; SEQ IID NO: 40; SEQ ID NO: 411

SEQ ID NO: 42; SEQ ID NO: 43; SeQ D NO : 44; SEQ ED NO: 45; SEQ DD NO: 46;

SEQ ID NO: 47; SEQ ID NO: 48; SEQ ID NO : 49; SEQ IID NO: 50; SEQ IID NO: 5E

SEQ ID NO: 52; SEQ IID NO: 53; SEQ D NO : 54; SEQ ED NO: 55; SEQ IID NO: 5Ó;

SEQ ID NO: 57; SEQ ID NO: 58; SEQ ID NO: 59; SEQ ID NO:

w którym sekwencja sekwencja łącząca (GlyGlyGlySer SEQ Id NO : 12;) jest zastąpiona przez sekwencję łączącą wybraną z grupy składającej się z:

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 1;4);

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SeQ ID NO : 1;5);

SerGlyGlySerGlyGlySer (SEQ ID NO : 1;6);

GluPheGlyAsnMet (SEQ ID NO : 1;7);

GluPheGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : m);

GluPheGlyGlyAsnGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : E9) i

GlyGlySerAspMetAlaGly (SEQ ID NO : B0).

15. Kompozycja, znamienna tym, że zawiera polipeptyd agonisty receptora EPO jak określono w zastrz. 1, i farmaceutycznie akceptowalny nośnik.

16. Kompozycja, znamienna tym, że zawiera polipeptyd agonisty receptora EPO jak określono w zastrz. 1; czynnik wybrany z grupy: GM-CSG, G-CSF, ligand c-mpl, M-CSF, IL-1, IL-4, IL-;, IL-;, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, EL-11, IL-1;, EL-B, IL-15, LIF, ligand ftó/flk;, ludzki hormon wzrostu, czynnik wzrostu limfocytów B, czynnik różnicowania limfocytów B, czynnik różnicowania eozynofili i czynnik wzrostu komórek macierzystych, warianty IL-;, białka fuzyjne, agoniści receptora G-CSF, agoniści receptora c-mpl, agoniści receptora ILE i wielofunkcyjni agoniści receptora; oraz farmaceutycznie akceptowalny nośnik.

17. Kompozycja, znamienna tym, że zawiera polipeptyd agonisty receptora EPO jak określono w zastrz. 1, przy czym sekwencja łącząca wybrana jest z grupy składającej się z:

GlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 1;;);

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 1;4);

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : B5);

SerGlyGlySerGlyGlySer (SEQ ID NO : 1;6);

GluPheGlyAsnMet (SEQ ID NO : 1;7);

GluPheGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 1;8);

GluPheGlyGlyAsnGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 1;9) i

GlyGlySerAspMetAlaGly (SEQ ID NO : EO).

18. Kompozycja, znamienna tym, że zawiera polipeptyd agonisty receptora EPO jak określono w zastrz. 1, i farmaceutycznie akceptowalny nośnik, przy czym polipeptyd agonisty receptora EPO wybrany jest z grupy składającej się z:

SEQ ID NO: 1; SEQ ID NO: ;; SEQ ID NO: ;; SEQ ID NO: 4; SEQ ID NO: 5; SEQ ID NO: 6; SEQ ID NO: 7; SEQ ID NO: 8; SEQ ID NO: 9; SEQ ID NO: 10; SEQ ID NO: 11; SEQ ID NO: 11; SEQ ID NO: 11; SEQ ID NO: 11; SEQ ED NO: 15; SEQ ID NO: 11;

SEQ ID NO: 117 SEQ ID NO: 18; SEQ ID NO: 11; SEQ ED NO: 20; SEQ IID NO: 2E

SEQ ID NO- 2;; SEQ ID NO: 23; SEO ID NO: 2;4 SEO ED NO: 25; SEO IID NO: 2;;

SEQ ID NO: 22; SEQ ID NO: 28; SEQ ID NO: 2;_; SEQ ED NO: 30; SEQ ID NO: 311

SEQ ID NO: 32; SEQ ID NO: 33; SEQ ID NO: 344 SEQ ED NO: 35; SEQ IID NO: 3ó;

SEQ ID NO: 32; SEQ ID NO: 38; SEQ ID NO: 3^9 SEQ ED NO: 40; SEQ ID NO: 4U

SEQ ID NO: 44; SEQ ID NO: 43; SEQ ID NO: 44; SEQ ED NO: 45; SEQ ID NO: 46;

SEQ ID NO: 477 SEQ ID NO: 48; SEQ ID NO: 49; SEQ ED NO: 50; SEQ ID NO: 5^

189 756

SEQ ID NO: 52; SEQ ID NO: 53; SEQ ID NO: 54; SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO: 56; SEQ ID NO: 57; SEQ ID NO: 58; SEQ ID NO: 59; i SEQ ID NO: 122. ,

19. Kompozycja, znamienna tym, że zawiera polipeptyd agonisty receptora EPO jak określono w zastrz. 1, i farmaceutycznie akceptowalny nośnik, przy czym polipeptyd agonisty receptora EPO wybrany jest z grupy składającej się z:

SEQ ID NO: 7; SEQ ID NO: 8; SEQ ID NO: 9; SEQ ID NO: 10; SEQ ID NO: 11;

SEQ ID NO: 11; SEQ ID NO: 11; SEQ IID NO: 14 ; SEQ ID NO: 11; SEQ ID NO : 16;

SEQ ID NO: 11; SEQ ID NO: 11; SEQ ID NO: 19 ; SEQ ID NO: 22; SEQ ID NO : 21;

SEQ ID NO: 222 SEQ ID NO: 23; SEQ ID NO: 24: SEQ ID NO: 255 SEQ ID NO : 26;

SEQ ID NO: 22; SEQ ID NO: 28; SEQ ID NO: ; SEQ ID NO: 30; SEQ D NO : 31;

SEQ ID NO: 302 SEQ ID NO: 33; SEQ ID NO: 34; SEQ ID NO: 305 SEQ ID NO : 3(5;

SEQ ID NO: 30; SEQ ID NO: 38; SEQ ID NO: 39; SEQ ID NO: 40; SEQ ID NO : 41;

SEQ ID NO: 442 SEQ ID NO: 43; SEQ ID NO: 44 : SEQ ID NO: 405 SEQ ID NO : 46;

SEQ ID NO: 40; SEQ ID NO: 48; SEQ ID NO: : SEQ ID NO: 50; SEQ ID NO: 51;

SEQ ID NO: 552 SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO: 54: SEQ ID NO: 555 SEQ ID NO: 5(5;

SEQ ID NO: 57; SEQ ID NO: 58; SEQ ID NO: 59; i SEQ ID NO: 122 i przy czym sekwencja łącząca (SEQ ID NO: 12;) jest zastąpiona sekwencją łączącą wybraną z grupy składającej się z:

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 120);

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 125);

SerGlyGlySerGlyGlySer (SEQ ID NO : 126);

GluPheGlyAsnMet (SEQ ID NO : 127);

GluPheGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 128);

GluPheGlyGlyAsnGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 129) i

GlyGlySerAspMetAlaGly (SEQ ID NO : B0).

20. Kompozycja, znamienna tym, że zawiera polipeptyd agonisty receptora EPO jak określono w zastrz. 1; czynnik wybrany z grupy składającej się z: GM-CSG, G-CSF, ligand c-mpl, M-CSF, IL-1, IL-4, IL-2, IL-;, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-1;, IL-15, LIF, ligand ludzki hormon wzrostu, czynnik wzrostu limfocytów B, czynnik różnicowania limfocytów B, czynnik różnicowania eozynofili i czynnik wzrostu komórek macierzystych, warianty IL-;, białka fuzyjne, agoniści receptora G-CSF, agoniści receptora c-mpl, agoniści receptora ILO i wielofunkcyjni agoniści receptora; i farmaceutycznie akceptowalny nośnik, przy czym sekwencja łącząca w tym polipeptydzie wybrana jest z grupy składającej się z: GlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 12;);

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 124);

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 125);

SerGlyGlySerGlyGlySer (SEQ ID NO : 126);

GluPheGlyAsnMet (SEQ ID NO : 127);

GluPheGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 128);

GlyGlySerAspMetAlaGly (SEQ ID NO : BO).

21;

21. Kompozycja, znamienna tym, że zawiera polipeptyd agonisty receptora EPO jak określono w zastrz. 1; czynnik wybrany z grupy składającej się z: GM-CSG, G-CSF, ligand c-mpl, M-CSF, IL-1, IL-4, IL-2, IL-;, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-1;,

IL-15, LIF, ligand 1^3/11^, ludzki hormon wzrostu, czynnik wzrostu limfocytów B, czynnik różnicowania limfocytów B, czynnik różnicowania eozynofili i czynnik wzrostu komórek m<iripr-7vctvrb ivarinntv TT -Ί Hinłlba fii^vinp aonniśri rpppntnra G-C SL atmniści rścentora — ~ ----- —---, ------- - _± c-mpl, agoniści receptora IL© i wielofunkcyjni agoniści receptora; i farmaceutycznie akceptowalny nośnik, przy czym polipeptyd agonisty receptora EPO wybrany jest z grupy składającej się z: SEQ ID NO: 1; SEQ ID NO: 2; SEQ ID NO: ;; SEQ ID NO: 4; SEQ ID NO: 5; SEQ ID NO: 6; SEQ ID NO: 7; SEQ ID NO: 8 : SEQ ID NO: 9; SEQ ID NO: 10; SEQ ID NO: 111 SEQ ID NO: 12; SEQ FD NO: 13: SEQ ID NO: 14; SEQ ID NO: 15; SEQ ID NO: 11;

189 756

SEQ ID NO: 17; SEE ID NO: 18; SEQ ID NO: 19; SEQ ID NO: 20; SEQ ID NO: 21;

SEQ ID NO: 22; SEE ID NO: 23; SEQ ID NO: 24; SEQ ID NO: 25; SEQ ID NO: 26;

SEQ ID NO: 27; SEE QD NO: 22; SEQ ID NO: 29; SEQ ID NO: 30; SEQ ID NO: 31;

SEQ ID NO: 32; SEE Π) NO: 333 SEQ ID NO: 34; SEQ ID NO: 35; SEQ ID NO: 36;

SEQ ID NO: 37; SEE QD NO: 38; SEQ ID NO: 39; SEQ ID NO: 40; SEQ ID NO: 41;

SEQ ID NO: 42; SEE ID NO: 433 SEQ ID NO: 44; SEQ ID NO: 45; SEQ ID NO: 46;

SEQ ID NO: 47; SEE ID NO: 44; SEQ ID NO: 49; SEQ ID NO: 50; SEQ ED NO: 51;

SEQ ID NO: 52; SEE Π) NO: 533 mQ ID NO: 54; SEQ ID NO: 55; SEQ ED NO: 56;

SEQ ID NO: 57; SEQ ID NO: 58; SEQ ID NO: 59; i SEQ ID NO: 122.

22. Kompozycja, znamienna tym, że zawiera polipeptyd agonisty receptora EPO jak określono w zastrz. 1; czynnik wybrany z grupy składającej się z: GM-CSG, G-CSF, ligand c-mpli M-CSF, IL-1, IL-4, IL-2, IL-3, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, LIF, ligand fit8/fik2, ludzki hormon wzrostu, czynnik wzrostu limfocytów B, czynnik różnicowania limfocytów B, czynnik różnicowania eozynofili i czynnik wzrostu komórek macierzystych, warianty IL-3, białka fuzyjne, agoniści receptora G-CSF, agoniści receptora c-mpl, agoniści receptora IL-3 i wielofunkcyjni agoniści receptora; i farmaceutycznie akceptowalny nośnik, przy czym polipeptyd agonisty receptora EPO wybrany jest z grupy składającej się z: SEQ ID NO: 1; SEQ ID NO: 2; SEQ ID NO: 3; SEQ ID NO: 4; SEQ ID NO: 5; SEQ ID NO: 6; SEQ ID NO: 7; SEQ ID NO: 8; SEQ ID NO: 9; SEQ ID NO: 10; SEQ ID NO: 11; SEQ ID NO: 12; SEE ID DNO: 113 SEQ ID NO: 14; SEQ ID NO: 15; SEQ ID NO: 16

SEQ ID NO: 17; SEE QD NO: SEQ ID NO: 11; SEQ ID NO: 20; SEQ ED NO: 21;

SEQ ID NO: 22; SEQ ID NO: 223 SEQ ID NO: 24; SEQ ID NO: 25; SEQ ED NO: 26;

SEQ ID NO: 27; SEQ Π) NO: 228 SEQ ID NO: 29; SEQ ID NO: 3^; SEQ ID NO: 31;

SEQ ID NO: 32; SEQ ID NO:33; SEQ ID NO: 34; SEQ ID NO: 35; SEQ ID NO: 36;

SEQ ID NO: 37; SEE Π) NO: 33ζ SEQ ID NO: 39; SEC} ID NO: 40; SEQ ED NO: 41;

SEQ ID NO: 42; SEE ED NO: 443 SEQ ID NO: 44; SEQ ID NO: 45; SEQ ED NO: 46;

SEO ID NO: 47; SEE HDD NO: 448 SEQ ID NO: 49; SEQ ID NO: 50; SEQ ED NO: 51;

SEQ ID NO: 32;EnQ ID NO: 53; SEQ ID NO: 54; SEQ ID NO: 55; ID NO: 56; SEQ ID NO: 57; SEQ ID NO: 58; SEQ ID NO: 59; i SEQ ID NO: 122;

przy czym sekwencja łącząca (SEQ ID NO: 123) jest zastąpiona sekwencją łączącą wybraną z grupy składającej się z:

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySrr (SEQ ID NO : 124);

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 125);

SerGlyGlySrrGlyGlySrr (SEQ ID NO : 126);

GluPheGlyAsnMet (SEQ ID NO :127);

GluPheGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 128);

GiuPhrGlyGlyAsnGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 129) i

GlyGlySrrAspMetAlaGly (SEQ ID NO : 130).

23. Zastosowanie polipeptydu agonisty receptora EPO jak określono w zastrz. 1, do wytwarzania leku do stymulowania wytwarzania komórek krwiotwórczych u pacjenta.

23-24 43-44 84-85 24-25 44-45 85-86 25-26 45-46 86-87 26-27 46-47 87-88 27-28 47-48 88-89 28-29 48-49 108-109 29-30 50-51 109-110 30-31 51-52 110-111 31-32 52-53 111-112 32-33 53-54 112-113 33-34 54-55 113-114 34-35 55-56 114-115 35-36 56-57 115-116 36-37 57-58 116-117 37-38 77-78 117-118 38-39 78-79 118-119 39-40 79-80 119-120 40-41 80-81 120-121 41-42 81-82 121-122 42-43 82-83 122-123

189 756

122-124 112^-12 2 124-125 142--28 ΟΝΟΣ 125-126 112--29

przy czym ten polipeptyd agonisty receptora EPO może być ewentualnie poprzedzony przy N-końcu przez (metioninę'¹), (alaninę'¹) lub przez (metioninę'², alaninę¹).

24. Zastosowanie polipeptydu określonego w zastrz. 1, do wytwarzania leku do leczenia zaburzeń hematopoezy na drodze modyfikacji pobranych od pacjenta erytroidalnych komórek progenitorowych przez ich hodowlę ze wspomnianym poiiprptydemi zebranie i przeszczepienie pacjentowi.

25. Zastosowanie polipeptydu określonego w zastrz. 1, do wytwarzania leku do leczenia zaburzeń hrmatopoezy na drodze modyfikacji pobranych od pacjenta, oddzielonych od innych komórek, erytroidalnych komórek progenitorowych przez ich hodowlę ze wspomnianym polipeptydem, zebranie i przeszczepienie pacjentowi.

26;

26. Zastosowanie według zastrz. 24, znamienny tym, że te erytroidalne komórki macierzyste izoluje się z krwi obwodowej.

27. Zastosowanie według zastrz. 25, znamienny tym, że te erytroidalnr komórki macierzyste izoluje się z krwi obwodowej.

28. Sposób selektywnego namnyeaniy ex vivo erytroidalnych komórek progenitorowych, znamienny tym, że:

189 756 (a) hoduje się erytroidalne komórki progenitorowe w podłożu hodowlanym zawierającym polipeptyd jak określono w zastrz. 1;

(b) zbiera się hodowane komórki.

29. Sposób selektywnego namnażania ex vivo erytroidalnych komórek progenitorowych, znamienny tym, że:

(a) oddziela się erytroidalne komórki progenitorowe od innych komórek;

(b) hoduje się oddzielone erytroidalne komórki progenitorowe w wybranym podłożu hodowlanym zawierającym polipeptyd jak określono w zastrz. 1; i (c) zbiera się hodowane komórki.

30. Sposób według zastrz. 28, znamienny tym, że te erytroidalne komórki macierzyste izoluje się z krwi obwodowej.

31;

SA·

41;

46;

51;

56;

189 756

31. Sposób według zastrz. 29, znamienny tym, że te erytroidalne komórki macierzyste izoluje się z krwi obwodowej.

32. Sposób selektywnego namnażania ex vivo erytroidalnych komórek progenitorowych znamienny tym, że:

(a) hoduje się erytroidalne komórki progenitorowe w podłożu hodowlanym zawierającym polipeptyd jak określono w zastrz. 1; i (b) zbiera się hodowane komórki, przy czym sekwencja łącząca w tym polipeptydzie wybrana jest z grupy składającej się z: GlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 123);

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 124);

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 125);

SerGlyGlySerGlyGlySer (SEQ ID No : 126);

GluPheGlyAsnMet (SEQ ID NO : 127);

GluPheGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 128);

GlupheGlyGlyAsnGlyGlyAsnMet (SEQ iD NO : 129) i

GlyGlySerAspMetAlaGly (SEQ ID NO : 130).

33. Sposób selektywnego namnażania ex vivo erytroidalnych komórek progenitorowych, znamienny tym, że:

(a) hoduje się erytroidalne komórki progenitorowe w podłożu hodowlanym zawierającym polipeptyd jak określono w zastrz. 1;

(b) zbiera się hodowane komórki, przy czym polipeptyd agonisty receptora EPO wybrany jest z grupy składającej się z:

SEQ ID NO: 1; SEQ ID NO: 2; SEQ ID NO: 3; SEQ ID NO; 4; SEQ ID NO: 55 SEQ ID NO: 6; SEQ ID NO: 7; SEQ ID NO: 8 ; SEQ ID NO : 9 ; SEQ ID NO ; 10; SEQ ID NO: 11; SEQ ID NO: SEQ ID NO: 13; SEQ IID NO: 14; SEQ ID NO: 15; SEQ ID NO: 16;

SEQ ID NNO U; SEQ ID NO: 18; SEQ ID NO: 19; SEQ ID NO: 20; SEQ ID NO: 21;

SEQ ID ΝΘ: 222 SEQ ID NO: 23; SEQ ID NO: 24; SEQ ID NO: 25; SEQ ID NO: 26;

SEQ ID NNO SEQ ID NO: 28; SEQ ID NO: 29; SEQ ID NO: 30; SEQ ID NO: 31;

SEQ ID NNO SEQ ID NO: H; SEQ ID NO: 34; SEQ ID NO: 35; SEQ ID NO: 36;

SEQ ID NNO SEQ ID NO: 38; SEQ ID NO: 39; SEQ ID NO: 40; SEQ ID NO: 41;

SEQ ID NNO 4412 SEQ ID NO: 43; SEQ ID NO: 44; SEQ ID NO: 45; SEQ ID NO: 4(5;

SEQ ID NO: SEQ ID NO: 48; SEQ ID NO: 49; SEQ ID NO: 50; SEQ ID NO: 51;

SEQ ID NNO SEQ ID NO: 53; SEQ IID NO: 54; SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO: 56;

SEQ ID NO: 57; SEQ ID NO: 58; SEQ ID NO: 59; i SEQ ID NO: 122

34. Sposób selektywnego namnażania ex vivo erytroidalnych komórek progenitorowych, znamienny tym, że:

(a) hoduje się erytroidalne komórki progenitorowe w podłożu hodowlanym zawierającym polipeptyd jak określono w zastrz 1;

SEQ ID NO: 1; SEQ ID NO: 2; SEQ ID NO: 3; SEQ ID NO: 4; SEQ ID NO: 5; SEQ ID NO: 6; SEQ ID NO: 7; SEQ ID NO: 8 ; SEQ D) NO : 9; SEQ ID NO; 10; SEQ IID NO: 111

SEQ ID NO: 112 SEQ ID NO: 13 ; SEQ D NO : 14; SEQ DD NO : 15; SEQ ID NO: 16;

189 756

SEQ ID NO: 17; SEQ ID NO: 18;· SEQ ID NO: 19; SEQ ID NO · 20· SEQ ID NO: 21SEQ ID NO: 22; SEQ ID NO: 23; SEQ ID NO: 24; SEQ ID NO · 25i SEQ ID NO: 26;

SEQ ID NO: 27; SEQ ID NO: 28!; SEQ UD NO: 29; SEQ ID NO· 30 · SEQ ID NO: 31;

SEQ ID NO: 32; SEQ ID NO: 33; SEQ ID NO: 34; SEQ ID NO · 35 · SEQ ID NO: 36;

SEQ ID NO: 37; SEQ ID NO: 38; SEQ ID NO: 39; SEQ ID NO · 40 · SEQ ID NO: 41;

SEQ ID NO: 42; SEQ ID NO: 43; SEQ ID NO: 44; SEQ ID NO · 45· SEQ ID NO: 46;

SEQ ID NO: 47; SEQ ID NO: 48; SEQ ID NO: 49; SeQ ID NO · 50 i SEQ ID NO: 51;

SEQ ID NO: 52; SEQ ID NO: 53; SEQ ID NO: 54; SEQ ID NO · ^^· SEQ ID NO: 56;

SEQ ID NO: 57; SEQ ID NO: 58; SEQ ID NO: 59; i SEQ ID NO: 122;

i przy czym przy czym sekwencja łącząca (SEQ ID NO: 123) w tym polipeptydzie jest zastąpiona sekwencją łączącą wybraną z grupy składającej się z:

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 124); GlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SeQ ID NO : 125^

SerGlyGlySerGlyGlySer (SEQ ID NO : 126);

GluPheGlyAsnMet (SEQ ID NO : 127);

GluPheGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 128);

35. Sposób selektywnego namnażania ex vivo erytroidalnych komórek progenitorowych, znamienny tym, że:

(a) oddziela się erytroidalne komórki progenitorowe od innych komórek;

(b) hoduje się oddzielone erytroidalne komórki progenitorowe w wybranym podłożu hodowlanym zawierającym polipeptyd jak określono w zastrz. 1; i (c) zbiera się hodowane komórki, przy czym przy czym sekwencja łącząca w tym polipeptydzie wybrana jest z grupy składającej się z:

GlyGlyGlySer SEQ ID NO : 123;

SerGlyGlySerGlyGlySer (SEQ ID NO : 126);

GluPheGlyAsnMet (SEQ ID NO : 127);

GluPheGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 128);

36. Sposób selektywnego namnażania ex vivo erytroidalnych komórek progenitorowych, znamienny tym, że:

(a) oddziela się erytroidalne komórki progenitorowe od innych komórek;

(b) hoduje się oddzielone erytroidalne komórki progenitorowe w wybranym podłożu hodowlanym zawierającym polipeptyd jak określono w zastrz. 1; i (c) zbiera się hodowane komórki, przy czym polipeptyd agonisty receptora EPO wybrany jest z grupy składającej się z:

SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID OO: SEQ ID NO: SEQ ID NO: SEQ ID OO:

NE:

SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO:

37. Sposób selektywnego namnażania ex vivo erytroidalnych komórek progenitorowych, znamienny tym, że:

(a) oddziela się erytroidalne komórki progenitorowe od innych komórek;

(b) hoduje się oddzielone erytroidalne komórki progenitorowe w wybranym podłożu hodowlanym zawierającym polipeptyd jak określono w zastrz. 1; i (c) zbiera się hodowlane komórki, przy czym polipeptyd agonisty receptora EPO wybrany jest z grupy składającej się z: SEQ ID NO: 1; SEQ ID NO: 2; SEQ ID NO: 3; SEQ ID NO: 4; SEQ ID NO: 5; SEQ ID NO: 6; SEQ ID NO: 7; SEQ ID NO: 8; SEQ ID NO: 9; SEQ ID NO: 10; SEQ ID NO: 11; SEQ ID NO: 12 NO: 13; SEQ ID NO: 14; SEQ ID NO: 15; SEQ ID NO: 16 NO: 17; SEQ ID NO: 18; SEQ ID NO: 19; SEQ ID NO: 20; SEQ ID NO: 21; SEQ ID NO: 22;

SEQ ID NO: 23; SEQ ID NO: 24; SEQ ID NO: 25; SEQ ID NO: 26; SEQ ID NO: 27;

SEQ ID NO: 28 SEQ ID NO: 29; SEQ ID NO: 30; SEQ ID NO; 31; SEQ ID NO: 32;

SEQ ID NO: 33; SEQ ID NO: 34; SEQ ID NO: 35; SEQ ID NO: 36; SEQ ID NO: 37;

SEQ ID NO:

38; SEQ ID NO:

39; SEQ ID NO:

40; SEQ ID NO:

41; SEQ ID NO: 42;

SEQ ID NO: 43; SEQ ID NO: 44; SEQ ID NO: 45; SEQ ID NO: 46; SEQ ID NO: 47;

SEQ ID NO: 48; SEQ ID NO: 49; SEQ ID NO: 50; SEQ ID NO: 51; SEQ ID NO: 52;

SEQ ID NO: 53; SEQ ID NO: 54; SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO: 56; SEQ ID NO: 57;

SEQ ID NO: 58; SEQ ID NO: 59; i SEQ ID NO: 122, i przy czym przy czym sekwencja łącząca (SEQ ID NO: 123) w tym polipeptydzie jest zastąpiona sekwencją łączącą wybraną z grupy składającej się z:

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 124);

GlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySer (SEQ ID NO : 125);

SerGlyGlySerGlyGlySer (SEQ ID NO : 126);

GluPheGlyAsnMet (SEQ ID NO : 127);

GluPheGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 128);

GluPheGlyGlyAsnGlyGlyAsnMet (SEQ ID NO : 129) i

GlyGlySerAspMetAlaGly (SEQ ID NO : 130).