MXPA99003874A

MXPA99003874A - Agonistas del receptor de eritropoyetina circularmente permutados

Info

Publication number: MXPA99003874A
Application number: MXPA/A/1999/003874A
Authority: MX
Inventors: A Mcwherter Charles
Original assignee: Feng Yiqing; Gd Searle & Co; A Mcwherter Charles; Summers Neena
Priority date: 1996-10-25
Filing date: 1999-04-26
Publication date: 1999-10-14

Abstract

Se describen nuevas proteínas agonistas de receptor de Eritropoyetina, ADNs que codifican las proteínas agonistas de receptor de Eritropoyetina, métodos de fabricación de las proteínas agonistas de receptor de Eritropoyetina y métodos de uno de las proteínas agonistas de receptor de Eritropoyetina.

Description

AGONISTAS DEL RECEPTOR DE ERITROPOYETINA CIRCULARMENTE PERMUTADOS SOLICITUDES RELACIONADAS La presente solicitud reclama prioridad bajo el título 35 del código E.U.A. §119 de la solicitud provisional E.U.A. con No de serie 60/034,044, presentada el 25 de Octubre de 1996.

CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente Invención se refiere a agonistas del receptor de eritropoyetina humana (EPO). Estos agonistas del receptor de EPO retienen una o más actividades de EPO nativa y pueden además mostrar actividad estimuladora mejorada de células hematopoyéticas y/o un perfil de actividad mejorado el cual puede incluir la reducción de actividades biológicas no deseables asociadas con EPO nativa y/o tienen propiedades físicas mejoradas que pueden incluir solubilidad, estabilidad y eficiencia de conformación Incrementada.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Los factores de estimulación de colonia los cuales estimulan la diferenciación y/o proliferación de las células de médula ósea han generado mucho interés debido a su potencial terapéutico para restablecer los niveles deprimidos de las células derivadas de las células totipotenciales hematopoyéticas. La eritropoyetina es una hormona a base de glicoproteína que se presenta de manera natural con un peso molecular que fue reportado primero de aproximadamente 39,000 daltons (T. Niyaki y otros, J. Biol. Chem. 252:5558-5564 (1977)). La hormona madura tiene una longitud de 166 aminoácidos y la forma "prepro" de la hormona, con su péptido ppncipal, es de 193 aminoácidos de largo (F. Lin, U.S. Patent No 4,703,008). La hormona madura tiene un peso molecular calculado a partir de su secuencia de aminoácidos de 18,399 daltons (K. Jacobs y otros, Nature 313:806-810 (1985); J.K. Browne y otros, Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 5:1693-702 (1986). Las primeras eritropoyetinas mutantes (es decir, análogos de eritropoyetina), preparados haciendo substituciones y deleciones de aminoácidos, han demostrado actividad reducida o no mejorada. Tal y como es descrito en la patente E.U.A. No 4,703,008, el reemplazamiento de los residuos tirosina en las posiciones 15, 40 y 145 con residuos fenilalanina, el remplazamiento del residuo de cisteína en la posición 7 con una histidina, la substitución de la prolina en la posición 2 con asparagma, la deleción de los residuos 2-6, la deleción de los residuos 163-166, y la deleción de los residuos 27-55 no resulta en un incremento aparente en la actividad biológica. La mutación Cis-a-His elimina la actividad biológica. Una sene de mutantes de eptropoyetina con una sola substitución de aminoácido en el residuo de asparagina 24, 38 u 83 demuestra una actividad severamente reducida (substitución en la posición 24) o exhiben degradación intracelular rápida y una falta aparente de secreción (substitución en el residuo 38 o 183). La eliminación del sitio de glicosilación enlazado a oxígeno en la sepna 126 resulta en una degradación rápida o falta de secreción del análogo de eptropoyetina (S. Dube y otros, J. Biol. Chem. 33:17516-17521 (1988). Se concluye que los sitios de glicosilación en los residuos 38, 83 y 126 son requeridos para una secreción apropiada y que los sitios de glicosilación ubicados en los residuos 24 y 38 pueden estar involucrados en la actividad biológica de la eritropoyetma madura.

La eritropoyetina desglicosilada es completamente activa en bioensayos in vitro (M. S. Dorsdal y otros, Endocrinology 116:2293-2299 (1985); patente E.U.A. No 4,703,008; E. Tsuda y otros, Eur J. Biochem. 266:20434-20439 (1991). Sin embargo, se acepta ampliamente que la glicosilación de eritropoyetina juega un papel importante en la actividad in vivo de la hormona (P. H.. Lowy y otros, Nature 185:1023-105 (1960); E. Goldwasser y C K. H , Kung, Ann. N.Y. Acad. Science 149:49-53 (1968); W. A. Lukowaky y R. H.. Painter, Can. J. Biochem. :909-917 (1972); S.W. Briggs y otros, Amer. J. Phys. 201 :1385-1388 (1974); J.C. Schooley, Exp. Hematol. 13:994-998; N. Imai y otros, Eur. J. Biochem. 194:457-462 (1990); M.S. Dordal y otros, Endocrinology 116:2293- 2299 (19859, E. Tsuda y otros, Eur. J. Biochem. 188.405-411 (1990); patente E.U.A. No 4,703,008; J.K. Brown y otros, Cold Spring Harbor Symposia on Quant. Biol. 51 :693-702 (1986); y K. Yamaguchi y otros, J. Biol. Chem. 266:20434-20439 (1991). La falta de actividad biológica in vivo de los análogos desglicosilados de eritropoyetina se atribuye a que estos son retirados rápidamente de la circulación de los animales tratados. Esta opinión es apoyada por comparación directa de la vida media en plasma de eritropoyetina gllcosilada y desglicosilada (J.C Spivak y B.B. Hoyuans, Blood 73:90-99 (1989), y M.N. Fukuda, y otros, Blood 73:84-89 (1989). La mutagénesis de los sitios de glicosilación de eritropoyetina dirigida por oligonucleótidos ha probado efectivamente la función de glicosilación pero ha fallado, aún, para suministrar una percepción hacia una estrategia efectiva para el mejoramiento significativo de las características de la hormona para sus aplicaciones terapéuticas. Se ha construido una serie de substitución de aminoácidos sencilla o mutantes de deleción, que involucran los residuos aminoácidos 15, 24, 49, 76, 78, 83, 143, 145, 160, 162, 163, 164, 165 y 166. En estos mutantes el extremo carboxilo-terminal, los sitios de glicosilación y los residuos de tirosma de eritropoyetina están alterados. Los mutantes han sido administrados a animales mientras se monitorea los niveles de hemoglobina, hematocrito y reticulocito (EP No. O 409 113). Mientras que varios de estos mutantes retienen su actividad biológica in vivo, ninguno muestra un incremento significativo en su capacidad para elevar los niveles de hemoglobina, hematocpto o reticulocito (el precursor inmediato de un eritrocito) cuando son comparados con la eritropoyetina nativa.

Se ha construido otro conjunto de mutantes para probar la función de los residuos 91-119 (dominio 1 ) y residuos 11-129 (dominio 2) (Y. Chern y otros, Eur. J. Biochem, 202:225-230 (1991)). Los mutantes del dominio 1 son degradados e inactivados rápidamente en un bioensayo in vitro mientras que los mutantes del dominio 2, en el mejor de los casos, retienen su actividad ¡n vitro. Además, estos mutantes no muestran actividad biológica in vivo aumentada en comparación a la eritropoyetina humana de tipo silvestre. Se concluye que los residuos 99-119 juegan un papel importante en la estructura de la eritropoyetlna.

La molécula de eptropoyetina humana contiene dos puentes disulfuro, uno que enlaza los residuos de cisteína en las posiciones 7 y 161 y un segundo que conecta a las cisteínas en las posiciones 29 y 33 (P.H. Lai y otros, J. Biol. Chem. 261:3116-3121 (1986)). La mutagénesis dirigida por oligonucleótidos ha sido utilizada para sondear la función de los puentes disulfuro que enlazan a las cisteínas 29 y 33 en la eptropoyetina humana. La cisteína en la posición 33 ha sido convertida a un resido prolina, que, imita a la estructura de la entropoyetina de muripa en este residuo. El mutante resultante tiene una actividad in vitro bastante reducida. La pérdida de actividad es tan severa que se concluye que el puente disulfuro entre los residuos 29 y 33 es esencial para el funcionamiento de la eptropoyetina (F.K. Lin, Molecular and Cellular Aspects of Erithropoietin and Erithropoiesis, pp. 23-36, ed. I.N. Rich, Springer-Verlag, Berlin (1987)).

La patente E.U.A No 4,703,008, por Lin, F-K. (de aquí en adelante referida como la patente '008) especula acerca de una amplia vapedad de modificaciones de EPO, incluyendo análogos de adición, de deleción y substitución de EPO. La patente '008 no indica que cualquiera de las modificaciones sugeridas podría incrementar la actividad biológica per se, aunque se establece que la deleción de los sitios de glicosilación podría incrementar la actividad de EPO producida en levaduras (ver la patente '008 en la columna 37, líneas 25-28). Además, la patente '008 especula que los análogos de EPO que tengan uno o más residuos pirosina reemplazados con fenilalanina podrían exhibir una afinidad de unión hacia el receptor incrementada o disminuida. La solicitud de patente Australiana AU-A-59145/90 por Fibi, M y otros discute también un número de proteínas EPO modificadas (muteínas de EPO). En general, se especula que la alteración de los aminoácidos 10-55, 70-85, 130-166 de EPO, en particular, las adiciones de aminoácidos básicos con carga positiva en la región carboxiio terminal tienen el propósito de incrementar la actividad biológica de EPO, La patente E.U.A. No4,835,260 por Shoemaker, C.B., discute a proteínas modificadas de EPO con substituciones de aminoácido de la metionina en la posición 54 y de asparagina en la posición 38. Se piensa que tales muteinas de EPO tienen estabilidad mejorada pero no están propuestas para exhibir cualquier incremento en la actividad biológica relativo al tipo silvestre de EPO.

El documento WO 91/05867 describe análogos de eritropoyetina humano que tienen un número mayor de sitios para la unión de carbohidratos que la entropoyetina humana, tales como EPO (Asn69), EPO (Asn125), Ser127), EPO (Thr125), y EPO (Pro124, Thr125). El documento WO94/24160 describe muteínas de eptropoyetina que tienen actividad aumentada, específicamente substituciones de aminoácido en las posiciones 20, 49, 73, 140, 143, 146, 147 y 154. El documento WO 94/25055 describe análogos de eptropoyetina, que incluyen EPO (X33, Cys139, des-Arg166) y EPO (Cys139, des-Arg166).

Reordenamiento de las secuencias de proteínas En la evolución, los reordenamientos de las secuencias de ADN juegan un papel importante en la generación de una diversidad de estructuras y funciones de proteínas. La duplicación de genes y el intercambio en el orden de los exones suministran un mecanismo importante para generar rápidamente una diversidad y por lo tanto suministrar organismos con una ventaja competitiva, especialmente debido a que la velocidad de mutación basal es baja (Doolittle, Protein Science 1:191-200, 1992). El desarrollo de métodos de ADN recombinante ha hecho posible estudiar el efecto de la transposición de la secuencia sobre la configuración, estructura y función de la proteína. La propuesta utilizada en la creación de nuevas secuencias se asemeja a aquella de pares de proteínas que se presentan naturalmente que están relacionados por reorganización lineal de las secuencias de sus aminoácidos (Cunningham, y otros, Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 76:3218-3222, 1979; Teather & Erfle, J. Bacteriol. 172: 3837-3841 , 1990; Schimming y otros, Eur, J. Biochem. 204: 13-19, 1992; Yamuchi y Minamikawa, FEBS Lett. 260: 127-130, 1991 ; MacGregor y otros, FEBS Lett. 378: 263-266, 5 1996). La primera aplicación in vitro de este tipo de reordenamientos a las proteínas fue descrito por Goldenberg y Creighton (J. Mol. Biol. 165: 407-413, 1983). Un nuevo extremo N terminal es seleccionado en un sitio interno (punto de ruptura) de la secuencia original, teniendo la nueva secuencia el mismo orden de aminoácidos que tiene el original a partir del punto de ruptura hasta que alcanza un aminoácido que está en o cerca del extremo C terminal original. En este punto la nueva secuencia es unida, ya sea directamente, o a través de una porción adicional de la secuencia (adaptador), a un aminoácido que está en o cerca del extremo N terminal opginal, y la nueva secuencia continua con la misma secuencia que la original hasta que alcanza un punto que está en o cerca del aminoácido que era el extremo N terminal al sitio d? punto de ruptura de la secuencia original, formando este residuo el nuevo extremo C terminal de la cadena. Esta propuesta ha sido aplicada a proteínas cuyo tamaño varía de 58 a 462 aminoácidos (Goldenberg & Creighton, J. Mol. Biol. 165: 407-413, 1983; Li & Coffino, Mol. Cell. Biol. 13: 2377-2383, 1993). Las proteínas examinadas han representado un intervalo amplio de clases estructurales, incluyendo proteínas que contienen predominantemente a-hélices (interleucina- 4; Kreitman y otros, Cytokine 7: 311-318, 1995), ß-lámina (interleucina- ; Horiick y otros, Protein Eng. 5: 427-431 , 1992), o mezclas de las dos (fosforibosil-antranilato isomerasa de levadura; Luger y otros, Science 243: 206-210, 1989). En estos estudios de reorganización de secuencia están representadas amplias categorías de funciones de proteína: Enzimas lisozima T4 Zhang y otros, Biochemistry 32: 12311- 12318 (1993); Zhang y otros, Nature Struct. Biol. 1 : 434-438 (1995) dihidrofolato-reductasa Buchwalder y otros, Biochemistry 31 : 1621-1630 (1994); Protasova y otros, Prot. Eng. 7: 1373- 377 (1995) ribonucleasa T1 Mullins y otros, J. Am. Chem. Soc. 116: 5529-5533 (1994); Garrett y otros Protein Science 5: 204-211 (1996) p-glucanasa de Bacillus Hahn y otros, Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 91 : 10417-10421 (1994) aspartato-transcarbamoilasa Yang & Schachman, Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 90: 11980-11984 (1993) fosforibosil-aptranilato isomerasa Luger y otros, Science 243: 206-210 (1989); Luger y otros, Prot. Eng. 3: 249- 258 (1990) pepsina/pesinógeno Lm y otros, Protein Science 4: 159-166 (1995) gliceraldehído-3-fosfato Vignais y otros, Protein Science A-deshidrogenasa 994-1000 (1995) ornitina descarboxilasa Li & Coffino, Mol. Cell. Biol. 13: 2377- 2383 (1993) fosfoglicerato deshidrogenasa Ritco-Vonsovici y otros, Biochemistry de levadura 34:16543-16551 (1995) Inhibidor de enzima inhibidor básico de tripsina Goldenberg & Creighton, J. Mol. Biol. pancreática 165: 407-413 (1983) Citocinas interleucina-1 ß Horlick y otros, Protein Eng. 5: 427-431 (1992) interleuc?na-4 Kreitman y otros, Cytokine 7: 311-318 (1995) Dominio de reconocimiento de tirosina-cinasa dominio SH3 de a-espectrina Viguera, y otros, J. Mol. Biol. 247: 670- 681 (1995 Proteína de transmembrana Omp A Koebnik & Kramer, J. Mol. Biol. 250: 617- 626 (1995) Proteína quimérica molécula de fusión de exotoxma Kreitman y otros, Proc. Nati. Acad. interleucina-4-Pse_jc.o_77?/7as Sci. U.S.A. 91: 6889-6893 (1994) Los resultados de estos estudios han sido altamente vapables. En varios casos se observó actividad, solubilidad o estabilidad termodinámica substancialmente menor (dihidrofolato reductasa de E. coií, aspartato transcarbamoilasa, fosfopbosil-antranilato isomerasa, gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa, ornitina descarboxilasa, omp A, fosfoglicerato deshidrogenasa de levadura). En otros casos la proteína de secuencia reordenada parecía tener muchas propiedades casi idénticas a las de su contra parte natural (inhibidor básico de tripsina pancreática, lisozima T4, ribonucleasa T1 , ß-gluconasa de Bacillus, interleucina-1 ß, dominio SH3 de a-espectrina, pepsinógeno, interleucina-4). En casos excepcionales, se observó un mejoramiento inesperado sobre algunas propiedades de la secuencia natural, por ejempio, la velocidad de solubilidad y reconfiguración para las secuencias del dominio SH3 de a-espectrina, y la afinidad hacia el receptor y actividad antitumor de la molécula de fusión de exotoxina de ?nterleuc?na-4-Pseudomonas transpuesta (Kreitman y otros, Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 91 : 6889-6893, 1994; Kreitman y otros, Cáncer Res. 55:3357-3363, 1995). La motivación primaria para este tipo de estudios ha sido el estudiar el papel de las interacciones a largo y corto plazo en la configuración y estabilidad de proteínas. Los reordenamientos de secuencia de este tipo convierten una subserie de interacciones que son de largo plazo en la secuencia original en interacciones a corto plazo en la nueva secuencia, y viceversa. El hecho de que muchos de estos reordenamientos de secuencia son capaces de lograr una conformación con al menos algo de actividad es una evidencia persuasiva de que la configuración de la proteína se presenta mediante múltiples rutas de configuración (Viguera, y otros, J. Mol. Biol. 247: 670-681 , 1995). En el caso del dominio SH3 de a-espectrina, el elegir nuevos extremos terminales en lugares que corresponden a vueltas ß de horquilla resultó en proteínas con una estabilidad ligeramente menor, pero que sin embargo fueron capaces de configurarse. Las posiciones de los puntos de ruptura internos utilizados en los estudios citados aquí se encontraron exclusivamente sobre la superficie de las proteínas, y están distribuidos a través de la secuencia lineal sin ninguna desviación obvia hacia los extremos o el centro (la variación en la distancia relativa desde el extremo N terminal original al punto de ruptura es de aproximadamente 10 a 80% de la longitud total de las secuencias). Los adaptadores que conectan a los extremos terminales N- y C- en estos estudios han vanado desde 0 a 9 residuos. En un caso (Yang & Schachman, Proc. Nati.

Acad. Sci. U.S.A. 90: 11984, 1993), una porción de la secuencia ha sido suprimida del segmento del extremo C terminal original, y la conexión hecha a través del extremo C terminal truncado hacia el extremo N terminal original. Los residuos hidrofílicos flexibles tales como Gly y Ser son utilizados frecuentemente en los adaptadores. Viguera, y otros (J. Mol. Biol. 247: 670-681 , 1995) comparó el unir los extremos terminales N- y C- originales con adaptadores de 3- ó 4 residuos; el adaptador de 3 residuos fue menos estable termodinámicamente. Protasova y otros (Protein Eng. 7: 1373-1377, 1994) utilizó adaptadores de 3 ó 5 residuos para conectar el extremo N terminal original de la dihidrofolato reductasa de E. coli; sólo el adaptador de 3 residuos produjo proteína en buen rendimiento.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Los agonistas del receptor de EPO humana modificados de la presente invención pueden ser representados por la fórmula: X1-(L)a'X2 En donde; a es o ó 1 ; X1 es un péptido que comprende una secuencia de aminoácido que corresponde a la secuencia de los residuos n+ 1 hasta J; X2 es un péptido que incluye una secuencia de aminoácido que corresponde a la secuencia de los residuos 1 hasta n n es un entero que varía desde 1 hasta J-1 ; y L es un adaptador.

En la fórmula anterior los residuos constituyentes de aminoácidos de EPO son numerados secuencíalmente desde 1 hasta J a partir del amino del extremo terminal carboxilo. Un par de aminoácidos adyacentes dentro de ésta proteípa pueden ser numerados n y n+1 respectivamente en donde n es un entero que varía de 1 hasta J-1. El residuo n+1 se convierte en el nuevo extremo N terminal del nuevo agonista del receptor de EPO y el residuo n se convierte en el nuevo extremo C terminal del nuevo agonista de receptor de EPO. La presente invención se refiere a polipéptidos agonistas novedosos de receptor de EPO que incluyen una secuencia de aminoácido modificada de EPO de la siguiente fórmula: AlaProProArgLeulleCysAspSerArgValLeuGluArgTyrLeuLeuGluAlaLys 10 20 GluAlaGluAsnlleThrThrGIyCysAlaGluHísCysSerLeuAsnGluAsnlleThr 30 40 ValProAspThrLysValAsnPheTyrAlaTrpLysArgMetGluValGIyGInGInAla 50 60 ValGIuValTrpGInGlyLeuAlaLeuLeuSerGIuAlaValLeuArgGlyGInAlaLeu 70 80 LeuValAsnSerSerGInProTrpGluProLeuGInLeuHisValAspLysAlaValSer 90 100 GlyLeuArgSerLeuThrThrLeuLeuArgAlaLeuGIyAlaGInLysGluAlalleSer 110 120 ProProAspAlaAlaSerAlaAlaProLeuArgThrileThrAlaAspThrPheArgLys LeuPheArgValTyrSerAsnPheLeuArgGlyLysLeuLysLeuTyrThrGIyGluAla 150 160 CysArgThrGIyAspArg 166 en donde opcionalmente 1-6 aminoácidos a partir del extremo N- terminal y 1-5 aminoácidos a partir del extremo C terminal pueden ser suprimidos de dicho polipéptido del agonista de receptor de EPO; en donde el extremo N- terminal está unido al extremo C terminal original directamente o a través de un adaptador capaz de unir el extremo N terminal al extremo C terminal y que tenga nuevos extremos N terminal y C terminal en los aminoácidos; 23-24 48-49 111-112 24-25 50-51 112-113 25-26 51-52 113-114 26-27 52-53 114-115 27-28 53-54 115-116 28-29 54-55 116-117 29-30 55-56 117-118 30-31 56-57 118-119 31-32 57-58 119-120 32-33 77-78 120-121 33-34 78-79 121-122 34-35 79-80 122-123 35-36 80-81 123-124 36-37 81-82 124-125 37-38 82-83 125-126 38-39 84-85 126-127 40-41 85-86 127-128 41-42 86-87 128-129 43-44 87-88 129-130 44-45 88-89 131-132 10 45-46 108-109 46-47 109-110 47-48 110-111 espectivamente; y dicho polipéptido agonista del receptor de EPO puede 15 opcionalmente estar inmediatamente precedido por (metionina"1), (alanina-1) o (metionina-2, alanina"1) Los puntos de ruptura más preferidos en los cuales se pueden crear nuevos extremos C terminal y N terminal son; 23-24, 24-25, 25-26, 27-28, 28-29, 29-30, 30-31 , 31-32, 32-33, 33-34, 34-35, 35-36, 36-37, 37-38, 38-39, 40-20 41 , 41-42, 42-43, 52-53, 53-54, 54-55, 55-56, 77-78, 78-79, 79-80, 80-81 , 81-82, 82-83, 83-84, 84-85, 85-86, 86-87, 87-88, 88-89,109-110, 110-111 , 111-112, 112-113, 113-114, 114-115, 115-116, 116-117, 117-118, 118-119, 119-120, 120- 121 , 121-122, 122-23, 123-124, 124-125, 125-126, 126-127, 127-128, 128-129, 129-130, 130-131 , y 131-132. Los puntos de ruptura más preferidos en los cuales se pueden crear nuevos extremos N terminal y C terminal son; 23-24, 24-25, 31-32, 32-33, 37-38, 38-39, 82-83, 83-84, 85-86, 86-87, 87-88, 125-126, 126-127, y 131-132.

Los sitios de ruptura más preferidos incluyen los sitios de glicosilación, los anticuerpos no neutralizantes, y los sitios de corte proteolítico.

Los agonistas del receptor de EPO de la presente invención pueden contener substituciones de aminoácido, tales como aquellas descritas en el documento WO 94/24160 o uno o más de los sitios de glicosilación en Asn24, Asn83, y Asn128 están cambiados a otros aminoácidos tales como pero no limitados a, deleciones y/o inserciones de Asp o Glu. También se pretende que los agonistas del receptor de EPO de la presente invención puedan también tener deleciones de aminoácido en cualquiera/o ambos de los extremos N terminal y C terminal de la proteína original y o deleciones a partir de los nuevos extremos N terminal y/o C terminal de las proteínas de secuencia reordenada en las fórmulas mostradas anteriormente. En una modalidad preferida de la presente invención el adaptador (L) que une el extremo N terminal al extremo C terminal es un polipéptido seleccionado a partir del grupo que consiste de: GlyGlyGlySer SEQ ID NO:123; GlyGlyGlySerGIyGlyGlySer SEQ ID NO: 124; GlyGlyGlySerGIyGlyGlySerGIyGlyGlySer SEQ ID NO: 125; SerGIyGlySerGIyGlySer SEQ ID NO: 126; GluPheGIyAsnMet SEQ ID NO. 127, GluPheGlyGIyAsnMet SEQ ID NO: 128; GluPheGlyGIyAsnGlyGLyAsnMet SEQ ID NO: 129, y GlyGlySerAspMetAlaGly SEQ ID NO: 130.

La presente invención abarca además agonistas del receptor de EPO humana recombinante co-administrados o en secuencia con uno o más de los factores estimulantes de colonia adicionales (CSF) que incluyen citocinas, linfocinas, interleucinas, factores de crecimiento hematopoyético los cuales se incluyen pero no están limitados a Gm-CSF, G-CSF, ligando c-mpl (conocido también como TPO o MGDF), M-CSF, IL-1 , IL-4, IL-2, IL-3, lL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9JL-10, IL-11 , IL-12, IL-13, IL-15, LIF, hormona de crecimiento humana, factor de crecimiento de células B, factor de diferenciación de células B, factor de diferenciación de eosinófilos y factor de células totipotenciales (SCF) conocido también como steel factor o ligando c-kit (referidos colectivamente en la presente como "factores"). Estas mezclas co-admmlstradas pueden estar caractepzadas por tener la actividad usual de ambos péptidos o la mezcla puede ser además caracterizada por tener una actividad biológica o fisiológica mayor que la función aditiva simple de la presencia de los agonistas del receptor de EPO o del segundo factor de estimulación de colonia sólo. La co-admmistración puede también suministrar un efecto aumentado sobre la actividad o una actividad diferente a partir de la esperada por la presencia del EPO o el segundo factor de estimulación de colonia. La co-adminlstración puede también tener un perfil de actividad mejorado el cual puede incluir la reducción de actividades biológicas no deseadas asociadas con la EPO humana nativa. En adición a la lista anterior, variantes de IL-3 mostradas en los documentos WO 94/12639 y WO 94/12638, la proteína de fusión mostrada en los documentos WO 95/21197 y WO 95/21254, los agonistas del receptor de G-CSF descritos en el documento WO-97/12977, los agonistas del receptor c-mpl descritos en el documento WO 97/12978, los agonistas del receptor IL-3 descritos en el documento WO 97/12979 y los agonistas del receptor multifuncionales mostrados en el documento WO 97/12985 pueden ser co-administrados con los po péptidos de la presente invención. Tal y como es utilizado en la presente "variantes IL-3 " se refieren a las variantes de IL-3 mostradas en el documento WO 94/12639 y WO 94/12638. Tal y como es utilizado aquí "proteína de fusión" se refiere a la proteína de fusión mostrada en los documentos WO 95/21197 y WO 95/21254. Tal y como es utilizado en la presente " agonistas del receptor de G-CSF" se refiere a los agonistas del receptor G-CSF descritos en el documento WO 97/12978. Tal y como es utilizado en la presente "agonistas del receptor c-mpl" se refiere a los agonistas del receptor c-mpl descritos en el documento WO 97/12978. Tal y como es utilizado aquí "agonistas del receptor IL-3" se refiere a los agonistas del receptor de IL-3 descritos en el documento WO 97/12979. Tal y como se utiliza en la presente "agonistas del receptor multifuncional"se refiere a agonistas del receptor mutifuncional mostrados en el documento WO 97/12985.

Además, se contempla que los usos m vitro incluirían la habilidad para estimular la activación y crecimiento de células sanguíneas y de médula ósea antes de que las células expandidas sean infundidas en los pacientes. También esta contemplado que los usos de los agonistas del receptor de EPO de la presente invención incluirán aplicaciones para banco de sangre, en donde los agonistas del receptor de EPO son dados a un paciente para incrementar el número de células rojas y productos sanguíneos retirados del paciente, antes de algún procedimiento médico, y los productos sanguíneos almacenados y transfundidos de regreso al paciente después del procedimiento médico. Adicionalmente, está contemplado que los usos de los agonistas del receptor de EPO incluirían el dar los agonistas del receptor de EPO a un donador de sangre antes de la donación de sangre para incrementar el número de células rojas, permitiendo por lo tanto al donador el donar más sangre con mayor seguridad.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La figura 1 ilustra esquemáticamente el reordenamiento de la secuencia de una proteína. El extremo N-terminal (N) y el extremo C-terminal (C) de la proteína nativa están unidos a través de un adaptador, o están unidos directamente. La proteína se abre en un punto de ruptura creando un nuevo extremo N-terminal (N nueva) y un nuevo extremo C-terminal (C nueva) lo que resulta en una proteína con una nueva secuencia de aminoácidos lineal. Una molécula reordenada puede ser sintetizada de novo como una molécula lineal y no tiene que pasar a través de los pasos de unir los extremos N-terminal y C-terminal opginales y abrir la proteína en el punto de ruptura. La figura 2 muestra un esquema del método 1 , para crear proteínas nuevas en las cuales los extremos N-terminal y C-terminal originales de la proteína nativa son unidos con un adaptador y son creados diferentes extremos N-terminal y C-terminal de la proteína. En el ejemplo mostrado el reordenamiento de la secuencia resulta en un nuevo gen que codifica una proteína con un extremo N-terminal nuevo creado en el aminoácido 97 de la proteína original, el extremo C-terminal original (a. a. 174) unido al aminoácido 11 (a. a. 1-10 están suprimidos) a través de una región del adaptador y un nuevo extremo C-terminal es creado en el aminoácido 96 de la secuencia original. La figura 3 muestra un esquema del método 2, para crear proteínas nuevas en las cuales los extremos N-terminal y C-terminal originales de la proteína nativa son unidos sin un adaptador y son creados diferentes extremos N-terminal y C-terminal de la proteína. En el ejemplo mostrado el reordenamiento de la secuencia resulta en un nuevo gen que codifica una proteína con un extremo N-terminal nuevo creado en el aminoácido 97 de la proteína original, el extremo C-termmal original (a.a. 174) unido al extremo N terminal original y un nuevo extremo C-terminal creado en el aminoácido 96 de la secuencia original.

La figura 4 muestra un esquema del método 3, para crear proteínas nuevas en las cuales los extremos N-terminal y C-terminal originales de la proteína nativa son unidos con un adaptador y son creados diferentes extremos N-termmal y C-terminal de la proteina. En el ejemplo mostrado el reordenamiento de la secuencia resulta en un nuevo gen que codifica una proteína con un extremo N-terminal nuevo creado en el aminoácido 97 de la proteína original el extremo C-terminal opginal (a.a. 174) unido al aminoácido 1 a través de una región del adaptador y un nuevo extremo C-terminal creado en al aminoácido 96 de la secuencia original. La figura 5 muestra una secuencia de ADN que codifica a EPO humana madura basado en la secuencia de Lin y otros, (PNAS 82:7580-7584, 1985).

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Los agonistas del receptor de la presente invención pueden ser útiles en el tratamiento de enfermedades caracterizadas por niveles bajos de células rojas del sistema hematopoyético. Un agonista del receptor de EPO puede ser útil en el tratamiento o prevención de anemia. Muchos fármacos pueden causar supresión de médula ósea o deficiencias hematopoyéticas. Ejemplos de tales fármacos son AZT, DDI, agentes alquilantes y antimetabolitos utilizados en quimioterapia, antibióticos tales como el cloranfenicol, penicilina, el ganciclovir, daunomicina y los fármacos a base de sulfa, fenotiazonas, tranquilizadores como el meprobamato, analgésicos tales como la aminopirina y dipirona, anti-convulsivos tales como la fenitoina o la carbamazepina, antitiroideos tales como el propiltiouracilo y metimazol y los diuréticos. Los agonistas del receptor de EPO pueden ser útiles para prevenir o tratar la supresión de médula ósea o deficiencias hematopoyéticas las cuales frecuentemente se presentan en pacientes tratados con estos fármacos. Las deficiencias hematopoyéticas pueden también presentarse como un resultado de infecciones virales, microbianas o parasíticas y como un resultado del tratamiento para enfermedades renales o insuficiencia renales, por ejemplo diálisis. El péptido de la presente puede ser útil en el tratamiento de dichas deficiencias hematopoyéticas. Otro aspecto de la presente invención suministra vectores de ADN plásmido para ser utilizado en el método de expresión de estos agonistas del receptor de EPO novedosos. Estos vectores contienen las secuencias de ADN novedosas descritas anteriormente las cuales codifican para los polipéptidos novedosos de la invención. Los vectores apropiados que pueden transformar las células hospederas capaces de expresar los agonistas del receptor de EPO incluyen vectores de expresión que comprenden secuencias de nucleótidos que codifican para los agonistas del receptor de EPO unidos a secuencias reguladoras de transcripción y traducción las cuales son elegidas de conformidad con las células hospederas utilizadas. Los vectores que incorporan las secuencias modificadas tal y como se describe anteriormente están incluidas en la presente invención y son útiles en la producción de los polipéptidos del agonista de receptor de EPO modificado. El vector utilizado en el método contiene además secuencias reguladoras seleccionadas en asociación operativa con las secuencias codificadoras de ADN de la invención y capaces de dirigir la replicación y expresión de las mismas en las células hospederas seleccionadas.

Como otro aspecto de la presente invención, se proporciona un método para producir la familia novedosa de agonistas del receptor de EPO humano. El método de la presente invención involucra el cultivar células apropiadas o líneas celulares, las cuales han sido transformadas con un vector que contiene una secuencia de ADN que codifica para la expresión del polipéptido del agonista de receptor de EPO novedoso. Las células apropiadas o líneas celulares pueden incluir vanas cepas de bacterias tales como E. Coli, levaduras, células de mamífero, o pueden utilizarse células de insectos como células hospederas en el método de la presente Invención. Otros aspectos de la presente invención son métodos y composiciones terapéuticas para tratar las condiciones referidas anteriormente. Tales composiciones incluyen una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más de los agonistas del receptor de EPO de la presente invención en una mezcla con un vehículo farmacéuticamente aceptable. Esta composición puede ser administrada ya sea parenteralmente, intravenosamente o subcutáneamente. Cuando es administrada, la composición terapéutica para ser utilizada en esta invención esta preferiblemente en la forma de una solución acuosa parenteralmente aceptable libre de pirógenos. La preparación de una solución de proteína parenteralmente aceptable como tal, tomando en consideración el pH, la isotonicidad, la estabilidad y aspectos similares, esta dentro de el campo de la técnica.

La administración estará en acuerdo con el régimen de dosificación que será determinado fácilmente por el experto basado en la actividad específica in vivo del análogo en comparación con la eritropoyetina humana y basándose en lo que se sabe en la técnica concerniente a la administración de eritropoyetina humana para inducir la entropoyesis y el tratamiento de diversas condiciones, tales como anemia, en humanos, incluyendo anemia en pacientes que sufren de insuficiencia renal. La dosis de un análogo de la invención puede variar un poco de individuo a individuo, dependiendo del análogo en particular y su actividad específica in vivo, la ruta de administración, la condición médica, la edad, peso o sexo del paciente, la sensibilidad del paciente al análogo o componentes del vehículo, y otros factores los cuales el médico que lleva el caso será capaz de tomar fácilmente en consideración. Respecto a los usos terapéuticos de los análogos de la invención, se hace referencia a las patentes E.U.A. Nos 4,703,008 y 4,835,260; ver también el capítulo sobre eritropoyetina humana [des-Arg126] (recombinante) en las páginas 591-595 de Physicians' Desk. Las preparaciones comercialmente disponibles de eptropoyetina humana ]des-Arg166] recombinante tienen 2,000, 3,000, 4,000, o 10,000 unidades de la glicohormona por mililitro en solución acuosa libre de conservador con 2.5 mg/mL de albúmina sérica humana, 5.8 mg/mL de citrato de sodio, 5.8 mg/mL de NaCI, y 0.06 mg/mL de ácido cítrico, pH 6.9 (+/-0.3). La EPO producida en forma recombinante ha probado ser especialmente útil para el tratamiento de pacientes que sufren de producción deteriorada de células rojas (Physiclans Desk Reference (PDR). Edición 1993, pp 602-605). La EPO recombinante ha probado ser efectiva en el tratamiento de anemia asociada con insuficiencia renal crónica y en individuos infectados con HIV que sufren de niveles de EPO endógeno disminuidos relacionados a la terapia con Zidovudine (AZT) (See PDR, edición 1993 , en la página 6002). Las modificaciones de la proteína de EPO que mejorarían su utilidad como una herramienta para el diagnóstico o tratamiento de trastornos de la sangre son ciertamente deseables. En particular, las formas modificadas de EPO que exhiben actividad biológica aumentada serían más efectivas y eficientes que la EPO nativa en ia preparación de la terapia indicada cuando es necesario administrar EPO al paciente, permitiendo la administración menos frecuente y/o a una dosis menor. La administración de cantidades reducidas de EPO reduciría además presumiblemente el riesgo de efectos adversos asociados con el tratamiento EPO, tal como hipertensión, convulsiones, dolores de cabeza, etc. (Ver PDR, edición 1993, en las páginas 603-604). Los agonistas del receptor de EPO de la presente invención pueden tener además estabilidad aumentada y por lo tanto vida media incrementada lo cual podría permitir la producción de una forma no glicosilada de EPO en un sistema de expresión bacteriano a un costo mucho más bajo. Debido a su vida media incrementada esta forma no glicosilada de EPO podría tener una actividad in vivo incrementada en comparación con la EPO desglicosilada. El método terapéutico y las composiciones pueden también incluir la co-administración con otros factores hematopoyéticos. Una lista no excluyente de otras hematopoyetínas apropiadas, factores estimulantes de colonia (CSF) e ipterieucinas para la co-administración simultánea o en sene con los polipéptidos de la presente invención incluyen GM-CSF, G-CSF, ligando c-mpl (también conocido como TPO o MGDF), M-CSF, IL-1, IL-4, IL-2, IL-3, IL-5, IL 6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11 , IL-12, IL-13, IL-15, LIF, hormona de crecimiento humana, factor de crecimiento de células B, factor de diferenciación de células B, factor de diferenciación de eosinófilos y factor de células totipotenciales (SCF) también conocido como steel factor o ligando c-kit (colectivamente referidos en la presente como "factores") o combinaciones de los mismos. En adición a la lista anterior, las variantes de IL-3 mostradas en el documento WO 94/12639 y WO 94/12638, la proteína de fusión enseñada en el documento WO 95/21197 y WO 95/21254 G-CSF, los agonistas del receptor de c-mpl descritos en el documento WO 97/12977, los agonistas del receptor WO 97/12978 IL-3 descritos en el documento WO 97/12979, y los agonistas del receptor multi-funcional mostrados en el documento WO 97/12985 pueden ser co-administrados con los polipéptidos de la presente invención. Los agonistas del receptor de EPO de la presente invención pueden ser útiles en la movilización de progenitores hematopoyéticos y células totipotenciales en sangre periférica. Los progenitores obtenidos de sangre periférica han sido demostrados como efectivos en la reconstitución de pacientes en la preparación de transplante autólogo de médula. Los agonistas del receptor de EPO de la presente invención pueden también ser útiles en la expansión ex vivo de progenitores hematopoyéticos. Los factores de estimulación de colonia (CSF) tales como G- CSF, han sido administrados solos, co-administrados con otros CSF, o en combinación con transplantes de médula ósea subsecuentes a la quimioterapia con dosis elevadas para tratar la anemia, neutropenia y trombocitopenia los cuales son frecuentemente resultado de tales tratamientos. Otro aspecto de la invención suministra métodos de sostenimiento y/o expansión de células precursoras hematopoyéticas las cuales incluyen el Inocular las células en un recipiente de cultivo que contiene un medio de cultivo que ha sido condicionado por exposición a una línea celular estromática tal como HS-5 (WO 96/02662, Roecklein y Torok-Strob, Blood 85:997-1105, 1995) que ha sido suplementada con un agonista del receptor de EPO de la presente invención.

Determinación del adaptador La longitud de la secuencia de aminoácido del adaptador puede ser seleccionada empíricamente o con la dirección proveniente de la información estructural, o utilizando una combinación de las dos propuestas. Cuando la información estructural no está disponible, pueden prepararse una serie de adaptadores pequeños para probarlos utilizando un diseño cuya longitud es variada para abarcar debidamente un intervalo de 0 a 50 A y cuya secuencia es elegida para que sea adecuadamente consistente con la exposición de la superficie (características hidrofílicas, Hopp & Woods, Mol. immunol. 20:483-489, 1983; Kyte & Doolittle, J. Mol. Biol. 157:105-132, 1982; área de superficie expuesta al solvente Lee & Richards, J. Mol. Biol. 55:379-400, 1971 ) y la capacidad de adoptar la conformación necesapa sin desordenar la configuración del agonista del receptor de EPO (conformacionalmente flexible; Karplus & Schuiz, Naturwissenschafíen 72:212-213, (1985). Considerando un promedio de traducción de 2.0 a 3.8 A por residuo, esto significaría que la longitud que se prueba estaría entre 0 y 30 residuos, siendo una longitud de 0 a 15 residuos el intervalo preferido. Ejemplo de tales series empíricas sería el construir adaptadores utilizando una secuencia de cassette tal como Gly-Gly-Gly-Ser repetido n veces, en donde n es 1 , 2, 3 o 4. Aquellos expertos en la técnica reconocerán que hay varias secuencias como tales que varían en longitud o composición y que pueden servir como adaptadores con la consideración primaria de que ninguno sea excesivamente corto o excesivamente largo (cf., Sandhu, Critical Rev. Biotech. 12:437-462, 1992); si estos son muy largos, los efectos entrópicos probablemente desestabilizarán la configuración tridimensional, y podría además hacer que la configuración sea cinéticamente impráctica, y si son muy cortos, probablemente estos desestabilizarán la molécula debido a la tensión de torsión o estérica. Aquellos expertos en el análisis de información estructural de proteína reconocerán que utilizando la distancia entre los extremos de cadena, definida como la distancia entre los alfa-carbonos c, se puede definir la longitud de la secuencia que se utilizará, o al menos para limitar el número de posibilidades que deben ser probadas en una selección empírica de adaptadores. Los expertos reconocerán también que algunas veces es el caso en que las posiciones de los extremos de la cadena polipeptídica están mal definidos en modelos estructurales obtenidos a partir de datos de difracción de rayos x o de espectroscopia de resonancia magnética nuclear, y que cuando es cierto, esta situación será por lo tanto necesariamente tomada en cuenta para estimar propiamente en forma debida la longitud del adaptador requerido. A partir de aquellos residuos cuyas posiciones están bien definidas se seleccionan los residuos que son cercanos en su secuencia a los extremos de la cadena, y la distancia entre los alfa carbonos c es utilizada para calcular una longitud aproximada para un adaptador entre ellos. Utilizando la longitud calculada como una guía, los adaptadores con un intervalo de número de residuos (calculados utilizando 2 a 3.8 A por residuo) son después seleccionados. Estos adaptadores pueden estar compuestos de la secuencia original, acortados o alargados como sea necesario, y cuando son alargados los residuos adicionales pueden ser elegidos para ser flexibles e hidrofílicos tal y como se describió anteriormente; u opcionalmente la secuencia original puede ser substituida para utilizar una sene de adaptadores, siendo un ejemplo la propuesta de cassette "Gly-Gly-Gly-Ser" mencionada anteriormente; u opcionalmente una combinación de la secuencia original y una secuencia nueva que tenga la longitud total apropiada puede ser utilizada.

Determinación de los extremos amino-terminal y carboxi-terminal de los agonistas del receptor de EPO Las secuencias de agonistas de receptor de EPO capaces de configurarse en estados biológicamente activos pueden prepararse mediante la selección apropiada de las posiciones iniciales (extremo amino-terminal) y finales (extremo carboxi-terminal) desde dentro de la cadena polipeptídica original mientras que se utiliza la secuencia del adaptador tal y como se describió anteriormente. Los extremos amino terminal y carboxi terminal son elegidos desde dentro de un fragmento común de la secuencia, referida como la región de punto de ruptura, utilizando las guías descritas posteriormente. De esta manera se genera una nueva secuencia de aminoácido mediante la selección de los extremos amino-terminal y carboxi-terminal desde dentro de la misma región del punto de ruptura. En muchos casos la selección de los nuevos extremos terminales será de forma tal que la posición original del extremo carboxi terminal será inmediatamente precedida por la del extremo amino terminai. Sin embargo, aquellos expertos en la técnica reconocerán que las selecciones de los extremos terminales en cualquier parte dentro de la región puede funcionar, y que estos efectivamente conducirán ya sea a deleciones o adiciones de las porciones amino o carboxilo de la nueva secuencia. Es un principio central de la biología molecular que la secuencia de aminoácidos primaria de una proteína dicta la conformación hacia la estructura tridimensional necesaria para la expresión de su función biológica. Los expertos en la técnica conocen métodos para obtener e interpretar información estructural tridimensional utilizando difracción de rayos x de cristales de proteína individual o espectroscopia de resonancia magnética nuclear de soluciones de proteína. Ejemplos de información estructural que son relevantes para la identificación de las regiones del punto de ruptura incluyen la localización y tipo de estructura secundaria de la proteina (hélices alfa y 3-10, laminas ß paralelas y antiparalelas, reversiones y vueltas de cadena, y lazos; Kabsch & Sander, Bíopolymers 22:2577-2637, 1983; el grado de exposición al solvente de los residuos de aminoácido, el grado y tipo de interacciones de los residuos uno con otro (Chothia, Ann. Rev. Biochem. 53:537-572; 1984) y la distribución estática y dinámica de las conformaciones a lo largo de la cadena polipeptídica (Alber & Mthews, Methods Enzymol. 154:511-533, 1987). En algunos casos se sabe de información adicional acerca de la exposición al solvente de los residuos; un ejemplo es un sitio de unión de post-traducción de carbohidrato el cual está necesariamente sobre la superficie de la proteína. Cuando la información estructural experimental no está disponible, o no es fácil de conseguir, se dispone de métodos para analizar la secuencia de aminoácidos primaria para hacer predicciones adecuadas en cuanto a la estructura terciaria y secundaria de la proteína, la accesibilidad hacia el solvente y la presencia de vueltas y lazos. Los métodos bioquímicos también se aplican algunas veces para determinar empíricamente la posición de la superficie cuando los métodos estructurales directos no son confiables; por ejemplo, utilizando la identificación de sitios de escisión de cadena, seguida de la proteólisis limitada para inferir la posición de la superficie (Gentile & Salvatore, Eur. J. Biochem. 218:603-621 , 1993). Utilizando de esta forma la información estructural experimentalmente derivada o métodos predictivos (v.gr, Srinivisan & Rose Proteins: Struct, Funct. & Genetics, 22 91-99, 1995), se inspecciona la secuencia de aminoácidos parenterales se para clasificar las regiones con base en si son o no integrales al mantenimiento de la estructura secundaria y terciaria. La ocurrencia de secuencias entre las regiones que son conocidas por involucrarse en la estructura secundaria periódica (hélices alfa y 3-10, hojas beta paralelas y antiparalelas) son regiones que se deben evitar. Similarmente, las regiones de secuencia de aminoácidos que se observan o se predicen que van a tener un bajo grado de exposición solvente son más propensas a ser parte del llamado núcleo hidrofóbico de la proteína y también se deben evitar para la selección para los grupos terminales amino y carboxilo. Por el contrapo, dichas regiones que son conocidas o se predice que van a estar en la vuelta o lazo de superficie y especialmente aquellas regiones que se sabe que no requieren actividad biológica, son los sitios preferidos para la ubicación de los extremos de la cadena polipeptídica. Los estiramientos continuos de la secuencia de aminoácidos que son preferidos con base en los criterios anteriores se conocen como una región de punto de ruptura.

MATERIALES Y MÉTODOS Método de ADN recombinante A menos de que se afirme lo contrario, todos los compuestos químicos especiales se obtuvieron de Sigma Co., (St. Louis, MO). Las endonucleasas de restricción y ligasa de ADN T4 se obtuvieron de New Engiand Biolabs (Beveriy, MA) o Boehringer Mannheim (Indianapolis, IN).

Transformación de las cepas E. Coli Las cepas E. Coli, tales como la DH5a™ (Life Technologies, Gaithersburg, MD) y TG1 (Amersham Corp., Arlington Heights, IL) se usan para la transformación de reacciones de ligación y son la fuente del ADN plasmídico para las células de mamífero de transfección. Las cepas E. coli, tales como MON105 y JM101 , se pueden usar para expresar al agonista de receptor EPO de la presente invención en el citoplasma o espacio periplásmico. MON105 ATCC#55204: F-, lamda-, IN(rmD, rrE), I, rpoD+, rpoH358. DH5a™ F-, ph?80dlacZdeltaM15, delta(lacZYA-argF)U169, deoR, recAl, endAl, hsdR17(rk-, mk+), phoA, supE44lamda-, thi-l, gyrA96, relAl. TGI: delta(lac-pro), supE, thi-l, hsdD5/F' (traD36, proA+B+, laclq, lacZdeltaM15). Las células de eficiencia de subclonación DH5a™ se compran como células competentes y están listas para la transformación utilizando el protocolo del fabricante, mientras que las cepas E. coli TGI y MON 105 se vuelven competentes para aceptar al ADN, utilizando un método de CaCI. Típicamente, de 20 a 50 ml de células se cultivan en el medio LB (1% de Bacto-triptona 0.5% de extracto de bacto-levaudra, 150 mM de NaCI) a una densidad de aproximadamente 1.0 de unidad de densidad óptica a 600 nanómetros (OD600) como se midió por un espectrofotómetro Baush & Lomb Spectronic (Roschester, NY). Las células se recolectaron por centrifugación y se resuspendieron en un volumen de cultivo de un quinto de solución de CaC (50 mM de CaCI2, 10 M de tris-Cl, pH 7.4) y se mantuvieron a 4°C durante 30 minutos. Las células se recolectaron de nuevo mediante centrifugación y se resuspendieron en un volumen de cultivo de un décimo de solución de CaCb. El ADN ligados se agregó a 0.2 mL de dichas células y las muestras se mantuvieron a 4°C durante 1 hora. Las muestras se cambian a 42° durante 2 minutos y un mL de Lb se agrega antes de agitar las muestras a 27*C durante 1 hora. Las células de estas muestras se esparcen en placas (medio LB más 1.5% de Bacto-agar) conteniendo ampicilina (100 microgramos/mL, ug/mL) al seleccionar los transformadores resistentes a la ampicilina, o espectinomicina (75 ug/mL) cuando se seleccionan para los transformadores resistentes a la espectonimicina. Las placas se incuban durante la noche a 37°C. Se recolectan las colonias únicas, se cultivan en LB complementado con un antibiótico adecuado durante 6-16 horas a 37°C con agitación. Las colonias se recolectan e inoculan en LB más un antibiótico adecuado (100 ug/mL de ampicilina o 75 ug/mL de espectonimicina) y se cultivan a 37°C con agitación Antes de cosechar los cultivos, se analiza 1 ul de células mediante PCR para la presencia de un gel agonista de receptor EPO. La PCR se lleva a cabo utilizando una combinación de iniciadores que fijan al gen y/o vector agonista del receptor EPO. Después de que se completa la PCR, se agrega el colorante de carga a la muestraseguido de la electroforesis como se descpbe anteriormente. Un gen se liga al vector cuando se observa un producto PCR del tamaño esperado.

MÉTODOS PARA LA CREACIÓN DE GENES CON EL NUEVO GRUPO N- TERMINAL/C-TERM1NAL Método I.- Creación de genes con el nuevo qrupo N-terminal/C-terminal que contiene una región adaptadora. Los genes con el nuevo grupo N-terminal/C-terminal que contienen una región adaptadora que separa al grupo C-terminal y N-terminal originales se pueden hacer esencialmente siguiendo el método descrito en L. S. Mulllns, y otros J. Am. Chem. Soc. 116, 5529-5533 (1994). Múltiples pasos de las amplificaciones de reacción de cadena de plimerasa (PCR) se usan para reorganizar la secuencia de ADN que codifica la secuencia de aminoácidos primaria de la proteína. Los pasos se ilustran en la figura 2. En el primero paso, la serie iniciadora ("Nuevo inicio" y "Inicio de adaptador") se usa para crear y amplificar, desde la secuencia de gen original, el fragmento de ADN ("Inicio de fragmento") que contiene la secuencia que codifica a la nueva porción del grupo N-terminal de la nueva proteína seguida por el adaptador que conecta los extremos C-terminal y N-terminal de la proteína original. En el segundo paso, el conjunto iniciador ("Nuevo interruptor" e "Interruptor de adaptador") se usa para crear y amplificar, desde la secuencia de gen original, el fragmento de ADN ("Interruptor de fragmento") que codifica al mismo adaptador como se usa anteriormente, seguido de la nueva porción C-terminal de la nueva proteína. Los iniciadores de "Nuevo inicio" y "Nuevo interruptor" se diseñan para incluir los sitios de reconocimiento de enzima de restricción adecuados que permiten la clonación del nuevo gen en los plásmidos de expresión. Las condiciones de PCR típicas son un ciclo de fusión de 65°C durante 2 minutos, 25 ciclos de desnaturalización a 94°C durante 1 minuto, 50°C de fijación durante 1 minuto y 72°C de extensión durante 1 minuto; más 1 ciclo 5 de 72°C de abstención durante 7 minutos. Se utiliza un equipo de reactivos de núcleo Perkín Elmer GeneAmp PCR. Una reacción de 100 ul contiene 100 pmoles de cada iniciador y un ug de ADN fijado; y un regulador de pH de 1x PCR, 200 uM dGTP, 200 uM dATP, 200 uM dTTP, 200 uM dCTP, 2.5 unidades de polimerasa de ADN AmpliTaq y 2 mM de MgCI?. Las reacciones de PCR se llevan a cabo en un cilcador térmico de ADN modelo 480 (Perkin Elmer Corporation, Norwalk, CT). El "Inicio de fragmento" e "Interruptor de fragmento", los cuales tienen una secuencia complementaria en la región adaptadora y la secuencia de codificación para los dos aminoácidos en ambos lados del adaptador, se unen en un tercer paso de PCR para hacer que el gen de longitud total codifique a la nueva proteína. Los fragmentos de ADN "Inicio de fragmento" e "Interruptor de fragmento" se resuelven en 1 % de gel de TAE marcado con bromuro de etidio y aislado utilizando un equipo de extracción de gei Qiaex (Aiagen). Dichos fragmentos se combinan en cantidades equimolares, calentados a 70°C durante 10 minutos y enfriados lentamente para permitir que se templen a través de su secuencia compartida en el "Inicio adaptador" y el "Interruptor adaptador". En el tercer paso de PCR, los iniciadores "Nuevo inicio-" e "Interruptor nuevo" se agregan a los fragmentos fijados para crear y amplificar el gen del nuevo grupo N-terminal/C-terminal de longitud total. Las condiciones de PCR típicas son un ciclo de fusión a 95°C durante 2 minutos; 25 ciclos de desnaturalización a 94°C durante 1 minuto, fijación a 60°C durante 1 minuto y extensión a 72°C durante 1 minuto; más un ciclo de extensión a 72°C durante 7 minutos. Se usa un equipo de reactivos del núcleo GeneAmp PCR. Una reacción de 100 ul contiene 100 pmoles de cada iniciador y aproximadamente 0.5 ug de ADN; y un regulador de pH 1x PCR, 200 uM dGTP, 200 uM DATP, 200 uM dTTP, 200 uM dCTP, 2.5 unidades de polimeraza de ADN AmpliTaq y 2 mM de MgCI2. Las reacciones de PCR se purifican utilizando un equipo Wizard PCR Preps (Promega).

Método II.- Creación de genes con el nuevo qrupo N-terminal/C-terminal sin una región adaptadora Se pueden hacer los nuevos genes del grupo N-terminal/C-terminal sin un adaptador que una al grupo N-terminal y C-terminal originales utilizando dos pasos de amplificación de PCR y una ligación de extremo rasurado. Los pasos se ilustran en la figura 3. En el primer paso, el conjunto iniciador ("Nuevo inicio" y "Inicio de P-bl") se usa para crear y amplificar, desde al secuencia de gen original, el fragmento de ADN ("Inicio de fragmento") que contiene la secuencia que codifica a la nueva porción del grupo N-terminal de la nueva proteína. En el segundo paso, la serie iniciadora ("Nuevo interruptor" e ""Interruptor de P-bl") se usa para crear y amplificar, desde la secuencia de gen original, al fragmento de ADN ("Interruptor de fragmento") que contiene la secuencia que codifica a la nueva porción del grupo C-terminal de la nueva proteina Los iniciadores de "nuevo inicio' y nuevo interruptor' se diseñan para incluir los sitios de restricción adecuados que permiten la clonación del nuevo gen en los vectores de expresión Las condiciones de PCR típicas son un ciclo de fusión a 95°C durante 2 minutos, 25 ciclos de desnaturalización a 94°C durante un minuto, fijación a 50°C durante 45 segundos y extensión a 72°C durante 45 segundos La polimerasa Deep Vent (New Englapd Biolabs) se utiliza para reducir la ocurrencia de proyecciones hacia afuera en condiciones recomendadas por el fabricante Los iniciadores de "inicio de P-bl ' e "interruptor de P-bl ' se fosfoeplasan en el extremo 5' para ayudar en la ligación del extremo rasurado subsecuente del 'inicio de fragmento" e "interruptor de fragmento ' entre si Una reacción de 100 ul que contienen 50 pmoles de cada iniciador y un ug de ADN templado, y regulador de pH 1x Vent (New England Biolabs), 300uM dGTP, 300 uM dATP, 300 uM dTTP, 300 uM dCTP, y una unidad de polimerasa de Deep Vent Las reacciones de PCR se llevan a cabo en un ciclador térmico de ADN modelo 480 (Perkín Elmer Corporation, Norwaik, CT) Los productos de reacción de PCR se purifican utilizando un equipo Wizard PCR Preps (Promega) Los iniciadores están diseñados para incluir los sitios de reconocimiento de enzima de restricción adecuados que permiten la clonación del nuevo gen en los vectores de expresión Típicamente el "inicio de fragmento" se diseña para crear un sitio de restricción de Ncol, y el 'interruptor de fragmento" se diseña para crear un sitio de restpcción Hindlll Las reacciones de digestión de restricción se purifican utilizando un equipo de sistema de limpieza de ADN Magic (Promega) El inicio e interruptor de fragmentos se resuelven en 1 % de gel TAE, teñidos con bromuro de etidio y aislados utilizando un equipo de extracción de gel Qiaex (Qiagen). Dichos fragmentos se combinan y se templan a los extremos del par de base - 3800 del fragmento de vector Ncol/Hindlll de pMON3934 al calentarse a 50°C durante 10 minutos y permitir el enfriamiento lento. Los tres fragmentos se ligan utilizando ligasa de ADN T4 (Boehringer Mannheim). El resultado es un plásmido que contiene el nuevo gen del grupo N-terminal/C-termipal de longitud total. Una porción de reacción de ligación se usa para transformar la cepa E. coli de las células DH5a (Life Technologies, Gaithersburg, MD). El ADN plasmídico se purifica y se confirma la secuencia como con anterioridad.

Método lll. Creación de nuevos genes dß los grupos N-terminal/C-terminal mediante el método de duplicación tándem. Los nuevos genes de ios grupos N-terminal/C-terminal se pueden hacer con base en el método descrito en R. A. Horlick, y otros Protein Erig. 5:427-431 (1992). La amplificación de reacción de cadena de polimerasa (PCR) de los nuevos genes de los grupos N-terminal/C-terminal se lleva a cabo utilizando un ADN templado duplicado en tándem. Los pasos se ilustran en la figura 4. El ADN templado duplicado en tándem se crea mediante clonación y contiene dos copias del gen separadas mediante la secuencia de ADN que codifica un adaptador que conecta a los extremos C- y N- terminai opginales de las dos copias del gen. Las series de iniciadores específicas se usan para crear y amplificar un nuevo gen de los grupos N-terminal/C-terminal de longitud total a partir dei ADN templado duplicado en tándem. Dichos iniciadores se diseñan para incluir los sitios de restricción adecuados que permiten la clonación del nuevo gen en los vectores de expresión. Las condiciones de PCR típicas son un ciclo de fusión a 95°C durante 2 minutos; 25 ciclos de desnaturalización a 94°C durante 1 minuto, la fijación a 50CC durante 1 minuto y extensión a 72°C durante 1 minuto; más un ciclo de extensión a 72CC durante 7 minutos. Se usa un equipo de reactivos de núcleo Perkin Elmer GeneAmp PCR (Perkin Elmer Corporation, Norwaik, CT). Una reacción de 100 ul contiene 100 pmoles de cada iniciador y un ug de ADN templado; y un regulador de pH de 1x PCR, 200 uM dGTP, 200 uM dATP, 200 uM dTTP, 200 uM dCTP, 2.5 unidades de polimerasa de ADN AmpliTaq y 2 mM de MgCI?. Las reacciones de la PCR se llevan a cabo en un ciclador térmico de ADN modelo 480 (Perkip Elmer Corporation, Norwaik, CT). Las reacciones de la PCR se purifica utilizando un equipo Wizard (Promega).

Aislamiento y caracterización de ADN El ADN plasmídico se puede aislar mediante un número de métodos diferentes y utilizando equipos comercialmente disponibles conocidos para los expertos en la técnica. Algunos de dichos métodos se muestran en la presente. El ADN plasmídico se aisla utilizando el equipo Promega Wizard™ Miniprep (Madison, Wl), los equipos de aislamiento Qiagen QIAwell Plasmid (Chatsworth, CA) o el equipo Qiagen Piasmid Midi. Dichos equipos siguen el mismo procedimiento general para el aislamiento del ADN plasmídico. En conclusión, las células se aglomeran mediante centrifugación (5000 x g), el ADN plasmídico se libera con tratamiento de NaOH/ácido secuencial, y el residuo de células se remueve mediante centrifugación (10000 x g). el sobrenadante (conteniendo al ADN plasmídico) se carga en una columna que contiene una resina aglutinante de ADN, la columna se lava, y el ADN plasmídico se lava con TE. Después de tamizar las colonias con el plásmido de interés, las células de E. coli se inoculan en 50-100 mLs de LB del antibiótico más adecuado para el cultivo durante la noche a 37°C en un incubador de aire con agitación. El ADN plasmídico purificado se usa para la secuencia de ADN, para otra restricción de la digestión de enzima, subclonación adicional de los fragmentos de ADN y transfección en un mamífero, E. coli y otras células.

Confirmación de secuencia El ADN plasmídico purificado se resuspende en dH20 y se cuantifica mediante la medición de absorción a 260/280 nm en un espectrómetro Bausch y Lomb Spectronic 601 UV. Las muestras de ADN se someten a secuencia utilizando los equipos terminadores de química de secuencia ABl PRISM™ DyeDeoxy™ (Applied Biosystems División of Perkin Elmer Corporation, Lincoln City, CA) (número de parte 401388 ó 402078) de acuerdo con el protocolo sugerido por los fabricantes usualmente modificado mediante la adición de 5% de DMSO a la mezcla de secuencia. Las reacciones de secuencia se llevan a cabo en un ciclador térmico de ADN modelo 480 (Perkip Elmer Corporation, Norwalk, CT) siguiendo las condiciones de amplificación recomendadas. Las muestras se purifican para remover el exceso de terminadores decolorantes con columnas giratorias Centri-Sep™ (Princeton Separations, Adelphia, NJ) y liofilizadas. Las reacciones de secuencia etiquetadas de colorante fluorescente se resuspenden en formamida desionizada, y se someten a secuencia al desnaturalizar 4.75% de geles de urea de 8M de poliacrilamida utilizando un secuenciador de ADN automático ABl Model 373A. El recubrimiento de los fragmentos de secuencia de ADN se analizan y unen en revestimientos de ADN maestro utilizando un programa de análisis de ADN Sequencher v2.1 (Gene Codes Corporation, Ann Arbor, Ml).

EXPRESIÓN DE AGONISTAS DE RECEPTOR EPO EN CÉLULAS DE MAMÍFERO Transfección/producción de célula mamífera dß medios acondicionados. La línea de célula BHK-21 se puede obtener del ATCC (Rockville, MD). La célula se cultiva en un medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM/alta glucosa), complementado con 2mM (mM) de L-glutamina y 10% de suero bovino fetal (FBS). Dicha formulación se designa como medios de crecimiento BHK. Los medios selectivos son los medios de crecimiento BHK complementados con 453 unidades/mL de higromicina B (Calbiochem, San Diego, CA). La línea de célula BHK-21 se transfectó establemente con anterioridad con la proteína VP16 de transactivación HSV, la cual transactiva el promotor IE110 encontrado en el pMON3359 plasmídico (véase Hippenmeyer y otros, Bio/Technology, pp. 1037- 1041 , 1993) La proteina VP16 controla la expresión de genes insertados detras del promotor IE110 Las células BHK-21 que expresan a la proteína VP16 de transactivación se designan BHK-VP16 El pMON1118 plasmidico (véase Highkm y otros, Poultry Sci , 70 970-981 , 1991 ) expresa al gen de resistencia de higromicipa del promotor SV40 Un plasmido similar está disponible de ATCC, pSV2-hph Las células BHK-VP16 se siembran en una caja de petp de cultivo de tejido de 60 milímetros (mm) en células de 3 X 105 por caja durante 24 horas antes de la transfección Las células se transfectan durante 16 horas en 3 mL de "OPTIMEM"™ (Gibco-BRL, Gaithersburg, MD) conteniendo 10 ug de ADN plasmídico conteniendo el gen de interés, 3 ug de plasmido de resistencia de higromicina, pMON1118, y 80 ug de Gibco-BRL "LIPOFECTAMINE"™ por caja El medio subsecuentemente se aspira y se reemplaza con 3 mL de medio de crecimiento 48 horas después de la transfección, el medio de cada caja se recolecta y se prueba para actividad (medio condicionado transitorio) Las células se remueven de la caja mediante tppsina-EDTA, se diluye en 1 10 y se transfiere a cajas de petp de cultivo de tejidos de 100 mm que contienen 10 mL de medio selectivo Después de aproximadamente 7 días en el medio selectivo, las células resistentes se cultivan en colonias de vanos milímetros de diámetro Las colonias se remueven de la caja con papel filtro (se cortan a aproximadamente el mismo tamaño que las colonias y se enjuagan en tppsina/EDTA) y se transfieren a pozos individuales de una placa de 24 pozos que contiene 1 L de medio selectivo Después de que los clones se cultivan a confluencia, los medios condicionados se vuelven a someter a prueba, y los clones positivos se expanden en los medios de crecimiento.

EXPRESIÓN DE AGONISTA DE RECEPTOR EPO EN E. COLI La cepa E. coli MON 105 o JM101 que alojan al plásmido de interés se cultivan a 37°C en M9 más el medio de casaminoácidos con agitación en un incubador de aire modelo G25 de New Brunswick Scientific (Edison, New Jersey). El crecimiento se tamiza a OD600 hasta que alcanza un valor de 1 , para entonces el ácido nalidíxico (10 miligramos/mL) en NaOH de 0.1 N se agrega a una concentración final de 50 µg/mL. Los cultivos entonces se agitan a 37°C durante 3 a 4 horas adicionales. Un alto grado de aereación se mantiene durante el periodo de cultivo para lograr la producción máxima del producto de gen deseado. Las células se examinan bajo un microscopio para la presencia de cuerpos de inclusión (IB). Las alícuotas de un mL del cultivo se remueven para el análisis del contenido de proteína al hervir las células comprimidas en pellas, tratándolas con el regulador de pH de reducción y electroforesis mediante SDS-PAGE (véase Maniatis y otros., Molecular Cloning: A Laboratori Manual, 1982). El cultivo se centrifuga (5000 x g) para comprimir en pellas las células. Las estrategias adicionales para lograr la expresión de alto nivel de genes en E. coli se pueden encontrar en Sawas, C.M. (Microbiological Reviews 60; 512-538, 1996).

PREPARACIÓN DEL CUERPO DE INCLUSIÓN, EXTRACCIÓN, CONFIGURACIÓN. DIÁLISIS, CROMATOGRAFÍA DEAE. Y CARACTERIZACIÓN DE LOS AGONISTAS DE RECEPTOR EPO QUE SE ACUMULAN COMO CUERPO DE INCLUSIÓN EN E. COLI Aislamiento de cuerpo dß Inclusión La pella de célula de un cultivo E. coli de 330 mL se resuspende en 15 mL de mejorador de pH de sonicación (hidrocloruro 2-amino-2-(hidroximetil) 1 ,3-propanodiol de 10 mM (Tris-HCL), Ph 8.0 + 1 mM de ácido etilendiamintetracetico (EDTA)). Dichas células resuspendidas se someten a sonido utilizando la sonda de micropunta de un sonicador Cell Disruptor (Model W-375, Heat Sistems-Ultrasonics, Inc., Farmingdale, New York). Tres fases de somcación en el regulador de pH de sonicación seguidas por la centrifugación se emplean para romper las células y lavar los cuerpos de inclusión (IB). La primera fase de sonicación es un estallido de tres minutos seguido de un estallido de un minuto, y las dos fases finales de sonicación son de 1 minuto cada una.

Extracción y configuración de proteínas de las pellas dß cuerpo dß inclusión: Después del paso final de centrifugación, la pella de IB se resuspende en 10 mL de 50 mL de Tris-HCl, pH 9.5, 8 M de urea, 5 mM de ditiotreitol (DTT) y se agita a temperatura ambiente durante aproximadamente 45 minutos para permitir la desnaturalización de la proteína expresada. La solución de extracción se transfiere a un vaso de precipitados que contiene 70 mL de 5 mM de Tri-HCI, pH 9.5 y 2.3 M de urea y se agita ligeramente mientras se expone al aire a 4°C durante 18 a 48 horas para permitir que se configuren las proteínas. La configuración se tamiza mediante ei análisis de un Vydac (Hesperia, Ca.) de columna de cromatografía líquida de alta presión de fase revertida de C18 (RP-HPLC) (0.46x25 cm). Un gradiente lineal de 40% a 65% de acetonitrilo, conteniendo 0.1% de ácido trifluoroacético (TFA) se emplea para tamizar la configuración. Dicho gradiente se desarrolla en 30 minutos a una velocidad de flujo de 1.5 mL por minuto. Las proteínas desnaturalizadas generalmente se eluyen más tarde en el gradiente en lugar de las proteínas configuradas.

Purificación Después de la configuración, las proteínas E. coli contaminantes se remueven mediante precipitación acida. El pH de la solución de configuración se titula entre pH 5.0 y pH 5.2 utilizando 15% (v/v) de ácido acético (HOAc). bicha solución se agita a 4°C durante 2 horas y entonces se centrifuga durante 20 minutos a 12000 x g para comprimir en pellas cualquier proteína insoluble. El sobrenadante del paso de precipitación acida se dializa utilizando una membrana Spectra/Por 3 con un peso molecular de corte (MWCO) de 3500 daltons. La diálisis sufre 2 cambios de 4 litros (un exceso de 50 veces) de 10 mM de Tris-HCl, pH 8.0 para un total de 18 horas. La diálisis reduce la conductividad de la muestra y remueve la urea antes de la cromatografía de DEAE. La muestra entonces se centrifuga (20 minutos a 12000 x g) para pellar cualquier proteína insoluble después de la diálisis. Se usa una columna Bio-Scale DEAE2 de Bio-Rad (7 x 52mm) para la cromatografía de intercambio de iones. La columna se equilibra en un regulador de pH que contiene 10 mM de Tris-HCl, pH 8.0. la proteína se eluye utilizando un gradiente de cloruro de sodio (NaCI) de 0 a 500 mM, en un regulador de pH de equilibrio, con 45 volúmenes de columna. Una velocidad de flujo de 1 mL por minuto se utiliza en el procedimiento. Las fracciones de columna (2mL por fracción) se recolectan en el gradiente y se analizan mediante HPLC RP en una columna de C18 Vydac (Hesperia, Ca.) (0.46 x 25 cm). Se emplea un gradiente lineal de 40% a 65% de acetonitrilo, conteniendo 0.1 % de ácido trifluoroacético (TFA). Dicho gradiente se desarrolla en 30 minutos a una velocidad de flujo de 1.5 mL por minuto. Las fracciones mezcladas entonces se dializan con 2 cambios de 4 litros (exceso de 50 a 500 veces) de 10 mM de acetato de amonio (NH_?Ac), pH 4.0 para un total de 18 horas. La diálisis se lleva acabo utilizando una membrana Spectra/Por 3 con un MWCO de 3500 daltons. Finalmente la muestra se filtra en forma estéril utilizando un filtro de jepnga de 0.22 µm (filtro de jeringa µStar LB, Costar, Cambrige, Ma.) y se almacena a 4°C. En algunos casos, las proteínas configuradas pueden ser purificadas en afinidad utilizando reactivos de afinidad tales como mAbs o subunidades de receptor acopladas a una matpz adecuada. Alternativamente, (o además) la purificación se puede lograr utilizando cualquier variedad de métodos cromatográficos tales como: intercambio de iones, filtración de gel o cromatografía hidrofóbica o HPLC de fase revertida. Los anteriores y otros métodos de purificación de proteína se describen en detalle en Enzymology, Volume 182 'Guide to Protein Purification' edited by Murray Deutscher, Academic Press, San Diego, CA (1990).

Caracterización de proteínas La proteina purificada se analiza mediante HPLC-RP, espectrometría de masa de electroaspersión y SDS-PAGE. La cuantificación de la proteína se hace mediante la composición de aminoácidos, HPLC-RP, y determinación de la proteína Bradford. En algunos casos el mapeo de péptido critico se lleva a cabo junto con la espectrometría de masa de electroaspersión para confirmarlla identidad de la proteína.

Ensavo de metilcelulosa Dicho ensayo refleja la capacidad de los factores de estimulación de colonia para estimular las células de la médula ósea normales para producir diferentes tipos de colonias hematopoyéticas in vitro (Bradlei y otros., Aust. Exp Biol. Sci. 44: 287-300, 1996), Pluznik y otros., J. Cell Comp. Physio 66:319-324, 1965).

Métodos Aproximadamente 30 mL de aspirato de medula ósea fresco, normal, saludable se obtienen de los individuos después que se les ha informado. Bajo condiciones estériles, las muestras se diluyen 1 :5 con una solución 1x PBS (#14040.059 Life Technologies, Gaithersburg, MD.) en un tubo cónico de 50 mL (#25339-50 Corning, Coming, MD). Ficoll (Histopaque 1077 Sigma H-8889) se estratifica bajo la muestra diluida y se centrifuga, 300 x g durante 30 minutos. La banda de célula mononuclear se remueve y se lava dos veces en 1X PBS y una vez con 1 % de BSA PBS (CellPro Co., Bothel, WA). Las células mononucleares se cuentan y las células CD34+ se seleccionan utilizando el equipo Ceprate LC (CD34) de columna (CellPro Co., Bothel, WA). Dicho fraccionamiento se lleva acabo ya que las células totipotenciales y progenitoras dentro de la medula ósea muestran un antígeno de superficie de CD34. Los cultivos se colocan en un triplicado con un volumen final de 1.0 mL en una caja de petri de 35 X 10 mm (Nunc#174926). El medio de cultivo se compra de Terri Fox Labs. Medio HCC-4230 (Terri Fox Labs, Vancouver, B.C., Canadá) y la eritropoyetina (Amgen, Thousand Oaks, CA.) se agrega a los medios de cultivo. De 3000-10000 células de CD34+ se agregan por caja. Las proteínas agonistas de receptor EPO, en los medios condicionados en las células de mamífero transfectadas o purificadas de los medios condicionados de las células de mamífero trapsfectadas o E. coli, se agregan para dar las concentraciones finales que varían de .001 nM a 10 nM. Los cultivos se resuspenden utilizando una jeringa de 3 ce y 1.0 mL se distribuye por caja. Los cultivos de control (respuesta de línea bases) no recibieron factores de estimulación de colonia. Los cultivos de control positivo recibieron medios condicionados (células humanas estimuladas PHA: Terri Fox Lab. H2400). Los cultivos se incubaron a 37°C, 5% de C02 en aire humidificado. Las colonias hematopoyéticas que se definen como mayores de 50 células se cuentan el día de respuesta pico (10-11 ) utilizando un microscopio de fase invertida Nikon con una combinación de objetivo 40x. Los grupos de células que contienen menos de 50 células se definen como aglomeraciones. Las colonias se pueden identificar alternativamente haciendo un frotis de las colonias un portaobjetos y tiñéndolas, o se pueden recoger, resuspender y girar el portaobjetos de citoespina para tinción.

Ensavos dß factor dß crecimiento hßmatopovético dß sangre dß cordón umbilical Las células de la medula ósea tradicionalmente se usan para los ensayos in vitro de la actividad de factor de estimulación de colonia hematopoyética (CSF). Sin embargo, la medula ósea humana no siempre está disponible, y hay una variación considerable entre donadores. La sangre de cordón umbilical se compara a la medula ósea como una fuente de células totipotenciales y progenitoras (Broxmeryer y otros., PNAS USA 89:4109-113, 1992; Mayani y otros., Blood 81 :3252-3258, 1993). A diferencia de la medula ósea, la sangre del cordón está disponible más fácilmente de forma más regular. También existe el potencial para reducir la variabilidad de la prueba por células mezcladas frescas obtenidas de vanos donadores, o para crear un banco de células brioconservadas para este propósito. Al modificar las condiciones de cultivo, y/o analizar los marcadores específicos de líneaje, es posible ensayar específicamente para la actividad de colonias de formación de estallido (PFU-E).

Métodos Las células mononucleares (MNC) se aislan de la sangre del cordón en 24 horas de recolección, utilizando un gradiente de densidad estándar (1.077 g/mL Histopaque). La sangre del cordón MNC se ha enriquecido además por las células totipotenciales y progenitoras mediante varios procedimientos, incluyendo la selección inmunomagnética para las células CD14-, CD34+; localizando la fracción SBA-, CD34+ utilizando frascos revestidos de Applied Immune Science (Santa Clara, CA); y la sección de CD34+ utilizando una columna de avidina CellPro (Bothell, WA). Las fracciones enriquecidas de célula CD34+ aisladas de manera fresca o creopreservadas se utilizan para el ensayo. Los cultivos duplicados para cada dilución de muestra en serie (concentración que varía de 1 pM a 1204 pM) se prepararon con células 1x104 en 1 ml de 0.9% de metiicelulosa que contienen un medio sin factores de crecimiento adicionales (Methocult H4230 de Stem Cell Technologies, Vancouver, BO). Después del cultivo durante 7-9 días, se cuentan las colonias que contienen >30 células.

Línea dß células transfßctadas: Las líneas de célula, tales como la BHK o la línea de célula murina proB Baf/3, se pueden transfectar con un receptor de factor de estimulación de colonia, tales como el receptor EPO humano que no tiene la línea de célula. Dichas líneas de célula transfectadas se pueden usar para determinar la actividad de proliferación de la célula y/o en el receptor.

EJEMPLO 1 Los genes que codifican la secuencia reacoplada de ligandos EPO se pueden construir mediante uno de los métodos descritos en la presente o mediante otros métodos recombinantes conocidos para aquellos expertos en la técnica. Para el propósito de este ejemplo, el sitio de permutación es entre residuos 131 (Arg) y 132(Thr) de EPO. Lo anterior es un sitio que es susceptible al corte proteolítico, indicando de esta forma la exposición de superficie con un grado relativamente alto de flexibilidad. En este ejemplo, un nuevo grupo N-terminal y un nuevo C-terminal se crea con un adaptador que une los términos originales. Lo anterior se hace, como se describe en el método II, en dos pasos de PCR y una ligación de extremo rasurado.

En el ppmer paso de PCR, que utiliza un vector que contiene la secuencia de ADN de SEQ ID NO: 120 como el templado, y los iniciadores "nuevo inicio" y "inicio rasurado", se crea un fragmento de ADN que codifican al nuevo grupo N-término. Dicho fragmento se llama "inicio de fragmento". La secuencia subrayada en el iniciador de nuevo inicio es el sitio de restricción Ncol. Iniciador de nuevo inicio = gcgcgcCCATGGAACAATCACTGCTGAG SEQ ID NO:131 Iniciador de inicio rasurado = TCTGTCCCCTGTCCT SEQ ID NO:132 En el segundo pasto de PCR, se usa un vector que contiene en la secuencia de ADN de SEQ ID NO:120 como el templado, y los iniciadores "nuevo interruptor" y "interruptor rasurado" crean un fragmento de ADN que codifica al nuevo grupo C-terminal. Dicho fragmento se llama "interruptor de fragmento". La secuencia subrayada en el nuevo Iniciador de interruptor es el sitio de restricción Hindlll. Nuevo iniciador de interruptor = GcacacAAGCTTAATTATCGGAGTGGAGCAGCTGAGGCCGCATC SEQ ID NO:133 Iniciador de extremo rasurado = GCCCCACCACGCCTCATCTGT SEQ ID NO:134 En el paso de ligación, los dos fragmentos creados en las dos reacciones PCR se ligan, se digieren con Ncol y Hindlli y se clonan en un vector de expresión. Los clones se tamizan mediante análisis de restricción y se someten a secuencia de ADN para confirmar la secuencia adecuada. Los iniciadores se pueden diseñar para crear los sitios de restricción diferentes a Ncol y Hindlll para clonar en otros vectores de expresión.

EJEMPLO 2 La secuencia reacoplada de agonistas de receptor EPO de la presente invención se pueden probar para la bioactividad mediante los métodos descritos en la presente o mediante otros ensayos conocidos para aquellos expertos en la técnica. Las técnicas adicionales para la construcción de las variantes, de expresión de proteína recombinante, purificación de proteína, caracterización de proteína, determinación de actividad biológica se pueden encontrar en los documentos WO 94/12639, WO 94/12638, WO 95/20976, WO 95/21197, WO 95/20977, WO 95/21254, los cuales se incorporan en la presente como referencia en su totalidad. Todas las referencias, patentes o solicitudes citadas en la presente se incorporan como referencia en su totalidad como si se hubieran escrito en la presente. Algunos otros ejemplos serán evidentes para el experto en la técnica después leer la presente descripción sin apartarse del espíritu y alcance de la invención. Se pretende que todos los otros ejemplos se incluyan dentro del alcance de las reivindicaciones anexas.

LISTADO DE SECUENCIAS (1 ) INFORMACIÓN GENERAL: (i) SOLICITANTE: G.D. Searle and Company (ii) TITULO DE LA INVENCIÓN: Nuevos agonistas de receptor de eritropoyetina (¡ii) NUMERO DE SECUENCIAS: 134 (iv) DIRECCIÓN PARA ENVIAR CORRESPONDENCIA (A) DESTINATARIO: G.D. Searle & Co. (B) CALLE: P.O. Box 5110 (C) CIDUDAD: Chicago (D) ESTADO: IL (E) PAÍS: E.U.A. (F) CÓDIGO POSTAL: 60680 (v) FORMA LEÍBLE POR COMPUTADORA: (A): TIPO DE MEDIO: Disco flexible (B) COMPUTADORA: IBM COMPATIBLE (C) SISTEMA OPERATIVO: DOS (D) SOFTWARE: FastSEQ Versión 2.0 (vi) DATOS DE LA SOLICITUD ACTUAL: (A) NUMERO DE SOLICITUD: (B) FECHA DE PRESENTACIÓN: 21-OCT-1997 (C) CLASIFICACIÓN (vii) (A) DATOS DE SOLICITUD ANTERIOR: (A) NUMERO DE SOLICITUD: 60/034,044 (B) FECHA DE PRESENTACIÓN: 25-0CT-1996 (viii) INFORMACIÓN SOBRE EL APODERADO/AGENTE (A) NOMBRE: Bennett, Denis A. (B) NUMERO DE REGISTRO: 34,547 (C) NUMERO DE REFERENCIA/CASO: 2991/1 (ix) INFORMACIÓN SOBRE TELECOMUNICACIONES (A) TELEFONO: 314-737-6986 (B) TELEFAX: 314-737-6972 (C) TELEX: (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 1 : (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 1 : Asn ??. Thr Thr Gly Cys Ala olu H__ Cys Ser Leu Asn Glu Asn He Thr val Pro Aap Thr Lys Val Asn g. Tyr A1. Trp Ly_ ^ ^ Val Gly oln _1_ Ala Val Olu Val Trp cln Gly Leu Ali L°u . eu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly ola A_a Leu Leu Val Asn ler Sar Gln Pro Trp Glu Pro Leu oln Leu „_. Val Asp Lys Ala Val Ser Oly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Oly Gln Lys olu Ala __. Ser P o Pro ?sp Ala A1, s„ ,la ^ ^ ^ ^ ^ 9^ ^ Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe íeS Arg Oly Leu Lys Leu yr Tíir Gly Clu Ala Cys Arg- Thr Gly Asp Arg Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu He Cys Asp ser Arg Val Leu Glu 145 150 155 160 Ar?r Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu 165 170 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 2. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos 5 (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA, lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA, ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 2: 10 lie Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn He Thr 1 5 10 15 Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Mee Glu Val 20 25 30 Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu 40 45 Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp 50 55 60 Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser 65 70 75 80 Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala He Ser 85 90 95 Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr lie Thr Ala Asp .,- 100 105 110 * *3 Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys 115 120 125 Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu He Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg 145 150 155 160 Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn 165 170 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 3: i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 3: Thr thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn lie Thr Val 1 5 10 15 Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp. Lys Arg Mee Glu Val Gly 25 30 Gln Gln Ala Val Glu val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala 40 45 Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn ser Ser Gln Pro Trp Glu 50 55 60 Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu 65 70 75 80 Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala He Ser Pro 85 90 95 Pro Aso Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr 100 105 110 Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu 115 120 125 Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly 130 135 140 Ser Ala Pro Pro Arg Leu He Cys Asp Ser Arg Val Leu Olu Arg Tyr 145 150 155 160 Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ha 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 4: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD. 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: Individual (D) TOPOLOGÍA, lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 4: Thr Gly Cys Ala Glu His cys Ser Leu Asn slu Asn He Thr Val Pro 1 5 10 15 Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu al Gly Gln 25 30 Gln Ala Val Glu val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser slu Ala val 40 45 Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro 50 55 60 Leu Gln Leu Hls Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr 65 70 75 80 Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala He Ser Pro Pro 85 90 95 Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe 100 105 110 Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys 115 120 125 Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser 130 135 140 Ala Pro Pro Arg Leu He Cys A=p ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu 145 150 155 160 Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn He Thr 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 5: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 5: Gly Cys Ala Glu His Cys ser Leu Asn Glu Asn He Thr Val Pro Asp 1 5 10 15 Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Mee Glu Val Gly sln Gln 25 30 Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu ser Glu Ala Val Leu 40 45 Arg Gly Gln Ala Leu Leu val Asn Ser Ser Gln pro Trp Glu Pro Leu 50 55 60 Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr 65 70 75 80 Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala He Ser Pro Pro Asp 85 90 95 Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe Arg 100 105 110 Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu 115 120 125 Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala 130 135 140 Pro Pro Arg Leu He Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu 145 150 155 160 slu Ala Lys Glu Ala Glu Asn He Thr Thr 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 13: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 13: Asn Glu Asn He Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp 1 5 10 15 Lys Arg Mee Glu Val Gly Gln sln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu 20 25 30 Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn 40 45 Ser Ser oln ro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val 50 55 60 Ser sly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln 65 70 75 80 Lys Glu Ala He Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg 85 90 95 Thr He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg val Tyr Ser Asn 100 105 110 Phe Leu Arg oly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr 115 120 125 Gly Asp Arg Gly Gly sly Ser Ala Pro Pro Arg Leu He Cys Asp Ser 130 135 140 A1r4g5 Val L_eu Glu Arg T1y5r0 Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn He Thr Thr Gly cys Ala slu Hrs Cys Ser Leu 155 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 14: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 14: Glu Asn He Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys 1 5 10 15 Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln sly Leu Ala 25 30 Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser 40 45 Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser 50 55 60 Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys 65 70 75 30 Glu Ala He Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr 85 90 - 95 He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe ftrg. Val Tyr Ser Asn Phe 100 105 110 Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly 115 120 125 Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu He Cys Asp Ser Arg 130 135 140 Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn He Thr 145 150 155 160 Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 15: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 15: Asn He Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg 1 5 10 15 Met G_lu Val sly sln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln sly Leu Ala Leu 25 30 Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser ser 40 45 Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly 50 55 60 Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala sln Lys Glu 65 70 75 80 Ala He Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr He 85 90 95 Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu 100 105 110 Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp 115 120 125 Arg Gly sly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu He Cys Asp Ser Arg Val 130 135 140 Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn He Thr Thr 145 150 155 160 Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 16: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ií) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 16: Xle Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Mee 1 5 10 15 Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu 25 30 Ser slu Ala al Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln 40 45 Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu 50 55 60 Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala sln Lys Glu Ala 65 70 75 80 He Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr He Thr 35 90 95 l Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg 100 105 110 sly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr GXy Asp Arg 115 120 125 Gly Gly Oly Ser Ala Pro Pro Arg Leu He Cys Asp Ser Arg Val Leu 130 135 140 Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn He Thr Thr Gly 145 150 155 160 Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn 16S INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 17: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 17: Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val 1 5 10 15 Oly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln sly Leu Ala Leu Leu Ser Olu 25 30 Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp 40 45 Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser sly Leu Arg Ser 50 55 60 Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Oln Lys Glu Ala He Ser 65 70 75 80 Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala ro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp B5 90 95 Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg sly Lys 100 105 110 Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly 115 120 125 sly Ser Ala Pro Pro Arg Leu He Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg 130 135 140 Tyr Leu Leu Glu Ala Lys slu Ala slu Asn He Thr Thr sly Cys Ala 145 150 155 160 Glu His Cys Ser Leu Asp Glu Asn He Thr 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 18: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 18: Pro Asp Thr Lys val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met slu Val Gly 1 5 10 15 Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala 25 30 Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu 40 45 Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu 50 55 60 Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala He Ser Pro 65 70 75 80 Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr 35 90 95 Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu 100 105 110 Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly 115 120 125 Ser Ala Pro Pro Arg Leu He Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr 130 135 140 Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn He Thr Thr Gly Cys Ala Glu 145 150 155 160 His Cys Ser Leu Asn Glu Asr. He Thr Val 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 19: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 19: Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln 1 5 10 15 sln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val 25 30 Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser G n Pro Trp Glu Pro 40 45 Leu sln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr 50 55 60 Thr Leu Leu Arg Ala Leu sly Ala Oln Lys Glu Ala He Ser Pro Pro 65 70 75 80 Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr_Phe B5 90 95 Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys 100 105 110 Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly sly Ser 115 120 125 Ala Pro Pro Arg Leu He Cys Asp Ser Arg Val Leu slu Arg Tyr Leu 130 135 140 Leu slu Ala Lys Glu Ala Glu Asn He Thr Thr Gly Cys Ala Glu His 145 150 155 160 Cys Ser Leu Asn Glu Asn He Thr Val Pro INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 20: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 20: Arg Met Glu Val Gly aln sln Ala Val clu Val Trp oln Gly Leu Ala 1 _. 5 - 10 15 Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg OÍ" Gln Al* Leu Leu Val Asn Ser 5 , 30 Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu Hls Val AsfJ - ys Ala Val Ser 40 45 Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys 50 55 60 Glu Ala He Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr 65 70 75 80 He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe 85 90 95 Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly alu Ala Cys Arg Thr Gly 100 105 110 Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu He Cys Asp Ser Arg 115 120 125 Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn He Thr 130 135 140 Thr Gly Cys Ala Olu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn He Thr Val Pro 145 150 155 160 Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 21. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 21 : Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln sly Leu Ala Leu 1 5 10 15 Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser " 25 30 Oln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly 40 45 Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys slu 50 55 60 Ala He Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr He 65 70 75 80 Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu 85 90 95 Arg oly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp 100 105 110 Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu He Cys Asp Ser Arg Val 115 120 125 -Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn He Thr Thr 130 135 140 Oly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn He Thr Val Pro Asp 145 ISO 155 160 Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 22: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 22: Glu Val Gly Gln Gln Ala Val alu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu 1 5 10 15 Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser sln 20 25 30 Pro Trp slu Pro Leu Gln Leu H_s Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu 40 45 Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys slu Ala 50 55 60 He Ser Pro pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr He Thr 65 70 75 80 Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg 85 90 95 sly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr sly slu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg 100 105 110 Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu lia Cys Asp Ser Arg Val Leu 115 120 125 Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn He Thr Thr Gly 130 135 110 Cys Ala Glu H s Cys Ser Leu Asn Glu Asn He Thr Val Pro Asp Thr 145 150 155 160 Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 23.

(I) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 23: Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln sly Leu Ala Leu Leu Ser 1 5 10 15 Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro 25 30 Trp Olu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg 40 45 Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala He 50 55 60 Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr He Thr Ala 65 70 75 80 Asp Thr Phe Arg Lys ueu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly 85 90 95 Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg sly 100 105 110 Gly sly Ser Ala Pro Pro Arg Leu Ha Cys Asp Ser Arg al Leu Glu 115 120 125 Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn He Thr Thr Gly Cys 130 135 140 Ala Glu Hrs Cys Ser Leu Asn Glu Asn He Thr Val Pro Asp Thr Lys 145 150 155 160 al Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met slu 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 24: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO, aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 24: Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu 1 5 10 15 His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu 25 30 Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala He Ser Pro Pro Asp Ala Ala 40 45 S*r Ala Ala Pro Leu Arg Thx He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu 50 55 60 Pne A^S Va-1 Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr 65 70 75 80 Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro 85 90 95 Arg Leu He Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala 100 105 110 Lys Glu Ala Glu Asn He Thr Thr Gly Cys Ala Glu xs Cys Ser Leu 115 120 125 Asn Glu Asn lie Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp 130 135 140 Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu 145 150 155 160 Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 25: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 25: Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His 1 5 10 15 Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg 20 2S 30 Ala Leu aly Ala Gln Lys Glu Ala He Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser 40 45 Ala Ala pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu phe 50 55 60 Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly 65 70 75 80 Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Oly Gly Ser Ala Pro Pro Arg 85 90 95 Leu He Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys 100 105 110 Glu Ala Glu Asn He Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn 115 120 125 slu Asn He Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys 130 135 140 Arg Met slu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln sly Leu Ala 145 150 155 160 Leu Leu Ser slu Ala Val Leu Arg sly aln 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 26. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 26: Leu Leu Val Asn Ser Ser sln Pro Trp slu Pro Leu sln Leu Val 1 5 10 15 Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala 25 30 Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala He Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala 40 45 Ala Pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg 50 55 60 Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Oly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr sly Glu 65 70 75 80 Ala cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu 85 90 95 He Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu slu Ala Lys Glu 100 105 110 Ala Glu Asn He Thr Thr sly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu 115 120 125 Asn He Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg 130 135 140 Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu 145 150 155 160 Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 27: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos 5 (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno 0 (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 27: Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp 5 10 15 Lys Ala Val Ser Gl/ Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu 20 25 30 Gly Ala Gln Lys Giu Ala He Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala 35 40 45 Pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val 50 55 60 Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala 65 70 75 80 ,_ Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu He 1? 85 90 95 Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Gla Ala 100 105 110 Glu Asn He Thr Thr Gly Cys Ala CITu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn 115 120 125 He Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met 130 135 140 Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Giu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu 145 150 155 160 Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 6. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 6: Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn He Thr Val Pro Asp Thr 1 5 10 15 Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala 25 30 Val Glu Val Trp Oln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg 40 45 Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu sln 50 55 60 Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu 65 70 75 80 Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala He Ser Pro Pro Asp Ala 85 90 95 Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys 100 105 110 Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr 115 120 125 Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro 130 135 140 Pro Arg Leu He Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu 145 150 155 160 Ala Lys Glu Ala Glu Asn He Thr Thr Gly 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 7: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 7: Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn He Thr Val Pro Asp Thr Lys 1 5 10 15 Val Asp Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln sln Ala Val 20 25 30 slu Val Trp Gln sly Leu Ala Leu Leu Ser slu Ala Val Leu Arg sly 40 45 Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu 50 55 50 His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu 65 70 75 80 Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala He Ser Pro Pro Asp Ala Ala 85 90 95 Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu 100 105 110 Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr 115 120 125 Gly slu Ala Cys Arg Thr sly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro 130 135 140 Arg Leu He Cys Asp ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu slu Ala 145 150 155 160 Lys Olu Ala slu Asn He Thr Thr sly Cys '55 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 8: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD. 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 8: Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met slu Val sly Gln Gln Ala Val Glu 25 30 Val Trp sln sly Leu Ala Leu Leu Ser Olu Ala Val Leu Arg sly Gln 40 45 Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp slu Pro Leu Gln Leu Hrs 50 55 60 val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg 65 70 75 80 Ala Leu Gly Ala Gln Lys slu Ala He Ser Pro Pro Asp Ala Ala ser 85 90 95 Ala Ala Pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe 100 105 110 Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr sly 115 120 125 Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly aly Gly Ser Ala Pro Pro Arg 130 135 140 Leu He Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys 145 150 155 160 Glu Ala Glu Asn He Thr Thr Gly Cys Ala 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 9: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 9: His Cys Ser Leu Asn Glu Asn He Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn 1 5 10 15 Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val 20 25 30 Trp Gln sly Leu Ala Leu Leu Ser s7u Ala Val Leu Arg aly Gln Ala 40 45 Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val 50 55 60 Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala 65 70 7S 80 Leu Gly Ala sln Lys slu Ala He Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala 85 90 95 Ala Pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg 100 IOS 110 Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Oly Glu 115 120 125 Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro pro Arg Leu 130 135 140 He Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Olu 145 150 155 160 Ala Olu Asn He Thr Thr Gly Cys Ala Glu 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 10: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 10: Cys Ser Leu Asn Glu Asn He Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Olu Val Gly Gln aln Ala Val Glu Val Tro 25 30 Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg sly Oln Ala Leu 40 45 Leu Val Asn ser Ser oln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu H_s Val Asp 55 50 Lys Ala Val ser Gly Leu Arg ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu 65 70 75 80 Gly Ala Oln Lys Glu Ala He ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala 85 90 95 Pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg val 100 105 H° Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu AJ.a 115 120 125 cys Arg Thr sly Asp Arg Gly Gly sly Ser Ala Pro Pro Arg Leu He 130 135 1*0 Cys Asp ser Arg Val Leu olu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys slu Ala 145 150 155 160 Olu Asn He Thr Thr Gly Cys Ala Glu His 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 11. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (il) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 11 Ser Leu Asn Glu Asn He Thr Val Pro Asp Thr Lys val Asp Phe Tyr 1 5 10 15 Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly sln Oln Ala Val alu Val Trp sln 20 25 30 sly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala val Leu Arg sly Gln Ala Leu Leu 40 45 Val Asp Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys 50 55 60 Ala Val Ser sly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly 65 70 75 80 Ala Gln Lys Glu Ala He Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro 85 90 95 Lau Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr 100 IOS 110 Ser Asn he Leu Arg sly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys 115 120 125 Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly ser Ala Pro Pro Arg Leu He Cys 130 135 140 Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Olu Ala Lys slu Ala Glu 145 150 155 160 Asn He Thr Thr Gly Cys Ala Glu His cys 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 12: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 12: Leu Asn Glu Asn He Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala 1 5 10 15 Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln aly 25 30 Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val 40 45 Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala 50 55 60 Val ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala 65 70 75 80 G u Lys Glu Ala He ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu 85 90 95 Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser 100 105 110 Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala cys Arg 115 120 125 Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu He cys Asp 130 135 140 Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala slu Asn 145 150 135 160 He Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 28: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA, ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 28: Val Asn Ser Ser sln pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys 1 5 10 15 Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly 20 25 30 Ala Gln Lys Glu Ala He ser Pro ro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro ' 35 40 45 Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr 50 55 60 Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys 65 70 75 80 Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly ser Ala Pro Pro Arg Leu He Cys 85 90 95 Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu 100 IOS 110 Asn He Thr Thr Gly cys Ala Glu Hrs Cys Ser Leu Asn Glu Asn He 115 120 125 Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu 130 135 140 Val Gly Glp Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser 145 150 155 160 Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 29. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 29: Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala 1 5 10 15 Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala 25 30 Gln Lys Glu Ala He Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu 40 45 Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser 50 55 60 Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg 65 70 75 80 Thr sly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu He Cys Asp 85 90 95 Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn 100 105 110 He Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Clu Asn He Thr 115 120 125 Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val 130 135 140 Gly Gln Gln Ala Val slu Val Trp sln sly Leu Ala Leu Leu Ser Glu 145 150 155 160 Ala Val Leu Arg sly Oln Ala Leu Leu Val 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 30. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 30: Ser Sex Gin Pro Trp Glu Pro Leu sln Leu His Val Asp Lys Ala Val 1 5 10 15 Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu sly Ala Gln 25 30 Lys Giu Ala He Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg 40 45 Thr He Thr Aia Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn 50 55 60 he Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr 65 70 75 80 Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu He Cys Asp Ser 85 90 95 Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Olu Ala Olu Asn He 100 IOS 110 Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn He Thr Val 115 120 125 Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly 130 135 140 Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Oly Leu Ala Leu Leu Ser Clu Ala 145 150 155 160 Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu val Asn 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 31 : (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 31 : Ser sln Pro Trp Glu 1 Pro Leu 5 Gln Leu His Val Asp Lys Ala sly Leu Arg Ser 10 Val Ser Leu Thr Thr 20 Leu Leu Arg 15 Ala Leu Ala Glu Ala Gln Lys He Ser 25 i Gly Pro Pro Asp 3S Ala Ala Ser 30 He Thr Ala Asp 40 Ala Ala Pro Leu Arg Thr Thr 50 Phe Arg Lys Leu Phe Leu Arg 55 Arg Val Tyr Ser Oly Lys Asn Phe 55 Leu Lys Leu 60 Tyr Thr Gly Asp Arg 70 Glu Ala Cys Arg Gly Gly Gly Ser Ala 75 Thr Gly 80 B5 Pro Pro Arg Leu He Val Leu Glu Arg Tyr 90 Cys Asp Ser Arg Leu Leu 100 Glu Ala Lys 95 Glu Aia Thr sly Cys Ala e Thr Glu 105 slu Asp H 115 Hls Cys Ser Leu Asp 110 Asn Asp Thr He Thr Lys Val 120 Glu Val Pro Asn 130 Phe Tyr Ala Trp Lys 125 Gln Ala Val Glu 13S Arg Met Glu Val sly Oln 145 Val Trp Gln 140 sly Leu Ala Leu Arg 150 Leu Leu Ser Glu Gly Gln Ala Leu Leu 155 Ala Val 165 Val Asn Ser 160 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 32. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 32: Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly 1 5 10 15 Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu 25 30 Ala He Ser Pro Pro Asp Ala Aia Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr He 40 45 Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu 50 55 60 Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp 65 70 75 80 Arg aly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu He Cys Asp Ser Arg Val 85 90 95 Leu Olu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Olu Asn He Thr Thr 100 105 110 Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Olu Asn He Thr Val Pro Asp 115 120 125 Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Oln sln 130 135 140 Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu 145 150 155 160 Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 33: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos 5 (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno 10 (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 33: Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu Hrs val Asp Lys Ala Val ser sly Leu 1 5 10 15 Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu aly Ala sln Lys Glu Ala 20 25 30 He Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr He Thr 35 40 45 Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg 50 55 60 •l_¡ Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg 65 70 75 80 Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu He Cys Asp Ser Arg Val Leu 85 90 95 Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala slu Asn He Thr Thr sly 100 105 110 Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn He Thr Val Pro Asp Thr 115 120 125 Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met slu Val Gly Gln Gln Ala 130 135 140 Val slu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg 145 150 155 160 Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 34: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: Individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 34: Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg 1 5 10 15 Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala He 25 - 30 Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr He Thr Ala 40 45 Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly 50 55 60 Lye Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr sly Asp Arg sly 6S 70 75 80 sly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu lie Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu 85 90 95 Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn He Thr Thr Gly Cys 100 105 110 Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn He Thr Val Pro Asp Thr Lys 115 120 125 Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln sln Ala Val 130 135 140 Glu Val Trp sln sly Leu Ala Leu Leu Ser slu Ala Val Leu Arg Gly 145 150 155 d0 Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 35: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos 5 (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno 10 (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 35: Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val ser Gly Leu Arg Ser 1 5 10 15 Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala sln Lys Glu Ala He Ser 20 25 30 Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp 40 45 Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg sly Lys 50 55 60 Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly 65 70 75 80 i . Gly ser Ala pro Pro Arg Leu He Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg 85 90 95 Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn He Thr Thr Gly Cys Ala 100 IOS 110 Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn He Thr Val Pro Asp Thr Lys Val 115 120 125 Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met olu Val Gly Gln sln Ala val Glu 130 135 140 al Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser slu Ala Val Leu Arg Gly Gln 145 150 155 160 Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser sln Pro Trp 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 36. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos 5 (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno 10 (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 36: Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala He Ser Pro P___.o__As? Ala 1 5 10 15 Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys 20 25 30 Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr 40 45 Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro 50 55 60 Pro Arg Leu He Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu slu 65 70 75 80 J-- Ala Lys Olu Ala Glu Asn He Thr Thr Gly Cys Ala slu His Cys Ser 85 90 95 Leu Asn Glu Asn He Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala 100 105 110 Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly 115 120 125 Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val 130 135 140 Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala 145 150 155 160 Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 37: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 37: Arg Ala Leu sly Ala Gln Lys Glu Ala He Ser Pro Pro Asp Ala Ala 1 5 10 15 Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu 25 30 Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg sly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr 40 45 Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro 50 55 60 Arg Leu He Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala 65 70 75 80 Lys Glu Ala Glu Asn He Thr Thr sly Cys Ala Glu Has Cys Ser Leu 85 90 95 Asn Glu Asn He Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp 100 105 110 Lys Arg Met Glu Val sly Gln Gln Ala val Glu Val Trp Gln Gly Leu US 120 125 Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asp 130 135 140 Ser Ser Gln Pro Trp alu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val 145 150 155 160 Ser sly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 38: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 38: Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala He Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser 1 5 10 15 Ala Ala Pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe 25 30 Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg sly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly 40 45 Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg sly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg 50 55 60 Leu He Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys 65 70 75 80 Glu Ala Glu Asn He Thr Thr Gly Cys Ala slu His Cys Ser Leu Asn 85 90 95 Glu Asn He Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys 100 105 110 Arg Met slu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala 115 120 125 Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser 130 135 140 Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val ser 1 14455 ' 1"5="0 155 160 Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 39: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 39: Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala He Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala 1 5 10 15 Ala Pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg 20 25 30 Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg sly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu 40 45 Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Glv Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu 50 55 60 He Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu 65 70 75 80 Ala Glu Asn He Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu 85 90 95 Asn He Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg 100 105 110 Met Glu Val Gly Gln Gln Ala val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu 115 120 125 Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly sln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser 130 135 140 Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly 145 150 155 160 Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 40: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 40. sly Ala Oln Lys Glu Ala He Sar Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala 1 5 10 15 Pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phß Arg Lys Leu Phe Arg Val 25 30 Tyr Ser Asn Phß Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala 40 4S Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu He 50 55 60 Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala 65 70 75 80 Glu Asp He Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn 85 90 95 He Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met 100 105 110 Olu Val Gly Oln Oln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu 115 120 125 Ser Glu Ala Val Leu Arg Oly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Oln 130 135 140 Pro Trp Olu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu 145 150 155 160 Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 41 : (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 41 : Ala Gln Lys Olu Ala He Ser pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro 1 5 10 3.5 Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr 20 25 30 Ser Asn Phß Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys 40 45 Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu He Cys 50 55 60 Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asn He Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn He 85 90 95 Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phß Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu 100 IOS 110 Val Oly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser 115 120 125 Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro 130 135 140 Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg 145 150 155 160 Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 42: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos 5 (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno 10 (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 42 sln Lys slu Ala He Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu 1 5 10 15 Arg Thr He Thr Ala Asp Thr phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser 20 25 30 Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly slu Ala Cys Arg 40 45 Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu He Cys Asp 50 55 60 Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn -le 65 70 75 B0 He Thr Thr Gly Cys Ala Glu Hrs Cys Ser Leu Asn Glu Asn He Thr 85 90 95 Val Pro Asp Thr Lys Val Asn phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val 100 105 110 Gly Gln Gln Ala Val slu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Olu 115 120 125 Ala Val Leu Arg sly Oln Ala Leu Leu val Asn Ser Ser Gln Pro Trp 130 135 140 Glu Pro Leu Gln Leu His val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser 145 150 15S 160 Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 43: (I) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA- (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO, aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 43: Lys Olu Ala He Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe Ar, Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu /r Thr Gly Oiu Ala Cys Arg Thr Oly Asp Arg Gly Giy sly Ser Ala Pro Pro Arg Leu He Cys Asp Ser Arg -al Leu Glu Arg Tyr eu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Olu Asn He 65 70 75 80 Thr Thr oly Cys Ala Olu His cys Ser Leu Asn Glu Asn He Thr Val 85 90 95 Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Giy 100 ios ll0 Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln sly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala 115 120 125 Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser sln Pro Trp slu 130 135 140 Pro Leu Oln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu 45 150 155 160 Thr Thr Leu Leu Arg Aia Leu Oly Ala Cln 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 44: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 44: Glu Ala He Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr 1 5 10 15 He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr ser Asn Phe 25 30 Leu Arg sly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr sly slu Ala Cys Arg Thr sly 40 45 Asp Arg sly sly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu He Cys Asp Ser Arg 50 55 60 Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn He Thr 65 70 75 80 Thr Gly Cys Ala Glu Hrs Cys Ser Leu Asn slu Asn He Thr Val Pro 85 90 95 Asp Thr Lys val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln 100 105 110 Gln Ala Val alu Val Trp sln Gly Leu Ala Leu Leu Ser slu Ala Val 115 120 12S Leu Arg aly sln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Cln Pro Trp slu Pro 130 135 140 Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg ser Leu Thr 145 150 155 160 Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 45: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos 5 (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno 10 (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 45: Ala He Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr He 1 5 10 15 Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu 20 25 30 Arg sly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp 35 40 45 Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu He Cys Asp Ser Arg Val 50 55 60 Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala -ys Glu Ala Glu Asn He Thr Thr 65 _ JO 75 80 -t c Gly Cys Ala Glu His C/s Ser Leu Asn Giu Asn He Thr Val Pro Asp '° 8S 90 95 Thr L/s val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln 100 105 110 Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu 115 120 125 Arg Gly Oln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu 130 135 140 G n Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr 145 150 155 160 Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys slu 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 46: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA, lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 46: He Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr He Thr 1 5 10 15 Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg 20 25 30 sly Lys Lau Lys Leu Tyr Thr sly Glu Ala cys Arg Thr sly Asp Arg 40 45 Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu He Cys Asp Ser Arg Val Leu 50 55 60 Olu Arg Tyr Leu Leu slu Ala Lys alu Ala olu Asn He Thr Thr Gly 65 70 75 80 Cys Ala Glu H?s Cys Ser Leu Asn Glu Asn He Thr Val Pro Asp Thr 85 90 95 Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu val Gly sln Gln Ala 100 IOS 110 Val Glu Val Trp Gln sly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg 115 120 125 Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser aln Pro Trp Glu Pro Leu Gln 130 135 140 Leu His Val Asp Lys Ala Val ser sly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu 145 150 155 160 Leu Arg Ala Leu sly Ala sln Lys Clu Ala 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 47: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: Individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 47: Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr He Thr Ala 1 5 10 15 Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly 20 25 30 Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly 40 45 Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu He Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu 50 55 60 Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn He Thr Thr Gly Cys 65 70 75 80 Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn He Thr Val Pro Asp Thr Lys 85 90 - 95 Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Vßt- Gly Gln Gln Ala Val 100 105 110 Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly 115 120 125 Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu 130 135 140 His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu 145 150 155 _ 160 Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Olu Ala He 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 48: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 48: Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp 1 5 10 15 Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Oly Lys 20 25 30 Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly 40 45 Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu He Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg 50 55 60 Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn He Thr Thr Gly Cys Ala 65 70 75 80 Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn He Thr Val Pro Asp Thr Lys Val 85 90 95 Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu 100 105 110 Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln 115 120 125 Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His 130 135 140 Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg 145 150 155 160 Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala He Ser 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 49: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 49: Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr 1 5 10 15 Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Oly Lys Leu 25 30 Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr sly Asp Arg Gly Gly Gly 40 45 Ser Ala Pro Pro Arg Leu He Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr 50 55 60 Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn He Thr Thr Gly Cys Ala Glu 65 70 75 80 His C/s Ser Leu Asn Clu Asn He Thr val Pro Asp Thr Lys Val Asn 85 90 95 Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met olu Val Gly Gln sln Ala Val Glu Val 100 105 110 Trp Gln sly Leu Ala Leu Leu Ser slu Ala Val Leu Arg Oly Oln Ala 115 120 125 Leu Lau Val Asn Ser Ser Oin Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val 130 135 140 Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala 145 150 1S5 160 Leu Gly Aia Gln Lys Glu Ala He Ser Pro 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 50. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 50: Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe 1 5 10 15 Arg Lys Leu Phß Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys 20 25 30 — Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser 40 45 Ala Pro Pro Arg Leu He Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu 50 55 60 Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn He Thr Thr Gly Cys Ala Glu His 65 70 75 80 Cys Ser Leu Asn Glu Asn He Thr val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe 85 90 95 Tyr Ala Trp Lys Arg Mee Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp 100 105 110 Oln Oly Leu Ala Leu Leu Ser Olu Ala Val Leu Arg Oly Gln Ala Leu 115 120 125 Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp 130 135 140 Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu 145 150 155 160 Gly Ala Gln Lys Glu Ala He Ser Pro Pro 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 51 : (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 51 : Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe Arg 1 5 10 15 Lys Leu Phe Arg val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu 20 25 30 Tyr Thr Gly Glu Ala cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly ser Aia 40 45 Pro Pro Arg Leu He Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu 50 55 60 Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn lie Thr Thr Giy Cys Ala Glu His Cys 65 70 75 80 Ser Leu Asn Glu Asp He Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr 85 90 95 Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln 100 105 110 Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu 115 L20 125 Val Asn Ser Ser Oln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu Has Val Asp Lys 130 135 140 Ala Val ser aly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly 145 150 155 160 Ala sln Lys Olu Ala He Ser Pro Pro Asp 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 52: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD. 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 52: Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys 1 5 10 15 Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg siy Lys Leu Lys Leu Tyr 25 30 Thr siy slu Ala Cys Arg Thr Cly Asp Arg aly sly Gly Ser Ala Pro 40 45 Pro Arg Leu He Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu 50 55 60 Ala Lys slu Ala slu Asn He Thr Thr sly Cys Ala Clu His Cys Ser 65 70 75 80 Leu Asn Clu Asn He Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala 85 90 95 Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln sln Ala Val alu Val Trp Gln Gly 100 105 110 Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly sln Ala Leu Leu Val 115 120 125 Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala 130 135 140 Val Ser sly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala 145 150 155 160 Oln Lys Olu Ala He Ser Pro Pro Asp Ala 155 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 53. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 53: Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu 1 5 10 15 Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr 20 25 30 Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Oly Gly Gly Ser Ala Pro Pro 40 45 Arg Leu He Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu slu Ala 50 55 60 Lys Glu Ala Glu Asn He Thr Thr Gly Cye Ala Glu Hxs Cys Ser Leu 65 70 75 80 Asn Glu Asn He Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp 85 90 95 Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu 100 105 110 Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn 115 120 125 Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val 130 135 140 Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln 145 150 155 160 Lys Glu Ala He Ser Pro Pro Asp Ala Ala 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 54: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 54: Ala Ala Pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe 1 5 10 15 Arg Val Tyr ser Asn Phe Leu Arg cly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr sly 20 25 30 Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg sly Gly sly Ser Ala Pro Pro Arg 40 45 Leu He Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys 50 55 60 Glu Aia Giu Asn He Thr Thr oly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asp 65 70 75 30 Glu Asn He Thr Val Pro Asp Thr Lys al Asn Phe Tyr Aia Trp Lys 85 90 95 Arg Met Olu Val Gly sln Oln Aia Val Glu Vai Trp Gln Gly Leu Ala 100 IOS 110 Leu Leu Ser Glu Ala Val Lau Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser 115 120 125 Ser Gln Pro Trp slu Pro Leu aln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser 130 135 140 Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu sly Ala Gln Lys 145 150 15S 160 Glu Ala He Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 55. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 55: Ala Pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg 1 5 10 15 val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu 20 25 30 Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Oly Gly Gly Ser Ala pro Pro Arg Leu 40 45 He Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu 50 55 60 Ala Glu Asn He Thr Thr Giy Cys Ala Glu Hls Cys Ser Leu Asn Glu 65 70 75 80 Asn He Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg 85 90 95 Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu 100 105 110 Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu val Asn Ser Ser 115 120 125 Gln Pro Trp slu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly 130 135 140 Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu 145 1S0 155 160 Ala He Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 56: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA. (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO, aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 56: Pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val 1 5 10 15 Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala 20 25 30 Cys Arg Thr Oly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu He 40 45 Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala 50 55 60 Glu Asn He Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn 65 70 75 80 He Thr Val Pro Asp Thr Lys val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met 85 90 95 Glu Val sly Gln Gin Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu 100 105 110 Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly sln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser sln 115 120 125 Pro Trp slu Pro Leu sln Leu Val Asp Lys Ala Val Ser Oly Leu 130 135 140 Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala 145 150 1S5 160 lie Ser Ero Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 57 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 171 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 57: Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr 1 5 10 15 Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly slu Ala Cys 20 25 30 Arg Thr sly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu He Cys 35 40 45 Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu slu Ala Lys Glu Aia Glu 50 55 60 Asn He Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn He 65 70 75 80 Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu 85 90 95 Val Gly sln aln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser 100 105 110 Glu Ala Val Leu Arg Gly Glp Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro 115 120 125 Trp Glu Pro Leu Glp Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg 130 135 140 Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Ala Lys Glu Aia 145 150 155 160 He Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 58: (I) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 58: Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser 1 5 10 15 Asn Phe Leu Arg sly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly siu Ala Cys Arg 20 25 30 Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly Ser Ala Pro Pro Arg Leu He Cys Asp 35 40 45 Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn 50 55 60 He Thr Thr Gly Cys Ala Glu Cys Ser Leu Asn Glu Asn He Thr 65 70 75 80 Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val 85 90 95 Gly Gln Oln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser slu 100 105 110 Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp 115 120 125 Glu Pro Leu Gln Leu Val As Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser 130 135 140 Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala He Ser 145 150 155 160 Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu 165 170 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 59. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 59: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 60: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 512 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 60: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 61 : (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA. (A) LONGITUD: 512 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 61 : INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 62: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 512 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: Individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 62: ACGACGGGCT GTGCTGAACA CTGCAGCTTs AATOAGAATA TCACTGTCCC AGACACCAAA 60 OTTAATTTCT ATGCCTGGAA GAGGATGGAG CTCOOGCAaC AGGCCGTAGA AOTCTGGCAG 120 GaccTssccc csssaccAa_i ccctGTtsot CAGCCGTGGG AGCCCCTGCA GCTGCATGTG GATAAAGCCG TCAGTGGCCT TCGCAGCCTC 240 ACCACTCTGC -TCGOGCTCT GGGAGCCCAG AAGGAAGCCA TCTCCCCTCC AGATGCGOCC 300 TCAGCTGCTC CACTCCGAAC AATCACTGCT GACACTTTCC GCAAACTCTT CCGAGTCTAC 360 TCCAATTTCC TCCGOGOAAA GCTGAAGCTG TACACAGGGG AGsCCTGCAG GACAGGGGAC 420 AGATGAGGCG OCGGCTCCCC CCACCACGCC TCATCTGTGA CAGCCOAGTC CTGGAGAGGT 480 ACCTCTTGOA GGCCAAGGAG GCCGAsAATA TC S12 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 63: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD. 512 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 63: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 64: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD. 512 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 64: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 65: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 512 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 65: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 66: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 512 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: Individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.. 66: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 67: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 512 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 67: ssAAAacrsA AscrsTACAC AsscsGCGGC 420 TCCCCCCACC ACGCCTCATC TGTsACACCC GAGTCCTGGA GAGGTACCTC TTGGAGGCCA 480 AGGAGOCCGA GAATATCACG ACGGGCTGTG CT 512 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 68: (I) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 512 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 68: CTATGCCTGG 60 AAGAGGATGG AOOTCCOOCA GCAGOCCGTA GAAGTCTGGC AGGGCCTGGC CCTsCTOTCO 120 TGcssssccA oscccTGTTG 130 CAGCTGCATG TasATAAAOC CCTCAGTGGC CTTCGCACCC TCACCACTCT OCTTCGGGCT 240 CTCOGAOCCC ACAAssAAsC CATCTCCCCT CCAGATGCGG CCTCAOCTGC TCCACTCCGA 300 ACAATCACTG CTGACACTTT CCGCAAACTC TTCCGAGTCT ACTCCAATTT CCTCCGGOGA 360 AACCTGAAGC TGTACACAGG GGAGGCCTsC AOGACAGGGG ACAGATGAGG COOCaaCTCC 420 CCCCACCACO CCTCATCTGT GACAGCCOAG TCCTGGAGAa GTACCTCTTG GAGOCCAAGG 480 AGGCCsAaAA TATCACOACO OGCTaTGCTO AA 512 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 69: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 512 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 69: TGCAGCTTGA ATGAsAATAT CACTCTCCCA OACACCAAAG TTAATTTCTA TGCCTGGAAG 60 AssATssAOG 120 GCCCCTGCAG 180 CTGCATsTGG ATAAAaCCGT CGCAGCCTCA CCACTCTOCT TCGGGCTCTG 240 GGAOCCCAGA AOGAAOCCAT CTCCCCTCCA OATOCOGCCT CAGCTGCTCC ACTCCGAACA 300 ATCACTGCTG ACACTTTCCG CAAACTCTTC CGAGTCTACT CCAATTTCCT CCOsGOAAAO 360 CTGAAOCTGT ACACAOOGGA GsCCTGCAGG ACAOGOGACA GATOAOGCGG CGGCTCCCCC 420 CACCACGCCT CATCTGTGAC AGCCGAGTCC TGGAGAGGTA CCTCTTGGAG GCCAAGGAGG 480 CCGAGAATAT CACGACGGGC TGTGCTGAAC AC 512 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 70: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD: 512 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 70: AGCTTOAATO AOAATATCAC TOTCCCAGAC ACCAAAGTTA ATTTCTATGC CTGaAAaACG 60 ATGGAGGTCG OGCAGCAaCC COTAOAAGTC TGGCAGGGCC TGOCCCTGCT GTCGGAAGCT 120 GTCCTGCOGG GCCAGGCCCT GTTGGTCAAC TCTTCCCAGC CGTGGGAGCC CCTGCAaCTO 180 CATCTOGATA AAGCCGTCAG TGGCCTTCGC AGCCTCACCA CTCTGCTTCG GOCTCTsssA 240 OCCCAOAAss CTCCTCCACT CCGAACAATC 300 ACTGCTGACA CTTTCCsCAA ACTCTTCCCA OTCTACTCCA ATTTCCTCCG GGGAAAGCTG 360 AAGCTOTACA CAOGGGAOOC CTOCAGGACA GGGGACAGAT sAOGCGGCGG CTCCCCCCAC 420 CACGCCTCAT CTGTGACAGC CGAGTCCTGG AGAOOTACCT CTTOGAOGCC AAGGAssCCG 480 AGAATATCAC GACssOCTGT GCTGAACACT GC 512 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 71. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 512 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 71 : TTGAATGAOA ATATCACTGT CCCAGACACC AAAGTTAATT TCTATGCCTG GAAGAGGATG 60 GAGGTCGGGC AGCAGaCCGT AGAAGTCTGG CAGOGCCTGG CCCTGCTCTC GOAAGCTOTC 120 CTGCGGOGCC ACOCCCTGTT COTCAACTCT TCCCAGCCGT GOOAGCCCCT GCAGCTGCAT 180 GTGGATAAAG CCGTCAGTaG CCTTCGCACC CTCACCACTC TGCTTCGGGC TCTGGGAOCC 240 CAsAAGGAAG CCATCTCCCC TCCAGATGCG GCCTCAGCTG CTCCACTCCG AACAATCACT 300 GCTGACACTT tCCGCAAACT CTTCCGAGTC TACTCCAATT TCCTCCGOss AAAOCTGAAO 360 CTOTACACAG GGGAGGCCTG CAGGACAGGG GACAsATGAG GCGGCGGCTC CCCCCACCAC 420 GCCTCATCTG TGACAGCCGA GTCCTGOAGA GGTACCTCTT GGAGGCCAAG GAGGCCOAGA 480 ATATCACGAC GGsCTGTGCT GAACACTGCA GC 512 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 72: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD. 512 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 72: AATGAGAATA TCACTOTCCC AGACACCAAA GTTAATTTCT ATGCCTCGAA OAOOATGsAG 60 OTCGGGCAGC AGGCCGTAGA AGTCTGGCAG OGCCTGGCCC TGCTGTCGsA AGCTCTCCTG 120 csassccAGG CCCTGTTGGT CAACTCTTCC cAGccGTssa J_GCCCCTGCA GCTGCATGTG ISO GATAAAGCCa TCAOTGOCCt TOGCAGCCTC ACCACTCTGC TTCGGGCTCT GG-GAGCCCAG 240 AAOOAAGCCA TCTCCCCTCC ACATGCOGCC TCAGCTGCTC CACTCCGAAC AATCACTCCT 300 GACACTTTCC GCAAACTCTT CCGAGTCTAC TCCAATTTCC TCCOGGGAAA GCTGAAGCTG 360 TACACAGOOG AGGCCTGCAG GACAGGGGAC AGATGAGGCG GCGGCTCCCC CCACCACGCC 420 TCATCTGTGA CAOCCGAOTC CTGGAGAOOT ACCTCTTGsA GGCCAAGOAG GCCGAGAATA 480 TCACGACGGG CTGTGCTsAA CACTOCAOCT TO 512 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 73. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA. (A) LONGITUD: 512 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 73: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 74. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 512 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA, lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 74: AATATCACTG TCCCACACAC CAAAGTTAAT TTCTATGCCT GGAAGAGGAT GsAGGTCaaG 60 CAGCAGGCCG TAGAAGTCTG GCAOsGCCTG OCCCTaCTOT CsGAAGCTGT CCTGCGGGGC 120 CAGGCCCTGT TGGTCAACTC TTCCCAGCCG TGGCAGCCCC TGCAGCTGCA TGTGGATAAA 180 GCCGTCAGTG GCCTTCGCAG CCTCACCACT CTOCTTCOCO CTCTCGGAGC CCAGAACGAA 240 OCCATCTCCC CTCCAGATGC GGCCTCAGCT GCTCCACTCC GAACAATCAC TGCTGACACT 300 TTCCOCAAAC TCTTCCGAGT CTACTCCAAT TTCCTCCGGG GAAAGCTsAA OCTOTACACA 360 ssoGAssccT 420 GTOACAOCCG AGTCCTGGAG AGGTACCTCT TGGAGGCCAA OsAGGCCOAG AATATCACGA 480 CsGGCTOTGC TGAACACTGC AGCTTGAATG AG 512 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 75: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 512 pares de bases (B) TIPO, ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 75: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 76. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 76: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 77: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 77: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 78: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 78: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 79: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 79: AACTCTTCCC AGCcstsssA GCCCC GCAG CTGCATGTGG ATAAAGCCGT CAGTGGCCTT 180 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 80. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 80: AGGATGGAGG TCGGaCAGCA GGCCGTAGAA GTCTGGCAGG GCCTGGCCCT GCT_TCGGAA 60 GCTGTCCTGC GOGOCCAOGC CCTGTTGOTC AACTCTTCCC AGCCGTGGGA GCCCCTGCAG 120 CTGCATGTss CAGTGGCCTT COCAGCCTCA CCACTCTGCT TCssGCTCTG 180 GGAGCCCAGA AGGAAGCCAT CTCCCCTCCA GATCCGOCCT CAGCTCCTCC ACTCCGAACA 240 ATCACTGCTG ACACTTTCCG CAAACTCTTC CGAGTCTACT CCAATTTCCT CCOGGGAAAG 300 CTGAAGCTGT ACACAGGGGA OGCCTOCAGa ACAGGGGACA GATGAGGCGs CGGCTCCCCC 360 CACCACGCCT CATCTGTOAC AGCCOAGTCC TGGAGAGGTA CCTCTTOGAO GCCAAGGAGG 420 CCGAGAATAT CACGACGGOC TOTGCTGAAC ACTGCAGCTT GAATGAGAAT AATCACTGTC 480 CCACACACCA AAGTTAATTT CTATGCCTOG AAO 513 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 81 : (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA" (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 81 : INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 82: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico d (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 82: OAsaTCGssc 60 CTGCGGOGCC AOOCCCTOTT OGTCAACTCT TCCCAGCCGT GGGAGCCCCT GCAOCTCCAT 120 stssATAAAG CCG CAGTGG CCTTCOCACC CTCACCACTC TOCTTCGGGC TCTsssAscc iso INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 83: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 83: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 84: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 84: CAGGCCCTGT TGaTCAACTC TTCCCAGCCG TGOGAGCCCC TGCAGCTGCA TGTGGATAAA 60 GCCGTCAGTG GCCTTCCCAG CCTCACCACT CTGCTTCGGG CTCTGGGAGC CCAGAAGGAA 120 GCCATCTCCC CTCCAGATGC COCCTCAGCT GCTCCACTCC GAACAATCAC TGCTOACACT 130 TTCCGCAAAC TCTTCCGAGT CTACTCCAAT TTCCTCCGGO OAAAOCTGAA GCTGTACACA 240 sssGAOGCCT CGCCTCATCT 300 GTGACAOCCG AOTCCTGGAG AOGTACCTCT TGGAGGCCAA GGAGGCCGAG AATATCACGA 360 casscTGTsc 420 AATTTCTATG CCTGGAAGAG GATOGAGOTC GOGCAGCACG CCOTAGAAGT CTGGCAGGGC 480 CTGsCCCTOC TsTCGGAAGC TGTCCTGCGO GGC 513 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 85: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 85: GCCCTGTTGG TCAACTCTTC CCAsCCGTsG GAGCCCCTGC AOCTGCATGT GGATAAAGCC 60 GTCAGTGGCC TTCGCAGCCT CACCACTCTG CTTCGOOCTC TOGGAGCCCA GAAGGAAOCC 120 ATCTCCCCTC CAGATGCGGC CTCAGCTGCT CCACTCCGAA CAATCACTOC TGACACTTTC 180 CGCAAACTCT TCCGAGTCTA CTCCAATTTC CTCCOGGGAA AGCTGAAGCT GTACACAGGO 240 GAGGCCTGCA GGACAssOOA CAGATOAOGC GGCGGCTCCC CCCACCACOC CTCATCTGTC 300 ACAOCCOAOT CCTGOAsAGG TACCTCTTGO AOOCCAAGOA GOCCGAGAAT ATCACGACGG 360 sCTGTsCTOA ACACTGCAGC TTGAATGAGA ATAATCACTG TCCCAGACAC CAAAOTTAAT 420 TTCTATGCCT GGAAGAGGAT GsAsGTCGGG CAGCAGGCCG TAGAAGTCTG OCAGGGCCTG 480 GCCCTGCTGT CGGAAGCTGT CCTGCGGGGC CAG 513 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 86: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 86: CTGTTOGTCA ACTCTTCCCA CCCGTOGGAG CCCCTGCAGC TGCATGTGGA TAAAGCCGTC 60 ACTGGCCTTC GCAGCCTCAC CACTCTGCTT CGGsCTCTGG GAGCCCAGAA GGAAGCCATC 120 TCCCCTCCAG ATGCGGCCTC AOCTGCTCCA CTCCGAACAA TCACTGCTGA CACTTTCCGC 180 AAACTCTTCC GAGTCTACTC CAATTTCCTC CGGGGAAAOC TOAAGCTCTA CACAGGOGAG 240 GCCTGCAGGA CAGGGGACAO ATGAGGCGGC GGCTCCCCCC ACCACGCCTC ATCTOTGACA 300 GCCGAGTCCT GGAGAOGTAC CTCTTGGAGG CCAAGGAGGC CGAGAATATC ACGACGGGCT 360 OTGCT-AACA CTGCAGCTTG AATGAGAATA ATCACTGTCC CAOACACCAA AGTTAATTTC 420 TATGCCTGGA AGAGGATGGA GGTCGGGCAG CAOGCCOTAO AAGTCTGGCA GGGCCTGOCC 480 -TGCTOTCOG AAGCTGTCCT GCGGOOCCAG GCC 513 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 87: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: Individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 87: TTGGTCAACT CTTCCEAGCC GTGGOAGCCC CTGCAGCTGC ATsTGGATAA AGCCGTCAGT 60 GGCCTTCOCA GCCTCACCAC TCTGCTTCOG GCTC-GOGAG CCCAaAAOGA AGCCATCTCC 120 CCTCCAGATG COOCCTCAGC TGCTCCACTC CGAACAATCA CTOCTOACAC TTTCCGCAAA 130 CTCTTCCGAG TCTACTCCAA TTTCCTCCGG GGAAAGCTGA AOCTOTACAC AGGGGAGGCC 240 TGCAGGACAG GGGACAGATG AGsCGGCGGC TCCCCCCACC ACGCCTCATC TOTGACAaCC 300 OAGTCCTGGA GAGGTACCTC TTGGAOaCCA AGOAGGCCGA GAATATCACG ACGGGCTGTG 360 CTGAACACTG CAGCTTGAAT GAGAATAATC ACTGTCCCAG ACACCAAAGT TAATTTCTAT 420 GCCTGGAAGA GOATCGAOG-T CGGGCAGCAG GCCGTAGAAG TCTGGCA_G_ CCTGGCCCTG 480 CTGTCGGAAG CTGTCCTGCO GOGCCAGGCC CTG 513 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 88: (I) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 88: GTCAACTCTT CCCAOCCGTG GGAGCCCCTG CAGCTGCATG TOGATAAAGC CGTCAGTC-aC 60 CTTCOCAGCC TCACCACTCT GCTTCGOOCT CTGGGAGCCC AOAAGGAAGC CATCTCCCCT 120 CCAGATGCGG CCTCAGCTGC TCCACTCCGA ACAATCACTG CTGACACTTT CCGCAAACTC 180 TTCCGAGTCT ACTCCAATTT CCTCCGGGGA AAGCTGAAsC TGTACACAGG GsAGOCCTGC 240 AGGACAGGGG ACAGATGAGG COGCGGCTCC CCCCACCACG CCTCATCTGT GACAGCCGAG 300 TCCTGGAGAO GTACCTCTTO OAGGCCAAGs AGGCCGAGAA TATCACGACG GGCTGTGCTG 360 AACACTGCAG CTTOAATGAG AATAATCACT GTCCCAGACA CCAAAGTTAA TTTCTATGCC 420 TGGAAGAGGA TGOAGGTCsa GCAGCACOCC GTAGAAGTCT GOCAOOOCCT GGCCCTOCTG 480 TCGGAAGCTG TCCTGCGGGG CCAGGCCCTG TTG 513 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 89: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 89: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 90: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 90: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 91: (I) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 91 : INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 92: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 92: ACCACTCTGC ttcsssctc_t OGOAGCCCAG AAOGAAGCCA TCTCCCCTCC AGATGCGGCC 120 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 93: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 93: ACTCTCCTTC osscTCTsss AGCCCAOAAO GAAGCCATCT CCCCTCCAGA TGCGGCCTCA 120 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 94: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 94: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 95: (I) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 95: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 96: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xl) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 96: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 97: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 97: CaOGCTCTOO aAGCCCAOAA GGAAGCCATC TCCCCTCCAG ATGCGGCCTC ACCTGCTCCA 60 CTCCGAACAA TCACTGCTOA CACTTTCCGC AAACTCTTCC GAGTCTACTC CAATTTCCTC 120 CGGGGAAAGC TOAAOCTGTA CACAGGGGAG GCCTGCAGOA CAGGGGACAG ATGAaOCssC 180 GGCTCCCCCC ACCACGCCTC ATCTGTGACA GCCGAGTCCT GGAGAGGTAC CTCTTGOAOs 240 CCAAGGAGGC CGAGAATATC ACGACGGGCT GTGCTCAACA CTOCAGCTTO AATOAsAATA 300 ATCACTCTCC CAOACACCAA AGTTAATTTC TATGCCTOOA AGAGGATGGA GOTCGOGCAG 360 CAGGCCGTAO AAGTCTssCA sOOCCTGsCC CTCCTGTCGG AAGCTGTCCT OCGOGGCCAG 420 OCCCTCTTOO TCAACTCTTC CCAGCCGTGG GAGCCCCTGC ACCTGCATGT GGATAAAGCC 480 GTCAGTGGCC TTCGCAOCCT CACCACTCTO CTT 513 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 98: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 98: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 99: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA. (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 99: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 100: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 100: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 101 : (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 101 : INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 102: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 102: TsscAGGscc 420 TCTTCCCAGC CGTGGGAGCC CCTGCAGCTG TOGCCTTCGC 480 AOCCTCACCA CTCraCTTCO GGCTCTOGsA 513 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 103: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 103: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 104: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 104: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 105: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: Individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 105: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 106: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 106: ATCTCCCCTC CAGATGCGGC CTCAGCTGCT CCACTCCGAA CAATCACTGC TGACACTTTC 60 CGCAAACTCT TCCGAGTCTA CTCCAATTTC CTCCGGGGAA AGCTGAAGCT GTACACAGOG 120 GAGGCCTGCA GGACAGaGGA CAGATGAGGC GGCGGCTCCC CCCACCACGC CTCATCTGTO 180 ACAOCCGAGT CCTGGAGAGG TACCTCTTCC AGGCCAAGGA GGCCGAGAAT ATCACCACGG 240 GCTGTGCTGA ACACTGCAGC TTGAATGAGA ATAATCACTG TCCCAGACAC CAAAGTTAAT 300 TTCTATGCCT GGAAGAGGAT GCAGOTCaaO CAGCAGGCCG TAGAAGTCTO GCAGGGCCTG 360 GCCCTCCTCT COGAAGCTOT CCTscGGsoC CAGGCCCTGT TGGTCAACTC TTCCCAGCCG 420 TOGGAGCCCC TGCAGCTOCA TsTOGATAAA OCCGTCAGTs GCCTTCGCAG CCTCACCACT 480 cTGCTTcssG GCC 513 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 107: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 107: TCCCCTCCAC ATOCOGCCTC AGCTGCTCCA CTCCGAACAA TCACTGCTGA CACTTTCCGC 60 AAACTCTTCC GAGTCTACTC CAATTTCCTC COGGGAAAGC TOAAGCTOTA CACAGCOGAG 120 GCCTGCAGGA CAGGGGACAG ATGAGGCOGC CGCTCCCCCC ACCACGCCTC ATCTOTGACA 180 OCCsAGTCCT GOAGAGGTAC CTCTTGGAGG CCAAGGAGGC CGAGAATATC ACGACaOGCT 240 GTGCTGAACA CTGCAGCTTO AATGAGAATA ATCACTGTCC CAGACACCAA AGTTAATTTC 300 TATGCCTGGA AGAGGATssA GGTCGGGCAO CAGGCCGTAs AAOTCTGGCA GGGCCTGGCC 360 CTGCTGTCGG AAGCTGTCCT GCGGGGCCAG GCCCTGTTGG TCAACTCTTC CCAGCCsTGO 420 OAGCCCCTCC AGCTOCATCT ssATAAAGCC GTCAGTGGCC TTCGCAsCCT CACCACTCTG 480 CTTCGOGCTC TGGGAGCCCA GAAGGAAGCC ATC 513 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 108: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 108: CCTCCAGATC COGCCTCAGC COAACAATCA CTGCTGACAC TTTCCCCAAA 60 CTCTTCCGAG TCTACTCCAA TTTCCTCCGO GGAAAGCTGA AGCTGTACAC AGsGOAGGCC 120 TGCAOGACAG GGGACAGATO AOaCGGCsOC TCCCCCCACC ACGCCTCATC TGTGACAGCC 180 GAGTCCTGOA OAGGTACCTC TTGGAGGCCA AGGAGOCCGA GAATATCACG ACGsOCTGTG 240 CTGAACACTG CAGCTTGAAT GAGAATAATC ACTGTCCCAG ACACCAAAGT TAATTTCTAT 300 GCCTsOAAGA GGATGsAssT GCCGTAGAAG TCTGsCAGGG 360 CTGTCGGAAG CTGTCCTGCO GOOCCAOOCC CTGTTGGTCA ACTCTTCCCA GCCGTssOAG 420 CCCCTGCAGC TOCATGTGGA TAAAGCCGTC AOTGGCCTTC OCAGCCTCAC CACTCTGCTT 480 CGGOCTCTGG GAGCCCAGAA GGAAGCCATC TCC 513 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 109: (I) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 109: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 110: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 110: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 111 : (¡) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ü) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 111: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 112: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 112: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 113: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: Individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 113: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 114: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 114: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 115: (I) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA, individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 115: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 116: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: Individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 116: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 117: (I) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: Individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 117: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 118: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 118: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 119: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 513 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 119: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 120: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 501 bases de pares (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 120: GCCCCACCAC GCCTCATCTG TGACAGCCGA GTCCTGGAGA GGTACCTCTT GGAGGCCAAG 60 GAGGCCGAGA-ATATCACGAC OGGeTGTGCT GAALACTCCA GCTTOAATGA GAATATCACT 120 GTCCCAGACA CCAAAGTTAA TTTCTATGCC TGGAAGAGGA TGGAGGTCGG OCAGCAGGCC 180 OTAGAAGTCT GOCAOOGCCT GOCCCTGCTO TCOGAAOCTO TCCTOCOGOG CCMGCCCTO 240 TTGGTCAACT CTTCCCAGCC GTGGGAGCCC CTsCAGCTGC ATGTGGATAA AGCCGTCAGT OGCCTTCGCA GCCTCACCAC TCTGCTTCGs GCTCTGGsAG CCCAGAAGGA AGCCATCTCC 360 CCTCCAGATG CGGCCTCAGC TCCTCCACTC CGAACAATCA CTGCTGACAC TTTCCGCAAA 420 TCTACTCCAA TTTCCTCCGG GGAAAGCTGA AGCTOTACAC AGGGGAGGCC TGCAGGACAG GGGACAGATG A 501 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 121 : (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 166 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 121: Ala Pro Pro Arg Leu He cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu 1 5 10 15 Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn He Thr Thr Gly Cys Ala Glu His 25 30 Cys Ser Leu Asn Glu Asn He Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn he 40 45 Tyr Ala Trp Lys Arg Met slu Val Gly Gln Gln Ala Val slu Val Trp 50 55 60 Cln Gly Leu Ala Leu Leu Ser slu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu 65 70 75 80 Leu Val Asn Ser Ser Gln pro Trp alu Pro Leu Gln Leu His Val Asp 85 90 - 95 Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu 100 105 110 Gly Ala Gln Lys Glu Ala He Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala 115 120 125 Pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu phe Arg Val 130 135 140 Tyr Ser Asn Phe Leu Arg sly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala 145 150 155 160 Cys Arg Thr Gly Asp Arg 165 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 122: (I) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xl) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 122: Thr val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Olu V¡1 Gly sln oln A_a Val Glu Val Trp sln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser sln Pro Trp Glu P-O Leu Oln Leu H_s Val Asp Lys Ala Val Ser Oly Leu Arg ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu oly Ala Oln Lys Olu Ala II. t r Pro Pro Asp Ala Tía ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr He Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr ser Asn Phe ju Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Gly Gly Gly ___ Ala Pro Pro Arg __u He Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu ?r, £_- Leu Leu_Glu Ala 1% slu Ala slu Asn He Thr Thr sly Cy. 14b ... Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn H11e 1 1770 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 123: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 4 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 123: Gly sly sly Ser INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 124: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 8 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 124: Oly Gly sly Ser aly Giy sly Ser INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 125: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 12 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 125: sly Gly Gly Ser sly Gly Gly Ser Oly Gly Gly Ser 1 S 10 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 126: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 7 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA, individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 126: Ser sly Gly Ser Gly Gly Ser 1 5 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 127: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 5 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: Individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 127: Glu Phe Gly Asn Met INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 128: (I) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 6 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 128: Glu Phe Gly Gly Asn Met INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 129: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 9 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 129: Glu Phe Gly Gly Asn Gly Gly Asn Met 1 5 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 130: (I) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 7 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 130: Gly Gly Ser Asp Met Ala Gly 1 5 INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 131 : (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 27 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 131 : OCGCGCCCAT GGACAATCAC TOCTGAC INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 132: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 15 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 132: INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 133: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 43 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 133: GCGCGCAAGC TTATTATCGG AGTGGAGCAG CTGAOaCCGC ATC INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 134: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 21 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ. ID NO.: 134:

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Un polipéptldo agonista de receptor de EPO humano, que contiene una secuencia de aminoácidos de EPO modificada de la fórmula: SEQ ID NO : 121 , en donde opcionalmepte 1-6 aminoácidos del grupo N-terminal original y 1-5 aminoácidos del grupo D-termlnal original se eliminan de dicho polipéptido agonista de receptor de EPO; en donde el grupo N-terminal original se une al grupo C-terminal original directamente o a través de un adaptador capaz de unir el grupo N-terminal al grupo C-terminal y teniendo los nuevos grupos C-terminal y N-terminal en los aminoácidos; 23-24; 24-25; 25-26; 26-27; 27-28; 28-29; 29-30; 30-31 ; 31-32; 32-33; 33-34; 34-35; 35-36; 36-37; 37-38; 38-39; 40-41 ; 41-42; 43-44; 44-45; 45-46; 46-47; 47-48; 48-49; 50-51 ; 51-52; 52-53; 53-54; 54-55; 55-56; 56-57; 57-58; 77-78; 78-79; 79-80; 80-81 ; 81-82; 82-83; 84-85; 85-86; 86-87; 87-88; 88-89; 108-109; 109-110; 110-111 ; 111-112; 112-113; 113-114; 114-115; 115-116; 116-117; 117-118; 118-119; 119-120; 120-121 ; 121-122; 122-123; 123-124; 124-125; 125-126; 126-127; 127-128; 128-129; 129-130; 130-131; 131-132, respectivamente; y dicho polipéptido agonista de receptor de EPO puede opcionalmente precederse inmediantamente en el grupo N-terminal (metionina"1), (alanina-1) o (metionina-2), (alanina"1).

2.- El polipéptido agonista de receptor de EPO, de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque el adaptador se selecciona del grupo que consiste de; SEQ ID NO : 123; SEQ ID NO : 124; SEQ ID NO : 125; SEQ ID NO : 126; SEQ ID NO : 127; SEQ ID NO : 128; SEQ ID NO : 129; y SEQ ID NO : 130.

3.- El polipéptido agonista de receptor de EPO de conformidad con la reivindicación 1 , seleccionado del grupo que consiste de; SEQ ID NO : 1 ; SEQ ID NO : 2; SEQ ID NO : 3; SEQ ID NO : 4; SEQ ID NO : 5; SEQ ID NO : 6; SEQ ID NO : 7; SEQ ID NO : 8; SEQ ID NO : 9; SEQ ID NO : 10; SEQ ID NO : 11 ; SEQ ID NO : 12; SEQ ID NO : 13; SEQ ID NO : 14; SEQ ID NO : 15; SEQ ID NO : 16; SEQ ID NO : 17; SEQ ID NO : 18; SEQ ID NO : 19; SEQ ID NO : 20; SEQ ID NO : 21 ; SEQ ID NO : 22; SEQ ID NO : 23; SEQ ID NO : 24; SEQ ID NO : 25; SEQ ID NO : 26; SEQ ID NO : 27; SEQ ID NO : 28; SEQ ID NO : 29; SEQ ID NO : 30; SEQ ID NO : 31 ; SEQ ID NO : 32; SEQ ID NO : 33; SEQ ID NO : 34; SEQ ID NO : 35; SEQ ID NO : 36; SEQ ID NO : 37; SEQ ID NO : 38; SEQ ID NO : 39; SEQ ID NO : 40; SEQ ID NO : 41 ; SEQ ID NO : 42; SEQ ID NO : 43; SEQ ID NO : 44; SEQ ID NO : 45; SEQ ID NO : 46; SEQ ID NO : 47; SEQ ID NO : 48; SEQ ID NO : 49; SEQ ID NO : 50; SEQ ID NO : 51 ; SEQ ID NO : 52; SEQ ID NO : 53; SEQ ID NO : 54; SEQ ID NO : 55; SEQ ID NO : 56; SEQ ID NO : 57; SEQ ID NO : 58; SEQ ID NO : 59; SEQ ID NO : 122.

4.- El polipéptido agonista de receptor de EPO de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado además porque la secuencia del adaptador (GlyGlyGlyGlySer SEC ID NO : 123) se reemplaza con una secuencia de adaptador seleccionada del grupo que consiste de; SEQ ID NO : 124; SEQ ID NO : 125; SEQ ID NO : 126; SEQ ID NO : 127, SEQ ID NO : 128; SEQ ID NO : 129; y SEQ ID NO : 130.

5.- Una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de ADN que codifica al polipéptido agonista de receptor de EPO de conformidad 5 con la reivindicación 1.

6.- Una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de ADN que codifica al polipéptido agonista de receptor de EPO de conformidad con la reivindicación 2.

7.- Una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia 10 de ADN que codifica al polipéptido agonista de receptor de EPO de conformidad con la reivindicación 3.

8.- Una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de ADN que codifica al polipéptido agonista de receptor de EPO de conformidad con la reivindicación 3, seleccionada del grupo que consiste de; SEQ ID NO: 60; 15 SEQ ID NO: 61; SEQ ID NO: 62; SEQ ID NO: 63; SEQ ID NO: 64; SEQ ID NO: 65; SEQ ID NO: 66; SEQ ID NO: 67; SEQ ID NO: 68; SEQ ID NO: 69; SEQ ID NO: 70; SEQ ID NO: 71; SEQ ID NO: 72; SEQ ID NO: 73; SEQ ID NO: 74; SEQ ID NO: 75; SEQ ID NO: 76; SEQ ID NO: 77; SEQ ID NO: 78; SEQ ID NO: 79; SEQ ID NO: 80; SEQ ID NO: 81; SEQ ID NO: 82; SEQ ID NO: 83; SEQ ID NO: 20 84; SEQ ID NO: 85; SEQ ID NO: 86; SEQ ID NO: 87; SEQ ID NO: 88; SEQ ID NO: 89; SEQ ID NO: 90; SEQ ID NO: 91; SEQ ID NO: 92; SEQ ID NO: 93; SEQ ID NO: 94; SEQ ID NO: 95; SEQ ID NO: 96; SEQ ID NO: 97; SEQ ID NO: 98; SEQ ID NO: 99; SEQ ID NO: 100; SEQ ID NO: 101; SEQ ID NO: 102; SEQ ID NO: 103; SEQ ID NO: 104; SEQ ID NO. 105, SEQ ID NO: 106; SEQ ID NO: 107; SEQ ID NO: 108; SEQ ID NO: 109; SEQ ID NO: 110; SEQ ID NO: 111 ; SEQ ID NO: 112; SEQ ID NO: 113; SEQ ID NO: 114; SEQ ID NO: 115; SEQ ID NO: 116; SEQ ID NO: 117; SEQ ID NO: 118; SEQ ID NO: 11

9. 9.- Una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de ADN que codifica al polipéptido agonista de receptor de EPO de conformidad con la reivindicación 4.

10.- Un método de producción de un polipéptido agonista de receptor de EPO que comprende: cultivar bajo condiciones nutrientes adecuadas, una célula hospedante transformada o transfectada con un vector reproducible que comprende dicha molécula de ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 5, 6, 7, 8 ó 9 en una forma que permite la expresión de dicho polipéptido agonista de receptor de EPO y recuperando dicho pollpéptido agonista de receptor de EPO.

11.- Una composición que comprende; un polipéptido de agonista de receptor de EPO de conformidad con la reivindicación 1 , 2, 3 ó 4; y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

12.- Una composición que comprende, un polipéptido agonista de receptor de EPO de conformidad con la reivindicación 1 , 2, 3, ó 4; un factor; y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

13.- La composición de conformidad con la reivindicación 12, caracterizada además porque dicho factor se selecciona del grupo que consiste de: GM-CSF, G-CSF, ligando c-mpl, M-CSF, IL-4, IL-2, IL-3, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11 , IL-12, IL-13, IL-15, LIF, ligando flt3/flk2, hormona de crecimiento, factor de crecimiento de la célula B, factor de diferenciación de la célula B, factor de diferenciación de la eosinofila y un factor de célula totipotencial, variantes IL-3, proteínas de fusión, agonistas de receptor G-CSF, agonistas de receptor c-mpl, agonistas de receptor IL-3, agonistas de receptor multifunsionales.

14.- El uso de un polípéptido agonista de receptor de EPO de conformidad con la reivindicación 1 , 2, 3 ó 4 para la fabricación de un medicamento para estimular la producción de células hematopoyéticas en un paciente que tiene trastornos hematopoyéticos.

15.- Un método para la expansión ex vivo selectiva de los progenitores eritroides, comprendiendo los pasos de; (a) cultivar las células progenitoras eritroides en un medio de cultivo, comprendiendo; un polipéptido de conformidad con la reivindicación 1 , 2, 3 ó 4; y (b) cosechar dicha células cultivadas.

16.- Un método para la expansión ex vivo selectiva de los progenitores eritroides, conteniendo los pasos de; (a) separar la células progepitoras eritroides de las otras células; (b) cultivar dichas células progenitoras eritroides con un medio de cultivo seleccionado que comprende un polipéptido de conformidad con la reivindicación 1 , 2, 3 ó 4; y (c) cosechar dichas células cultivadas.

17- Un método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado además porque dichas células progenitoras eritroides se aislan de la sangre periférica.

18.- Un método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizada además porque dichas células progenitoras eritroides se aislan de la sangre periférica.