MXPA99003875A

MXPA99003875A - Agonistas novedosos de receptor flt3

Info

Publication number: MXPA99003875A
Application number: MXPA/A/1999/003875A
Authority: MX
Inventors: A Mcwherter Charles
Original assignee: Feng Yiqing; Gd Searle & Co; Mckearn John P; A Mcwherter Charles; Minnerly John C; Minster Nancy I; Staten Nicholas R; Streeter Philip R; Woulfe Susan L
Priority date: 1996-10-25
Filing date: 1999-04-26
Publication date: 1999-10-14

Abstract

Se describen proteínas agonistas novedosas de receptor flt3, moléculas de ADN que codifican para tales proteínas agonistas de receptor flt3, métodos para obtener dichas proteínas, y métodos para usar las mismas.

Description

AGONISTAS NOVEDOSOS DE RECEPTOR FLT3 La presente solicitud reclama la prioridad bajo el título 35, del Código de los Estados Unidos 119 de la solicitud provisional de los Estados Unidos serie No. 60/030,094, presentada el 25 de octubre de 1996.

CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a agonistas de receptor flt3 de humano. Estos agonistas de receptor flt3 retienen una o más actividades del ligando flt3 nativo, y pueden mostrar también actividad estimulante mejorada de células hematopoyéticas y/o un perfil de actividad mejorado el cual puede incluir reducción de actividades biológicas inconvenientes asociadas con el ligando flt3 nativo, y/o tienen propiedades físicas mejoradas que pueden incluir solubilidad, estabilidad y eficiencia de repliegue mejoradas.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Los factores estimulantes de colonias que estimulan la diferenciación y/o proliferación de células de médula ósea han generado gran interés debido a su potencial terapéutico para restaurar los niveles deprimidos de células derivadas de células madre hematopoyéticas. Los factores estimulantes de colonias en sistemas tanto de humano como de murino han sido identificados y distinguidos de acuerdo a sus actividades. Por ejemplo, los CSF de granulocitos (G-CSF) y los CSF de macrófagos (M-CSF) estimulan la formación in vitro de colonias de granulocitos y macrófagos neutrófiios, respectivamente, mientras que GM-CSF y la interleuc?na-3 (IL-3) tienen actividades más amplias y estimulan la formación de colonias de macrófagos y de granulocitos neutrófilos y eosinófilos. Ciertos factores tales como el ligando flt3 son capaces de afectar predominantemente a las células madre. Los receptores de tirosina cinasa son receptores del factor de crecimiento que regulan la proliferación y diferenciación de numerosas células. Ciertos receptores de tirosina cinasa funcionan dentro del sistema hematopoyético. El ligando flt3 (Rosnet y otros, Oncogene, 6:1641-1650,1991 ) y flk-2 ( atthews y otros, Cell, 65:1143- 152, 1991) son formas de un receptor de tirosina cinasa que están relacionadas a los receptores c-fms y c-kit. Los receptores flk-2 y flt3 son similares en secuencia de aminoácidos y varían en dos residuos de aminoácidos en el dominio extracelular, y divergen en un segmento de 31 aminoácidos localizado cerca del extremo O El ligando flt3 es un factor de crecimiento hematopoyético que tiene la propiedad de ser capaz de regular el crecimiento y la diferenciación de células progenitoras hematopoyéticas y células madre hematopoyéticas. Debido a su capacidad para sustentar el crecimiento y la proliferación de células progenitoras, los agonistas de receptor fit3 tienen potencial para su uso terapéutico en el tratamiento de trastornos hematopoyéticos tales como la anemia apoplástica y síndromes mielodisplásticos. Adiciopalmente, los agonistas de receptor flt3 serán útiles para restaurar células hematopoyéticas hasta cantidades normales en aquellos casos en donde el número de células ha sido reducido debido a enfermedades o a tratamientos terapéuticos tales como radiación y quimioterapia. El documento WO 94/28391 describe la secuencia de proteína nativa del ligando flt3 y una secuencia de ADNc que codifica para el ligando ftl3, métodos para expresar dicho ligando en una célula hospedera con el ADNc, y métodos para tratar pacientes con un trastorno hematopoyético usando el ligando flt3. La patente de E.U.A. No. 5, 554, 512 está dirigida al ligando flt3 de humano como una proteína aislada, ADN que codifica para el ligando flt3, células hospederas transfectadas con moléculas de ADNc que codifican para el ligando flt3, y métodos para tratar pacientes con dicho ligando. El documento WO 94/26891 provee ligandos flt3 de mamífero, incluyendo un aislado que tiene una inserción de 29 aminoácidos, y fragmentos del mismo.

Reordenamiento de las secuencias de proteína En la evolución, los reordenamientos de las secuencias de ADN desempeñan una función importante para generar una diversidad de estructuras y funciones de las proteínas. La duplicación de genes y el entremezclado de exones, provee un mecanismo importante para generar rápidamente diversidad y proveer así organismos con una ventaja competitiva, especialmente debido a que la velocidad de mutación basal es baja (Doolittle, Protein Science 1 :191-200, 1992). El desarrollo de métodos de ADN recombinante ha hecho posible estudiar los efectos de la transposición de secuencias sobre el plegamiento, estructura y función de las proteínas. El enfoque usado para crear nuevas secuencias se semeja a aquel de pares de proteínas que ocurren naturalmente y que se relacionan mediante reorganización lineal de sus secuencias de aminoácidos (Cunningham y otros, Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 76:3218-3222, 1979; Teather y Erfle, J. Bacteriol. 172: 3837-3841 , 1990; Schimmmg y otros, Eur. J. Biochem. 204: 13-19, 1992; Yamiuchi y Minamikawa, FEBS Lett. 260:127-130, 1991 : MacGregor y otros, FEBS Lett. 378:263-266, 1996). La primera aplicación in vitro de este tipo de reortienamiento para proteínas fue descrita por Goldenberg y Creighton (J. Mol. Biol. 165:407-413, 1983). Un nuevo extremo N se selecciona en un sitio interno (punto de rompimiento) de la secuencia original, la nueva secuencia teniendo el mismo orden de aminoácidos que la secuencia original a partir del punto de rompimiento hasta que alcanza un aminoácido que está en, o cerca de, el extremo C original. En este punto, la nueva secuencia es unida, ya sea directamente o a través de una porción adicional de secuencia (enlazador), a un aminoácido que está en, o cerca de, el extremo N original, y la nueva secuencia continúa con la misma secuencia que la secuencia original, hasta que alcanza un punto que está en, o cerca de, el aminoácido que era el extremo N, hacia el sitio del punto de rompimiento de la secuencia original, este residuo formando el nuevo extremo C de la cadena.

Este enfoque se ha aplicado a proteínas que varían en tamaño de 58 a 462 aminoácidos (Goldenberg y Creighton, J. Mol. Biol. 165:407-413, 1983; Ll y Coffino, Mol. Cell. Biol. 13:2377-2383, 1993). Las proteínas examinadas han representado una amplia gama de clases estructurales, incluyendo proteínas que contienen predominantemente hélice a (interieucina-4; Kreitman y otros, Cytokine 7:311-318, 1995), lámina ß (interleucina-1 ; Horllck y otros, Protein Eng. 5:427-431 , 1992), o mezclas de ambas (fosforribosil antranilato isomerasa de levaduras; Luger y otros, Science 243: 206-210, 1989). Ambas categorías de función de proteínas se representan en estos estudios de reorganización de secuencia: Enzimas Lisozima T4 Zhapg y otros, Biochemistry 32:12311-12318 (1993); Zhang y otros, Nature Struct. Biol. 1:434-438 (1995) dihidrofoiiato Buchwalder y otros, Biochemistry reductasa 31 :1621-1630 (1994); Protasova y otros, Prot. Eng. 7:1373-1377 (1995) ribonucleasa T1 Mullins y otros, J. Am. Chem. Soc. 116:5529-5533 (1994); Garrett y otros, Protein Science 5:204-211 (1996) ß-glucanasa de Bacillus Hahn y otros, Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 91 :10417-10421 (1994) Aspartato Yang y Schachman, Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 90:11980-19984 (1993) transcarbamoilasa Fosforribosil Luger y otos, Siencie 243:206-210 antranilato (1989), Luger y otros, Prot. Eng. ¡somerasa 3:249-258 (1990) Pepsina/pepsinógeno Lin y otros, Protein Science 4:159-166 (1995) Gliceraldehído-3- Vignais y otros, Protein Science fosfato deshidrogenasa 4:994-1000 (1995) Ornitina Li y Coffino, Mol. Cell. Biol. descarboxilasa 13:2377-2383 (1993) Fosfoglicerato Ritco-Vonsovici y otros, Biochemistry deshidrogenasa de 34:16543-16551 (1995) levadura Inhibidores de enzima Inhibidor básico de Goldenberg y Creighton, J. Mol. tripsina pancreática Biol. 165:407-413 (1983) Citocinas lnterleucina-1 ß Horlick y otros, Protein Eng. 5:427- 431 (1992) interleucina-4 Kreitman y otros, Cytokine 7:311- 318 (1995) Dominio de reconocimiento de tirosina cinasa Dominio SH3 de Viguera, y otros, J. Mol. Biol. espectrina a 247:670-681 (1995) Proteína de transmembrana Omp A Koebnik y Kramer, J. Mol. Biol. 250:617-626 (1995) Proteína quimérica Molécula de fusión de Kreitman y otros, Proc. Nati. Acad. lnterleuclna-4-exotoxina de Sci. U.S.A 91 :6889-6893 (1994).

Psßudomonas Los resultados de estos estudios han sido altamente variables. En muchos casos, se observaron actividad, solubilidad o estabilidad termodinámica substancialmente menores (dihidrofoliato reductasa de E. coli, aspartato transcarbamoilasa, fosforribosil antranilato ¡somerasa, gl?ceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa, ornltina descarboxiiasa, omp A, fosfoglicerato deshidrogenasa de levadura). En otros casos, la proteína de secuencia reordenada parece tener muchas propiedades casi idénticas a las de su contraparte natural (inhibidor básico de tripsina pancreática, lisozima T4, ribonucleasa T1 , ß-glucanasa de Bacillus, interieucina-1 ß, dominio SH3 de espectrina a, pepsinógeno, interleucina-4). En casos excepcionales, se observó un mejora inesperada en algunas propiedades de la secuencia natural, por ejemplo, la solubilidad y la velocidad de repliegue para las secuencias reordenadas del domino SH3 de espectrina a, y la afinidad de receptor y la actividad antitumoral de la molécula de fusión transposada de interleucina-4-exotoxina de Pseudomonas (Kreitman y otros, Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 91 : 6889-6893, 1994; Kreitman y otros. Cáncer Res. 55:3357-3363, 1995). La motivación primaria de estos tipos de estudios ha sido estudiar la función de las interacciones a corta escala y a gran escala en ei plegamiento y estabilidad de las proteínas. Los reordenamientos de secuencia de este tipo convierten un subgrupo de interacciones que son de gran escala en la secuencia original, en interacciones a corta escala en la nueva secuencia, y viceversa. El hecho de que muchos de estos reordenamientos de secuencias sean capaces de lograr una conformación con por lo menos cierta actividad, es evidencia persuasiva de que el plegamiento de las proteínas ocurre mediante vías de plegamiento múltiples (Viguera y otros, J. Mol. Biol 247:670-681 , 1995). En el caso del dominio SH3 de la espectpna alfa, la elección de nuevos extremos en posiciones que correspondían a giros de pasador beta, dio como resultado proteínas con estabilidad ligeramente menor, pero que no obstante eran capaces de plegarse. Las posiciones de los puntos de rompimiento internos usados en ios estudios citados en la presente, se encuentran exclusivamente sobre la superficie de las proteínas, y están distribuidas a lo largo de la secuencia lineal sin alguna inclinación obvia hacia los extremos o la parte media (la variación de la distancia relativa del extremo N original al punto de rompimiento es de aproximadamente 10 a 80% de la longitud total de la secuencia). Los enlazadores que unen los extremos N y C originales en estos estudios han variado de 0 a 9 residuos. En un caso (Yang & Schachman, Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 90:11980-11984, 1993), una porción de la secuencia ha sido suprimida del segmento del extremo C original, y se ha hecho la unión del extremo C truncado con el extremo N original. Los residuos hidrofílicos flexibles tales como Gly y Ser se usan con frecuencia en los enlazadores. Viguera y otros (J. Mol. Biol. 247:670-681 , 1995) compararon la unión de los extremos N y C originales con enlazadores de 3 ó 4 residuos; el enlazador de 3 residuos era termodinámicamente menos estable. Protasova y otros (Protein Eng. 7: 1373- 1377, 1994) usaron enlazadores de 3 ó 5 residuos en la unión de extremos N originales de dihidrofoliato reductasa de E. coli; únicamente el enlazador de 3 residuos produjo proteínas con buen rendimiento.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Los agonistas modificados del receptor flt3 de humano de la presente invención se pueden representar mediante la fórmula: X -(L) a -X2 en donde: a es 0 ó 1 ; X1 es un péptido que comprende una secuencia de aminoácidos que corresponde a la secuencia de residuos n+1 a J; X2 es un péptido que comprende una secuencia de aminoácidos que corresponde a la secuencia de residuos 1 a n; n es un entero que varía de 1 a J-1 ; y L es un enlazador. En la fórmula anterior, los residuos de aminoácidos constituyentes del ligando flt3 de humano se ennumeran secuencialmente de 1 a J del extremo amino al extremo carboxilo. Un par de aminoácidos adyacentes dentro de esta proteína se puede ennumerar como n y n+1 , respectivamente, en donde n es un entero que varía de 1 a J-1. El residuo n +1 se convierte en el nuevo extremo N del nuevo agonista de receptor flt3, y el residuo n se convierte en el nuevo extremo C del nuevo agonista de receptor flt3. La presente invención se refiere a agonistas novedosos de receptor flt3 de la siguiente fórmula: ThrGlt?--3pCysSerPheGlnH?sSerProIleSerSer----pPheAlaValLysI-.eArg 10 20 GluLeuSerAspTyrLeuLe GlnA?p1---rPro alThrValAlaSerAsnLeuGlnAsp 30 40 GluGluLeuCysGlyGlyLeuTrpArgLeuValLeuAlaGlnArgTrpMetGl ArgLeu 50 60 LysT--rValAlaGlySerLysMetGlnGlyLeuLeuGluArgValAsnT-?rGluIleH--S 70 80 PheValThrLysCysAlaPheGl- ProProProSerCy?LeuArgPheValGl--.T--rAsn 90 100 IleSerArgLeuLeuGlnGluT--r?erGluGlnLeuValAlaLeuLysProTrpIleT--r 110 120 ArgGlnAsnPheSerArgCysLeuGluLeuGlnCysGlnProAspSerSerThrLeuPro 130 ^140 ProProTrpSerProArgProLeuGluAlaThrAlaProThrAlaProGlnProProI-eu 150 160 LeuLeuLeuLeuLeuLeuProValGlyLeuLeu---euLeuAlaAlaAlaTrpCysLeuH-.s 170 180 TrpGlnArgThrArgArgArgT--rProArgProGlyGluGlnValProProValPro?er 190 200 ProGlnAspLeuLauLeuValGluH-.s ?EQ ID NO : 145 209 en donde el extremo N se une al extremo C directamente o a través de un enlazador capaz de unir el extremo N al extremo C, teniendo nuevos extremos C y N en los aminoácidos: 28-29 42-43 93-94 29-30 64-65 94-95 30-31 65-66 95-96 31-32 66-67 96-97 2-33 86-87 97-98 34-35 87-88 98-99 36-37 88-89 99-100 37-38 89-90 100-101 38-39 90-91 101-102 39-40 91-92 102-103 40-41 92-93 respectivamente; y 41-42 adicionalmente, dicho polipéptido agonista de receptor flt3 puede ir precedido inmediatamente por (metionina"1), (alanina"1) o (metionina"2, alanina"1). Una modalidad preferida es el polipéptido agonista de receptor flt3 de humano, que comprende una secuencia de aminoácidos modificada del ligando flt3 de la fórmula: Tl-rGlr-A--pCysSerPheGlnH-.sSerProIle--erSerAspPheAlaValLysIleArg 10 20 GluLeuSerAspTyrLeuLeuGl--AspTyrProValT--rValAla?erAsr-LeuGlnAsp 30 40 GluGluLeuCysGlyGlyLeuTrpArgLeuValLet-AlaslnArgTrpMetsluArgLeu 50 60 LysT--rValAlaGlySerLysMetGlnGlyLeuLeuGluArgValA-.pThrGluIleHis 70 80 PheValThrLysCysAlaPheGlnProProProSerCysLeuArgP--eValGl--T--rAs?- 90 100 IleSerArgLeuLeuGlnGluThrSerGluGlnLeuValAlaLeuLysProTrpIleThr 110 120 ArgGl-?AsnPheSerArgCysLeuGluLF'--GlnCysGlnProAspSerSerT----l-eu 130 en donde el extremo N se une al extremo C directamente o a través de un enlazador capaz de unir el extremo N al extremo C, teniendo nuevos extremos C y N en los aminoácidos: 28-29 42-43 93-94 10 29-30 64-65 94-95 30-31 65-66 95-96 31-32 66-67 96-97 32-33 86-87 97-98 34-35 87-88 98-99 15 36-37 88-89 99-100 37-38 89-90 100-101 38-39 90-91 101-102 39-40 91-92 102-103 40-42 92-93 respectivamente; y 20 41-42 adicionalmente, dicho polipéptido agonista de receptor fit3 puede ir precedido inmediatamente por (metionina"1), (alanina"1) o (metionina"2, alanina"1).

Los puntos de rompimiento más preferidos ep los cuales se pueden obtener nuevos extremos C y N son 36-37, 37-38, 38-39, 39-40, 40-41 , 41-42, 42-43, 64-65, 65-66, 66-67, 86-87, 87-88, 88-89, 89-90, 90-91 , 91-92, 92-93, 93-94, 95-96, 96-97, 97-98, 99-100 y 100-101. Los puntos de rompimiento más preferidos en los cuales se pueden obtener nuevos extremos C y N son: 39-40, 65-66, 89-90, 99-100 y 100-101. Los agomtas de receptor flt3 de la presente invención pueden contener substituciones, supresiones y/o inserciones de aminoácidos. Se pretende también que los agonistas de receptor flt3 de la presente invención puedan tener también supresiones de aminoácidos en cualquiera de los extremos N y C o ambos en la proteína original, y/o supresiones de los nuevos extremos N y/o C en las proteínas de secuencia reordenada en las fórmulas mostradas anteriormente. Los agonistas de receptor flt3 de la presente invención pueden contener substituciones, supresiones y/o inserciones de aminoácidos. Una modalidad preferida de la presente invención, el enlazador (L) que une al extremo N con el extremo C, es un polipéptido seleccionado del grupo que consiste de: GlyGlyGlySer SEQ ID NO: 38; GlyGlyGlySerGlyGlyGlySer SEQ ID NO:39; GlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySer SEQ ID NO: 40; ?erGlyGlySerGlyGlySer SEQ ID NO-41; GluPheGlyAsnMet SEQ ID NO: 42; GluPheGlyGlyAsn et SEQ ID NO : 43 ; GluPheGlyGlyAsnGlyGlyAspMet SEQ ID NO:44; GlyGlySerAspMet-AlaGly SEQ ID NO: 45; ?erGlyGlyAsnGly ?EQ ID NO: 46; ?erGlyGlyAsnGly?erGlyGlyAsnGly ?EQ ID NO:47; ?erGlyGlyAsnGly?erGlyGlyAsr-GlySerGlyGlyAsnGly ?EQ ID NO:48; ?erGlyGlySerGlySerGlyGlySerGly ?EQ ID NO: 49; ?erGlyGly?erGlySerGlyGlySerGlySerGlyGlySerGly SEQ ID NO:50; GlyGlyGlySe GlyGly SEQ ID NO: 51; GlyGlyGlySerGlyGlyGly SEQ ID NO:52; GlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGly SEQ ID NO: 53; GlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGly SEQ ID NO:54; GlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGly SEQ ID NO:55; GlyGlyGlySerGlyGlyGly?erGlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGly GlyGlySerGly SEQ ID NO: 56; GlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGly GlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlyGlySerGly SEQ ID NO:148; ProProProTrpSerProArgProLeuGlyAlaThrAlaProThrAlaGly GlnProPro eu ?EQ ID NO: 149; ProProProTrp?erProArgPro euGlyAlaThrAlaProThr SEO ID NO: 150; Y ValGluThrValPheHisArgValSerGlnAspGlyLeuTjeuT rSer ?EQ ID NO: 151.

La presente invención abarca también agonistas recombinantes de receptor flt3 de humano coadministrados o secuencialmente con uno o más factores adicionales estimulantes de colonias (CSF) incluyendo citocinas, linfocinas, ¡nterleucinas, factores de crecimiento hematopoyético que incluyen, pero no están limitados a, GM-CSF, G-CSF, ligando c-mpl (conocido también como TPO o MGDF), M-CSF, eritropoyetina (FLT3), IL-1 , IL-4, IL-2, IL-3, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11 , IL-12, IL-13, IL-15, LIF, hormona del crecimiento humano, factor de crecimiento de células B, factor de diferenciación de células B, factor de diferenciación de eosinófilos y factor de células madre (SCF), conocido también como factor acero o ligando c-kit (referidos en conjunto en la presente como "factores"). Estas mezclas coadministradas se pueden caracterizar por tener la actividad usual de los péptidos, o la mezcla se puede caracterizar además por tener una actividad biológica o fisiológica mayor que simplemente la función aditiva de la presencia de los agonistas de receptor flt3 o el segundo factor estimulante de colonias solos. La coadministración puede proveer también un efecto incrementado sólo en la actividad, o una actividad diferente de la esperada por la presencia del ligando flt3 o el segundo factor estimulante de colonias. La coadministración puede tener también un perfil de actividad mejorado que puede incluir reducción de actividades biológicas inconvenientes asociadas con el ligando flt3 nativo de humano. Además de la lista anterior, las variantes de IL-3 descritas en los documentos WO 94/12639 y WO 94/12638, la protelna de fusión descrita en los documentos WO 95/21197 y WO 95/21254, los agonistas de receptor G-CSF descritos en el documento WO 97/12977, los agonistas de receptor c-mpl descritos en el documento WO 97/12978, los agonistas de receptor IL-3 descritos en el documento WO 97/12979 , y los agonistas de receptor multifuncionales descritos en el documento WO 97/12985, se pueden coadministrar con los polipéptidos de la presente invención. Como se usa en la presente, las "variantes de IL-3" se refieren a las vanantes de IL-3 descntas en los documentos WO 94/12639 y WO 94/12638. Como se usa en la presente, las "proteínas de fusión" se refieren a la proteína de fusión descrita en los documentos WO 95/21197 y WO 95/21254. Como se usa ep la presente, los "agonistas de receptor G-CSF" se refieren a los agonistas de receptor G-CSF descritos en el documento WO 97/12978. Como se usa en la presente, los "agonistas de receptor c-mpl" se refieren a los agonistas de receptor c-mpl descritos en el documento WO 97/12978. Como se usa en la presente, los "agonistas de receptor IL-3" se refieren a los agonistas de receptor IL-3 descritos en el documento WO 97/12979. Como se usa en ía presente, los "agonistas de receptor multifuncionales" se refieren a los agonistas de receptor multifucionales descritos en el documento WO 97/12985. Además, se prevé que los usos in vitro incluirían la capacidad para estimular la activación y el crecimiento de células sanguíneas y células de la médula ósea antes de que las células expandidas sean infundidas en pacientes. Otro uso propuesto es para la producción de células dendríticas tanto in vivo como ex vivo.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La figura 1 ilustra esquemáticamente el reordenamiento de secuencias de una proteína. El extremo N (N) y el extremo C (C) de la proteína nativa se unen a través de un enlazador, o se unen directamente. La proteína se abre en un punto de rompimiento creando un nuevo extremo N (nuevo N) y un nuevo extremo C (nuevo C), dando como resultado una proteína con una nueva secuencia lineal de aminoácidos. Una molécula reordenada puede ser sintetizada de novo como molécula lineal y no ir a través de los pasos de unión del extremo N y el extremo C originales y la apertura de la proteína en el punto de rompimiento. La figura 2 muestra un esquema del método I para crear nuevas proteínas en las cuales el extremo N y el extremo C originales de la proteína nativa se unen a través de un enlazador y se crean diferentes extremos N y C en la proteína. En el ejemplo mostrado, el reordenamiento de secuencias da como resultado un nuevo gen que codifica para una proteína con un nuevo extremo N creado en el aminoácido 97 de la proteína original, el extremo C original (aminoácido 174) unido al aminoácido 11 (se suprimen ios aminoácidos 1 a 10) a través de una región del enlazador, y un nuevo extremo C creado en el aminoácido 96 de la secuencia original. La figura 3 muestra un esquema del método II para crear nuevas proteínas en las cuales el extremo N y el extremo C originales de la proteína nativa se unen sin un enlazador y se crean diferentes extremos N y C en la proteína. En el ejemplo mostrado, el reordenamiento de secuencias da como resultado un nuevo gen que codifica para una proteína con un nuevo extremo N creado en el aminoácido 97 de la proteína original, el extremo C original (aminoácido 174) unido al extremo N original, y un nuevo extremo C creado en el aminoácido 96 de la secuencia original. La figura 4 muestra un esquema del método lll para crear nuevas proteínas en las cuales el extremo N y el extremo C originales de la proteína nativa se unen a través de un enlazador y se crean diferentes extremos N y C en la proteína. En el ejemplo mostrado, el reordenamiento de secuencias da como resultado un nuevo gen que codifica para una proteína con un nuevo extremo N creado en el aminoácido 97 de la proteína original, el extremo C original (aminoácido 174) unido al aminoácido 1 a través de una región del enlazador, y un nuevo extremo C creado en ei aminoácido 96 de la secuencia original. Las figuras 5a y 5b muestran la secuencia de ADN que codifica para la forma madura del aminoácido 209 del ligando flt3 de Lyman y otros (Oncogene 11 :1165-1172, 1995). La figura 6 muestra la secuencia de ADN que codifica para la forma soluble del aminoácido 134 del ligando fU3 de Lyman y otros (Oncogene 11 :1165-1172, 1995). La figura 7 muestra la bioactividad de los agonistas pMON32320 y pMON32321 del receptor flt3, comparativamente con el flt3 nativo recombinante (Genzyme) de la prueba de proliferación de células MUTZ-2. MT = transfección simulada.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Los agonistas de receptor flt3 de la presente invención pueden ser útiles en el tratamiento de enfermedades caracterizadas por niveles disminuidos de células hematopoyéticas. Un agonista de receptor flt3 puede ser útil en el tratamiento o prevención de trastornos hematopoyéticos. Muchos fármacos pueden causar supresión de la médula ósea o deficiencias hematopoyéticas. Ejemplos de dichos fármacos son AZT, DDI, agentes alquilantes y antimetabolitos usados en quimioterapia, antibióticos tales como cloranfenicol, penicilina, ganciclovir, daunomicina y fármacos de sulfa, fenotiazonas, tranquilizantes tales como meprobamato, analgésicos tales como aminopirina y dipirona, anticonvulsivaptes tales como fenitoína o carbamazepina, antitiroideos tales como propiltiouracilo y metamizol, y diuréticos. Los agonistas de receptor flt3 pueden ser útiles para prevenir o tratar la supresión de la médula ósea o deficiencias hematopoyéticas que ocurren con frecuencia en pacientes tratados con estos fármacos. Las deficiencias hematopoyéticas pueden ocurrir también como resultado de infecciones virales, microbianas o por parásitos, quemaduras, y como resultado de tratamiento de enfermedad renal o insuficiencia renal, por ejemplo, en diálisis. El presente péptido puede ser útil en el tratamiento de dicha deficiencia hematopoyética. Otro aspecto de la presente invención provee vectores de ADN plasmídico para su uso en el método de expresión de estos agonistas novedosos de receptor flt3. Estos vectores contienen las secuencias de ADN novedosas descritas anteriormente que codifican para los polipéptidos novedosos de la invención. Los vectores apropiados que pueden transformar células hospederas capaces de expresar los agonistas de receptor flt3, incluyen vectores de expresión que comprenden secuencias de nucleótidos que codifican para los agonistas de receptor flt3 unidos a secuencias reguladoras de la transcripción y traducción que se seleccionan de acuerdo con las células hospederas usadas. Los vectores que incorporan secuencias modificadas como las descritas anteriormente se incluyen en la presente invención, y son útiles en la producción de los polipéptidos modificados del agonista de receptor flt3. El vector utilizado en el método contiene también secuencias reguladoras seleccionadas en asociación operativa con el ADN que codifica para secuencias de la invención, y capaz de dirigir la replicación y expresión de las mismas en células hospederas seleccionadas. Como otro aspecto de la presente invención, se provee un método novedoso para producir la familia novedosa de agonistas de receptor flt3 de humano. El método de la presente invención implica cultivar células o líneas de células adecuadas, las cuales han sido transformadas con un vector que contiene una secuencia de ADN que codifica para la expresión del polipéptido agonista novedoso de receptor flt3. Las células o líneas de células adecuadas pueden incluir varias cepas de bacterias tales como E. col!, levaduras, células de mamífero, o se pueden utilizar células de insectos como células hospederas en el método de la presente invención.

Otros aspectos de la presente invención son métodos y composiciones terapéuticas para tratar las condiciones referidas anteriormente. Dichas composiciones comprenden una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más de los agonistas de receptor fit3 de la presente invención en una mezcla con un vehículo farmacéuticamente aceptable. Esta composición se puede administrar parenteralmente, intravenosamente o subcutáneamente. Cuando se administra la composición terapéutica que se usa en esta invención, está preferiblemente en forma de una solución acuosa parenteralmente aceptable y libre de pirógenos. La preparación de dicha solución de proteína parenteralmente aceptable, preparada respecto al pH, isotonicidad, estabilidad y similares, está dentro del alcance del experto en la técnica. El régimen de dosificación considerado en un método para tratar las condiciones descritas anteriormente, será determinado por el médico tratante considerando varios factores que modifican la acción de fármacos, por ejemplo, la condición, peso corporal, sexo y dieta del paciente, la severidad de cualquier infección, la hora de administración y otros factores clínicos. Generalmente, un régimen diario puede estar en la escala de 0.5-15 µg/kg de agonistas no glicosilados de receptor flt3 por kilogramo de peso corporal. Las dosificaciones serían ajustadas respecto a la actividad de un agonista de receptor dado, y no sería irracional observar que los regímenes de dosificación puedan incluir dosis tan bajas como 0.1 microgramos, y tan altas como 1 miligramo por kilogramo de peso corporal por día. Además, pueden haber circunstancias específicas donde las dosificaciones del agonista de receptor flt3 serían ajustadas arriba o abajo de la escala de 0.5 a 150 microgramos por kilogramo de peso corporal. Estas incluyen la coadministración con otros factores de crecimiento o de CSF; coadministración con fármacos quimioterapéuticos y/o radiación; el uso de agonistas glicosilados de receptor flt3; y varios problemas relacionados con el paciente mencionados al principio de esta sección. Como se indicó anteriormente, las composiciones y el método terapéuticos pueden incluir también la coadministración con otros factores humanos. Una lista no exclusiva de otras hematopoyetinas apropiadas, CSFs e interleucinas para coadministración simultánea o en serie con los pollpéptidos de la presente invención, incluye GM-CSF, G-CSF, ligando c-mpl (conocido también como TPO o MGDF), M-CSF, eritropoyetina (FLT3), IL-1 , IL-4, IL-2, IL-3, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11 , IL-12, IL-13, IL-15, LIF, hormona del crecimiento humano, factor de crecimiento de células B, factor de diferenciación de células B, factor de diferenciación de eosinófilos y factor de células madre (SCF), conocido también como factor acero o ligando c-kit (referidos en conjunto en la presente como "factores"), o combinaciones de los mismos. Además de la lista anterior, las variantes de IL-3 descritas en los documentos WO 94/12639 y WO 94/12638, proteína de fusión descrita en los documentos WO 95/21197 y WO 95/21254, agonistas de receptor G-CSF descritos en el documento WO 97/12977, agonistas de receptor c-mpl descritos en el documento WO 97/12978, agonistas de receptor IL-3 descritos en el documento WO 97/12979 y agonistas de receptor multifuncionales descritos en el documento WO 97/12985, pueden ser coadministrados con los polipéptidos de la presente invención.

Los agonistas de receptor flt3 de la presente invención pueden ser útiles en la movilización de progenitores hematopoyéticos y células madre en sangre periférica. Se ha demostrado que progenitores derivados de sangre periférica son eficaces para reconstituir pacientes en el ámbito de los transplantes autólogos de médula. Se ha demostrado que los factores de crecimiento hematopoyéticos, incluyendo G-CSF y GM-CSF, incrementan el número de células madre y progenitores circulantes en la sangre periférica. Esto ha simplificado el procedimiento para recoger células madre en la sangre periférica y disminuir dramáticamente el costo del procedimiento disminuyendo el número de féresis requeridas. El agonista de receptor flt3 de la presente invención puede ser útil en la movilización de células madre y para mejorar además la eficacia del transplante de células madre periféricas. Los agonistas de receptor flt3 de la presente invención pueden ser también útiles en la expansión ex vivo de progenitores hematopoyéticos. Los factores estimulantes de colonias (CSFs), tales como G-CSF, han sido administrados solos, coadmlnistrados con otros CSFs, o en combinación con transplantes de médula ósea subsecuentes a quimioterapia de dosis alta para tratar la neutropenia, que es con frecuencia el resultado de dicho tratamiento. Sin embargo, el período de neutropenia severa puede no ser totalmente eliminado. El linaje mieloide, el cual está formado de monocitos (macrófagos), granulocitos (incluyendo neutrófilos) y megacariocitos, es crítico para prevenir infecciones y hemorragias que pueden poner en riesgo la vida. La neutropenia puede ser también el resultado de enfermedad, trastornos genéticos, fármacos, toxinas, radiación y muchos tratamientos terapéuticos tales como terapia oncológica. Los transplantes de médula ósea se han usado para tratar esta población de pacientes. Sin embargo, varios problemas están asociados con el uso de la médula ósea para reconstituir un sistema hematopoyético comprometido, e incluyen: 1 ) el número de células madre en médula ósea u otros tejidos, tales como bazo o sangre periférica, es limitado, 2) enfermedad por injerto contra hospedero, 3) rechazo al injerto y 4) contaminación posible con células tumorales. Las células madre y las células progenitoras constituyen un porcentaje muy pequeño de las células nucleadas en la médula ósea, bazo y sangre periférica. Es claro que existe una respuesta a la dosis, de modo que un número mayor de progenitores hematopoyéticos multipotenciales incrementará la recuperación hematopoyética. Por lo tanto, la expansión in vitro de células madre debe mejorar la recuperación hematopoyética y la supervivencia de los pacientes. La médula ósea de un donador alogénico se ha usado para proveer médula ósea para realizar transplantes. Sin embargo, la enfermedad por injerto contra hospedero y el rechazo al injerto limitan el transplante de médula ósea incluso en receptores con donadores fraternales igualados en HLA. Una alternativa a los transplantes alogénicos de médula ósea son los transplantes autólogos de médula ósea. En los transplantes autólogos de médula ósea, parte de la médula ósea del paciente es cosechada antes de practicar terapia mieloablasiva, por ejemplo, quimioterapia de dosis alta, y es transplantada de nuevo después en el paciente. Los transplantes autólogos eliminan el riesgo de enfermedad por injerto contra hospedero y rechazo al injerto. Sin embargo, los transplantes autólogos de médula ósea presentan aún problemas en términos del número limitado de células madre en la médula y contaminación posible con células tumorales. El número limitado de progenitores hematopoyéticos multipotenciales puede ser superado mediante la expansión ex vivo de los progenitores hematopoyéticos multipotenciales. Además, las células madre pueden ser aisladas específicamente con base en la presencia de antígenos de superficie específicos tales como CD34+ para disminuir la contaminación del injerto de médula por células tumorales. Las siguientes patentes contienen más detalles sobre la separación de células madre, células CD34+, cultivo de células con factores hematopoyéticos, el uso de las células para el tratamiento de pacientes con trastornos hematopoyéticos, y el uso de factores hematopoyéticos en terapia génica y expansión celular. El documento 5,061 ,620 se refiere a composiciones que comprenden células madre hematopoyéticas humanas provistas separando las células madre de células delicadas. El documento 5,199,942 describe un método para realizar transplantes autólogos de células hematopoyéticas, que comprende: (1 ) obtener células progenitoras hematopoyéticas de un paciente; (2) expansión ex vivo de células con un factor de crecimiento seleccionado del grupo que consiste de IL-3, ligando de flt3, ligando de c-kit, GMCSF, IL-1 , proteína de fusión de GM-CSF/IL- 3, y combinaciones de los mismos; (3) administrar la preparación celular a un paciente. El documento 5,240,856 se refiere a un separador de células que incluye un aparato para controlar automáticamente el procedimiento de separación de células. El documento WO 91/16116 describe dispositivos y métodos para aislar y separar selectivamente células objetivo de una mezcla de células.

El documento WO 91/18972 describe métodos para el cultivo de médula ósea in vitro, incubando una suspención de células de médula ósea usando un biorreactor de fibras huecas. El documento WO 92/18615 se refiere a un procedimiento para mantener y expander células de médula ósea, en un medio de cultivo que contiene mezclas específicas de citocinas, para su uso en transplantes. El documento WO 93/08268 describe un método para expander selectivamente células madre, que comprende los pasos de (a) separar células madre CD34+ de otras células, y (b) Incubar las células separadas en un medio selectivo, de modo que las células madre sean expandidas selectivamente. El documento WO 93/18136 describe un procedimiento para el sustento in vitro de células de mamífero derivadas de sangre periférica. El documento WO 93/18648 se refiere a una composición que comprende células precursoras de neutrófilos humanos con un alto contenido de mieloblastos y promielocitos para el tratamiento de neutropenia genética o adquirida.

El documento WO 94/08039 describe un método para enriquecer células madre hematopoyéticas humanas seleccionando células que expresen la proteína c-kit. El documento WO 94/11493 describe una población de células madre que son células CD34+ y de tamaño pequeño, las cuales son aisladas usando un método de elutriación por contraflujo. El documento WO 94/27698 se refiere a un método que combina la separación por inmunoafinidad y la separación centrífuga por flujo continuo para separar selectivamente una población de células heterogéneas nucleadas de una mezcla de células heterogéneas. El documento WO 94/25848 describe un aparato de separación de células para recoger y manipular células objetivo. El cultivo a largo plazo de precursores CD34+ altamente enriquecidos de células progenitoras hematopoyéticas de médula ósea humana en cultivos que contienen IL-1a, IL-3, IL-6 o GM-CSF, se describe en Brandt y otros (J. Clin. Invest. 86 : 932-941 , 1990). Un aspecto de la presente invención provee un método para la expansión ex vivo selectiva de células madre. El término "célula madre" se refiere a las células hematopoyéticas multlpotenciales, así como también a las células precursoras y progenitoras mieloides precoces que pueden ser aisladas de médula ósea, bazo o sangre periférica. El término "expansión" se refiere a la proliferación y diferenciación de las células. La presente invención provee un método para la expansión ex vivo selectiva de células madre, que comprende los pasos de: (a) separar células madre de otras células, (b) cultivar las células madre separadas en un medio selectivo que contenga un agonista de receptor flt3 y, opcionalmente, un segundo factor estimulante de colonias, y (c) cosechar las células madre cultivadas. Las células madre cultivadas, así como también las células progenitoras comprometidas destinadas para convertirse en neutrófilos, eritrocitos, plaquetas, etc., se pueden distinguir de la mayoría de otras células, por la presencia o ausencia de antígenos marcadores de progenitor particulares, tal como CD34, que están presentes sobre la superficie de estas células, y/o mediante características morfológicas. El fenotipo para una fracción de células madre humanas altamente enriquecidas se reporta como CD34+, Thy-1+ y lin-, pero se entenderá que la presente invención no está limitada a la expansión de esta población de células madre. La fracción de células madre humanas enriquecidas CD34+ se puede representar mediante varios métodos ya reportados, incluyendo burbujas o columnas de afinidad, burbujas magnéticas o citometría de flujo usando anticuerpos dirigidos hacia antígenos de superficie tales como CD34+. Además, se pueden usar métodos de separación física tales como elutriación por contraflujo para enriquecer los progenitores hematopoyéticos. Los progenitores CD34+ son heterogéneos, y pueden ser divididos en vanas subpoblaciones caracterizadas por la presencia o ausencia de coexpresión de diferentes moléculas asociadas a la superficie celular asociada al linaje. Las células progenitoras más inmaduras no expresan marcador alguno conocido asociado al linaje, tales como HLA-DR o CD38, pero pueden expresar CD90 (thy-1). Otros antígenos de superficie tales como CD33, CD38, CD41 , CD71 , HLA-DR o c-kit se pueden usar también para aislar selectivamente a progenitores hematopoyéticos. Las células separadas se pueden incubar en medio selectivo en un matraz de cultivo, bolsa estéril o en fibras huecas. Se pueden utilizar varios factores estimulantes de colonias para expander selectivamente las células. Factores representativos que se han utilizado para la expansión ex vivo de médula ósea incluyen: ligando c-kit, IL-3, G-CSF, GM-CSF, IL-1 , IL-6, IL-11 , ligando flt3, o combinaciones de los mismos. La proliferación de células madre se puede monitorear ennumerando el número de células madre y otras células mediante técnicas estándar (por ejemplo, hematocitómetro, CFU, LTCIC) o mediante cifrometría de flujo antes o después de la incubación. Se han reportado varios métodos para la expansión ex vivo de células madre utilizando varios métodos de selección y expansión usando vanos factores estimulantes de colonias que incluyen: ligando c-kit (Brandt y otros, Blood 83 : 1507-1514, 1994; McKenna y otros., Blood 86: 3413-3420, 1995), IL-3 (Brandt y otros, Blood 83: 1507-15114, 1994; Sato y otros, Blood 82 : 3600-3609, 1993), G-CSF (Sato y otros, Blood 82: 3600-3609, 1993), GM-CSF (Sato y otros, Blood 82: 3600-3609, 1993), IL-1 (Muench y otros, Blood 81 : 3463-3473, 1993), IL-6 (Sato y otros, Blood 82: 3600-3609, 1993), IL-11 (Lemoli y otros, Exp. Hem. 21: 1668-1672, 1993; Sato y otros, Blood 82: 3600-3609, 1993), ligando flt3 (McKenna y otros, Blood 86: 3413-3420, 1995), y/o combinaciones de los mismos (Brandt y otros, Blood 83: 1507-1514, 1994; Haylock y otros, Blood 80: 1405-1412, 1992; Koller y otros, Biotechnology 11 : 358-363, 1993; Lemoli y otros, Exp. Hem. 21 : 1668-1672, 1993), McKenna y otros, Blood 86: 3413-3420, 1995; Muench y otros, Blood 81 : 3463-3473, 1993; Patchen y otros, Biotherapy 7: 13-26, 1994; Sato y otros, Blood 82: 3600-3609, 1993; Smith y otros, Exp. Hem. 21 : 870-877, 1993; Steen y otros, Sfem Cells 12: 214-224, 1994; y Tsujino y otros, Exp. Hem. 21 : 1379-1386, 1993). Entre los factores individuales estimulantes de colonias, se ha demostrado que hlL-3 es uno de los más potentes para expander células CD34+ de sangre periférica (Sato y otros, Blood 82: 3600-3609, 1993; Kobayashi y otros, Blood 73: 1836-1841 , 1989). Sin embargo, no se ha demostrado que algún factor individual sea tan efectivo como la combinación de factores múltiples. La presente invención provee métodos para la expansión ex vivo que utiliza agonistas novedosos de receptor flt3.

Otro aspecto de la invención provee métodos para sustentar y/o expander células progenitoras hematopoyéticas, que incluye inocular las células en un matraz de cultivo que contenga un medio de cultivo que haya sido acondicionado mediante exposición a una línea de células estromáticas tales como HS-5 (véase el documento WO 96/02662, Roecklein y Torok-Strob, Blood 85: 997-1105, 1995) que haya sido complementada con un agonista de receptor flt3 de la presente invención. Se prevé también que los usos de los agonistas de receptor flt3 de la presente invención incluirían aplicaciones en bancos de sangre, en donde los agonistas de receptor flt3 se administran a un paciente para aumentar el número de células sanguíneas, y se extraen productos sanguíneos del paciente, antes de realizar cierto procedimiento medico, y los productos sanguíneos son almacenados y transfundidos de vuelta ep el paciente después de dicho procedimiento. Adicionalmente, se prevé que los usos de los agonistas de receptor flt3 incluirían administrar dichos agonistas a un donador de sangre antes de dicha donación para aumentar el número de células sanguíneas, permitiendo así que el donador dé con seguridad más sangre. Otro uso clínico proyectado de los factores de crecimiento ha sido la activación in vitro de progenitores y células madre hematopoyéticos para terapia génica. Debido a la vida prolongada de las células progenitoras hematopoyéticas y a la distribución de sus células hijas a través de todo el cuerpo, las células progenitoras hematopoyéticas son buenos candidatos para la transfección génica ex vivo. Para que el gen de interés sea incorporado en el genoma de la célula madre o progenitor hematopoyéticos, es necesario estimular la división celular y la replicación del ADN. Las células madre hematopoyéticas recirculan a una frecuencia muy baja, lo cual significa que los factores de crecimiento pueden ser útiles para promover la transducción de genes e incrementar así los prospectos clínicos para terapia génica. Las aplicaciones potenciales de la terapia génica (véase Crystal, Science 270: 404-410, 1995 ) incluyen: 1 ) el tratamiento de muchas inmunodeficiencias y trastornos metabólicos congénitos (Kay y Woo, Trends Genet. 10: 253-257, 1994), 2) trastornos neurológicos (Friedmann, Trends Genet. 10: 210-214, 1994), 3) cáncer (Culver y Blaese, Trßnds Genet. 10: 174-178, 1994) y 4) enfermedades infecciosas (Gilboa y Smith, Trends Genet. 10: 139-144, 1994).

Existen varios métodos conocidos por los expertos en la técnica, para introducir material genético en una célula hospedera. Se han desarrollado numerosos vectores, tanto vírales como no vírales, para transferir genes terapéuticos en células primarias. Los vectores basados en virus incluyen: 1 ) retrovirus recombinantes de replicación deficiente (Boris-Lawrie y Temin, Curr.

Opln. Genet. Dev. 3: 102-109, 1993; Boris-Lawrie y Temin, Annal. New York Acad. Sci. 716: 50-71 , 1994; Miller, Current Top. Microbiol. immunol. 158:1-24, 1992) y adenovirus recombinantes de replicación deficiente (Berkner, BioTechniques 6: 616-629, 1988; Berkner, Current Top. Microbiol. Immunol. 158: 39-66, 1992; Brody y Crystal, Annal. New York Acad. Sci. 716: 90-103, 1994).

Los vectores no basados en virus incluyen complejos de proteína/ADN (Cristiano y otros, PNAS USA. 90: 2122-2126, 1993; Curiel y otros, PNAS USA 88: 8850- 8854, 1991; Curiel, Annal. New York Acad. Sci. 716: 36-58,1994), electroporación y suministro mediado por liposomas, como en el caso de liposomas catiónicos (Farhood y otros, Annal. New York Acad. Sci. 716: 23-35, 1994). La presente invención provee una mejora a los métodos existentes para expander células hematopoyéticas, en las cuales se ha introducido nuevo material genético, ya que provee métodos que utilizan agonistas de receptor flt3 que pueden tener actividad biológica y/o propiedades físicas mejoradas. Otro uso propuesto de los agonistas de receptor flt3 de la presente invención, es para la generación de números más grandes de células dendríticas, a partir de percursores, que se usan como adyuvantes para inmunización. Las células dendríticas desempeñan una función crucial en el sistema inmune. Son las células profesionales que presentan antígeno más eficientes en la activación de células T en reposo, y son las células principales que presentan antígeno para la activación de las células T naturales in vivo y, así, para el inicio de respuestas inmunes ppmarias. Interiorizan, procesan y presentan eficientemente antígenos (Ag) solubles específicos de tumores. Las células dendríticas tienen la capacidad única de agrupar células T naturales y de responder a los Ag encontrados debido a la sobrerregulación rápida de la expresión del complejo de histocompatibilidad principal (MHC) y moléculas coestimulatorias, la producción de citocinas y migración hacia órganos linfáticos. Dado que las células dendr?ticas son de importancia fundamental para sensibilizar al hospedero contra un neoantígeno para respuestas inmunes dependientes de CD4, pueden desempeñar también una función crucial en la generación y regulación de inmunidad a tumores. Las células dendríticas se originan de un precursor CD34+ de médula ósea común a granulocitos y macrófagos, y se ha establecido en humanos la existencia de una unidad separada formadora de colonias de células dendríticas (CFU-DC) que da lugar a colonias puras de células dendríticas. Además, se ha descrito un intermediario de CD14+ de post-CFU con el potencial para diferenciarse a lo largo de la vía de células dendríticas o de macrófagos bajo diferentes condiciones de citocina. Este precursor biopotencial está presente en la médula ósea, sangre umbilical y sangre periférica. Las células dendríticas pueden ser aisladas mediante el marcador específico de células, CD83, el cual se expresa en células dendríticas maduras, para delinear la maduración de células dendríticas cultivadas. Las estrategias basadas en células dendríticas provee un método para mejorar la respuesta inmune contra tumores y agentes infecciosos. El SIDA es otra enfermedad para la cual se pueden usar terapias a base de células dendríticas, dado que las células dendríticas pueden desempeñar una función importante en promover la repllcación del VHI-1. Una inmunoterapia requiere la generación de células dendríticas de pacientes cancerosos, su exposición in vitro al Ag del tumor, derivado de masas tumorales removidas quirúrgicamente, y reinyección de estas células en los pacientes con tumores. Preparaciones de membrana relativamente crudas de células tumorales serán suficientes como fuentes de antígeno del tumor, evitando la necesidad de realizar la identificación molecular del antígeno del tumor. El antígeno del tumor puede ser también de péptidos, carbohidratos o secuencias de ácido nucleico sintéticos. Además, la administración concomitante de citocinas tales como los agonistas de receptor flt3 de la presente invención, puede facilitar aún más la inducción de inmunidad al tumor. Se prevé que la inmunoterapia puede realizarse en un ámbito in vivo, ep donde los agonistas de receptor flt3 de la presente invención son administrados a un paciente, que tiene un tumor, solos o con otros factores de crecimiento hematopoyéticos para aumentar el número de células dendríticas, y el antígeno del tumor endógeno es expuesto a las células dendríticas. Se prevé también que la immunoterapia in vivo puede ser con antígeno exógeno. Se prevé también que el tratamiento mediante inmunoterapia puede incluir la movilización de precursores de células dendríticas o células dendríticas maduras, administrando al paciente los agonistas de receptor flt3 de la presente invención solos o con otros factores de crecimiento hematopoyéticos, removiendo los precursores de células dendríticas o las células dendríticas maduras del paciente, exponiendo las mismas al antígeno, y regresándolas, al paciente. Además, las células dendríticas que han sido removidas pueden ser cultivadas ex vivo con los agonistas de receptor flt3 de la presente invención, solos o con otros factores de crecimiento hematopoyéticos para aumentar él número de células dendríticas antes de su exposición al antígeno. Las estrategias basadas en células dendríticas prevén también un método para reducir la respuesta inmune en enfermedades autoinmunes. Los estudios de células dendríticas han sido obstaculizados ampliamente por dificultades para preparar las células en números suficientes y en una forma razonablemente pura. En un ámbito de expansión de células ex vivo, el factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos (GM-CSF) y el factor de necrosis tumoral a (FNT-a), cooperan en la generación ex vivo de células dendríticas a partir de progenitores hematopoyéticos (células CD34+) recuperados de médula ósea, sangre umbilical o sangre periférica, y el ligando flk-2/flt3 y el ligando c-kit (factor de células madre [SCF]) sinergizan para aumentar la generación de células dendríticas inducida por GM-CSF más FNT-a (Siena, S. y otros, Experimental Hematology 23:1463-1471, 1995). Se prevé también un método para la expansión ex vivo de precursores de células dendríticas o células dendríticas maduras usando el agonista de receptor flt3 de la presente invención, para proveer cantidades suficientes de células dendríticas para inmunoterapia.

Determinación del enlazador La longitud de la secuencia de aminoácidos del enlazador se puede seleccionar empíricamente o con base en la Información estructural, o mediante el uso de una combinación de los dos enfoques. Cuando no se cuenta con información estructural, se puede preparar una pequeña serie de enlazadores para poner a prueba usando un diseño cuya longitud se hace variar para abarcar una escala de 0 a 50 Á, y cuya secuencia se selecciona para ser consistente con la exposición de la superficie (carácter hidrofílico, Hopp & Woods, Mol. Immunol. 20:483-489, 1983; Kyte y Doollttle, J. Mol. Biol. 157:105-132, 1982; área de superficie expuesta a solvente, Lee y Richards, J. Mol. Biol. 55:379-400, 1971), y la capacidad para adoptar la conformación necesaria sin perturbar la configuración del agonista de receptor flt3 (conformacionalmente flexible; Karplus y Schulz, Naturwissenschaften 72:212-213 (1985)). Suponiendo un promedio de traducción de 2.0 a 3.8 Á por residuo, esto significaría que la longitud de prueba estaría entre 0 y 30 residuos, siendo 0 a 15 residuos la escala preferida. Un ejemplo de dicha serie empírica sería construir enlazadores usando una secuencia de cassette tal como Gly-Gly-Gly-Ser repetida n veces, en donde n es 1 , 2, 3 o 4. Los expertos en la técnica reconocerán que existen muchas secuencias que varían en longitud o composición y que pueden servir como enlazadores, siendo la consideración primaria que no sean excesivamente largas ni cortas (véase Sandhu, Critical Rev. Biotech. 12:437-462,1992); si son demasiado largas, los efectos de entropía desestabilizarán probablemente el pliegue tridimensional, y puede ser también que el plegamiento sea simétricamente poco práctico, y si son demasiado cortas, probablemente desestabilizaran la molécula debido al esfuerzo de torsión o esteárico. Los expertos en el análisis de la información estructural de las proteínas reconocerán que el uso de la distancia entre los extremos de cadena, definida como la distancia entre los carbonos alfa, se puede usar para definir la longitud de la secuencia que será usada, o por lo menos para limitar el número de posibilidades que se deben poner a prueba en una selección empírica de enlazadores. Reconocerán también que es a veces el caso de que las posiciones de los extremos de la cadena polipeptídica están mal definidas en modelos estructurales derivados de difracción de rayos X o datos de espectroscopia de resonancia magnética nuclear, y cuando esto ocurre, esta situación necesitará por lo tanto ser tomada en cuenta para estimar adecuadamente la longitud del enlazador requerido. A partir de aquellos residuos cuyas posiciones están bien definidas, se seleccionan dos residuos que estén próximos en secuencia a los extremos de cadena, y la distancia entre sus carbonos alfa se usa para calcular una longitud aproximada para un enlazador entre ellos. Usando como guía la longitud calculada, se seleccionan entonces enlazadores con una escala de números de residuos (calculada usando 2 a 3.8 ? por residuo). Estos enlazadores pueden estar formados de la secuencia onginal, acortada o alargada según sea necesario, y cuando son alargados, los residuos adicionales se pueden seleccionar para que sean flexibles e hidrofílicos como se describió anteriormente; u opcionalmente, la secuencia original puede ser substituida para usar una serie de eplazadores, siendo un ejemplo el enfoque del cassette Gly-Gly-Gly-Ser mencionado anteriormente; u opcionalmente, se puede usar una combinación de la secuencia original y la nueva secuencia que tenga la longitud total apropiada.

Determinación de los extremos amino v carboxilo del agonista de receptor flt3 Se pueden preparar secuencias del agonista de receptor flt3 capaces de plegarse a estados biológicamente activos, seleccionando apropiadamente las posiciones de inicio (extremo amino) y de término (extremo carboxilo) dentro de la cadena polipeptídica original, mientras se usa la secuencia del enlazador como se describió anteriormente. Los extremos amino y carboxilo se seleccionan dentro de un tramo común de secuencia, referido como región de punto de rompimiento, usando las pautas descritas más adelante. Una secuencia de aminoácidos novedosa se genera así seleccionando extremos amino y carboxilo dentro de la misma región de punto de rompimiento. En muchos casos, la selección de los nuevos extremos será tal que la posición original del extremo carboxilo precede inmediatamente a la del extremo amino. Sin embargo, los expertos en la técnica reconocerán que las selecciones de extremos en cualquier parte dentro de la región pueden funcionar, y que estas conducirán efectivamente a supresiones o adiciones a las porciones amino o carboxilo de la nueva secuencia. Es un dogma central de la biología molecular que la secuencia de aminoácidos primaria de una proteína dicta el plegamiento hacia la estructura tridimensional necesaria para la expresión de su función biológica. Los expertos en la técnica conocen métodos para obtener e interpretar la información estructural tridimensional usando difracción de rayos X de cristales de proteína individuales, o espectroscopia de resonancia magnética nuclear de soluciones de proteína. Ejemplos de información estructural que son relevantes para la identificación de regiones de punto de rompimiento incluyen la localización y el tipo de estructura secundaria de la proteína (hélices alfa y 3-10, láminas beta paralelas y antiparalelas, inversiones y giros de cadena, y bucles; Kabsch y Sander, Biopolymers 22: 2577-2637, 1983; el grado de exposición de residuos de aminoácidos a solvente, el grado y tipo de interacciones entre residuos (Chothia, Ann. Rev. Biochem. 53:537-572; 1984), y la distribución estática y dinámica de conformaciones a lo largo de la cadena polipeptídica (Alber y Mathews, Methods Enzymol. 154: 511-533, 1987). En algunos casos, se cuenta con información adicional sobre la exposición de residuos a solvente; un ejemplo es un sitio de unión de carbohidrato después de la traducción, el cual está necesariamente sobre la superficie de la proteína. Cuando no se cuenta con información estructural experimental, o no es factible obtenerla, existen también métodos para analizar la secuencia de aminoácidos primaría para hacer predicciones sobre la estructura secundaria y terciaria de la proteína, la accesibilidad al solvente, y la ocurrencia de giros y bucles. Los métodos bioquímicos son también a veces aplicables para determinar empíricamente la exposición de superficie cuando los métodos estructurales directos no son factibles; por ejemplo, usando la identificación de sitios de escisión de cadena consecutiva a proteólisis limitada para inferir exposiciones de superficie (Gentile y Salvatore, Eur. J. Biochem. 218:603-621 , 1993). Así, usando la información estructural experimentalmente derivada o métodos predictivos (véase por ejemplo, Strinivisan y Rose, Proteins: Struct. Funct. & Genetics, 22: 81-99, 1995), la secuencia de aminoácidos parental se inspecciona para clasificar regiones según si son o no integrales para el mantenimiento de la estructura secundaria y terciaria. La ocurrencia de secuencias dentro de regiones que se sabe intervienen en la estructura secundaria periódica (hélices alfa y 3-10, láminas beta paralelas y antiparalelas), son regiones que se deben evitar. Del mismo modo, las regiones de secuencias de aminoácidos que se observa o se predice tienen un bajo grado de exposición a solvente, más probablemente serán parte del denominado núcleo hidrofóbico de la proteína, y se deben evitar también para la selección de extremos amino y carboxilo. En contraste, aquellas regiones que se sabe o se predice están en giros o bucles de superficie, y especialmente aquellas regiones que se sabe no se requieren para actividad biológica, son los sitios preferidos para la localización de los extremos de la cadena pollpeptídica. Los tramos continuos de secuencia de aminoácidos que se prefieren con base en los criterios anteriores, son referidos como una región de punto de rompimiento.

CUADRO 1 OLIGONUCLEOTIDQS NCOFLT CTGACCATGGCNACCCAGGACTGCTCCTTCCAA SEQ ID NO 57, HIND160 ACTGAAGCTTAGGGCTGACACTGCAGCTCCAG SEQ ID NO 58, HIND165 ACTGAAGCTTACAGGGTTGAGGAGTCGGGCTG SEQ ID NO 59, FL23For GACTGCCATGGCNACYCAGGAYTGYTCYTTYCAACACAGCCCCATC SEQ ID NO 60, FH3AFor GACTGCCATGGCNACYCAGGAYTGYTCYTTYCAACACAGCCCCATC 10 SEQ ID NO 61 , SCF REV TGTCCAAACTCATCAATGTATC SEQ ID NO 62, 39FOR CATGGCCATGGCCGACGAGGAGCTCTGCGGGGGCCTCT SEQ ID NO 63, 39REV GCTAGAAGCTTACTGCAGGTTGGAGGCCACGGTGAC SEQ ID NO 64, 65FOR CATGGCCATGGCCTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGC SEQ ID NO 65, 65REV GCTAGAAGCTTACCCAGCGACAGTCTTGAGCCGCTC SEQ ID NO 66, 15 89FOR CATGGCCATGGCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGT SEQ ID NO 67, 89REV GCTAGAAGCTTAGGGCTGAAAGGCACATTTGGTGACA SEQ ID NO 68, L5A CCCTGTCTGGCGGCAACGGCACCCAGGACTGCTCCTTCCAAC SEQ ID NO 69, L10A GCGGTAACGGCAGTGGAGGTAATGGCACCCAGGACTGCTCCTTCCAAC SEQ ID NO 70, L15A ACGGCAGTGGTGGCAATGGGAGCGGCGGAAATGGAACCCAGGACTGCTCC TTCCAAC SEQ ID NO 71 , L5B GTGCCGTTGCCGCCAGACAGGGTTGAGGAGTCGGGCTG SEQ ID NO 72, LLOB ATTACCTCCACTGCCGTTACCGCCTGACAGGGTTGAGGAGTCGGGCTG SEQ ID NO 73, LL5B GCTCCCATTGCCACCACTGCCGTTACCTCCAGACAGGGTTGAGGA GTCGGGCTG SEQ ID NO-74; L15C GATGAGGATCCGGTGGCAATGGGAGCGGCGGAAATGGAACCCAGG ACTGCTCCTTCCACC SEQ ID NO-.75; L15D GATGACGGATCCGTTACCTCCAGACAGGGTTGAGGAGTCGGGCTG SEQ ID NO:76; .L15E GATGACGGATCCGGAGGTAATGGCACCCAGGACTGCTCCTTCCAAC SEQ ID NO:77; 339FOFO GACTGCCATGGCCGACGAGGAGCTCTGCG SEQ ID NO:78; 339REV2 GACTCAAGCTTACTGCAGGTTGGAGGCC SEQ ID NO:79; 339-10FOR3 GACTCGGGATCCGGAGGTTCTGGCACCCAGGACTGCTCC SEQ ID NO:80; 339-15FOR2 GACTGGGATCCGGTGGCAGTGGGAGCGGCGGATCTGGAACC SEQ ID NO:81; 339REV3 GACTTGGGATCCACTACCTCCAGACAGGGTTGAGGAGTC SEQ ID NO:82; FLN3 ACTGACGGATCCACCGCCCAGGGTTGAGGAGTCGGGCTG SEQ ID NO:83; FLN7 CTGACGGATCCACCTCCTGACCCACCGCCCAGGGTTGAGGAGTCGGGCTG SEQ ID NO:84; FL 11 ACTGACGGATCCACCTCCTGACCCACCTCCTGACCCACCGCCCAG GGTTGAGGAGTCGGGCTG SEQ ID NO:85; C-term ACGTAAAGCTTACAGGGTTGAGGAGTCG SEQ ID NO:86; FLC3 GTCAGTGGATCCGGAGGTACCCAGGACTGCTCCTTCCAAC SEQ ID NO:87; FLC4 GTCAGTGGATCCGGAGGTGGCACCCAGGACTGCTCCTTCCAAC SEQ ID NO:88; FLC10 GTCAGTGGATCCGGAGGTGGCTCAGGGGGAGGTAGTGGTACCCAG GACTGCTCCTTCCAAC SEQ ID NO:89; Flt36 GTTGCCATGGCNTCNA.AYCTGCARGAYGARGARCTGTGCGGGGGCCTCTG GCGGCTG SEQ ID NO:90; FI137 GTTGCCATGGCNAAYCTGCARGAYGARGARCTGTGYGGGGGCCTCTGGCG GCTGGTC SEQ ID NO 91 , FH38 GTTGCCATGGCNCTGCARGAYGARGARCTGTGYGGYGGCCTCTGGCGGCT GGTCCTG SEQ ID NO 92, Flt39 GTTGCCATGGCNCARGAYGARGARCTGTGYGGYGGYCTCTGGCGGCTGGT CCTGGCA SEQ ID NO 93, FIMO GTTGCCATGGCNGAYGARGARCTGTGYGGYGGYCTCTGGCGGCTGGTCCT GGCACAG SEQ ID NO 94, Flt4l GTTGCCATGGCNGARGARCTGTGYGGYGGYCTCTGGCGGCTGGTCCTGGC ACAGCGC SEQ ID NO 95, Flt42 GTTGCCATGGCNGARCTGTGYGGYGGYCTGTGGCGYCTGGTCCTGGCACA GCGCTGG SEQ ID NO 96, Flt43 GTTGCCATGGCNCTGTGYGGYGGYCTGTGGCGYCTGGTCCTGGCACAGCG CTGGATG SEQ ID NO 97, 36REV TATGCAAGCTTAGGCCACGGTGACTGGGTA SEQ ID NO 98, 37REV TATGCAAGCTTAGGAGGCCACGGTGACTGG SEQ ID NO 99, 38REV TATGCAAGCTTAGTTGGAGGCCACGGTGAC SEQ ID NO 100, 39REV TATGCAAGCTTACAGGTTGGAGGCCACGGT SEQ ID NO 101 , 40REV TATGCA AGCTTACTGCAGGTTGGAGGCCAC SEQ ID NO 102, 41REV TATGCAAGCTTAGTCCTGCAGGTTGGAGGC SEQ ID NO 103, 42REV TATGCAAGCTTACTCGTCCTGCAGGTTGGA SEQ ID NO 104, 43REV TATGCAAGCTTACTCCTCGTCCTGCAGGTT SEQ ID NO 105, CUADRO 2 SECUENCIAS DE ADN pMON30237.seq GCCACCCAGGACTGCTCCTTCCAACACAGCCCCATCTCCTCCGACTTCGCTGTCAAAATCCG TGAGCTGTCTGACTACCTGCTTCAAGATTACCCAGTCACCGTGGCCTCCAACCTGCAGGACG AGGAGCTCTGCGGGGCGCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGGATGGAGCGGCTCA AGACTGTCGCTGGGTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACGGAGATACACTT TGTCACCAAATGTGCCTTTCAGCCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTCCAGACCAACATCT CCCGCCTCCTGCAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGATCACTCGCC AGAACTTCTCCCGGTGCCTGGAGCTGCAGTGTC AGCCC SEQ ID NO:106; pMON30238.seq GCCACCCAGGACTGCTCCTTCCAACACAGCCCCATCTCCTCCGACTTCGCTGTCAAAATCCG TGAGCTGTCTGACTACCTGCTTCAAGATTACCCAGTCACCGTGGCCTCCAACCTGCAGGACG AGGAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGGATGGAGCGGCTCA AGACTGTCGCTGGGTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACGGAGATACACTT TGTCACCAAATGTGCCTTTCAGCCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTCCAGACCAACATCT CCCGCCTCCTGCAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGATCACTCGCC AGAACTTCTCCCGGTGCCTGGAGCTGCAGTGTC AGCCCGACTCCTCAACCCTG SEQ ID NO:107; pMON30239.seq GCCACCCAGGACTGCTCCTTCCAACACAGCCCCATCTCCTCCGACTTCGCTGTCAAAATCCG TGAGCTGTCTGACTACCTGCTTCAAGATTACCCAGTCACCGTGGCCTCCAACCTGCAGGACG AGGAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGGATGGAGCGGCTCA AGACTGTCGCTGGGTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACGGAGATACACTT TGTCACCAAATGTGCCTTTCAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGATC ACTCGCCAGAACTTCTCCCGGTGCCTGGAGCTGCAGTGTCAGCC CGACTCCTCAACCCTG SEQ ID NO 108, PMON32329 seq GGAACTCAGGATTGTTCTTTCCAACACAGCCCCATCTCCTCCGACTTCGCTGTCAAAATCCG TGAGCTGTCTGACTACCTGCTTCAAGATTACCCAGTCACCGTGGCCTCCAACCTGCAGGACG AGGAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGGATGGAGCGGCTCA AGACTGTCGCTGGGTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACGGAGATACACTT TGTCACCAAATGTGCCTTTCAGCCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTCCAGACCAACATCT CCCGCCTCCTGCAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGATCACTCGCC AGAACTTCTCCCGGTGCCTGGAGCTGCAGTGTC AGCCC SEQ ID NO 109, pMON32330 seq GGTACCCAGGATTGTTCTTTCCAACACAGCCCCATCTCCTCCGACTTCGCTGTCAAAATCCG TGAGCTGTCTGACTACCTGCTTCAAGATTACCCAGTCACCGTGGCCTCCAACCTGCAGGACG AGGAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGGATGGAGCGGCTCA AGACTGTCGCTGGGTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACGGAGATACACTT TGTCACCAAATGTGCCTTTCAGCCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTCCAGACCAACATCT CCCGCCTCCTGCAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGATCACTCGCC AGAACTTCTCCCGGTGCCTGGAGCTGCAGTGTCAGCCCGACTCCTCAACCCTG SEQ ID NO 110, pMON32341 seq GCCACTCAGGACTGTTCTTTCCAACACAGCCCCATCTCCTCCGACTTCGCTGTCAAAATCCG TGAGCTGTCTGACTACCTGCTTCAAGATTACCCAGTCACCGTGGCCTCCAACCTGCAGGACG AGGAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGGATGGAGCGGCTCA AGACTGTCGCTGGGTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACGGAGATACACTT TGTCACCAAATGTGCCTTTCAGCCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTCCAGACCAACATCT CCCGCCTCCTGCAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGATCACTCGCC AGAACTTCTCCCGGTGCCTGGAGCTGCAGTGTC AGCCC SEQ ID NO lll, PMON32342 seq GCCACTCAGGACTGC??TTTTCAACACAGCCCCATCTCCTCCGACTTCGCTGTCAAAATCCG TGAGCTGTCTGACTACCTGCTTCAAGATTACCCAGTCACCGTGGCCTCCAACCTGCAGGACG AGGAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGGATGGAGCGGCTCA AGACTGTCGCTGGGTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACGGAGATACACTT TGTCACCAAATGTGCCTTTCAGCCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTCCAGACCAACATCT CCCGCCTCCTGCAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGATCACTCGCC AGAACTTCTCCCGGTGCCTGGAGCTGCAGTGTCAGCCCGACTCCTCAACCCTG SEQ ID NO 112, PMON32320 seq GCCGACGAGGAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGGATGGA GCGGCTCAAGACTGTCGCTGGGTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACGGA GATACACTTTGTCACCAAATGTGCCTTTCAGCCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTCCAGA CCAACATCTCCCGCCTCCTGCAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGAT CACTCGCCAGAACTTCTCCCGGTGCCTGGAGCTGCAGTGTCAGCCCGACTCCTCAACC CTGTCTGGAGGTAACGGATCCGGTGGCAATGGGAGCGGCGGAAATGGAACCCAGGACTGC TCCTTCCAACACAGCCCCATCTCCTCCGACTTCGCTGTCAAAATCCGTGAGCTGTCTGACTA CCTGCTTCAAGATTACCCAGTCACCGTG GCCTCCAACCTGCAG SEQ ID NO.113; pM0N32321 séq GCCGACGAGGAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGGATGGA GCGGCTCAAGACTGTCGCTGGGTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACGGA GATACACTTTGTCACCAAATGTGCCTTTCAGCCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTCCAGA CCAACATCTCCCGCCTCCTGCAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGAT CACTCGCCAGAACTTCTCCCGGTGCCTGGAGCTGCAGTGTCAGCCCGACTCCTCAACCCTG TCAGGCGGTAACGGCAGTGGAGGTAATGGCACCCAGGACTGCTCCTTCCAACACAGCCCCA TCTCCTCCGACTTCGCTGTCAAAATCCGTGAGCTGTCTGACTACCTGCTTCAAGATTACCCA GTCACCGTGGCCTCCAACCTGCAG SEQ ID NO:114; pMON32322.seq GCCGACGAGGAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGGATGGA GCGGCTCAAGACTGTCGCTGGGTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACGGA GATACACTTTGTCACCAAATGTGCCTTTCAGCCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTCCAGA CCAACATCTCCCGCCTCCTGCAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGAT CACTCGCCAGAACTTCTCCCGGTGCCTGGAGCTGCAGTGTCAGCCCGACTCCTCAACCCTG TCTGGCGGCAACGGCACCCAGGACTGCTCCTTCCAACACAGCCCCATCTCCTCCGACTTCG CTGTCAAAATCCGTGAGCTGTCTGACTACCTGCTTCAAGATTACCCAGTCACCGTGGCCTCC AACCTGCAG SEQ ID NO:115, p ON32323.seq GCCTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACGGAGATACACTTTGTCACCAAAT GTGCCTTTCAGCCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTCCAGACCAACATCTCCCGCCTCCTG CAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGATCACTCGCCAGAACTTCTCCC GGTGCCTGGAGCTGCAGTGTCAGCCCGACTCCTCAACCCTGTCTGGAGGTAACGGATCCGG TGGCAATGGGAGCGGCGGAAATGGAACCCAGGACTGCTCCTTCCAACACAGCCCCATCTCC TCCGACTTCGCTGTCAAAATCCGTGAGCTGTCTGACTACCTGCTTCAAGATTACCCAGTCAC CGTGGCCTCCAACCTGCAGGACGAGGAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGC ACAGCGCTGGATGGAGCGGCTC AAGACTGTCGCTGGG SEQ ID NO.116; PMON32324 seq GCCTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACGGAGATACACTTTGTCACCAAAT GTGCCTTTCAGCCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTCCAGACCAACATCTCCCGCCTCCTG CAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGATCACTCGCCAGAACTTCTCCC GGTGCCTGGAGCTGCAGTGTCAGCCCGACTCCTCAACCCTGTCTGGAGGTAACGGATCCGG AGGTAATGGCACCCAGGACTGCTCCTTCCAACACAGCCCCATCTCCTCCGACTTCGCTGTCA AAATCCGTGAGCTGTCTGACTACCTGCTTCAAGATTACCCAGTCACCGTGGCCTCCAACCTG CAGGACGAGGAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGGATGGA GCGGCTCAAGACTGTCGCTGGG SEQ ID NO.117, GCCTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACGGAGATACACTTTGTCACCAAAT GTGCCTTTCAGCCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTCCAGACCAACATCTCCCGCCTCCTG CAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGATCACTCGCCAGAACTTCTCCC GGTGCCTGGAGCTGCAGTGTCAGCCCGACTCCTCAACCCTGTCTGGCGGCAACGGCACGC AGGACTGCTCCTTCCAACACAGCCCCATCTCCTCCGACTTCGCTGTCAAAATCCGTGAGCTG TCTGACTACCTGCTTCAAGATTACCCAGTCACCGTGGCCTCCAACCTGCAGGACGAGGAGCT CTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGGATGGAGCGGCTCAAGACTGT CGCTGGG SEQ ID NO 118, PMON32326 seq GCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTCCAGACCAACATCTCCCGCCTCCTGCAGGAGACCT CCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGATCACTCGCCAGAACTTCTCCCGGTGCCTGGA GCTGCAGTGTCAGCCCGACTCCTCAACCCTGTCTGGAGGTAACGGCAGTGGTGGCAATGGG AGCGGTGGAAATGGAACCCAGGACTGCTCCTTCCAACACAGCCCCATCTCCTCCGACTTCG CTGTCAAAATCCGTGAGCTGTCTGACTACCTGCTTCAAGATTACCCAGTCACCGTGGCCTCC AACCTGCAGGACGAGGAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGG ATGGAGCGGCTCAAGACTGTCGCTGGGTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACA CGGAGATACACTTTGTCACCAAA TGTGCCTTTCAGCCC SEQ ID NO 119, PMON32327 seq GCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTCCAGACCAACATCTCCCGCCTCCTGCAGGAGACCT CCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGATCACTCGCCAGAACTTCTCCCGGTGCCTGGA GCTGCAGTGTCAGCCCGACTCCTCAACCCTGTCAGGCGGTAACGGCAGTGGAGGTAATGGC ACCCAGGACTGCTCCTTCCAACACAGCCCCATCTCCTCCGACTTCGCTGTCAAAATCCGTGA GCTGTCTGACTACCTGCTTCAAGATTACCCAGTCACCGTGGCCTCCAACCTGCAGGACGAG GAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGGATGGAGCGGCTCAAG ACTGTCGCTGGGTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACGGAGATACACTTTG TCACCAA-ATGTGCCTTTCAGCCC SEQ ID NO 120, pMON32328.seq GCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTCCAGACCAACATCTCCCGCCTCCTGCAGGAGACCT CCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGATCACTCGCCAGAACTTCTCCCGGTGCCTGGA GCTGCAGTGTCAGCCCGACTCCTCAACCCTGTCTGGCGGCAACGGCACGCAGGACTGCTCC TTCCAACACAGCCCCATCTCCTCCGACTTCGCTGTCAAAATCCGTGAGCTGTCTGACTACCT GCTTCAAGATTACCCAGTCACCGTGGCCTCCAACCTGCAGGACGAGGAGCTCTGCGGGGGC CTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGGATGGAGCGGCTCAAGACTGTCGCTGGGTCC AAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACGGAGATACACTTTGTCACCAAATGTGCCTT TCAGCCC SEQ ID NO 121 , pMON32348 seq GCCGACGAGGAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGGATGGA GCGGCTCAAGACTGTCGCTGGGTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACGGA GATACACTTTGTCACCAAATGTGCCTTTCAGCCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTCCAGA CCAACATCTCCCGCCTCCTGCAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGAT CACTCGCCAGAACTTCTCCCGGTGCCTGGAGCTGCAGTGTCAGCCCGACTCCTCAACCCTG TCTGGAGGTAGTGGATCCGGAGGTTCTGGCAACCCAGGACTGCTCCTTCCAACACAGCCCC ATCTCCTCCGACTTCGCTGTCAAAATCCGTGAGCTGTCTGACTACCTGCTTCAAGATTACCCA GTCACCGTGGCCTCCAACCTGCA G SEQ ID NO.122, PMON32350 seq GCCGACGAGGAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGGATGGA GCGGCTCAAGACTGTCGCTGGGTCCAAGATGCA,AGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACGGA GATACACTTTGTCACCAAATGTGCCTTTCAGCCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTCCAGA CCAACATCTCCCGCCTCCTGCAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGAT CACTCGCCAGAACTTCTCCCGGTGCCTGGAGCTGCAGTGTCAGCCCGACTCCTCAACC CTGTCTGGAGGTAGTGGATCCGGTGGCAGTGGGAGCGGCGGATCTGGAACCCAGGACTGC TCCTTCCAACACAGCCCCATCTCCTCCGACTTCGCTGTCAAAATCCGTGAGCTGTCTGACTA CCTGCTTCAAGATTACCCAGTCACCGTG GCCTCCAACCTGCAG SEQ ID NO 123, FLT3N seq CCATGGCCACCCAGGACTGCTCCTTCCAACACAGCCCCATCTCCTCCGACTTCGCTGTCAAA ATCCGTGAGCTGTCTGACTACCTGCTTCAAGATTACCCAGTCACCGTGGCCTCCAACCTGCA GGACGAGGAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGGATGGAGC GGCTCAAGACTGTCGCTGGGTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACGGAGAT ACACTTTGTCACCAAATGTGCCTTTCAGCCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTCCAGACCA ACATCTCCCGCCTCCTGCAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGATCAC TCGCCAGAACTTCTCCCGGTGCCTGGAGCTGCAGTGTCAGCCCGACTCCTCAACCCTGGGC GGTGGATCC SEQ ID NO 124, FLT3C seq GGATCCGGAGGTACCCAGGACTGCTCCTTCCAACACAGCCCCATCTCCTCCGACTTCGCTG TCAAAATCCGTGAGCTGTCTGACTACCTGCTTCAAGATTACCCAGTCACCGTGGCCTCCAAC CTGCAGGACGAGGAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGGATG GAGCGGCTCAAGACTGTCGCTGGGTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACG GAGATACACTTTGTCACCAAATGTGCCTTTCAGCCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTCCA GACCAACATCTCCCGCCTCCTGCAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTG GATCACTCGCCAGAACTTCTCCCGGTGCCTGGAGCTGCAGTGTCAGCCCGACTCCTCAACC CTGTAAGCTT SEQ ID NO 125, FLTTN.seq CCATGGCCACCCAGGACTGCTCCTTCCAACACAGCCCCATCTCCTCCGACTTCGCTGTCAAA ATCCGTGAGCTGTCTGACTACCTGCTTCAAGATTACCCAGTCACCGTGGCCTCCAACCTGCA GGACGAGGAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGGATGGAGC GGCTCAAGACTGTCGCTGGGTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACGGAGAT ACACTTTGTCACCAAATGTGCCTTTCAGCCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTCCAGACCA ACATCTCCCGCCTCCTGCAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGATCAC TCGCCAGAACTTCTCCCGGTGCCTGGAGCTGCAGTGTCAGCCCGACTCCTCAACCCTGGGC GGTGGGTCAGGAGGTGGATCC SEQ ID NO.126; FLT4C.seq GGATCCGGAGGTGGCACCCAGGACTGCTCCTTCCAACACAGCCCCATCTCCTCCGACTTCG CTGTCAAAATCCGTGAGCTGTCTGACTACCTGCTTCAAGATTACCCAGTCACCGTGGCCTCC AACCTGCAGGACGAGGAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGG ATGGAGCGGCTCAAGACTGTCGCTGGGTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACA CGGAGATACACTTTGTCACCAAATGTGCCTTTCAGCCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTC CAGACCAACATCTCCCGCCTCCTGCAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCT GGATCACTCGCCAGAACTTCTCCCGGTGCCTGGAGCTGCAGTGTCAGCCCGACTCCTCAAC CCTGTAAGCTT SEQ ID NO.127; FLTUN.seq CCATGGCCACCCAGGACTGCTCCTTCCAACACAGCCCCATCTCCTCCGACTTCGCTGTCAAK ATCCGTGAGCTGTCTGACTACCTGCTTCAAGATTACCCAGTCACCGTGGCCTCCAACCTGCA GGACGAGGAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGGATGGAGC GGCTCAAGACTGTCGCTGGGTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACGGAGAT ACACTTTGTCACCAAATGTGCCTTTCAGCCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTCCAGACCA ACATCTCCCGCCTCCTGCAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGATCAC TCGCCAGAACTTCTCCCGGTGCCTGGAGCTGCAGTGTCAGCCCGACTCCTCAACCCTGGGC GGTGGGTCAGGAGGTGGGTCAG GAGGTGGATCC SEQ ID NO:128; FLTIOCseq GGATCCGGAGGTGGCTCAGGGGGAGGTAGTGGTACCCAGGACTGCTCCTTCCAACACAGC CCCATCTCCTCCGACTTCGCTGTCAAAATCCGTGAGCTGTCTGACTACCTGCTTCAAGATTAC CCAGTCACCGTGGCCTCCAACCTGCAGGACGAGGAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTG GTCCTGGCACAGCGCTGGATGGAGCGGCTCAAGACTGTCGCTGGGTCCAAGATGCAAGGC TTGCTGGAGCGCGTGAACACGGAGATACACTTTGTCACCAAATGTGCCTTTCAGCCCCCCCC CAGCTGTCTTCGCTTCGTCCAGACCAACATCTCCCGCCTCCTGCAGGAGACCTCCGAGCAG CTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGATCACTCGCCAGAACTTCTCCCGGTGCCTGGAGCTGCAGT GTCAGCCCGACTCCTCAACCCTGTAAGCTT SEQ ID NO-129, p ON32365.seq GCCGACGAGGAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGGATGGA GCGGCTCAAGACTGTCGCTGGGTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACGGA GATACACTTTGTCACCAAATGTGCCTTTCAGCCCCCCCCCAGCTGTCTTCGC-TTCGTCCAGA CCAACATCTCCCGCCTCCTGCAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGAT CACTCGCCAGAACTTCTCCCGGTGCCTGGAGCTGCAGTGTCAGCCCGACTCCTCAACCCTG GGCGGTGGATCCGGAGGTACCCAGGACTGCTCCTTCCAACACAGCCCCATCTCCTCCGACT TCGCTGTCAAAATCCGTGAGCTGTCTGACTACCTGCTTCAAGATTACCCAGTCACCGTGGCC TCCAACCTGCAG SEQ ID NO.130; p ON32366 séq GCCGACGAGGAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGGATGGA GCGGCTCAAGACTGTCGCTGGGTCCAAGATGCAAGGCTTGCGGAGCGCGTGAACACGGAG ATACACTTTGTCACCAAATGTGCCTTTCAGCCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTCCAGAC CAACATCTCCCGCCTCCTGCAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGATC ACTCGCCAGAACTTCTCCCGGTGCCTGGAGCTGCAGTGTCAGCCCGACTCCTCAACCCTGG GCGGTGGATCCGGAGGTGGCACCCAGGACTGCTCCTTCCAACACAGCCCCATCTCCTCCGA CTTCGCTGTCAAAATCCGTGAGCTGTCTGACTACCTGCTTCAAGATTACCCAGTCACCGTGG CCTCCAACCTGCAG SEQ ID NO 131 , PMON32367 seq GCCGACGAGGAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGGATGGA GCGGCTCAAGACTGTCGCTGGGTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACGGA GATACACTTTGTCACCAAATGTGCCTTTCAGCCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTCCAGA CCAACATCTCCCGCCTCCTGCAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGAT CACTCGCCAGAACTTCTCCCGGTGCCTGGAGCTGCAGTGTCAGCCCGACTCCTCAACCCTG GGCGGTGGGTCAGGAGGTGGATCCGGAGGTACCCAGGACTGCTCCTTCCAACACAGCCCC ATCTCCTCCGACTTCGCTGTCAAAATCCGTGAGCTGTCTGACTACCTGCTTCAAGATTACCCA GTCACCGTGGCCTCCAACCTGCAG SEQ ID NO 132, p ON32368 seq GCCGACGAGGAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGGATGGA GCGGCTCAAGACTGTCGCTGGGTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACGGA GATACACTTTGTCACCAAATGTGCCTTTCAGCCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTCCAGA CCAACATCTCCCGCCTCCTGCAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGAT CACTCGCCAGAACTTCTCCCGGTGCCTGGAGCTGCAGTGTCAGCCCGACTCCTCAACCCTG GGCGGTGGATCCGGAGGTGGCTCAGGGGGAGGTAGTGGTACCCAGGACTGCTCCTTCCAA CACAGCCCCATCTCCTCCGACTTCGCTGTCAAAATCCGTGAGCTGTCTGACTACCTGCTTCA AGATTACCCAGTCACCGTGGCCTCC AACCTGCAG SEQ ID NO:133; pMON32369.seq GCCGACGAGGAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGGATGGA GCGGCTCAAGACTGTCGCTGGGTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACGGA GATACACTTTGTCACCAAATGTGCCTTTCAGCCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTCCAGA CCAACATCTCCCGCCTCCTGCAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGAT CACTCGCCAGAACTTCTCCCGGTGCCTGGAGCTGCAGTGTCAGCCCGACTCCTCAACCCTG GGCGGTGGGTCAGGAGGTGGGTCAGGAGGTGGATCCGGAGGTGGCACCCAGGACTGCTC CTTCCAACACAGCCCCATCTCCTCCGACTTCGCTGTCAAAATCCGTGAGCTGTCTGACTACC TGCTTCAAGATTACCCAGTCACCGTG GCCTCCAACCTGCAG SEQ ID NO 134, PMON32370.seq GCCGACGAGGAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGGATGGA GCGdCTCAAGACTGTCGCTGGGTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACGGAG ATACACTTTGTCACCAAATGTGCCTTTCAGCCCCCCCCCAGCTGCCTTCGCTTCGTCCAGAC CAACATCTCCCGCCTCCTGCAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGATC ACTCGCCAGAACTTCTCCCGGTGCCTGGAGCTGCAGTGTCAGCCCGACTCCTCAACCCTGG GCGGTGGGTCAGGAGGTGGGTCAGGAGGTGGATCCGGAGGTGGCTCAGGGGGAGGTAGT GGTACCCAGGACTGCTCCTTCCAACACAGCCCCATCTCCTCCGACTTCGCTGTCAAAATCCG TGAGCTGTCTGACTACCTGCTTCAAGATTACCCAGTCACCGTGGCCTCCAACCTGCAG SEQ ID N0.135; pMON35712.seq GCCGATTACCCAGTCACCGTGGCCTCCAACCTGCAGGACGAGGAGCTCTGCGGGGGCCTC TGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGGATGGAGCGGCTCAAGACTGTCGCTGGGTCCAAG ATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACGGAGATACACTTTGTCACCAAATGTGCCTTTCA GCCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTCCAGACCAACATCTCCCGCCTCCTGCAGGAGACC TCCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGATCACTCGCCAGAACTTCTCCCGGTGCCTG GAGCTGCAGTGTCAGCCCGACTCCTCAACCCTGGGCGGTGGGTCAGGAGGTGGGTCAGGA GGTGGATCCGGAGGTGGCACCCAGGACTGCTCCTTCCAACACAGCCCCATCTCCTCCGACT TCGCTGTCAAAATCCG TGAGCTGTCTGACTACCTGCTTCAA SEQ ID NO.136; pMON35713.seq GCCGCCTCCAACCTGCAGGACGAGGAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCA CAGCGCTGGATGGAGCGGCTCAAGACTGTCGCTGGGTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAG CGCGTGAACACGGAGATACACTTTGTCACCAAATGTGCCTTTCAGCCCCCCCCCAGCTGTCT TCGCTTCGTCCAGACCAACATCTCCCGCCTCCTGCAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGGCG CTGAAGCCCTGGATCACTCGCCAGAACTTCTCCCGGTGCCTGGAGCTGCAGTGTCAGCCCG ACTCCTCAACCCTGGGCGGTGGGTCAGGAGGTGGGTCAGGAGGTGGATCCGGAGGTGGCA CCCAGGACTGCTCCTTCCAACACAGCCCCATCTCCTCCGACTTCGCTGTCAAAATCCGTGAG CTGTCTGACTACCT GCTTCAAGATTACCCAGTCACCGTG SEQ ID NO:137; pMON35714 seq GCCGTCGCTGGGTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACGGAGATACACTTTG TCACCAAATGTGCCTTTCAGCCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTCCAGACCAACATCTCC CGCCTCCTGCAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGATCACTCGCCAG AACTTCTCCCGGTGCCTGGAGCTGCAGTGTCAGCCCGACTCCTCAACCCTGGGCGGTGGGT CAGGAGGTGGGTCAGGAGGTGGATCCGGAGGTGGCACCCAGGACTGCTCCTTCCAACACA GCCCCATCTCCTCCGACTTCGCTGTCAAAATCCGTGAGCTGTCTGACTACCTGCTTCAAGAT TACCCAGTCACCGTGGCCTCCAACCTGCAGGACGAGGAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGG CTGGTCCTGGCACA GCGCTGGATGGAGCGGCTCAAGACT SEQ ID NO -138, pMON35715 seq GCCTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACGGAGATACACTTTGTCACCAAAT GTGCCTTTCAGCCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTCCAGACCAACATCTCCCGCCTCCTG CAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGATCACTCGCCAGAACTTCTCCC GGTGCCTGGAGCTGCAGTGTCAGCCCGACTCCTCAACCCTGGGCGGTGGGTCAGGAGGTG GGTCAGGAGGTGGATCCGGAGGTGGCACCCAGGACTGCTCCTTCCAACACAGCCCCATCTC CTCCGACTTCGCTGTCAAAATCCGTGAGCTGTCTGACTACCTGCTTCAAGATTACCCAGTCA CCGTGGCCTCCAACCTGCAGGACGAGGAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGG CACAGCGCTGGAT GGAGCGGCTCAAGACTGTCGCTGGG SEQ ID NO 139, pMON35716 seq GCCCCCCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTCCAGACCAACATCTCCCGCCTCCTGCAGGAGACCT CCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCTGGATCACTCGCCAGAACTTCTCCCGGTGCCTGGA GCTGCAGTGTCAGCCCGACTCCTCAACCCTGGGCGGTGGGTCAGGAGGTGGGTCAGGAGG TGGATCCGGAGGTGGCACCCAGGACTGCTCCTTCCAACACAGCCCCATCTCCTCCGACTTC GCTGTCAAAATCCGTGAGCTGTCTGACTACCTGCTTCAAGATTACCCAGTCACCGTGGCCTC CAACCTGCAGGACGAGGAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTG GATGGAGCGGCTCAAGACTGTCGCTGGGTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAA CACGGAGATACACTT TGTCACCAAATGTGCCTTTCAGCCC SEQ ID NO 140, PMON 35717 seq GCCCGCTTCGTCCAGACCAACATCTCCCGCCTCCTGCAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGG CGCTGAAGCCCTGGATCACTCGCCAGAACTTCTCCCGGTGCCTGGAGCTGCAGTGTCAGCC CGACTCCTCAACCCTGGGCGGTGGGTCAGGAGGTGGGTCAGGAGGTGGATCCGGAGGTGG CACCCAGGACTGCTCCTTCCAACACAGCCCCATCTCCTCCGACTTCGCTGTCAAAATCCGTG AGCTGTCTGACTACCTGCTTCAAGATTACCCAGTCACCGTGGCCTCCAACCTGCAGGACGAG GAGCTCTGCGGGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGGATGGAGCGGCTCAAG ACTGTCGCTGGGTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACGGAGATACACTTTG TCACCAAATGTGC CTTTCAGCCCCCCCCCAGCTGTCTT SEQ ID NO 142, PMON 35718.seq GCCACCAACATCTCCCGCCTCCTGCAGGAGACCTCCGAGCAGCTGGTGGCGCTGAAGCCCT GGATCACTCGCCAGAACTTCTCCCGGTGCCTGGAGCTGCAGTGTCAGCCCGACTCCTCAAC CCTGGGCGGTGGGTCAGGAGGTGGGTCAGGAGGTGGATCCGGAGGTGGCACCCAGGACT GCTCCTTCCAACACAGCCCCATCTCCTCCGACTTCGCTGTCAAAATCCGTGAGCTGTCTGAC TACCTGCTTCAAGATTACCCAGTCACCGTGGCCTCCAACCTGCAGGACGAGGAGCTCTGCG GGGGCCTCTGGCGGCTGGTCCTGGCACAGCGCTGGATGGAGCGGCTCAAGACTGTCGCTG GGTCCAAGATGCAAGGCTTGCTGGAGCGCGTGAACACGGAGATACACTTTGTCACCAAATG TGCCTTTCAGCCCCC CCCCAGCTGTCTTCGCTTCGTCCAG SEQ ID NO.143, CUADRO 3 SECUENCIAS DE PROTEÍNAS pMON30237.pep AlaT rGInAspCysSerP-ieGInHisSerProIleSerSerAspP eAlaValLysIleArgGluLeuSerAspTyrLeuLe uGInAspTyrProValThrValAlaSerAsnLeuGInAspGluGluLeuCysGlyAlaLeuTrpArgLeuValLeuAlaGln ArgTfMetGI-iArgLeuLysT rValAlaGlySerLysMetGInGlyLeuLeusiuArgValAsnThrGIulleHisP eVal ThrLysCysAlaP eGInProProProSerCysLeuArgP eValGInThrAsnlleSerArgLeuLeuGInGlu'pirSerG luGInLeuValAlaLeuLysProTflle ThrArgGInAsnPheSerArgCysLeuGIuLeuGInCysGlnPro SEQ ID NO.l; pMON30238.pep AlaThrGInAspCysSerP eGInHisSerP -IleSerSerAspP eAlaValLysIleArgGluLeuSerAspTyrLeuLe uGInAspTyrProValThrValAlaSerAsnLeuGInAspGluGluLeuCysGIyGlyLeuTrpArgLeuValLeuAlaGIn ArgTrpMetGluArgLeuLysThrValAIaGlySerLysMetGInGlyLeuLeuGluArgValAsnT rGIulleHisP eVal T rLysCysAlaP eGInProProProSerCysLeuArgP eValGInT rAsnlleSerArgLeuLeuGInGluT rSerG luGInLeuValAlaLeuLysProTflleT rArgGInAsnP eSerArgCysLeuGluLeuGInCysGlnProAspSerSer ThrLe-j SEQ ID NO.2; pMON30239 pep AlaT rGInAspCysSerPheGlpHisSerProlIeSerSerAspP eAlaValLysIleArgGluLeuSerAspTyrLeuLe uGInAspTyrPraValThrValAlaSTrAsnLeuGInAspGluGluLeuCysGlyGlyLeuTrpArgLeuValLeuAlaGIn ArgTfMetGluArgLeuLysT rValAlaGlySerLysMetGInGlyLeuLeuGIuArgValAsnT rGIulleHisP eVal ThrLysCysAlaP eGInGluThrSerGIuGInLeuValAlaLeuLysProTflleT rArgGInAsnP eSerArgCysLe uGluLeuGInCysGlpProAspSérSerT rLeu SEQ ID NO:3, PMON32329 pep GlyT rGlnAspCysSerP eGInHisSerProlleSerSerAspPheAlaValLysIleArgGluLeuSerAspTyrLeuLe uGInAspTyrProValT rValAlaSerAsnLeuGInAspGluGluLeuCysGlyGlyLeuTrpArgLeuValLeuAlaGln ArgTfMetGluArgLeuLysT rValAlaGlySerLysMetGInGlyLeuLeuGluArgValAsnT rGIulleHisPheVal ThrLysCysAlaP eGInProProProSerCysLeuArgP eValGInThrAsnlleSerArgLeuLeuGInGluThrSerG luGInLeuVa-AlaLeuLysProTrplleThrArgGInAsnPheSer-ArgCysLeuGluLeuGInCysGlnPro SEQ ID NO:4, pMON32330.pep GlyTh-GInAspCysSerPheGInHisSerProlleSerSerAspPheAlaValLysIleArgGluLeuSerAspTyrLeuLe uGlnAspTyrProValThrVa.AlaSerAsnLeuGlnAspGluGluLeuCysG.lyGlyLeuTfA.gLeuValLeuAlaGlr- ArgTfMetGluArgLeuLysT rValAlaGlySerLysMetGlpGlyLeuLeuGluArgValAsnThrGIulleHisPheVai T rLysCysAlaP eGInProProProSerCysLeuArgPI-eValGInT rAsnlleSerArgLeuLeuGInGluT rSerG luGInLeuValAlaLeuLysProTfIleT rArgGInAsnPheSerArgCysLeuGluLeuGInCysGlnProAspSerSer T rLeu SEQ ID NO 5, pMON32341.pep AlaThrGInAspOysSerPheGInHisSerProlleSerSerAspPheAlaValLysIleA-gGluLeuSerAspTyrLei-iLe uGInAspTyrProValT rValAlaSerAsnLeuGInAspGluGluLeuCysGlyGlyLeuTfArgLeuValLeuAlaGln ArgTfMetGluArgLeuLysThrValAlaGlySerLysMetGInGlyLeuLeuGluArgValAsnThrGIulle HisP eValT rLysCysAIaPheGInProProPraSerCysLeuArgP eValGInThrAsnlleSerArgLeuLeuGInG luT rSerGIuGInLe-iValAlaLeuLysProTrplleT rArgGlnAsnP eSerArgCysLeuGluLeuGInCysGlnPro SEQ ID NO.6; pMON32342 pep AlaThrGInAspCysSerP eGIrH-sSerProlleSerSerAspP eAlaValLysIleArgGluLeuSerAspTyrLeuLe uGInAspTyrProValT rValAlaSerAsnLeuGlpAspGluGlul-euCysGlyGlyLeuTrpArgLeuValLeuAlaGln ArgTfMetGluArgLeuLysThrValAlaGlySerLysMetGInGlyLeuLeuGluArgValAsnT rGIulleHisPheVal ThrLysCysAlaPheGInProPraPraSerCysLeuArgP eValGInThrAsnlleSerArgLeuLeuGInGluT rSerG luGInLeuValAlaLei-iLysProTrplleT rArgGInAsnP eSerArgCysLeuGluLeuGInCysGlnProAspSerSer ThrLeu SEQ ID NO 7, pMON32320 pep AlaAspGluGluLeuCysGlyGlyLeuTrpArgLeuValLeuAlaGInArgTrpMetGluArgLeuLysThrValAlaGlyS erLysMetGInGlyLeuLeuGluArgValAsnThrGIuIleHisP eValThrLysCysAlaP eGInProProProSerCys LeuArgP eValGInT rAsnlleSerArgLeuLeuGInGluThrSerGluGInLeuValAlaLeuLysProTrplleT rArg GlnAsnPheSerArgCysLeuGluLeuGInCysGlnProAspSerSerThrLeuSerGIyGIyAsnGlySerGIyGIyAsn GlySerGIyGlyAsnGlyThrGIpAspCysSerP eGInHisSerProlleSerSerAspP eAlaValLysIleArgGIuLeu SerAspTyrLeuLeuGInAspTyrProValT rValAlaSerAsnLeuGln SEQ ID NO 8, pMON32321 pep AlaAspGluGluLeuCysGlyGlyLeuTfArgLeuValLeuAlaGlnArgTfMetGluArgLeuLysT rValAlaGlyS erLysMetGInGlyLeuLeuGluArgValAsnT rGIulleHisPheValThrLysCysAlaPheGlnProProProSerCys LeuArgP eValGInThrAsnlleSerArgLeuLeuGInGluT rSerGIuGInLeuValAlaLeuLysPraTflleT rArg GlnAsnP eSerArgCysLeuGluLeuGlnCysGlnProAspSerSerThrLeuSerGIyGIyAsnGlySerGIyGIyAsp GlyT rGInAspCysSerP eGInHisSerProlleSerSerAspPheAlaValLysIleArgGIuLeuSerAspTyrLeuLe uGInAspTyrProValThrValAlaSerAsnLeuGln SEQ ID NO 9, pMON32322.pep AlaAspGluGluLeuCysGlyGlyLeuTrpArgLeuValLeuAlaGInArgTfMetGluArgLeuLysThrValAlaGlyS erLysMetGlnGlyLeuLeuGluArgValAsnT- .rGlulleHisP eValT rLysCysAlaP eGlnProProProSerCys LeuArgP eValGInThrAsnlleSerArgLeuLeuGInGluThrSerGIuGInLeuValAlaLeuLysProTflleThrArg GlnAsnP eSerArgCysLeuGluLeuGInCysGlpProAspSerSerT rLeuSerGIyGIyAsnGlyThrGlnAspCy sSerPheGInHisSerProlleSerSerAspPheAlaValLysIleArgGluLeuSerAspTyrLeuLeuGInAspTyrProV alT rValAlaSerAsnLeuGlá SEQ ID NO: 10; pMON32323.pep AlaSerLysMetGInGlyLeuLeuGluArgValAsnThrGIulleHisP eValThrLysCysAlaP eGInProProProSe rCysLeuArgPheValGInThrAsnlleSerArgLeuLeuGInGluThrSerGIuGlnLeuValAlaLeuLysProTflleT rArgGInAsnP eSerArgCysLeuGluLeuGInCysGlnProAspSerSerThrLeuSerGIyGIyAsnGlySerGIyGI yAspGlySerGIyGIyAspGlyThrGIpAspCysSerP eGInHisSerProlleSerSerAspPheAlaValLysIleArgGI uLeuSerAspTyrLeuLeuGInAspTyrProValT rValAlaSerAsnLeuGInAspGluGluLeuCysGlyGlyLeuTrp AtgLeuValLeuAlaGli-ArgTfMetGluArgLe-iLysThrValAlaGly SEQ ID NO:11 ; p ON32324.pep AlaSerLysMetGInGlyLeuLeuGIuArgValAsnThrGIulleHisP eValThrLysCysAlaPheGInProProProSe rCysLeuArgPheValGIpThrAsnlleSerArgLeuLeuGInGluT rSerGIuGInLeuValAlaLeuLysProTrplleT rArgGInAsnPheSerArgCysLeuGluLeuGInCysGlnProAspSerSerThrLeuSerGIyGIyAsnGlySerGIyGI yAsnGlyT rGInAspCysSerPheGInHisSerProlleSerSerAspPheAlaValLysIleArgGluLeuSerAspTyrL euLeuGInAspTyrProValT rValAlaSerAsnLeuGInAspGluGlul-euCysGlyGlyLeuTrpArgLeuValLeLiAI aGInArgTrpMetGluArgLeuLysThrValAlaGly SEQ ID NO:12; pMON32325 pep AlaSerLysMetGInGlyLeuLeuGluArgValAsnT rGIulleHisPheValT rLysCysAlaPheGlnPraProProSe rCysLe-iArgP eValGInT rAsnlleSerArgLeuLeuGInGluTTirSerGltjGInLeuValAlaLeuLysProTrplleT rArgGInAsnP eSerArgCysLeuGluLeuGInCysGlnP-OAspSerSerT rLeuSerGIyGIyAsnGlyT rGInAs pCysSerP eGlr.H?sSerProlleSerSerAspPheAlaValLysl[eA.gGluLeuSe-AspTyrLeuLeuGlnAspTyrP roValThrValAlaSerAspLeuGlnAspGluGluLeuCysGlyGlyLeuTrpArgLeuValLeuAlaGInArgTfMetGlu ArgLeuLysT rValAlaGly SEQ ID NO:13, pMON32326 pep AlaProProSerCysLeuArgP eValGInThrAsnlleSerAraLeuLeuGInGluT rSerGIuGInLeuValAlaLeuLy sProTflleT rArgGInAsnPheSerArgCysLeuGluLeuGInCysGlnProAspSerSerT rLeuSerGIyGIyAsn GlySerGIyGIyAsnGlySerGIyGIyAsnGlyT rGInAspCysSerPheGInHisSerProlleSerSerAspPheAlaVa ILysIleArgGluLeuSerAspTyrLeuLe-iGlpAspTyrProValThrValAlaSerAspLeuGInAspGluGluLeuCysG lyGlyLeuTrpArgLe-iValLeuAlaGInArgTrp etGluArgLeuLysThrValAlaGlySerLysMetGInGlyLeuLetJ GluArgValAsnTl.rGlulleH?sP eValThrLysCysAlaP eGlnPro SEQ ID NO:14; PMON32327 pep AlaProPraSerCysLeuArgPheValGInT rAsnlleSerArgLeuLeuGInGluThrSerGIuGInLeuValAlaLeuLy sProTrplleThrArgGInAsnPheSerArgCysLeuGluLeuGInCysGlnProAspSerSerT rLeuSerGIyGIyAsn GlySerGIyGIyAsnGlyT rGInAspCysSerP eGInHisSerProlleSerSerAspPheAlaValLysIleArgGluLeu SerAspTyrLeuLeuGInAspTyrProValT rValAlaSerAsnLeuGInAspGluGluLeuCysGlyGlyLeuTfArgL euValLeuAlaGInArgTrpMetGluArgLeuLysTI-rValAlaGlySerLysMetGInGlyLeijLeuGluArgValAsnThr GlulleHisP eValThrLysCysAlaPheGInPro SEQ ID NO:15; PMON32328 pep AlaProProSerCysLeuArgP eValGInT rAsnlleSerArgLeuLeuGInGluThrSerGíuGInLeuValAlaLeuLy sProTrplleThrArgGInAsnPheSerArgCysLeuGluLeuGInCysGlnProAspSerSerThrLeuSerGIyGIyAsn GlyT rGInAspCysSerP eGInHisSerProlleSerSerAspP eAlaValLysIleArgGluLeuSerAspTyrLeuLe uGInAspTyrProValT rValAlaSerAsnLeuGInAspGluGluLeuCysGlyGlyLeuTfArgLeuValLeuAlaGln ArgTrp etGluArgLeuLysT rValAlaGlySerLysMetGInGlyLeuLeuGluArgValAsnT rGIulleHisPI-eVal ThrLysCysAlaP eGInPro SEQ ID NO 16, PMON32348 pep AlaAspGluGluLeuCysGlyGlyLeuTfArgLeuValLeuAlaGInArgTrpmetGluArgLeuLysThrValAlaGlyS erLysMelGInGlyLeuLeuGluArgValAsnT rGIulleHisP eValT rLysCysAlaP eGInProProProSerCys LeuArgPheValGInThrAsnlleSerArgLeuLeuGInGluThrSerGIuGInLeuValAlaLeuLysProTflleT rArg GlnAsnP eSerArgCysLeuGluLeuGInCysGlnProAspSerSerThrLeuSerGIyGlySerGIySerGIyGlySer GlySerGIyGlySerGIyT rGInAspCysSerPheGInHisSerProlleSerSerAspP eAlaValLysIleArgGluLeu SerAspTyrLeuLeuGInAspTyrProValThrValAlaSerAsnLeuGln SEQ ID NO 17, PMON32350 pep AlaAspGluGluLeuCysGlyGlyLeuTrpArgLeuVal euAlaGInArgTfMetGluArgLeuLysThrValAlaGlyS erLysMetGlnGlyLeuLeuGluArgValAsnT rGIulleHisP eValThrLysCysAlaP eGInProProProSerCys LeuArgP eValGInThrAsnlleSerArgLeuLeuGInGluT rSerGIuGInLeuValAlaLeuLysProTrplleT rArg GlnAsnP eSerArgCysLeuGluLeuGInCysGlnProAspSerSerThrLeuSerGIyGlySerGIySerGIyGlySer GlyT rGInAspCysSerPheGInHisSerProlleSerSerAspPheAlaValLysIleArgGluLeuSerAspTyrLeuLe uGInAspTyrProValT rValAlaSerAsnLeuGln SEQ ID NO.18, FLT3N pep etAlaThrGIpAspCysSerPheGInHisSerProlleSerSerAspP eAlaValLysIleArgGluLeuSerAspTyrLe uLeuGInAspTyrProValT rValAlaSerAsnLeuGlpAspGluGluLeuCysGlyGlyLeuTrpArgLeuValLeuAla GlnArgTrpMetGluArgLeuLysThrValAlaGlySerLysMetGInGlyLeuLeuGluArgValAsnTI-rGIulleHisPhe ValThrLysCysAlaP eGInProProProSerCysLeuArgPheValGInThrAsnlleSerArgLeuLeuGInGluThrS erGIuGInLeuValAlaLeuLysProTrplleThrArgGInAsnPl-eSerArgCysLeuGIuLeuGInCysGlnPtOAspSe rSerT rLeuGlyGIyGlySer SEQ ID NO 19, FLT3C pep GlySerG-yGlyT rGInASPCysSerPheGInHisSerProlleSerSerAspPheAlaValLysIleArgGluLe-iSerAs pTyrLeuLeuGInAspTyrProValT rValAlaSerAsnLeuGInAspGluGluLeuCysGlyGlyLeuTrpArgLeuVal LeuAlaGInArgTfMetGluArgLeuLysThrValAlaGlySerLysMetGlpGlyLeuLeuGluArgValAsnT rGIulle HisP eValT rLysCysAlaP eGInProProProSerCysLeuArgP eValGInT rAsnlleSerArgLeuLeuGlnG luT-irSerGluGInLeuValAlaLeuLysProTrplleT rArgGInAsnPheSerArgCysLeuGlLiLeuGInCysGlnPro AspSerSerThrLeu SEQ ID NO 20, FLT7N pep MetAlaThrGInAspCysSerP eGlnHisSerProlleSerSerAspPheAlaValLysIleArgGluLeuSerAspTyrLe uLeuGInAspTyrProValT rValAlaSerAsnLeuGInAspGluGluLeuCysGlyGlyLeuTrpArgLeuValLeuAla GlnArgTfMetGluArgLeuLysT rValAlaGlySerLysMetGInGlyLeuLeuGluArgValAsnT rGIulleHisPhe ValThrLysCysAlaP eGInProProProSerCysLeuArgPheValGInT rAsnlleSerArgLeuLeuGInGlijThrS erGIuGlnLeuValAlaLeuLysProTflleT-irArgGInAsnP eSerArgCysLeuGluLeuGInCysGlnProAspSe -SerThrLe-iGlyGlyGlySerGIyGlyGlySer SEQ ID NO 21, FLT4C.pep GlySerGIyGlyGlyThrGInAspCysSerP eGInHisSerProlleSerSerAspP eAlaValLysIleArgGluLeuSer AspTyrLeuLeuGlnAspTyrProValT rValAlaSerAsnLeuGInAspGluGluLeuCysGIyGIyLeuTfArgLeu Val euAlaGInArgTfMetGluArgLeuLysThrValAlaGlySerLysMetGInGlyLeuLeuGluArgValAsnT rGI ulleHisPI-eValThrLysCysAlaP eGInProProProSerCysLeuArgP eValGInTI-rAsnlleSerArgLeuLeuG InGluThrSerGIuGInLeuValAlaLeuLysProTrplleT rArgGlpAsnP eSerArgCysLeuGluLeuGInCysGln ProAspSerSe.T rLeu SEQ ID NO:22; FLTUN.pep MetAlaT rGInAspCysSe- P eGInHisSerProlleSe.SerAspPheAlaValLysIleArgGluLeuSerAspTyrLe uLeuGInAspTyrProValT rValAlaSerAsnLeuGInAspGluGluLeuCysGIyGIyLeuTfArgLeuValLeuAla GlnArgTrp etGluAtgLeuLysT rValAlaGlySerLysMetGI--GlyLeuLeuGluArgValAsnThrGlulleHisP e ValThrLysCysAlaPheGInProProProSerCysLeuArgPheValGInThrAsnlleSerArgLeuLeuGInGluT rS erGIuGInLe ValAlaLeuLysProTrplleThrArgGInAsnPheSerArgCysLeuGluLeuGInCysGlnProAspSe rSerThrLeuGlyGlyGlySerGIyGlyGlySerGIyGlyGlySer SEQ ID NO:23; FLTIOC.pep GlySerGIyGlyGlySerGlyGlyGlySerGIyThrGInAspCysSerP eGInHisSerPralleSerSerAspPheAlaVal LysIleArgGluLeuSerAspTyrLeuLeuGInAspTyrProValThrValAlaSerAsnLeuGInAspGluGluLeuCysGl yGlyLeuTfArgLeuValLeuAlaGInArgTrpMetGluArgLeuLysThrValAlaGlySerLysMetGInGlyLeuLeu GluArgValAsnThrGIulleHisPheValThrLysCysAlaPheGInProProProSerCysLeuArgPheValGInThrAs nlleSerArgLeuLeuGlnGluT rSerGluGlnLeuValAlaLeuLysProTrplleThrArgGlnAsnPl.eSerArgCysLe uGluLeuGInCysGlnProAspSerSerThrLeu SEQ ID NO:24; PMON32365 pep AlaAspGluGluLeuCysGlyGlyLeuTfArgLeuValLeuAlaGInArgTrpMetGluArgLeuLysThrValAlaGlyS erLysMetGInGlyLeuLeuGluArgValAsnT rGIulleHisP eValThrLysCysAlaP eGInProProProSerCys LeuArgP eValGInTI-rAsnIleSerArgLeuLeuGInGluT rSerGIuGInLeuValAlaLeuLysProTrplleT rArg GlnAsnPheSerArgCysLeuGluLeuGInCysGlnProAspSerSerT rLeuGlyGlyGlySerGIyGlyThrGInAsp CysSerPheGInHisSerProlleSerSerAspP eAlaValLysIleArgGluLeuSerAspTyrLeuLeuGInAspTyrPr oValT rValAlaSerAsnLeuGln SEQ ID NO 25, PMON32366 pep AlaAspGluGluLeuCysGlyGlyLeuTrpArgLeuValLeuAlaGInArgTfMetGluArgLeuLysThrValAlaGlyS erLysMetGInGlyLeuLeuGluArgValAsnT rGIulleHisP eValThrLysCysAlaPheGInProProProSerCys LeuArgP eValGlnT rAsnlleSerArgLeuLeuGInGluT rSerGIuGInLeuValAlaLeuLysProTrplleThrArg GlpAsnPheSerArgCysLeuGluLeuGInCysGlnProAspSerSerThrLeuGlyGlyGlySerGIyGlyGlyT rGIn AspCysSerP eGInHisSerProlleSerSerAspP eAlaValLysIleArgGluLeuSerAspTyrLeuLeuGInAspTy rProValThr ValAlaSerAsnLeuGln SEQ ID NO 26, PMON32367 pep AlaAspGluGluLeuCysGlyGlyLeuTfArgLeuValLeuAlaGInArgTfMetGluArgLeuLysThrValAlaGlyS erLysMetGlpGlyLeuLeuGluArgValAsnThrGIulleHisPheValThrLysCysAlaPheGInProProProSerCys LeuArgPheValGInThrAsnlleSerArgLeuLeuGInGluThrSerGIuGInLeuValAlaLeuLysProTrplleThrArg GlnAsnPheSerArgCysLeuGluLeuGInCysGlnProAspSerSerThrLeuGlyGlyGlySerGIyGlyGlySerGIy GlyThrGInAspCysSerP eGInHisSerProlleSerSerAspPheAlaValLysIleArgGluLeuSerAspTyrLeuLe uGInAspTyrProValThrValAlaSerAsnLeuGln SEQ ID NO 27, pMON32368.pep AlaAspGluGluLeuCysGlyGlyLeuTrpArgLeuValLeuAlaGInArgTrpMetGluArgLeuLysT rValAlaGlyS erLys etGInGlyLeuLeuGluArgValAsnT rGIulleHisPheValThrLysCysAlaP eGInProProProSerCys LeuArgP eValGInThrAsnlleSerArgLeuLeuGInGluT rSerGIuGInLeuValAlaLeuLysProTrpüeThrArg GlnAsnPheSerArgCysLeuGluLeuGInCysGlnProAspSerSerT rLeuGlyGlyGlySerGIyGlyGlySerGIy GlyGlySerGIyThrGInAspCysSerP eGlpHisSerProlleSerSerAspP eAlaValLysIleArgGluLeuSerAsp TyrLeuLeuGInAspTyrProValT r ValAlaSerAsnLeuGln SEQ ID NO 28, pMON32369-pep AlaAspGluGluLeuCysGlyGlyLeuTrpArgLeuValLeuAlaGInArgTfMetGluArgLeuLysT rValAlaGlyS erLysMetGInGlyLeuLeuGIuArgValAsnT rtBIulleHisP eValThrLysCysAlaP eGInProProProSerCys LeuArgP eValGInThrAsnlleSerArgLeuLeuGInGluT rSerGluGInLeuValAlaLeuLysProTrplleT rArg GlnAsnP eSerArgCysLeuGluLeuGInCysGlpProAspSerSerThrLeuGlyGlyGlySerGIyGlyGlySerGIy GlyGlySerGIyGlyGlyT rGInAspCysSerP eGInHisSerProlleSerSerAspPheAlaValLysIleArgGluLeu SerAspTyrLeuLeuGInAspTyrProValThrValAlaSerAsnLeuGln SEQ ID NO 29, pMON32370 pep AlaAspGluGluLeuCysGlyGlyLeuTfArgLeuValLeuAlaGInArgTfMetGluArgl-euLysT rValAlaGlyS erLysMetGInGlyLeuLeuGluArgValAsnThrGIulleHisPheValThrLysCysAlaPheGInProProProSerCys LeuArgPheValGInT rAsnlleSerArgLeuLeuGInGlijT rSerGIuGInLeuValAlaLeuLysProTflleThrArg GlnAsnP eSerArgCysLeuGluLeuGInCysGlpProAspSerSerT rLeuGlyGlyGlySerGIyGlyGlySerGIy GlyGlySerGIyGlyGlySerGIyGlyGlySerGIyT rGInAspCysSerPheGInHisSerProlleSerSerAspPheAla ValLysIleArgGluLeuSerAspTyrLeuLeuGInAspTyrProValThrValAlaSerAsnLeu Gln SEQ ID NO.30; PMON35712 pep AlaAspTyrP-OValT rValAlaSerAsnLeuGInAspGluGluLeuCysGlyGlyLeuTfArgLeuValLeuAlaGInAr gTrp etGluArgLeuLysThrValAlaGlySerLysMetGInGlyLeuLeuGluArgValAsnT rGIulleHisP eVaIT rLysCysAlaPheGInProProProSerCysLeuArgP eValGInT rAsnlleSerArgLeuLeuGInGlu "pirSerGIuGInLeuValAlaLeuLysProTflleThrArgGInAsnPheSerArgCysLeuGluLeuGInCysGlnProA spSerSerThrLeuGlyGlyGlySerGIyGlyGlySerGIyGlyGlySerGIyGlyGlyT rGInAspCysSerPheGInHis SerProlleSerSerAspPheAlaValLysIleArgGluLeuSerAspTyrLeuLeuGln SEQ ID NO 31, pMON35713 pep AlaAlaSerAsn euGInAspGluGluLeuCysGlyGlyLeuTfArgLeuValLeuAlaGInArgTfMetGluArgLeuL ysThrValAlaGlySerLysMetGInGIyLeuLeuGluArgValAsnT rGIulleHisP eValT rLysCysAlaPheGln ProProPraSerCysLeuArgPheValGInT rAsnlleSerArgLeuLeuGInGluT rSerGIuGInLeuValAlaLeuLy sProTflleT rArgGInAsnP eSerArgCysLe-iGluLeuGInCysGlnProAspSerSerThrLeuGlyGlyGlySer GlyGlyGlySerGIyGlyGlySerGIyGlyGlyThrGInAspCysSerPheGlnHisSerProlleSerSerAspPheAlaVal LysIleArgGluLeuSerAspTyrLeuLeuGInAspTyrProValT rVal SEQ ID NO-32, pMON35714 pep AlaValAlaGlySerLys etGInGlyLeuLeuGluArgValAsnThrGIulleHisPl-eValT rLysCysAlaP eGInPro ProProSerCysLeuArgPheValGInThrAsnlleSerArgLeuLeuGInGIuThrSerGIuGInLeuValAlal-euLysPr oTflleThrArgGInAsnPheSerArgCysLeuGluLeuGInCysGlnProAspSerSerThrLeuGlyGlyGlySerGIy GlyGlySe-GIyGlyGlySerGIyGlyGlyT rGInAspCysSe-PheGlpHisSerProlleSerSerAspPheAlaValLys HeArgGluLeuSerAspTyrLeuLeuGInAspTyrProValT rValAlaSerAsnLeuGInAspGluGluLeuCysGlyGI yLeuTrpArgLeuValLeuAlaGInArgTfMetGluArgLeuLysThr-SEQ ID NO 33, pMON35715.pep AlaSerLysMetGInGlyLeuLeuGluArgValAsnT rGIulleHisP eVapTirLysCysAlaP eGInProProProSe -CysLeuArgPheValGlnTh-AsnlleSerArgLeuLeuGlnGluThrSerGIuGInLeuValAlaLeuLysProTrplleTh rArgGInAsnP eSerArgCysLeuGluLeuGInCysGlnProAspSerSerThrLeuGlyGIyGlySerGIyGlyGlySer GlyGlyGlySerGIyGlyGlyT rGInAspCysSerP eGInHisSerProlleSerSerAspPheAlaValLysIleArgGluL euSerAspTyrLeuLeuGInAspTyrProValThrValAlaSerAspLeuGInAspGluGluLeuCysGlyGlyLeuTrpAr gLeuValLeuAlaGInArgTfMetGluArgLeuLysT rValAlaGly SEQ ID NO:34; pMON35716.pep AlaProProSerCysLeuArgPheValGInThrAsnlleSerArgLeuLeuGInGluThrSerGIuGInLeuValAlaLeuLy sProTflleThrArgGlpAspPheSerArgCysLeuGluLeuGInCysGlnProAspSerSerThrLeuGlyGlyGlySer GlyGlyGlySerGIyGlyGlySerGIyGlyGlyT rGInAspCysSerPheGInHisSerPralleSerSerAspPheAlaVal LysIleArgGluLeuSerAspTyrLeuLeuGInAspTyrPraValThrValAlaSerAsnLeuGInAspGluGluLeuCysGI yGlyLeuTfArgLeuValLeuAlaGInArgTrp etGluArgLeuLysThrValAlaGlySerLysMetGInGlyLeuLeu GluArgValAsnThrGluHeHisP- -eValT-.rLysCysAlaP- -eGlr.Pro SEQ ID NO:35; pMON35717.pep AlaArgPheValGInThrAsnlleSerArgLeuLeuGInGluThrSerGIuGInLeuValAlaLeuLysPraTfIleThrArg GlnAsnPheSerArgCysLeuGluLeuGInCysGlnProAspSerSerThrLeuGlyGlyGlySerGIyGlyGlySerGIy Gly.GlySerGIyGlyGlyThrGInAspCysSerPheGInHIsSerProlleSerSerAspPheAlaValLysIleArgGluLeu SerAspTyrLeuLeuGInAspTyrProValThrValAlaSerAsnLeuGInAspGluGluLeuCysGlyGlyLeuTrpArgL euValLeuAlaGInArgTfMetGluArgLeuLysThrValAlaGlySerLysMetGlnGlyLeuLeuGluArgValAsnThr GIulleHisPheValThrLysCysAlaPheGInProProProSerCysLeu SEQ ID NO:36; pMON35718.pep AlaThrAsnlleSerArgLeuLeuGInGluThrSerGIuGInLeuValAlaLeuLysProTrplleThrArgGIriAsnPheSer ArgCysLeuGluLeuGInCysGlnProAspSerSerThrLeuGlyGlyGlySerGIyGlyGlySerGIyGlyGlySerGIyGI yGlyThrGInAspCysSerPheGInHisSerProlleSerSerAspPheAlaValLysIleArgGluLeuSerAspTyrLeuL euGInAspTyrProValThrValAlaSerAsnLeuGInAspGluGluLeuCysGlyGlyLeuTrpArgLeuValLeuAlaGl nArgTfMetGluArgLeuLysThrValAlaGlySerLysMetGInGlyLeuLeuGluArgValAsnThrGIulleHisPheV alThrLysCysAlaPheGInProProProSerCysLeuArgPheValGIp SEQ ID NO:37; Materiales v métodos Métodos de ADN recombinante A menos que se indique lo contrario, todos los químicos de especialidad se obtuvieron de Sigma Co., (St. Louis, MO). Las endonucleasas de restricción y ligasa de ADN T4 se obtuvieron de New England Biolabs (Beverly, MA) o Boehringer Mapnheim (Indianapolis, IN).

Transformación de cepas de E. Coli Cepas de E. Coli, tales como DH5a™ (Life Technologies, Gaithersburg, MD) y TG1 (Amersham Corp; Aírlington Heights, IL) se usan para la transformación de reacciones de ligación y son la fuente de ADN plasmídico para transfectar células de mamífero. Las cepas de E. Coil, tales como MON 105 y JM101 , se pueden usar para expresar el agonista del receptor f!3 de la presente invención en el citoplasma o espacio periplásmico. MON 105 ATCC#55204: F-, lamda-, IN (rrnD, rrE)1 , rpoD+, rpoH358 DH5a™: F-, phi80dlacZdeltaM15, delta(lacZYA-argF)U169, deoR, recA1 , endA1 , hsdR17 (rk-,mk+), phoA, supE44lamda-,thi-1 , gyraA96, re1A1 TG1 : delta(lac-pro), suPE, thi-1 , hsdD5/F' (traD36, proA+B+, laclq, lacZdeltaM15) Las células de eficiencia de subclonación DH5a™ se compran como células competentes y están listas para la transformación usando el protocolo del fabricante, mientras que ambas cepas TG1 y MON105 de E. Coli se hacen competentes para captar el ADN usando un método de CaCI? Típicamente, se cultivan 20 a 50 mL de células en medio LB (1% de Bactotriptona, 0.5% de extracto de levadura, 150 mM de NaCI) hasta una densidad de aproximadamente 1.0 unidad de densidad óptica en 600 nanómetros (OD600) medida por un espectrofotómetro espectrónico Bausch & Lomb (Rochester, NY). Las células se recogen mediante centrifugación y se resuspenden en un volumen de cultivo de un quinto de solución de CaCl2 (50 mM CaCI2, 10mM Tris-Cl, pH 7.4) y se mantienen a 4°C durante 30 minutos. Las células son recogidas de nuevo mediante centrifugación y se resuspenden en un décimo de volumen de cultivo de solución de CaCI2 El ADN ligado es añadido a 0.2 mL de estas células, y las muestras se mantienen a 4°C durante una hora. Las muestras se desplazan a 42°C durante dos minutos y se añade 1 mL de LB antes de agitar las muestras a 37°C durante una hora. Las células de estas muestras se dispersan en placas (medio LB más 1.5% de Bacto-agar) que contienen ampiciiina (100 microgramos/mL, ug/mL) cuando se selecciona para transformantes resistentes a ampicilina, o espectinomicina (75 ug/mL) cuando se selecciona para transformantes resistentes a espectinomicina. Las placas se incuban durante la noche a 37°C. Se recogen colonias individuales y se cultivan en LB complementado con antibiótico adecuado durante 6-16 horas a 37°C con agitación. Las colonias se recogen y se inoculan en LB más antibiótico adecuado (100 ug/mL de ampicilina o 75 ug/mL de espectinomicina) y se cultivan a 37°C mientras se agita. Antes de cosechar los cultivos, se analiza 1 ul de células mediante PCR para verificar la presencia de un gen del agonista del receptor flt3.

La PCR se lleva a cabo usando una combinación de iniciadores que se fijan al gen y/o vector del agonista del receptor flt3. Después de que la PCR es completada, se añade colorante de carga a la muestra seguido por electroforesis como se describió arriba. Un gen ha sido ligado al vector cuando se observa un producto de PCR del tamaño esperado.

Métodos para la creación de genes con extremo N/extremo C nuevos Método I. Creación de genes con extremo N/extremo C nuevos que contienen una región enlazadora.

Los genes con extremo N/extremo C nuevos que contienen una región enlazadora que separa al extremo C y al extremo N originales se pueden hacer esencialmente siguiendo el método descrito en L. S. Mullins y otros, J. Am. Chem. Soc. 116, 5529-5533 (1994). Se usan varios pasos de amplificaciones por reacción en cadena de pollmerasa (PCR) para reordenar la secuencia de ADN que codifica la secuencia de aminoácidos principal de la proteína. Los pasos se ilustran en la figura 2. En el primer paso, se usa el conjunto de iniciadores ("inicio nuevo" e "inicio de enlazador") para crear y amplificar, a partir de la secuencia de genes original, el fragmento de ADN ("inicio de fragmento") que contiene la secuencia que codifica la nueva porción N terminal de la nueva proteína seguida por el enlazador que conecta los extremos del extremo C y el extremo N de la proteína original. En el segundo paso, el conjunto de iniciadores ("detención nueva" y "detención de enlazador") se usa para crear y amplificar, a partir de la secuencia de genes original, el fragmento de ADN ("detención de fragmento") que codifica el mismo enlazador que el usado arriba, seguido por la nueva porción del extremo C de la nueva proteína. Los iniciadores "inicio nuevo" y "detención nueva" se diseñan para incluir los sitios de reconocimiento de enzima de restricción adecuados que permiten la clonación del gen nuevo en plásmidos de expresión. Las condiciones de PCR típicas son un ciclo de fusión a 95°C durante dos minutos; 25 ciclos de desnaturalización a 94°C durante un minuto, 50°C de fijación durante un minuto y 72°C de extensión durante un minuto; más un ciclo de extensión de 72°C durante siete minutos. Se usa un equipo de reactivos de núcleo Perkin Elmer GeneAmp PCR. Una reacción de 100 ul contiene 100 pmol de cada iniciador y un ug de ADN de molde; y 1x de regulador de pH de PCR 200 uM de dGTP, 200 uM dATP, 200 uM dTTP; 200 uM de dCTP, 2.5 unidades ADN polimerasa AmpliTaq y 2 mM de MgCl2. Las reacciones de PCR se llevan a cabo en un ciclizador térmico de ADN modelo 480 (Perkin Elmer Corporation, Norwalk, CT). "Inicio de fragmento" y "detención de fragmento", los cuales tienen una secuencia complementaria en la región enlazadora y la secuencia de codificación para los dos aminoácidos en ambos lados del eniazador, se unen entre si en un tecer paso de PCR para hacer el gen de longitud completa que codifica la proteína nueva. Los fragmentos de ADN "inicio de fragmento" y "detención de fragmento" se resuelven en un gel de TAE al 1%, se tiñen con bromuro de etidio y se aislan usando un equipo de extracción con gel Qiaex (Qiagen). Estos fragmentos son combinados en cantidades equimolares, se calientan a 70°C durante diez minutos y se enfrían lentamente para permitir la fijación a través de su secuencia compartida en "inicio de enlazado." y "detención de enlazador". Ep el tercer paso de PCR, los iniciadores "inicio nuevo" y "detención nueva" se añaden a los fragmentos fijados para crear y amplificar el gen de extremo N/extremo C nuevos de longitud completa. Las condiciones de PCR típicas son un ciclo de fusión a 95°C durante dos minutos; 25 ciclos de desnaturalización a 94°C durante un minuto, 60°C de fijación durante un minuto y 72°C de extensión durante un minuto; más un ciclo de extensión a 72°C durante siete minutos. Se usa un equipo Perkin Elmer GeneAmp PCR Core Reagents. Una reacción de 100 ul contiene 100 pmol de cada iniciador y aproximadamente 0.5 ug de ADN; y 1x de regulador de PH de PCR, 200 uM de dGTP, 200 uM de dATP, 200 uM de dTTP; 200 uM de dCTP, 2.5 unidades de ADN pollmerasa AmpliTaq y 2 mM de MgCl2- Las reacciones de PCR se purifican usando un equipo Wizard PCR Preps (Promega).

Método II. Creación de genes con extremo N/extremo C nuevos sin una región enlazadora. Los genes con extremo N/extremo C nuevos sin un enlazador que una el extremo N y extremo C originales pueden hacerse usando dos pasos de amplificación por PCR y una ligación de extremos rasurados. Los pasos se ilustran en la figura 3. En el primer paso, el primer conjunto ("inicio nuevo" e "inicio de P-b1") se usa para crear y amplificar, a partir de la secuencia de genes original, el fragmento de ADN ("inicio de fragmento") que contiene la secuencia que codifica la nueva porción del extremo N de la nueva proteína. En el segundo paso, el conjunto de iniciadores ("detención nueva" y "detención de P-b1") se usa para crear y amplificar, a partir de la secuencia de genes original, el fragmento de ADN ("detención de fragmento") que contiene la secuencia que codifica una la nueva porción del extremo C de la nueva proteína. Los iniciadores "inicio nuevo" y "detención nueva" están diseñados para incluir sitios de restricción adecuados que permitan la clonación del gen nuevo en vectores de expresión. Las condiciones de PCR típicas son un ciclo de fusión a 95°C durante dos minutos; 25 ciclos de desnaturalización a 94°C durante un minuto, 50°C de fijación durante 45 segundos y 72°C de extensión durante 45 segundos. Se usa polimerasa Deep Vent (New England Biolabs) para reducir la ocurrencia de proyecciones en condiciones recomendadas por el fabricante. Los iniciadores "inicio de P-bl" y "detención de P-bl" son fosforilados al final para ayudar en la ligación de extremos rasurados subsecuente de "inicio de fragmento" y "detención de fragmento" entre sí. Una reacción de 100 ul contenfa 150 pmol de cada iniciador y un ug de ADN de molde; y 1x de reguiador de PH Vent (New England Biolabs), 300 uM de dGTP, 300 uM de dATP, 300 uM de dTTP, 300 uM de dCTP y 1 unidad de polimerasa Deep Vent. Las reacciones de PCR se llevan a cabo en un ciclizador térmico de ADN modelo 480 (Perkin Elmer Corporation, Norwalk, CT). Los productos de reacción de PCR se purifican usando un equipo Wizard PCR Preps (Promega).

Los iniciadores son diseñados para incluir sitios de reconocimiento de enzima de restricción adecuados que permitan la clonación del gen nuevo en vectores de expresión. Típicamente, "inicio de fragmento" es diseñado para crear un sitio de restricción Ncol, y "detención de fragmento" es diseñado para crear un sitio de restricción Hindlll. Las reacciones de digestión de restricción se purifican usando un equipo Magic ADN Clean-up System (Promega). Los fragmentos inicio y detención son resueltos en gel de TAE al 1 %, se tiñen con bromuro de etidio y se aislan usando un equipo Qiaex Gel Extraction (Qiagen). Estos fragmentos se combinan y se fijan a los extremos del fragmento de vector Ncol/Hindlll de -3800 pares de bases de pMON3934 calentando a 50°C durante diez minutos y se dejan enfriar lentamente. Los tres fragmentos se ligan entre sí usando ligasa de ADN T4 (Boehringer Mannheim). El resultado es un plásmido que contiene el gen de extremo N/extremo C nuevos de longitud completa. Una porción de la reacción de ligación se usa para trasformar células DH5a de cepa de E. Coli (Life Technologies. Gaithersburg. MD). Se purifica ADN plasmídico y se confirma la secuencia como abajo.

Método lll. Creación de genes de extremo N/extremo C nuevos mediante método de duplicación en tándem. Los genes de extremo N/extremo C nuevos se pueden hacer en base al método descrito en R. A. Horlick, y otros, Protein Eng. 5: 427-431 (1992).

La amplificación por reacción en cadena de polimerasa (PCR) de los genes de extremo N/extremo C nuevos se lleva a cabo usando un ADN de molde duplicado en tándem. Los pasos se ilustran en la figura 4. El ADN de molde duplicado en tándem se crea mediante clonación y contiene dos copias del gen separado por secuencia de ADN que codifica un enlazador que conecta los extremos de los extremos C y N de las dos copias del gen. Se usan conjuntos de iniciadores especificos para crear y amplificar un gen de extremo N/extremo C nuevos de longitud completa a partir del ADN de molde duplicado en tándem. Estos Iniciadores están diseñados para incluir sitios de restricción adecuados que permitan la clonación del gen nuevo en vectores de expresión. Las condiciones de PCR típicas son un ciclo de fusión a 95°C durante dos minutos; 25 ciclos de desnaturalización a 94°C durante un minuto, 50°C de fijación durante un minuto y 72°C de extensión durante un minuto; más un ciclo de extensión a 72°C durante siete minutos. Se usa un equipo Perkin Elmer GeneAmp PCR Core Reagents (Perkin Elmer Coforation, Norwalk, CT). Una reacción de 100 ul contiene 100 pmol de cada iniciador un ug de ADN de molde; y 1x de regulador de pH de PCR, 200 uM de dGTP, 200 uM de dATP, 200 uM de dTTP, 200 uM de dCTP, 2.5 unidades de ADN polimerasa AmpliTaq y 2 Mm de MgC . Las reacciones de PCR se llevan acabo en un ciclizador térmico de ADN modelo 480 (Perkin Elmer Coforation, Norwalk, CT). Las reacciones de PCR se purifican usando un equipo Wizard PCR Preps (Promega).

Aislamiento y caracterización de ADN El ADN plasmídico puede aislarse mediante un número de métodos diferentes y usando equipos comercialmente disponibles conocido por aquellos expertos en la técnica. Algunos de esos métodos se muestran aquí. El ADN plasmídico es aislado usando el equipo Promega Wizard™ Miniprep (Madison, Wl), los equipos de aislamiento Qiagen QlAwell Plasmid (Chatsworth, CA) o el equipo Qiagen Plasmid Midi. Estos equipos siguen el mismo procedimiento general para el aislamiento de ADN plasmídico. Brevemente, se peletizan células mediante centrifugación (5000 x g), se libera ADN plasmídico con tratamiento secuencial de NaOH/ácido y se remueven los residuos celulares mediante centrifugación (10000 x g). El sobrenadante (que contiene el ADN plasmídico) se carga sobre una columna que contiene resina de unión a ADN, la columna se lava y se eluye ADN plasmfdico con TE. Después de tamizar para las colonias con el plásmido de interés, las células de E. Coll son inoculadas en 50-100 mLs de LB más el antibiótico adecuado para crecimiento durante la noche a 37°C en una incubadora de aire mientras se agita. El ADN plasmídico purificado se usa para la determinación de secuencia de ADN, digestión con enzima de restricción adicional, subclonación adicional de fragmentos de ADN y transfección en mamíferos, E. coli u otras células.

Confirmación de secuencia El ADN plasmídico purificado es resuspendido ep dH20 y cuantificado midiendo la absorbencia a 260/280 nm en un espectrómetro UV Bausch and Lomb Spectronic 601. Se determina la secuencia de las muestras de ADN usando equipos de química de determinación de secuencia terminadora ABI PRISM™ DyeDeoxy™ (Applied Biosystems División of Perkin Elmer Coforation, Lincoln City, CA) (Número de parte 401388 ó 402078) de acuerdo con el protocolo sugerido por los fabricantes y modificado normalmente por la adición de DMSO al 5% a la mezcla de determinación de secuencia. Las reacciones de determinación de secuencia se llevan a cabo en un ciclizador térmico de ADN modelo 480 (Perkin Elmer Corporation, Norwalk, CT) siguiendo las condiciones de amplificación recomendadas. Las muestras se purifican para remover el exceso de terminadores de colorante con columnas centrífugas Centri-Sep™ (Princeton Separations, Adelphia, NJ) y se liofilizan. Las reacciones de determinación de secuencia marcadas con colorante fluorescente se resuspenden en formamida desionizada, y se determina su secuencia en geles de desnaturalización con 4.75% de poliacrilamida-urea a 8M usando un determinador de secuencia de ADN automático ABI Modelo 373A. Los fragmentos de secuencia de ADN traslapantes son analizados y ensamblados en grupos contiguos maestros de ADN usando el programa Sequencher de análisis de ADN (Gene Codes Coforation, Ann AFor, Ml).

Expresión de agonistas del receptor flt3 en células de mamífero Transfección de células de mamífero/producción de medios acondicionados La línea de células BHK-21 puede obtenerse de la ATCC (Rockville, MD). Las células se cultivan en medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEN/alta-glucosa), complementado a 2mM (mM) de L-glutamina y 10% de suero bovino fetal (FBS). Esta formulación se designa medio de crecimiento 5 BHK. El medio selectivo es medio de crecimiento BHK complementado con 453 unidades/mL de higromicina B (Calbiochem, San Diego, CA). La línea de células BHK-21 se transfectó en forma estable previamente con la proteína VP16 transactivante HSV, la cual transactiva al promotor IE110 encontrado en el plásmido pMON3359 (Ver Hiippenmeyer y otros, Bio Technology, pp. 1037-1041 , 1993). La proteína VP16 conduce la expresión de los genes insertados detrás promotor IE110. Las células BHK-21 que expresan la proteína VP16 transactivadora se designan BHK-VP16. El plásmido pMON118 (Ver Highkin y otros, Poultry Sci., 70:970-981 , 1991) expresa al gen de resistencia a higromicina del promotor de SV40. Un plásmido similar está disponible de ATCC, pS V2-hph.

Las células BHK-VP16 se plantan en una caja de cultivo de tejido de 60 milímetros (mm) a 3 x 105 células por caja, 24 horas antes de la transfección. Las células se transfectan durante 16 horas en 3 mL de "OPTIMEM"™ (Gibco-BRL, Gaithersburg, MD) que contiene 10 ug de ADN plasmídico que contiene el gen de interés, 3 ug del plásmido de resistencia a higromiclna pMON1118 y 80 ug de Gibco-BRL "LIPOFECTAMINE"™ por caja. El medio es aspirado subsecuentemente y reemplazado con 3 mL de medio de crecimiento. Cuarenta y ocho horas después de la transfección, los medios de cada caja se recogen y se prueban para verificar la actividad (medios acondicionados transitorios). Las células son removidas de la caja mediante tripsina-EDTA, se diluyen 1 :10 y se transfieren a cajas de cultivo de tejido de 100 mm que contienen 10 mL de medio selectivo. Después de aproximadamente 7 días en medio selectivo, las células resistentes crecen en colonias de varios milímetros de diámetro. Se remueven las colonias de la caja con papel filtro (cortado a aproximadamente el mismo tamaño que las colonias e impregnado con tripsina/EDTA) y se transfieren a cavidades individuales de una placa de 24 cavidades que contiene 1 mL de medio selectivo. Después de que las clonas son cultivadas, el medio acondicionado se vuelve a probar y las clonas positivas se expanden en medios de crecimiento.

Expresión de agonistas del receptor flt3 en E. coli Cepas de E. Coli MON105 o JM101 que portan al plásmido de interés se cultivan a 37°C en M9 más medio de casaminoácidos con agitación en una incubadora de aire modelo G25 de New Brunswick Scientific (Edison, Nueva Jersey). Se monitorea el crecimiento a OD600 hasta que alcanza un valor de 1 , momento en el cual se añade ácido nalidíxico (10 miligramos/mL) en NaOH a 0.1 N hasta una concentración final de 50µg/mL. Los cultivos se agitan después a 37°C durante tres a cuatro horas adicionales. Se mantiene un alto grado de aereación a lo largo del periodo de cultivo para lograr una producción máxima del producto de gen deseado. Las células se examinan bajo un microscopio de luz para verificar la presencia de cuefos de inclusión (IB). Se remueven alícuotas de un mL del cultivo para análisis del contenido de proteínas mediante ebullición de las células peletizadas, tratándolas con regulador de pH de reducción y electroforesis mediante SDS-PAGE (ver. Maniatis y otros, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 1982). El cultivo es centrifugado (5000 x g) para peletizar las células. Las estrategias adicionales para lograr la expresión de alto nivel de genes en E. Coli se pueden encontrar en Sawas, C.M. (Microbiological Reviews 60; 512-539, 1996).

Preparación de cuerpo de inclusión, extracción, repliegue, diálisis, cromatografia DEAE y caracterización de los agonistas del receptor flt3 que se acumulan como cuefos de inclusión en E. coli Aislamiento de cuerpos de inclusión. La pella de célula de un cultivo de E. coli de 330 mL es resuspendida en 15 mL de regulador pH de sonificación (10 mM de clorhidrato de 2-amino-2-(hidroximetil)-1 ,3-propanodiol (Tris-HCl), pH 8.0 + 1 mM de ácido etilendiaminotetraacético (EDTA)). Estas células resuspendidas se sonifican usando la sonda de punta microscópica de un Sonicator Cell Disruptor (modelo W-375, Heat Systems-Ultrasonics, Inc., Farmingdale, Nueva York). Se emplean tres rondas de sonificaclón en regulador pH de sonificación seguidas por centrifugación para romper las células y lavar los cuerpos de inclusión (IB). La primera ronda de sonificación es un estallido de 3 minutos seguido por un estallido de un minuto, y las dos rondas finales de sonificación son de un minuto cada una.

Extracción y repliegue de proteínas de pellas de cuefos de inclusión: Después del paso de centrifugación final, se resuspende la pella de IB en 10 mL de 50 mM de Tris-HCl, pH 9.5, 8 M de urea y 5 mM de ditiotreitol (DTT) y se agita a temperatura ambiente durante aproximadamente 45 minutos para permitir la desnaturalización de la proteína expresada. La solución de extracción se transfiere a un vaso de precipitado que contiene 70 mL de 5 mM de Tris-HCl, pH 9.5 y 2.3 M de urea, y se agita suavemente mientras se expone al aire a 4°C durante 18 a 48 horas para permitir que las proteínas se replieguen. El repliegue se monitorea mediante análisis en una columna C18 de cromatografía de líquidos de alta presión de fase invertida (CLAP-FI) (0.46x25 cm) Vydac (Hesperia, Ca.). Se emplea un gradiente lineal de 40% a 60% de acetonitrilo que contiene 0.1 % de ácido trifluoroacético (TFA), para monitorear el repliegue. Este gradiente se desarrolla durante 30 minutos a una velocidad de flujo de 1.5 mL por minuto. Las proteínas desnaturalizadas generalmente eluyen más adelante en el gradiente que las proteínas replegadas.

Purificación: Después del repliegue, las proteínas de E. coli contaminantes se remueven mediante precipitación con ácido. El pH de la solución de repliegue se titula a entre pH 5.0 y pH 5.2 usando 15% (v/v) de ácido acético (HOAc). Esta solución se agita a 40°C durante 2 horas y después se centrifuga durante 20 minutos a 12,000 x g para peletizar cualquier proteína insoluble. El sobrenadante del paso de precipitación con ácido se dializa usando una membrana Spectra/Por 3 con un corte de peso molecular (MWCO) de 3,500 daltons. La diálisis es contra dos cambios de 4 litros (un exceso de 50 veces) de 10 mM de Tris-HCl, pH 8.0 durante un total de 18 horas. La diálisis disminuye la conductividad de la muestra y remueve urea antes de la cromatografía DEAE. La muestra es después centrifugada (20 minutos a 12,000 x g) para peletizar cualquier proteína insoluble después de la diálisis. Se usa una columna DEAE2 Bio-Rad Bio-Scale (7 x 52 mm) para la cromatografía de intercambio de iones. La columna es equilibrada en un regulador de pH que contiene 10 mM de Tps-HCI, pH 8.0. La proteína es eluida usando un gradiente de 0 a 500 mM de cloruro de sodio (NaCI) ep regulador de pH de equilibrio, sobre 45 volúmenes de columna. Una velocidad de flujo de 1 mL por minuto se usa a lo largo de la prueba. Las fracciones de la columna (2 mL por fracción) se recogen a través del gradiente y se analizan mediante CLAP Fl en una columna C18 Vydac (Hesperia, Ca.) (0.46 x 25 cm). Se emplea un gradiente lineal de 40% a 65% de acetonitrilo, que contiene 0.1% de ácido trifluoroacético (TFA). Este gradiente se desarrolla durante 30 minutos a una velocidad de flujo de 1.5 mL por minuto. Las fracciones recogidas son después dializadas contra 2 cambios de 4 litros (exceso de 50 a 500 veces) de 10 mM de acetato de amonio (NH4Ac), pH 4.0 durante un total de 18 horas. La diálisis se lleva a cabo usando una membrana Spectra/Por 3 con un MWCO de 3,500 daltons. Finalmente, la muestra se filtra estérilmente usando un filtro de jeringa de 0.22 µm (µStar LB syringe filter, Costar, Cambridge, Ma.) y se almacena a 4°C. En algunos casos las proteínas replegadas pueden pupficarse por afinidad usando reactivos de afinidad tales como mAbs o subunidades de receptor unidas a una matriz adecuada. Como alternativa (o además de), la purificación puede lograrse usando cualquiera de una variedad de métodos cromatográficos tales como: cromatografía de intercambio de iones, de filtración por gel o hidrofóbica, o CLAP de fase invertida.

Estos y otros métodos de purificación de proteínas se descpben en detalle en Methods in Enzymology, Volumen 182 'Guide to Portein Purification' editado por Murray Deutscher, Academic Press, San Diego, CA (1990).

Caractepzación de protelna: La proteína purificada es analizada mediante CL-AP Fl, espectrometría de masa por electroaspersióp y SDS-PAGE. La cuantificación de proteínas se lleva a cabo por composición de aminoácidos, CLAP-FI y determinación de proteínas de Bradford. Ep algunos casos se lleva a cabo el mapeo de péptidos trípticos en conjunto con espectrometría de masa por electroaspersión para confirmar la identidad de la proteína.

Prueba de metilcelulosa Esta prueba refleja la capacidad de los factores de estimulación de colonia para estimular células normales de la médula ósea y producir diferentes tipos de colonias hematopoyéticas in vitro (Bradley y otros, Aust. Exp Biol. Sci. 44:287-300, 1966), Pluznik y otros, J. Cell Comp. Physio 66:319-324, 1965).

Métodos Se obtiene aproximadamente 30 mL de médula ósea saludable fresca y normal de Individuos después de su consentimiento informado. Bajo condiciones estériles las muestras se diluyen 1 :5 con una solución de 1X PBS (#14040.059 Life Technologies, Gaithersburg, MD.) en un tubo cónico de 50 mL (#25339-50 Corning, Corning MD). Se coloca Ficoll (Histopaque 1077 Sigma H- 8889) bajo la muestra diluida y se centrifuga, 300 x g durante 30 minutos. La banda de células mononucleares se remueve y se lava dos veces en 1X PBS y una vez con 1 % de BSA PBS (CellPro Co., Bothel, WA). Se cuentan las células mononucleares y se seleccionan las células CD34+ usando la columna del equipo Ceprate LC (CD34) (CellPro Co., Bothel, WA). Este fraccionamiento se lleva a cabo ya que todas las células madre y progenitoras dentro de la médula ósea despliegan antígeno de superficie CD34. Los cultivos se establecen por triplicado con un volumen final de 1.0 mL en una caja de petri de 35 x 10 mm (Nunc#174926). El medio de cultivo se compra de Terry Fox Labs, (medio HCC-4230, Terry Fox Labs, Vancouver, B.C., Canadá) y se añade eritropoyetina (Amgen, Thousand Oaks, CA.) al medio de cultivo. Se añaden 3,000-10,000 células CD34+ por caja. Las proteínas del agonista del receptor FLT3, en medio acondicionado a partir de células de mamífero transfectadas o purificadas de medios acondicionados a partir de células de mamífero transfectadas o E. coli, se añaden para dar concentraciones finales que varían de .001 nM a 10 nM. Los cultivos se resuspenden usando una jeringa de 3 ce y se coloca 1.0 mL por caja. Los cultivos de control (respuesta de línea de base) no recibieron factores de estimulación de colonia. Los cultivos de control positivos recibieron medios acondicionados (células humanas estimuladas con PHA: Terry Fox Lab. H2400). Los cultivos se incuban a 37°C, 5% de C02 en aire humidificado. Las colonias hematopoyéticas que se definen como más de 50 células se cuentan el día de la respuesta pico (días 10-11 ) usando un microscopio de fase invertida Nikon con una combinación de objetivo de 40x. Los grupos de células que contienen menos de 50 células son llamados racimos. Alternativamente, se pueden identificar colonias dispersando las colonias sobre un portaobjetos y tiñiéndolas, o pueden ser recogidas, resuspendidas y colocadas sobre portaobjetos de citospína para la tinción.

Pruebas de factor de crecimiento hemopoyético en sangre de cordón humano Las células de médula ósea se usan tradicionalmente para el análisis in vitro de la actividad del factor de estimulación de colonia hematopoyético (CSF). Sin embargo, la médula ósea humana no siempre está disponible y existe una considerable variabilidad entre donadores. La sangre del cordón umbilical es comparable con la médula ósea como una fuente de células madre y progenitoras hematopoyéticas. (Broxmeyer y otros, PNAS EUA 89:4109-113, 1992; Mayaní y otros, Blood 81 :3252-3258, 1993). En contraste con ia médula ósea, la sangre de cordón está disponible más fácilmente en una base regular. También existe un potencial para reducir la variabilidad en las pruebas mediante la recolección de células obtenidas frescas de varios donadores, o para crear un banco de células criopreservadas para este propósito.

Métodos Se aislan células mononucleares (MNC) de sangre de cordón a las 24 horas de recolección, usando un gradiente de densidad normal (1.077 g/mL Histopaque). Las MNC de la sangre de cordón han sido enriquecidas adicionalmente para células madre y progenitoras mediante varios procedimientos, incluyendo selección inmunomagnética para células CD 4-, CD34+; visualización para fracción SBA-, CD34+ usando matraces recubiertos de Applied Immune Science (Santa Clara, CA); y selección de CD34+ usando una columna de avidina CellPro (Bothell, WA). Se usan fracciones enriquecidas de células CD34+ aisladas frescamente o criopreservadas para la prueba. Se preparan cultivos por duplicado para cada dilución en serie de muestra (escala de concentración de 1 pM a 1204 pM) con 1x104 de células en 1ml de medio que contiene 0.9% de metilcelulosa sin factores de crecimiento adicionales (Methocult H4230 de Stem Cell Technologies, Vancouver, BC). En algunos experimentos, se usó eritropoyetina (FLT3) que contiene Methocult H4330 en lugar de Methocult H4230, o se añadió factor de célula madre (SCF), 50 ng/mL (Biosource International, Camarillo, CA). Después de cultivar durante 7-9 días, se cuentan las colonias que contienen >30 células.

Prueba de proliferación de célula MUTZ-2 Una línea de células tal como MUTZ-2, la cual es una línea de células de leucemia mieloide humana (Germán Collection of Microorganisms and Cell Cultures, DSM ACC 271), se puede usar para determinar la actividad proliferativa de células de agonistas del receptor flt3. Los cultivos de MUTZ-2 se mantienen con ligando flt3 nativo recombinante (20-100 ng/mL) en el medio de crecimiento. Dieciocho horas antes del establecimiento de la prueba, se lavan las células de MUTZ-2 en medio de IMDM (Gibco) tres veces y se resuspenden en medio de IMDM solas a una concentración de 0.5-0.7 x 10E6 células/mL y se incuban a 37°C y 5% de C?2 para privar de nutrientes a las células del ligando flt3. El día de la prueba, los parámetros y los agonistas del receptor flt3 se diluyen dos veces por encima de la concentración final deseada en placas de 96 cavidades tratadas con cultivo de tejido estéril. Los agonistas del receptor flt3 y los parámetros se prueban por triplicado. Se colocan 50µl de medio de prueba en todas las cavidades excepto en la hilera A. Se añaden 75µl de los agosnistas del receptor flt3 o parámetros a la hilera A, se toman 25µl de esa hilera y se llevan a cabo diluciones en serie (1 :3) en el resto de la placa (hileras B a G). La hilera H permanece como un control únicamente con medio. Las células de MUTZ-2 privadas de nutrientes se lavan dos veces en medio de IMDM y se resuspenden en 50 µl de medio de prueba. Se añaden 50µl de células a cada cavidad dando como resultado una concentración final de 0.25 x 10E6 células/mL. Las placas de prueba que contienen células son incubadas a 37°C y 5% de C?2 durante 44 horas. Cada cavidad es después pulsada con 1µCi/cavidad de timidina titulada en un volumen de 20µl durante cuatro horas. Las placas son después cosechadas y contadas.

Líneas de células transfectadas: Líneas de células, tales como BHK o la línea de células pro B Baf/3 de murino, se pueden transfectar con un receptor de factor de estimulación de colonia tal como el receptor flt3 humano que no tiene la línea de células. Estas líneas de células transfectadas se pueden usar para determinar la actividad dei ligando cuyo receptor ha sido transfectado.

EJEMPLO 1 Aislamiento de ligando flt3 que codifica ADNc Se amplificaron tres clonas de ligando flt3 a partir de ARN poliA-i- de medula ósea humana (Clontech) usando iniciadoras de PCR NCOFLT, HIND160 y HIND165 (de acuerdo con las condiciones sugeridas por ei fabricante). Estos productos de PCR amplificados fueron purificados con gel y se clonaron en el vector pMON5723 de expresión de BHK generando pMON30237 (NCOFLT + HIND160), pMON30238 (NCOFLT + HIND165), y una clona de eliminación pMON30239 (NCOFLNT + HIND165). La eliminación en pMON30239 es de los residuos de aminoácidos 89 a 106 (la numeración de los residuos se basa en la secuencia de ligando flt3 nativo como se muestra en la figuras 5a y 5b).

EJEMPLO 2 Se construyó un ligando flt3 de secuencia reordenada usando varios métodos y tipos de enlazador. El primer conjunto de constructos que contiene el péptidos enlazador (SerGlyGlyAsnGly)X (en donde X=1 , 2 ó 3) con los puntos de ruptura 39/40, 65/66 y 89/90 se hicieron usando un procedimiento de PCR de dos pasos descrito por Mullins y otros, en el cual la mitad frontal y la mitad posterior de cada molécula de secuencia final reordenada se hace por separado en el primer paso de PCR, después los productos apareados del primer paso de reacción se combinan en un segundo paso de PCR y se extienden en ausencia en iniciadores exógenos. Por ejemplo, para hacer las tres moléculas precursoras dei punto de rompimiento 89/90 con los enlazadores de aminoácidos SerGIyGIyAsnGly SEQ ID N0 ß, SerGIyGIyAsnGlySerGiyAsnGly SEQ ID NO 47 y SerGIyGIyAsnGlySerGIyAsnGlySerGiyGIyAsnGly SEQ ID NO48 (pMON32326, pMON32327 y pMON32328, respectivamente), se generaron seis productos de PCR iniciales. Se usaron los siguientes pares de iniciadores en la reacción de PCR de primer paso: a) 89For/L5B; b) 89For/L10B; c) 89For/L15B; d) 89Rev/L5A; e) 89Rev/L10A y f) 89Rev/L15A. El enfoque idéntico se usó para hacer precursores pM?N32321 (punto de rompimiento 39/40, pares de iniciadores 39For/L10B y 39Rev/L10a) y pM?N32325 (punto de rompimiento 65/66, pares de iniciadores 65For/L5B y 65Rev/L5A). Excepto según se mencione abajo, todas las reacciones de PCR subsecuentes utilizaron los componentes del equipo PCR Optimizer (Invitrogen) y condiciones de amplificación de acuerdo con el protocolo sugerido por el fabricante. Las reacciones se establecieron como sigue: 50 pmol de cada iniciador, 10 ui de regulador de pH B 5X [300 M de Tris-HCl (pH 8.5), 10 mM de MgCI2, 75 mM (NH4)2S?4], 5 U Taq polimerasa y 100 ng de ADN de molde desnaturalizado por calor (en este ejemplo pM?N30238) se combinaron, y se llevaron a 45 ul de volumen de final con dH2?. Las reacciones fueron preincubadas durante 1-5 minutos a 80°C, después se añadió 5 ul de dNTP a 10 mM a cada reacción y se desnaturalizaron por calor durante 2 minutos a 94°C antes de la amplificación en un ciclizador térmico de ADN Perkin Elmer modelo 480. Siete ciclos de amplificación de ADN se llevaron a cabo bajo las siguientes condiciones: desnaturalización por calor durante un minuto a 94°C, dos minutos de fijación a 65°C, seguidos por una extensión de 3 minutos a 72°C. Se llevaron a cabo veintitrés ciclos adicionales que consistían de un minuto de desnaturalización por calor a 94°C seguidos por cuatro minutos de fijación/extensión a 72°C, seguidos por un ciclo de extensión final de siete minutos a 72°C. Con la excepción de pM?N32328, los productos de amplificación por PCR se probaron en 1.2% de gel de agarosa TAE, y las bandas de tamaño adecuado (el principal producto de amplificación) se extirparon y purificaron usando Geneclean II (Bio 101). Las muestras se resuspendieron en 10 ul de dH2?. Los productos de amplificación para pM?N32328 se purificaron directamente usando un equipo Wizard PCR Clean UP (Promega), y el ADN eluyó en 50 ul de dH2?.

Se modificó el método para construir los precursores de pMON32322 (punto de rompimiento 39/40, pares de iniciadores 39For/L5B y 39Rev/L5A) incrementando la cantidad del molde a 1 ug, y cambiando las condiciones de amplificación por PCR como sigue: seis ciclos de 94°C, un minuto, 65°C durante dos minutos y 72°C durante 21 minutos, seguidos por 15 ciclos de 94°C durante un minuto, 70°C durante dos minutos y 72°C durante dos minutos, seguidos por un solo ciclo extensión a 72°C durante siete minutos. El segundo paso de PCR utilizó los precursores purificados con gel del primer paso de PCR con una combinación de iniciador/molde como sigue: 5 ul cada uno de cada molécula precursora (es decir, para pMON32328 los productos de PCR de los pares de iniciadores 89For/L5B y 89Rev/L5A), 10 ul de regulador de pH %X B, 5 U de polimerasa Taq y 24 ul de dH20. Las reacciones se calentaron durante cinco minutos a 80°C, se añadieron 5 ul de dNTP a 10 mM y las reacciones se desnaturalizaron por calor a 94°C durante dos minutos. Las condiciones de amplificación de ADN fueron con sigue: 15 ciclos de 94°C durante un minuto, 69°C durante dos minutos, seguidos después por una extensión de tres minutos a 72°C. Para permitir la extensión completa, el último ciclo se siguió mediante un solo paso de extensión a 72°C durante siete minutos. El tiempo de incubación a 80°C se redujo a dos minutos y el número de ciclos se incrementó a diez ciclos para pMON32325 (productos de PCR 65For/L5B y 65Rev/L5A). Los productos de reacción por PCR del tamaño adecuado se purificaron con gel en un gel de agarosa TAE al 1.2% usando Geneclean II. Para pMON32322 (39For/L5B y 39Rev/L5A) la temperatura de fijación se redujo a 68°C y el tiempo de extensión se redujo a dos minutos. Además, el producto de PCR se purificó usando un equipo Wizard PCR Clean UP (Promega) de acuerdo con el protocolo sugerido por el proveedor. El segundo paso de PCR se modificó para pMON32326 (productos de PCR de 89For/L15B y 89Rev/L15A) como sigue. Se establecieron tres conjuntos de reacciones de PCR idénticamente a las de arriba, excepto para el tipo de regulador de pH de muestra (ya sea regulador de pH 5X B, D o J - equipo PCR Optimizer). La composición de los reguladores de pH D y J difiere de la del regulador de pH B sólo por pH o [MgCb]. El [MgCy para el regulador de pH D es 3.5 mM, mientras que el pH del regulador de pH J es 9.5. El protocolo se modificó incrementando el número de ciclos de PCR, y alícuotas de 20 y 15 ul se tomaron al final de los ciclos 10, 15 y 20. Cinco uls de de cada punto de tiempo de alícuota fueron analizados para verificar la presencia de material amplificado en un gel de agarosa TBE al 1.2%. El resto de las mezclas de reacción por PCR con regulador de pH B, D y J se agruparon y purificaron subsecuentemente usando el protocolo del equipo Wizard PCR Clean Up. El ADN se eluyó en 50 ul dH20. Las muestras purificadas de la reacción por PCR de segundo paso se digirieron con Ncol/Hindlll usando una de dos condiciones de digestión estandarizadas. Para las muestras purificadas con Geneclean II, se digirieron 10 ul de ADN en una reacción de 20 ul con 7.5 U cada una de Ncool/Hindlll durante dos horas a 37°C, y se purificaron con gel en un gel de agarosa TAE al 1.1% de nuevo con Geneclean II. Las muestras listas para ligación se resuspendieron en 10 ul de dH20. Para pMON32322, se digirió una muestra de 20 ul en un volumen de reacción de 50 ul con 20U cada uno de Ncol y Hiindill durante 3 horas a 37°C. Se añadieron, mezclaron y almacenaron a -20°C durante la noche un volumen de 0.1 de NaOAc a 3M (pH 5.5) y un volumen de 2.5 de EtOH. El ADN se recuperó peletizando durante 20 minutos a 13,000 rpm a 4°C ep un micrófugo Sigma MK 202. La peña de ADN se enjuagó con EtOH al 70% helado, se liofilizó y se resuspendió en 10 ul de dH20.

EJEMPLO 3 Se usó un enfoque alternativo para construir pMON32320 (punto de rompimiento 39/40, eniazador de quince aminoácidos), pMON32323 (punto de rompimiento 65/66, enlazador de quince AA) y pMON32324 (punto de rompimiento 65%66, enlazador de diez aminoácidos). Se diseñaron iniciadores nuevos (L15C, L15D, L15E) para incoforar sitio de restricción BamHl en el iniciador que estaba dentro de marco para permitir la clonación en el sitio BamHl y mantener el marco de lectura adecuado. Las condiciones de reacción de PCR para el primer paso se llevaron a cabo en forma idéntica a la descrita para pMON32322, excepto que se usó el siguiente conjunto de pares de iniciadores: 65For/L15D y 65Rev/L15E (pMON32324); 39For/L15D y 39Rev/L15C (pmon32320) y 65For/L15D y 65Rev/L15C (pMon32323). Los productos de reacción de PCR se purificaron usando un equipo Wizard PCR Clean Up como el descrito, y eluyeron en 50 ul de dH20. Las muestras fueron digeridas con Ncol/BamHI (39For/L15D y 65For/L15D) o BamHI/Hindill (39Rev/L15C, 65Rev/L15C y 65Rev/L15E). Las digestiones de restricción se llevaron a cabo como sigue: 10 ul de productos de reacción de PCR purificados, 3 ul de regulador de pH de restricción universal 10X, 15 U de Ncol o Hindlll, 15 U de BamHl, en un volumen de reacción final de 30 ul. Las reacciones se incubaron durante 90 minutos a 37°C y los productos de PCR se purificaron con gel en un gel de agarosa TAE al 1.1% usando Geneclean II. El ADN listo para ligación se resuspendió en 10 ul de dH2o. Los insertos se ligaron a pMON3977 digerido con Ncol/Hindlll (vector de expresión de mamífero BHK) que había sido tratado con fosfatasa alcalina de camarón (SAP) ya sea en una reacción de ligación de tres vías (pMON32320, PMON32323 o PMON32324) o de dos vías (pMON32321 , PpMON32322, pMON2325, pMON32327 y pMON32328) como sigue: se añadieron 2.5 ul de inserto (2 ul de cada amplicón de par de iniciadores para PMON32320, pMON32323 y pMON32324) a 50 ng de vector en una reacción de diez ul usando condiciones de ligación normales. Dos ul de cada reacción se transformaron con 100 ul de células de DH5a químicamente competentes (Gibco/BRL) siguiendo el protocolo sugerido por el fabricante. Se plaquearon alícuotas de 25 ul y 200 ul sobre placas LB que contenían 50 ug/ml de ampicilina y se incubaron durante la noche. Las colonias aisladas se recogieron y el ADN se preparó a partir de cultivos nocturnos de 50 mL usando equipos de midipreparación de ADN Qiagen. El ADN se cuantificó mediante absorbencia a A260/A280, y se verificó para un tamaño de inserto correcto mediante electroforesis con gel de agarosa después de la digestión de un molde de 1 ug con endonucleasas de restricción Ncol/Hindlll. Se determinó las secuencia de las muestras que contenían insertos del tamaño predicho en ambas orientaciones usando iniciadores específicos de vector y un determinador de secuencia de ADN fluorescente automatizado modelo 373A (Perking Elmer ABI). Las reacciones de determinación de secuencia se hicieron en volúmenes de reacción de 20 ul usando un ciclizador térmico de ADN Perkin Elmer modelo 480 como sigue: un ug de molde, 3.2 pmol de iniciador, 1 ul de DMSO y 9.5 ul de premezcla dideoxi terminador Taq (Perkin Elmer ABI) se combinaron y se sometieron a 25 ciclos de amplificación de determinación de secuencia como sigue: 30 segundos a 94°C, 15 segundos de fijación a 50°C seguidos por un ciclo de extensión de cuatro minutos a 60°C. Las muestras se purificaron usando columnas centrífugas Centri-sep (Princeton Separations) siguiendo el protocolo sugerido por el fabricante, se liofilizaron y se sometieron para el análisis de secuencia. Las muestras que contenían las secuencias de aminoácidos predichas se seleccionaron para análisis y se les asignaron números pMON.

EJEMPLO 4 Un enfoque similar usado para contruir pMON32320, pMON32323 y pMON32324 se utilizó para introducir el segundo tipo de enlazador (SerGlyGlySerGly)X en donde x = 2 ó 3, en dos agonistas del receptor flt3 de secuencia reordenada que contenían el punto de rompimiento 39/40 (pMON32348 y 32350). Los pares de iniciadores fueron como sigue: para PMON32348 las combinaciones de 339For2 339Rev3 y 339Rev2/339-10For3 y para pMON32350 las combinaciones de 339For2/339Rev3 y 339Rev2/339-15For3 se usaron para crear tres productos de amplificación por PCR. Cada amplificación por PCR se estableció como sigue: a 100 ng de pMON32320 desnaturalizado por calor, se añadieron 50 pmol de cada par de iniciadores, 10 ul de regulador de pH 5X B, 5 U de polimerasa Taq y dH2? hasta un volumen final de 45 ul. Las reacciones se preincubaron como se describió arriba. Se llevaron a cabo quince ciclos de amplificación bajo las siguientes condiciones: desnaturalización por calor a 94°C, un minuto, seguida por un paso de fijación de dos minutos a 70°C y una extensión de tres minutos a 72°C. Después del último ciclo, se usó un solo paso de extensión a 72°C durante 7 minutos. Los productos de amplificación de PCR de pares de iniciadores 339For2 339Rev3, 339Rev2/339-10For3 y 339Rev2/339-15For2 se purificaron usando un equipo Wizard PCR Clean Up (Promega) y eluyeron en 50 ul de dH20. Las digestiones con Ncol/BamHI para el par de iniciadores 339For2/339Rev3 fueron como sigue: 8 ul de ADN de molde se mezclaron 2 ul de regulador de pH de restricción universal y 10 u cada uno de Ncol y BamHl en un volumen de reacción de 20 ul, y se incubaron durante 90 minutos a 37°C. Los productos de digestión se purificaron usando el protocolo de purificación directa Geneclean II y ADN listo para ligación resuspendido en 10 ul de dH20. Las digestiones de restricción y la purificación subsecuente para los productos de amplificación 339Rev2/339-10For3 y 339Rev2/339-15For2 se llevaron a cabo idénticamente a como se describió para el amplicón 339For2/339Rev3, excepto que 10 U de Hindlll se sustituyeron por Ncol. Ligaciones normales se hicieron añadiendo a 50 ng de Ncol/HindIII/SAP tratado, gei purificado pMON3977, 0.5 ul de amplicón 339For2/Rev3, 1 ul de amplicones 339Rev2/339-10For3 (pMON32348) o 339Rev2/339-15For3 (pMON32350), 5U de ligasa de ADN T4 y 1 ul de regulador de pH de ligasa 10 X en un volumen de reacción de 10 ul durante 60 minutos a temperatura ambiente. Los pasos subsecuentes que llevaban a una confirmación de secuencia de ADN final se llevaron a cabo como se describió arriba.

EJEMPLO 5 Un tercer tipo de enlazador, con un motivo de repetición (GlyGlyGlySEr) X variable, se incoforó en otro conjunto de agonistas de receptor flt3 de secuencia reordenada de moldes modularmente construidos. Estas longitudes de enlazador fueron: enlazador 6 AA (GlyGlyGlySerGIyGly SEQ ID NO:51 ), enlazador 7 AA (GlyGlyGlySerGIyGlyGly SEQ ID NO:52), enlazador 10 AA (GlyGlyGlySerGIyGlyGlySerGIyGly SEQ ID NO:53), enlazador 10 AA (GlyGlyGlySerGIyGlyGlySerGIyGlyGlySerGIy SEQ ID NO:54), enlazador 15 AA (GlyGlyGlySerGIyGlyGlySerGIyGlyGly SEQ ID NO:55); y enlazador 21 AA (GlyGlyGlySerGIyGlyGlySerGIyGlyGlySerSIyGlyGlySerGIyGlyGlySerGIy SEQ ID NO: 56) residuos de aminoácidos. Estos moldes modulares, cada uno comprendiendo un dímero de ligando hflt3 separado por un enlazador que contenía BamHl de longitud única, se construyeron como sigue. Seis moldes de PLASMIDO intermedios, FL3N, FL7N, FL11N, FL3C, FL4C y FL10C se construyeron mediante PCR usando Iniciadores apareados y pMON30238 como molde usando condiciones cíclicas similares a las empleadas para pMON32322. Por reacción, se añadió 50 pmol de cada iniciador a 100 ng de molde desnaturalizado por calor y las reacciones se ensamblaron como describió para pMON32322. Las condiciones de ciclo fueron como sigue: siete ciclos de 94°C, un minuto; dos minutos a 65°C y 2.5 minutos a 72°C; seguidos por diez ciclos de un minuto a 94°C, dos minutos a 70°C y 2.5 minutos a 72°C. Una sola extensión de 7 minutos a 72°C completó la reacción de ciclizado. L,os pares de iniciadores usados para construir cada intermediario fueron: ext-N/FLN3 (FL3N); ext-N/FLN7 (FL7N); ext-N/FLN11 (FL11 N); ext-C/FLC3 (FL3C); ext-C/FLC4 (FL4C) y ext-C/FLC10). Los productos de amplificación por PCR se purificaron con equipos Wizard PCR Clean Up (Promega) y eluyeron en 50 ul de dH20. El ADN purificado para el primer subconjunto FL3N, FL7N, y FL11 N, se digirió con Ncol/BamHI, se purificó con gel como se describió arriba y se ligó a ADN de vector pSE420 tratado con Ncol/BamHI/Sap (Invitrogen). Los moldes intermediarios del segundo subconjunto, FL3C, FL4C, y FL10C, se construyeron en forma idéntica excepto que se utilizó Hindlll en lugar de Ncol. Los pasos subsecuentes que llevaban a la confirmación de secuencia de ADN final se llevaron a cabo como se describió arriba.

EJEMPLO 6 Para hacer los siguientes seis moldes, los dos subconjuntos de intermediarios en pSE420 se digirieron con Ncol/BamHI (FL3N, FL7N, FL11 N-subconjunto 1 ) o BamHI/HindIII (FL3C, FL4C, FL10C-subconjunto 2) y se purificaron con gel usando Geneclean II como se describió previamente. Un amplicón intermediario para cada subconjunto se ligó a pMON3977 tratado con Ncol/Hindlll/SAP por reacción y se transformó en células DH5a como se describió previamente usando las siguientes combinaciones para generar longitudes de enlazador específicas: enlazadores seis AA (FL3N y FL3C), enlazador siete AA (FL3N y FL4C), enlazador diez AA (FL6N y FL3C), enlazador trece AA (FL3N y FL1 OC), enlazador quince AA (FL11 N y FL4C), y enlazador 21 AA (FL11 N y FL10C). Se preparó ADN 50 mL en cultivos nocturnos a partir de colonias individuales de cada una de las seis combinaciones descritas arriba, se analizaron para el tamaño inserto correcto mediante de análisis de restricción con Ncol/Hidlll y se usaron como molde. Los pares de iniciadores 39For/39Rev (punto de rompimiento 39/40); 65For/65Rev (punto de rompimiento 65/66) y 89For/89Rev) (punto de rompimiento 89/90) se usaron para amplificar por PCR cada molde como se describió para pMON32322, excepto que se usaron 75 pmoles de cada iniciador. Las condiciones de amplificación se modificaron como sigue: seis ciclos de 94°C durante un minuto, 2 minutos a 70°C, 2.5 minutos a 72°C; seguidos por nueve ciclos de 94°C durante un minuto y tres minutos a 72'C. Después del último ciclo, un extensión final de seis minutos a 72°C permitió bastante tiempo para la extensión competa de los productos. Las muestras se purificaron usando un equipo Wizar PCR Clean Up como el descrito, y se digirieron doblemente con Ncol/Hindlll. Estos productos de amplificación se purificaron de nuevo usando un equipo Wizard PCR Clean Up. Además, todas las seis moléculas de longitud de enlazador diferente para el punto de rompimiento 39/40 se clonaron en pMON3977 tratado con Ncol/Hindlll/SAP como proteínas Individuales (pMON32365, pMON32366, pMON32367, pMON32368, pMON32369 y 32370). Los pasos subsecuentes que llevaban a la confirmación de secuencia de ADN final se llevaron a cabo como se describió arriba.

EJEMPLO 7 Se construyeron ligandos Flt3 de secuencia reordenada adicionales usando los intermediarios de molde de dímero descritos previamente. Para los ligandos Flt3 de secuencia reordenada que tenían el enlazador de quince aminoácidos (GlyGlyGlySer)3GlyGlyG!y SEQ ID NO:55, se usaron los intermediarios de dímero Flt4C.seq y FU11 N. seq como el molde en la reacción de PCR. Cinco puntos de ruptura nuevos que correspondían a los residuos de aminoácidos del ligando Flt3 28/29, 34/35, 62/63, 94/95 y 98/99, se construyeron usando un enfoque a base de PCR usando un equipo PCR Optimizer (Invitrogen) y los siguientes pares de iniciadores: FL29For/FI29Rev, FI35For/FL35Rev, FL63For/FL63Rev, FL95For/FL95Rev, FL99For/FL99Rev. Las condiciones de amplificación fueron como sigue: siete ciclos de 94°C durante 1', 62°C durante 2' y 2.5' a 70°C; doce ciclos de 94°C durante 1 ', 68°C durante 2' y 70°C durante 2.5'; seguidos por un ciclo final de 7' a 72°C. Los productos de PCR que correspondían al tamaño de inserto predicho se digiperon hasta la conclusión con Ncol y Hindlll, y se purificaron con gel como se describió previamente usando Gene Clean II (Bio 101) siguiendo el protocolo sugerido por el fabricante. Las muestras se resuspendieron en un volumen final de 10 ul con dH20. Los insertos se clonaron como genes individuales en el vector de expresión de mamífero pMON3977 (tratado con Ncoi/Hindlll/SAP) y se designaron pMON35712, pMON35713, pMON35714, pMON35715, pMON35716, pMON35717, pMON35718 respectivamente. Técnicas adicionales para la construcción de los genes variantes, la expresión de proteínas recombinantes, la purificación de proteínas, la caracterización de proteínas y la determinación de la actividad biológica pueden encontrarse en WO 94/12639, WO 94/12638, WO 95/20976, WO 95/21194, WO 95/29977, WO 95/21254 y WO 96/23888, las cuales se ¡ncoforan en la presente a manera de referencia ep su totalidad. Todas las referencias, patentes o solicitudes citadas en la presente se incorporan a manera de referencia en su totalidad como se estuvieran escritas en la presente. Varios otros ejemplos serán aparentes para la persona experta en la técnica después de leer la presente descripción, sin alejarse del espíritu y alcance de la invención Se intenta que todos esos demás ejemplos puedan ser incluirlos dentro del alcance de las reivindicaciones anexas LISTADO DE SECUENCIAS (1) INFORMACIÓN GENERAL (i) SOLICITANTE G D Searle Corporate Patent Department (n) TITULO DE LA INVENCIÓN Agonistas novedosos de receptor flt3 (ni) NUMERO DE SECUENCIAS 151 (?v) DIRECCIÓN PARA CORRESPONDENCIA (A) DESTINATARIO G D Searle Coforate Patent Department (B) CALLE P O Box 55110 (C) CIUDAD Chicago (D) ESTADO IL (E) PAÍS E U A (F) CÓDIGO POSTAL 60680 (v) FORMA LEÍBLE POR COMPUTADORA (A) TIPO DE MEDIO Diskette (B) COMPUTADORA Compatible con IBM (C) SISTEMA OPERATIVO DOS (D) SOFTWARE FastSEQ for Windows Versión 2 0 (vi) DATOS DE LA SOLICITUD ACTUAL (A) NUMERO DE SOLICITUD (B) FECHA DE PRESENTACIÓN 21-OCT-1997 (C) CLASIFICACIÓN (vil) DATOS DE LA SOLICITUD ANTERIOR (A) NUMERO DE SOLICITUD (B) FECHA DE PRESENTACIÓN 25-OCT-1996 INFORMACIÓN DEL APODERADO/AGENTE (A) NOMBRE Bennett, Dennis A (B) NUMERO DE REGISTRO 34,547 (C) NUMERO DE REFERENCIA CASO C-2993/2 (IX) INFORMACIÓN POR TELECOMUNICACIONES (A) TELEFONO 314-737-6986 (B) TELEFAX 31 -737-6972 (C) TELEX (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 1 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 135 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 1 Ala Thr Gln Aßp Cys ser Phe Gln His Ser Pro lie Ser Ser Asp Phe 1 5 10 15 Ala Val Lys lie Arg Glu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu Gln Asp Tyr Pro 25 30 Val Thr Val Ala ser A--n Leu Gln Asp Glu Glu Leu Cys Gly Ala Leu 40 45 Trp Arg Leu al Leu Ala Gln Arg Trp MeC Glu Arg Leu Lys Thr Val 50 55 60 Ala Gly ser Lys Met Gln Gly Leu Leu Glu Arg Val Asn Thr Glu lie 65 70 75 80 His Phß val Thr Lys Cys Ala Phe Gln Pro Pro Pro Ser Cys Leu Arg 85 90 95 Phe val Gln Thr Asn lie Ser Arg Leu Leu Gln Glu Thr Ser Glu Gln 100 IOS 110 Leu al Ala Leu Lys Pro Trp lie Thr Arg Gln Asn Phe Ser Arg Cys 115 120 125 Leu Glu Leu G--a ys Gln Pro (2) INFORMACIÓN PAFÍA SEQ ID NO 2 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 140 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 2 Ala Thr Gln Asp Cys Ser Phe Gln H-.S Ser Pro He Ser Ser Asp Phe 1 5 10 15 Ala Val Lys He Arg Glu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu Gln Asp Tyr Pro 25 30 Val Thr val Ala Ser Asn Leu Gln Asp Glu Glu Leu Cys Gly Gly Leu 40 45 Trp Arg Leu Val Leu Ala Glp Arg Trp Met Glu Arg Leu Lys Thr Val 50 55 60 Ala sly Ser Lys Met Gltl Gly Leu Leu Glu Arg Val Asn Thr Glu He 65 70 75 80 His Phe Val Thr Lys cys Ala Phe Gln Pro Pro Pro Ser Cys Leu Arg 85 90 95 Phe Val G n Thr Asn He Ser Arg Leu Leu Gln Glu Thr Ser Glu Gln 100 105 110 Leu Val Ala Leu Lys Pro Trp He Thr Arg Gln Asn Phe Ser Arg Cys 115 120 125 Leu Glu Leu Gln Cys Gln Pro Asp Ser Ser Thr Leu 130 135 140 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 3 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 122 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (n) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (Xl) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 3 Ala Thr G n phe 1 Ala Val Lys ro Val Thr Val Leu Trp Arg Leu Val 50 Ala Gly Ser Ha 65 80 His Phe Val Val Ala Leu Lys Glu Leu Gln Cys 115 (2) INFORMACIÓN PAFÍA SEQ ID NO 4 (i) CAF?ACTERISTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 135 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (u) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (Xl) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 4 sly Thr aln Asp Cys Ser Phe sln His Ser Pro He Ser Ser Asp Phe 1 5 10 15 Ala Val Lys He Arg Glu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu sln Asp Tyr Pro 25 30 Val Thr Val Ala Ser Asn Leu sln Asp Glu Glu Leu Cys Gly sly Leu 40 45 Trp Arg Leu Val Leu Ala Gln Arg Trp Met slu Arg Leu Lys Thr Val 50 55 60 Ala Gly Ser Lys Met Gln Gly Leu Leu Glu Arg Val Asn Thr Glu He 65 70 75 80 His Phe Val Thr Lys Cys Ala Phe Gln Pro Pro Pro Ser Cys Leu Arg 85 90 95 Phe Val Gln T r Asn He Ser Arg Leu Leu Gln Glu Thr Ser Glu sln 100 IOS 110 Leu Val Ala Leu Lys Pro Trp He Thr Arg Gln Asn Phe Ser Arg Cye 115 120 125 Leu Glu Leu Gln Cys Gln Pro 130 135 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 5 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 140 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (x?) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 5 sly Thr Gln Asp Cys Ser Phe Gln H13 Ser Pro Hß Ser Ser Asp Phe 1 5 10 15 Ala Val Lys He Arg Glu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu Gln Asp Tyr Pro 25 30 Val T r Val Ala Ser Asn Leu Gln Asp Glu slu Leu Cys oly aly Leu 40 45 Trp Arg Leu Val Leu Ala Gln Arg Trp Met alu Arg Leu Lys Thr Val 50 55 60 Ala Gly Ser Lys Met Gln Gly Leu Leu Glu Arg Val Asn Thr Glu He 65 70 75 80 His Phß Val Thr Lys Cys Ala Phe Gln Pro Pro Pro Ser Cys Leu Arg 85 90 95 Phe Val Gln Thr Asn He Ser Arg Leu Leu Gln Glu Thr Ser Glu Gln 100 105 110 Leu Val Ala Leu Lys Pro Trp He Thr Arg Gln Asn Phe Ser Arg Cys 115 120 125 Leu Glu Leu Gln cys Gln Pro Asp Ser Ser Thr Leu 130 135 140 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 6 (l) CAI ACTERISTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 135 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 6 Ala Thr Gln Asp Cys Ser Phe Gln His Ser Pro He Ser Ser Asp Phe 5 10 15 Ala Val Lys He Arg Glu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu Gln Asp Tyr Pro 25 30 Val Thr val Ala ser Asn Leu Gln Asp Glu slu Leu Cys sly Gly Leu 40 45 Trp Arg Leu Val Leu Ala Gln Arg Trp Met Glu Arg Leu Lys Thr Val 50 55 60 Ala sly Ser Lys Met Gln Gly Leu Leu slu Arg Val Asn Thr Glu He 65 70 75 80 His Phe Val Thr Lys Cys Ala phe aln Pro Pro Pro Ser Cys Leu Arg 85 90 95 Phe Val Gln Thr Asn He Ser Arg Leu Leu Gln Glu Thr Ser Olu Gln 100 105 110 Leu Val Ala Leu Lys pro Trp He Thr Arg Gln Asn Phe Ser Arg Cys 115 120 125 Leu slu Leu Gln Cys Gln pro 130 135 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 7 (I) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 140 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 7 Ala Thr Gln Asp Cys Ser Phe Gln His Ser Pro He Ser Ser Asp Phe 1 5 10 15 Ala Val Lys He Arg Clu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu Cln Asp Tyr Pro 25 30 Val Thr Val Ala Ser Asn Leu sln Asp Glu Glu Leu Cye Gly Gly Leu 40 45 Trp Arg Leu Val Leu Ala Gln Arg Trp Met Clu Arg Leu Lys Thr Val 50 55 60 Ala Gly Ser Lys Met Gln Gly Leu Leu Glu Arg Val Asn Thr alu He 65 70 75 80 His Phe Val Thr Lys Cys Ala Phe Gln Pro Pro Pro Ser Cys Leu Arg 85 90 95 Phe Val Gln Thr Asn He Ser Arg Leu Leu Gln Glu Thr ser Glu Gln 100 105 110 Leu Val Ala Leu Lys Pro T p He Thr Arg Gln Asn Phe Ser Arg Cys 115 120 125 Leu Glu Leu Gln Cys Gln Pro Asp Ser Ser Thr Leu 130 135 140 (2) INFORMACIÓN PAFiA SEQ ID NO 8 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 155 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 8 Ala Asp Glu Glu Leu Cys Gly Gly Leu Trp Arg Leu Val Leu Ala Gln 1 5 10 15 Arg Trp Met Glu Arg Leu Lys Thr Val Ala Gly Ser Lys Met Gln Gly 25 30 Leu Leu Glu Arg Val Asn Thr Glu He Hrs Phe Val Thr Lys Cys Ala 40 45 Phe Gln Pro Pro Pro Ser Cye Leu Arg Phe Val Gln Thr Asn He Ser 50 55 60 Arg Leu Leu Oln Glu Thr Ser Glu Gln Leu Val Ala Leu is Pro Trp 65 70 75 80 He Thr Arg sln Asn Phe Ser Arg Cys Leu Clu Leu Cln Cys aln Pro 85 90 95 Asp Ser Ser Thr Leu Ser aly aly Asn Gly Ser Gly Gly Asn Gly Ser 100 105 110 Gly Gly Asn Gly Thr Gln Asp Cys Ser Phe sln His Ser Pro He Ser 115 120 125 Ser Asp Phe Ala Val Lys He Arg alu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu aln 130 135 140 Asp Tyr Pro Val Thr Val Ala Ser Asn Leu aln 145 150 155 (2) INFORMACIÓN PAFiA SEQ ID NO.9: (I) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 150 aminoácidos (B) TIPO, aminoácidos (C) TIPO DE CADENA, sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA. Ninguno 5 (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA. SEQ ID NO.9: Ala Asp slu Glu Leu Cys Gly sly Leu Trp Arg Leu Val Leu Ala sln 1 5 10 15 Arg Trp Met slu Arg Leu Lys Thr Val Ala Gly ser Lys Met Gln sly 25 30 Leu Leu slu Arg Val Asn Thr alu He Hi- Phe Val T r Lys Cys Ala 40 45 phe Gln Pro Pro Pro Ser Cys Leu Arg Phe Val sln Thr Asn He Ser 50 55 60 Arg Leu Leu sln alu Thr Ser Glu Gln Leu Val Ala Leu Lys Pro Trp 65 70 75 80 lie Thr Arg Gln Asn Phe Ser Arg Cys Leu Glu Leu Gln Cys Gln Pro 85 90 95 Asp Ser Ser Thr Leu Ser sly Gly Asn Gly Ser Gly Gly Asn Gly Thr 0 100 105 110 Gln Asp Cys Ser Phe Gln Has Ser Pro Hß Ser Ser Asp Phe Ala Val 115 120 125 Lys He Arg Clu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu Cln Asp Tyr Pro Val Thr 130 135 140 Val Ala Ser Asn Leu Gln '145 150 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO.10: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 145 aminoácidos (B) TIPO, aminoácidos c (C) TIPO DE CADENA- sencilla ' (D) TOPOLOGÍA- Lineal (II) TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:10: Ala Asp Glu Glu Leu Cys Gly Gly Leu Trp Arg ou Val Leu Ala Gln 1 5 10 15 Arg Trp Met Glu Arg Leu Lys Thr Val Ala Gly Ser Lys Met aln Cly 2b 30 Leu Leu Glu Arg Val Asn Thr Glu lie His Phe val Thr Lys Cys Ala 40 45 Phe sln Pro Pro Pro Ser Cys Leu Arg Phe Val sln Thr Asn He Ser 50 55 60 01 Arg Leu Leu Gln Glu Thr Ser Glu Gln Leu Val Ala Leu Lys Pro Trp 65 70 75 80 He Thr Arg aln Asn Phe ser Arg Cys Leu Clu Leu sln Cys sln Pro 85 90 95 Asp Ser Ser Thr Leu Ser Gly Gly Asn Gly Thr Gln Asp Cys Ser Phe 100 105 110 Gln Hrs Ser Pro He Ser Ser Asp Phe Ala Val Lys He Arg slu Leu 115 120 125 Ser Asp Tyr Leu Leu Gln Asp Tyr Pro Val Thr Val Ala Ser Asn Leu 130 135 140 Gln 145 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO.11 : (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA. (A) LONGITUD: 155 aminoácidos (B) TIPO, aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA- Lineal (n) TIPO DE MOLÉCULA- Ninguno (ll) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA. SEQ ID NO:11 • 85 90 95 sln His Ser Pro He Ser Ser Asp Phe Ala Val Lys He Arg Glu Leu 100 105 110 Tyr Leu Leu Gln Asp Tyr Pro Val Thr Val Ala Ser Asn Leu 115 120 125 sln Asp Glu Glu Leu Cys Gly Gly Leu Trp Arg Leu Val Leu Ala aln 130 135 140 Arg Trp Met Glu Arg Leu Lys Thr Val Ala sly 145 150 155 Ala Ser Lys Met aln sly Leu Leu Glu Arg Val Asn Thr alu He H-.S 1 5 10 15 Phe Val Thr Lys Cys Ala Phe Gln Pro Pro Pro Ser Cys Leu Arg Phe 20 25 30 Val Gln T r Asn He Ser Arg Leu Leu sln Glu T r Ser Glu Gln Leu 40 45 Val Ala Leu Lys Pro Trp He Thr Arg Gln Asn Phe Ser Arg Cys Leu 50 55 60 Glu Leu aln Cys Gln Pro Asp Ser Ser Thr Leu Ser Gly Gly Asn Gly 65 70 75 80 Ser Gly aly Asn sly Ser Gly sly Asn Gly Thr sln Aep Cys Ser Phe (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:12: (l) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD. 150 aminoácidos (B) TIPO: aminoácidos (C) TIPO DE CADENA: sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA. Ninguno (Xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:12: Ala Ser Lys Met Gln Gly Leu Leu slu Arg Val Asn Thr Glu He His 1 5 10 15 Phe Val Thr Lys Cys Ala Phe Gln Pro Pro Pro Ser Cys Leu Arg Phe 25 30 val sln Thr Asn He Ser Arg Leu Leu Gln Glu Thr Ser Glu Gln Leu 40 45 Val Ala Leu Lys Pro Trp He Thr Arg Gln Asn Phe Ser Arg Cys Leu 50 55 60 slu Leu Gln Cys Gln Pro Asp ser Ser Thr Leu Ser Gly Gly Asn sly 65 70 75 80 Ser Gly Gly Asn Gly Thr Gln Asp cys Ser Phß sln His Ser Pro He 85 90 95 Ser Ser Asp Phß Ala Val Lys He Arg Glu Leu Ser Asp Tyr Leu LeL 100 105 110 Gln Asp Tyr ro Val Thr al Ala Ser Asn Leu Gl--- Asp Glu Glu Leu 115 120 125 Cys Gly Gly Leu Trp Arg Leu Val Leu Ala Gln Arf rp Met Glu Arg 130 135 142 Leu Lys Thr Val Ala Cly 145 _ 150 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 13 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 145 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (??) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 13 Ala Ser Lys Met Gln Gly Leu Leu Glu Arg Val Asn Thr Glu He His 1 5 10 15 Phe Val Thr Lys Cys Ala Phe Gln Pro Pro Pro Ser Cys Leu Arg Phe 20 25 30 Val Gln Thr Asn He Ser Arg Leu Leu Gln Glu Thr Ser Glu Gln Leu 35 40 45 Val Ala Leu Lys Pro Trp He Thr Arg Gln Asn Phe Ser Arg Cys Leu 50 55 60 alu Leu Gln Cys aln Pro Asp Ser Ser Thr Leu Ser Gly Gly Asn Gly 65 70 75 80 Thr Gln Asp Cys Ser Phe Cln His Ser Pro He Ser Ser Asp Phe Ala 85 90 95 Val Lys He Arg alu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu Gln Asp Tyr Pro Val 100 105 110 Thr val Ala Ser Asn Leu Gln Asp Glu alu Leu Cys Cly Cly Leu Trp 115 120 125 Arg Leu al Leu Ala Gln Arg Trp Met slu Arg Leu Lys Thr Val Ala 130 135 140 sly 145 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 14 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 155 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (u) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (Xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 14 Ala Pro Pro Ser Cys Leu Arg Phe Val sln Thr Asn He Ser Arg Leu 1 5 10 15 Leu sln Glu Thr Ser Glu Gln Leu Val Ala Leu Lys Pro Trp He Thr 25 30 Arg Gln Asn Phe Ser Arg Cys Leu Glu Leu Gln Cys Gln Pro Asp Ser 40 45 Ser Thr Leu Ser Gly Gly Asn Gly Ser Gly Gly Asn Gly Ser Gly Gly 50 55 60 Asn Gly Thr Gln Asp Cys Ser Phe Gln Hrs Ser Pro lie Ser Ser Asp 65 70 75 80 Phe Ala Val Lys He Arg Glu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu aln Asp Tyr 85 90 95 Pro Val Thr Val Ala Ser Asn Leu Gln Asp slu slu Leu Cye Gly sly 100 105 110 Leu Trp Arg Leu Val Leu Ala Oln Arg Trp Met slu Arg Leu Lys Thr 115 120 125 Val Ala Gly Ser Lys Met aln sly Leu Leu slu Arg Val Asn Thr Glu 130 135 140 He His Phe Val Thr Lys Cys Ala Phe Gln Pro 145 150 155 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 15 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 150 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 15 Ala Pro Pro Ser Cys Leu Arg Phe Val Gln Thr Asn He Ser Arg Leu 1 5 10 15 Leu Gln Glu Thr Ser Glu Gln Leu Val Ala Leu Lys Pro Trp He Thr 25 30 Arg Gln Asn Phe Ser Arg Cys Leu Glu Leu Gln Cys sln Pro Asp Ser 40 45 Ser Thr Leu Ser Gly Gly Asn Gly Ser sly aly Asn Gly Thr Gln Asp 50 55 60 Cys Ser Phe Gln Hxs Ser Pro He Ser Ser Asp Phe Ala Val Lys He 65 70 75 80 Arg Glu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu Gln Asp Tyr Pro Val Thr Val Ala 85 90 95 Sar Asn Leu Gln Asp Glu Glu Leu Cys Gly Gly Leu Trp Arg Leu Val 100 105 110 Leu Ala Gln Arg Trp Met Glu Arg Leu Lys Thr Val Ala aly Ser Lys 115 120 125 Met Gln Gly Leu Leu Glu Arg Val Asn Thr Glu He His Phe Val Thr 130 135 140 Lys Cys Ala Phe sln pro (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 16 (l) CAFiACTERISTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 145 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (H) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (Xl) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 16 Ala Pro Pro Ser Cys Leu Arg Phe Val Gln Thr Asn He Ser Arg Leu 1 5 10 15 Leu Gln Glu Thr Ser Glu Gln Leu Val Ala Leu Lys Pro Trp He Thr 25 30 Arg Cln Asn Phe Ser Arg Cys Leu Glu Leu Cln cys aln Pro Asp Ser 40 45 Ser Thr Leu Ser Gly Gly Asn aly Thr Gln Asp Cys Ser Phe Gln His 50 55 60 Ser Pro He Ser Ser Asp Phe Ala Val Lys He Arg Glu Leu Ser Asp 65 70 75 80 Tyr Leu Leu aln Asp Tyr Pro Val Thr Val Ala Ser Asp Leu sln Asp 85 90 95 Glu Glu Leu Cys Gly sly Leu Trp Arg Leu Val Leu Ala sln Arg Trp 100 105 110 Met Glu Arg Leu Lys Thr Val Ala Gly Ser Lys Met Gln sly Leu Leu 115 120 125 slu Arg Val Asn Thr slu He Hrs Phe Val Thr Lye Cye Ala Phe aln 130 135 140 Pro 145 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 17 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 155 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (ll) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno 5 (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 17 Ala Asp slu Olu Leu Cys Gly Gly Leu Trp Arg Leu Val Leu Ala Gln 1 5 10 15 Arg Trp Met Glu Arg Leu Lys Thr Val Ala Gly Ser Lys Met aln Gly 25 30 Leu Leu Glu Arg Val Asn Thr slu He His Phe Val Thr Lys Cys Ala 40 45 Phe sln Pro Pro Pro Ser Cys Leu Arg phe al Gln Thr Asn He Ser 50 55 60 Arg Leu Leu Gln Glu Thr Ser Glu sln Leu al Ala Leu Lys Pro Trp 65 70 75 80 He Thr Arg Gln Asn Phe Ser Arg Cys Leu clu Leu Gln Cys Gln Pro 85 90 95 Asp Ser Ser Thr Leu Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser r, 100 105 110 l U Gly Gly Ser sly Thr Oln Asp Cys Ser Phe sln His Ser Pro He Ser 115 120 125 Ser Asp Phe Ala Val Lys He Arg slu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu Gln 130 135 140 Asp Tyr Pro Val Tíir Val Ala Ser Asn Leu Gln (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 18 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 150 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal 15 (u) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 18 Ala Asp Glu aiu Leu Cys Gly Gly Leu Trp Arg Leu Val Leu Ala Gln 1 5 10 15 Arg Trp Met slu Arg Leu Lys Thr Val Ala Gly Ser Lys Met Gln Gly 25 30 Leu Leu Glu Arg Val Asn Thr slu Xle His Phe Val Thr Lys Cys Ala 40 45 Phe Gln Pro Pro Pro Ser Cys Leu Arg Phe Val sln Thr Asn He Ser 50 55 60 Arg Leu Leu sln Glu Thr Ser Glu Gln Leu Val Ala Leu Lys Pro Trp 65 70 75 80 He Thr Arg aln Asn Phe Ser Arg Cys Leu Glu Leu Gln Cys Gln Pro 0 85 90 95 Asp Ser Ser Ti-r Leu Ser sly Gly Ser Gly Ser Gly sly Ser sly Thr 100 105 110 Gln Asp Cys Ser phe Gln His Ser Pro He Ser Ser Asp Phe Ala Val 115 120 125 Lys He Arg slu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu sln Asp Tyr Pro Val Thr 130 135 140 Val Ala Ser Asn Leu Gln 145 150 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 19 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 145 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (n) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno 5 (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 19 Met Ala Thr Gln Asp Cys Ser Phe Cln His Ser pro xle Ser Ser Asp 1 5 10 15 Phe Ala Val Lys He Arg slu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu sln Asp Tyr 20 25 30 Pro Val Thr Val Ala Ser Asn Leu Cln Asp slu slu Leu Cys Gly Gly 35 40 45 Leu T-rp Arg Leu Val Leu Ala Gln Arg Trp Met Glu Arg Leu Lys Thr 50 55 60 Val Ala Gly Ser Lye Met Gln Gly Leu Leu Glu Arg Val Asn T r Glu 65 70 75 80 He His Phe Val Thr Lys Cys Ala Phe Gln Pro pro Pro Ser Cys Leu 85 90 95 Arg Phe Val Gln Thr Asn He Ser Arg Leu Leu Gln alu T r Ser slu -_ 100 105 110 l U Gln Leu Val Ala Leu Lys Pro Trp Xle Thr Arg Gln Asn Phe Ser Arg 115 120 125 Cys Leu Glu Leu sln Cys Cln Pro Asp Ser Ser Thr Leu Gly Gly Gly 130 135 140 Ser 145 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 20 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 143 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal 15 TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 20 sly Ser aly Gly Thr Gln Asp Cys Ser Phe sln His Ser Pro He ser 1 5 10 15 Ser Asp Phe Ala Val Lys He Arg Glu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu Gln 25 30 Asp Tyr Pro Val Tbr Val Ala Ser Asn Leu Gln Asp slu slu Leu Cys 40 45 Gly Gly Leu Trp Arg Leu Val Leu Ala Gln Arg Trp Met Glu Arg Leu 50 55 60 Lys Thr Val Ala Gly Ser Lys Met Gln Gly Leu Leu Glu Arg Val Asn 65 70 75 80 Thr Glu He His Phe Val Thr Lys Cys Ala Phe Gln Pro Pro Pro Ser 85 90 95 Cys Leu Arg phe Val Gln Thr Asn He Ser Arg Leu Leu sln slu Thr 100 IOS 110 Ser slu Gln Leu Val Ala Leu Lys Pro Trp He Thr Arg Gln Asn Phe 115 120 125 Ser Arg Cys Leu Glu Leu Gln Cys Gln Pro Asp Ser Ser Thr Leu 130 135 140 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO.21 : (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD. 149 aminoácidos (B) TIPO, aminoácidos (C) TIPO DE CADENA: sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (ll) TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno (X¡) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:21 : Met Ala Thr Cln Asp cys Ser phe Gln His Ser Pro He Ser Ser Asp 1 5 10 15 Phe Ala Val Lys He Arg slu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu Gln Asp Tyr 20 25 30 Pro Val T r Val Ala Ser Asn Leu Gln Asp Glu alu Leu Cys Gly Gly 35 40 45 Leu Trp Arg Leu Val Leu Ala sln Arg Trp Met Glu Arg Leu Lys Thr 50 55 60 Val Ala Gly Ser Lys Met Cln Cly Leu Leu Glu Arg Val Asn Thr alu 65 70 75 30 He Hxs Phe Val Thr Lys Cys Ala Phe Cln Pro Pro Pro Ser Cys Leu 85 90 95 Arg Phe Val Cln Thr Asn He ser Arg Leu Leu sln slu Thr Ser alu 100 105 110 sln Leu Val Ala Leu Lys Pro Trp He Thr Arg Gln Asn Phe Ser Arg 115 120 125 Cys Leu Glu Leu G n Cys Gln Pro Asp Ser Ser Thr Leu Gly Gly sly 130 135 140 Ser sly sly Gly ser 145 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:22: (l) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 1 aminoácidos (B) TIPO: aminoácidos (C) TIPO DE CADENA: sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal 15 (n) TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno (Xl) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:22. Cly Ser Gly sly sly Thr oln Asp Cys Ser Phe cln Hxs Ser Pro He 1 5 10 15 Ser Ser Asp Phe Ala Val Lys He Arg Glu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu 25 30 Gln Aep Tyr Pro Val Thr Val Ala Ser Asn Leu Gln Asp alu slu Leu 40 45 Cys aly Cly Leu Trp Arg Leu Val Leu Ala Cln Arg Trp Met Glu Arg 50 55 60 Leu Lys Thr Val Ala Gly ser Lys Met sln Gly Leu Leu Glu Arg Val 65 70 75 80 r,rt Asn Thr Glu He Hxs Phe Val Thr Lys cys Ala Phe Gln Pro Pro Pro '"' 85 90 95 Ser Cys Leu Arg Phe Val Gln Thr Asn lie Ser Arg Leu Leu Gln alu 100 105 110 Thr Ser Glu Gln Leu Val Ala Leu Lys Pro Trp He Thr Arg Cln Asn 115 120 125 Phe Ser Arg Cys Leu Glu Leu Gln Cys Gln Pro Asp Ser Ser Thr Leu 130 135 140 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 23 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 153 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (n) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (Xl) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 23 Met Ala Thr sln Asp Cys Ser Phe Gln Hxs Ser Pro He Ser Ser Asp 1 5 10 15 Phe Ala Val Lys He Arg slu Leu ser Asp Tyr Leu Leu Gln Asp Tyr 25 30 Pro Val Thr val Ala Ser Asn Leu sln Asp Glu alu Leu Cys cly Gly 40 45 Leu Trp Arg Leu Val Leu Ala Gln Arg Trp Met Glu Arg Leu Lys Thr 50 55 60 Val Ala Gly Ser Lys Met Gln sly Leu Leu slu Arg Val Asn Thr clu 65 70 75 80 He Hxe Phe Val T r Lys Cys Ala Phe aln Pro Pro Pro Ser Cys Leu 85 90 95 Arg Phe Val aln Thr Asn He Ser Arg Leu Leu Cln clu Thr Ser slu 0 100 105 110 sln Leu Val Ala Leu Lys Pro Trp He Thr Arg aln Asn Phe Ser Arg 115 120 125 Cys Leu slu Leu Cln Cys Cln Pro Asp Ser ser T r Leu aly sly sly 130 135 140 Ser sly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 145 150 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 24 (i) CAFIACTERISTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 150 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla 15 (D) TOPOLOGÍA Lineal (n) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 24 aly Ser sly sly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Gln Asp Cys Ser 1 5 10 15 Phe Gln Hxs Ser Pro xle ser Ser Asp Phe Ala val Lys Xle Arg alu 25 30 Leu Ser Asp Tyr Leu Leu aln Asp Tyr Pro Val Thr Val Ala Ser Asn 40 45 Leu Gln Asp Glu Glu Leu Cys Gly Gly Leu Trp Arg Leu Val Leu Ala 50 55 60 aln Arg Trp Met Glu Arg Leu Lys Thr Val Ala Gly Ser Lys Met sln 65 70 75 80 -£U Gly Leu Leu Glu Arg Val Asn Thr Glu He Hxs Phe Val Thr Lys Cys 85 90 95 Ala Phe Gln Pro Pro Pro Ser Cys Leu Arg Phe Val sln Thr Asn Xle 100 105 110 Ser Arg Leu Leu Gln slu Thr Ser Clu sln Leu Val Ala Leu Lys Pro 115 120 125 Trp He Thr Arg sln Asn Phe Ser Arg Cys Leu Glu Leu Gln Cys aln 130 135 140 Pro Asp Ser Ser Thr Leu 145 150 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 25 (l) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 146 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (n) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 25 Ala Asp Glu alu Leu cys Gly Gly Leu Trp Arg Leu Val Leu Ala Gln 1 5 10 15 Arg Trp Met Glu Arg Leu Lys Thr Val Ala Gly Ser Lye Met aln Gly 25 30 Leu Leu Glu Arg al Asn Thr slu He His Phe Val Thr Lys Cys Ala 40 45 Phe Cln Pro Pro Pro Ser Cys Leu Arg Phe Val Gln Thr Asn He Ser 50 55 60 Arg Leu Leu aln alu Thr Ser alu Cln Leu Val Ala Leu Lys Pro Trp 65 70 75 80 He Thr Arg sln Asn Phe Ser Arg Cys Leu slu Leu Gln Cys Gln Pro 85 90 95 Asp Ser Ser Thr Leu Gly sly Gly Ser Gly aly Thr sln Asp Cys Ser 100 105 110 Phe Cln Hxs Ser Pro Xle Ser Ser Asp Phe Ala Val Lys Xle Arg slu US 120 125 Leu Ser Asp Tyr Leu Leu Cln Asp Tyr Pro Val Thr Val Ala Ser Asn 130 135 140 Leu sln 145 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 26 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 147 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (n) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 26 Ala Asp Clu alu Leu Cys aly Cly Leu Trp Arg Leu Val Leu Ala Cln 1 5 10 15 Arg Trp Met Clu Arg Leu Lys Thr Val Ala Gly Ser Lys Met Gln Gly 25 30 Leu Leu slu Arg Val Asn Thr slu Xle Hxs Phe Val Thr Lys Cys Ala 40 45 Phe Cln Pro Pro Pro Ser Cys Leu Arg Phe Val Cln Thr Asn Xle Ser 50 55 60 Arg Leu Leu sln Glu Thr Ser Glu cln Leu Val Ala Leu Lys Pro Trp 65 70 75 80 He Thr Arg sln Asn Phe Ser Arg Cys Leu Clu Leu Gln Cys Cln Pro 85 90 95 Asp Ser Ser Thr Leu sly sly Cly Ser aly sly sly Thr aln Asp Cys 100 105 110 Ser Phe Gln Hxs Ser Pro He Ser Ser Asp Phe Ala Val Lys He Arg 115 120 125 Glu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu Gln Asp Tyr ro Val Thr Val Ala Ser 130 135 140 Asn Leu Gln 145 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 27 (i) CAFtACTERISTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 150 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno 5 (XI) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 27 Ala Asp Clu Glu Leu Cys Gly Gly Leu Trp Arg Leu Val Leu Ala Gln 1 5 10 15 Arg Trp Met Glu Arg Leu Lys Thr Val Ala Gly Ser Lys Met Gln Gly 25 30 Leu Leu Clu Arg Val Asn Thr Glu He Hxs Phe Val Thr Lys Cys Ala 40 45 Phe Gln Pro Pro Pro Ser Cys Leu Arg Phe Val Gln Thr Asn He Ser 50 55 60 Arg Leu Leu sln Glu Thr Ser Glu Gln Leu Val Ala Leu Lys Pro Trp 65 70 75 80 He Thr Arg Gln Asn Phe Ser Arg Cys Leu slu Leu oln Cys Cln Pro 85 90 95 Asp Ser Ser Thr Leu Gly Gly Gly Ser sly Gly Gly Ser Gly Gly Thr n 100 105 110 ' L> aln Asp Cys Ser Phe Gln Hxs Ser Pro He Ser Ser Asp Phe Ala Val 115 120 125 Lys He Arg Glu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu Gln Asp Tyr Pro Val Thr 130 135 140 Val Ala Ser Asn Leu aln (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 28 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 153 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal 1 5 (n) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 28 Ala Asp slu slu Leu Cys sly aly Leu Trp Arg Leu Val Leu Ala sln 1 5 10 15 Arg Trp Met olu Arg Leu Lys Thr Val Ala sly Ser Lys Met sln sly 25 30 Leu Leu Glu Arg Val Asn Thr slu He His Phe Val Thr Lys Cys Ala 40 45 Phe Gla Pro Pro Pro Ser Cys Leu Arg Phe Val Gln Thr Asn He Ser 50 55 60 Arg Leu Leu aln Clu T r Ser Clu Gln Leu Val Ala Leu Lys Pro Trp 65 70 75 80 He Thr Arg sln Asn Phe Ser Arg Cys Leu slu Leu sln Cys aln Pro 20 85 90 95 Asp Ser Ser Thr Leu Cly sly sly Ser aly sly Gly Ser sly sly sly 100 105 110 Ser sly Tlir Oln Asp Cys Ser Phe Gln His Ser Pro He Ser Ser Asp 115 120 125 Phe Ala Val Lys He Arg alu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu aln Asp Tyr 130 135 140 Pro Val T r Val Ala Ser Asn Leu Cln 145 150 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 29 (i) CARACTERÍSTICAS DE l-A SECUENCIA (A) LONGITUD 155 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal TIPO DE MOLÉCULA Ninguno 5 (x?) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 29 Ala Asp Glu Glu Leu Cys Gly Gly Leu Trp Arg Leu Val Leu Ala sln 1 5 10 15 Arg Trp Met alu Arg Leu Lys Thr val Ala Gly Ser Lys Met Gln Gly 25 30 Leu Leu Glu Arg Val Asn Thr Glu He Hxs Phe Val Thr Lys Cys Ala 40 45 Phe Gln Pro Pro Pro Ser Cys Leu Arg Phe Val sln Thr Asn Xle Ser 50 55 60 Arg Leu Leu aln alu Thr Ser slu aln Leu Val Ala Leu Lys Pro Trp 65 70 75 80 He Thr Arg sln Asn Phe Ser Arg cys Leu slu Leu sln Cys Gln Pro 85 90 95 Asp Ser Ser Thr Leu sly sly Gly Ser sly sly sly Ser Gly Cly Cly -.„ 100 105 110 1 ser aly aly aly Thr Gln Asp cys ser Phe aln Hxs Ser Pro He Ser 115 120 125 Ser Asp Phe Ala Val Lys He Arg slu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu Oln 130 135 140 Asp Tyr Pro Val Thr Val Ala Ser Asn Leu aln (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 30 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 161 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal 15 (ll) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (Xl) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 30 Ala Asp Glu alu Leu Cye Gly aly Leu Trp Arg Leu Val Leu Ala Gln 1 5 10 15 Arg Trp Met Glu Arg Leu Lys Thr Val Ala Gly Ser Lys Met Gln sly 20 25 30 Leu Leu Olu Arg Val Asn Thr slu He His Phe Val Thr Lys Cys Ala 40 45 Phe Gln Pro Pro Pro Ser Cys Leu Arg Phe Val Gln Thr Asn He Ser 50 55 60 Arg Leu Leu aln slu Thr ser Olu sln Leu Val Ala Leu Lys Pro Trp 65 70 75 80 „_ He Thr Arg sln Asn Phe Ser Arg Cys Leu slu Leu Gln Cys Gln Pro 20 85 90 95 Asp Ser Ser Thr Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 100 105 lio Ser Gly Cly Gly Ser sly s-y Gly Ser Gly Thr Gln Asp Cys Ser Phe 115 120 125 Gln Hxs Ser Pro He Ser ser Asp Phe Ala Val Lys He Arg Glu Leu 130 135 140 Ser Asp Tyr Leu Leu Gln Asp Tyr Pro Val Tí-r Val Ala Ser Asn Leu 145 150 155 160 Gln (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 31 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 155 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (n) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 31 Ala Asp Tyr Pro Val Thr Val Ala Ser Asn Leu Gln Asp Glu Glu Leu 1 5 10 15 Cys Gly Gly Leu Trp Arg Leu Val Leu Ala Gln Arg Trp Met Glu Arg 25 30 Leu Lys Thr Val Ala Gly Ser Lys Met Gln sly Leu Leu Glu Arg Val 40 45 Asn Thr Glu He Hxs Phe Val Thr Lys Cys Ala Phe Gln Pro Pro Pro 50 55 60 Ser Cys Leu Arg Phe Val Cln Thr Asn He Ser Arg Leu Leu Cln slu 65 70 75 • 80 Thr Ser alu sln Leu Val Ala Leu Lys Pro Trp He Thr Arg sln Asn 85 90 95 Phe Ser Arg Cys Leu Clu Leu Oln Cys sln Pro Asp Ser Ser Thr Leu 100 105 110 aly Gly aly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Thr 115 120 125 sln Asp Cys Ser Phe Gln Hxs Ser Pro Xle Ser Ser Asp Phe Ala Val 130 135 140 Lys He Arg slu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu sln (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 32 (I) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 155 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 32 Ala Ala Ser Asn Leu Gln Asp alu Glu Leu Cys Gly Gly Leu Trp Arg 1 5 10 15 Leu Val Leu Ala Gln Arg Trp Met slu Arg Leu Lys Thr Val Ala aly 25 30 Ser Lys Met oln Gly Leu Leu Glu Arg Val Asn Thr Glu He Hxs Phe 40 45 Val Thr Lys Cys Ala Phe Gln Pro Pro Pro Ser Cys Leu Arg Phe Val 50 55 60 Gln Thr Asn Xle Ser Arg Leu Leu Gln Glu Thr Ser Glu Gln Leu Val 65 70 75 80 Ala Leu Lys Pro Trp He Thr Arg Gln Asn Phe Ser Arg Cys Leu Glu 85 90 95 Leu Gln Cys Gln Pro Asp Ser Ser Thr Leu sly Gly Gly Ser Gly Gly 100 105 ??o Gly Ser Gly Gly Gly Ser sly aly sly Thr sln Asp Cys Ser Phß Gln 115 120 125 His Ser Pro He Ser Ser Asp Phe Ala Val Lys He Arg Glu Leu Ser 130 135 140 Asp Tyr Leu Leu Gln Asp Tyr Pro Val Thr Val 145 150 155 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 33 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 155 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (ll) TIPO DE MOLÉCULA. Ninguno (Xl) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 33 Ala Val Ala sly Ser Lys Met Gln sly Leu Leu Glu Arg Val Asn Thr 1 5 10 15 Glu He Hxs Phe val Thr Lys Cys Ala Phe Gln Pro Pro Pro Ser cys 25 30 Leu Arg Phe Val Gln Thr Asn Xle Ser Arg Leu Leu Gln Glu Thr Ser 40 45 Glu Gln Leu Val Ala Leu Lys Pro Trp He Thr Arg Gln Asn Phe Ser 50 55 60 Arg Cys Leu Glu Leu Gln Cys Gln Pro Asp Ser Ser T r Leu Gly Gly 65 70 75 80 Gly Ser sly aly Gly Ser Gly Gly Cly Ser aly aly Gly Thr Gln Asp 85 90 95 Cys Ser Phe G n Hxs Ser Pro He ser Ser Asp Phe Ala Val Lys xle 100 105 110 0 Arg Glu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu Gln Asp Tyr Pro Val Thr Val Ala 115 120 125 Ser Asn Leu aln Asp slu slu Leu Cys Gly sly Leu Trp Arg Leu val 130 135 140 Leu Ala aln Ara Trp Met Clu Arg Leu Lys Thr (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 34 (l) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 155 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (u) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 34 Ala Ser Lys Met sln Gly Leu Leu Glu Arg Val Asn Thr Glu He Hxs 1 5 10 15 Phe Val Thr Lys cys Ala Phe Gln Pro Pro Pro ser Cys Leu Arg Phe 20 25 30 Val Gln Thr Asn He Ser Arg Leu Leu aln Glu Thr Ser Glu Gln Leu 40 45 Val Ala Leu Lys Pro Trp He Thr Arg Gln Asn Phe Ser Arg Cys Leu 50 55 60 Glu Leu cln Cys Gln Pro Asp Ser ser Thr Leu Gly Gly Gly Ser Gly 65 70 75 80 _,. Gly sly Ser sly sly Gly Ser sly aly aly Thr sln Asp Cys Ser Phe 2U 85 90 95 Gln His Ser Pro He Ser Ser Asp Phe Ala Val Lys He Arg Glu Leu 100 105 110 Ser Asp Tyr Leu Leu Gln Asp Tyr Pro Val Thr Val Ala Ser Asn Leu 115 120 125 Gln Asp slu slu Leu Cys Gly sly Leu Trp Arg Leu Val Leu Ala Cln 130 135 140 Arg Trp Met Glu Arg Leu Lys Thr Val Ala Gly 145 150 155 1 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 35 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 155 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (ll) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 35 Ala pro Pro Ser Cys Leu Arg Phe Val Gln Thr Asn He Ser Arg Leu 1 5 10 15 Leu aln slu Thr Ser Glu Gln Leu Val Ala Leu Lys Pro Trp He Thr 25 30 Arg Gln Asn Phe Ser Arg Cys Leu Glu Leu Gln Cys Gln Pro Asp Ser 40 45 Ser Thr Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly sly Gly Ser sly 50 55 60 aly Gly Thr Gln Asp Cys Ser Phe Gln Hxs Ser Pro He Ser Ser Asp 65 70 75 80 Phe Ala Val Lys He Arg Clu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu Gln Asp Tyr 85 90 95 Pro al Thr Val Ala Ser Asn Leu Gln Asp Glu alu Leu Cys Gly Gly 100 105 110 Leu Trp Arg Leu Val Leu Ala Gln Arg Trp Met Glu Arg Leu Lys Thr 115 120 125 Val Ala Gly Ser Lys Met Gln Gly Leu Leu slu Arg Val Asn Thr Glu 130 135 140 He Hxs Phe Val Thr Lys Cys Ala Phe Gln Pro 145 150 155 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 36 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 155 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (n) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno ( i) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 36 Ala Arg Phe Val Gln Thr Asn He Ser Arg Leu Leu aln Glu Thr Ser 1 5 10 15 Glu Gln Leu Val Ala Leu Lys Pro Trp Xle Thr Arg Cln Asn Phe Ser 25 30 Arg cys Leu Glu Leu cln Cys Gln Pro Asp Ser Ser Thr Leu sly aly 40 45 Gly Ser sly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Thr Gln Asp 50 55 60 Cys Ser Phe Gln Hxs Ser Pro He Ser Ser Asp Phe Ala Val Lys He d5 70 7S 80 Arg Glu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu Gln Asp Tyr Pro Val T r Val Ala 85 90 95 Ser Asn Leu sln Asp clu Glu Leu Cys Gly Gly Leu Trp Arg Leu Val 100 105 110 Leu Ala Gln Arg Trp Met Olu Arg Leu Lys Thr Val Ala Gly ser Lys 115 120 125 Met Gln sly Leu Leu Glu Arg Val Asn Thr Glu xle Hxs Phe Val Thr 130 135 140 Lys Cys Ala Phe Gln Pro Pro Pro Ser Cys Leu 145 150 155 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 37 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 155 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (n) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 37 Ala Thr Asn He Ser Arg Leu Leu Gln Glu Thr Ser Glu Gln Leu Val 1 5 ?o n Ala Leu Lys Pro Trp He Tfar Arg Gln Asn phe Ser Arg Cys Leu alu 20 25 30 Leu Glp Cys Gln Pro Asp Ser Ser Thr Leu aly Gly Gly Ser Gly Gly 40 45 Gly Ser aly Gly Gly Sex Gly Gly Gly Thr Gln Asp Cys Ser Phe Gln 50 55 60 Hxs Ser Pro Xle Ser Ser Asp Phe Ala Val Lys He Arg Glu Leu Ser 65 70 75 80 Asp Tyr Leu Leu Gln Asp Tyr Pro Val Thr val Ala Ser Asn Leu cln 85 90 95 Asp slu Glu Leu Cys Gly Gly Leu Trp Arg Leu Val Leu Ala Gln Arg 0 100 105 110 Trp Met Glu Arg Leu Lys Thr Val Ala Gly Ser Lys Met Gln Gly Leu 115 120 125 Leu Glu Arg Val Asn Thr Glu He Hxs Phe val Thr Lys Cys Ala Phe 130 135 140 Gln pro Pro Pro Ser Cys Leu Arg Phe Val Gln 145 150 155 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 38 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 4 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla -, 5 (D) TOPOLOGÍA Lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 38 Gly Gly Gly Ser (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 39 ~n (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA ^u (A) LONGITUD 8 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno ( i) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 39 Gly Gly Gly Ser Gly sly Gly Ser 1 5 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 40 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 12 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (n) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (Xl) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 40 aly sly sly Ser Gly aly Oly Ser sly Gly Gly Ser 1 5 10 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 41 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 7 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (n) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 41 Ser Gly Gly Ser sly Gly Ser (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 42 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 5 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal 00 TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (Xl) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 42 slu Phe Gly Asn Met 1 5 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 43 (l) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 6 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (n) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 43 Glu Phe Gly Gly Asn Met 1 5 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 44 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 9 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (XI) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 44 Glu Phe Gly Gly Asn Gly sly Asn Met 1 5 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 45 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 7 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (u) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 45 Gly Gly Ser Asp Met Ala sly 1 5 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 46.

(I) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 5 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (??) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 46 Ser Gly Gly Asn Gly 1 5 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 47 (l) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 10 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (n) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (Xl) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 47 Ser Gly Gly Asn Gly Ser Gly sly Asn Gly 1 5 "I (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 48 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 15 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (n) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (XI) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 48 Ser Gly Oly Aen sly Ser aly Gly Asn aly Ser aly sly Asn sly 1 5 10 15 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 49 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 10 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (??) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (x?) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 49 Ser sly aly Ser sly Ser Gly sly Ser sly 1 5 10 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO.50. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA. (A) LONGITUD: 15 aminoácidos (B) TIPO, aminoácidos (C) TIPO DE CADENA, sencilla (D) TOPOLOGÍA: Lineal (li) TIPO DE MOLÉCULA. Ninguno (x?) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO.50: Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly sly ser sly Ser Gly Gly ser Gly (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:51 : (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD: 6 aminoácidos (B) TIPO, aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA: Lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA- SEQ ID NO-51 : Oly Gly sly Ser Gly Gly 1 5 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:52: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 7 aminoácidos (B) TIPO, aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA: Lineal (ll) TIPO DE MOLÉCULA. Ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO.52: Gly Gly Gly Ser aly sly aly 1 5 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO.53: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 10 aminoácidos (B) TIPO: aminoácidos (C) TIPO DE CADENA: sencilla (D) TOPOLOGÍA: Lineal (li) TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno ( i) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA. SEQ ID NO.53. Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Oly sly 1 5 10 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO.54: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD. 13 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA: sencilla (D) TOPOLOGÍA. Lineal (??) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA. SEQ ID NO.54: Gly sly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly sly Gly Ser sly 1 5 10 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:55: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD. 15 aminoácidos (B) TIPO, aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA- Lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA. Ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO:55. sly Gly Gly Ser Gly sly sly ser sly Gly Oly Ser Gly sly Gly 1 5 ?o 15 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:56: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD. 21 aminoácidos (B) TIPO: aminoácidos (C) TIPO DE CADENA: sencilla (D) TOPOLOGÍA. Lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO.56: aly Gly Gly Ser Gly Gly sly Ser Gly Gly Gly ser Gly Gly sly Ser 1 5 10 15 . aly Gly sly Ser Gly 20 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 57 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 33 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 57 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 58 (0 CARACTERÍSTICAS DE A SECUENCIA (A) LONGITUD 32 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 58 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 59 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 32 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (Xl) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 59 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 60 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 46 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (Xl) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 60 GACTGccATa cajACYCAas AYTOYTCYTT YCAACACAGC CCCATC 1 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:61. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD 46 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA: Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO.61: G--ctsccAta aa-ACYCAss A?ts?tc--tt YCAACACAGC CCCATC (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO.62. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD.22 pares de bases (B) TIPO, ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA: Lineal 1 0 (XI) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO:62. TGTCCAAACT CATCAATCTA TC (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:63: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA' (A) LONGITUD 38 pares de bases (B) TIPO, ácido nucleico -, ? (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA- SEQ ID NO.63: CATsaccATG accoACGAsa AacrcTacsa aGsccTCT (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID N0.64: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: 20 (A) LONGITUD: 36 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: sencilla (D) TOPOLOGÍA. Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA- SEQ ID NO:64: scTAOAAacT TACGGCAGO TGCACOCCAC saTGAc (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:65.

(I) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD: 38 pares de bases TIPO, ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA, sencilla (D) TOPOLOGÍA: Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 65: CATCGCCATC TGCAAGGCTT G TC-aA'-C (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO.66: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA.

(A) LONGITUD 36 pares de bases (B) TIPO, ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA. Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA. SEQ ID N0.66: GCTAGAAGCT TACCCAGCGA CACTCTTCAa CCCCTC (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:67: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD. 36 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA. Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:67: CATCGCCATG OCCCCCCCCA GCTCTCTTCG CTTCGT (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:68: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 37 pares de bases (B) TIPO, ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: sencilla (D) TOPOLOGÍA: Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO:68: sctAs-u-sct TAOGC TOAA AoscACAttt GCTOACA (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 69 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 42 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 69 cccTCTCTas CGscAAcssc ACCCAGGACT GCTCCTTCCA AC (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 70 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 48 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 70 scGsTAACss CAGTGGAGGT AATGGCACCC AGOACTGCTC CTTCCAAC (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 71 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 57 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (XI) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 71 ACOGCAGTGG TsaCAATGCC AGCGsCGGAA ATOGAACCCA GGACTsCTCC TTCCAAC (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 72 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 38 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (Xl) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 72 aTaCCGTTGC CGCCAaACAa GGTTGAGsAG TCGGGCTO (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 73. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA. (A) LONGITUD: 48 pares de bases (B) TIPO, ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA- sencilla (D) TOPOLOGÍA. Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA. SEQ ID NO.73. ATTACCTCCA CTGCCGTTAC CGCCTOACAO OCTTOAOGAG TCGGOCTG (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO.74: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD. 54 pares de bases (B) TIPO, ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA- sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal ° (x?) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO.74: CCTCCCATTC CCACCACTGC CGTTACCTCC AOACAaGOTT GAGGAsTCGG OCTO (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:75. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD 60 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico c (C) TIPO DE CADENA- sencilla (D) TOPOLOGÍA. Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA- SEQ ID NO.75: OATOAOC-ATC CssTCGCAAT GCOAGCGaCG GAAATGGAAC CCAOGACTOC TCCTTCCACC (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO.76: (I) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: 0 (A) LONGITUD: 45 pares de bases (B) TIPO, ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA, sencilla (D) TOPOLOGÍA: Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA' SEQ ID NO.76: GATsACGGAT CCGTTACCTC CAGACAGOOT TaAsOAGTCO OGCTO (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 77 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD. 46 pares de bases (B) TIPO, ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA- Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO.77.

OATaAcaGAT ccsaAssTAA TsacACCCAs (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 78: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD: 29 pares de bases (B) TIPO, ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA: Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO:78: GACTCCCATG CCCGACGAOO AGCTCTGCO (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:79. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 28 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA: Lineal ( i) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID N0.79.

GACTCAAGCT TACTOCACOT TGGAGsCC (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:80: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 39 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: sencilla (D) TOPOLOGÍA. Lineal (Xl) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA- SEQ ID NO.80: GAcrcssaAT CCOGAGOTTC TOOCACCCAG OACTOCTCC (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 81 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 41 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 81 OACTaOGATC CGGTaGCACT COGAOCCCCa CATCTCOAAC c (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 82 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 39 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal ° (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 82 OACTTOGOAT CCACTACCTC CAGACACCOT TOAGOAOTC (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 83 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 39 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico 5 (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 83 GasTTOAssA GTcsGscrs (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 84 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA 0 (A) LONGITUD 51 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 84 ACTGACGGAT CCACCTCCTG ACCCACCGCC CAGsGTTGAG OAaTCCCGCT G (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO.85. (l) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD. 63 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: sencilla (D) TOPOLOGÍA: Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO.85: ACTGACaOAT CCACCTCCTG ACCCACCTCC TGACCCACCG CCCAGCGTTG A--GAGTCGGG CTO (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:86: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD. 28 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO.86. ACGTAAAGCT TA--AGGGTTG AOGAOTCG (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO.87: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA. (A) LONGITUD. 40 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA- sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO.87: stcAataa-At ccaa-vaarAC CCAGGACTGC TCCTTCCAAC (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:88: (I) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 43 pares de bases (B) TIPO, ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: sencilla (D) TOPOLOGÍA: Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO.88: otcAGtaaAt ccGGAostsa CACCCAGOAC TGCTCCTTCC AAC (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 89 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 60 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 89 •3 Gtc--stsaAT ccaGAGsTGa cTCAaasasA cccAaGACTs (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 90 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 57 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal ° ( i) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 90 GTTGCCATsG CHTCNAAYCT GCAEGAYGA-- GAECTGTGCG GGasCCTCTG GCGGCTG (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 91 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 57 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 91 attGCCAtso GAYaARGAR ctato?sGss accTCTssca acTOOTC (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 92 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA 0 (A) LONGITUD 57 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal ( l) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 92 sttsccA--ss CNctsc--HsA ?sARs--Rcta ts?so?sacc tctss-ssct astcc?-G (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 93 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 57 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (x?) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 93 attscc--tsa CNCARGAYGA RGARCTGTG? csYGGYCTCT aacsscTGGT ccToscA (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 94 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 57 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 94 GTTGCCATGG OT-AYCARGA RCTGTsYGGY GGYCTCTGaC GaCTaOTCCT CGCACAO (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 95 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 57 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 95 sttsc-Atss CHOARGARCT GTGYsaYOGY ctctoacasc tsatcctsoc ACAGCOC (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 96 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 57 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 96 sttsccAtos CNOARCTOTG ?oGYGs?cta TGGCGYCTGG TCCTGGCACA GCGCTGG (2) INFORMACIÓN PAPA SEQ ID NO 97 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 57 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 97 att(-ccAtss c-?ctGts?ss TsacACAGCG ctsoAts (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 98 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 30 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal ° (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 98 TATCCAAGCT TAoaccAcas toAcraaatA (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 99 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 30 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico 5 (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 99 TATCCAACCT TAOCAssccA cssrsACTcs (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 100 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA 0 (A) LONGITUD 30 pares d? bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 100 TATCCAACCT tActts?Ass CCACCGTGAC (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO.101 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA.

(A) LONGITUD. 30 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA. Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:101: TATOCAAGCT TACAGGTTCG AOOC-ACOOT (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO.102: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 30 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA, sencilla (D) TOPOLOGÍA: Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:102: (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:103: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD 30 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA, sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO:103: TATGCAAGCT TAGTCCTCCA aGTTGGAGGC (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:104: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD. 30 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: sencilla (D) TOPOLOGÍA: Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO.104- TATGCAAGCT TACTCOTCCT aCAGOTTOCA (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 105 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 30 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 105 5 ATOCAAOCT TACTCCTCOT CCTaCAGaTT (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 106 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 405 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 106 GCCACCCAGG ACTGCTCCTT CCAACACAGC CCCATCTCCT CCOACTTCCC TsTCAAAATC 60 CGTGAGCTsT CTOACTACCT GCTTCAAGAT TACCCAOTCA CCG-TOGCCTC CAACCTGCAG 120 GACGAOGAGC TCIGCaOGOC CCTCTOGCss CTOaTCCTOG CACAaCOCTO GATGsAGCsG 180 CTCAAGACTG TCOCTaOOTC CAACATOCAA aOCTTOCTCG AGCGCGTGAA CACaOAGATA 240 CTTTCAGCCC CCCCCCAGCT OTCTTCCCTT CGTCCAGACC 300 AACATCTCCC GCCTCCTCCA GOAGACCTCC GAGCAGCTCG TasCaCTOAA GCCCTGGATC 360 ACTCGCCACA ACTTCTCCCO GTGCCTOGAG CTGCAGTGTC AGCCC 405 -¡ 5 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 107 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 420 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 107 CCCACCCACG ACTGCTCCTT CCAACACAGC CCCATCTCCT CCOACTTCGC TGTCAAAATC 60 CGTGAGCTOT CTGACTACCT GCTTG----OAT TACCCAGTCA CCGTGsCC-TC CAACCTGCAG 120 nr, GAcsAGsAGC TCTscGsGss cCTCTGscss ctsstcctos c--CAscscts oATaa-w-ccG 180 ^U CTCAAOACTG TCGCTGGsTC CAAGATCCAA GsCTTaCTGG AsCsCOTGAA CACGOAOATA 240 CACTTTOTCA CCAAATaTOC CTTTCAGCCC CCCCCCAOCT GTCTTCaCTT CGTCCAOACC 300 AACATCTCCC aCCTCCT-CA CGAGACCTCC CAscAscTss TsscscTGAA CCCCTCOATC 360 ACTCGCCAOA ACTTCTCCCG sTGCCTGGAa CTGCAGTGTC AGCCCGACTC CTCAACCCTG 420 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 108 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD.366 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA. Lineal (Xl) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO:108: GCCACCCAGa ACTGCTCCTT CCAACACAGC CCCATCTCCT CCGACTTCOC TGTCAAAATC 60 csTGAacrsT 120 GACGAGGAaC TCTGCGsOGG CCTCTGCCaO CTsGTCCTGG CACAGCGCTO GATGGAGCas 180 TcscTsaaTC ascrrscTss AscscsTCAA 240 CACTTTGTCA CCAAATGTOC CTTTCAGsAO ACCTCCGAOC AGCTsGTGaC sCTGAAGCCC 300 TGGATCACTC GCCAGAACTT CTCCCCaTGC CTGGAOCTsC AGTGTCAOCC COACTCCTCA 360 ACCCTs 366 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:109: (0 CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD: 405 pares de bases (B) TIPO, ácido nucleico -\ o (C) TIPO DE CADENA, sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO.109: acAACTCAss GTCAAAATC 60 COTOAOCTOT CTOACTACCT CCTTC AGAT TACCCAGTCA CCGTGGCCTC CAACCTCCAO 120 OACGAGCACC TCTGCGsGGG CCTCTGsCGC CTsGTCCTGa CAC scsCTG OAT-sAacss 180 CTCAAGACTO TCGCTCaOTC CAAGATaCAA ssCTTCCTas ACCGCGTGAA CACGGAOATA 240 CACTTTGTCA CCAAATGTOC CT-TCAGCCC CCCCCCAGCT GTCTTCaCTT CGTCCAGACC 300 AACATCTCCC GCCTCCTGCA COAGACCTCC CACCAGCTCG TCaCaCTGAA CCCCTCCATC 360 ACTCGCCAGA ACTTCTCCCG GTGCCTsGAG CTsCAGTGTC ACCCC 405 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO.110. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD. 420 pares de bases (B) TIPO, ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA, sencilla (D) TOPOLOGÍA: Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO.110. 20 GGTACCCAGO ATTOTTCTTT CCAACACAOC CCCATCTCCT CCGACTTCOC TGTCAAAATC 60 CsTGAGCTGT CTOACTACCT GCTTCAAGAT TACCCAOTCA CCGTGOCCTC CAACCTaCAO 120 GACGAaoAsc TCTscsasss cTGGTCCTsa CACAacacra sATsoAGcss leo CTCAAGACTG TCaCTOOOTC CAAGATsCAA OOCTTOCTCG AsCsCsTGAA CACGGAGATA 240 CACTTTsTCA CCAAATsTCC CTTTCAGCCC CCCCCCACCT GTCTTCGCTT CGTCCAGACC 300 AACATCTCCC GCCTCCTGCA GGAGACCTCC GAGCAGCTGs TasCGCTGAA OCCCTOCATC 360 ACTCsCC--CA ACTTCTCCCC GTGCCTsGAG CTGCAGTCTC AGCCCCACTC CTCAACCCTC 420 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 11 1 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 405 pares de bases (B) TIPO acido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 1 11 ??SS??*00 AsTGTTCTTT CCAACACACC CCCATCTCCT CCGACTTCOC TGTC?AAATC 60 ???5Í°?TGT CTGACTACCT aCTTCAAOAT TACCCAGTCA CCGTGsCCTC ¿?A5SGCA¿ ifó SSSSS00 tcTGCGaGGG ccTCTsacsa ctsatcctos cACAscacTs GATGGAGC8 ?ao r?££2?C!la TcacToaarc CAAGATGCAA OGCTTOCTOG AacscaTOAA CÍCCOAGATA 240 CACTTTsTCA CCAAATsTGC CTTTCAOCCC CCCCCCAOCT CTCTTCCCTT caíccAa??c üSo JíSES-?^ 8CTCCTOCA soAOAccrcc GAGCAGCTGG TaacsSSK GCTC?¿STC lll ACTCGCCAGA ACTTCTCCCG OTOCCTOGAa CTCCAGTGTC AGCCC ¡05 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 112 o (0 CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 420 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 112 OCCACTCAGG A rscTCTTT TCAACACAGC CCCATCTCCT CCGACGGCGC TGTCAAAATC 60 8TGAGC?CÍ cSícTACCT GCTTCAAGAT TACCCAGTCA CCGTGGCCTC CAACCTGCM 120 t?tscossss ccTCToacoa ctsstcctc-s cACAscscTG GAissAscas 180 CTCAAÍ-ACTG TCGCTOGGTC CAAGATGCAA OGCTTOCTaG AOCGCGTGAA CACGGAOATA 210 5 ¿AC?TÍG?CA CCAAATGTGC CTTTCAGCCC CCCCCCAGCT GTCTTCGCTT CGTCCAGACC 300 SC TC?CC GCC-T?CTGCA sOAGACCTCC GAGCAGCTGO TGGCsCTGAA OCCCTOGTC 360 ACTCOCCAGA ÍOTTCTCCCG atocctssAG ctacAa?stc ACCCCOACTC CTCAACCCTC 420 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 113 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 465 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal 0 (XI) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 113 sccsACOAss AacTCTGcss ssaccTCTas cosctGatcc ToacACAscs CTOGATCGAG 60 CGGCTCAAOA ctatcoctss stcc-u«-Ats cAAsscTTsc tsaA0CGcat OAACACGOAO 120 ATACACGTTO TCACCAAATO ToccTTTCAa CCCCCCCCCA actatctt-s CTTCGTCCAG ISO ACCAACATCT CCCOCCTCCT aCAGOAGACC TCCOAGCAOC TOGTGaCsCT OAAOCCCTOO 240 ATCACTCOCC AGAACTTCTC CCX-TCCCTO GAaCTGCAGT CTCAGCCCGA CTCCTCAACC 300 ctstctasA--? OTAACGOATC CGGTsscAAT sGGAscssca GAAATGOAAC ccAGa C sc 360 TCCTTCCAAC ACAOCCCCAT CTCCTCCOAC TTCsCTGTCA AAATCCsTsA OCTGTCTGAC 420 TACCTGCTTC AAGATTACCC ACTCACCCTC OCCTCCAACC TGCAG 465 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 114. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 450 pares de bases (B) TIPO, ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: sencilla (D) TOPOLOGÍA. Lineal (x¡) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO. 114: cccsAcsAGG AGCTCTacas cGsctoatcc TaacACAocs ctssAtsoAs 60 CGGCTCAAGA CTGTCGCTC-G GTCCAAGATG CAAGsCTTGC TaGAGCsCGT GAACACOGAG 120 ATACACTTTG TCACCAAATG TsCCTTTCAG CCCCCCCCCA sCTGTCTTCG CTTCGTCCAG 180 ACCAACATCT CCCGCCTCCT CCACGAGACC TCCCAGCACC TGGTGaCGCT OAAGCCCTCC 240 ATCACTCsCC AGAACTTCTC CCCOTGCCTs OACCTCCACT CTCAGCCCOA CTCCTCAACC 300 CTGTCAGGCG GTAACGGCAG TGGAOGTAAT ssCACCCAss ACTGCTCCTT CCAACACACC 360 CCCATCTCCT CCGACTTCGC TGTCAAAATC CGTGAGCTaT CTOACTACCT CCTTCAAOAT 420 TACCCAGTCA CCGTGOCCTC CAACCTCCAG 450 (2) INFORMACIÓN PAPA SEQ ID NO.115. ^ (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA. (A) LONGITUD: 435 pares de bases (B) TIPO, ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA- sencilla (D) TOPOLOGÍA: Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA. SEQ ID NO:115: accGAcsAss Asctctocss saocctctss cosctsatcc TssCACAsca ctaoAtaaAs eo CssCTCAAGA CTGTCGCTGG GTCCAAOATs CAAGGCTTac TGsAOCsCGT GAACACOGAO 120 ATACACTTTs TCACCAAATs TGCCTTTCAG CCCCCCCCCA GCTGTCTTCG CTTCGTCCAG 180 ACCAACATCT CCCOCCTCCT GCAGGAGACC TCCGAOCAGC TOGTssCsCT OAAacCCTOs 240 ATCACTCOCC AGAACTTCTC CCGGTaCCTO GAGCTOCAaT OTCAGCCCGA CTCCTCAACC 300 ctatctsocs scAAcascAC 360 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:116: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA. (A) LONGITUD: 465 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA- sencilla (D) TOPOLOGÍA: Lineal 20 (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO.116: (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 11 (l) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 450 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 117 CCCTCCAACA TGCAACGCTT CCTCOACCCC GTGAACACsG AGATACACTT TGTCACCAAA 60 TGTGCCTTTC AGCCCCCCCC CAGCTCTCTT CGCTTCCTCC AGACCAACAT CTCCCGCCTC 120 ctscAcaA?A actostssca TCCcsaTccc ststc-AGCcc cccTGTCTss 240 tccsoAoatA 300 sCTOTCAAAA TCCCTOAaCT GTCTGACTAC CTGCTTCAAs ATTACCCAGT CACCCTOGCC 360 TCCAACCTGC AGGACsAGOA aCTCTGCGGG GsCCTCTGsC OGCTCaTCCT OGCACAGCOC 420 TGOATsOAGC GGCTCAAGAC TGTCGCTGOs 450 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 118 n (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 435 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 118 GCCTCCAAGA TGCAAGGCTT aCTOCAaCOC OTOAACACOO AGATACACTT TGTCACCAAA 60 TsTGCCTTTC AGCCCCCCCC CAGCTGTCTT CGCTTCGTCC AGACCAACAT CTCCCGCCTC 120 CTGCAGGAOA CCTCCGAOCA OCTCGTGacO CTGAAGCCCT GGATCACTCa CCAGAACTTC 180 TCCcaaTocc cccTGTCTsa 240 ACsCAOOACT OCTCCTTCCA ACACAGCCCC ATCTCCTCCG ACTTCGCTGT CAAAATCCOT 300 5 aACCTCTCTa ACTACCTOCT TCAAOATTAC CCAGTCACCG TGacCTCCAA CCTaCAaOAC 360 acassssccT crsscsGCTG GTCCTcscAc AGCGCTGsAT sGAscsscTC 420 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 119 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 465 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal 0 (x?) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 119 GCCCCCCCCA CCTGTCTTCG CTTCGTCCAG ACCAACATCT CCCCCCTCCT CCAGGAGACC 60 TCCGAGCAGC TsGTGGCGCT CAACCCCTCG ATCACTCOCC AGAACTTCTC CCGGTGCCTO 120 GAGCTGCACT OTCAGCCCOA CTCCTCAACC CTGTCTCsAG OTAACGCCAC TOCTCGCAAT 180 sGGAsCOsTG GAAATsOAAC CC--GGACTGC TCCTTCCAAC ACAGCCCCAT CTCCTCCCAC 240 sctstctoAc AstcAccots 300 OCCTCCAACC TaCACGACGA GGAGCTCTsC sGOGGCCTCT GGCsGCTaGT CCTGGCAC--G 360 CGCTGsATss CACTCTCGCT GGGTCCAAGA TsCAAGGCTT scTGGAscsc 420 GTOAACACGa AGATACACTT TsTCACCAAA TsTsCCTTTC AGCCC 465 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 120. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA. (A) LONGITUD. 450 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA: Lineal (Xl) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO: 120: GCCCCCCCCA GCTGTCTTCG CTTCGTCCAG ACCAACATCT CCCGCCTCCT --CAGOAGACC 60 TCCGAGCAOC TGGTGGCGCT GAAGCCCTGa ATCACTCGCC AGAACTTCTC CCaOTaCCTC 120 OACCTCCAGT GTCAGCCCGA CTCCTCAACC CTGTCAGsca GTAACGGCAG TGOAsOTAAT 180 GOCACCCAGa ACTCCTCCTT CCAACACACC CCCATCTCCT CCOACTTCCC TOTCAAAATC 240 CGTGAGCTsT CTGACTACCT CCTTCAACAT TACCCAGTCA CCCTOGCCTC CAACCTCCAG 300 GACGAGGAsc TCTGcsssGs ccrcTsscss craaTCCTOG CAc-vscacts sATsoAscss 360 CTCAAGACTG TCGCTGasTC CAAGATCCAA sGCTTsCTGC AGCGCGTC-AA CACGGAsATA 420 CACTTTGTCA ccAA--rstsc CTTTCAGCCC 450 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 121. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD. 435 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: sencilla (D) TOPOLOGÍA. Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO. 121 : GCCCCCCCCA GCTCTCTTCs CTTCOTCCAG ACCAACATCT CCCGCC CCT GCAGGACACC 60 TCCGAGCAGC TGGTGGCGCT GAAGCCCTCO ATCACTCGCC AGAACTTCTC CCCG-TGCCTG 120 GAGCTGCAaT OTCAOCCCOA CTCCTCAACC CTCTCTaOCO OCAACOGCAC aCAGsACTGC 180 TCCTTCCAAC ACAGCCCCAT CTCCTCCGAC TTCOCTOTCA AAATCCGTGA GCTGTCTGAC 240 TACCTGCTTC AAGATTACCC AGTCACCGTG GCCTCCAACC TGCAGOACOA aOAGCTCTGC 300 GGGGsccTCT 0GCGsctGst ccTcacAG a cGCTssATss AscsscTCAA 360 GGsTCCAACA TGCAAGCCTT sCTGGAGCGC GTGAACACGa AOATACACTT TOTCACCAAA 420 TGTGCCTTTC AGCCC 435 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 122: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD.451 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: sencilla (D) TOPOLOGÍA- Lineal (xí) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO: 122: GCCGACGAGO AGCTCTCCC-G sGGCCTCTGG CGGCTGGTCC TGGCACAOCG CTaGATGGAG 60 CGOCTCAAGA CTCTCsCTGG aTCCAAGATC CAAGaCTTCC TCGAGCGCGT aAACACGGAG 120 ATACACTTTO TCACCAAATs TacCTTTCAa CCCCCCCCCA GCTGTCTTCG CTTCGTCCAG 180 ACCAACATCT CCCGCCTCCT GCAOGAGACC TCCOAGCAGC TGsTOCCCCT CAACCCCTOG 2 0 ATCACTCGCC AGAACTTCTC CCOGTGCCTs GAGCTGCAGT GTCAGCCCOA CTCCTCAACC 300 CTOTCTOGAG GTAGTGGATC CsGAssTTCT OGCAACCCAO OACTOCTCCT TCCAACACAG 360 CCCCATCTCC TCCsACTTCC CTaTCAAAAT CCGTOAsCTs TCTGACTACC 420 TTACCCAGTC ACCGTGGCCT CCAACCTGCA G 451 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 123 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 465 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 123 3 accaACGAGG AGCTCTscss soocctctss COGCTGGTCC TsscACAscs cts?AtasAs 60 csacTcAAGA cTGTcccTss OTCCAAGATC CAAGCCTTCC TasAGcscsT OAACACGGAG 120 ATACACTTTG TCACCAAATC TOCCTTTCAG CCCCCCCCCA GCTGTCTTCC CTTCGTCCAG 180 ACCAACATCT CCCGCCTCCT CCAGGAGACC TCCOAOCAGC TsGTssCCCT GAAGCCCTGG 240 ATCACTCsCC AGAACTTCTC CCGOTsCCTG GAGCTGCAGT GTCAGCCCGA CTCCTCAACC 300 CTGTCTGGAs st--GtssATC csatssc--at aaGAGCGsca GATCTOOAAC CCAGGACTGC 360 TCCTTCCAAC ACACCCCCAT CTCCTCCGAC TTCCCTGTCA AAATCCGTGA GCTGTCTGAC 420 TACCTGCTTC AAOATTACCC AGTCACCsTO OCCTCCAACC TOCAO 465 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 124 10 CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 437 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal ( i) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 124 CCATGGCCAC CC--GGACTGC TCCTTCCAAC ACAGCCCCAT CTCCTCCGAC TTCGCTGTCA 60 AAATCCGTGA CCGTCTGAC TACCTGCTTC AAGATTACCC AaTCACCGTs acCTCCAACC 120 TGCAOGACGA GGAGCTCTGC GssGGCCTCT OaCOaCTaOT CCTGGCACAa cccTssATss 180 AscsscTCAA CACTOTCCCT COCTCCAACA TOCAAOCCTT acraGAccac sts-^ACACGs 240 AOATACACT-T TGTCACCAAA TGTOCCTTTC AGCCCCCCCC CAGCTaTCTT CGCTTCGTCC 300 AGACCAACAT CTCCCGCCTC CTGCAGOAsA CCTCCOAGCA sCTssTGGCG CTGAAGCCCT 360 A c GGATCACTCG CCAGAACTTC TCCCGGTGCC TGGAGCTCCA GTGTCAGCCC GACTCCTCAA 420 ' ^ cccTssGcsa 437 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 125 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 436 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal 20 (xO DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 125 GOATCCGOAO OTACCCAGOA CTGCTCCTTC CAACACAGCC CCATCTCCTC CGACTTCaCT 60 OTSAA TH? aíSáSS-c TOACTACCTO CGGCAAGATT ACCCAGCAC 8T8CCTCC 120 AAccTscAss ACGAGOAGCT CTOCOOGOOC ctctsscsoc TGGTCCTsac ACAGCGCTCG 180 £ £ SS-S-Í CGCTOGOTCC AAGATGCAAG GCTTGCTOsA JCOCOTOAAC 240 ACGOAOATAC ACTTTGTCAC CAAATGTGCC TTTCA-3CCCC CCCCCAOCTO TCTTCOCTTC 300 OTCCAOACCA ACATCTCCCG CCTCCTOCAO OAGACCTCCG AscAscTsoT aacacTsAAa 360 8^ATC-A SSCCAC-AA CTTCTCCCGG TGCCTGOAsC TCCAGTGTCA OCCCOACTCC 420 TCAACCCTCT AAGCTT (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 126. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA. (A) LONGITUD 449 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO.126: CCATGGCCAC CCAGGACTsC TCCTTCCAAC ACACCCCCAT CTCCTCCCAC TTCGCTCTCA 60 AAATCCsTOA OCTaTCTGAC TACCTGCTTC AAGATTACCC ACTCACCGTa GCCTCCAACC 120 TGCAOGACOA GsAGCTCTGC sGGGGCCTCT GGCCsCTGsT CCTCGCACAG CGCTGGATss 180 AGCGsCTCAA OACTCTCGCT GCOTCCAACA TGCAAGOCTT sCTGOAGCaC CTGAACACGs 240 ACATACACTT TOTCACCAAA TCTsCCTTTC AGCCCCCCCC CAGCTOTCTT COCTTCaTCC 300 cTscAaoAsA ccTCCOAscA sctostsacc CTGAACCCCT 360 GOATCACTCa CCAOAACTTC TCCCaaTOCC TssAaCTGCA aTOTCACCCC GACTCCTCAA 420 CCCTGCGCCG TOaCTCAOsA asTGOATCC 449 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 127- (l) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA -| o (A) LONGITUD: 439 pares de bases (B) TIPO, ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (x?) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 127: aOATCCGGAG GTOOCACCCA OGACTOCTCC TTCCAACACA OCCCCATCTC CTCCOACTTC 60 OCTsTCAAAA TCCGTOAGCT OTCTOACTAC CTOCTTCAAO ATTACCCAOT CACCsTGGCC 120 TCCAACCTGC AGGACGAGGA GCTCTGCssO sGCCTCTGGC GsCTGGTCCT GGCACAGCGC 180 TOGATGsAGC OGCTCAAGAC TaTCGCTGGG TCCAAQATaC AAGGCTTOCT GGAaCsCsTs 240 AACACOGAGA TACACTTTGT CACCAAATGT GCCTTTCAOC CCCCCCCCAC CTOTCTTCOC 300 TTCOTCCAGA CCAACATCTC CCCCCTCCTO CAGOAOACCT CCGAGCAOCT GGTGGCGCTG 360 AAGCCCTGGA TCACTCGCCA GAACTTCTCC CGsTsCCTGG AOCTGCAGTs TCAGCCCGAC 420 TCCTCAACCC TGTAAGCTT 439 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 128: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD. 461 pares de bases (B) TIPO, ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA. Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO.128: n CCATGGCCAC CCAGGACTGC TCCTTCCAAC ACAGCCCCAT CTCCTCCOAC TTCOCTOTCA 60 --u AAATCcsrsA acraTCTOAC 120 TscAasAcaA saGGsccTCT GscsscTssT ccTsscACAs cactosAtsa 180 AGCGaCTCAA GACTOTCOCT GssTCCAAGA TGCAAGGCTT GCTGGAGCGC GTGAACACGG 240 AGATACACTT TGTCACCAAA TGTGCCTTTC ACCCCCCCCC CAGCTGTCTT CGCTTCGTCC 300 AGACCAACAT CTCCCOCCTC CTOCAGOACA CCTCCOAGCA GCTOOTaGCC CTOAAOCCCT 360 GGATCACTCG CCAGAACTTC TCCCssTGCC TGGAGCTGCA GTOTCAGCCC GACTCCTCAA 420 cccTssscGG TOGOTCAOCA Gstssstc--a a--sstsaAtc c 461 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 129 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 457 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (x?) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 129 5 GOATCCCGAa aTCaCTCACG COaAGOTAGT sGTACCCAGO ACTGCTCCTT CCAACACAGC 60 CCCATCTCCT CCGACTTCGC TGTCAAAATC CsTGAGCTGT CTGACTACCT GCTTCAAGAT 120 TACCCAGTCA CCGTGGCCTC C--ACCTGCAG GACGAGGAGC TCTGCGGGGG CCTCTGGCOG 180 CTCGTCCTGs CACAGCCCTO OATOCAOCCG CTCAAGACTC TCsCTGGCTC CAAGATGCAA 240 ssCTTGCTsG AsCGCGTGAA CACCOAGATA CACTTTCTCA CCAAATGTGC CTTTCAGCCC 300 CCCCCCAGCT GTCTTCaCTT COTCCAGACC AACATCTCCC GCCTCCTGCA GGAGACCTCC 360 GACCAGCTCC TOaCGCTOAA OCCCTGGATC ACTCGCCAGA ACTTCTCCCC CTscCTGGAs 420 CTsCAGTGTC AGCCCOACTC CTCAACCCTO AAOCTT 457 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 130 (l) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA •J O (A) LONGITUD 438 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal ( i) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 130 GCCGACGAGG AOCTCTOCGG GGGCCTCTGG CGGCTGGTCC TGGCACAGCG CTGGATGGAG 60 CGGCTCAAGA CTGTCGCTGa GTCCAAGATG CAAGsCTTGC TGGAGCGCGT GAACACGGAs 120 ATACACTTTG TCACCAAATO TsCCTTTCAO CCCCCCCCCA CCTCTCTTCO CTTCOTCCAO 180 ACCAACATCT CCCGCCTCCT GCAGOAaACC TCCGAGCAOC TOOTaGCOCT CAAOCCCTCG 240 ATCACTCGCC AGAACTTCTC CCGaTGCCTO GAGCTGCAGT OTCAGCCCGA CTCCTCAACC 300 ctaoscssts GATccssAss 360 GACTTCGCTO TCAAAATCCG TGACCTCTCT GACTACCTGC TTCAAGATTA CCCAGTCACC 420 AcciacAs 438 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 131 CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 441 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 131 n Sí--??S?G^sG! AGC CTscss GsaccTCTGs csscrssTcc 60 0 8^?=ÍSS: GtccAA--Ats T(----?cS-CT GAAc S-S ATACACTTTs TCACCAAATs TsCCTTTCAO CCCCCCCCCA OCTOTCTTCO CT 8TCC-S 120 180 ???^?^CT 88CTCCT GCAGGAGACC TCCGAGCAGC Gs?aá?sCT SÍS8^ 240 i?S^??8 *=?cttctc ccsaTsccTa cSS¿£-8 300 ?8Í?810 8CCCGC-AC-G TGGCACCCAG OACTGCTCCT TCCAACACM CCcS?c?8 360 SGS I-S?S?SS CCGTGAGCTa TCTOACTACC TGCTTCA^ SgSS£ ll (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 132 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 450 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 132 cccsACGAos AscTCTGCGs acaccTCTas TsacACAGcs ctasAtaaA? 60 csscTCAAOA ct<-tcsctsa TaoAscscGT sAACAcsaAs 120 ATACACTTTO TCACCAAATO TsCCTTTCAO CCCCCCCCCA GCTGTCTTCG CTTCGTCCAG 180 cccoccTccT scAssAsAcc tsstsscs-t OAAGCCCTss 240 ATCACTCGCC AGAACTTCTC CCGGTGCCTG GAGCTGCAGT GTCAGCCCaA CTCCTCAACC 300 crsaaccGTs GGTCAGGAss asTACccAss 360 CCCATCTCCT CCGACTTCGC TGTCAAAATC CsTOAGCTGT CTCACTACCT GCTTCAAGAT 420 TACCCAGTCA CCOTCOCCTC CAACCTCCAa 450 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 133 o 0) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 459 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 133 OCCOACOAOG AGCTCTsCGG GOOCCTCTOO CGGCTssTCC TOGCACAGCs CTGGATGOAC 60 CGOCTCAAGA CTGTCaCTGs OTCCAAGATC CAAOOCTTac TGaAGCsCGT CAACACCOAC 120 ATACACTTTO TCACCAAATG TOCCTTTCAG CCCCCCCCCA OCTOTCTTCO CTT.CGTCCAG 180 ACCAACATCT CCCOCCTCCT CCAOGAGACC TCCGAGCAGC TGGTascaCT GAAGCCCTGG 240 ATCACTCGCC AOAACTTCTC CCOOTOCCTO GAOCTOCAOT OTCAGCCCGA CTCCTCAACC 300 5 cTssscsaTG TGGCTCAGss 360 CAACACAGCC CCATCTCCTC CGACTTCGCT GTCAAAATCC GTOAOCTaTC TOACTACCTG 420 CTTCAAGATT ACCCAOTCAC COTOOCCTCC AACCTOCAC 459 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 134 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 465 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 134 GCCGACGAGG AGCTCTGCaa OaOCCTCTaa COGCTGOTCC TOGCACAOCa CTGGATGOAO 60 csscTCAAsA CTGTcscTsa TssAscscGT 120 ATACACTTTC TCACCAAATO TsCCTTTCAG CCCCCCCCCA sCTsTCTTCG CTTCGTCCAG 180 ACCAACATCT CCCGCCTCCT GCAGOACACC TCCCAaCACC TaOTCCCCCT GAAOCCCTCO 240 ATCACTCCCC AOAACTTCTC CCssTOCCTG GACCTCCAGT GTCAsCCCGA CTCCTCAACC 300 CTGGGCsGTG sGTCAGGAss TsGGTCAGCA OaTCOATCCC OAGOTaaCAC CCAGOACTOC 360 TCCTTCCAAC ACAGCCCCAT CTCCTCCGAC TTCGCTOTCA AAATCCOTGA OCTGTCTOAC 420 TACCTOCTTC AAGATTACCC AOTCACCGTs OCCTCCAACC TOCAG 465 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 135: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA. (A) LONGITUD. 483 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal ( i) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO.135 GCCGACGAGO AGCTCTGCGG GsGCCTCTGG csGCTGsTCC TsGCACAGCG CTGOATaaAs 60 CGGCTCAAGA CTGTCGCTGG GTCCAAsATC CAACOCTTGC TGsAsCsCCT GAACACOGAG 120 ATACACTTTC TCACCAAATC TGCCTTTCAC CCCCCCCCCA CCTCCCTTCC CTTCOTCCAG 180 ACCAACATCT CCCOCCTCCT aCAasAOACC TCCOAOCAOC TssTGGCGCT OAAOCCCTOO 240 ATCACTCGCC AOAACTTCTC CCOOTOCCTa OAGCTaCAOT GTCAGCCCGA CTCCTCAACC 300 CTasGCGGTG GGTCAGGAGO TGGGTCA--GA GGTsOATCCG GAOOTOaCTC AGa-K-OAGOT 360 AOTaGTACCC AGGACTGCTC CTTCCAACAC AGCCCCATCT CCTCCGACTT CGCTGTCAAA 420 ATCCGTOAGC TGTCTGACTA CCTGCTTCAA OATTACCCAO TCACCsTGGC CTCCAACCTO 480 CAO 483 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 136- (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD: 465 pares de bases (B) TIPO- ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: sencilla (D) TOPOLOGÍA: Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA. SEQ ID NO.136: GCCGATTACC CAGTCACCOT COCCTCCAAC CTGCAGGACs AGGAGCTCTG CGGGasCCTC 60 taacssctso TCCTGOCACA acoctssAts CAGCGGCTCA AGACTGTCGC TssGTCCAAs 120 ATGCAAGGCT TGCTssAGCs CGTGAACACO GAGATACACT TTsTCACCAA ATGTGCCTTT 180 CAGCCCCCCC CCAGCTGTCT TCsCTTCGTC CAGACCAACA TCTCCCGCCT CCTGCAGOAG 240 ACCTCCGAGC AGCIGaTOOC OCT-AAGCCC TGGATCACTC GCCAOAACTT CTCCCOGTGC 300 CTGGACCTsC AGTOTCAOCC CGACTCCTCA ACCCTGGsCa sTGGsTCAGG AGsTOGGTCA 360 GGAaGTGGAT CCaGAGGTGa CACCCAGGAC TOCTCCTTCC AACACAGCCC CATCTCCTCC 420 GACTTCGCTG TCAAAATCCG TGAGCTsTCT GACTACCTGC TTCAA 465 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 137: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA. (A) LONGITUD: 465 pares de bases (B) TIPO, ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xO DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:137: sccaccrccA ACCTacAGGA CCACOACCTC TscGGoaGcc TCTsscascT ssTCCTsscA 60 CAGCGCTGGA TGGAGCGsCT CAAGACTGTC GCTGGGTCCA AGATOCAAOO CTTGCTGsAG 120 CsCGTGAACA CGGAGATACA CTTTGTCACC AAATGTGCCT TTCAGCCCCC CCCCAGCTOT 180 CTTcscTTcs TCCAGACCAA CATCTCCCGC ctcc--scAas AGACCTCCOA scAG--tsats 24o GCGCTOAAGC CCTGGATCAC TCGCCAGAAC TTCTCCCGGT GCCTCOAOCT CCACTCTCAG 300 CCCGACTCCT cAAcccTcca csGTssaTCA GGA0Gtssat CAaaAssGG ATCCGGAGGT 360 GGCACCCAGG ACTGCTCCTT CCAACACAOC CCCATCTCCT CCGACTTCGC TOTCAAAATC 420 CGTGAGCTGT CTGACTACCT GCTTCAAGAT TACCCAGTCA CCGTG 465 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 138: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD: 465 pares de bases (B) TIPO, ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (XI) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO:138: GCCGTCsCTG GOTCCAAGAT sCAAGGCTTG CTCGAGCCCa TGAACACGGA GATACACTTT 60 GTCACCAAAT CTaCCTTTCA CCCCCCCCCC ACCTaTCTTC OCTTCOTCCA CACCAACATC 120 TCCCsCCTCC TsCssAsAC CTCCGAC-CAs CTCCTOaCGC TGAAsCCCTC CATCACTCCC 180 CAGAACTTCT cccsGTsccT ssAOCTscAs TGTCAGCCCG ACTCCTCAAC ccraasccaT 240 ssaTCAssAO otasstcAss AoatssAtcc saAGatss--A CCCACGACTC CTCCTTCCAA 300 CACAGCCCCA TCTCCTCCCA CTTCOCTOTC AAAATCCCTs AGCTCTCTGA CTACCTGCTT 360 CAAOATTACC CAGTCACCGT GOCCTCCAAC CTGCAGGACG AGGAGCTCTG CGCK-GGCCTC 420 T--GCGGCTGG TCCTOaCACA aCGCTGGATG GAGCGGCTCA AOACT 465 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 139: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 465 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA: Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA- SEQ ID NO.139: sccrccAAGA TscAAaacTT scTGGAscsc GTGAACACGG AGATACACTT TCTCACCAAA 60 TGTGCCTTTC OCCCCCCCC CAGCTGTCTT CGCTTCGTCC AGACCAACAT CTCCCGCCTC 120 CTsCAGOAGA CCTCCGAGCA GCTGGTGGCG CTGAAGCCCT GGATCACTCG CCAGAACTTC 180 TcccsaTscc TGGAGCTGCA GTOTCAGCCC GAC CCTCAA CCCTGGGCGG GGGTCAGGA 240 GGTsaaTCAs s--sstssAtc cGGAsstosc ACC(_AGGACT CCTCCTTCCA ACACACCCCC 300 ATCTCCTCCG ACTTCGCTOT CAAAATCCsT sAGCTsTCTG ACTACCTGCT TCAACATTAC 360 cc--atcAcca TGOCCTCCAA CCTOCAOGAC sAaGAGCTCT scGssssccT ctsocsscta 420 aTCCTaacAC Ascs rsGAT aoAscssctc AAGACTOTCO CTGGO 465 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 140: (l) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA. (A) LONGITUD. 465 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: sencilla (D) TOPOLOGÍA. Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:140: OCCCCCCCCA aCTOTCTTCa CTTCOTCCAG ACCAACATCT CCCOCCTCCT GCAOGAGACC 6O TCCOAOCACC TsGTsacscT GAAscccTsa ATCACTCOCC AOAACTTCTC ca-otsccts 120 s-«-ctscAst GTCAOCCCGA CTCCTCAACC CTGsscGGTG saTCAosAso tasstcAs?A ißo sGTGGATCCG GAaGTGGCAC CCAGOACTsC TCCTTCCAAC ACAGCCCCAT CTCCTCCOAC 240 TTcsTaTA AAATCCGTOA GCTGTCTOAC TACCTGCT C AAGATTACCC AOTCACCGTG 300 aCCTCCAACC TGCAGGACGA GGAX--CTCTGC asGGGCCTCT sGCGaCTGGT CCTGGCACAG 360 CGCTOaATOa AGCCGCTCAA sACTGTCGCT GGGTCCAAGA TaCAAGsCTT GCTGOAGCsC 420 sTGAACACss AGATACACGT TaTCACCAAA TsTGCCTTTC AOCCC 465 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 141 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD: 465 pares de bases (B) TIPO, ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: sencilla (D) TOPOLOGÍA- Lineal (Xl) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO.141 • acccscTTca TCCAGACCAA CATCTCCCOC CTCCTOCAGG AGACCTCCOA GCAacTasTa 60 GCGCTGAAGC CCTGGATCAC TCGCCAGAAC TTCTCCCGCT OCCTCGAGCT CCAOTaTCAO 120 CAACccTsss caatsoatcA soAsstssst CAaGAGGTss oacAcccAaa TGTCAAAATC 240 CsTGAsCTaT CTsACTACCT sCTTCAAOAT TACCCAaTCA CCsTsGCCTC 300 G-AcsAasAGC TCTacassss ccTCTGGcsa CTCGTCCTsc CACACCCCTC CATCCACCCC 360 CTCAAOACTO TCCCTOOOTC CAAGATOCAA GsCTTGCTGG AacacaTOAA CACOsAsATA 420 CACTTTGTCA CCAAATGTOC CTTTCAsCCC CCCCCCACCT GTCTT 465 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 142. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD. 465 pares de bases (B) TIPO, ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: sencilla (D) TOPOLOGÍA. Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA- SEQ ID NO.142. OCCACCAACA TCTCCCGCCT CCTGCAGaAs ACCTCCGAGC AGCTOGTsaC GCTGAAGCCC 60 TGGATCACTC GCCACAACTT CTCCCGGTsC CTGOAOCTGC AGTGTCAGCC COACTCCTCA 120 AcccTsaaca oaAoatsc-At ccGQAGGTGa 180 TGCTCCTTCC AACACACCCC CATCTCCTCC OACTTCCCTC TCAAAATCCC TCACCTCTCT 240 CACTACCTOC TTCAAGATTA CCCAGTCACC GTGGCCTCCA ACCTGCAsOA CGAsOAsCTC 300 Tacasasscc tctsocssct saTCCTsscA CAacoctssA TssAscsscT 360 GCTsaGTCCA AGATGCAAGC CTTGCTssAG CCCGTsAACA CGGAGATACA CTTTsTCACC 420 AAATsTOCCT TTCAOCCCCC CCCCAOCTOT CTTCOCTTCa CCAO 465 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 143: 0) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA. (A) LONGITUD. 134 aminoácidos (B) TIPO: aminoácidos (C) TIPO DE CADENA: sencilla (D) TOPOLOGÍA: Lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA. Ninguno (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO.143: Thr sln Asp Cys Ser Phe sln His ser Pro He Ser Ser Asp Phe Ala 1 5 10 15 Val Lys He Arg slu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu aln Asp Tyr Pro Val 20 25 30 Thr Val Ala Ser Asn Leu aln Asp Glu Glu Leu Cys Gly Gly Leu Trp 40 45 Arg Leu Val Leu Ala Gln Arg Trp Met slu Arg Leu Lys Thr Val Ala 50 55 60 sly Ser Lys Met sln sly Leu Leu Clu Arg val Asn Thr Clu He Hxs 65 70 75 80 Phe Val Thr Lys Cys Ala he cln Pro Pro pro Ser Cys Leu Arg Phe 85 90 95 Val Gln Thr Asn He Ser Arg Leu Leu Oln Clu Thr Ser Glu Gln Leu 100 IOS 110 Val Ala Leu Lys Pro Trp He Thr Arg sln Asn Phe Ser Arg Cys Leu 115 120 125 c slu Leu aln Cys Gln Pro ° 130 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 144 (I) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 139 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (n) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno 0 (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 144 Thr Gln Asp Cys Ser Phe Gln His Ser Pro He Ser Ser Asp he Ala 1 5 10 15 Val Lys He Arg slu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu oln Asp Tyr pro Val 25 30 Thr Val Ala Ser Asn Leu aln Asp Clu Glu Leu Cys Gly sly Leu Trp 40 45 Arg Leu Val Leu Ala Gln Arg Trp Met Glu Arg Leu Lye Thr val Ala 50 55 60 Gly Ser Lye Met Gln Gly Leu Leu Glu Arg val Asn Thr Glu xle --xs 65 70 75 80 Phe Val Thr Lys Cys Ala Phe Gln Pro Pro Pro Ser Cys Leu Arg Phe 85 90 95 c Val sln Thr Asn He Ser Arg Leu Leu Gln Glu Thr Ser Glu Gln Leu ? 100 105 110 Val Ala Leu Lys Pro Trp He Thr Arg Gln Asn Phe Ser Arg cys Leu 115 120 125 slu Leu sln Cys Gln Pro Asp Ser Ser Thr Leu 130 135 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 145 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 209 aminoácidos (B) TIPO aminoácidos (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal 0 (II) TIPO DE MOLÉCULA Ninguno (Xl) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 145 Thr Gln Asp Cys Ser Phe aln Hxs Ser Pro He Ser Ser Asp Phe Ala 1 5 10 15 Val Lys He Arg alu Leu Ser Asp Tyr Leu Leu sln Asp Tyr Pro Val 20 25 30 Thr Val Ala Ser Asn Leu Gln sp Glu Glu Leu cys Gly sly Leu T-rp 35 40 45 Arg Leu Val Leu Ala Cln Arg Trp Met alu Arg Leu Lys Thr Val Ala 50 55 60 aly Ser Lys Met Oln Gly Leu Leu Glu Arg Val Asn Thr Glu He His 65 70 75 80 Phe Val Thr Lys Cys Ala Phe Gln Pro Pro Pro Ser cys Leu Arg Phe 85 90 95 Val Gln Thr Asn He Ser Arg Leu Leu Gln Glu Thr Ser Glu Gln Leu 100 105 110 Val Ala Leu Lys Pro Trp He Thr Arg Gln Asn Phe Ser Arg Cys Leu 115 120 125 Glu Leu Gln Cys Gln Pro Asp Ser Ser Thr Leu Pro Pro Pro Trp Ser 130 135 140 Pro Arg Pro Leu slu Ala Thr Ala Pro Thr Ala Pro sln Pro Pro Leu 145 150 155 160 Leu Leu Leu Leu Leu Leu Pro Val Gly Leu Leu Leu Leu Ala Ala Ala 165 170 175 Trp cys Leu Hxs Trp sln Arg T r Arg Arg Arg Thr Pro Arg Pro sly 180 185 190 Glu Gln Val Pro Pro Val Pro Ser Pro Gln Asp Leu Leu Leu Val Glu 195 200 205 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO 146 (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 402 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 146 ACCCAGGACT GCTCCTTCCA ACACAGCCCC ATCTCCTCCG ACTTCaCTGT CAAAATCCGT 60 GAGCTGTCTG ACTACCTGCT TCAAOATTAC CCAGTCACCs TsOCCTCCAA CCTaCAGGAC 120 OAGGAsCTCT GCGGGOsCCT CTGGCGGCTs sTCCTGGCAC AGCGCTOGAT GOAOCaaCTC 180 AAGACTCTCG CTGGGTCCAA GATGCAAGCC TTCCTCC-AaC GCCTOAACAC GGAGATACAC 240 TTTGTCACCA AATGTGCCTT TCAGCCCCCC CCCAOCTGTC TTCCCTTCCT CCAGACCAAC 300 ATCTCCCOCC TCCTGCAGsA GACCTCCGAG CAGCTGGTsG CGCTGAAGCC CTGGATCACT 360 COCCAGAACT tc-tcccssta cctsoAacts CAGTGTCAGC ce 02 (2) INFORMACIÓN PAFA SEQ ID NO 147 (I) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA (A) LONGITUD 630 pares de bases (B) TIPO ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal (XI) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO 147 ACCCAOGACT GCTCCTTCCA ACACAGCCCC ATCTCCTCCG ACTTCGCTGT CAAAATCCGT 60 GACCTsTCTs ACTACCTGCT TCAAsATTAC CCAGTCACCa TGGCCTCCAA CCTGCAGGAC 120 OACGAGCTCT GCGGGGGCCT CTGGCGsCTs GTCCTGGCAC AGCGCTGGAT OGAGCCGCTC 180 AAGACTGTCG CTOGGTCCAA GATGCA-W-GC TTOCTGGAGC GCGTOAACAC GGAGATACAC 240 TTTGTCACCA AATGTGCCTT TCAGCCCCCC CCCAGCTGTC TTCGCTTCOT CCAGACCAAC 300 ATCTCCCGCC TCCTGCAGGA GACCTCCGAG CAGCTGGTOG CGCTGAAGCC CTGGATCACT 360 CGCCAGAACT TCTCCCGCTC CCTsGAGCTG CAGTGTCAGC CCGACTCCTC AACCCTOCCA 420 CCCCCATCGA GTCCCCGGCC CCTGGAGGCC ACAGCCCCGA CACCCCCGCA GCCCCCTCTG 480 TGCTGCTscc csTGssccTC cTGCTGCTss 540 TCsCAOAGGA CGCaGCCOAG OACACCCCCC CCTGGGGAGC AsaTGCCCCC CGTCCCCAGT 600 CCCCAGOACC TGCTGCTTGT GOAOCACTOA 630 16 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO. 148: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD 29 aminoácidos (B) TIPO: aminoácidos (C) TIPO DE CADENA: sencilla (D) TOPOLOGÍA. Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO.148: 5 - Oly sly sly Ser sly Oly aly Ser aly aly sly Ser sly aly Gly Ser 1 5 10 15 aly Gly Gly Ser aly Gly Gly Ser Gly sly sly Ser sly 20 25 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 149. (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA. (A) LONGITUD. 21 aminoácidos (B) TIPO: aminoácidos (C) TIPO DE CADENA, sencilla (D) TOPOLOGÍA Lineal 10 (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:149. Pro Pro Pro Trp Ser Pro Arg Pro Leu Gly Ala Thr Ala ro Thr Ala 1 5 10 15 aly Cln Pro Pro Leu 20 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 150: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 15 aminoácidos (B) TIPO: aminoácidos < (C) TIPO DE CADENA, sencilla (D) TOPOLOGÍA: Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO:150. Pro Pro Pro Trp Ser Pro Arg Pro Leu Gly Ala Thr Ala Pro Thr 1 5 10 15 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 151 : (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA- 20 (A) LONGITUD: 16 aminoácidos (B) TIPO: aminoácidos (C) TIPO DE CADENA, sencilla (D) TOPOLOGÍA: Lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:151 : Val Glu Thr Val Phe His Arg Val Ser Gln Asp Gly Leu Leu Thr Ser 1 5 10 15

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Un polipéptido agonista de receptor flt3 de humano, caractepzado porque comprende una secuencia de aminoácidos modificada de ligando flt3, que corresponde a SEQ ID No: 144, en donde los aminoácidos 1 a 7 son suprimidos opcionalmente del extremo C de dicho polipéptido agonista de receptor flt3 de SEQ ID No: 144; en donde el extremo N está unido al extremo C directamente o a través de un enlazador capaz de unir el extremo N con el extremo C, y teniendo nuevos extremos C y N en los aminoácidos: 28-29; 29-30; 30-31 ; 31-32; 32-33; 34-35; 36-37; 37-38; 38-39; 39-40; 40-41 ; 42-43; 64-65; 65-66, 66-67; 86-87; 87-88; 88-89; 89-90; 90-91 ; 91-92; 92-93; 93-94; 94-95; 95-96; 96-97, 97-98; 98-99; 99-100; 100-101 ; 101-102; 102-103, respectivamente; y adicionalmepte dicho nuevo extremo N de dicho polipéptido agonista de receptor flt3 va opcionalmente precedido de inmediato por (metionina"1), (alanina"1) o (metionina"2, alanina"1). 2.- El polipéptido agonista de receptor flt3 de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque dicho enlazador se selecciona del grupo que consiste de: SEQ ID No:38; SEQ ID No:39; SEQ ID No:40; SEQ ID No:41 ; SEQ ID No:42; SEQ ID No:43; SEQ ID No:44; SEQ ID No:45; SEQ ID No:46; SEQ ID No:47; SEQ ID No:48; SEQ ID No:49; SEQ ID No:50; SEQ ID

No:51 ; SEQ ID No:52; SEQ ID No:53; SEQ ID No:54; SEQ ID No:55; SEQ ID No:56; SEQ ID No:148; SEQ ID No:149; SEQ ID No:150 y SEQ ID No:151.

3.- El polipéptido agonista de receptor flt3 de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque se selecciona del grupo que consiste de: SEQ ID No:8; SEQ ID No:9; SEQ ID No:10; SEQ ID No:11 ; SEQ ID No:12; SEQ ID No:13; SEQ ID No:14; SEQ ID No:15; SEQ ID No:16; SEQ ID No:31 ; SEQ ID No:32; SEQ ID No:33; SEQ ID No:34; SEQ ID No:35; SEQ ID No:36 y SEQ ID No:37.

4.- Una molécula de ácido nucleico, caracterizada porque comprende una secuencia que codifica para el polipéptido agonista de receptor flt3 de conformidad con la reivindicación 1.

5.- La molécula de ácido nucleico, caracterizada además porque comprende una secuencia que codifica para el polipéptido agonista de receptor flt3 de conformidad con la reivindicación 2.

6.- La molécula de ácido nucleico, caracterizada además porque comprende una secuencia que codifica para el polipéptido agonista de receptor flt3 de conformidad con la reivindicación 3.

7.- La molécula de ácido nucleico, caracterizada además porque comprende una secuencia que codifica para el polipéptido agonista de receptor flt3 de conformidad con la reivindicación 6, seleccionado del grupo que consiste de: SEQ ID No:113; SEQ ID No:114; SEQ ID No:115; SEQ ID No:116; SEQ ID No:117; SEQ ID No:118; SEQ ID No:119; SEQ ID No:120; SEQ ID No:121; SEQ ID No:136; SEQ ID No:137; SEQ ID No:138; SEQ ID No:139; SEQ ID No:140; SEQ ID No:141 y SEQ ID No:142.

8.- Un método para producir un polipéptido agonista de receptor flt3, caracterizado porque comprende: desarrollar bajo condiciones nutritivas adecuadas, una célula hospedera transformada o transfectada con un vector replicable que comprende dicha molécula de ácido nucleico de conformidad con las reivindicaciones 4, 5, 6 ó 7, de tal forma que permita la expresión de dicho polípéptido agonista de receptor fit3 y la recuperación del mismo.

9.- Una composición, caracterizada porque comprende: un polipéptido de conformidad con las reivindicaciones 1 , 2, 3, ó 4; y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

10.- La composición, caracterizada además porque comprende: un pollpéptido de conformidad con las reivindicaciones 1 , 2, 3, ó 4; un factor seleccionado del grupo que consiste de: un factor estimulante de colonias, una citocina, una linfocina, una interleucina y un factor de crecimiento hematopoyético, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

11.- La composición de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada además porque dicho factor se selecciona del grupo que consiste de: GM-CSFy G-CSF, ligando c-mpl, M-CSF, IL-1 , IL-4, IL-2, IL-3, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11 , IL-12, IL-13, IL-15, LIF, ligando flt3/flk2, hormona del crecimiento humano, factor de crecimiento de células B, factor de diferenciación de células B, EPO y factor de diferenciación de eosinófilos; variantes de IL-3, proteínas de fusión, agonistas de receptor G-CSF, agonistas de receptor c-mpi, agonistas de receptor IL-3, agonistas de receptor multifuncionales; y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

12.- El uso del polipéptido de conformidad con las reivindicaciones 1 , 2, 3 0 4, para la fabricación de una composición para estimular la producción de células hematopoyéticas en un paciente.

13.- El uso de la composición de conformidad con las reivindicaciones 9, 10 u 11 , para la fabricación de un medicamento para estimular la producción de células hematopoyéticas en un paciente.

14.- Un método para la expansión ex vivo selectiva de células madre, caracterizado porque comprende los pasos de: (a) separar células hematopoyéticas de otras células; (b) cultivar dichas células hematopoyéticas separadas en un medio de cultivo que comprenda: el polipéptido de conformidad con las reivindicaciones 1, 2, 3, ó 4; y (c) cosechar dichas células cultivadas.

15.- El método para la expansión ex vivo selectiva de células hematopoyéticas, caracterizado además porque comprende los pasos de: (a) cultivar dichas células hematopoyéticas en un medio de cultivo que comprende: la composición de conformidad con las reivindicaciones 9, 10 u 11 ; y (b) cosechar dichas células cultivadas.

16.- El método para la expansión ex vivo selectiva de células hematopoyéticas, caracterizado además porque comprende los pasos de: (a) separar las células hematopoyéticas de otras células; (b) cultivar dichas células hematopoyéticas separadas en un medio de cultivo que comprenda: la composición de conformidad con las reivindicaciones 9, 10, u 11 ; y (c) cosechar dichas células cultivadas.

17.- El uso de un cultivo de células cosechadas separadas de conformidad con la reivindicación 14, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un paciente que sufre de un trastorno hematopoyético.

18.- El uso de un cultivo de células cosechadas separadas de conformidad con la reivindicación 15, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un paciente que sufre de un trastorno hematopoyético.

19.- El uso de un cultivo de células cosechadas transducidas con ADN que comprende un poiipéptido de conformidad con las reivindicaciones 1 , 2, 3 64, para la fabricación de un medicamento para terapia génica humana.

20.- El uso de un cultivo de células cosechadas, separadas y transducldas con ADN que comprende la composición de conformidad con las reivindicaciones 9, 10 u 11 , para la fabricación de un medicamento para terapia génica humana.

21.- Un método para la producción de células dendríticas, caracterizado porque comprende los pasos de: (a) separar células progenltoras hematopoyéticas o células CD34+; y (b) cultivar dichas células progenitoras hematopoyéticas o células CD34+ en un medio de crecimiento que comprende los agonistas de receptor flt3 de conformidad con las reivindicaciones 1 , 2, 3, ó 4.

22.- El método de conformidad con la reivindicación 21 , caracterizado además porque comprende el paso de: (c) pulsar dichas células progenitoras hematopoyéticas o células CD34+ cultivadas con un antígeno.

23.- El método de conformidad con la reivindicación 21 , caracterizado además porque dicho medio de crecimiento comprende además: uno o más factores seleccionados del grupo que consiste de: GM-CSF, IL-4, FNT-a, factor de células madre (SCF), ligando flt3, IL-3, una variante de IL-3, una proteína de fisión de la variante IL-3, y un agonista de receptor muitifuncional.

24.- El uso de los agonistas de receptor fit3 de conformidad con las reivindicaciones 1 , 2, 3 ó 4, para la fabricación de un medicamento para tratar a un humano que sufre de un tumor, infección o enfermedad autoinmune.

25.- El uso de conformidad con la reivindicación 24, en donde dichos agonistas de receptor flt3 comprenden además: uno o más factores seleccionados del grupo que consiste de: GM-CSF, IL-4, FNT-a, factor de células madre (SCF), ligando flt3, IL-3, una variante de IL-3, una proteína de fusión de la variante IL-3, y un agonista de receptor multifuncional.

26.- El uso de conformidad con las reivindicaciones 24 o 25, en donde dichos agonistas de receptor flt3 comprenden un antlgeno.

27.- El uso de progenitores de células dendríticas o células dendríticas maduras movilizadas con los agonistas de receptor flt3 de conformidad con las reivindicaciones 1 , 2, 3 ó 4, para la fabricación de un medicamento para tratar a un humano que sufre de un tumor, infección o enfermedad autoinmupe, en donde dichos precursores de células dendríticas o células dendríticas maduras son pulsados con un antígeno.

28.- El uso de conformidad con la reivindicación 27, en donde los factores de movilización se seleccionan del grupo que consiste de: GM-CSF, IL- 4, FNT-a, factor de células madre (SCF), ligando flt3, IL-3, una variante de lL-3, una proteína de fusión de la variante IL-3, y un agonista de receptor multifunciopai.

29.- El uso de conformidad con la reivindicación 27, en donde los precursores de células dendríticas o células dendríticas maduras son cultivados en un medio de crecimiento que comprende los agonistas de receptor flt3 de conformidad con las reivindicaciones 1 , 2, 3 ó 4.

30.- El uso de conformidad con la reivindicación 29, en donde dicho medio de crecimiento comprende además uno o más factores seleccionados del grupo que consiste de: GM-CSF, IL-4, FNT-a, factor de células madre (SCF), ligando flt3, IL-3, una variante de IL-3, una proteína de fusión de la variante IL-3, y un agonista de receptor multifuncional.

31.- El uso de células progenitoras hematopoyéticas o células CD34+ cultivadas en un medio de crecimiento que comprende los agonistas de receptor flt3 de conformidad con las reivindicaciones 1 , 2, 3 ó 4, para producir precursores de células dendríticas o células dendríticas maduras, para la fabricación de un medicamento para tratar a un humano que sufre de un tumor, infección o enfermedad autoinmune.

32.- El uso de conformidad con la reivindicación 31, en donde los precursores de células dendríticas o células dendríticas maduras son pulsados con un antígeno.

33.- El uso de conformidad con la reivindicación 31 , en donde dichas células progenitoras hematopoyéticas o células CD34+ son separadas de las otras células antes de su cultivo.

34.- El uso de conformidad con la reivindicación 32, en donde dichas células progenitoras hematopoyéticas o células CD34+ se separan de otras células antes de su cultivo.

35.- El uso de conformidad con la reivindicación 31 , en donde dicho medio de cultivo comprende además uno o más factores seleccionados del grupo que consiste de: GM-CSF, IL-4, FNT-a, factor de células madre (SCF), ligando flt3, IL-3, una variante de IL-3, una proteína de fusión de la variante IL-3, y un agonista de receptor multifuncional.

36.- El uso de conformidad con la reivindicación 32, en donde dicho medio de cultivo comprende además uno o más factores seleccionados del grupo que consiste de: GM-CSF, IL-4, FNT-a, factor de células madre (SCF), ligando fit3, IL-3, una variante de IL-3, una proteína de fusión de la variante IL-3, y un agonista de receptor multifuncional.

37.- El uso de conformidad con la reivindicación 33, en donde dicho medio de cultivo comprende además uno o más factores seleccionados del grupo que consiste de: GM-CSF, IL-4, FNT-a, factor de células madre (SCF), ligando flt3, IL-3, una variante de IL-3, una proteína de fusión de la variante IL-3, y un agonista de receptor multifuncional.

38.- El uso de conformidad con la reivindicación 34, en donde dicho medio de cultivo comprende además uno o más factores seleccionados del grupo que consiste de: GM-CSF, IL-4, FNT-a, factor de células madre (SCF), ligando flt3, IL-3, una variante de IL-3, una proteína de fusión de la variante IL-3, y un agonista de receptor multifuncional.