PL185105B1 - Frakcja rybosomalna i kompozycja ją zawierająca - Google Patents

Abstract

1. Frakcja rybosomalna, znamienna tym, ze jest preparowana z co najmniej jednego gatunku niefotosyntetyzujacej bakterii nitkowatej. 5. Kompozycja kosmetyczna lub farmaceutyczna zawierajaca substancje aktywna w kosmetycznie lub farmaceutycznie dopuszczalnym nosniku, znamienna tym, ze jako substancje aktywna zawiera co najmniej jedna frakcje rybosomalna otrzymywana z co najmniej jednego gatunku niefotosyntetyzujacej bakterii nitkowatej. PL PL PL

Description

Obecny wynalazek dotyczy frakcji rybosomalnej otrzymanej z co najmniej jednego gatunku niefotosyntetyzującej bakterii nitkowatej (filamentous).

Rybosomy są organellami subkomórkowymi o wielkości 140 do 230 angstremów składającymi się z kwasów rybonukleinowych połączonych z białkami i są one obecne w komórkach wszystkich organizmów, a w szczególności u bakterii. Rybosomy są miejscem złożonych reakcji umożliwiających syntezę białek dzięki obecności wieloenzymatycznych kompleksów wchodzących w ich skład.

U organizmów prokariotycznych, rybosomy wykazują stałą sedymentacji rzędu 70 S (svedberg: jednostka międzynarodowa wyrażająca szybkość opadania cząstek poddanych wirowaniu w warunkach standardowych).

Morfologicznie, rybosomy podzielone są na dwie podjednostki różnej wielkości przez szczelinę, która przebiega prostopadle do długiej osi rybosomu. Te dwie podjednostki mają stałą sedymentacji rzędu, kolejno, 50 S i 30 S. Podjednostka 50 S zawiera dwa kwasy nukleinowe o stałych sedymentacji kolejno 23 S i 5 S oraz około 30 białek, podczas gdy podjednostka 30 S zawiera kwas rybonukleinowy 16 S i około dwudziestu białek.

Jest zrozumiałe, że wyrażenie „frakcja rybosomalna” odnosi się do frakcji wzbogaconej w rybosomy uzyskanej z medium, które można otrzymać, na przykład w wyniku wirowania, przez rozdział różnych organelli zawartych w komórkach organizmu.

Bez względu na stopień czystości, frakcja rybosomalna może zatem zawierać albo co najmniej jeden kompletny rybosom albo co najmniej jeden element składowy rybosomu albo też element składowy jednej z podjednostek rybosomu.

Obecnie, frakcje rybosomalne są wykorzystywane na przykład w kosmetyce do sporządzania kompozycji opóźniających proces starzenia się skóry, poprzez stymulację wzrostu komórek oraz modulację dojrzewania tkanki łącznej (EP-A-631773). W medycynie znane są

185 105 kompozycje przeznaczone do wzmagania obrony immunologicznej, w szczególności u pacjentów cierpiących z powodu rozległych oparzeń, którzy są w następstwie tego narażeni na oporne zakażenia bakteryjne, wirusowe lub grzybicze (WO 91/11174) lub u pacjentów z chorobami obszaru otorynolaryngologicznego (FR 2253499, FR 2360314, FR 2388563, FR 2674755 oraz ZA 8801071) lub z alergiami (US 4946945). Frakcje rybosomalne są także wykorzystywane do sporządzania adjuwantów do szczepionek (FR 2374911 i DE 1617809). W ogólności, frakcje rybosomalne wykorzystywane w tych wynalazkach otrzymywane są z bakterii gram-negatywnych, na przykład, z bakterii z rodziny Enterobacteriaceae (np. Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Serratia marcessens), lub z rodziny Pasteurellaceae (np. Haemophilus influenzae), albo też z bakterii gram-pozytywnych, na przykład z bakterii z rodziny Bacillus (np. Bacillus subtiiis) albo z rodziny Streptococcaceae (np. Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes Gr. A) lub z rodziny Lactobacillaceae (np. Acidophilus, bifidum) lub z drożdży, na przykład z Candida albicans lub Candida tropicalis.

Chociaż frakcje rybosomalne otrzymywane według procedur ze stanu techniki są zadowalające, niemniej jednak wydaje się korzystne zbadanie nowych frakcji rybosomalnych otrzymanych z organizmów, które jak dotąd nie były wykorzystywane w tej dziedzinie.

Jednym z celów tego wynalazku jest zaproponowanie nowej frakcji rybosomalnej, która może być wykorzystana w co najmniej jednej dziedzinie spośród omówionych wyżej lub, co możliwe, w nowych dziedzinach.

Przedmiotem tego wynalazku jest zatem, jako nowy produkt, frakcja rybosomalna charakteryzująca się tym, że jest preparowana z co najmniej jednego gatunku niefotosyntetyzującej bakterii nitkowatej.

Jak to przedstawiono wyżej, ze względu na stopień czystości frakcja rybosomalna może zawierać albo co najmniej jeden kompletny rybosom albo co najmniej jeden element składowy rybosomu albo też element składowy jednej z podjednostek rybosomu.

System immunologiczny obejmuje układ wyspecjalizowanych komórek, które poddane są wielu kontrolnym mechanizmom zapewniającym im odnowę, aktywację i różnicowanie co jest niezbędne do utrzymania normalnego poziomu obrony immunologicznej. Zadaniem systemu immunologicznego jest rozróżnianie swoistych i obcych elementów, aby eliminować patogenne czynniki i samoistnie powstające komórki nowotworowe. Każdy spadek ilości komórek, każda choroba immunologiczna lub każda niewydolność funkcji prowadzi do nasilenia pojawiania się objawów patologicznych charakteryzujących się zakłóceniami mechanizmów immunologicznych w rozpoznawaniu swoistych i obcych elementów oraz zwiększoną wrażliwością na zakażenia mikroorganizmami oraz możliwością zachodzenia procesów nowotworowych.

Skóra jest najważniejszym układem organizmu i wiadomo, że jest ona pośród najbardziej czynnych składników systemu obrony immunologicznej organizmu. Trzy rodzaje komórek skóry biorą udział w tym systemie: keratocyty, melanocyty oraz komórki Langerhansa. Komórki te występujące wyłącznie w skórze odgrywają istotną rolę w reakcji immunologicznej, a w szczególności w prezentacji antygenu.

Zdrowa skóra sama ma zdolność bronienia się przed zewnętrzną inwazją wirusów za pomocą środków, które zawiera. Niemniej jednak, skóra narażona jest na ciągłe oddziaływania ze strony środowiska, przez środki chemiczne oraz przez promieniowania. Komórki Largenhansa są w szczególności pierwszym celem oddziaływania promieniowania ultrafioletowego.

Oddziaływania te odbijają się w postaci obniżonej efektywności systemu obrony immunologicznej, co powoduje zmniejszenie się odporności na czynniki patogenne oraz wzrost możliwości powstawania niektórych raków.

Aby pomóc skórze w spełnianiu jej funkcji immunologicznej, produkty pobudzające system odpornościowy skóry są w obszarze dużego zainteresowania.

Wiadomo ponadto, że system immunologiczny, a w szczególności system immunologiczny skóry, staje się mniej wydolny w wyniku procesu chronobiologicznego starzenia.

Taki spadek wydolności zachodzi także podczas starzenia wywołanego naświetlaniem.

Immunostymulacyjne oddziaływania mogą zatem przywrócić funkcje immunologiczne, a szczególnie funkcje naskórka przez wzmocnienie naturalnych właściwości obronnych skóry.

185 105

Inny przedmiot tego wynalazku dotyczy kosmetycznej lub farmaceutycznej kompozycji zawierającej substancję aktywną w kosmetycznie lub farmaceutycznie dopuszczalnym nośniku charakteryzującej się tym, że zawiera co najmniej jedną frakcję rybosomalną uzyskaną z co najmniej jednego gatunku niefotosyntetyzującej bakterii nitkowatej.

Rybosomalna frakcja uzyskana z co najmniej jednego gatunku niefotosyntetyzującej bakterii nitkowatej wykazuje znaczną zdolność stymulacji systemu immunologicznego.

Bardziej szczegółowo, przedmiotem tego wynalazku jest kosmetyczna lub farmaceutyczna kompozycja zawierająca, według zasad immunologicznych, co najmniej jedną frakcję rybosomalną otrzymaną z co najmniej jednego gatunku niefotosyntetyzującej bakterii nitkowatej.

Frakcja rybosomalna jest korzystnie przeznaczona do stymulacji systemu immunologicznego skóry. Stymulacja systemu immunologicznego skóry jest szczególnie korzystna podczas chronobiologicznego lub spowodowanego promieniowaniem starzenia się skóry.

Frakcja rybosomalna według wynalazku pochodzi z bakterii wybranej spośród niefotosyntetyżyjących bakterii nitkowatych zdefiniowanych według systematyki Bergey'a w Manual of Systematic Bacteriology (vol. 3, rozdziały 22 i 23, wydanie 9, 1989), spośród których można tu wymienić bakterie należące do rzędu Beggiatoales, a w szczególności bakterie należące do rodzajów Beggiatoa, Vitreoscilla, Flexithrix lub Leucothrix.

Bakterie, które właśnie zdefiniowano, a niektóre z nich zostały już opisane, mają ogólnie wodne środowisko i mogą być znalezione zwłaszcza w wodach morskich lub w ciepłych źródłach. Spośród tych bakterii, które mogą być wykorzystane w wynalazku można wymienić na przykład:

Vitreoscilla filiformis (ATCC 15551)

Vitreoscilla beggiatoides (ATCC 43181)

Beggiatoa alba (ATCC 33555)

Flexitkrix dorotheae (ATCC 23163)

Leucothrix mucor (ATCC 25107)

Sphaerotiius natans (ATCC 13338)

Korzystnie według wynalazku wykorzystywana jest odmiana Vitreoscilla filiformis.

Według obecnego wynalazku może być wykorzystany każdy sposób otrzymywania frakcji rybosomalnej znany fachowcom w tej dziedzinie.

W szczególności należy tu wymienić sposoby opisane przez Norris'a i Ribbons'a w ,,Methods in Microbiology”, 1973, (Academic Press).

W kompozycjach według wynalazku, frakcja rybosomalna z co najmniej jednego gatunku niefotosyntetyzującej bakterii nitkowatej stanowi od 0,0001% do 20% wagi całkowitej kompozycji a korzystnie od 0,01% do 10% wagi całkowitej kompozycji.

W zależności, czy frakcja wykorzystana jest w kompozycji przeznaczonej do podania: drogą doustną, w postaci iniekcji lub aplikacji na skórę (na każdy obszar skóry ciała), na włosy, na paznokcie, na śluzówkę (jama ustna, dziąsła, genitalia, odbyt lub tkanka łączna), kompozycja może być w postaci leku galenowego zwykle stosowanego.

Przy miejscowej aplikacji na powierzchnię skóry, kompozycja może mieć postać zwłaszcza wodnego lub olejowego roztworu lub dyspersji typu lotionu lub serum, emulsji o konsystencji płynnej lub półpłynnej typu mleczka, które można otrzymać na drodze dyspersji fazy tłuszczowej w fazie wodnej (O/W) lub odwrotnie (O/W), lub suspensji albo emulsji o delikatnej konsystencji typu wodnistego lub bezwodnego kremu lub żelu, lub jeszcze mikrokapsułek albo mikrocząsteczek, albo pęcherzykowatych dyspersji typu jonowego i/lub niejonowego. Kompozycje takie sporządzane są według powszechnie stosowanych sposobów.

Mogą one być także zastosowane do włosów lub do włosów skóry głowy w postaci wodnych, alkoholowych lub wodnoalkoholowych roztworów albo w postaci kremów, żeli, emulsji, pianek lub jeszcze w postaci kompozycji aerozolowych ze sprężonym czynnikiem rozpylającym.

W przypadku postaci przeznaczonych do iniekcji, kompozycje mogą być w postaci wodnych lub olejowych lotionów lub w postaci serum. Przy zastosowaniu do oczu, mogą one być w postaci kropli, a do podania doustnego mogą być w postaci kapsułek, granulek, syropów lub tabletek.

185 105

Ilości różnych składników kompozycji według wynalazku są takie same jakich zwykle używa się w omawianej dziedzinie.

Do miejscowej aplikacji na skórę, kompozycje takie obejmują, zwłaszcza oczyszczające, ochronne, lecznicze i pielęgnacyjne kremy do twarzy, do rąk, do stóp, do dużych anatomicznych fałd lub do całego ciała (na przykład kremy na dzień, kremy na noc, kremy do demakijażu, kremy do podkładu, kremy przeciwsłoneczne), płynne podkłady, mleczka do demakijażu, mleczka ochronne do ciała lub mleczka pielęgnacyjne, mleczka przeciwsłoneczne, lotiony, żele i pianki do pielęgnacji skóry jak oczyszczające lotiony, lotiony przeciwsłoneczne, sztucznie opalające lotiony, kompozycje kąpielowe, kompozycje dezodorantowe zawierające czynnik bakteriobójczy, żele lub lotiony po goleniu, kremy do depilacji, kompozycje przeciw ukąszeniom owadów, kompozycje przeciwbólowe oraz kompozycje do leczenia niektórych chorób skóry jak egzema, rumień, łuszczyca, liszaje, ostry świąd lub zapalenie skóry.

Kompozycje mogą być konfekcjonowane w postaci kompozycji aerozolowej zawierającej czynnik rozpylający pod ciśnieniem.

Frakcja rybosomalna otrzymana z co najmniej jednego gatunku niefotosyntetyzującej bakterii nitkowatej wykorzystana według wynalazku, może także być włączona do różnych kompozycji do pielęgnacji włosów w tym zwłaszcza do szamponów, do lotionów do modelowania włosów, do lotionów leczniczych, do kremów lub żeli do modelowania, do kompozycji koloryzujących (zwłaszcza do utleniających barwników) opcjonalnie w postaci szamponów koloryzujących, do lotionów do remodelowania włosów, do kompozycji do robienia trwałej fryzury (zwłaszcza kompozycji do pierwszego etapu modelowania trwałej fryzury), do lotionów lub żeli przeciwdziałających wypadaniu włosów, do szamponów przeciwpasożytniczych i temu podobnych.

Kompozycje mogą także być przeznaczone do pielęgnacji jamy ustnej i zębów w postaci na przykład pasty do zębów. W tym przypadku, kompozycje mogą zawierać zwykle stosowane adjuwanty i składniki dodatkowe, typowe do stosowania do pielęgnacji jamy ustnej, w tym zwłaszcza czynniki powierzchniowo aktywne, czynniki zmiękczające, czynniki nawilżające, czynniki czyszczące jak krzemionka, różne składniki aktywne jak fluorki, a zwłaszcza fluorek sodu oraz ewentualnie czynniki słodzące jak sacharynian sodu.

Jeśli kompozycja jest w postaci emulsji, zawartość fazy tłuszczowej może wahać się od 5% do 80%, a korzystnie od 5% do 50% wagi całkowitej kompozycji. Oleje, woski, emulgatory oraz koemulgatory zastosowane w kompozycji w postaci emulsji mogą być wybrane spośród tych, które stosuje się w dziedzinie kosmetyki. Emulgatory i koemulgatory obecne są w kompozycji w ilości od 0,3% do 30% wagowych, a korzystniej od 0,5% do 20% wagowych wagi całkowitej kompozycji. Emulsja może dodatkowo zawierać lipidowe pęcherzyki.

Jeśli kompozycja jest w postaci roztworu lub olejowego żelu, faza tłuszczowa może stanowić więcej niż 90% całkowitej wagi kompozycji.

Wiadomym sposobem, każda kompozycja kosmetyczna może także zawierać adjuwanty, które są zwykle stosowane w dziedzinie kosmetyki, takie jak hydrofilne lub lipofilne czynniki żelujące, hydrofilne lub lipofilne składniki dodatkowe, czynniki konserwujące, przeciwutleniacze, rozpuszczalniki, perfumy, wypełniacze, filtry, adsorbenty zapachu i materiały koloryzujące. Ilości tych różnych substancji i adjuwantów są takie same jakich używa się zwykle w dziedzinie kosmetyki, przykładowo od 0,01% do 10% wagi całkowitej kompozycji. W zależności od ich charakteru, adjuwanty te mogą być umieszczone w fazie tłuszczowej, w fazie wodnej i/lub w lipidowych kuleczkach.

Oleje lub woski mogą być wykorzystane w wynalazku i można tu wymienić oleje mineralne (parafina płynna), oleje roślinne (frakcja płynna masła keratowego, olej słonecznikowy), oleje zwierzęce (perhydroskwalen), oleje syntetyczne (olej purcelinowy), oleje silikonowe lub woski (cyklometikon) oraz oleje fluorowane (perfuoropolietery), woski pszczele i Camauba lub parafinowe. Do tych olei można dodawać alkohole tłuszczowe i kwasy tłuszczowe (kwas stearynowy).

Jako emulgatory, które mogą być wykorzystane według wynalazku, można wymienić na przykład stearynian glicerolu, polisorbitan 60 i mieszaninę PEG-6/PEG-32/stearynian glicerolu oferowany przez firmę Gattefosse pod nazwą handlową Tefose 63.

185 105

Jako rozpuszczalniki, które mogą być wykorzystane według wynalazku, można wymienić niższe alkohole, a zwłaszcza etanol i izopropanol oraz glikol propylenowy.

Jako hydrofilne czynniki żelujące, które mogą być wykorzystane w wynalazku można wymienić polimery karboksywinylowe (karbomer), kopolimery akrylowe takie jak akrylanowe/alkiloakrylanowe kopolimery, poliakrylamidy, polisacharydy takie jak hydroksypropylowa celuloza, naturalne gumy i glinki, zaś jako lipofilne czynniki żelujące można tu wymienić zmodyfikowane glinki jak bentony, sole metalowe kwasów tłuszczowych jak stearyniany glinu i hydrofobowe krzemionki, etylocelulozę oraz polietylen.

Kompozycja może zawierać inne hydrofilne substancje aktywne jak białka lub hydrolizaty białkowe, aminokwasy, poliole, mocznik, allantoinę, cukry lub pochodne cukrów, rozpuszczalne w wodzie witaminy, wyciągi roślinne i hydroksykwasy.

Lipofilne substancje aktywne, które mogą być wykorzystane to retinol (witamina A) lub jego pochodne, tokoferol (witamina E) i jego pochodne, niezbędne kwasy tłuszczowe, ceramidy, niezbędne tłuszcze płynne, kwas salicylowy i jego pochodne.

Według wynalazku jest możliwe między innymi wykorzystanie frakcji rybosomalnej z co najmniej jednego gatunku niefotosyntetyzującej bakterii nitkowatej w połączeniu z innymi aktywnymi czynnikami przeznaczonymi w szczególności do zapobiegania i/lub leczenia chorób skóry. Wśród takich aktywnych czynników, które można przykładowo wymienić, są to:

- czynniki modyfikujące różnicowanie i/lub proliferację i/lub pigmentację skóry, takie jak kwas retinoinowy i jego izomery, retinol i jego estry, witamina D i jej pochodne, estrogeny takie jak estradiol, kwas kojowy lub hydrochinon;

- czynniki przeciwbakteryjne jak fosforan klindamycyny, srytromycyna lub antybiotyki z grupy tetracyklin;

- czynniki przeciwpasożytnicze, a w szczególności netronidazol, krotamiton lub pyrethrynoidy;

- czynniki przeciwgrzybicze, a w szczególności substancje należące do grupy imidazoli takie jak ekonazol, ketokonazol lub mykonazol lub ich sole, związki polienowe takie jak amfoterycyna B, związki z grupy allyloamidów takie jak terbinafina, lub oktopiroks;

- czynniki przeciwwirusowe takie jak acyklowir;

- sterydowe czynniki przeciwzapalne takie jak hydroksykortyzon, walerianian betametazonu lub propionian klobetazolu albo niesterydowe czynniki przeciwzapalne takie jak ibuprofen i jego sole, diklofenak i jego sole, kwas acetylosalicylowy, acetaminofen lub kwas pochodzący z korzenia lukrecji;

- znieczulające czynniki takie jak chlorowodorek lidokainy i jego pochodne;

- czynniki przeciwświądowe takie jak tenaldyna, trimeprazyna lub cyproheptadyna;

- czynniki keratolityczne jak kwasy alfa- i beta-hydroksykarboksylowe lub kwasy betaketokarboksylowe, ich sole, amidy lub estry, a bardziej szczególnie hydroksykwasy jak kwas glikolowy, kwas mlekowy, kwas salicylowy, kwas cytrynowy i w ogólności kwasy występujące w owocach oraz kwas 5-n-oktanoilosalicylowy;

- czynniki redukujące wolne rodniki takie jak alfa-tokoferol lub jego estry, nadtlenek dysmutazy, niektóre czynniki chelatujące metale lub kwas askorbinowy i jego estry;

- czynniki przeciwłojotokowe jak progesteron;

- czynniki przeciw łupieżowi jak oktopiroks lub pyrithion cynku;

- czynniki przeciwtrądzikowe jak kwas retinojowy lub nadtlenek benzoilu.

W odniesieniu do szczególnych postaci wynalazek odnosi się do kompozycji zawierającej co najmniej jedną frakcję rybosomalnąz co najmniej jednego gatunku niefotosyntetyzującej bakterii nitkowatej oraz co najmniej jeden czynnik wybrany spośród czynników przeciwbakteryjnych, przeciwpasożytniczych, przeciwgrzybiczych, przeciwwirusowych, przeciwzapalnych, przeciwświądowych, znieczulających, keratolitycznych, zmiataczy wolnych rodników, przeciwłojotokowych, przeciwłupieżowych, przeciwtrądzikowych i/lub spośród czynników modyfikujących dyferencjację i/lub proliferację i/lub pigmentację komórek skóry.

Sposób kosmetycznego oddziaływania na skórę, włosy i/lub śluzówki przeprowadzany jest zwłaszcza przez zastosowanie higienicznych lub kosmetycznych kompozycji opisanych wyżej, za pomocą powszechnie stosowanych technik aplikacji takich kompozycji. Na przy185 105 kład: aplikacja kremów, żeli, serum, lotionów, mleczek do demakijażu lub przeciwsłonecznych kompozycji do ochrony skóry lub do suchych włosów, aplikacja Lotionu do włosów i do włosów mokrych, szamponów, lub jeszcze zastosowanie pasty do zębów na dziąsła.

Następujące przykłady i kompozycje ilustrują wynalazek bez zawężania go w żaden sposób. Proporcje podane dla kompozycji są wyrażone w procentach wagowych, chyba, że podano w danym miejscu inaczej.

Przykładl

Sporządzanie frakcji rybosomalnej z Vitreoscilla filiformis

Hodowla Vitreoscilla filiformis przeprowadzana jest według procedury opisanej przez Zgłaszającego we francuskim zgłoszeniu patentowym opublikowanym pod numerem 2700172.

Objętość 100 ml hodowli poddana jest wirowaniu przez 10 min przy 13,000 obrotów na minutę w 4°C.

Supernatant jest zbierany. Dodawany jest siarczan amonu przy pH 7,5 w ilości 210 mg/ml.

Przeprowadzane jest powtórne wirowanie w takich samych warunkach jak poprzednie.

Supernatant dializowany jest (spektralna, dializacyjna błona, wielkość porów 1000 MWCO (około 100 daltonów)) wobec buforu Tris-HC1, pH 7,6.

Otrzymuje się około 70 ml preparatu wzbogaconego w rybosomy.

Przykład 2.

Wpływ frakcji rybosomalnej z Vitreoscilla filiformis na wzrost i na dyferencjecję splenocytów 7-tygodniowej myszy linii Balb/c

Frakcja rybosomalna z Vitreoscilla filiformis według przykładu 1 testowana jest w różnych stężeniach przy użyciu modelu odzwierciedlającego aktywność produktu na system immunologiczny: na wzrost i dyferencjację splenocytów 7-tygodniowej myszy linii Balb/c.

Potencjalna aktywność frakcji rybosomalnej oceniana jest:

a) przez pomiar wbudowywania tnnidjmy do kwasu dezoksyryboyrybemowego (wskaźnik proliferacji).

Kontrola negatywna zobrazowana jest przez wpływ medium hodowlanego na splenocyty, zaś kontrola pozytywna zobrazowana jest przez wpływ referencyjnych lipepolisacharadów (LPS) w stężeniu 0,001% i 0,0001%. Zastosowane LPS z Escherichia coli oferowane są przez firmę Sigma.

Procedura testu wbudowywania Irytowanej tymidyny:

Mysie splenocyty umieszcza się w okrągłodennych, 96-stuWriynkewach płytkach do hodowli typu NUNC w ilości 250,000 komórek na jedną studzienkę i w objętości końcowej 200 ml. Produkty poddane testowaniu dodawane są do studzienek w różnych stężeniach. Proliferacja komórkowa oceniana jest przez pomiar wbudowania bytowanej tymidyny (1 pCi/studzienkę). Na 18 godzin przed zakończeniem hodowli, 10 μΐ trytowanej tymidyny zawierającej 100 pCi/ml dodawane jest do każdej hodowlanej studzienki. W 18 godzin później, komórki oddziela się za pomocą filtru używając aparatu typu Tomtec do separacji komórek. Następnie filtr jest wysuszany i umieszczany w naczynku z płynem scyntylacyjnym. Radioaktywność filtru mierzona jest w liczniku promieniowania beta.

Wskaźnik proliferacji obliczany jest za pomocą indeksu stymulacji według następującego wzoru:

[radioaktywność testu minus radioaktywność kontroli (komórki + medium)] dzielone przez radioaktywność kontroli

Wyniki przedstawiono w tabeli poniżej: (wartości wskaźników stymulacji wyliczone są według wzoru podanego wyżej)

185 105

	24 godz.	48 godz.	72 godz.	96 godz.
Frakcja rybosomalna
5%	1,02	4,08	3,10	1,97
2,5%	1,84	8,18	8,03	2,87
1,25%	1,64	4,80	2,03	0,89
0,63%	1,61	4,56	3,81	1,33
0,31%	1,63	3,97	4,66	4,16
LPS
0,001%	1,50	5,47	13,64	16,48
0,00001%	1,03	1,03	2,47	5,32

Frakcja rybosomalna zwiększa wskaźniki proliferacji bardzo znacząco. Efekt maksymalny obserwowano przy stężeniu 2,5% i po 48 godzinnej hodowli.

Uzyskany wpływ porównywalny jest z wpływem obserwowanym dla kontroli pozytywnej. b) przez pomi ćp produkejiimmunoglobulmbo dyferencfeceiwszysfcich splenocytów w postać komórek B (limfocyty B).

Negatywną kontrolę przedstawia wpływ medium hodowlanego na splenochth zaś kontrolę pozhthwną przedstawia wpływ referencyjnych lipofolisacharydów (LPS) w stężeniu 0,001% i 0,0001%. Zastosowane LPS po^h<^^£ąz Escherichia coli i są oferowane przez firmę Sigma.

Oznaczanie immudoglobulid:

Komórki hodowane są w tych samych warunkach jak opisano wyżej. Po dwóch dniach hodowli, pobierane są supematanty i poddane testowi na obecność immunoglobulin (Ig).

Test ten przeprowadzany jest za pomocą zestawu firmy Phaemingen według procedury analitycznej podanej przez producenta.

Immunoglobuliny są białkami obecnymi we krwi i łączą się z antygenami, aby te mogły zostać rozpoznane i uznane za obce ciała przez limfocyty B.

Immodoglobulidh dzieli się na różne typy i fedthfh na podstawie strokturh niezmiennych obszarów stanowiących fragmenty ich ciężkich łańcuchów. Rozróżnia się 5 klas (Ig M, G, A, D oraz E) immodoglobolid u myszy. Immunoglobolina G jest najobficiej występującą immunoglobuliną w płynach ciała a zwłaszcza w płynach fezanacchdiowych, gdzie zwalcza ona mikroorganizmy i toksyny. Immonoglobulida G może być zakwalifikowana do 4 różnych podklas (12,3 oraz 4).

Immodoglobulina A jest najważniejszą immonogloboliną w wydzielinach surowiczośluzówkowych, gdzie broni ona zewnętrznych powierzchni ciała.

Immunoglobulida M jest wysoce wydajnym czynnikiem aglutynującym produkowanym bardzo wcześnie w odpowiedzi immunologicznej. Stanowi ona pierwszą linię obrony przez zakażeniami bakteryjnymi.

W omawianym teście były oznaczane tylko Ig G1, G2a, G2b, G3, M oraz A.

Uzyskane wyniki przedstawiono w tabeli poniżej.

	IgG1	IgG2a	IgG2b	IgG3	IgM	IgA
Kontrola	1	1	1	1	1	1
0,001 LPS	3,4	3,7	3,2	3,4	2,9	3,5
0,0001 LPS	3	3,3	3,1	3,2	3	3
5% R.F.	2,1	2,2	2,2	2,1	2,2	2,3
2,5% R.F.	3,3	3,3	3	3,1	2,9	3,4
1,25% R.F.	3,8	3,9	3,4	3,6	3,3	4

R.F. = fralkcja rybosomalna

185 105

Frakcja rybosomalna znacząco podnosi produkcję immunoglobulin wszystkich klas i podklas badanych tutaj. Optymalne stężenia aktywne wynosi 1,25%.

Wyniki te są porównywalne z wynikami otrzymanymi dla pozytywnej kontroli. Przykład3

Przykład kompozycji według wynalazku. Kompozycje te zostały sporządzone za pomocą konwencjonalnych sposobów znanych osobom obeznanym w tej dziedzinie.

Krem oczyszczający

Frakcja rybosomalna według przykładu 1	0,50
Alkohol cetylowy	2,00
Stearynian glicerolu	2,00
Kwas stearynowy	2,00
Eter poliglicerylo-3-hydroksylaurylowy	5,00
Olej mineralny Codex	12,00
Karbomer	0,35
Wodorotlenek sodu	0,15
Substancja zapachowa	q.s.
Metyloparaben	0,20
Sterylna woda demineralizowana	q.s. 100,00
Mleczko oczyszczające
Frakcja rybosomalna według przykładu 1	0,50
Karbomer	0,40
Wodorotlenek sodu	0,10
Olej mineralny Codex	5,00
Stearynian glicerolu	1,00
Alkohol cetylowy	0,50
Stearynian PEG 100	0,80
Metyloparaben	0,20
Substancja zapachowa	q.s.
Sterylna demineralizowana woda	q.s. 100.00
Lotion pielęgnacyjny
Frakcja rybosomalna według przykładu 1	1,00
Glicerol	2,00
Metyloparaben	0,15
Substancja zapachowa	q.s.
Sterylna woda demineralizowana	q.s. 100.00
Krem pielęgnacyjny
Frakcja rybosomalna według przykładu 1	2,00
Stearynian glicerolu	1,00
Stearynian PEG 100	1,00
Kwas stearynowy	1,00
Alkohol cetylowy	2,00
Olej sojowy	3,00
Olej palmowy	2,00
Cyklometikon	2,00
Dimetikon	1,00
Poliakrylamid	0,20
Glicerol	3,00
Metyloparaben	0,20
Substancja zapachowa	q.s.
Sterylna demineralizowana woda	q.s. 100.00

185 105

Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 50 egz.

Claims (9)

1. Frakcja rybosomalna, znamienna tym, że jest preparowana z co najmniej jednego gatunku niefotosyntetyzującej bakterii nitkowatej.

2. Frakcja rybosomalna według zastrz. 1, znamienna tym, że bakteria należy do rzędu Beggiatoales.

3. Frakcja rybosomalna według zastrz. 1, znamienna tym, że bakteria należy do rodzaju Beggiatoa, Vitreoscilla, Flexithrix lub Leucothrix.

4. Frakcja rybosomalna według zastrz. 1, znamienna tym, że bakteria wybrana jest ze szczepów Vitreoscilla filiformis.

5. Kompozycja kosmetyczna lub farmaceutyczna zawierająca substancję aktywną w kosmetycznie lub farmaceutycznie dopuszczalnym nośniku, znamienna tym, że jako substancję aktywną zawiera co najmniej jedną frakcję rybosomalną otrzymywaną z co najmniej jednego gatunku niefotosyntetyzującej bakterii nitkowatej.

6. Kompozycja według zastrz. 5, znamienna tym, że frakcja rybosomalna jest czynnikiem immunostymulacyjnym.

7. Kompozycja według zastrz. 6, znamienna tym, że frakcja rybosomalna jest czynnikiem immunostymulacyjnym dla systemu immunologicznego skóry.

8. Kompozycja według zastrz. 5, znamienna tym, że frakcja rybosomalna stanowi od 0,0001% do 20% wagi całkowitej kompozycji.

9. Kompozycja według zastrz. 8, znamienna tym, że frakcja rybosomalna stanowi od 0,01% do 10% wagi całkowitej kompozycji.