Przedmiotem wynalazku jest sposób wyodrebniania podofilotoksyny, a dokladniej nowy sposób wyodrebniania i oczyszczania podofilotoksyny z jej wzglednie zanieczyszczonych zró¬ del:, a zwlaszcza z ekstraktów roslinnych, takich jak zywice uzyskane przez ekstrakcje ros¬ lin z gatunku podophyllum.Podorilotoksyna jest silnie biologicznie czynna substancja szczególnie uzyteczna jako lek przeciw condylomata acurainata (brodawkom konczystym) /G. Gabriel i R.N.T. Thin, Br. J. Vener. Dis,, 59, 124-126 (1983)7 wykazujaca ponadto wlasciwosci cytostatyczne /G. von Krogh i H.I- Maibach, Dermatologica, 167, 70-77 (1983)7 i przeciwwirusowe /"T. Karkkanen, M.L. Makinen, J. Miettinen, P. Maunuksela, T. Laijoki i J. Paranko, Drugs Exp. Clin. Res. 9, 1-7 (1983) 7• Dotychczas podofilotoksyne wyodrebniano z wyzej wspomnianych zywic róznymi praco¬ chlonnymi sposobami• Wszystkie te sposoby obejmowaly ekstrakcje rozpuszczalnikiem, z regu¬ ly chloroformem, a nastepnie dalsze etapy obróbki o Zgodnie z najpowazniejsza nowsza lite¬ ratura /w. M. Hearon I W. S. MacGregor, Chenw Rev., 55, 1002 (1955); J. L. Hartwell i W. F. Detty, J. Am, Cheau Soc, 246-253 (1950)^ w celu uzyskania podofilotoksyny niezbed¬ ne jest oczyszczanie chromatograficzne. W wielu przypadkach w procesach oczyszczania sto¬ sowany byl benzen, bez wzgledu na znana jego szkodliwosc dla zdrowia. Uwazano ponadto, ze zastosowanie chromatografii jest absolutnie niezbedne w celu otrzymania podofilotoksyny o takim stopniu czystosci, ze jest ona tylko w niewielkim stopniu zanieczyszczona wieloma zwiazkami pokrewnymi v/ystepujacymi w materiale roslinnym* Z tego wzgledu podofilotoksyna jest bardzo rzadka i droga substancja, trudna do otrzymania w wiekszych ilosciach.2 H7 999 Ostatnio wzrasta zapotrzebowanie na czysta podofilotoksyne, zarówno jako na suro¬ wiec do wytwarzania róznych farmakologicznie czynnych pochodnych, jak i do bezposredniego wykorzystania w leczeniu klinicznym. W obydwu przypadkach wysoce pozadane jest stosowanie produktu o mozliwie jak najwiekszej czystosci.Obecnie opracowano proces wyodrebniania oczyszczania podofilotoksyny z zywicy ros¬ lin podophyllum w duzej skali, z wyeliminowaniem silnie rakotwórczego rozpuszczalnika, benzenu, a ponadto umozliwiajacy uzyskanie z duza wydajnoscia czystej podofilotoksyny, Wynalazek oparty jest na nieznanej dotychczas zdolnosci podofilotoksyny do tworze¬ nia kompleksów z wieloma róznymi zwiazkami aromatycznymi i heteroaromatycznymi, obejmuja¬ cymi fenol, toluen, chlorobenzen, anizol, o-ksyien, m-ksylen, p-ksylen i nitrobenzen oraz substancje zasadowe, takie jak anilina i pirydyna, a takze ich homologi, takie jak nafta¬ len, chinolina i izochinoiina. Ponadto unika sie koniecznosci oczyszczania surowej zywicy przez ekstrakcje rozpuszczalnikiem.Tak wiec zgodny z wynalazkiem sposób wyodrebniania podofiloksyny polega na tym, ze sporzadza sie roztwór zywicy zawierajacej podofilotoksyne w rozpuszczalniku organicznym ewentualnie zawierajacym wode, na powstaly roztwór dziala sie srodkiem kompleksujacym be¬ dacym zwiazkiem aromatycznym lub heteroaromatycznym wybranym z grupy obejmujacej fenol, toluen, chlorobenzen, anizol, o-, m- i p-ksyleny, nitrobenzen, aniline, pirydyne, naftalen, alkohol furfurylowy, chinoline i izochinoline, powstaly staly kompleks oddziela sie z roz¬ tworu i z tego kompleksu wyodrebnia sie podofilotoksyne, po czym ewentualnie powtarza sie obróbke oczyszczajaca i na wyodrebniona podofilotoksyne ewentualnie dziala sie wodnym roz¬ tworem zasady.Obróbke oczyszczajaca, obejmujaca sporzadzanie roztworu podofilotoksyny, korzyst¬ nie w etanolu, wytwarzanie jej kompleksu ze srodkiem-kompleksu jacym i ewentualnie woda, oddzielanie kompleksu i wyodrebnianie oczyszczonej podofilotoksyny, mozna powtarzac wielo¬ krotnie az do uzyskania produktu o zadanym stopniu czystosci, przy czym w kolejnych cyk¬ lach obróbki (co najmniej w dwóch) mozna stosowac rózne srodki kompleksujace.W celu jeszcze dokladniejszego oczyszczenia produktu ewentualnie prowadzi sie do¬ datkowy etap obróbki, kontaktujac roztwór podofilotoksyny w nie mieszajacym sie z woda rozpuszczalniku, korzystnie chloroformie, z wodnym roztworem zasady, korzystnie wodorotlen¬ ku sodowego.Dokladne warunki prowadzenia procesu wedlug wynalazku nie sa scisle okreslone i mo¬ ga zmieniac sie w znacznym stopniu, choc ogólnie mozna stwierdzic, ze zanieczyszczona podo¬ filotoksyne, np. zywice podophyllum, rozpuszcza sie w odpowiednim rozpuszczalniku, korzyst¬ nie w rozpuszczalniku, w którym rozpuszcza sie cala zywica, np. w nizszym alkoholu alifa¬ tycznym o 1-3 atomach wegla lub w estrze nizszego kwasu karboksylowego o 1-3 atomach wegla w grupie alkilowej. Do roztworu dodaje sie nastepnie kompleksujacy zwiazek aromatyczny, po czym w razie potrzeby mozna dodac rózne ilosci wod£. Powoduje to wytracenie kompleksów za¬ zwyczaj o dobrze wyksztalconej strukturze krystalicznej, które mozna wyodrebnic i z których po usunieciu srodka kompleksujacego uzyskac mozna podofilotoksyne o czystosci okolo 90# z duza wydajnoscia. Powtarzajac powyzsze postepowanie z zastosowaniem róznych srodków kom- pleksujacych otrzymac mozna podofilotoksyne o czystosci 92-95*. Czesto stwierdza sie, ze szereg zwiazków pokrewnych pozostaje jako trwale zanieczyszczenia, nawet po 5-8 rekrystali¬ zacjach z zastosowaniem róznych rozpuszczalników i srodków kompleksujacych i dla uzyskania jeszcze wyzszego stopnia czystosci nalezy przeprowadzic kolejny etap oczyszczania.Zgodnie z korzystnym wariantem sposobu wedlug wynalazku, umozliwiajacym uzyskanie podofilotoksyny o szczególnie wysokiej czystosci, oczyszczanie "absolutne" przeprowadzic mozna przez ekstrakcje roztworu zanieczyszczonej podofilotoksyny w rozpuszczalniku nie mie¬ szajacym sie z woda, np. w chloroformie, za pomoca wodnego roztworu zasady. Jest to o tyle147 999 3 zaskakujace, ze zgodnie z danymi literaturowymi podofilotoksyna Jest bardzo nietrwala w srodowisku alkalicznym i ulega przeksztalceniu w jej epimer, pikropodofiline, w wyniku dzialania alkaliów W. Borsche i J. Niemann, Liebiegs Ann. Chem. 494, 126-142 (1932) Sposób wedlug wynalazku ilustruja ponizsze przyklady.Przyklad I. A. 643 g podofiliny (zywicy z roslin podophyllum) rozpuszcza sie w 1,5 ml etanolu, umiarkowanie ogrzewajac. Do goracego roztworu dodaje sie 643 ml to¬ luenu, a nastepnie 129 ml wody. Roztwór chlodzi sie w wodzie z lodem, po czym wytracona krystaliczna substancje odsacza sie i przemywa 2 ml eteru. Wydajnosc 342,8 g. Substancja ta jest kompleksem podofilotoksyny, toluenu i wody. Analiza metoda cieczowej chromatogra¬ fii cisnieniowej (HPLC) wykazala, ze zawiera on okolo ^3% lignanów o zblizonej budowie.Kompleks rozpuszcza sie ponownie w 1 litrze etanolu umiarkowanie ogrzewajac, dodaje sie 140 ml pirydyny i 470 ml wody, po czym roztwór chlodzi sie w wodzie z lodem. Wytracona substancje krystaliczna odsacza sie i przemywa 250 ml eteru. Wydajnosc 292 g.Substancja ta stanowi kompleks podofilotoksyny, pirydyny i wody. Analiza HPLC wy¬ kazala, ze zawartosc innych lignanów wynosi okolo 1%• Po rekrystalizacji sie z mieszaniny 1 litra etanolu i 430 ml wody uzyskuje sie 239 g kompleksu pirydynowo-wodnego.B. 119 g kompleksu rozpuszcza sie w 1,2 litra chloroformu i roztwór przemywa sie kolejno 500 ml 0,8 n kwasu solnego, 500 ml 0,4 n wodorotlenku sodowego^ 450 ml 0,01 n kwa¬ su solnego, 450 ml wody i 500 ml nasyconego roztworu wodnego chlorku sodowego. Roztwór chloroformowy suszy sie nad stalym siarczanem magnezowym, chloroform usuwa sie pod zmniej¬ szonym cisnieniem, a pozostalosc w postaci substancji o konsystencji syropu rekrystalizuje sie z 450 ml octanu etylu uzyskujac uwodniona podofilotoksyne w ilosci 50 g. Metoda HPLC stwierdzono, ze produkt ten zawiera ponizej 0,4# innych lignanów. Próbke produktu wysuszo¬ no w temperaturze 100°C pod zmniejszonym cisnieniem uzyskujac analitycznie czysta podofi¬ lotoksyne. Analiza elementarna: stwierdzono (wyliczono): C 63,62 (63,76), H 5,39 (5,35).Widma IR, 1„ NMR i C NMR sa zgodne z widmami opublikowanymi w literaturze.Przyklad II. A. 1 kg podofiliny rozpuszcza sie w 3 litrach etanolu umiarkowanie ogrzewajac. Po uzyskaniu jednorodnego roztworu dodaje sie 1 litr toluenu i 200 ml wody, po czym mieszanine chlodzi sie w wodzie z lodem. Wytracona substancje krysta¬ liczna odsacza sie i przemywa 1 litrem eteru, po czym rekrystalizuje sie z mieszaniny 2 litrów etanolu, 650 ml toluenu i 130 ml wody. Wyodrebniona substancje krystaliczna rozpu¬ szcza sie ponownie w 1,5 litrze etanolu, dodaje 210 ml pirydyny i 630 ml wody i roztwór chlodzi sie w wodzie z lodem. Wytracony krystaliczny kompleks wyodrebnia sie, przemywa 1 litrem eteru i suszy uzyskujac 478 g produktu.Produkt IIA rozpuszcza sie w 5 litrach chloroformu i przemywa kolejno 2 litrami Q,4n kwasu solnego, 2 litrami 0,2 n wodorotlenku sodowego, 1,4 litra 0,03 n kwasu solnego i 700 ml nasyconego roztworu wodnego chlorku sodowego, po czym suszy sie nad siarczanem magnezowym. Chloroform usuwa sie pod zmniejszonym cisnieniem, a pozostala substancje o kon¬ systencji syropu rekrystalizuje sie z mieszaniny 1,4 ml etanolu i 0,9 litra wody. Uzyskuje sie 419 g (39#) dwuhydratu podofilotoksyny, zawierajacego ponizej 0,6# pikropodofiliny i ponizej 0,1# innych zblizonych lignanów. Analiza; stwierdzono (wyliczono) C 58,63 (58,67), H 5,53 (5,77). Produkt zidentyfikowano metodami spektroskopowymi IR i H NMR. Mala próbke wysuszono w temperaturze 100°C pod zmniejszonym cisnieniem uzyskujac analitycznie czysty produkt. Analiza: C 63,75 (63,76), H 5,41 (5,35).Przyklad III. A. 500 g podofiliny rozpuszcza sie w 1,5 litra etanolu umiar¬ kowanie ogrzewajac, po czym dodaje sie 0,5 litra toluenu i 100 ml wody, roztwór chlodzi sie, a wytracona krystaliczna substancje odsacza sie i przemywa mieszanina etanolu, tolu¬ enu i wody 15:5:1 w ilosci 200 ml. Substancje te rozpuszcza sie natychmiast w 1 litrze etanolu, 330 ml toluenu i 66 ml wody, po czym roztwór chlodzi sie w wodzie z lodem. Osad4 147 999 wyodrebnia sie jak wyzej i suszy uzyskujac 211 g produktu. Produkt ten rozpuszcza sie po¬ nownie w 500 ml wrzacego metanolu, goracy roztwór saczy sie, dodaje 368 ml wody i chlodzi w wodzie z lodem, uzyskujac po odsaczeniu i wysuszeniu pod zmniejszonym cisnieniem nad kwasem siarkowym i w temperaturze 100°C pod cisnieniem atmosferycznym 192 g podofilotok- syny i innych zblizonych lignanów. w stosunku 9:1.B. 5 g powyzszej zanieczyszczonej podofilotoksyny rozpuszcza sie w 50 ml chloro¬ formu i przemywa kolejno 50 ml 0,4 n wodorotlenku sodowego, 50 ml 0,02 n kwasu solnego, 50 ml wody i 50 ml nasyconego roztworu chlorku sodowego, po czym chloroform usuwa sie pod zmniejszonym cisnieniem, a pozostalosc rekrystalizuje sie z 20 ml mieszaniny etanol-woda (1:1)* Uzyskuje sie w ten sposób podofilotoksyne, zidentyfikowana metoda spektroskopii IR, zawierajaca ponizej 1,4# innych lignanów.Przyklad IV. A. 50 g podofiliny rozpuszcza sie w 150 ml etanolu ogrzewa¬ jac, po czym dodaje sie 50 ml chlorobenzenu i 10 ml wody. Po schlodzeniu wytracony osad odsacza sie i przemywa 20 ml eteru. Stwierdzono, ze kompleks podofiliny z chlorobenzenem i woda, uzyskany w ilosci 19,5 gf zawiera okolo 1356 innych lignanów. 5 g powyzszej substan¬ cji rozpuszcza sie ponownie w 15 ml etanolu, dodaje 5 g fenolu i 2 ml wody, roztwór chlodzi sie, a wytracona substancje odsacza sie i przemywa 10 ml eteru. Uzyskuje sie 4.2 g komplek¬ su podofilotoksyny z fenolem i woda.B. Kompleks ten rozpuszcza sie w 20 ml octanu etylu i roztwór zadaje sie 20 ml 2 n wodorotlenku sodowego. Paze organiczna oddziela sie i zateza pod zmniejszonym cisnie¬ niem. Pozostalosc rekrystalizuje sie z 20 ml mieszaniny etanol-woda (1:1), uzyskujac po wy¬ suszeniu pod zmniejszonym cisnieniem nad kwasem siarkowym 3*75 g uwodnionej podofilotoksyny o czystosci powyzej 98,5#, co stwierdzono metoda HPLC. Produkt zidentyfikowano metodami spektroskopii IR, 1H NMR i 13C NMR;/oC/ £° » - 118,5-°.Ponizszy przyklad ilustruje proces wyodrebniania podofilotoksyny z podofiliny przy zastosowaniu w etapie A róznych kombinacji srodków kompleksujacych.Przyklad V. Ogólny sposób postepowania: 60 g podofiliny rozpuszcza sie umiarkowanie ogrzewajac w 180 ml odpowiedniego rozpuszczalnika. W pewnych przypadkach, gdy uzyskuje sie nierozpuszczalna pozostalosc, roztwór dekantuje sie. Do roztworu dodaje sie aromatyczny srodek kompleksujacy w ilosci 60 ml lub 60 g, jesli jest to srodek staly, a na¬ stepnie rózne ilosci wody. Po schlodzeniu wytracony kompleks wyodrebnia sie po czym poste¬ powanie powtarza sie stosujac takie same lub inne rozpuszczalniki i srodki kompleksujace.Wyodrebniona substancje w koncu krystalizuje sie, po czym usuwa sie srodek kompleksujacy.W kazdym przypadku produkt identyfikuje sie metoda spektroskopii IR i lub HPLC. Wyniki po¬ dano w tabeli, w której skrót n.d. oznacza, ze czystosc podofilotoksyny nie zostala okres¬ lona.147 999 5 1 VW II 1 O II i a iim I-O 1 CM 1 i 1 T3 II 1 » II 1 ^ II 1 1 01 1 1 1 1 T3 H Ir 1 4 1 (01 O B 1 t- 1 *- 1 "Ol j* 1 I 1 Ol II 1 NI B * 1 1 1 -HI O O 1 1 i him ar i i 1 (0 1 TDi-l 1 O 1 1 4*1 X 3 B 1 t- 1 1 i mi o w i i i .i-tf .* i i 1 Ul O 0) 1 I 1 Xl U rH 1 1 1 1 CO P, 1 1 i i-hi \ r i o: i i i i 1 0)1 N ^J 1 1 r- l Ul 2 G l IX 1 Eh 1 p,rH H 1 1 O 1 1 N 1 1 O N 1 IX i ia:o i i o P T "T" i 1 1 co 11 1 IT3 rH 1 1 1 1 O B 1 GO 1 1 ¦ ¦:* ii 1 CO 1 ^ | 1 I-OI 6) 1 1 1 Ol rH 1 i 1 CCI CX 1 1 i ni e i i vo 1 -HI O 1 I 1 «HI X rH 1 1 * 1 {01 B 1 C^ 1 fi i -pij*; i io» 1 W 1 0) O 1 1 3 1 J Xi & 1 1 H 1 fclOTJ I I O l Xl U 2 1 1 -P i i co o) i i l OJ I I 1 :ai : : IQM 1 1 O 1 INX 1 1 fO 1 1 10 -H 1 1 » l . 1 3 fi 1 i X 1 1 PhiHiH 1 Vi) I O i i n co fl i i m 1 1 O N 1 IX i ice: o i i c\j 11 1 I O L_li i L J r~T i—r 1 1 1 03 II 1 1 IT3 II i i^ la i m i c\j i an i f \ 1 -Ol X 1 1 1 1 Ol OJ | 1 1 i cdi h i i i l Nid i i i I-HIE 1 i O l 1 rH 1 O 1 1 r- 1 1 COI^J J 1*1 1 -PI 1 1 fi 1 i mix ,h i -3- i ai i 1 W « O B l 1 3 1 i UlT} a* i I h i 1 X1 O -o 1 1 O 1 ! 1^3 1 1 -P 1 i co i zn oj i t i s ni i i i O i l 3M N X l I KN 1 1 Ul W «H | | » 1 i on 3 c i i x i 1 «HI p^rHrH 1 KN 1 O 1 i cm n «j b i i mi 1 1 O N 1 1X1 i i et: o i i cnj i I t t 1 O 1 II II 1 1 »0 1 *W O , 1 1 1 1 O 'O fi bO 1 CNJ 1 O 1 IHOH 1 1 r- 1 1 M p,rH 1 1 1 jt II I 1 K O II 1 |HQrH , | | I i c«h c i i m i 1 -P*H » 1 1 • 1 i m O w ^ I *- i o i 1 v«0 X 1 1 Ch 1 1 N O O 1 1 1 sop,-p i i i i kn i » i -d- i m i *— i i L r i m i *— 1 £ l O 1 KN l X 1 O 1 1 vO • 1 fi 0) 1 rH » 1 0) X 1 o o KN X O m X c\J l U CNJ 1 O ! T— 1 • | fi 1 OJ 1 3 i H 1 O 1 •P 1 « ! * 1 £ ' O 1 m i X l CNI 1 O 1 O I *— 1 -* 1 • 1 ^— 1 & 1 1 C*- 1 « 1 ^ 1 T— 1 ^~ 1 1 1 v£ 1 T— 1 X 1 O I kn l X i O 1 v£ •» fi 0) r-l » 03 X 1 s o KN X O m X CNJ o CNJ 1 O I r— | •» | fi 1 OJ 1 3 i rH 1 O 1 -P 1 O 1 KN 1 * 1 X 1 O 1 m i X 1 CNJ 1 O 1 o i T~ 1 O I • 1 ^ 1 ON 1 I O 1 * i m l O i *-- • i i i i- 1 T— 1 X 1 O 1 KN 1 X i O 1 1 \D » fi 0) iH CO X 1 a o KN » X- o m X CNJ O CNJ 1 O l r- 1 » | fi 1 0) 1 3 l rH 1 O 1 P 1 O 1 KN 1 X 1 O 1 m i X 1 CNJ 1 O 1 O I *-- 1 KN 1 * 1 CNJ 1 Ch i i o i » i m i o 1 r- 1 1 \ C^ 1 T— 1 X 1 O 1 K 1 X 1 O 1 1 v£) * r-i O 1 N ¦H fi CC O ro X • O m X CNI O CNJ O T— * fi 0) 3 H O -P O r^ X O m X CNJ U o T— C\J * » 1 1 1 1 * 1 ^ 1 1 1 1 1 i m i t- i i i i i i i 1 i i l i i _1_ t i tv l <- 1 X 1 O 1 K I X 1 O 1 1 1 1 J 1 1 1 1 1 1 fi 1 0) 1 Xi 1 O 1 U\D 1 O • 1 H fi 1 £ 0) 1 O N 1 1 1 • O i r<~\ i • l X 1 O i m 1 X 1 CNJ | 1 O .1 1 r 1 j 1 CNJ 1 .1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 O I 1 5- 1 1 & 1 1 fi 1 1 0 | 1 3 1 1 r~\ 1 1 O 1 1 P 1 1 1 1 O 1 1 KN | 1 - 1 1 X 1 1 O 1 i m i i X i 1 CNI I 1 O 1 1 1 1 1 1 1 5 O 1 1 r- 1 1 | 1 1 i i i i i i i i* t i « i 1 r- 1 s o i 1 I 1 1 1 *— I « 1 KN 1 O 1 *~ 1 | 1 I 1 l 1 T- 1 X 1 O 1 KN l X 1 O i m 1 (D i « 1 O ro •k -tf «k C 0) 3 rH O -P m CNJ * X O 1 m i X l CNJ I U i CNJ 1 O 1 l— 1 fi 1 0 1 T* ' 1 n i X 1 1 i O 1 m i CNJ 1 £ ¦ O I m i X i . CNJ 1 O 1 K | • 1 CD 1 f^ 1 « l CNJ 1 ON 1 1 T— | * i ro 1 O 1 T— 1 1 1 CNJ 1 T— 1 X 1 O 1 JO 1 X 1 O i m i cd i * 1 O i m i * i <* * i fi 0) 1 r-i 0} X 1 O m CNJ « X o m X i CNJ O CM ! O 1 *— ! fi 1 0) 1 rH 1 1 01 1 X l 1 1 O 1 m i CM 1 « i X 1 O 1 m i X 1 CNJ 1 O 1 KN 1 » 1 CD 1 co i •» 1 CNJ 1 ON 1 l l- 1 * 1 KN 1 »- 1 CNJ 1 1 1^ r i i 1 CNI 1 X » o 1 KN i X 1 O i m 1 GO 1 « l O 1 KN « 1 « fi 1 0) 1 H 1 » 0) X 1 s ** m CNJ 5 O m X CNJ U CNJ o i T~ 1 fi 1 0) 1 H 1 * 1 n i X 1 l 1 O 1 m i CNJ 1 * | X 1 O 1 m i X i CNJ 1 O 1 KN 1 •» | CO 1 CD 1 «. | KN 1 ON 1 1 ^ | • 1 KN 1 C 1 *- 1 1 i m 1 v— 1 X i O 1 KN I X 1 O i m 1 CO 1 • i O 1 KN [ * 1 ^ i » 1 fi 1 OJ 1 rH 1 i m 1 X ? a m CNJ « X o m X CNJ o CNJ O I T— 1 fi 1 0) 1 H 1 t 1 (0 1 X 1 1 1 O I m i CNJ 1 X 1 O 1 m i X 1 CNJ 1 O 1 KN 1 * 1 CO 1 • 1 T3 1 * 1 fi 1 1 KN 1 •» 1 KN • O 1 T— 1 1 i m 1 r- « X 1 O 1 KN 1 X 1 O i m i co 1 * 1 O 1 KN 1 « 1 -tf •» 1 rH 1 O N 1 *H fi C0 m CNJ » X o m X CNJ O CNJ 1 O 1 T- 1 fi 1 0 1 r-\ 1 . 1 01 | X 1 1 | O 1 m i CNJ 1 X 1 O I m i X i CNJ 1 U 1 KN ( • t CO 1 l 1 * 1 CNJ 1 cn i 1 CNI 1 * 1 KN 1 O 1 CNJ 1 1 i m 1 T" 1 X 1 O 1 KN 1 X 1 U i m 1 CO | m I O 1 1 1 fi 1 0) KN 1 Xi • 1 O^ 1 U 1 O » 1 rH fi 1 -C 0) 0 N m CNJ • X O m X CNJ O CNI o \ r- | fi 1 0) | rH 1 1 O 1 X l 1 1 O 1 m i CNJ 1 m | X 1 O 1 m i X 1 CNI | O | KN | * 1 CO 1 m i ** i CNJ | ON | i c^ i m i*i » 1 KN 1 KN L _» 1 O 1 *- i i i g L L i m i m 1 r- 1 t- i X 1 X 1 O 1 O 1 KN | KN I X 1 X 1 O 1 O 1 CNJ 1 CNJ l*| « 1 t- 1 ^ i 1 vD m i i i fi 1 « 1 0) 1 fi 1 rH 1 0) 1 i 1 0 1 W rH 1 X 1 O 1 1 P 1 0 m i m CNJ 1 CNJ » 1 * X i X O I O m i m X 1 X CNJ | CNJ O 1 O CNJ 1 CNJ 1 O 1 O 1 r- 1 r- 1 \ fi 1 fi 1 0) 1 0) 1 rH 1 rH 1 1 . 1 CO 1 W 1 X l X 1 1 1 1 1 KISI KN 1 O 1 1 KN 1 * 1 * 1 X 1 X i O 1 O I mi. mi X i X l CNJ 1 CNJ 1 U 1 O 1 O 1 O I t- 1 r- 1 r- i m i * i * i CNJ 1 t- 1 ON 1 ON 1 1 *— | « 1 -tf ! l O 1 CV 1 1 1 i m 1 CNJ 1 X 1 O 1 KN 1 X 1 O 1 CNJ 1 • 1 *- 1 V0 fi 1 €) 1 H 1 » 1 CO 1 X 1 1 1 S m CNJ X o m X CNJ O CNJ O fi 0) rH ^ CO X 1 s a « X o m X CNJ O o T- KN • CNJ O147 999 c.d. tabeli i—i . ,. . . . ._ —_ - _ §__ __ - _- -- _— .I OJ 1 1 1 Ililll 1 1 1 1 1 1 1 II i *- i -- i cm i co imimiiicjvir^io ico i-^" ic^if^-it^icT^ it- iv-i I-I • 1 * 1 •¦ 1 » 1 » 1 * 1 • 1 ¦» 1 •» 1 * 1 •* 1 • 1 * 1 •» 1 » 1 * 1 * 1 i i i i i i l-i iii i i i i i i i i ii l t- i O 1 O IOIOIOIOlOIOiO IOIOIOIOlOIOiO lOl I _- | OO 1 Oj 1 OJ 1 OJ i OJ 1 CV. 1 OJ 1 OJ 1 OJ 1 OJ 1 OJ 1 OJ 1 OJ 1 OJ 1 OJ 1 CM 1 CM I I ? I 1 1 1 1 1 II 1 1 1 1 1 1 i 1 1 1 1 1 I 1 III i imimim imimimimimim imiioimimimimim im? f 1 OJ 1 OJ 1 OJ IOJI0JICMICMI0vilCM lOJlOJlOJlOJICMICMlOJ ICSJI l °^ I X* I X 1 X* 1X1X1X1X1X13? l3?ia?l3?l3?l3?iaTl3? (XI 1 1 O 1 O 1 O lOlOlOlOIOlO IOIOIOIOlOIOiO SOI i i roi roi roi roi roi roi roi roi roi roi roi roi ro § roi roi roi roi i IXIXIX IXIXIXIXIXIX IXIXIXIXIXIXIX 1 X f 1 1 O 1 O 1 O IOIOIOIOIOIO IOIOIOIOlOIOiO IOI 1 00 1 1 I y 1 1 1 I I 1 1.1 1 1 1 1 1 1 1 1 lOJI(MI0vJ 1 O 1 O I O 1 O 1 O 1 OlOiOiOIOIOIOlO IOI 1 1 KO 1 1 Ililll 1 i 1 1 1 1 1 II ii i iii imimimi iii imimimi iii imi 11*1 icimi»i*i*i igi i « i * i • i idl ie»i i i c i vo i a i icicicimio) imiciciCiinia)im i fi i 1 f- 1 0) 1 * 1 £ 1 « 1 0; i 1 1 iH 1 rH 1 OKO ICIrHlrHliHlrHlO IClrHlfHIHIfHIOlfl IrHl i i , • o i t, idJi^i^i^ioit.miaji^i^i^ioi^mia; i s 1 | 1 I^I.Hlr-ICliHI-tfl^l^l-rtlrHCIrHl.Sdl^l^l-HIHCriH \ X l i iii£ij_aioiiiiiiici-: i iaia3ioNi-tJioiEiaicdioNi+^i i imimim lOlOIOIOlOiO IOIOIOIOlOIOiO ioi i i cm i oj i cm iroiroiroiro.iro.iro Iroiroiroiroiroiroiro s ro i ! ^ 1 X 1 3? 1 X l3?lx'!x'lXiXk|x' IXl3?i:i?i:i?i:x?i:i?l3? 1X1 1 IOIOIO IOIOIOIOIOIO IOIOIOIOlOIOiO IOI i i mi mi mi mi mi mi mi mi mi mi mi mi mi mi mi mi mi l i X I X 1 X IXIXIXIXIXIX IXIXIXIXIXIXIX IX! 1 1 OJl CMI CMI CMI OJl OJI CM 1 OJl OJI OJl CMI CMI (Ml CMI CMI CMI CMI 1 IOIOIO IOIOIOIOIOIO IOIOIOIOlOIOiO IOI 1 lO 1 CM 1 CM 1 CM 1 O- 1 CM 1 CM 1 CM 1 OJ 1 CM lOJlOJlOJICMIOJlOJlOJ IOJI l IOIOIO IOIOIOIOIOIO 1 l I I I I t 1 1 1-J-IGlC'C ICICICICICIC 1 It— It— I-— It—I-- 1 CU IOJI ! 1 l(DICDICUI 1 » 1 * \ & | ,0 ! 1 1 rH 1 rH 1 rH IrHliHliHIfHliHlrH IrHlfHliHIrHlHlrHI OO 1 OO? 1 1 ^ 1 . 1 . !llll^l, !OIOIOiOIOIOI*HT-l£-nr-[ 1 1 (A 1 03 1 <0 lCOI(0|cnitOIV)l(0 ININININININlO«IO*4 1 1 _C 1 ,_1 1 ^ 1X1^1^1^1^!^ 1 . i iiiiii iiiiiiiiiiii i c i d i c i c: « c t d i x: i ieipie iaiaiaiaia,ioHicoicdialicd!aji(flsoNioNJ 1 IOIOIO IOIOIOIOIOIO IOIOIOIOlOIOiO lO! i iroiroiro iroiroiroiroiroiro l ro ! ro l ro ! ro i ro I ro i ro iroi 1 1 * 1 * 1 * 1 * 1 * 1 * 1 * 1 •» 1 • I nl • ! * I * t * I •* ! * I » 1 i »o i X I X I X lXIXlXiXlXlX IXIXIXIXIXIX(X 1X1 1 IOIOIO IOIOIOIOIOIO IOIOIOIOlOIOiO lO! i » mi mi mi mi mi mimi mi mi mi mi mi mi mi mi mi mr 1 IXIXIX IXIXIXIXIXIX IXIXIXIXIXIXIX 1X1 l 1 CMI CMI OJl CsJIOJI OJl OJl OJl CMI OJl OJI OJI OJl CMI CMI CMI CMI 1 IOIOIO IOIOIOIOIOIO IOIOIOIOlOIOiO IOI i IOIOIO lOlOIOIOlOiO IOIOIOIOlOIOiO 1 O ! i i m i r»- i vo iooimioi'jDiroio imir-icxiioi^i--iF- i go i i *~ i -- i cm i cm i--i--iroicMi--iT- iCMlojl^iroiojiroio soji 1 1 CT* 1 0 1 0 IC7NlO^I-CJ\|O^ICJvlO ICJ\IOICJ\ICrNlO\ICJ\l(7\ 1 Cft J i-iii iiiiii • ¦ ¦ i • 9 i i i147 999 c.d. tabeli i—7 7° 7 T T i 7 1 1 i r i 1 n **-T T "T icMir^iQiv£)iioiinir\i io ia?ivoioic^ i vo i o ic im i r. i l icMlroicMiroiroi-d" Il- i cm I -d" I ro I ro i cm i ro ik^ i ,- iro i i *- i O i o • O i J • • * ¦ • ¦ i m i io i m i i ioi 1 <- 1 CM 1 CM 1 CM 1 1 1 III 11 IS III III 1 t- 1 ¦«<- Ir- ! 1^- 1 1 O 1 1 1 1 1 I" 1 1 1 1 II 1 1 1 I 1 t- 1 | 1 ! 1 1 1 1 1 III II i 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 t | II II 1 ii i i imimirHi t i i i i i i i i i ii i i i c\j i X i o i IO' i i i i i i O i O » i imimimi^icMiCiioiCMi i i imiir* im i<- i *- i 1 |CMICMlCMlrHlOIOJItdrOI»l 1 1 ll-ll- !t- 1* 1 * l i i*i*i*ioiooiwoio«*ihi i i i»i*i* ix ix i lOS|XlXIXICMIOfOl^rOlOr-IIOI 1 1 IXIX IX IO IO 1 i lOioiotEioiaiihoiGiiiifi ioio io imimi i iroiroiroioiroi.cip«ciaJi i i i ro i ro i r^ i x ix i llXlXlXlrHlXIIIII4-l| 1 1 IXIXIXICMICMI i iOioioioiuit-icmidi i i ioio io io io i 1 | i 1 1 1 1 1 1 i l 1 II 1 1 GJ'I 1 t 1 1 1 1 1 1 1 i 1 1 1 II 1 ICI 9 l CD 1 O 1 O 1 O I * 1 1 1 • 6 ¦ ¦ 1 ' I C •*-¦ i O 1 1 1*1*1*111111 II Itllllll lll| II 1 « HI » 1 lll-il-ll-i 1 1 l 1 1 1 1 1 1 1 1 O fll ' *- l I I 1 i ! 1 I I i 1 1 I II i I J* i 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 II i 1 -O 1 1 i i i i i i i i t i i i ii i i i m i t i i i i i i i i t i i i i i i timi iii i i i i imi i i to i * i i i * o i ¦ i!»i ici i i i i i • i i i cm i co i £ bo i £ ari ?i 1 1 £ 1 lO 1 4) 1 1 1 | 1 It-I 1*1 iCbOIOICDNIrHOl t [^ 1 4) 1 * 1 ,0 1 1 1 1 1 1*1 1 CMI • 1 ^. 1 fl^JI H M OH i 1 IrHirHlOI 1 1 1 1 ICI l4eiHl'T3CMIOl^!Sl.C»l 1 1 1 O I blTM 1 I 1 II II 1114)11 ID 1 O 1 , \ U *\ U) lONI I 1 (0 i N 1 O *l 1 1 l 1 131 1 H lf\ 1 £ 1 £h 1 -M C I ^ 031 X C I 1 1 Jd 1 1 -H 1 *H 0) 1 1 .£ 1 H 0) 1 1 IIICI-CO)! 1 1 1 1 IOI l4C0lVitp«ICNIE,Olca,ai i i ci 1 aj i o ni i i i i i * i i . i i i i loi i ; —4—4—l—4—-I—i—-4—<--—i--—i--—i-—i—i-—i—\— $ j—-j 1 1 1 1 1 1 1 » 1 1 1 1 O l 1 1 1 i 1 i i o ' o i o i o i i i i i i icMimimimio^ioi i iroiroiroiroi i i i i m i o i * i *- i *- • *- i cm -h i cm i 1 1 » 1 « | » | * 1 1 1 1 l<-ICMlXl*l*l*l*Cl*l 11X1X1X1X1 1 1 1 1*1*10 1X1X1X1X0,1X1 i vo i o i o i o i g i i i i ixiximioioioioa^io i ii mi mi mi mi i i i ioioiXimim!mim-pimi i 1X1X1X1X11 II 11 III fOl IOI CMIXIX IX 1 X W 1 X 1 1 1 CMI CMI CMICMI 1 1 1 IXIXIX 1 CMI CMI CMI CMcOl CMI IIOIOIOIOI 1 1 1 IOIOIOIOIOIOIOCIOI 1 Lf\ 1 CM 1 CM 1 CM 1 CM 1 CM ICM ICM 1 CM 1 CM 1 CM 1 CM ICMICM ICM ICM ICNJ 1 iiiiiiii i i i i i i i i i i i m i i l l £ 1 £ 1 £ 1 O 1 O IOIO 1 O 1 O 1 O 1 O IOIO IO 1 * IO I 1 1 -TJ Ol ,0|,OI»l*l*.l* 1*1*1*1* 1*1*1*10) 1* 1 l 1 | U 1 ^H ^rl 4) 1 4) 1 4) 1 4 14)14)14)14) 10)10) 10) 1 10) i 1 IO-C04 0H3I2 13 13 I3I3I3I3 1313 13 IW 13 ! IH£IH£IH£IHIH IH IH IHIHIHIH IHIH IH i X IH 1 1 l.£0)|.£4)i.£4)IOIOIOIO(OIOIOIO IOIO IO II IO 1 1 1 O NI O Ni O NI 4 i 4* 143 |4 | +J 1 4* 1 4- 1 4- 1 -l- 1 4^ |4- IO 1 4 1 l IOIOIOIOIOIOIO 1 O 1 O 1 O 1 O IOIO IO IO IO 1 1 ifoiroiroiroiro iroiro lioiroiroiro iroiro iro iro iro i iroiaTiKiKiEisr ix* ix* i x* i x* i x* i x* i x t x ix? ix* ix* 1 1 lOlOIOIOIOIOIOIOIOiOiO IOIO IOIO IO 1 1 1 mi mi mi mi mi mi mi mi mi mi mi mi mi mi mi mi l IXIXIXIXIXIXIXIXIXIXIX IXIX IX IX IX 1 1 1 CMI CMI CMI CMI CM CMI CMI CM,l CMI CMI CMI CMI CMI CMI CMI CMI 1 IOIOIOIOIO IOIO IOOIOIO IOIO IO IO IO 1 ICMIOIOIOIOIO IO IO 1 O 1 O 1 O 1 O IOIO IO IO IO 1 i—i—1—1—«—f—j—i f—-|—-l—-1—j—-]—i—~j—-i-—i 1 icoil-ioicMim 10 im ioioimiro loim im i^r 10 i 1 iroiCMiroiroi^t i a i 0 i cm l *- i o ¦ *- icmipo 1 i 1 1 CJ 1 OS 1 O. i 0 § 0^ 1 GO IGO 8 CJ* * 0 1 lO^IO^ 1 0 !0 I0 1147 999 c.d. tabeli r_.f , , r i { 1 i -j- , r-—.- r ( I CMI III lift I III I I li I I I IT\ im I CM I I ICM I m I m I I j r 1 1 r 1 i ! ! i ^ i f ^—"—f \~——! I T—I III III I | |ll I I II I *—I II I I I I I I III I I I I I II I I I I I I I I I I I | I | || I | I I I I I I II III r—i- 1- 1- r r 1-——r r——-i -i r t -i t r~ 1 i oi iii i i i i i iii i i ii i *~ i i i i i i i i i i i i i i i i ii i i i i i i i i ii iii i 4- 1- 1- 1 1- -v- 1- 1 1-- -i- 1- ?• 1 * 1-—-—i i oni iii iii; i i i t i i ii i ii i i i i i i i i i i i i i i ii i i i i i i i i ii iii r—t r r 1 r 1 1 i 1 1 1—*—t 1 f 1 1 iooi i o i o i o i o i o i o i o in* iv£ivoic^io iao i^oi I I l*l*l*l*l*l*l»l»|*|*l*l*|*l*l I II I *- I CM I vO I^I<-It-Ix- IO I O I O I O I r- l O IOI L X L——I L. I- U U U 1 4 -I -*» -I 4. 1- 4 li i i i ir\ i i i i iini i iiAiooiGOi i |lCMlCMIOI*llT\l < I 1*1 I 1*1*1*1 I i i i ir-i«li*iir\iirimicMimimimi.d'imi i i i* i*i*icioji*i»i*i« i*i*i*i»i*i i I l C !CICl£»IClClClC l C I C I C I C I C l C l I I 10) I OJ I 0) I TJ I t-l I iJ t 0) I 0) I OJ I 0) I 0) I OJ I 0) 10) I I ir--l3 I 3 i 3 I I M I N. I 2 I 3 i 3 l 3 i 2 l 3 I 3 13 i I 1 IrH I i-i I I IO IOIOI-H I C I OJ I O I O IO IOIOIOIO IO I I I I 4-» I 4- I -P I CX I CO I £ I 4- I 4-» I -P | -p | -p I -P I P^ I -P I I [—} r r r J , r- , j -| <-}^ f A {. 1 1 i i m i i i i i i m i i i ii i h i i i i PC i ! i m i ir i i 1X1 I CT» 1 l l IOI l I I CM I O 3 O I t~ 1 r- I lT» I * I CM I GO I * I ON I I I I CM I ON I I IO I CM I PO | • 1 * I t- I H I O I* I Cl * I -H r- I I ^ I X I *! i vo i o oi * i * i x ix i *i o mi o o ' x i cdi ci Cri o*- i o i c i I IOCMlXIXlO lOIXI Cl-I O m I O I W I Ol 0*1 ^ * I CMI 0) I i io ioioi ini mioictJio i miici-Pi-uHiosiE 131 i 1 roi mi mix 1x1 m 1 -p 1 m 1 x 1 o 1 oj 1 oi i r-i 1- i o irHi 1 IX 1X1X1 CMI CM I X I 3 t X I CMI«HIOIO^IjCOIrH^-IOI I IO IOIOIO IOIOIOIO IO It^IOJIcC^IO^IOt-I-PI r—t—-—1 r 1 1 1 r 1 1 1- 1 r 1 r 1 1 II 111 1 1 1 1 1 m 1 1 1 1 1 11 lin I W I CM I CM I *- ICMICMICMICM Ir- I CM I CM I .CM I CM ICM I CM I I 1 j. f {- ' -.[——,j j— j —|—,—j™-f 1 f -i ! 11 * 1 1 1 1 1 1 o 1 -h 1 1 1 1 1 1 1 I • I O IOIOI I I O I O I O I r- IHIOIOICIOIOI I I Ir- I t- I t- I C I *- I *- I *- I IO It-It-It-It- It- | I I I * I * 5 * I -0 CM i * I * I *|* IC I *l *l *l *l * I 1 i 1 io) 1 o 1 o 1 o 1 o 1 oj 1 o 1 oj 1 .£ o 1 * 1 a 1 oj 1 o 10 1 1 I 13 I3I3IJh*I3INI3I3 IOr-13131313 13 111 I IrH IrHliHI-Pl^lr-IlClrHlrH 1 O * I r-f ! r-l I rH I rH liH 1 I I IO lOiCliHOJlOIOJlOlO I N cd I O I O I O I O IO I I I |4-5 I-P|-P|£NI-P1,0|-PI-P | -h £ | * i 4- I -P I -P | -P I I h * + .4. f. h 1-— 1- h -fr— 1 -«r- -*-* H * I -I II I I I I I I 1*1 III I 1*1 I II I I I I I I * I IT\ | IOI I I IrHI i I IO IOI IO I O I O I rH I X IO IfOlOI I IO IOI 1 im imioim imimioi cMim i *imi 101 oi cMimi 1 1 * 1 *imi * 1 *i *icoio 1 * 1 ci * i -h mi i m i X i * i mix 1x1 *ix iXiXicdmiooi^ lojicicio IO iCi 1 10 101X10 10101-PiOmio 1 n 1 o 1 o «i Sm » 1 cmioji i 1 lpi mioi mi mi ini3io i i/NiP^i4-i«Pr-HO0iX 131 1 ix iximix !Xixi^ii mix ioiajitiiHPiiooiiHi I I CM I CMlXl CM I CMI CMII IX 1 CMI-HiOlotnl^OIr-imiO! 1 IO IOJOIO IOIOI%- I O I O IT3IC0I (d-P I o I I J. 1 -_L, «L.. 1 1 1— 1 U 4-., !»- J. J i.-- --I . i iCMtO IOIOIO IOIOIOIO IO IOIOIOIO IO IOI r-~4 T f "f— ! j—»—I -»J——-j —-|™-J- } ——-!_« f-.-»-^}-„ j 5— 1 00 1 oo i • i • imi • i • i • i • j • i • i • i • i • i • i I * I *lT3l'0 1 * I «0 1 Tj I T3 I T3 ITJITJIT? lT3 I *0 I.TJl I t— I CM I • I • I x— 1 *l • I • I • I • I • I • I • I « I • I l<^ IONICIC ICTNlCiCIC IC ICICICIC IC ICI147 999 9 Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wyodrebniania podofilotoksyny, znamienny tym, ze sporzadza sie roztwór zywicy zawierajacej podofilotoksyne w rozpuszczalniku organicznym ewentualnie zawierajacym wode, na powstaly roztwór dziala sie srodkiem kompleksujacym bedacym zwiaz¬ kiem aromatycznym lub heteroaromatycznym wybranym z grupy obejmujacej fenol, toluen, chlo- robenzen, anizol, o-, m- i p-ksyleny, nitrobenzen, aniline, pirydyne, naftalen, alkohol furfurylowy, chinoline i izochinoline, powstaly staly kompleks oddziela sie z roztworu i z tego kompleksu wyodrebnia sie podofilotoksyne, po czym ewentualnie powtarza sie obrób¬ ke oczyszczajaca i na wyodrebniona podofilotoksyne ewentualnie dziala sie wodnym roztwo¬ rem zasady, 2. Sposób wedlug zastrz.1, znamienny tym, ze jako rozpuszczalnik or¬ ganiczny stosuje sie etanol. 3. Sposób wedlug zastrz.1, znamienny tym, ze w co najmniej dwóch ko¬ lejnych cyklach obróbki oczyszczajacej stosuje sie rózne zwiazki aromatyczne lub hetero¬ aroma tyczne. 4. Sposób wedlug zastrz.1, znamienny tym, ze ostatni etap oczyszcza¬ nia prowadzi sie kontaktujac roztwór podofilotoksyny w nie mieszajacym sie z woda roz¬ puszczalniku z wodnym roztworem zasady. 5. Sposób wedlug zastrz.4, znamienny tym, ze jako rozpuszczalnik stosuje sie chloroform. 6. Sposób wedlug zastrz.1 albo 4, z n a m i e n n y t y m, ze jako zasade stosuje sie wodorotlenek metalu alkalicznego. PL PL