PL130796B1 - Culture medium for production of concentrates of mesophilic lactic acid bacteria - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest pozywka do produkojl konoentratów mezofllnyoh bakterii wie¬ kowyoh, znajdujaoyoh zastosowanie przy produkojl serów dojrzewajacych, masla 1 twarogów w zakladach mleozarakloh.Znany sposób wytwarzania konoentratów mezofilnyoh bakterii wlekowyoh prowadzi sie przez nannazanle komórek na specjalnie dobranych podlozaoh. Nastepnym etapem jest sageszozanle Basy bakteryjnej 1 jej utrwalanie. Sklad znanego podloza, na którys prowadzi sie nannazanle komórek bakteryjnych jest nastepujacys mleko hydrollsowane pepsyna 50 gram/litr, nanok ku¬ kurydziany 30 gram/litr, glukoza 5,0 gram/litr, oytrynlan sodu 5,0 gran/litr, slarozan man- ganawy 0,12 gran/litr, slarozan magnezowy 0,12 gram/litr, slarozan oynkowy 0,12 gran/litr, woda - uzupelnienie do objetosci 1 litra.Hodowle komórek bakteryjnych prowadzi sie przy stalym pH 6,4 pozywki. W tym oelu prowa¬ dzi sie w ozasle hodowli neutralizacje wytwarzanego kwasu mlekowego za pomoca 27&-toweJ wody amoniakalnej. Po zakonczeniu hodowli komórki odwirowuje sie na wirówce. Oddzielone komórki zawiesza sie w substancji ochronnej 1 poddaje utrwaleniu poprzez zamrozenie, suszenie roz- pylowe lub liofilizacje. Próby zlloflllzowanla komórek na tym podlozu hodowlanym bez odwiro¬ wania masy bakteryjnej nie daly pozytywnych rezultatów. Zastosowanie niewielkiej prózni na¬ wet w bardzo niskiej temperaturze doprowadzalo do gwaltownego wrzenia.Z nlemieoklego opisu patentowego nr 2 539 629 znana jest pozywka, która stosowana jest w produkcji mleczarskiej, ale dla innego oelu, a mianowicie sluzy do przygotowania zakwasów roboozyoh czyli namnozenia bakterii mlekowych ze szozepionkl, która moze byc równiez "kon¬ centrat mezofilnyoh bakterii mlekowych". Pozywka ta na 100 ozesol wagowych w przeliczeniu na sucha mase zawiera 1 - od 20 do 95 czesci produktu mlecznego zawierajacego zdecydowanie wieksza czesc slodkiej serwatki a mniejsza ozes<5 mleka,2 130 796 - ad 0,1 do 30 ozesol, najkorzystniej 0,2-10 czesci zródla azotu, - od malej Ilosci do 30 ozesol cytrynlaniu, najkorzystniej 5-20 ozesol, który jest wazny dla oslagnleola fagorezystenojl, ¦- od malej ilosoi do 20 ozesci fosforanu, najkorzystniej od 1-7 czesci, który jest wazny dla oslagnleola fagorezystenojl.Pozywka ta, ze wzgledu na swój sklad wykazuje wlasciwosci fagorezystentne za oo odpo¬ wiedzialne sa zawarte w niej cytryniany 1 fosforany. Na etapie produkcji zakwasów roboozycb jest to Istotna wlasciwosc. Dodatek soli buforujacych oraz wiazacych jony wapnia /cytry¬ niany, fosforany/ w ilosciach wskazanyoh wedlug opisu patentowego RFN jest zbedny podczas produkcji koncentratów mezofilnyoh bakterii mlekowych 1 pozywka ta nie nadaje sie do ich wytwarzania .Celem wynalazku jest opracowanie skladu pozywki hodowlanej do produkcji liofilizowa¬ nych koncentratów mezofilnyoh bakterii mlekowyoh o zwiekszonej aktywnosci, aby mozna bylo utrwalac namnozona biomase na drodze suszenia liofilizacyjnego bez uprzedniego odwirowywa¬ nia masy bakteryjnej.Sklad pozywki hodowlanej powinien zapewniac osiagniecie maksymalnej ilosol drobnoustro¬ jów podczas namnazanla komórek w optymalnej temperaturze rozwoju przy stalym pH. Jednoczes¬ nie sucha masa pozywki powinna byc mozliwie jak najnizsza, aby po wysuszeniu otrzymac jak najwieksza ilosc komórek w 1 gramie* Za wlasolwe namnozenie komórek zarówno pod wzgledem ilosciowym jak tez jakosciowym tj. jej aktywnosci odpowiedzialny jest caly sklad pozywki, a nie pojedyncze komponenty. 0 przy¬ datnosci pozywki do konkretnego oelu deoyduje nawet dodatek jednego skladnika o odpowied- 4. niej kompozycji* W pracy nad wynalazkiem okazalo sie nieoczekiwanie, ze postawione zadanie spelnia poniz¬ sza pozywka do namnazanla mezofilnyoh bakterii mlekowych o skladzie: mleko odtluszczone w proszku 70,0-80,0 gram/litr, ekstrakt drozdzowy 1,0-2,0 gram/litr, glukoza 3,0-5,0 gram/litr, oytrynian sodu 2,0-3,0 gram/litr, siarczan manganawy 0,10-0,15 gram/litr, slarozan magnezo¬ wy 0,10-0,15 gram/litr, slarozan cynkowy 0,10-0,15 gram/litr, woda - uzupelnienie do objetos¬ ci 1 litra.Pozywke o powyzszym skladzie zaszczepia sie uprzednio przygotowanym lnoculum i prowadzi hodowle w stalej temperaturze 27°C do momentu osiagniecia pH 5,0. Nastepnie wlaoza sie uklad neutralizacji 1 prowadzi dalej hodowle na stalym poziomie pH 6,4-6,6. Neutralizacje prowadzi sie za pomooa 20%-wego roztworu NaOH. Po ukonozenlu hodowli dodaje sie jalowy 18%-towy roz¬ twór laktozy. Nastepnie sohlodzona, namnozona biomase rozlewa sie do butelek, zamraza 1 su¬ szy sublimacyjnie, W pozywce do produkoji koncentratów bakteryjnych wedlug wynalazku cytryniany spelniaja Inna role. Ich obecnosc zreszta w ilosci znaoznle nizszej, anizeli wedlug opisu patentowego RFN jest niezbedna do uzyskania komórek bakteryjnych o wlasolwej aktywnosci aromatotwórczej.Pozywka wedlug wynalazku pozwala na utrwalenie namnozonej biomasy mezofilnyoh bakterii mlekowyoh przez suszenie liofilizaoyjne bez uprzedniego odwirowywania masy bakteryjnej. Sto¬ sowanie dotychczasowej pozywki wymagalo odwirowania komórek, a nastepnie zawieszenia lcb w substanojl ochronnej przed liofilizaoja. Komórki wyhodowane na nowej pozywoe liofilizuje sie wraz z pozywka po dodaniu substancji ochronnych.Przy zastosowaniu nowej pozywki uzyskano koncentracje bakterii mezofilnyoh paciorkowców mlekowyoh i - 7 i 10 komórek/ml. Stosujac znana pozywke uzyskuje sie taka sama koncentracje komórek w ni, ale aktywnosc fizjologiczna kultur uzyskanych w hodowli na nowej pozywoe jest 2-3 krotnie wyzsza od kultur otrzymanych na dotychczasowych pozywkach. Sprowadzajao kultury do porównywalnej aktywnosci uzyskuje sie 2-3 krotnie wieksza wydajnosc ? tej sa^^j llosol pozywki. Ponadto pozywka jest latwa do przygotowania, gdyz nie wymaga hydrolizy pepsynowej mleka 1 znaoznle prostsza technologia, bowiem zostala wyeliminowana Jedna operacja, a miano- wiole odwirowywanie komórek.130 796 3 Przedmiot wynalazku zostanie blizej objasniony w przykladzie wykonania.Przyklad. Sklad pozywki do hodowli koncentratów mezofilnych bakterii mlekowych Jest nastepujacyt 1,75 kg mleka odtluszczonego w proszku "instant", 115 g glukozy, 57,5 g cytrynianu sodu, 23 g ekstraktu drozdzowego, 2,76 g MgS04, 2,76 g MnS04, 2,76 g ZnS04 oraz woda w ilosol uzupelniajacej do 23 litrów; Pozywke wedlug wynalazku do produkcji konoentratów wykorzystuje sie nastepujaco* Powyz¬ sze skladniki wsypuje sie do fermentora 1 po wymieszaniu 1 rozpuszczeniu sprawdza sie pil pozywki, które powinno wynosic 6,6-6,3, jezeli Jest za niskie neutralizuje sie za pomoca 20£-wego wodorotlenku sodu. Sterylizacje pozywki prowadzi sie w fermentorze przy 115°C. Po ochlodzeniu do temperatury 27°C pozywke w fermentorze zaszczepia sie 3% lnooulun, przygoto¬ wanym na jalowym mleku odtluszczonym. Inkubacje inoculum prowadzi sie w temperaturze 23 C.Hodowle biomasy prowadzi sie w fermentorze w stalej temperaturze 27°C do momentu osiagniecia pil 5,0. Po osiagnieciu pH 5,0 wlacza sie uklad neutrallzaojl 1 prowadzi dalej hodowle na stalym poziomie pH 6,4-6,6. Pozywke neutralizuje sie 20&- przerwania hodowli jest zmniejszenie sie zuzyoia neutralizatora w jednostce czasu. Po za¬ konczeniu namnazanla zawartosc fermentora chlodzi do temperatury okolo 11°C 1 dodaje 590 ml l8£-towego jalowego roztworu laktozy. Po wymieszaniu namnozona biomase rozlewa sie do jalowych butelek po 150 ml, zamraza 1 suszy sublimacyjnie. Wysuszony koncentrat miele sie i poddaje badaniom. Gotowy produkt pakuje sie w woreczki z folii trójwarstwowej.Zastrzezenie patentowe Pozywka do produkcji konoentratów mezofilnych bakterii mlekowych, zawieraJaoa glukoze, cytrynian sodu, siarczan manganawy, siarczan magnezowy, siarczan cynkowy, znamienna tym, ze sklada sie zt 70,0-60,0 g/l mleka odtluszczonego w proszku, 1,0-2,0 g/l ekstraktu drozdzowego, 3,0-5,0 g/l glukozy, 2,0-3,0 g/l cytrynianu sodu, 0,10-0,15 g/l siarozanu manga- nawego, 0,10-0,15 g/l siarczanu magnezowego, 0,10-0,15 g/l siarczanu cynkowego oraz wody w Ilosci uzupelnlajaoej do objetosci i 1. PL

Claims (1)

1. Zastrzezenie patentowe Pozywka do produkcji konoentratów mezofilnych bakterii mlekowych, zawieraJaoa glukoze, cytrynian sodu, siarczan manganawy, siarczan magnezowy, siarczan cynkowy, znamienna tym, ze sklada sie zt 70,0-60,0 g/l mleka odtluszczonego w proszku, 1,0-2,0 g/l ekstraktu drozdzowego, 3,0-5,0 g/l glukozy, 2,0-3,0 g/l cytrynianu sodu, 0,10-0,15 g/l siarozanu manga- nawego, 0,10-0,15 g/l siarczanu magnezowego, 0,10-0,15 g/l siarczanu cynkowego oraz wody w Ilosci uzupelnlajaoej do objetosci i

1. PL