PL122319B2 - Process for preparing carbobenzoxy-l-prolylglycine amide - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania amidu karbobenzoksy-L-proliloglicyny, przeznaczonego do wytwarzania peptydów, a w szczególnosci hormonu luliberyny i jej analogów oraz analogów oksytocyny.Znane sa dotychczas dwie grupy sposobów otrzymywania amidu karbobenzoksy-L- proliloglicyny. Jedna grupa sposobów polega na sprzeganiu aktywowanej formy karbobenzoksy- L-proliny z estrem etylowym glicyny i nastepnie wymianie estru na amid przez dzialanie amoniaku.Ogólna wada tych sposobów jest otrzymywanie produktu zanieczyszczonego, o czym swiadczy przede wszystkim temperatura topnienia. Druga grupa sposobów polega na sprzeganiu aktywowa¬ nej formy karbobenzoksy-L-proliny bezposrednio z amidem glicyny. W tej grupie sposobów znanych jest siedem rozwiazan szczególowych, z których cztery polegaja na aktywowaniu karbobenzoksy-L-proliny przy pomocy estrów aktywnych, co wymaga odrebnego etapu syntezy estru aktywnego. Trzypozostale sposoby polegaja na bezposrednim aktywowaniu karbobenzoksy- L-proliny. Dwa z nich to aktywowanie przy omocy dicykloheksylokarbodiimidu, który daje produkt nieczysty, a trzeci to aktywowanie przy pomocy chloromrówczanuizobutylu w srodowi¬ sku dimetyloformamidu [Shields J.E., opis patentowy Stanów Zjedn. Ameryki 3853834 (1974)].W tym ostatnim sposobie wytwarzania mieszanego bezwodnika karbobenzoksy-L-proliny z monoestrem izobutylowym kwasu weglowego prowadzi sie w dimetyloform-amidzie przez 5 minut, a nastepnie dodaje sie zawiesiny chlorowodorku amidu glicyny z N-metylomorfolina w dimetyloformamidzie i reakcje prowadzi sie przez 2-3 godziny w temperaturze—15°C, a nastepnie kilkanascie godzin w temperaturze pokojowej. Otrzymuje sie produkt z wydajnoscia 55% i o temperaturze topnienia 137-142°C.W trakcie badan stwierdzono, ze prowadzenie reakcji aminolizy w temperaturze pokojowej powoduje dysproporcjonowanie bezwodnika karbobenzoksy-L-proliny z monoestrem izobutylo¬ wym kwasu weglowego do symetrycznego bezwodnika karbobenzoksy-L-proliny i piroweglanu izobutylu, co w efekcie prowadzi do otrzymania produktów ubocznych w postaci karbobenzoksy- L-proliny i amidu izobutyloksykarbonyloglicyny. Jest to powodem malej wydajnosci wlasciwego produktu i zanieczyszczenia go przede wszystkim karbobenzoksy-L-prolina. Stwierdzono dalej, ze2 122 319 mozna znacznie zmniejszyc zakres reakcji ubocznej i otrzymac wlasciwy produkt z wysoka wydaj¬ noscia i o wysokim stopniu czystosci.Istota wynalazku polega na wytwarzaniu amidu karbobenzoksy-L-prolinyna drodze konden¬ sacji karbobenzoksy-L-proliny zchloromrówczanem izobutylu w srodowiskudimetyloformamidu i w obecnosci N-metylomorfoliny do mieszanego bezwodnika karbobenzoksy-L-proliny z monoes- trem izobutylowym kwasu weglowego i nastepnej aminolizy otrzymanego bezwodnika chlorowo¬ dorkiem amidu glicyny w tym samym srodowisku i w obecnosci N-metylomorfoliny, przy czym reakcje aminolizy bezwodnika karbobenzoksy-L-proliny z monoestrem izobutylowym kwasu Weglowego prowadzi sie w temperaturze od —10°C do —20°C i w czasie od 18 do 24 godzin.Sposobem wedlug wynalazku rozpuszcza sie karbobenzoksy-L-proline w dimetyloformami¬ dzie, roztwór chlodzi do —15°C, dodaje N-metylomorfoline i chloromrówczan izobutylu i po 15 minutach, chlorowodorek amidu glicyny i N-metylomorfoline. Reakcje prowadzi sie w ciagu kilkunastu godzin w temperaturze —15°C. Odsacza sie osad chlorowodorku N-metylomorfoliny a dimetyloformamid odparowuje pod zmniejszonym cisnieniem. Oleista pozostalosc rozpuszcza sie w chlorku metylenu i ekstrahuje 2% kwasem octowym. Warstwe organiczna suszy sie bezwodnym Na2S04 i rozpuszczalnik odparowuje od oleistej pozostalosci, która krystalizuje sie z octanu etylu.Otrzymuje sie produkt z 84% wydajnoscia teoretyczna o temperaturze topnienia 145,5—146°C.Sposobem wedlug wynalazku otrzymuje sie produkt z wysoka wydajnoscia o wyjatkowo wysokiej czystosci, o czym swiadczy podana wyzej temperatura topnienia a takze chromatografi¬ czna jednorodnosc w czterech róznych typach ukladów rozpuszczalników. Te wydajnosc i czystosc produktu uzyskuje sie dzieki prowadzeniu reakcji w niskiej temperaturze, co zapobiega dyspropor- cjonowaniu mieszanego bezwodnika karbobenzoksy-L-proliny z monoestrem izobutylowym kwasu weglowego.Wynalazek ilustruja ponizsze przyklady stosowania.Przyklad I. 14,97g(60 mM) karbobenzoksy-L-proliny rozpuszczono w 30 mL dimetylofor¬ mamidu, roztwór ochlodzono do temperatury —15°C i dodano 6,618 mL (60 mM) N- metylomorfoliny oraz 7,722 mL (60 mM) chloromrówczanu izobutylu. Po 15 minutach reakcji dodano 6,632g (60 mM) chlorowodorkuamidu glicyny i 6,618 mL (60 mM) N-metylomorfoliny. Po 18 godzinach reakcji w temperaturze —15°C odsaczono chlorowodorek N-metylomorfoliny a dimetyloformamid odparowano pod zmniejszonym cisnieniem. Oleista pozostalosc rozpuszczono w 200 mL chlorku metylenu i ekstrahowano 3X35 mL 2% kwasu octowego. Warstwe chlorku metylenu suszono bezwodnym Na2S04 i rozpuszczalnik odparowano. Pozostalosc krystalizowano z 500 mL octanu etylu. Otrzymano 15,27g produktu, co stanowi 84% wydajnosci teoretycznej.Produkt mial nastepujaca charakterystyke: t.top. = 145,5-146°C,[a]i*o8 = —41.12°(C l, metanol), [a]o2o,8 = —29,7° (C 1, dimetyloformamid) Analiza dla wzoru: Ci5Hi9N304 M = 305,33 obliczone: C 59,00%; H 6,27%; N 13,76% znalezione: 59,18%; 6,03%; 13,87% Wspólczynniki Rt chloroform/metanol/dioksan/stez. amoniak = 6:3,5:2,5:0,5; R4 = 0,75 n-butanol/kwas octowy/woda = 4:1:5; Rf = 0,67 etanol/woda = 7:3; Rf = 0,74 n-butanol/kwas octowy/pirydyna/woda = 5:1:4:1; R = 0,70 Przyklad II. 12,47g (50 mM) karbobenzoksy-L-proliny rozpuszczono w 25 mL dimetylo¬ formamidu, roztwór ochlodzono do temperatury —15°C i dodano 5,515 mL (50 mM) N- metylomorfoliny oraz 6-435 mL (50 mM) chloromrówczanu izobutylu. Po 15 minutach reakcji dodano 5,526g (50 mM) chlorowodorkuamidu glicyny i 5,515 mL (50 mM) N-metylomorfoliny.Po 14 godzinach reakcji w temperaturze —10°C z mieszaniny reakcyjnej wyodrebniono produkt tak jak opisano w przykladzie I. Otrzymany dipeptyd mial taka sama charakterystyke jak otrzymany wedlug przykladu I.Przyklad III. 2,495g (10 mM) karbobenzoksy-L-prolinyrozpuszczono w 5 mL dimetylofor¬ mamidu, roztwór ochlodzono do temperatury —15°C i dodano 1,103 mL (10 mM) N- metylomorfoliny oraz 1,287 mL (10 mM) chloromrówczanu izobutylu. Po 15 minutach reakcji dodano l,105g (10 mM) chlorowodorku amidu glicyny i 1,103 mL N-metylomorfoliny. Po 24122319 3 godzinach reakcji w temperaturze —20°C z mieszaniny reakcyjnej wyizolowano produkt tak jak opisano w przykladzie I, a otrzymany dipeptyd mial taka sama charakterystyke jak produkt otrzymany wedlug przykladu I.Zastrzezenie patentowe Sposób wytwarzania amidu karbobenzoksy-L-proliloglicyny na drodze kondensacji karbobenzoksy-L-proliny z chloromrówczanem izobutylu w srodowisku dimrtyloformamidu i w obecnosci N-metylomorfoliny do mieszanego bezwodnika karbobenzoksy-L-proliny z monoes- trem izobutylowym kwasu weglowego i nastepnej aminolizy otrzymanego pólproduktu chlorowo¬ dorkiem amidu glicyny w tym samym srodowisku i w obecnosci N-metylomorfoliny, znamienny tym, ze reakcje aminolizy bezwodnika karbobenzoksy-L-proliny z monoestrem izobutylowym kwasu weglowego prowadzi sie w temperaturze od — 10°C do —20°C w czasie od 18 do 24 godzin. PL

Claims (1)

1. Zastrzezenie patentowe Sposób wytwarzania amidu karbobenzoksy-L-proliloglicyny na drodze kondensacji karbobenzoksy-L-proliny z chloromrówczanem izobutylu w srodowisku dimrtyloformamidu i w obecnosci N-metylomorfoliny do mieszanego bezwodnika karbobenzoksy-L-proliny z monoes- trem izobutylowym kwasu weglowego i nastepnej aminolizy otrzymanego pólproduktu chlorowo¬ dorkiem amidu glicyny w tym samym srodowisku i w obecnosci N-metylomorfoliny, znamienny tym, ze reakcje aminolizy bezwodnika karbobenzoksy-L-proliny z monoestrem izobutylowym kwasu weglowego prowadzi sie w temperaturze od — 10°C do —20°C w czasie od 18 do 24 godzin. PL