PL100239B1 - Sposob oczyszczania nystatyny - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób oczysizezania antybiotyku nystatyny, zwanego w starszej lite¬ raturze fungiicydyna.

Nystatyna i metoda jej otrzymywania ze Strep- tomyces noursei sa omówione w opisie patento¬ wym Stanów Zjedn. Ameryki nr 2 797 li&3. Wzmlian- feuja tez o tyni Banlzen i Brown w „Fungicidin An Anitilbiotic Produced by a Soi! Actinomyoete" Proc.

Soc. Exiptl. Biol. Med. 76: 93 (11950) oraz Brown, Hanzen i Manson w „Effect of Fongicidin (nysta- tin) in Mice Injected wiith Lenthal Mixtures of Aureomycin and Camdida albilcalns', Science 1*77: 60© (1(953). W dalszym ciagu opisu antybiotyk ten okreslany jest pojedynczym terminem „nystaty¬ na".

IZnane ,sa metody izolowania nystatyny ze srodo¬ wiska fermentujacego. Przyklady takich procesów podano w opisach patentowych Stanów Zjedn. Am. nr 2 797,103, 2^80 781^ 3 38218414 oraz S5HT1(0I0l Ny¬ statyna, wyosobniana znanymi sposobami!, jest jed¬ nak niezbyt czysta i stanowi produkt niejednolicie krystaliczny. Splosoby otrzymywania czystej nysta¬ tyny, znane np. z opisów patentowych Stanów Zjedn. Am. nr nr 2 8i3I2 710, 21805 807, 350(9215(5 i 3.5flffl IKJtti, maja jedinak szereg wad. Wad tych nie ma sposób wedlug wynalazku, który polega na tym, ze wytwarzla sie zawiesine surowej lub cze¬ sciowo oczyszczonej nystatyny w nizszym alkano¬ lu,, powoduje rozpuszczanie nystatyny przez doda¬ nie slabego kwasu organicznego o wartosci pKa, no wynoszacej w temperaturze 25°C lyO—5,6, przesa¬ cza otrzymany roztwór w nizszym alkamolu, mie¬ sza przesacz z rozpuszczainikiem chlorowcowego- wodorowym, po czym zobojetnia mieszanine i przez dodanie wody wytraca sie oczyszczona nystaty- ne.

Nystatyne, oczyszczona sposobem wedlug wyna¬ lazku, mozna latwo przeprowadzac w postac kry¬ staliczna o wysokiej aktywnosci. Siposób ten zmniej¬ sza niebezpieczenstwo inaktywacjd nystatyny z po¬ wodu przypadkowego przedawkowania kwasu i moze byc latwo kontrolowany na skale produkcyj¬ na, przy uzyciu konwencjonalnej aparatury i zwy¬ klych reagentów, i rozpuszczalników.

Nystatyna,, isitosowana jako prodluikt wyljiscdowy w procesie, prowadzonym sposobem wedlug wynala¬ zku, moze byc surowa, zanieczyszczona lub czes¬ ciowo oczyszczona. Termin „nystatyna zanieczysz¬ czona" obejmuje nie tylko nystatyne, zawierajaca zanieczyszczenia chemiczne, ale takze nystatyne z zamieczysziczeniami fizycznymi, takiimi jak czastki mulu, substancje wlókniste i inne drobne zanie¬ czyszczenia, powodujace, ze nystatyna nie nadaje sie do farmaceutycznego wykorzystania.

Pierwszym etapem procesu wedlug wynalazku, jest wytworzenie zawiesiny nystatyny, stanowiacej produkt wyjsciowy, w nizszym alkanolu, to jest w alkanolu, zawierajacym li—4 atomów wegla, najkorzystniej w metanolu. Stosowana ilosc niz¬ szego alkanolu nie ma decydujacego znaczenia, ale 100239100239 aktywnosc nystatyny w zawiesinie powinna wyno¬ sic co najmniej okolo 25 000 jednostek/mililitr, ko¬ rzystnie okolo 100 000 jednostek/mililitr.

Do wytworzonej zawiesiny nystatyny w nizszym alkanolu dodawany jest slaby kwas organiczny, to jest kwas, nalezacy do grupy jedno lub wielozasa- dowych kwasów organicznych, które takze moga zawierac jedna lub wiecej grup hydroksylowych i których wartosc pKa w temperaturze 25°C wynosi 1,0—5,0. Przykladami takich kwasów sa kwasy ta¬ kie jak: octowy, maleinowy i cytrynowy, przy czym korzystnie stosuje sie kwas octowy i cytry- inowy^a zwlaszcza kwas cytrynowy. Ilosc kwasu, ^ofjiawftnego do, zawiesiny, izailezy oczywiscie od ro¬ dzaju kwasu, ale powinna wystarczyc. do rozpusz¬ czenia nystatyny. ; f SostroÓF -w. nizszym alkanolu przesacza sie. W ^lujpo^ie^nia wtoajnosci procesu saczenia moz¬ na dodawac do zawiesiny takie srodki pomocnicze, jak ziemia okrzemkowa. Mozna równiez stosowac dodatek wegla aktywnego, ale nie jest to koniecz¬ ne.

Korzystnie jest przemywac zuzyty placek filtra¬ cyjny porcjami swiezego nizszego alkanolu, 'w celu pelniejszego odzyskania nystatyny. Popluczyny niz¬ szego alkanolu powinny byc dodane do przesaczu przed dalsza jego przeróbka. Do otrzymanego roz¬ tworu dodaje sie rozpuszczalnik chloroweglowodo- rowy, np. cMoroform,, drwuichiorometan. Ze wzgledu na bezpieczenstwo korzystnie stosuje sie dwuchlorometan. Chloroweglowodór dodaje sie w ilosci 0,1—5,0 ml na 1 milion jednostek aktywno¬ sci. Otrzymana mieszanine zobojetnia sie do war¬ tosci pH okolo 6,0^8,0 przez dodanie odpowied¬ niej zasady, np. takiej jak trójetanoloamdna, dwu- etyloainiija, trójetyloamina, amoniak i wodórotleoek sodu.

Oczyszczona nystatyne wytraca sie przez doda¬ nie do mieszaniny wody i wyosobnia znanymi spo¬ sobami. Korzystna metoda polega na dodaniu kry¬ sztalów nystatyny, utrzymywaniu mieszaniny w stanie wrzedia pod chlodnica zwrotna i schladzaniu do temperatury nizszej od pokojowej, korzystnie do oteolo 0—li5°C. Otrzymana krystaliczna nystaty¬ ne oddziela sie np. przez odsaczanie lub odwiro¬ wanie.

'Przyklad I. 15„4 g odpadkowej nystatyny o aktywnosci mikrobiologicznej 4490i jednostek/mg miesza sie z 30O ml metasiodu w temperaturze oko¬ lo lfl*C i do otrzymanej zawiesiny dodaje 7,5 g jednowodaego kwasu cytrynowego, a nastepnie za¬ wiesine miesza sse w ciagu 30 minut, otrzymujac metny roz4w46#. Do roztworu dodaje sie 2,0 g zie¬ mi okrzemkowej i przesacza za pomoca filtru próz¬ niowego* w celu usunieci* stalych osadów. Osad przemywa sie 3 porcjami metanolu po 25 ml i po¬ pluczyny dodaje do przesaczu. Przesacz miesza sie i dodaje kolejno w okresie 5 minut 75 ml dwu- chlorometanu 30 mr40*/t mieszaniny trójchloroeta- noloamiijy z woda oraz 560 ml zimnej wody de¬ stylowanej, przy czyim otrzymuje sie zawiesine bez¬ postaciowej nystatyny. iW celu doprowadzenia wartosci pH do 6fi—7,0 dodaje sie do zawiesiny 6 ml 40% uwodnionej trój¬ etanoloaminy oraz 575 mg zarodkowych kryszta¬ lów nystatyny. Zawiesine utrzymuje sie w stainie wrzenia pod chlodnica zwrotna (41°C) w ciagu 15 minut, a nastepnie przez okres 2 godzin stopniowo oziebja do temperatury 10°C i utrzymuje w tej temperatuirze w ciagu dalszej godziny.

Zawiesine krysztalów osacza sie na filtrze próz¬ niowym, osad przemywa 60 ml zimnego uwodnio¬ nego 40% metanolu, a nastepnie 3 porcjami po 75 ml acetonu. Krysztaly suszy sie pod zmniejszonym cisnieniem w ciagu 2l0 godzin w temperaturze 45°C, otrzymujac 10,72 g nystatyny o aktywnosci mikro¬ biologicznej, wynoszacej 5360 jednostek/mg.

Przyklad II. Ii7„65 g surowej nystatyny o ak¬ tywnosci mikrobiologicznej 21940 jednostek/imiligram miesza sie z 2O0 ml metanolu w temiperaturze o- kolo 16°C, do zawiesiny dodaje sie 7,5 g^ kwasu cytrynowego i miesza w ciagu 30 minut. Nastep¬ nie do otrzymanej zawiesiny dodaje sie 1,0 g zie¬ mi okrzemkowej, przesacza na filtrze prózniowym, przemywa osad 3 porcjami po 1\7 ml metanolu i popluczyny dodaje do przesaczu.

Przesacz miesza sie i dodaje don kolejno przez okres 5 minut 50 md.dwuchlorometanu, 30 ml 40% uwodnionej trójetanoloaminy oraz 350 ml zimnej wody destylowanej, otrzymujac zawiesine bezpo¬ staciowej nystatyny. Dodatkowo dodaje sie do za¬ wiesiny 3,6 ml 40% uwodnionej trójetanoloaminy, aby uzyskac wartosc pH okolo 6,7—7,0-. Nastepnie dodaje sie 500 zarodkowych krysztalów nystatyny i utrzymuje w stanie wrzenia pod chlodnica zwrot¬ na (40°C) przez okres 14 minut, po czym stopnio¬ wo oziebia sie do temperatury 10°C przez, okres 2 godzin i utrzymuje w tej temperaturze w ciagu dalszej godziny.

'Zawiesine krysztalów odsacza sie na filtrze próz¬ niowym,, krysztaly przemywa 40 ml zimnego 40% uwodnionego metanolu, a nastepnie 3 porcjami a- cetoffiu po 50 ml, po czym suszy w ciagu 20 godzin 40 w tem(peraturze 45°C. Otrzymuje sie 7,lfc g nysta¬ tyny o mikrobiologicznej aktywnosci wynoszacej 60(00 jedlnositek/imiiligram. 45

Claims (1)

1. Zastrzezenia patentowe 1. Sposób oczyszczania nystatyny, znamienny tym, ze wytwarza sie zawiesine nystatyny w nizszym alkanolu, powoduje oczyszczanie nystatyny przez 50 dodanie slabego kwasu organicznego o, wartosci pKav wynoszacej w temperaturze 25°C l/>—15,0, przesacza otrzymany rozfWór w nizszym aUkaino- lu, miesza przesacz z rozipusizczalnikiem chLorowe- glowodcircwyim, (po ozym zobojejtnda mieszanine i 53 przez dodanie wody wyltraca z niej oczyszczona nystatyoe. 2(. Sposób wedlug zalstrz. 1, znamienny tym, ze otrzymany przy przesaczaniu roztworu placek fil¬ tracyjny przemywa sie nizszym alkanolem i doda- w je popluczyny do przesaczu. |3. Sposób wedlug zastrz. 1, roamienny tym. ze wytracona nystatyne przeprowadza sie w postac krystaliczna. 4w Sposób wedlug zastirz. 1,, znamienny tym, ze 65 jako nizszy alkanol s-tosuje sie mietanoil.? 5 5. iSipoisólb wedlug zastirz. 1, znamienny tym, ze jalko kwas. organiczny stasuje sie kwas cytryno¬ wy. 6. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako cMoroiwejglcwcdór stonuje sie dwuicMcTome- tan. 7. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym7 ze 6 wytwarza sie zawiesine nystatyiny w metanolu, roz- pusizcza nystatyne w kwasie cytrynowym, przesa¬ cza otrzymany roztwór i przemywa osad metano¬ lem, doidajac popluczyny do przesaczu, po czym 5 miesza sie przesacz z dwuchlorometamem, zobo¬ jetnia mlies'zanine i dodaje do niej wody, powodu¬ jac wytracenie nystatyny,