CS203131B2 - Method of cleaning the nystatine - Google Patents

Description

Předložený vynález se týká nového způsobu přípravy antibiotika nystatinu (uváděného ve starší literatuře jako fungicidin) a přesněji způsobu čištění surového částečně čištěného nebo kontaminovaného nystatinu.

Nystatin a jeho způsob přípravy z Streptomyces noursei jsou uvedeny Hazenem a j. v US patentu č. 2 797 183. Kromě toho je možno odkázat na práci Házen a Brown, Fungicidin, An Antibiotic Produced by a Soil Actinomycete, Proč. Soc. Exptl. Biol. Med. 76:93 (1950) a Brown, Házen and Mason, Effect of Fungicidin (nystatin) in Mice Injected with Lethal Mixtures of Aureomycin and Candida albicans, Science 117, 609 (1953). Antibiotikum je zde uváděno jedním výrazem nystatin.

V literatuře je známo několik metod isolace nystatinu z fermentačního média. Příklady těchto postupů jsou Házen a j., US patent č. 2 797 183, Vandeputte a j., US patent číslo 2 786 781, Vandeputte a j., US patent č. 3 332 844, a Renella, US patent č. 3 5.17 100. Nystatin izolovaný známými postupy není vysoce čistý stejnoměrně krystalický produkt. Způsob získávání nystatinu v této formě je samozřejmě vysoce požadovaný a v literatuře bylo navrženo několik způsobů, které však mají určité nevýhody. Příklady těchto postupů jsou v paten- . těch Vandeputte, US patent č. 2 832 719, Dutcher a j., US patent č. 2 865 807, Mendelsohn, US patent č. 3 509 255, a Esse, US patent č. 3 517 101.

Způsob podle předloženého vynálezu se vyznačuje tím, že se nystatin nejprve suspenduje v nižším alkanolu, načež se přidáním kyseliny citrónové uvede do roztoku, získaný extrakt v nižším alkanolu se filtruje, к filtrátu se přidá chlorované uhlovodíkové rozpouštědlo a vzniklá směs chlorovaného uhlovodíkového rozpouštědla a extraktu v nižším alkanolu se neu tralizuje na pH 6 až 8, s výhodou na 6,6 až 7,0, načež se přidáním vody vysráží vyčištěný nystatin.

203131 2

Předložený vynález se,týká způsobu čištění surového, částečně čištěného nebo kontaminovaného nystatinu, který poskytuje produkt vysoké účinnossi, který se snadno převede na vysoce krystalickou formu. Tento postup ommzuje. na minimum nebezpečí inaktivace nystatinu způsobené náhodným předávkováním kyseliny a může se snadno kontrolovat při výrobě ve velkém za použití běžných zařízení a obchodně dostupných činidel a rozpouštědel.

Nyssatin použitý jako výchozí mateeiál při novém čisticím postupu podle předloženého . vynálezu může být surový, částečně čištěný nebo kontaminovaný nystatin. Výraz kontaminovaný nystatin zahrnuje nejen nystatin, který obsahuje chemické znečišeěolos, ale také nystatin kontaminovaný fyzikálními znečištěninami, jako jsou částečky prachu, vláknitý mattriál a ostatní částečky, které mohou způsobovat, že nystatin je neakceptovatelný pro ké pooužií.

První stupeň postupu podle předloženého vynálezu je suspendování n^ístatiň^c^v^é^h^o výchozího maaeriálu v nižším alkanoíLu, například alkanolu s 1, 2, 3 nebo 4 atomy uhlíku, s výhodou v methanolu. ^Množiv! použitého nižšího alkanolu není rozhoodjící, ale aktivita оуу1я11nu v suspensi má být alespoň 25 000 jednotek na miliiitr, s výhodou alespoň 100 000 jednotek na milíiitr.

Po suspendování nystatinu v nižším alkanolu· se přidá kyselina citoonová. Mnnožtví kyseliny ·· přidané k suspensi musí být dostatečné, aby se rozpuusil nystatin.

Extrakt v nižším alkanolu se oddiltruje. Pro zlepšení účinku fi^ačn^ho postupu se přidává k suspensi pomocná fiHaační látka, jako je diatomický kysličník křemiččtý. Mů-že se také přidávat aktivní uhhl, · ale nevyžaduje se.

Filtrační koláč se s výhodou promývá dávkami čerstvého nižšího alkanolu, aby se zajistilo úplné získání nystatinu. Promývací nižší alkanolové podíly se přidají k extraktu nižšího alkanolu před provedením postupu.

K nižšímu alkanolovému extraktu se přidá chlorovaný uhlovodík. Příklady rozpouštědel jsou chloroform, dichlormethán a ostatní. Z důvodů bezρečnosti je výhodným rozpouštědlem dichlormethan. Chlorovaná uhlovodíková rozpouštědla se přidávají k nižšímu alkanolovému extraktu v mwožsví od asi 0,1 do 5,0 ml na milion jednotek aktivity.

. Směs rozpouštědla·a nižšího alkanolového extraktu se neutralizuje na pH od asi 6,0 do

8,0 vhodnou bází. Příklady bází jsou treehannolamin, dieehylamlo, triehhyaamin, amoniak a hydroxid sodný.

Vv^čštěný nystatin se sráží přidáním vody ke směsi a isoluje se běžným způsobem. Výhodným postupem je přidání očka krystalů nystatinu, potom zahhátí k varu a následnicí ochlazení pod teplotu místnostmi, s výhodou na teplotu od 0 do 15 °C. Vznnklý krystalický nystatin· se oddělí například filtrací nebo cennrifugací.

Vvnniez je blíže objasněn v následnících příkladech.

Příklad!· ’

Odpad nystatinu (15,4 g mirkobiologický účinek 4 490 jednotek/mg) se suspenduje v 300 ml methanolu při teplotě asi 16 °C. K s^pensi se přidá monoShrSrát kyseliny citrónové (7,5 g) a suspense se míchá 30 minut a získá se zakalený roztok. Přidá se - -diatomický kysličník křemičitý (2,0 g) a suspense se filtruje ve vakuu, aby se sdstraoiis zbylé pevné látky. Zbytek na filtru se třikrát promuje po 25 ml methanolu a promývací roztok se přidá k kému · filtrátu. Me.ehanolický filtrát se míchá a v pětiminutových intervalech se přidá 75 mj. dichlormethanu, 30 ml 40% roztoku trdthan^oami^^^u ve vodě a 560 ml · studené destilované vody a získá se suspense amorfního nystatinu. Pak se k suspenzi přidá dalších 6 ml‘40% roztoku triethanolaminu ve vodě a pH se upraví na asi 6,6 až 7,0, načež se přidá 375 mg krystalického nystatinu. Suspense se zahřeje k varu (41 °C) 15 minut a postupně se během dvou hodin vychladí na 10 °C a udržuje se na této teplotě další hodinu.

Suspense krystalů se odfiltruje ve vakuu a krystaly se promyjí 60 ml studeného 40% meehanolu ve vodě a třemi 75 ml dávkami acetonu. Kyytaly se pak suší ve vakuu 20 hodin při 45 °C a získá se 10,72 g ^slatinu, mikrobiologického účinku 5 360 jednotek/mg.

Příklad 2 .

Surový nystatin (17,65 g, mikrobiologický účinek 2 940 jednot,ek/mg) se suspenduje v 200 ml methanolu při teplotě asi 16 °C. Přidá se monnohrddát kyseliny citrónové (7,5 g) a 30 minutový mícháním se získá suspense. K této suspensi se přidá diatomický kysličník křemičitý (1,0 g) a zbylé pevné podíly se oddiltrují ve vakuu. Zbytek se promyje třemi 17 ml dávkami meehanolu a promývací roztoky se přid'a;ií k methanoHckém_U filtrátu. Meehannoický filtrát se míchá a v intervalech 5 minut se přidá 50 ml dichlormethanu, 30 ml 40% roztoku erietaanohminu ve vodě a 350 ml studené destilované vody, přičemž se získá suspense amoo^í’ního ^stati-nu. K suspensi se přidá dalších 3,6 ml 40% roztoku eriethnnohaminu ve vodě aby pH se upravilo na 6,7 až 7,0. Přidají se očka krystalického nystatinu (500 uig) a . suspense se. ohřívá k varu (40 °C) po dobu 14 minut, během dvou hodin se postupně ochladí na 10 °C a udržuje se na této teplotě · další hodinu.

Suspense krystalů se filtruje ve vakuu a krystaly se promyjí 40 ml studeného 40% roztoku methanolu ve vodě a pak třemi 50 ml dávkami acetonu. Kryjtaly se vysuší ve vakuu 20 hodin při 45 °C a získá se 7,12 g nystatinu, mirkobinlngického účinku 6 000 jednotek/mg.

Claims (6)

. PŘEDMĚT VYNÁLEZU

1. Způsob čištění ^slatinu, vyznačený tím, že se ^slatin nejprve suspenduje v nižším alkan^u, našež se přidáním kyseliny citrónové uvede do roztoku, získaný extrakt v nižším alkano^ se filtruje, k filtrátu se přidá chlorované uhlovodíkové rozpouštědlo a vzniklá směs chlorovaného uhlovodíkového rozpouštědla a extraktu v nižším alkanolu se neuuralisuje na pH 6 až 8, s výhodou na 6,6 až 7,0, načež se přidáním vody vysráží.vyčištěhý nystatin.

2. Způsob podle bodu 1, vyznačený tím, že se filtrační koláč získaný při fiiraččnm stupni promyje nižším alkanolem a promývací nižší hlkhnnlické roztoky se přidají k extraktu v nižším alkan^u.

3. Způsob podle bodu 1 nebo 2, vyznačený tím, že se vysrážený nystatin převede na krystalickou formu.

4. Způsob podíle bodů 1 až 3, vyznačený tím, že · se jako nižší alkami použije methanol.

5. Způsob podle · bodů 1 až 4, vyznačený tím, že se jako chlorované uhlovodíkové rozpouštědlo používá fichlormithhn.

6. Způsob podle bodu 1, vyznačený tím, že se nystatin suspenduje v meehanolu, přidáním kyseliny citrónové se uvede do roztoku, vzniklý methanolický extrakt se filtruje, filtrační koláč se promyje methanolem a meehanolické promývací roztoky se přidají k methanolickému extraktu, ke kterému se pak přidá fichlormithhn a získaná směs · dichlormethanu a melhannoického extraktu se neuuralisuje na pH 6,6 až 7,0 načež se přidáním vody vysráží nydtatin.