NO863077L - Fremgangsmaate til mikrobiell hydroksylering av forskolin og dens derivater ved neurospora crassa. - Google Patents
Fremgangsmaate til mikrobiell hydroksylering av forskolin og dens derivater ved neurospora crassa.Info
- Publication number
- NO863077L NO863077L NO863077A NO863077A NO863077L NO 863077 L NO863077 L NO 863077L NO 863077 A NO863077 A NO 863077A NO 863077 A NO863077 A NO 863077A NO 863077 L NO863077 L NO 863077L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- forskolin
- neurospora crassa
- atcc
- means hydrogen
- derivatives
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 15
- 241000221961 Neurospora crassa Species 0.000 title claims description 6
- 230000033444 hydroxylation Effects 0.000 title claims description 5
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 title claims description 5
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 title claims description 4
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 9
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 6
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 claims description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 3
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 claims description 3
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 claims description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 claims description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims 1
- OHCQJHSOBUTRHG-KGGHGJDLSA-N FORSKOLIN Chemical compound O=C([C@@]12O)C[C@](C)(C=C)O[C@]1(C)[C@@H](OC(=O)C)[C@@H](O)[C@@H]1[C@]2(C)[C@@H](O)CCC1(C)C OHCQJHSOBUTRHG-KGGHGJDLSA-N 0.000 description 45
- SUZLHDUTVMZSEV-UHFFFAOYSA-N Deoxycoleonol Natural products C12C(=O)CC(C)(C=C)OC2(C)C(OC(=O)C)C(O)C2C1(C)C(O)CCC2(C)C SUZLHDUTVMZSEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- OHCQJHSOBUTRHG-UHFFFAOYSA-N colforsin Natural products OC12C(=O)CC(C)(C=C)OC1(C)C(OC(=O)C)C(O)C1C2(C)C(O)CCC1(C)C OHCQJHSOBUTRHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZKZMDXUDDJYAIB-MLITWPTNSA-N 1,9-dideoxyforskolin Chemical compound O=C([C@@H]12)C[C@](C)(C=C)O[C@]1(C)[C@@H](OC(=O)C)[C@@H](O)C1[C@]2(C)CCCC1(C)C ZKZMDXUDDJYAIB-MLITWPTNSA-N 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- PXYAFNGUEZPJBI-OAUGPMCWSA-N [(3r,4ar,5s,6s,6as,10as,10bs)-3-ethenyl-6,10b-dihydroxy-3,4a,7,7,10a-pentamethyl-1-oxo-5,6,6a,8,9,10-hexahydro-2h-benzo[f]chromen-5-yl] acetate Chemical compound O=C([C@@]12O)C[C@](C)(C=C)O[C@]1(C)[C@@H](OC(=O)C)[C@@H](O)[C@@H]1[C@]2(C)CCCC1(C)C PXYAFNGUEZPJBI-OAUGPMCWSA-N 0.000 description 4
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 4
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 4
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000131459 Plectranthus barbatus Species 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 3
- WPDITXOBNLYZHH-UHFFFAOYSA-N desacetylforskolin Natural products O1C(C)(C=C)CC(=O)C2(O)C3(C)C(O)CCC(C)(C)C3C(O)C(O)C21C WPDITXOBNLYZHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- ZKZMDXUDDJYAIB-UHFFFAOYSA-N dideoxy-forskolin Natural products C12C(=O)CC(C)(C=C)OC2(C)C(OC(=O)C)C(O)C2C1(C)CCCC2(C)C ZKZMDXUDDJYAIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 150000004160 forskolin derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 3
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 3
- SUZLHDUTVMZSEV-WESICCPUSA-N (3R,4aR,5S,6S,6aS,10S,10aS,10bS)-3-ethenyl-6,10-dihydroxy-3,4a,7,7,10a-pentamethyl-1-oxododecahydro-1H-benzo[f]chromen-5-yl acetate Chemical compound O=C([C@@H]12)C[C@](C)(C=C)O[C@]1(C)[C@@H](OC(=O)C)[C@@H](O)[C@@H]1[C@]2(C)[C@@H](O)CCC1(C)C SUZLHDUTVMZSEV-WESICCPUSA-N 0.000 description 2
- WDJJFDJQYGLZPA-CGPDBNODSA-N (3R,4aS,5S,6S,6aS,10S,10aS,10bR)-3-ethenyl-5,6,10-trihydroxy-3,4a,7,7,10a-pentamethyl-2,5,6,6a,8,9,10,10b-octahydrobenzo[f]chromen-1-one Chemical compound O1[C@@](C)(C=C)CC(=O)[C@@H]2[C@@]3(C)[C@@H](O)CCC(C)(C)[C@@H]3[C@H](O)[C@H](O)[C@]21C WDJJFDJQYGLZPA-CGPDBNODSA-N 0.000 description 2
- ZKZMDXUDDJYAIB-SUCLLAFCSA-N 1,9-dideoxyforskolin Natural products O=C([C@@H]12)C[C@](C)(C=C)O[C@]1(C)[C@@H](OC(=O)C)[C@@H](O)[C@@H]1[C@]2(C)CCCC1(C)C ZKZMDXUDDJYAIB-SUCLLAFCSA-N 0.000 description 2
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SBMKZIAQTQIEHN-NRADYMPXSA-N Coleonol C Natural products [H][C@@]12[C@H](OC(C)=O)[C@@H](O)[C@@]3(C)O[C@@](C)(CC(=O)[C@]3(O)[C@@]1(C)[C@@H](C)CCC2(C)C)C=C SBMKZIAQTQIEHN-NRADYMPXSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000010412 Glaucoma Diseases 0.000 description 2
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- CLOQVZCSBYBUPB-VDCUXWMXSA-N [(3r,4ar,5s,6s,10s,10ar,10bs)-3-ethenyl-5,10,10b-trihydroxy-3,4a,7,7,10a-pentamethyl-1-oxo-5,6,6a,8,9,10-hexahydro-2h-benzo[f]chromen-6-yl] acetate Chemical compound O[C@H]([C@@]12C)CCC(C)(C)C1[C@H](OC(=O)C)[C@H](O)[C@]1(C)[C@]2(O)C(=O)C[C@](C)(C=C)O1 CLOQVZCSBYBUPB-VDCUXWMXSA-N 0.000 description 2
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- ZRSNZINYAWTAHE-UHFFFAOYSA-N p-methoxybenzaldehyde Chemical compound COC1=CC=C(C=O)C=C1 ZRSNZINYAWTAHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 2
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- WPDITXOBNLYZHH-KAACEJSMSA-N (3r,4ar,5s,6s,6as,10s,10ar,10bs)-3-ethenyl-5,6,10,10b-tetrahydroxy-3,4a,7,7,10a-pentamethyl-5,6,6a,8,9,10-hexahydro-2h-benzo[f]chromen-1-one Chemical compound O1[C@@](C)(C=C)CC(=O)[C@]2(O)[C@@]3(C)[C@@H](O)CCC(C)(C)[C@@H]3[C@H](O)[C@H](O)[C@]21C WPDITXOBNLYZHH-KAACEJSMSA-N 0.000 description 1
- CTIHYOZNWNAKHD-UHFFFAOYSA-N 4-methoxybenzaldehyde;sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O.COC1=CC=C(C=O)C=C1 CTIHYOZNWNAKHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000014181 Bronchial disease Diseases 0.000 description 1
- 206010006482 Bronchospasm Diseases 0.000 description 1
- 235000005320 Coleus barbatus Nutrition 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 241000221960 Neurospora Species 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007885 bronchoconstriction Effects 0.000 description 1
- 230000003491 cAMP production Effects 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N dihydroxy(oxo)silane Chemical compound O[Si](O)=O IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930004069 diterpene Natural products 0.000 description 1
- 125000000567 diterpene group Chemical group 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000012746 preparative thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
- C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D311/78—Ring systems having three or more relevant rings
- C07D311/92—Naphthopyrans; Hydrogenated naphthopyrans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
- C12P17/06—Oxygen as only ring hetero atoms containing a six-membered hetero ring, e.g. fluorescein
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Pyrane Compounds (AREA)
Description
Oppfinnelsen vedrører forskolin-analoge og derivater, en fremgangsmåte til deres fremstilling ved hjelp av mikro-
bielle omdannelser ved hjelp av Neurospora crassa, og anvend-elsen av stoffene som farmasøytisk middel, spesielt som me-dikamenter til behandling av glaukom, hjerteinsuffisiens, hypertonie, betennelser, allergier, bronchialsykdommer og sykdommer av immunsystemer.
Forskolin og dets naturlige forekommende analoge er en gruppe
av labdan-terpenoider, som isoleres fra planten Coleus for-skolii (Briqu.). Strukturformlene av forskolin og dets naturlig forekommende isolerte analoger, vises i formel I
For forskolin er R2= OH, R' = Ac, samt R3 til R7og R" = H.
Inntil i dag er det påvist følgende naturlig forekommende for-skolinanaloger:
1,9-didesoksy- R" = Ac, samt R.^til R7og R" = H,
forskolin:
9-desoksy- R1= OH, R<1>= Ac, samt R2til R7og R" = H, forskolin:
1,9-didesoksy-
7-deacetyl-
forskolin: R<1>, R" og R^til R^= H,
1-desoksy-
forskolin: R2= OH, R' = Ac, samt R" og Rx, R^til R^= H,
7-deacetyl-
forskolin: R^, R2= OH, R<1>,R", samt R3til R7= H.
6- acetyl-7- R, = OH, R" = Ac, samt R' og R2til R^= H, deacetyl-
forskolin:
(Tetrahedron Lett. 19, 1669 (1977), J. Med. Chem. 26, 486 (1983).
Forskolin er en av de viktige diterpener av planten Coleus for-skoli. Dette stoff og dets derivater kan anvendes som verdi-fulle legemidler ved behandling av forskjellige sykdommer som glaukom, hypertonie, hjerteinsuffisiens, betennelse, allergier, bronchokonstriksjon og rent generelt av sykdommer som blir frem-bragt ved forstyrrelser av cAMP-produksjonen og -metabolismen (indisk patent nr. 143 875 og tilsvarende DE-OS 25 57 784, indisk patent 145 926, indisk patent nr. 147 630 og tilsvarende DE-OS 26 40 275, Med. Res. Revs. 3, 201-19 (1983)).
En fremgangsmåte til isolering av hoveddelen av forskolin fra Coleus forskohlii er allerede omtalt (se indiske patenter nr. 143 975 og 145 926, DE-OS 25 57 784). Ved denne fremgangsmåte utvinnes dessuten forskolin-analoger. Disse analoger kan anvendes som mellomprodukter til fremstilling av forskolin. Det er allerede blitt omtalt metoder hvorigjennom analoge med samme oksydasjonstrinn som forskolin, f. eks. 7-deacetyl-forskolin og 6-acetyl-7-deacetylforskolin kan omdannes til forskolin (indisk patent 147 007, J. Chem. Perk. Trans. 1, 767
(1982)) .
Det er allerede omtalt en fremgangsmåte av mikrobiell omdannel-se hvorigjennom de mindre hydroksylerte forskolin-analoge omdannes til forskolin, 7-deacetyl-forskolin eller 6-acetyl-7- deacetylforskolin, eller i slike derivater som ved kjente kjemiske metoder lett lar seg omdanne til forskolin (tysk søk-nad P 35 02 685.5) .
Oppfinnelsens gjenstand er en mikrobiell fremgangsmåte til hydroksylering av Labdan-terpenoider med formel I
hvori
Rlog R2ketyr hydrogen eller hydroksy, til Rg betyr hydrogen, R' betyr acetylgruppen eller hydrogen og R" betyr hydrogen, ved hjelp av Neurospora-stammer, spesielt ved hjelp av stammer Neurospora crassa ATCC 9279, ATCC 9344, ATCC 10336, ATCC 10870. Fremgangsmåten erkarakterisert vedat en for-bindelse med formel I, hvori R^-R^, R<1>og R" har overnevnte betydning, fermenteres i et vanlig næringsmedium av definert sammensetning som inneholder en av de nevnte mikroorganisme-stammer. Fermenteringen foregår 3-5 dager ved en temperatur på 25-30°C, fortrinnsvis ved 28°C under rysting.
Næringsmediet inneholder karbon- og nitrogenkilder, eventuelt også uorganiske næringssalter samt sporelementer';
Som karbonkilder egner det seg f. eks. glukose, stivelse, dekstrin og glycerol. Egnede nitrogenkilder er f. eks. soja-mel, gjærekstrakt, kjøttekstrakt, maltekstrakt, maissvelle-vann, pepton og kasein. Som uorganiske næringssalter kommer det f. eks. på tale natriumklorid, magnesiumsulfat eller kal-siumkarbonat, som sporelementer f. eks. jern, magnesium, kobber, sink og kobolt i form av egnede salter.
Inntil avslutningen av omsetningen frafiltreres soppmycelet og det resulterende kulturfiltrat ekstraheres med organisk oppløs-ningsmiddel som diklormetan, kloroform eller etylacetat. Ek-straktet tørkes hensiktsmessig over tørkemidler som Na2SO^
og konsentreres i vakuum. Residuet renses deretter ved skille-fremgangsmåten som eksempelvis kromatografi og ved krystalli-
sering.
Hydroksyleringen foregår fortrinnsvis i 1-, 2- og/eller 3-stilling.
Generell fremgangsmåtebeskrivelse:
a) StammehoTd og dyrking.
Sporesuspensjoner av overnevnte stammer podes på små skrårør
med følgende næringsmedium og dyrkes 14 dager ved 30°C:
Stammeholdnæringsmedium:
Til dyrkning i væskekulturer utvinnes fra stammene sporesuspensjoner ved oppsvømming av de små skrårørene med steril NaCl 0,8 %, og denne fortynnes til en titer på 1 x 10^ sporer/ ml. 0,5 ml av denne suspensjon tjener som inokulum av 50
ml hovedkultur (i 100 ml Erlenmeyerkolbe) av følgende sammensetning:
Hovedkulturnæringsoppløsning:
Etter 30-40 timer ved 29°C og en rystefrekvens på 19 0 omdr./ min, oppnår man en tett mycelaktig vekst.
b) B io t r an s f o rrnasjon.
Til biotransformasjon overføres det 50 ml hovedkultur i en
steril 300 ml Erlenmeyerkolbe og tilsettes 16 mg substrat (oppløst i metanol). Deretter rystes suspensjonene ved 28°C og 240 omdr./min 3-5 dager. Fremgangen av biotransformasjonen følges ved hjelp av tynnsjiktkromatografi (HPTCL-plater, metyl-enklorid/etylacetat = 3/1, anisaldehyd-svovelsyre som påvis-ningsreagens). Etter omsetningens avslutning frafiltreres soppmycelet, den resulterende kulturfiltrat ekstraheres med samme mengde diklormetan og inndampes.
c) Transformasjonsprodukte r (strukturer se tabell 1)
I) 1,9-didesoksyforskolin (1) 1 a-HO-DDF (5)
(DDF) ( = 9-desoksyforskolin)
2 a-HO-DDF (8)
3 a-HO-DDF (9)
II) 7-dAc-l,9-didesoksforskolin (11)
7-dAc-9-desoksyforskolin (12)
III) 1-desoksyforskolin (3)->forskolin (2)
IV) forskolin (2) 3a-HO-forskolin (10)
6Ac-7dAc-3a-HO-forskolin (13) .
Omsetningseksempler med N. crassa ATCC 10336
Eksempel 1
Biotransformasjon av 1,9-didesoksyforskolin (DDF). Gjennomføring ifølge 1 b) 120 timer
DC-analyse av reaksjonsproduktet:
Eksempel 2
Biotransformasjon av 1-desoksyforskolin
Gjennomføring ifølge 1 b) 72 timer,
DC-analyse av reaksjonsproduktet:
Eksempel 3
Biotransformasjon av forskolin,
gjennomføring ifølge 1 b) 72 timer,
DC-analyse av reaksjonsproduktet:
Eksempel 4
En ifølge eksempel 1 gjennomført biotransformasjon av DDF
ga etter ekstrahering med etylacetat 97,8 mg tørrstoff.
Denne mengde ble oppløst i diklormetan, impregnert på 1 g kiselgel 60 (Grace, 31 ym, pH 7,0), og deretter fylt i en forsøyle. Over forsøylen ble deretter prøven kromatografert på hovedsøylen (102 ml kiselgel, se ovenfor) ved en strømning på 2 ml/min med diklormetan/aceton = ..15/1. Etter ca. 22 timer ble den mobile fases polaritet øket til 10/1. De enkelte fraksjoner (a 14 ml) ble analysert på stoffinnhold pr. DC (CH2Cl2/aceton = 7/1, deteksjon med anisaldehyd/H2S04/eddik-syre som omtalt ovenfor).
Ved siden av uomsatt DDF ble det oppnådd 2,1 mg ND1 (Rf 2 0,64) . 4,2 mg ND2 (Rf = 0,46) og 7,9 mg av en blanding ND2 og ND3
(Rf = 0,36). Denne blanding ble spaltet over preparativ tynnsjiktkromatografi til 3,5 mg ND2 og 4,0 mg ND3.
Eksempel 5
En ifølge eksempel 3 gjennomført biotransformasjon av forskolin ga etter ekstrahering med etylacetat 57,1 mg tørr-stoff.
Denne mengde ble oppløst i 1,7 ml CH2C12og kromatografert over en kiselgelsøyle (Merck, KG 60, 15-40 ym, 102,5 ml søyle-volum) med den mobile fase CH2Cl2/aceton = 12/1 ved 2,5 ml/ min. Etter 8 timer ble den mobile fase anvendt med forholdet 9/1.
Ifølge DC"^ får man i det vesentlige ikke omsatt forskolin, 7-desacetyl-forskolin og de nye stoffene NF2, NF3 og NF4.
En etterrensning av mellomfraksjonene førte til 0,9 mg NF3 og 0,7 mg NF4.
1) Kiselgelplater Merck, F254 10 x 20 cm
mobil fase: petroleter/etylacetat = 2/1
Deteksjon: se eksempel 4.
3g- hydroksy- forskolin ( NF 3)
N-NMR (270 MH2, CDC13, TMS) 6= 5,96 (dd, J = 10 Hz, J<»>=18 Hz 14-H), 5,57 (d, J = 4 Hz, 7 a-H), 5,30 (d, J = 18 Hz +
homoallylkobling, 15 t-H), 4,99 (d, J = 10 Hz + homoallylkobling, 15 c-H), 4,65 (forbrukt t. J = 4 Hz, 1 a-H), 4,41 (forbrukt, t, J = 5 Hz, 6 a-H), 3,52 (forbrukt, t. J = 4Hz, 3 B-H), 2,85 (AB med 6A = 3,20 og 6= 2,50, JAB= 17 Hz, 12-H), 2,63 (d, J=4 Hz, 5 a-H)
2,14 (AB med 6A2 2,34 og 6B 2 1,94, JAB= 16 Hz, tilsatt J'= 3 Hz til t, 2-H) , 2,20 (s, OCOCH3) ,1,88-0,80 (resterende signaler deri, 5g, hver 3H ved 6 = 1,73, 1,43, 1,37, 1,28 og 1,12, CH3).
MS m/z = 427 (18, M<+>+H), 426 (4, M<+>), 408 (78, M<+->H20)
391 (46), 380 (16), 331 (28), 125 (100), 109 (90 %) .
3a- hydroksy- T, 9- didesoksy- forskolin ( ND2)
1 un
H-NMR (270 MHz, CDC13, TMS) 6 = 5,95 (dd, 10 Hz, J'= 18 Hz,
14-H), 5,27 (d, J = 18 Hz + homoallylkobling, 15 t-H), 5,14 (d, J= 4Hz + 7 a-H), 5,06 (d, J = 10 Hz + homoallylkobling, 15 c-H), 4,21 (forbrukt s, 6 a-H), 3,38 (forbrukt.s, 3 B-H), 2,82 (s, 9 a-H), 2,60 (AB med 6A= 2,65 og 6B = 2,55, JAfi= 16 Hz, 12-H), 2,30 - 2,00 (m, 5 H deri 2,21, s, OCOCH3), 1,78 - 0,75
(rest. H, deri 4s, 1,52, 1,43, 1,22, 1,03 for CH3)
MS m/z= 379 (M<+->CH3), 361 (M<+->CH3H20), 334 (M<+->AcOH),
319 (M<+->CH3-AcOH), 251, 222, 167, 151, 95, 71 %.
Fig. 1 og 2 viser H-NMR-signalene av de togforbindelser ND2 resp. NF3 i området 5 = 1,80 - 6,50.
Claims (7)
1. Fremgangsmåte til mikrobiell hydroksylering eller oksydering av labdan-terpenoider med formel I
hvori og R2 betyr hydrogen eller hydroksy, R^ til Rg betyr hydrogen, R^ betyr hydrogen eller hydroksy, R' betyr acetylgruppen eller hydrogen, og R" betyr hydrogen, karakterisert ved at man på en av de nevnte forbindelser med formel I som substrat i et vanlig næringsmedium lar det innvirke en mikroorganismestamme Neurospora crassa og de dannede forbindelser isoleres etter avslutning av fermenteringen fra kulturvæsken med ekstrahering med et organisk oppløsningsmiddel, og etterfølgende kromatografi, og/ eller krystallisering.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at det anvendes stammen Neurospora crassa ATCC 9279, ATCC 9344, ATCC 10336 eller 10780.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 2, karakterisert ved at fermenteringen gjennomføres 3-5 dager ved 25-30°C under rysting og kulturfiltratet ekstraheres med diklormetan.
4. Fremgangsmåte ifølge krav 3, karakterisert ved at det fermenteres ved 28°C.
5. Fremgangsmåte ifølge krav 1-4, karakterisert ved at hydroksyleringen foregår i 1-, 2- og/eller 3-stilling.
6. 3a-hydroksyforskolin.
7. Legemiddel, inneholdende 3a-hydroksyforskolin.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19853527336 DE3527336A1 (de) | 1985-07-31 | 1985-07-31 | Verfahren zur mikrobiellen hydroxylierung von forskolin und seinen derivaten durch neurospora crassa |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO863077D0 NO863077D0 (no) | 1986-07-30 |
| NO863077L true NO863077L (no) | 1987-02-02 |
Family
ID=6277208
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO863077A NO863077L (no) | 1985-07-31 | 1986-07-30 | Fremgangsmaate til mikrobiell hydroksylering av forskolin og dens derivater ved neurospora crassa. |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0212293A2 (no) |
| JP (1) | JPS6232892A (no) |
| KR (1) | KR870001313A (no) |
| AU (1) | AU6068486A (no) |
| DE (1) | DE3527336A1 (no) |
| DK (1) | DK361886A (no) |
| FI (1) | FI863102A (no) |
| GR (1) | GR862016B (no) |
| IL (1) | IL79558A0 (no) |
| NO (1) | NO863077L (no) |
| PT (1) | PT83100B (no) |
| ZA (1) | ZA865690B (no) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4740522A (en) * | 1986-08-28 | 1988-04-26 | Hoechst-Roussel Pharmaceuticals Inc. | Oxolabdanes useful as pharmaceuticals for reducing intraocular pressure |
| US5247097A (en) * | 1986-08-28 | 1993-09-21 | Hoechst-Roussel Pharmaceuticals Incorporated | Oxolabdanes |
| US6200665B1 (en) | 1998-06-08 | 2001-03-13 | Asahi Glass Company Ltd. | Stepped glass sheet |
-
1985
- 1985-07-31 DE DE19853527336 patent/DE3527336A1/de not_active Withdrawn
-
1986
- 1986-07-22 EP EP86110026A patent/EP0212293A2/de not_active Withdrawn
- 1986-07-29 FI FI863102A patent/FI863102A/fi not_active Application Discontinuation
- 1986-07-29 IL IL79558A patent/IL79558A0/xx unknown
- 1986-07-29 KR KR1019860006207A patent/KR870001313A/ko not_active Application Discontinuation
- 1986-07-30 GR GR862016A patent/GR862016B/el unknown
- 1986-07-30 JP JP61177866A patent/JPS6232892A/ja active Pending
- 1986-07-30 ZA ZA865690A patent/ZA865690B/xx unknown
- 1986-07-30 NO NO863077A patent/NO863077L/no unknown
- 1986-07-30 DK DK361886A patent/DK361886A/da not_active Application Discontinuation
- 1986-07-30 PT PT83100A patent/PT83100B/pt unknown
- 1986-07-30 AU AU60684/86A patent/AU6068486A/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK361886A (da) | 1987-02-01 |
| JPS6232892A (ja) | 1987-02-12 |
| EP0212293A2 (de) | 1987-03-04 |
| DE3527336A1 (de) | 1987-02-05 |
| GR862016B (en) | 1986-12-23 |
| ZA865690B (en) | 1987-03-25 |
| NO863077D0 (no) | 1986-07-30 |
| IL79558A0 (en) | 1986-10-31 |
| PT83100B (de) | 1988-08-26 |
| AU6068486A (en) | 1987-02-05 |
| KR870001313A (ko) | 1987-03-13 |
| FI863102A (fi) | 1987-02-01 |
| PT83100A (de) | 1986-08-01 |
| FI863102A0 (fi) | 1986-07-29 |
| DK361886D0 (da) | 1986-07-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH0622780A (ja) | 新規真菌株及びそれを用いた抗生物質産生方法 | |
| PETERSEN et al. | Production of cladospirone bisepoxide, a new fungal metabolite | |
| JP2792629B2 (ja) | 新規な１０員環ラクトンおよびその製造方法 | |
| NO863077L (no) | Fremgangsmaate til mikrobiell hydroksylering av forskolin og dens derivater ved neurospora crassa. | |
| EP1534732B1 (en) | 5 androsten-3-ol steroid intermediates and processes for their preparation | |
| US3340278A (en) | 5(10), 7-estradiene-3, 17-dione and the process for the production thereof | |
| EP0217840B1 (de) | Verfahren zur herstellung von 1-methyl-1,4-androstadien-3,17-dion | |
| US3031445A (en) | New 16-oxygenated steroids | |
| PL79139B1 (no) | ||
| EP0284358B1 (en) | Novel anti-tumor compounds, method for the preparation thereof, and pharmaceutical preparations containing them | |
| USRE29163E (en) | 1,2,3,4,10,19-Hexanor-9-oxo-5,9-seco-25D-spirostan-5-oic acid | |
| US4086141A (en) | Process for the fermentation production of ergoline derivatives | |
| ASAI et al. | MICROBIOLOGICAL HYDROXYLATION OF STEROID IX. HYDROXYLATION OF STEROID BY SYNCEPHALASTRUM RACEMOSUM.(2) | |
| US3198809A (en) | Microbiological reduction process and steroid products produced thereby | |
| MXPA05014202A (es) | Procedimiento microbiano para la hidrolisis y oxidacion de esteres esteroideos de androst-5-eno y preg-5-eno. | |
| US4803275A (en) | 2-oxo-5-methyl-6-[4-heptene]-2H-pyrano[3,2-c]pyridine | |
| US4753959A (en) | Antibiotic lactone compound | |
| US20060100185A1 (en) | 5-Androsten-3beta-ol steroid intermediates and processes for their preparation | |
| WO1996012034A1 (en) | A microbiological process for the preparation of 17beta-carboxy substituted 3-oxo-4-azasteroids and the use of such products as inhibitors of the enzyme 5alpha-reductase | |
| US3775433A (en) | Antimicrobial metabolite s491beta and s491ypsilon and chemical derivatives | |
| US3829447A (en) | (-)-9-oxo-5(s)-hydroxy decanoic acid lactone | |
| JP2844854B2 (ja) | Ｆｒ９０１３０８物質およびその製造法 | |
| US3488258A (en) | Method of resolving racemic steroids | |
| CN112094883A (zh) | 一种利用微生物转化制备β-猪去氧胆酸的方法 | |
| US3732268A (en) | Microbiological preparation of optically active 9-oxo-5(s)-hydroxy-decanoic acid and the lactone thereof |