NO823111L - Fremgangsmaate for paavisning av meget smaa mengder av antigener og antistoff ved en forbedret agglutinasjonsinhiberende test - Google Patents
Fremgangsmaate for paavisning av meget smaa mengder av antigener og antistoff ved en forbedret agglutinasjonsinhiberende testInfo
- Publication number
- NO823111L NO823111L NO823111A NO823111A NO823111L NO 823111 L NO823111 L NO 823111L NO 823111 A NO823111 A NO 823111A NO 823111 A NO823111 A NO 823111A NO 823111 L NO823111 L NO 823111L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- sensitized
- antigen
- antibodies
- hcg
- antibody
- Prior art date
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 30
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 29
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 title abstract description 12
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 16
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 12
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 12
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims description 11
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 5
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 claims description 3
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 claims description 3
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims description 3
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 claims description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 claims description 2
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 abstract description 18
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 15
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 18
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 18
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 description 18
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 16
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 10
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 9
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 9
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 7
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- MUCZHBLJLSDCSD-UHFFFAOYSA-N diisopropyl fluorophosphate Chemical compound CC(C)OP(F)(=O)OC(C)C MUCZHBLJLSDCSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 description 3
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GVGLGOZIDCSQPN-PVHGPHFFSA-N Heroin Chemical compound O([C@H]1[C@H](C=C[C@H]23)OC(C)=O)C4=C5[C@@]12CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C4OC(C)=O GVGLGOZIDCSQPN-PVHGPHFFSA-N 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000003899 bactericide agent Substances 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- ZPUCINDJVBIVPJ-LJISPDSOSA-N cocaine Chemical compound O([C@H]1C[C@@H]2CC[C@@H](N2C)[C@H]1C(=O)OC)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZPUCINDJVBIVPJ-LJISPDSOSA-N 0.000 description 2
- 229960002069 diamorphine Drugs 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 2
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 238000009597 pregnancy test Methods 0.000 description 2
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- JXSSPZOCHGZWJP-UHFFFAOYSA-N 1,2-difluoro-3,4-dinitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(F)C(F)=C1[N+]([O-])=O JXSSPZOCHGZWJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TUSDEZXZIZRFGC-UHFFFAOYSA-N 1-O-galloyl-3,6-(R)-HHDP-beta-D-glucose Natural products OC1C(O2)COC(=O)C3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C3=C(O)C(O)=C(O)C=C3C(=O)OC1C(O)C2OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 TUSDEZXZIZRFGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 1-prop-2-ynoxypropan-2-ol Chemical compound CC(O)COCC#C GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000013563 Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108010051457 Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 description 1
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 239000001263 FEMA 3042 Substances 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- LRBQNJMCXXYXIU-PPKXGCFTSA-N Penta-digallate-beta-D-glucose Natural products OC1=C(O)C(O)=CC(C(=O)OC=2C(=C(O)C=C(C=2)C(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)O2)OC(=O)C=2C=C(OC(=O)C=3C=C(O)C(O)=C(O)C=3)C(O)=C(O)C=2)O)=C1 LRBQNJMCXXYXIU-PPKXGCFTSA-N 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000000022 bacteriostatic agent Substances 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 238000006757 chemical reactions by type Methods 0.000 description 1
- 229940015047 chorionic gonadotropin Drugs 0.000 description 1
- 229960003920 cocaine Drugs 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000007233 immunological mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000003821 menstrual periods Effects 0.000 description 1
- QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N octafluoropropane Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000027758 ovulation cycle Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 229940121649 protein inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000012268 protein inhibitor Substances 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- LRBQNJMCXXYXIU-NRMVVENXSA-N tannic acid Chemical compound OC1=C(O)C(O)=CC(C(=O)OC=2C(=C(O)C=C(C=2)C(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)O2)OC(=O)C=2C=C(OC(=O)C=3C=C(O)C(O)=C(O)C=3)C(O)=C(O)C=2)O)=C1 LRBQNJMCXXYXIU-NRMVVENXSA-N 0.000 description 1
- 229940033123 tannic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000015523 tannic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920002258 tannic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940108519 trasylol Drugs 0.000 description 1
- 239000000439 tumor marker Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/536—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/811—Test for named disease, body condition or organ function
- Y10S436/813—Cancer
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/811—Test for named disease, body condition or organ function
- Y10S436/814—Pregnancy
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/815—Test for named compound or class of compounds
- Y10S436/817—Steroids or hormones
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/815—Test for named compound or class of compounds
- Y10S436/817—Steroids or hormones
- Y10S436/818—Human chorionic gonadotropin
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/826—Additives, e.g. buffers, diluents, preservatives
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Abstract
I. Fremgangsmåte for påvisning av meget små mengder antigener og antilegemer ved hjelp av en forbedret agglutineringsinhiberingstest.Denne fremgangsmåte anvender en immunologisk mekanisme av typen antigen- antilegemer og erat antilegemene omsettes med antigenene i en væskefase i en primær immunologisk reaksjon hvoretter det tilsettes et sensibilisert indikatorsystem med en forsinkelse som kan oppgå fra 15 min. til 18 timer etter at antigen- antilegeme-reaksjonen har funnet sted.Ved hjelp av denne nye fremgangsmåte oppnås enkning av sensibiliteten for agglutineringsinhiberings-testen med en faktor på fra 10 til 20.
Description
Foreliggende oppfinnelse gjelder en fremgangsmåte for oppdagelse av meget små mengder antigener og antilegemer ved hjelp av en forbedret agglutineringsinhiberingstést.
Bestemmelsen av substanser for diagnostiske eller vitenskaplige formål i flytende prøver ved hjelp av agglutinering og inhibering av agglutineringen i en sensibilisert fast fase, som f.eks. røde blodlegemer, kolloidale partikler, latex eller lignende har vært kjent i mer enn 20 år. Testen foregår som følger: den faste bærerfasen aktiveres ved hjelp av. et bindende middel (f. eks. garvesyre, glutar-aldehyd, difluor-dinitrobenzen) og sensibiliseres ved hjelp av et antigen eller antilegeme. I nærvær av et tilsatt løse-lig antigen, kan dette antigen forbinde seg med antilegemet,
og således inhibere agglutinering eller aggregasjon av den faste fasen.
På samme måtå vil en fast, granulert fase som er sensibilisert ved hjelp av et antilegeme aggregere eller glutinere i nærvære av en bestemt mengde antigen og denne, aggregasjon kan inhiberes ved hjelp av et tilsatt løselig antilegeme.
Dette systemet er meget følsomt men er i de senere år erstattet av mere raffinerte teknikker, blandt hvilke radioimmunologiske prøver er mest brukt. De radioimmunologiske prøvene krever fadioelementer, kostbare måleinstrumenter og høyt kvalifisert arbeidskraft. Det er derfor ikke uintre-ant å forsøke å forbedre følsomheten til den testen som er basert på agglutinering av en fast sensibilisert fase, på
en slik måte at den kan ko/nkurrere med de radioimmunologiske prøvene.
Foreliggende oppfinnelse gjelder således en fremgangsmåte for oppdagelse av antigener, som f.eks. det lutiniserende hormon (LH) det korioniske gonadotropin-hormonet (HCG), : ::a-fetoproteinet (AFB) progesteronet, det karsino-endri-oniske genet, testosteronet, surt fosfatase og andre antigener som f.eks. heroinet, kokainet, glyserginsyren og dens derivater, såvel som deres antilegemer. Hovedgrunnen til at det ikke finnes en enkel og pålitelig agglutinasjons-
test for oppdagelse av disse strukturer er deres lave konsentrasjon i plasmaet, urinen, gjerne ryggmargsvæsken og
andre. For å illustrere denne situasjonen uten at dette eksemplet på noen måte skal være begrensende, skal her lutiniseringshormonet (LH) analyseres, hvilket er et tegn på eggløsning hos pattedyr.
Hos kvinnen utskilles LH normalt på den 14.ende
dag i menstruasjonssyklusen, men dette hormonet utskilles også i små mengder utenom denne toppen liksåvel som av menn. Dette hormonet er meget lik graviditetshormonet (det korioniske gonatropin-hormonet) som utskilles fra fertilitets-øyeblikket og også av visse maligne tumorer.
Begge disse proteiniske hormonene har underenheten
u~. De skiller seg litt fra hverandre ved at underenheten . J3'/. hydrogenbundet til underenheten '.et , er 21 amino-syrer kortere i LH sammenlignet med HCG.
Graviditetstester som bestemmer - a og ' . (^-under-enhetene i HCG er velkjente. Disse immunologiske testene, såvel som mer spesifike tester som baserer seg på bruken av antilegemer mot LH, kan anvendes for bestemmelse av LH. Likeledes kan graviditetstester som er spesifike for underenheten i HCG anvendes for oppdagelse av tumorer som utskiller underenheten " g i HCG.• For tiden anvendes imidlertid bare kompliserte og kostbare radioimmunologiske tester for oppdagelse av små mengder av LH eller
HCG.
Grunnen til at agglutinasjons- og aggregasjons-testene ikke anvendes er de meget små mengder lutiniserende hormon som utskilles ved eggløsningsøyeblikket, såvel som det meget lave nivå op tumormarkører som utskilles av maligne tumorer i det øyeblikk de oppstår, dvs. nøyaktig i det øyeblikk det er viktig å oppdage dem. De konvensjonelle agglutinasjons-testene er ikke tilstrekkelig følsomme til å oppdage dem.
En konvensjonell immonologisk agglutinasjonstest for oppdagelse av . g HCG eller LH anvendes på følgende måte: Urinen eller en annen kropsvæske som inneholder den substansen som skal bestemmes tilsettes til en blanding av sensibiliserte indikatorceller (som regel fåreceller som er sensibilisert av antigenet) som f.eks. et spesifisert antilegeme fortynnet på .Passende måte. Dersom den analyserte væsken er fri for antigen, agglutinerer antilegemene i blandingen de røde blodlegemene og disse sedimenterer som et jevnt teppe på bunnen av serologirøret eller på bunnen av skålen.
Dersom væsken inneholder antigen, vil dette antigen reagere med de solubiliserte antilegemene og en inhibering av agglutinasjonen vil opptre. Cellene sedimenterer da fritt på bunnen av røret i en kompakt ring. En test av denne type anvendt på australsk antigen er beskrevet i US patent-skrift 3 887 697.
Antigen- antilegemereaksjonen er meget langsom ved
4°C og testen IHA utføres vanligvis ved omgivende temperatur (T.A) eller ved 37°C. Når de anvendte reaktantene lagres i et kjøleskap, oppvarmes de vanligvis til T.A. før de tilsettes til indikatorsystemet. Et slikt system er beskrevet i "Methods in Enzymology, vol.70, Immunochemical Techniques, side 462-463, Academic Press".
Systemet er meget følsomt og har muliggjort en rekke spesielle anvendelser, som de som er beskrevet i US patent-skrifter 3 887 697 og 4 308 026.
Denne fremgangsmåte muliggjør bestemmelse av omtrent 125 internasjonale enheter av HCG pr. liter væske eller også 275 internasjonale enheter av LH pr. liter.
I og med at begynnende tumorer utskiller meget små mengder av 6-HCG (oppdaget ved hjelp av en spesifik radio-immunologisk tést for underenheten g) for det første, og at topputskillelsen av LH på den 14.ende dag etter starten på menstruasjonsperioden er i middel 40 internasjonale enheter av LH pr. liter, er agglutineringsinhiberingstestene som er disponible for oppdagelse av 3-HCG eller LH for lite følsomme for oppdagelse av eggløsningen hos en kvinne med normal syklus eller for oppdagelse av tumormarkøren B-HCG
i det øyeblikk tumoren oppstår.
Det er ifølge foreliggende oppfinnelse overraskende funnet at sensibilitetsgrensen for en agglutineringsinhiberingstest kan forbedres med en faktor fra 10 - 20 ganske enkelt ved å forsinke det øyeblikket da systemindikatoren, fortrinnsvis sensibiliserte røde blodlegemer, tilsettes til antilegemet- antigen-blandingen. Det er funnet at de proteaser som vanligvis finnes i dé analyserte væskene (plasma, serum, urin, gjerne ryggmargs-væsken) ikke er tilstrekkelig aktive til på signifikant måte å innvirke på reaksjonen antigen- antilegeme i "den tid som er nødvendig for at denne reaksjonen skal bli fullstendig. Uttrykt på annen måte, foreliggende oppfinnelse har som formål en fremgangsmåte for oppdagelse av antigener og antilegemer ifølge en immunologisk mekanisme av typen reaksjon antigen- antilegeme,karakterisert vedat den omfatter to på hverandre følgende trinn: A - Antilegemene omsettes med antigenene i en flyt
ende fase i en primær immunologisk reaksjon, og
B et sensibilisert indikatorsystem tilsettes med en forsinkelse som kan oppgå til fra 15 min. til 18 min. etter at reaksjonen antigen- antilegemer har funnet sted.
Ifølge en spesiell utførelsesform av denne fremgangsmåte, er det sensibilisrerte indikatorsystemet fortrinnsvis en fast, granulert fase som er sensibilisert av antigenet eller av et spesifikt middel. Denne faste, granulerte fase består fortrinnsvis av sensibiliserte erytrositter eller av sensibiliserte bakterier.
Ifølge en spesiell utførelsesform lyofiliseres de spesifike antilegemene i bestemte mengder i enkelte rør og antigenet kan likeledes fordelaktig lyofiliseres i bestemte mengder i enkelte rør.
For at systemet'skal bli mer pålitelig, er det videre funnet at den reaktant som inneholder antilegemene kan inne-holde proteaserinhibitorer og bakteriostater og baktericider, som f. eks. natriumadcid, mertiolat, trasylol, di-isopropy.J-fluorfosfat, EDTA og andre substanser som inhiberer akti-viteten til bakteriene og proteasene under den tid da den immunologiske reaksjonen finner sted, uten imidlertid å sette denne reaksjonen i fare.
Typisk tilveiebringes en på forhånd bestemt mengde av spesifike antilegemer mot antigenet som skal bestemmes (f. eks. 6-H.CG, FP, CEA, heroin) fortynnet i et passende løs-ningsmiddel i flytende form, og lyofiliseres fortrinnsvis for å oppnå større stabilitet under lagring. Til disse spesifike antilegemer tilsettes testvæsken (f.eks. 0,1 til 0,15 ml) inneholdende det antigenet som skal. bestemmes. I stedet for straks å tilsette den sensibiliserte indikatorbestanddelen til blandingen (dvs. sensibiliserte polymer-perler eller sensibilisert latex eller sensibiliserte røde blodlegemer eller lignende) og avlese resultatene av den komplekse reaksjonen straks som en aggregasjon eller etter avstøtning av den faste fase på bunnen av et rør, utsettes tilsetningen av indikatorsystemet til den senere tid. Antigener og spesifike antilegemer i væskefase får så anledning til å reagere med hverandre ved en temperatur som vanligvis oppgår til 20 til 25°C. Det tidsrom primærreaksjonen får lov til å fortsette før tilsetningen av den sensibiliserte indikatorbestanddelen, definerer sensibilitetsnivået for testen. Indikatorsystemet består av en fast, granulert fase som er sensibilisert av et antigen eller et antilegeme.
De følgende eksempler illustrer anvendelse av oppfinn-elsen uten imidlertid å begrense den..
Eksempel 1
Urin fra en mann blandes med HCG i konsentrasjoner som varierer fra 2 00 til 7,5 UI/1. Antilegemer mot underenheten 3 av HCG oppnådd ved inokulering av undårenheten B
hos kaniner, fortynnes på en slik måté at det i en agglutineringsinhiberingstest med fåreceller som er sensibilisert av HCG, en følsomhet på 100 UI/1 i den analyserte væske.
50 ml av antilegemeløsningen, som inneholder 10 _ 3 m di-iso-propylfluorfosfat som proteininhibitor, ble innført i sere- ■', logirør og lyofilisert. For en HCG-bestemmelse fikk hvert av rørene en bestemt dose HCG i o,15 ml urin. Noen før får stå ved omgivende temperatur i noen timer, og ved bestemte intervaller innføres røde blodlegemer som er sensibilisert av HCG i rørene. De røde blodlegemene er suspendert i o,25 ml reaktant. Tabellen på neste side illustrerer det sensibilitetsnivå som oppnås i løpet av tiden.
I denne tabell angis en positiv inhiberende agglutinerings-reaksjon, dvs. nærvær av HCG i den analyserte væske, ved tall som varierer fra 0 til 3, idet 0 betyr en sterk positiv reaksjon og 3 en svak reaksjon. En negativ reaksjon, dvs. fravær av HCG, betegnes med 4 som betyr full agglutinering. Det observeres at IHA-testen, når den utføres på vanlig måte, dvs. med umiddelbar tilsetning av den faste indikator-fase sammen med den reagerende væske til antilegemene ved tiden 0 er sensitiv for 100 Ul HCG pr. liter urin. Denne sensibiliteten er nesten den beste som kan oppnås ved eh slik test. Testens sensibilitet øker signifikant når tilsetningen av indikatorsystemet forsinkes. En 20 gangers økning i sensibilitet oppnås således når den primære antigen-antilegeme-reaksjon i væskefase får fortsette over natten. Det således oppnådde sensibilitetsnivå er det samme som oppnås ved radioimmunoforsøk.
Prisen på bestemmelsen av 3-HCG ved hjelp av den nye IHA-testen, tiden som er nødvendig for å praktisere den, kompetansenivået til brukerne, er alle faktorer som på
meget fordelaktig måte kan sammenlignes med de radioimmunologiske og enzymoimmunologiske-testene.
Eksempel 2
Antilegemer ble oppnådd mot underenheten av HCG som
er identisk med underheten a av LH. 50 microliter av en
_3 passende fortynning av antilegemer inneholdende 10 m
di-isopropyl-fluorfosfat (DFP) og 0,4% EDTA lyofiliseres i serologirør. Etter lyofilisering mottok, rørene 0,15 ml mannlig urin inneholdende varierende mengder av LH eller HCG. Inkubering fant sted i løpet av 18 timer ved omgivelsestemperatur, hvoretter 0,25 ml av en suspensjon av sensibiliserte røde blodlegemer ble tilsatt til alle rørene. En sedimentasjon av celler fant sted i løpet av 2 timer og resultatene ble nedtegnet. Disse er oppsummert i tabell II, hvor 4 betegner fullstendig agglutinering, dvs. fravær av antigen i den analyserte væske, og fra 3 til 0 betegner økende konsentrasjon av antigen i den analyserte væske.
Testen er mer følsom for HCG enn for LH. En konstrasjon av LH i den analyserte væske oppdages uten usikkerhet opptil
et nivå på 50 UI/1 og resten er følsom for 25 UI71. Denne ekstreme sensibiliteten gjør testen anvendbar for oppdagelse av eeLiøsning.
Eksempel 3
Bakterien E. koli ble sensibilisert av HCG. Antilegeme-anti-HCG ble oppnådd fra kaniner ved .'.inokulering av HCG og blødning 14 dager etter en forsterknings inokulering..
Det ble fremstilt en fortynning av antilegemene anti-HCG hvilken inneholdt i 50 yl fortynningsmiddel, ble til--3
satt 10 m DFP og 0,4% EDTA, hvilket var tilstrekkelig til å oppnå en inhibering av aggregasjon av de HCG-sensibiliserte
bakteriene suspendert i 50 yl fortynningsmiddel (0,1 m glycin, pH 8,0 inneholdende 1% kvegalbumin og 0,1% natrium-.acid) da denne suspensjon ble blandet med 50 yl' urin inneholdende 500 UI/HCG pr, liter. Ved en lavere konsentrasjon av HCG i urinen, ble bakteriene aggregert av antilegemene. 50 microliter av antilegemeløsningen ble tilsatt til sero-logirørene og holdt ved 4°C til anvendelsesøyeblikket.
For utførelse av testen ble antilegemeløsningene opp-varmet til omgivelsestemperaturen 50 yl ufin inneholdende forskjellige konsentrasjoner av HCG som varierte fra 500 til 62,5 Ul pr. liter ble tilsatt til løsningen i sero-logirørende og holdt ved omgivelsestemperatur. Ved bestemte intervaller ble 50 yl HCG-sensibilisert bakteriesuspensjon tilsatt til rørene som innholdt antigen- antilegemeblandin<Jen og totalblandingen (0,15 ml)'ble så straks overført til et objektglass hvor væsken ble holdt i omrøring i 3 min.
ved langsom rotasjon av platen.
Etter denne tid ble en vurdering av aggregasjonen eller inhiberingen av aggregasjonen gjennomført. En positiv test, dvs. nærvær av løselige HCG, ble bemerket ved en inhibering av aggreasjonen og en negativ test, dvs. fravær av løselige / HCG ble bemerket ved en aggregasjon av bakteriesuspensjon. Tabell III oppsummerer resultatene fra dette forsøk.
Denne tabell, viser at forsinkelsen ved tilsetning av den
faste indikatormassen til antigen- antilegemeblanding gjør testen mer følsom. En forsinkelse på 15 min. fordobler sensibiliteten, og en forsinkelse på 60 min. øker sensibiliteten
fire ganger.
For praktiske anvendelser foreligger det flere typer
av arbeidsbetingelser.
De spesifike antilegemer og indikatorceller kan tilveiebringes i væske- og suspensjon-form i to adskilte flasker som inneholder proteaseinhibitorer og baktericide og bakterio-statiske midler. Fortynningene og fordelingen av de nødvend-ige væsker for å oppnå en optimal sensibilitet og da ut-føres av brukeren og denne . arbeidsmåte begrenser bruken av testene til medisinske analyselaboratorier.
Antilegemer som forhåndsfortynnet til passende nivå kan tilsettes til serologirør. De kan dessuten lyofiliseres for å forlenge deres stabilitet. Oppdeling av antilegemene i definerte mengder er foretrukket fordi konsentrasjonen av antilegemer må være korrekt justert for å oppnå gode resul-tater. Alt som så behøves er å tilsette til røret en bestemt mengde av testvæske som skal analyseres, vente til den primære reaksjonen er fullstendig og så tilsette indikatorsystemet.
Dersom testen er bestemt for vanlige mennesker, er en foretrukken fremgangsmåte å tilveiebringe serologirørene inneholdende forhåndstynnede antilegemer i lyofilisert form. Dersom indikatorsystemet består av sensibiliserte røde blodlegemer, innføres rørene over et speil og de røde blodlegemene inneholdes i plastposer. Antallet poser som inneholder indikatorsystemet er lik antallet tilveiebragte rør.
Brukeren skal så:
1) Tilsette 2-3 dråper urin til et rør,
2) vente 5-7 timer avhengig av det ønskede sensibilitetsnivå,
3) tilsette inneholdet i en pose til samme rør,
4) vente i 2 timer og avlese i speilet den oppnådde type sedimentasjon.
Claims (10)
1. Fremgangsmåte for oppdagelse av antigener og antilegemer ved hjelp av en immunologisk antigen- antilegeme-reaksjon,
karakterisert ved følgende trinn:
A - Antilegemene omsettes med antigenene i en væske
fase i en primær immunologisk reaksjon, og B - et sensibilisert indikatorsystem tilsettes med en
forsinkelse som kan oppgå fra 15 min. til 18 timer etter at reaksjonen mellom antigener og antilegemer har funnet sted.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1,
karakterisert vedat det sensibiliserte indikatorsystemet er en fast, granulert, antigensensibilisert fase.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 2,
karakterisert ved at det sensibiliserte indikatorsystemet er en fast, granulert fase som er sensibilisert av spesielt middel.
4. Fremgangsmåte ifølge kravene 1, 2 og 3, karakterisert ved at den faste, granulerte fase består av sensibiliserte erytrocytter.
5. Fremgangsmåte ifølge krav 1, 2 og 3, karakterisert ved at den faste granulerte fase består av sensibiliserte bakterier.
6. Fremgangsmåte ifølge krav 2,
karakterisert ved at de spesifike antilegemene lyofiliseres.i bestemte mengder i individuelle rør.
7. Fremgangsmåte ifølge krav 2, karakterisert ved at antigenet lyofiliseres i bestemte mengder i individuelle rør.
8. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at det faste indikatorsystemet fremstilles i form av en suspensjon i enhetsvolumer.
9. Fremgangsmåte ifølge krav 8, karakterisert ved at det faste indikatorsystemet fremstilles i form av en suspensjon i enhetsplast-poser.
10. Fremgangsmåte ifølge kra 1, 5 og 6, karakterisert ved at løsningen av antigener og antilegemer inneholder baktericide og kateriostatiske midler og proteaseinhibitorer.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US06/302,589 US4387166A (en) | 1981-09-15 | 1981-09-15 | Immunoassay wherein immune complex forms and ages for at least one hour |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO823111L true NO823111L (no) | 1983-03-16 |
Family
ID=23168403
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO823111A NO823111L (no) | 1981-09-15 | 1982-09-14 | Fremgangsmaate for paavisning av meget smaa mengder av antigener og antistoff ved en forbedret agglutinasjonsinhiberende test |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4387166A (no) |
EP (1) | EP0074890B1 (no) |
AT (1) | ATE14799T1 (no) |
DE (2) | DE74890T1 (no) |
DK (1) | DK412382A (no) |
FI (1) | FI823189L (no) |
NO (1) | NO823111L (no) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5356817A (en) * | 1988-06-09 | 1994-10-18 | Yale University | Methods for detecting the onset, progression and regression of gynecologic cancers |
US5288612A (en) * | 1991-07-03 | 1994-02-22 | The Scripps Research Institute | Assay methods for detecting serum proteases, particularly activated protein C |
US5427950A (en) * | 1992-01-18 | 1995-06-27 | Kabushiki Kaisha Seitai Kagaku Kankyusho | Method for radioactivity measurement, process for preparing sample and device therefor |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3541202A (en) * | 1967-06-26 | 1970-11-17 | Us Health Education & Welfare | Detection of rubella by hemagglutination-inhibition |
BE754428A (fr) * | 1969-08-07 | 1971-01-18 | Baxter Laboratories Inc | Methode pour la determination d'anticorps dans les fluides biologiques |
US3887697A (en) * | 1971-08-09 | 1975-06-03 | Us Health | Hemagglutination method for australia antigen and antibody thereto |
JPS5912991B2 (ja) * | 1976-02-02 | 1984-03-27 | 武田薬品工業株式会社 | 風疹hi抗体測定用希釈液 |
JPS5341420A (en) * | 1976-09-29 | 1978-04-14 | Mochida Pharm Co Ltd | Immunochemically measuring methoa of hapten |
CA1083956A (en) * | 1976-10-12 | 1980-08-19 | Susan M. Mondabaugh | Microbial antibodies immunoassay |
DE2736684A1 (de) * | 1977-08-16 | 1979-03-01 | Technical Research Affiliates | Nachweis von antigenen durch sensibilisierte mikrobische teilchen |
US4205954A (en) * | 1978-05-26 | 1980-06-03 | Warner-Lambert Company | Kinetic latex agglutinometry |
-
1981
- 1981-09-15 US US06/302,589 patent/US4387166A/en not_active Expired - Fee Related
-
1982
- 1982-09-03 AT AT82401630T patent/ATE14799T1/de active
- 1982-09-03 DE DE198282401630T patent/DE74890T1/de active Pending
- 1982-09-03 DE DE8282401630T patent/DE3265235D1/de not_active Expired
- 1982-09-03 EP EP82401630A patent/EP0074890B1/fr not_active Expired
- 1982-09-14 NO NO823111A patent/NO823111L/no unknown
- 1982-09-15 FI FI823189A patent/FI823189L/fi not_active Application Discontinuation
- 1982-09-15 DK DK412382A patent/DK412382A/da not_active Application Discontinuation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DK412382A (da) | 1983-03-16 |
EP0074890B1 (fr) | 1985-08-07 |
FI823189A0 (fi) | 1982-09-15 |
FI823189L (fi) | 1983-03-16 |
ATE14799T1 (de) | 1985-08-15 |
DE74890T1 (de) | 1983-08-18 |
DE3265235D1 (en) | 1985-09-12 |
EP0074890A1 (fr) | 1983-03-23 |
US4387166A (en) | 1983-06-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4313734A (en) | Metal sol particle immunoassay | |
JP2656970B2 (ja) | イムノアッセイのための方法及びキット | |
Ozturk et al. | Differential production of human chorionic gonadotropin and free subunits in gestational trophoblastic disease | |
EP0019620B1 (en) | Insolubilized methylated albumin conjugates for autoimmune disease fluoroimmunoassays | |
Labrousse et al. | Miniaturization of β-galactosidase immunoassays using chromogenic and fluorogenic substrates | |
Pisetsky et al. | A simple enzyme-linked immunosorbent assay for antibodies to native DNA | |
EP0328413B1 (en) | Sodium decyl sulfate wash solution, test kit and method for the determination of an immunological ligand | |
KR920007686B1 (ko) | 추출 조성물, 테스트 키트 및 이것을 이용해 단순포진 비루스의 항원을 추출하거나 정량하는 방법 | |
US3658982A (en) | Stable latex reagent for the detection of rheumatoid arthritis | |
US5124245A (en) | Wash composition, test kit and their use to determine a herpes simplex viral antigen | |
NO781473L (no) | Polymermatriks basert paa akrylamid. | |
NO823111L (no) | Fremgangsmaate for paavisning av meget smaa mengder av antigener og antistoff ved en forbedret agglutinasjonsinhiberende test | |
US5366864A (en) | Buffered wash composition, insolubilizing composition, test kits and method of use | |
Van Steirteghem et al. | Radioimmunoassay of creatine kinase isoenzymes in human serum: isoenzyme MM. | |
JP3558645B2 (ja) | 甲状腺自己免疫疾患の臨床診断薬としてのポリクローナルヒト抗−hTg自己抗体の使用及び患者血清中での抗−hTg自己抗体の検出用添加薬 | |
US4251514A (en) | Insolubilized deoxyribonucleic acid (DNA) | |
US4254097A (en) | Method of detecting antibodies to human thyroglobulin | |
WO1992018535A1 (en) | Endometrial antigen, composition, test kit and method for endometrial antibody determination | |
CN109060782B (zh) | 一种猫早孕的发光检测试剂的制备方法及应用 | |
EP0389301A2 (en) | Reagent complex for immunoassay | |
JPH0736015B2 (ja) | 診断試験キットおよびリガンドの測定方法 | |
IE68446B1 (en) | A colour stable chromogen composition | |
AU7556191A (en) | Total gonadotropal alpha peptide chain assay | |
NO138675B (no) | Diagnostisk fremgangsmaate for paavisning av humant chorionisk gonadotropin, humant albumin eller en reumatoid faktor | |
Hunter | Monoclonal antibodies in clinical chemistry |