NO790908L

NO790908L - Fremgangsmaate ved fremstilling av pseudotrisaccharider

Info

Publication number: NO790908L
Application number: NO790908A
Authority: NO
Inventors: Peter John Lovell Daniels
Original assignee: Scherico Ltd
Priority date: 1974-11-29
Filing date: 1979-03-16
Publication date: 1976-06-01
Also published as: CA1048020A; IE43126L; FR2292482B1; FI753318A; NO142080C; NO142080B; AU8698875A; DK531375A; IL48558A0; IL48558A; LU73887A1; AR215848A1; SE7513330L; GR58472B; NO753969L; DE2552799A1; ES442989A1; JPS52244A; IE43126B1; NL7513737A

Description

Fremgangsmåte ved fremstilling av pseudotrisaccharider

Foreliggende oppfinnelse angår, pseudotrisaccharider, fremgangsmåte for frems-tilling: av disse, farmasøytiske* formuleringer og metoder for anvendelse som antibacterielle midler.

Nærmere bestemt, angår oppfinnelsen. 5-epi-,. 5-epi-* amino-5-deoxy og 5-epi-azido-5-deoxyderivater av 4,6-di-0-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptamin-antibacterielle midler innbefattende gentamicinené, sisomicin, verdamicin, tobramycin, kanamycinene, Antibiotikum G-418, 66-40B, 66-40D, JI-20A, JI-20B og G-52 og 1-N-alkylderivatene derav.

Det er kjent innen faget bredspektrede antibacterielle midler som kan klassifiseres kjemisk som 4,6-di-0-(aminoglycosyl) • 1,3-diaminocyclitoler. Verdifulle antibacterielle midler av denne gruppe er de hvori aminocyclitolet er 2-deoxystreptamin. Spesielt verdifulle antibacterielle midler av 4,6-di-0-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptaminene er de hvori aminoglycosylgruppen ved 6-stillingen er et garosaminylradikal. Innen klassen av 4-0-amirioglycosyl-6-0-garosaminyl-2-deoxystreptaminer er antibio-tica slik som gentamicin B, B-^, C-^, Cla>C2/C2a'C2b °^ X2' verdamicin, sisomicin, Antibiotikum G-418, Antibiotikum G-52, Antibiotikum JI-20A og Antibioticum JI-20B.

Også kjent innen faget er 1-N-alkyl-derivater av de ovenfor angitte 4,6-di-0-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitoler som generelt utviser bredspektret antibacteriell aktivitet og utviser forbedret aktivitet overfor forbindelser som er resistente overfor 1-N-usubstituerte antibacterielle midler.

De nye pseudotrisaccharider ifølge oppfinnelsen er derivater av 4,6-di-0-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptaminene gentamicin A, gentamicin B, gentamicin B^, gentamicin C^, gentamicin C, , gentamicin C->, gentamicin C_ . gentamicin C_. , tentamicin X2, tobramycin, verdamicin, kanamycin A, kanamycin 2

B, 3 1 ,4 ' -dideoxykananiycin B, Antibiotikum G-52 , Antibiotikum 66-40B, Antibiotikum 66-40D, Antibiotikum G-418, Antibiotikum JI-20A, Antibiotikum JI-203 og sisomicin, hvori 2-deoxystrepa-mindelen er ersttet med en 1,3-diaminocyclitol av formelen

hvori R er hydrogen eller en gruppe -CH2Y hvor Y er hydrogen, alkyl, alkenyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, hydroxyalkyl, aminoalkyl, N-alkylaminoalkyl, aminohydroxyalkyl, N-alkylaminohydroxyalkyl, fenyl, benzyl eller tolyl, hvilke alifatiske radikaler har opp til 7 carbonatomer, og hvis de er substituert med amino og hydroxyl, bærer substituentene på forskjellige carbonatomer, og X er hydroxyl, azido eller amino, forutsatt at når det gjelder derivater av sisomicin, er substituenten X azido eller amino, og farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter derav.

Særlig anvendbare antibacterielle midler ifølge oppfinnelsen innbefatter derivater av 4,6-di-0-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptaminer hvori aminoglycosidradikalet ved 6-stilling er garosaminyl,. Typiske derivater av 4-0-aminoalycosyl-6-0-garosaminyl-2-deoxystreptaminer ifølge oppfinnelsen er deriva*-ter av gentamicin B, gentamicin B-^, gentamicin C-^, gentamicin C^a, gentamicin C2fgentamicin<C>2a, gentamicin C^/gentamicin X2, sisomicin, verdamicin, Antibiotikum G-418, Antibiotikum JI-20A, Antibiotikum JI-20B og Antibiotikum G-52, hvilke forbindelser er definert ved følgende strukturformel X:

hvori X og R er som tidligere angitt for formel I og hvori AG-^er en aminoglycosylfunksjon valgt fra gruppen bestående av

Andre anvendbare derivater av 4,6-di-0-(aminoglycosyl) 2-deoxystreptaminer ifølge oppfinnelsen innbefatter derivater av tobramycin, kanamycin A, kanamycin B og 3<1>,4'-dideoxykanamycin B av følgende formel XI:

hvori X og R er som tidligere angitt for formel I og hvori AG2 er en aminoglycosylfunksjon valgt fra gruppen bestående av derivater av Antibiotikum 66-40D' av følgende formel:

hvori X og R er som tidligere angitt med formel I, og derivater av gentamicin A og Antibiotikum 66-40B av følgende formel

XIII.

hvori X og R er som tidligere angitt med formel I og hvori AG^er en aminoglycosylfunksjon valgt fra gruppen bestående av

Derivatene av 4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxystrepta-minene ifølge oppfinnelsen som definert i. formel, I eller av formlene X - XIII erkarakterisert vedat de er hulte-, amorfe pulvere.

Også. innbefattet innen oppfinnelsen er farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter av derivatene av 4,6-di-O-(aminoglycosyl) -2-deoxystreptaminene slik som ovenfor definert, hvilke salter fremstilles ifølge kjente prosedyrer slik som ved nøy-tralisering av den frie base med en passende syre, vanligvis til pH 5. Egnede syrer for dette formål innbefatter syrer slik som saltsyre., svovelsyre, fosforsyre, hydrobromsyre og lignende. De fysikalske utførelsesformer av syreaddisjonssaltene av derivatene av 4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptaminene erkarakterisert vedå være hvite faste materialer som er løselige i vann og uløselige i de fleste polare og ikke-polare organiske løsningsmidler.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen slik som definert ved formlene X - XIII, spesielt de hvori 6-0-aminoglycosylen er 6-0-garosaminyl, og deres ikke-toksiske, farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter utviser bredspektredé antibacteriell aktivitet og utviser et forbedret antibacterielt spektrum sam-menlignet med moderantibioticaene.

Innbefattet blandt de substituenter som taes i betraktning for gruppen -CH2Y i formel I er rettk^édede og forgrenede alkylgrupper slik som ethyl, n-propyl, n-butyl, (3-methylpropyl, n-pentyl, 3-methylbutyl, Y-methylbutyl og 3/Ø-dimethylpropyl, n-hexyl, <$-methylpentyl, p-ethylbu.tyl, y-ethylbutyl, n-heptyl, e-methylheptyl, 3-ethylpentyl, y-ethylpentyl, 6-ethylpentyl, Y-propylbutyl, n-octyl, iso-octyl, 3-ethylhexyl, <5-ethylhexyl, e-ethylhexyl, 3-propylpentyl, y-propylpentyl,. alkenylgrupper slik som 3-propenyl, 3-methylpropenyl, 3-butenyl, 3-methyl-3-butenyl, 3~ethyl-3-hexenyl, cykliske grupper slik som cyclopro-pylmethyl, cyclopentylmethyl, cyclohexylmethyl og cyclopentyl-ethyl, aromatiske grupper slik som o-, m-, p-methylbenzyl, hydroxysubstituerte rettkjedede og forgrenede alkylgrupper slik som 3-hydroxyethyl, e-hydroxypentyl, 3-hydroxy-Y-methylbutyl, 3-hydroxy ,3-methylpropyl, 6-hy dr oxy bu tyl,- 3-hydroxypropyl,. y~ hydroxypropyl, w-hydroxyoctyl, 3-hydroxy-<5-pentenyl, aminosub-stituerte rettkjede og forgrenede alkylgrupper slik som e-aminopentyl, 3-aminopropyl, Y-aminopropyl.,. 6-aminobutyl, 3-amino-Y— methylbutyl og w-aminooctyl og mono-N-alkylerte derivater derav slik som N-ethyl, N-methyl og N-propylderivatene, f.eks.£-methylaminopentyl, 3-ntethylaminopropyl, 3-ethylaminopropyl, fi-methylaminobutyl, 3-methylamino-Y-methylbutyl og (o-methylaminobutyl, amino- og hydroxydisubstituerte rettkjedede og forgrenede alkylgrupper slik som 3-hydroxy-e-aminopentyl- Y-hydroxy-Y-methyl-6-aminobutyl, S-3~hydroxy-6-aminobutyl, S-3-hydroxy-Y-aminopropyl og 3-hydroxy-3-inethyl-Y-aminopropyl, og mono-N-alkylerte derivater derav slik som 3-hydroxy-e-methylaminopen-tyl/ Y-hydroxy-Y-methyl-6-methylaminobutyl, 3~hydroxy-6-methylaminobutyl- 3-hydroxy-Y-ethylaminopropyl og 3-hydroxy-3-methyl-Y-methylaminopropyl.

Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse kan også beskrives som derivater av de ovenfor angitte 4,6-di-O-(aminoglycosyl) -2-deoxystreptaminer hvori 2-deoxystreptamindelen er erstattet med en 1,3-diaminocyclitol av formelen:

hvor X enten er azido eller amino eller (unntatt for sisomicin) hydroxy, eller hvor 2-deoxystreptamin-delen er erstattet med en 1 z 3-diaminocyclitol av formel I hvori R er gruppen -C^Y hvor Y er som ovenfor definert og X er enten azido eller amino eller

(unntatt for sisomicin) hydroxyl, og farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter derav.

I en foretrukket gruppe av forbindelser i formel I

og i formel X er R hydrogen eller alkyl med opp til 4 carbonatomer (spesielt 2 - 4 carbonatomer) hvor hydrogen og ethyl ei-de mest foretrukne<p>g hvor propyloogså er foretrukket.

En spesielt foretrukket gruppe av forbindelser, omfatter derivatene av 4-0--aminoglycasyl-6-Q-gaxo"s-aminyi.--2.-deoxyskrept»--minene gentamicin C-^, gentamicin C^a, verdamicin og sisomicin, hvori R i formel I er hydrogen og X er azido eller, amino,, og farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter derav.

En annen særlig foretrukken gruppe av forbindelser omfatter derivatene av 4-0-aminoglycosyl-6-0-garosaminyl-2-deoxy-streptaminene gentamicin C-^, gentamicin C^a, gentamicin C2, verdamicin og Antibiotikum G-418 hvori R i formel I er ethyl eller hydrogen og X er hydroxyl, og farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter derav.

En annen side ved foreliggende oppfinnelse angår derivater av 4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptaminene gentamicin A, gentamicin B, gentamicin B-^, gentamicin C-^, gentamicin C-^a, gentamicin C2, gentamicin C2a/gentamicin C2fa, gentamicin X2, tobramycin, verdamicin, kanamycin A, kanamycin B, 3',4'-dideoxykanamyciri.B, Antibiotikum G-52, Antibiotikum 66-40B, Antibiotikum 66-40D, Antibiotikum G-418, Antibiotikum JI-20A, Antibiotikum JIr-20B og sisomicin, hvori 2-deoxystreptamindelen er erstattet med en 1,3-diaminocyclitol av formelen:

hvori R-L er en gruppe -C-Y hvor Y er hydrogen, alkyl, alkenyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, hydroxyalkyl, aminoalkyl, N-alkyl-. aminoalkyl, aminohydroxyalkyl, N-alkylaminohydroxyalkyl, fenyl,

benzyl eller tolyl, hvilke alifatiske radikaler har opp til 7 carbonatomer og, hvis de er substituert med amino og hydroxyl, bærer substituentene på forskjellige carbonatomer, og hvor X er hydroxyl, azido eller amino, forutsatt at når det gjelder derivater av sisomicin er substituenten X azido eller amino, og syre-addis jonssalter derav.

Disse 1-N-acylforbindelser avviker fra forbindelsene ifølge formel I (eller formlener X - XIII,): bare- idet at aminor-gruppen i l-stilling er acylert. I tillegg til å være mellomprodukter ved fremstilling av derivatene-av formel I hvor R er gruppen -Ct^Y, er de også verdifulle idet de--.utviser bredspekt— ret antibakteriell aktivitet per se, 1-N-acetyl, 1-N-(S-4-amino- . 2-hydroxybutyryl) og 1-N-(S-3-amino-2-hydroxypropionyl)-derivatene er spesielt anvendbare forbindelser. De farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter av de 1-N-acylerte forbindelser slik som som dannes med saltsyre, svovelsyre, fosforsyre, propionsyre, maleinsyre, fenyleddiksyre, innbefattes også ifølge oppfinnelsens ramme.

Disse salter kan fremstilles ved oppløsning av den

fri nitrogenbase i vann, justere løsningen av det antibacterielle middel til pH 4,0 og lyofilisere den resulterende løs-ning .

Ved en fremgangsmåte ifølge foreliggende oppfinnelse fremstilles derivatene av 4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxy-streptaminene gentamicin A, gentamicin B, gentamicin B-^, gentamicin C-. , gentamicin C. , gentamicin C~, gentamicin C_ ,

-L la£• /La. gentamicin C2b'gentamicin X2, tobramycin,. verdamicin, kanamycin A, kanamycin B, 3<1>,4<1->dideoxykanamycin B, Antibiotikum G-52, Antibiotikum 66-40B, Antibiotikum 66-40D, Antibiotikum G-418, Antibiotikum JI-20A, Antibiotikum JI-20B og sisomicin, hvori 2-deoxystreptamindelen er erstattet med en 1,3-diaminocyclitol av formelen:

hvori R er hydrogen eller en gruppe -C^Y hvor Y er hydrogen, alkyl, alkenyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, hydrocyalkyl, aminoalkyl, N-alkylaminoalkyl, aminohydroxyalkyl, N-alkylaminohydroxyalkyl, fenyl, benzyl eller tolyl, hvilke alifatiske radikaler har opp til 7 carbonatomer og, hvis de er substituert med amino og hydroxyl, bærer substituentene på forskjellige carbonatomer, og hvor X er hydroxyl, azido eller amino, forutsatt at når det gjelder derivater av sisomicin., er subs>tituenten:. X: azido eller.'amino når R er gruppen -CHjY, og de farmasøytisk akseptable syre-addis jonssalter derav, ved at et derivat av én av de ovenfor angitte 4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptaminer- hvor 2-deoxy-1 streptamindelen er erstattet med en 1,3-diaminocyclitol av formelen:

hvori R er som ovenfor definert og X<1>er hydroxy eller azido, og hvilke derivater er per-N-beskyttet og "O-beskyttet i alle stillinger enn 5-stilling, underkastes fjerning av de beskyttende grupper, og hvis et derivat av 4,4-di-0-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptamin ønskes hvori substituenten X er amino, underkastes reduksjon av azidogruppen i 5-stilling enten før eller etter fjerning av de beskyttende grupper, og om ønsket, alkylering av en forbindelse hvori R er hydrogen under dannelse av en forbindelse hvor R er gruppen -Ct^Y hvor Y er som ovenfor angitt, og

isolering av derivatet som sådant eller som et farmasøytisk,

akseptabelt syreaddisjonssalt.

Fjerning av beskyttende grupper og reduksjon av azidogruppen til amino utføres etter metoder kjent innen faget.

Selvsagt når det ønskes en sluttforbindelse med en 5-epi-azido-gruppe må de beskyttende grupper være slik at de anvendte reaksjonsbetingelser for fjerning derav ikke påvirker azidogruppen. Således skal de N- og O-beskyttende grupper generelt være mottagelige for splitting ved basisk eller mild syre hydrolyse hvis azidogruppen ønskes i sluttforbindelsen. I et slikt tilfelle kan fjerning av de beskyttende grupper utføres ved behandling av forbindelsen hvori 1,3-diaminocyclitoldelen er av formel II hvor X' er azido, ved forhøyede temperaturer med vandig base, og når acetaler eller ketaler er tilstede, ved behandling også med vandig mild syre.

Når en sluttforbindelse ønskes hvorX er hydroxyl eller amino anvendes utgangsmaterialer hvor: X er hydroxyl eller azido., I slike tilfeller kan også beskyttende grupper være tilstede hvis fjerning med fordel utføres ved reduktiv splitting.

I for eksempel, et 5-epi-azido-5-deoxy-mellomprodukt hvori 1,3-diaminocyclitoldelen er av formel II og hvori alle 0-og N-beskyttende grupper er mottagelige for splitting ved base (f.eks. som i 1,3,21,6 *-tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-epi-azido-5-deoxy-2"-0-benzoyl-3",4"-N,0-carbonylsisomicin) vil behandling derav ved 100° C med vandig natriumhydroxyd gi et ahtibacterielt aktivt 5-epi-azido-5-deoxyaminoglycosid ifølge oppfinnelsen (f.eks. 5-epi-azido-5-deoxysisomicin). Når 5-epi-azido-5-deoxy-per-N- og O-beskyttede mellomprodukter også inneholder acetal-og ketalfunksjoner som splittes ved syre'(f.eks. som i 1,3,2',6I<->tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-epi-azido-5-deoxy-3<1>,4<1->0-benzyliden-2"-0-benzoyl-3",4"-N,0-carbonyl-Antibiotikum JI-20A), behandles det resulterende produkt etter behandling med base som ovenfor beskrevet med mild vandig syre etterfulgt av nøytralisering av den vandige syreblanding med wild base (f. eks. vandig ammoniumhydroxyd). Rensing av det resulterende produkt etter kjente metoder, vanligvis ved kromatografi, gir et antibacterielt aktivt 5-epi-azido-5-deoxyaminoglycosid-antibacterielt middel ifølge oppfinnelsen (f.eks. 5-epi-azido-5-deoxy-Antibiotikum JI-20A) .

Hvis det ønskes sluttforbindelser som har en 5-epi-amino-gruppe i molekylet underkastes utgangsforbindelsen med en 5-epi-azidogruppe en fjerning av beskyttende grupper, og azidogruppen omdannes til amino. Omdannelsen av azidogruppen utføres vanligvis enten med hydrogen i nærvær av en katalysator eller med et alkalimetall i flytende ammoniakk.

Reduksjon med hydrogen i nærvær av en katalysator foretrekkes når man reduserer 5-epi-azido-4,6-di-O-(aminogly- syl)-2,5-dideoxystreptamin-N-beskyttet-O-beskyttede mellomprodukter fri for umettethet slik som 5-epi-azido-5-deoxy-0- og N-beskyttede derivater av gentamicin A, B, B-^, C^, cia'C2' C2a'<C>2bog X2av tobramvcin'kanamyciner A og B, 3'/4<1->dideoxykaria-mycin B og Antibioticum G-418, JI-20A, JI-20B. På den annen side når man reduserer 5-epi-azido-N-beskyttet-O-béskyttet-4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2,5-dideoxystreptamiri-mellomprodukter i hvilke dobbeltbindinger er tilstede slik1 som. i, derivater av sisomicin, verdamicin, Antibiotikum G-52 og Antibiotikum 66-40B, 66-40D, er reduksjon ved hjelp av et alkalimetall i flytende ammoniakk foretrukket for å unngå reduksjon av dobbel.tbindingen..

Ved reduksjon av et 5-epi-azido-5-deoxy-mellomprodukt med hydrogen i nærvær av en katalysator, er de mest. hyppig anvendte katalysatorer platina, palladium og fortrinnsvis palladium på benkull.

Hydrogeneringen utføres vanligvis ved romtemperatur i lavere alkanonsyrer, fortrinnsvis eddiksyre, selv om andre løs-ningsmidler slik som lavere alkanoler kan anvendes. Hydrogeneringen fortsettes inntil det ikke er noe: ytterligere merkbart fall i hydrogentrykk, og det derved dannede 5-epi-amino-5-deoxy-derivat isoleres vanligvis ved å fjerne løsningsmidlet slik som ved destillasjon, og hvoretter det derved dannede 5-epi-amino-5-deoxy-residuum behandles med base og syre om nødvendig, for å fjerne eventuelt gjenværende M-beskyttende og O-beskyttende grupper. Når fremgangsmåten utføres med 5-epi-azido-5-deoxy-mellomprodukter som har per-N-benzyloxycarbonyl-aminobeskyttende grupper og 3",4"-N,0-carbonyl-beskyttende grupper, fjernes fortrinnsvis de benzyloxycarbonyl-beskyttende grupper under hydro-generingsprosedyren og det resulterende 5-epi-amino-5-deoxy-2"-0-hydrocarboncarbonyl-3",4"-N,0-carbonylderivat behøver bare å behandles med base (f.eks. med 2N-natriumhydroxyd) for å fjerne acylradikalene. Det resulterende anti-bakterielle aktive 5-epi-amino-5-deoxyaminoglycosid isoleres deretter og renses under . anvendelse av kjente metoder. Ved en typisk måte for utførelse av hydrogenering av et 5-epi-azido-5.-deoxy per-N-beskyttet-per-O-beskyttet mellomprodukt hydrogeneres 5-epi-azido-5-deoxy-mellomporduktet (f.eks. 1,3,2<1>,6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-epi-azido-5-deoxy-2"-0-benzoyl-3",4"-N,0-carbonylgentamicin Cigl, løst i eddiksyre ved romtemperatur ved 4 atmosfærer start-hydrogentrykk i nærvær av 30 % pallådium-på-benkull som katalysator. Når intet ytterligere fall i hydrogentrykk er merkbart, fjernes katalysatoren ved filtrering og løsningsmidlet fjernes ved destillasjon i vakuum under dannelse av et residuum omfat-, tende 5-epi-amino.-5-deoxy-2 "-O-benzoy 1-3 " , 4 "-N,0-carbonylgentamicin C, som ved behandling med 2N natriumhydrpxyd ved forhøyede temperaturer (f.eks. 100° C) etterfulgt av nøytralisering med, eddiksyre, fjerning av eventuelle uløselige;• bestanddeler1 ved: filtrering, konsentrering av reaksjonsløsningen til et lite volum og deretter kromatografi på Amberlite IRC-50-harpiks, (H+<->form), etterfulgt av eluering med ammoniumhydroxyd, konsentrering og lyofilisering av eluatet gir 5-epi-amino-5-deoxygentamicin C_, L cl, et nytt antibacterielt middel ifølge foireliggen-de oppfinnelse.

Ebentuelle acetal- eller ketalbeskyttende grupper i utgangs-5-epi-azido-5-deoxy-per-N-beskyttet-per—O-beskyttet aminoglycosid kan fjernes etter hydrogenering og behandling av det derved dannede produkt med base, ved behandling med mild vandig syre, f.eks. med fortynnede uorganiske syrer, eller med trifluoreddiksyre, eller vanligvis med fortynnede alkansyrer slik som eddiksyre.

Ved reduksjon av et 5-epi-azido-5-deoxy-per-N-beskyfcT-tet-per-O-beskyttet-aminoglycosid med en dobbeltbinding ved omsetning derav med et alkalimetall (f.eks. kalium, lithium og fortrinnsvis natrium) i flytende ammoniakk, løses vanligvis 5-epi-azido-5-deoxy-mellomproduktet (f.eks. 1,3,2 *,6'-tetra-N-benzyloxy-carbonyl-5-epi-azido-5-deoxy-2"-O-benzoy1-3",4"-N,0-carbonylsisomicin) i en blanding av et coløsningsmiddel slik som tetrahydrofuran og flytende ammoniakk til hvilket alkalimetallet (f.eks. natrium) er langsomt tilsatt og reaksjonsblan-dingén omrøres i noen få timer. Ammoniakken tillates å fordampe og eventuelle gjenværende 0- og N-beskyttende grupper fjernes ved tilsetning av vann til reaksjonsblandingen som gir natriumhydroxyd og oppvarming til forhøyet temperatur (f.eks. 100° C). Rensing av det resulterenee produkt utføres vanligvis via kromatografiske metoder for å oppnå et antibacterielt aktivt 5-epi-amino-5-deoxy-aminoglycosid ifølge oppfinnelsen, f.eks. 5-epi.-amino-5-deoxysisomicin.

Hvis det i sluttforbindelsen ønskes å ha en 5-epi-amin<p>gruppe, er det også mulig å fremstille den tilsvarende sluttforbindelse med en 5-epi-azidogruppe ved fjerning av alle beskyttende grupper og deretter omvandle 5-epi-azidogruppen til 5-epi-aminogruppen ved å anvende hovedsakelig de samme betingelser som ovenfor beskrevet.

Når det ønskes en sluttforbindelse hvori i formler I

X er hydroxyl, underkastes en. utgangsforbindelse. hvori i, formel II X1 er hydroxyl, en fjerning av de tilstedeværende beskyttende grupper i molekylet. De beskyttende grupper fjernes ved omsetning med vandig base, eller når beskyttende grupper., som. er, mottagelige overfor reduktiv splitting er tilstede, ved. reaksjon med et reduksjonsmiddel (som slik hydrogen i nærvær av katalysator eller et alkalimetall i flytende ammoniakk) etterfulgt av behandling med vandig base, og deretter, når acetaler eller ketaler er tilstede, ved behandling med vandig syre. Generelt er reaksjonsbetingelsene de samme som ovenfor beskrevet for det tilfelle hvor det erholdes et 5-epi-aminoderivat.

Utgangsforbindelsene ved den ovenfor angitte prosess hvori 1,3-diaminocyclitoldelen er av formel II, og som inneholder beskyttende grupper, er nye forbindelser og kan beskrives som følger for anvendelse av 5.-epi-azido (X'=N3i formel II) forbindelsene som et eksempel.

Selv om enhver amino-beskyttende gruppe kan anvendes, innbefatter særlig anvendbare aminobeskyttende grupper (betegnet med "Z" i formlene XIV - XXI vist i det etterfølgende) for ut-gangsf orbindelsene ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen, lavere alkoxycarbonyler (fortrinnsvis med opp til 8 carbonatomer, f.eks. methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, n-propyloxycarbonyl, iso-propyloxycarbonyl, n-butyloxycarbonyl, tert-butoxycarbonyl-octyloxycarbonyl og lignende), substituert benzyloxycarbonyl

(innbefattende o, m og p-methoxybenzyloxycarbonyl og lignende)

og fortrinnsvis benzyloxycarbonyl. Lavere alkanoyler som fortrinnsvis har opp. til 8 carbonatomer (f.eks. acetyl, propionyl, valeryl, caprylyl) er også anvendbare aminobeskyttende grupper (Z), i særdeleshet for forbindelser avledet fra antibacterielle midler som ikke kan danne et 3",4"-N,0-carbonylderivat (f.eks. forbindelser som ikke har en 6-0-garosaminyl-substituent slik som derivater av gentamicin A, og kanamycinene).

De foregående amino-beskyttende grupper fjernes ved behandling med base (f.eks. med natriumhydroxyd) eller når det gjelder benzyloxycarbonyl, ved reduktiv splittingsmetoder kjent innen faget. Benzyloxycarbonyl er en foretrukket aminobeskyttende gruppe på grunn av at den fjernes under reduksjonsbetin-gelsene hvorved et 5-epi-azido-5-deoxy-per-N-beskyttet-per-0-beskyttet-mellomprodukt behandles med hydrogen i nærvær av en katalysator (fortrinnsvis palladium) eller'med, et. alkal.imetall..

(f.eks. natrium eller kalium) i flytende ammoniakk under dannelse av et 5-epi-amino-5-deoxyaminoglycosid ifølge oppfinnelsen. I tillegg til det foregående er benzyloxycarbonyl en foretrukket aminobeskyttende gruppe for utgangsforbindelsene for denne prosess da i aminoglycosider med en hydroxylfunksjon tilstøtende en aminpfunksjon, slik som ved stilling 3" og 4" i 6-0-garos-aminylradikalet av aminoglycosidene av formel X, vil N-benzyloxy-carbonylderivatet (f.eks. 3"-N-benzyloxycarb6nylderivatene av forbindelser av formel X) når de underkastes basiske betingelser (slik som med natriumhydrid i dimethylformamid) danne et oxazolidinon med den tilstøtende hydroxylfunksjon (f.eks. et 3",4"-N,0-carbonylderivat av forbindelser- av formel X) med ledsagende eliminering av benzylalkohol. Tilsvarende vil N-alkoxycarbonyl-derivater danne oxazolidinoner med en tilstøtende hydroxylfunksjon. Når i tillegg en utgangsforbindelse har en 1-N-CH2V-substituent som har en hydroxylgruppe ia- eller 3-stilling til en aminobeskyttende gruppe Z som er en benzyloxycarbonyl eller alkoxycarbonyl, vil hydroxylgruppen sammen med den beskyttende gruppe Z danne et oxazolidinon eller et tetrahydro-1,3-oxazin-2-on.

Hydroxylfunksjoner i utgangsforbindelsene for denne prosess beskyttes hensiktsmessig ved O-acylradikaler av hydrocarboncarboxylsyre fortrinnsvis med opp til 8 carbonatomer (hvilke radikaler er betegnet som "Z^<1>i formlene XIV - XXIi det etterfølgende) eller ved O-hydrocarbonylidenradikaler av ketoner og aldehyder som fortrinnsvis har opp til 8 carbonatomer under dannelse av ketaler og acetaler, innbefattet cykliske ketaler og acetaler (hvilke hydrocarbonylidenradikaler er betegnet som "W" i formlene XIV - XXI i det etterfølgende) selv om en hvilken som helst annen hydroxy-beskyttende gruppe også kan anvendes for å beskytte hydroxylfunksjonene.

Generelt beskyttes nabohydroxylgrupper i aminoglycosid-forløperne for utgangsforbindelsene for denne prosess hensiktsmessig med cyliske ketaler eller acetaler. Med "nabohydroxylgrupper" taes i betraktning side- og ikke-side-hydroxylgrupper som er plasert slik at de sammen danner en cyklisk ketal eller cyklisk acetalfunksjon med ketoner og aldehyder eller deres derivater. Eksempler på slike "nabohydroxylgrupper" er 2', 3 ' - hydroxylgruppene i gentamiciner B og Bj. og i kanamycin A (som danner 2 ' , 3 1 -O-hydrocarbonylidenderiva.ter:) 4 ' , 6:'-hydroxyl.grup.^-pene i gentamicin A og X2og i Antibiotikum G-418 (som danner 4',6'-O-hydrocarbonyliden-derivater) 3',4<1->hydroxylgruppene i Antibiotikum JI-20A og JI-20B og i kanamycin. B (som. danner' 3 ',4 '~ O-hydrocarbonyliden-derivater) og 4",6"-hydroxylgruppene i tobramycin, kanamyciner A og B og 31,4'-dideoxykanamycin- B (som danner 4",6"-O-hydrocarbonyliden-derivater)..

Det cykliske ketal og acetalderivatene av nabohydroxyl-gruppene innbefatter O-alkyliden (f.eks. O-iso-propyliden), 0-cycloalkyliden (f.eks. O-cyclohexyliden) og O-arylalkyliden (f.eks. O-benzyliden)-derivater, som alle kan fjernes ved behandling med fortynnet vandig mild syre (f .eks. med 50 til 80 % eddiksyre). Arten av hydrocarbonet eller substituerte hydrocar-boner "yliden"-radikalene av de cykliske ketaler og acetaler er uten betydning da de bare virker som "blokkerende grupper", inn-går ikke i fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen og fjernes deretter slik at de fri hydroxylgrupper regenereres i deres opprinnelige form.

I utgangsforbindelsene ved fremgangsmåtene ifølge foreliggende oppfinnelse beskyttes isolerte hydroxylgrupper forskjellig fra 5-hydroxylgruppen, slik som 2"-hydroxylgruppen som er tilstede i alle aminoglycosidforløperne ifølge oppfinnelsen, 4'-hydroxylgruppen i tobramycin, og 4"-hydfoxylgruppen i Antibiotikum 66-40B og i gentamicin A såvel som andre hydroxylgrupper som ikke beskyttes av cylisk ketal eller acetalfunksjoner (f.eks. 3'-hydroxylgruppen i gentamicin A og 2<1>og 4"-hydroxylgruppen i kanamycin A) hensiktsmessig ved hydrocarboncarbonylradikaler (betegnet som "Z-^1 i formel XIV - XXI i det etterføl-gende) , hvilket hydrocarbon fortrinnsvis har opp til 8 carbonatomer. Anvendbare hydrocarboncarbonylradikaler er acylradika-. ler avledet fra lavere alkanolsyrer med opp til 8 carbonatomer innbefattet acetyl, propionyl, n-butyryl-valeryl og caprylyl såvel som acylradikaler avledet fra aralkanonsyrer slik som fenylacetyl og fra arylcarboxylsyrer slik som o, m og p-toluoyl, mesitoyl og fortrinnsvis benzoyl.

Innbefattet blandt 5-epi-azido-5-deoxy-per-N-beskyttet-per-O-beskyttet-mellomproduktene er forbindelser som er eksempli-fisert ved følgende formler: 1,3,2',6'-tetra-N-Z-5-epi-azido-5-deoxy-2"-0-Z, -3" ,4"-N^O-car.bonyl-Antibiotikum' 66-4OD av formel;

XVI

hvor R<*>er som tidligere angitt for R, men hvori hvilken som helst aminofunksjon er substituert veden gruppe Z, og hvilken somhelst hydroxylf unks jon er omdannet til en ester OZ-^, eller når hydroxylgruppen er i a- eller 3-stilling til en amino-beskyttende gruppe Z som er benzyloxycarbonyl eller alkoxycarbonyl, er hydroxylgruppen sammen med den beskyttende gruppe Z omdannet til et oxazolidinon eller et tetrahydro-1,3-oxazin-2-on, Z og Z^er som "definert i det etterfølgende, og 1,3,2',6'-tetra-N-Z-5-epi-azido-2"-0-Z1-3",4"-N,0-carbonyl-4,6-di-O-(aminoglycosyl )-2,5-dideoxystreptaminer av følgende formel XV: hvor R' er som ovenfor angitt, og Z er valgt fra gruppen bestående av benzyloxycarbonyl, substituert benzyloxycarbonyl og alkoxycarbonyl, og Z1er et hydrocarboncarbonyl, hvilket hydrocarbon har opp til 8 carbonatomer, og AG4er en aminoglycosylfunksjon valgt fra gruppen bestående av:

hvor Z er som ovenfor definert.

Andre 5-epi-azido-5-deoxy-per-N-beskyttet-Per-0-beskyttet utgangsforbindelser med foreliggende fremgangsmåte innbefatter 1,3,2' ,6' ,3"-penta-N-Z *-5-epi-azido-5-deoxy-4 1 ,2,,^di-0-Z1-4",6"-0-W-tobramycin, 1,3,6',3"-tetra-N-Z'-5-epi-azido-5-deoxy-2' ^"-O-Z^S' ,4' ,4" ,6"-di-0-W-kanamycin A, 1,3,6' ,3"-tetra-N-Z'-5-epi-azido-5-deoxy-4',2"-di-0-Z1-2',3'; 4",6"-di-0-W-kanamycin A, 1,3,2',6',3"-penta-N-Z'-5-epi-azido-5-deoxy-3',4'; 4",6"-di-O-W-2"-0-Z1-kanamycin B og1,3,2<1>,6<1>,3"-penta-N-Z'-5-epi-azido-5-deoxy-2 ' -O-Z-^-411,6"-0-W-3 ' ,4 ' -dideoxy-kanamycin B av formelen

XVI:

hvor R<1>er som ovenfor definert og hvor W er et hydrocarbonyliden med opp til 8 carbonatomer valgt fra gruppen bestående av alkyliden, cycloalkyliden og arylalkyliden', Z' er lavere alka-noyl, benzyloxycarbonyl, substituert benzyloxycarbonyl eller alkoxycarbonyl, Z-^er som definert for formel XV og AG^er valgt fra gruppen bestående av: hvor W, Z<1>og Z1er som ovenfor definert, l,3-di-N-Z-5-epir-azido-5-deoxy-2' ^ '-O-W-S1 ,4 ' ; 3" ,4 "-di-N^-carbonyl-^^O-Z^-derivater av gentamiciner B og B-^ av følgende formel XVII hvori R<1>, Z og Z-^ er som ovenfor definert, og hvor AGg er en aminoglycosylfunksjon valgt fra gruppen bestående av: hvor W er som ovenfor definert/ 1,3,2'-tri-N-Z-5-epi-azido-5-deoxy-3 »,2"-di-0-Z1-4 »,6'-0-W-3",4M<->N,0-carbonyl-derivater av gentamicin X2og Antibitokum G-418 av følgende formelXVIII hvor R', Z og Z^ er som ovenfor definert og AG^er en aminoglyco-sylf unks jon valgt fra gruppen bestående av: hvor W, Z og Z-^er som ovenfor definert, 1,3,2',6',3"-penta-N-Z1-5-epi-azido-5-deoxy-2",4"-di-O-Z^ Antibiotikum 66-40B med følgende formel XIX: hvor R* , Z' og er som ovenfor definert, 1,3,2' ,3"-tetra-N-Z'-5-epi-azido-5-deoxy-3 ' ,2" ,4 "-tri-O-Z-,^ ' ,6 '-O-W-gentamici.n A av følgende formel XX: hvori R', W, Z' og Z^erssom ovenfor definert, og 1,3 , 2 ' , 6 ' -tetra-N-Z-5-epi-azido-5-deoxy-3 * ,4 ' -0-W-2 "-0-^-3 ", 4 "-N,0-carbonyl-derivater av Antibiotika JI-20A og JI-20B av føl-gende formel XXI: hvori R', Z og Z-^er som ovenfor definert og AGg er'en åmino-glycosylfunksjon valgt fra gruppen bestående av:

hvor Z og W er som ovenfor definert.

De nødvendige nye utgangsforbindelser for fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen, dvs. 5-epi-azido-4,6-di-O-(aminoglycosyl) -2 , 5-dideoxystreptaminene med hydroxyl og amino-beskyttende grupper, fremstilles ved behandling av det tilsvarende 5-0-hydrocarbonsulfonyl (eller substituert hydrocarbonsulfonyl)-4,6-di-0-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptamin (dvs. forbindelser av formlene XIV - XXI som er fri for 5-epi-azidodeien og som har en 5-0-hydrocarbonsulfonylgruppe) med et alkalimetall-azid i et organisk løsningsmiddel.

Organiske løsningsmiodler for er egnet for denne fremgangsmåte er organiske løsningsmidler i hvilke 5-0-hydro-carbonsulf onyl (eller substituert hydrocarbonsulfonyl)-per-N- beskyttet-per-O-beskyttet-4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptamin og alkalimetallazidreagenset er løselig og er løs-ningsmidler som ikke vil reagere med •freagenset slik at muligheten for konkurerende bireaksjoner er minimalt. Egnede organiske løsningsmidler som er mest anvendbare ved denne fremgangsmåte

er løsningsmidler som dimethylformamid, dimethylacetamid og hexamethylfosforsyretriamid. Dimethylformamid- anvendes hyppig.

Natriumazid anvendes vanligvis ved. omdannelse? av et S-O-hydrocarbonsulfonyl-mellomprodukt ifølge oppfinnelsen til det tilsvarende 5-epi-azido-4-deoxy-mellomprodukt av formel XIV - XXI, imidlertid kan andre alkalimetallazider' anvendes- slik som kaliumazid og lithiumazid.

De 5-0-hydrocarbonsulfonyl og 5-0-substituert hydro-carbonsulfonylester-mellomprodukter som er anvendbare i denne fremgangsmåte og også anvendbare som utgangsmaterialer i andre fremgangsmåter ifølge oppfinnelsen er de som er avledet fra hydrocarbonsulfonsyrer med opp til 8 carbonatomer innbefattet etansulfonsyre, benzensulfonsyre, p-toluensulfonsyre, og fortrinnsvis methansulfonsyre, og også de som er avledet fra nitro-benzensulfonsyre (f.eks', o, m og p-nitrobenzensulfonsyrer) og de som er avledet fra halogenhydrocarbonsulfonsyrer (f.eks. tri-fluormethansulfonsyre, p-klorbenzensulfonsyre, o- eller p-brom-benzensulfonsyrer og lignende). 5-0-hydrocarbonsulfonyl og 5-O-substituert hydrocarbonsulfonyl-mellomproduktene fremstilles

fra de tilsvarende per-N-beskyttet-per-0-beskyttet-5-hydroxy-aminoglycosider (dvs. forbindelser av formel XIV - XXI som er fri for 5-epi-N3_delen og som har en 5-hydroxylfunksjon, hvilke forbindelser anvendes som utgangsmaterialer i en annen fremgangsmåte ifølge oppfinnelsen) ved behandling derav med et hydrocar-bonsulf onylhalogenid (fortrinnsvis methansulfonylklorid) i et tertiært amin (vanligvis triethylamin)).

Ved omdannelse av et 5-0-hydrocarbonsulfonyl (eller 5-0-substituert hydrocarbonsulfonyl)-4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptamin (med aminofunksjoner og alle andre hydroxylfunksjoner beskyttet av grupper som er mottagelige overfor reduktiv splitting og/eller basisk eller mild syrehydrolyse)

til det tilsvarende 5-epi-azido-5-deoxy-mellomprodukt (slik som definert ved formlene XIV - XXI) ved denne fremgangsmåte løses

utgangs-5-O-h.ydrocarbonsulfonylderlvatet (f.eks. 1,3,2',6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-O-meth.ansulf onyl-2 "-O-benzoyl-3" , 4 " - N/O-carbonylsisomicin og 1,3,2',6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-O-methansulfonyl-2"-0-benzbyl-3",4M<->N,0-carbonylgentamicin C^). vanligvis i dimethylformamid til hvilket minst én ekvivalent, hvis en overskytende molar mengde (i forhold til den molare mengde av aminoglycosid) av natriumazid er tilsatt under en argonatmosfære. Reaksjonsblandingen oppvarmes (vanligvis over 100° C) inntil 5-O-methansulfonyl-mellomproduktet. ikke^lenger; er .

tilstede som fastslått ved tynnskiktskromatografisk" analyse. • Det resulterende produkt isoleres vanligvis ved konsentrering av reaksjonsblandingen, oppløsning av residuet i. et. syrefritt orga— nisk løsningsmiddel, vasking av den organiske-løsning' med vann, deretter fordampning av den vaskede organiske løsning til et residuum omfattende et 5-epi-azido-5-deoxy-mellomprodukt (f.eks. 1,3,2' , 6 ' -tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-epi-azido-5-deoxy-2"-0-benzoyl-3",4"-N,0-carbonylsisomicin og 1,3,2',6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-epi-azido-5-deoxy-2"-O-benzoyl-3",4"-N,0-carbonylgentamicin C-^) .

Per-N-beskyttet-per-O-beskyttet-5-O-hydrocarbon-sulfo-nyl-4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptaminene som er for-løpere for de tilsvarende 5-epi-azido-5-deoxy-mellomprodukter og også utgangsmaterialer ved en annen fremgangsmåte ifølge oppfinnelsen, avledes fra kjente ubeskyttet-4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptaminer innbefattet 4-0-aminoglycosyl-6-0-garosaminyl-2-deoxystreptamin-antibiotika slik som gentamicin B, gentamicin B^, gentamicin C^, gentamicin C^a, gentamicin C^, gentamicin C2a, gentamicin C^, gentamicin X2, sisomicin, verdamicin, Antibiotikum G-418, Antibiotikum JI-20A, Antibiotikum JI-20B og Antibiotikum G-52, og 4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptaminer slik som gentamicin A, tobramycin, Antibiotikum 66-40B, Antibiotikum.66-40D, kanamycin A, kanamycin B og 3',4'-dideoxykanamycin B. Av de foregående er foretrukne forløpere gentamicin C-^, C^a, C2, C2a, C2t)/Antibiotikum 66-40D, verdamicin, Antibiotikum G-52 og sisomicin, hvor alle meget lett omdannes til foretrukne forbindelser ifølge oppfinnelsen, dvs. de

tilsvarende 5-epi-azidp-5-deoxyderivater og 5-epi-amino-5-deoxy-derivatene og 5-epimerene.

De ovenfor angitte 4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxy-' streptamin-antibiotika er kjent. Av gentamicinene er utgangsforbindelsen angitt her som gentamicin X2også kjent innen faget som gentamicin X. Utgangsforbindelsen angitt her som gentamicin C2bme<^ ^en ^"er v*ste strukturformel er innen teknikkens stand også angitt som gentamicin C- a .■

Ved fremstilling av l-N-CH^Y-derivatene ifølge oppfinnelsen via de tilsvarende utgangsmaterialer, er l-N-GH2Y-per-N-beskyttet-per--0-beskyttet-5-0-hydrocar.bonsulf;onylJ-4'-/,6--di^O-'

(aminoglycosyl)-2-deoxystreptamin-forløperne også avledet fira 1-N-CH2Y-derivatene av de ovenfor beskrevne l-N-usubstituert-4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptaminer. Disse forbindelser- er-kjent innen faget.

Ved fremstilling av per-N-beskyttet-per-0-beskyttet-5-O-hydrocarbonsulfonyl-4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2~deoxystreptamin-forbindelsene beskyttes aminogruppene først ved dannelse av ami-der som er mottagelige overfor reduktiv splitting eller basisk hydrolyse. Ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen foretrekkes det å beskytte aminogruppene ved dannelse av N-benzyloxycarbonylderivater derav (f.eks. 1,3,6',3"-tetra-N-benzyloxycarbonylgentamicin B og 1,3,2 ' ,6 ' ,3"-penta-N-benzyloxycarbonyl-gentamicin C-^) .

De derved dannede per-N-beskyttet-aminoglycosidene som har et garosaminyloxyradikal ved C-6 behandles deretter med et alkalimetallhydrid, vanligvis natriumhydrid i dimethylformamid hvorved den 3"-N-hydrocarbonyloxy-carbonyl-beskyttende gruppe cykliseres med 4"-hydroxylfunksjonen under dannelse av et oxa-zolidinonderivat, dvs. et 3",4"-N,0-carbonylderivat. I aminoglycosider hvori andre aminogrupper er tilstøtende til en hydroxy lgruppe (som som 6"-amino og 4'-hydroxylgruppene i gentamicin B), vil andre N,0-carbonylderivater dannes. Ved således omsetning av hver av 1,3,2',6',3"-penta-N-benzyloxycarbonyl-gentami-

cin C-^ og av 1,3,61,3"-tetra-N-benzyloxycarbonyl-gentamicin B

med natriumhydrid i dimethylformamid dannes oxazolidinonderivat-ene, dvs. 1,3,2',6<1->tetra-N-benzyloxycarbonyl-3",4"-N,0-carbonylgentamicin C, og 1,3-di-N-benzyloxycarbonyl-6' ,4',3" ,4"-di-N,0-carbonylgentamicin B.

Alternativt kan ved beskyttelse av aminogruppene fra antibakterielle midler som ikke kan danne et 3",4"-N,0-carbonyl-derivat (f.eks. mellomprodukter som ikke har en 6-0-garosaminyl- substituent slik. gentamicin A og 3 ? ,4' -dideoxykanamycin B) , aminogruppene hensiktsmessig beskyttet av lavere alkanoylgrupper slik som acetyl og propionyl ved behandling av det antibakterielle middel med det tilsvarende syreanhydrid i ethanol hvorved det dannes det tilsvarende per-N-lavere alkanoylaminoglycosid. Således vil behandling av gentamicin A med eddiksyreanhydrid i ethanol gi per-N-acetyl-gentamicin A.

Deretter vil. vanligvis tilstøtende'hydroxylgrupper be— - skyttes som vil danne en ketal- eller acetalgruppe ved behandling med et keton eller aldehyd eller derivat derav i dimethylformamid i nærvær av katalytiske mengder av en sterk syre slik: somt p-to:lu-< ensulfonsyre under anvendelse av kjente metoder. Således vil det ovenfor angitte mellomprodukt av gentamicin B ved behandling med 1,1-dimethoxycyclohexan i dimethylformamid i nærvær av p-toluensulfonsyre gi et ketal ved 2' og 3<1->hydroxylgruppene, dvs. 1,3-di-N-benzyloxycarbonyl-2<1>,3'-O-cyclohexyliden-6<1>,4'; 3",4"-di-N,0-carbonylgentamicin B. Tilslutt omvandles eventuelle isolerte hydroxylfunksjoner (unntatt 5-hydroxylgruppen) som er tilbake i det delvis beskyttede aminoglycosid-derivat til det tilsvarende hydrocarboncarbonylderivat ved behandling derav med en syreklo-

rid av hydrocarboncarboxylsyre i et tertiært amin (fortrinnsvis pyridin), idet den molare mengde av syrehalogenidreagenset er basert på antall hydroxylgrupper som skal forestres. Hvis bare en hydroxylgruppe forskjellig fra 5-hydroxylgruppen er tilbake i molekylet (f.eks. 2"-hydroxylgruppen) anvendes en ekvivalent mengde av syrehalogenid til den molare mengde av aminoglycosid, hvis to hydroxylgrupper skal beskyttes, anvendes to molare ekvivalenter av syrehalogenid pr. mol aminoglycosid. Acylhalo-genider av hydrocarboncarboxylsyrer med opp til 8 carbonatomer anvendes fortrinnsvis, innbefattet syreklorider av lavere alkanonsyrer slik som eddiksyre, propionsyre, valerinsyre og caprylsyrer, av aralkanonsyrer slik som fenyleddiksyre og arylcarboxylsyrer slik som toluen og fortrinnsvis benzoesyrer. Således vil hver av de ovenfor angitte mellomprodukter av gentamicin og B ved behandling med ekvimolare mengder av benzoylklorid i pyridin gi det tilsvarende 2"-0-benzoyl-derivat, dvs. 1,3,21,6 »-tetra-N-benzyloxycarbony1-2"-O-benzoyl-3",4"-N,0-carbonylgentamicin C-^ og 1, 3-di-N-benzyloxycarbonyl-2 1 ,3 "-0-cyclohexyliden-6',4<1>,3",4"-di-N,0-carbonyl-2"-O-benzoylgentami-

ein B som begge ved behandling med methansulfonylklorid i triethylamin gir de tilsvarende 5-0-methansulfonylderivater. Forbindelsene (4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxy-streptaminene) som er per-N-beskyttet og O-beskyttet i alle stillingen enn 5-stillingen anvendes også som utgangsmaterialer i en fremgangsmåte ifølge oppfinnelsen.

Alternativt kan etter beskyttelse av aminogruppene ved hjelp av N-benzyloxycarbonylderivater og hydroxylgrupper. støtende; til de beskyttede aminogrupper via N,0-carbonylderivater, alle andre hydroxylgrupper unntatt 5-hydroxylgruppen beskyttes ved omdannelse derav til en hydrocarboncarbonylgruppe uten.først å beskytte nabohydroxylgruppen med acetal eller ketalgrupper. Således vil 1,3-di-N-benzyloxycarbonyl-6',4';3",4"-di-N,0-carboriyl-gentamicin B ved omsetning med tre molar ekvivalenter benzoylklorid i pyridin gi det tilsvarende 2',3<1>,2"-tri-O-benzoatderi-

vat som ved omsetning med methansulfonylklorid i pyridin omdan-

nes til en forbindelse som er anvendbar ifølge oppfinnelsen, dvs. 1, 3-di-N-benzyloxycarbonyl-5-0-rmethansulfonyl-2 1 ,3' ,2"-tri-0-benzoyl-6',4';3",4"-di-N,0-carbonylgentamicin B.

De andre nødvendige nye utgangsmaterialer for denne fremgangsmåte ifølge oppfinnelsen, dvs. forbindelser hvori 1,3-diaminocyclitoldelen er av formel.II hvori i formelen X* er hydroxy-(5-epi-4,6-di-0-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptaminer) og hvilke forbindelser er per-N-beskyttet og O-beskyttet i alle stillinger unntatt 5-stilling fremstilles ved fremgangsmåter som er beskrevet i det etterfølgende.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan. fremstilles etter kjente metoder innen faget og ennvidere etter metoder som er nye per se. En ny fremgangsmåte for fremstilling av derivater av 4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptaminene gentamicin A, gentamicin B, gentamicin B-, , gentamicin C-. , gentamicin C ,

j- la gentamicin C2/ gefitamicin C^, gentamicin C2a, gentamicin C2b, gentamicin X2, tobramycin verdamicin, kanamycin A, kanamycin B, 3•,4<1->di-deoxykanamycin B, Antibiotikum G-52, Antibiotikum 66-

40B, Antibiotikum 66-40D, Antibiotikum G-418, Antibiotikum JI-

2QA, Antibiotikum JI-20B og sisomicin, hvori 2-deoxy-streptamindelen er erstattet med en 1,3-diaminocyclitol av formelen:

hvori formelen R er hydrogen eller en gruppe -CI^Y hvor Y er hydrogen, alkyl, alkenyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyL, hydroxyalkyl, aminoalkyl, N-alkylaminoalkyl, aminohydroxyalkyl, N-alkyl— aminohydrpxyalkyl, fenyl, benzyl eller tolyl, hvilke alifatiske radikaler har opp til 7 carbonatomer, og hvis de er substituert med amino og hydroxyl, bærer substituentene på forskjellige carbonatomer, og hvor X-^er hydroxyl, og farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter derav, omfatter behandling av et derivat av en av de ovenfor angitte 4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptaminer, hvori 2-deoxystreptamindelen er erstattet med en 1,3-diaminocyclitol av formelen:

hvor i formelen R er som ovenfor definert og X<1>er usubstituert eller substituert hydrocarbonsulfonyloxy, og hvori hydroxyl-

og aminogruppene i 4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptamin-derivatet er beskyttet av grupper som er mottagelige overfor reduktiv splitting eller overfor basisk eller mild syrehydrolyse, med dimethylformamid ved temperaturer i området fra 80 til 155° C, hvoretter de beskyttende grupper i det resulterende produkt fjernes og om ønsket, en forbindelse hvori R er hydro- .

gen alkyleres under dannelse av en forbindelse hvori R er i gruppen -CI^Y- hvor Y er som ovenfor angitt, og isolering av derivatet som sådant eller som et farmasøytisk akseptabelt syre-addis jonssalt .

Reaksjonen utføres i dimethylformamid alene eller fortrinnsvis også i nærvær av et tetraalkylammoniumalkanoat. Be-handlingen av et 5-0-hydrocarbonsulfonylmellomprodukt med dimethylformamid alene, utføres ofte ved ti lbakelø.pstempe råtur/'

(dvs. ca. 155° C) da reaksjonshastigheten vanligvis er større enn når reaksjonen utføres ved lavere temperaturer. Når imidlertid reaksjonen utføres i nærvær av et tetraalkylammoniumalkanoat forløper reaksjonen godt ved lavere temperatur (f .eks .

100 - 140° C) under dannelse av gode utbytter av et renere produkt. Tetra-n-butylammoniumacetat foretrekkes vanligvis men andre tetraalkylammoniumalkanoater kan anvendes, f.eks. tetraethylammoniumacetat, tetraethylammoniumacetat, tetraethylammo-niumformiat, tetra-n-butylammoniumformiat og lignende. Den molare mengde av tetraalkylammoniumalkanoat pr. mol aminoglyco-

sid er vanligvis fra 1,5 til 5 mol.

Mellomproduktene som fremstilles ved omsetning av N-beskyttet-O-beskyttet-5-O-hydrocarbonsulfonyl (eller substituert hydrocarbonsulfonyl)-4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptamin med dimethylformamid gir ved hydrolyse en 5-epi-forbindelse ifølge oppfinnelsen. Når tetra-n-butylammoniumacetat anvendes sammen med dimethylformamid, er det dannede mellomprodukt det tilsvarende N-beskyttet-O-beskyttet-5-epi-O-acetylderivat som ved hydrolyse gir en 5-epi-forbindelse ifølge oppfinnelsen.

Beskyttende grupper som er mottagelige overfor reduk-

tiv splitting anvendes fortrinnsvis ved utførelse av fremgangsmåten da de kan fjernes lett via reduksjonsmetoder etter epime-risering ved 5-stillingen. Andre beskyttende grupper vil imidlertid være tilbake etter reduksjonstrinnet, f.eks. N,0-carbo-nylgrupper som fjernes ved behandling med vandig base ved for-høyede temperaturer. I tiliegg er syrehydrolyse nødvendig for å fjerne acetaler eller ketaler.

Ved fjerning av beskyttende grupper som er mottagelige overfor reduktiv splitting fra mellomproduktene fremstilt ved denne fremgangsmåte, er reduksjonen med hydrogen i nærvær av en katalysator foretrukket når de fremstilte 5-epi-4,6-di-O-(aminoglycosyl).-2-deoxystreptamin-N-beskyttet-0-beskyttet mellomprodukter er fri for.umettethet, slik som mellomproduktene avledet ved behandling med dimethylformamid av 0- og N-beskyttede derivater av gentamicin A, B, B^, C^, Cla#C2>C2a'C2b°g X2 og tobramycin, kanamycin A og B, 3<1>,4'-dideoxykanamycin B og Antibiotikum G-418, JI-20A og JI-20B.' Ved på den annen side' fjerning av beskyttende grupper som er .mottagelige overfor reduktiv splitting fra N-beskytte:t-0-beskyttet-5-ep.i.-4., 6;-di.r0- (amino:—<g>lycosyl)-2-deoxystreptamin-mellomprodukter i hvilke en dobbeltbinding er tilstede, slik.som de som er avledet fra sisomicin.,. verdamicin, Antibiotikum. G-52, Antibiotikum 66-40B og 66-40D er, reduksjon ved hjelp av et alkalimetall i flytende ammoniakk foretrukket for å unngå reduksjon av dobbeltbindingen.

Ved avblokkering av et mellomprodukt med hydrogen 1 nærvær av en katalysator er den mest hyppig anvendte.katalysator palladium- fortrinnsvis palladium-på-benkull.

Hydrogenolysen av beskyttende grupper utføres vanligvis ved romtemperatur i lavere alkanonsyrer, fortrinnsvis eddiksyre, selv om andre løsningsmidler slik som lavere alkanoler kan anvendes . Hydrogeneringen fortsettes inntil det ikke er noe ytterligere merkbart fall i hydrogentrykket og 5-epi-4,6-di-O-(aminoglycosyl) -2-deoxystreptaminet ifølge oppfinnelsen isoleres deretter vanligvis ved fjerning av løsningsmidlet slik som ved destillasjon og deretter behandling av det dannede N- og O-beskyttet-5-epi-2-deoxystreptamin-mellomprodukt med base, og når acetaler eller ketaler også er tilstede, med vandig syre for å fjerne gjenværende beskyttende grupper.

I en typisk utførelsesmåte av denne prosess løses et 5-0-hydrocarbonsulfonyl-per-N-beskyttet-per-O-beskyttet-mellomprodukt lik de av formel XIV - XXI men som har en hydrocarbon-

,, , OS00-hydrocarbon .. 'csulfonyloxygruppe ved C-5 \\2 Ji stedet for en epi-Y-

azidogruppe i N3f.eks. 1,3,2<1>,6<1->tetra-N-benzyloxycarbonyl-• 5-0-methansulf onyl-2"-0-benzoyl-3 " ,4 "-N,0-carbonylgentamicin C-^

i dimethylformamid og oppvarmes til tilbakeløpstemperatur i 18 timer hvoretter løsningen fordampes til et residuum av et 5-epi-N-rb.eskyttet-O-beskyttet-4 , 6-di-O- (aminoglycosyl) -2-deocystrepta-

min-mellomprodukt som løses i eddiksyre og hydrogeneres ved romtemperatur ved 4 atmosfærers begynnelseshydrogentrykk i nærvær av 30. % palladium-på-benkull. Når intet ytterligere fall i hydrogentrykk er merkbart, fjernes katalysatoren ved filtrering og løs-ningsmidlet fjernes ved destillasjon i vakuum under dannelse av et residuum som ved behandling med 2N natriumhydroxyd ved for-høyede temperaturer (f.eks. 100° C) etterfulgt av nøytralisering med eddiksyre, isolering og rensing under anvendelse^ av kjente teknikker gir 5-epigentamicin C-^, et nytt antibakterielt middel ifølge foreliggende oppfinnelse.

I en annen foretrukket utførelsesmåte. av denne fremgangsmåte oppvarmes et 5-0-hydrocarbonsulfonyl-per-N-beskyttet-per-O-beskyttet-mellomprodukt, f.eks. 1,3,2',6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-O-methansulfonyl-2"-O-benzoyl-3",4"-N,0-carbonylsisomicin og 1-N-ethyl-l,3,2<1>,6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-0-methansulfonyl-2"-0-benzoyl-3",4"-N,0-carbonylsisomicin, i dimethylformamid til hvilket tetra-n-butylammoniumacetat er tilsatt til 120° C i 16 timer og løsningen fordampes under dannelse av det tilsvarende 5-epiacetylderivat, f.eks. 1,3 , 2',6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-epi-0-acetyl-2"-O-benzoyl-3",4"-N,0-carbonylsisomicin og det tilsvarende 1-N-ethylderivat som ved behandling med vandig kaliumhydroxyd etterfulgt av nøytralisering, isolering og rensing via kromatografiske metoder gir en 5-epi-forbindelse, f.eks. 5-episisomicin og l-N-ethyl-5-episisomicin.

Enhver acetal- eller ketal-beskyttende gruppe i mellomproduktene fjernes etter fjering av de N-beskyttende grupper ved behandling med fortynnet vandig syre, f.eks. med fortynnet uorganiske syrer, fortynnet trifluoreddiksyre eller vanlig med fortynnede alkanonsyrer slik som eddiksyre.

Ved fjerning av carbobenzyloxybeskyttende grupper fra et per-N-beskyttet-per-O-beskyttet-aminoglycosid-mellomprodukt som har en dobbeltbinding (f.eks. mellomproduktet avledet fra 1,3,2',6'-tetra-N-benzyloxycarbony1-2"-O-benzoy1-3",4"-N,0-car-bonylverdamicin ved behandling med dimethylformamid) ved omsetning derav med et alkalimetall (f.eks. kalium, lithium og fortrinnsvis natrium) i flytende ammoniakk, løses mellomporduktet vanligvis i en blanding av et coløsningsmiddel slik som tetrahydrofuran og flytende ammoniakk til hvilket alkalimetallet

(f .eks. natrium), ex tilsatt og reaks jonsblandingen omrøres i

noen få timer. Etter at ammoniakken har fått fordampe, fjernes enhver gjenværende 0- og N-beskyttende grupper (slik som 3".,4"-N,0-carbonyl og 2"-0-benzoylgruppen) ved tilsetning av vann til reaksjonsblandingen som gir hatriumhydroxyd og oppvarming til forhøyede temperaturer (f.eks. 100° C). Rensing av det resulterende produkt utføres via kromatografiske metoder under dannelse av et antibakterielt aktivt 5-epi-aminoglycosid ifølge- oppfinnelsen, f.eks. 5-epiverdamlcin.

Alternativt kan de beskyttende grupper fjernes fra det N- og O-beskyttede mellomprodukt fremstilt ved behandling med-dimethylformamid av et N- og 0-beskyttet-5-0-hydrocarbonsulfonyl-4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptamin ved omsetning derav med base ved forhøyede temperaturer og, når acetaler eller ketaler er tilstede, ved behandling med vandig syre.

Oppfinnelsen angår også en ny fremgangsmåte for fremstilling av derivater av 4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxystrepta-minene gentamicin A, gentamicin B, gentamicin B-^, gentamicin C^, gentamicin C, , gentamicin C~, gentamicin C„ , gentamicin C0, ,

x ac c. a

gentamicin X2, tobramycin, verdamicin, kanamycin A, kanamycin B, 3',4<1->dideoxykanamycin B, Antibiotikum G-52, Antibiotikum 66-40B, Antibitoikum 66-40D, Antibiotikum G-418, Antibiotikum JI-20A, Antibiotikum JI-20B og sisomicin, hvori 2-deoxystreptamindelen

er erstattet med en 1,3-diaminocyclitol av formelen:

hvori formelen R er hydrogen eller en gruppe -CH2Y hvor Y er hydrogen, alkyl, alkenyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, hydroxyalkyl, aminoalkyl, N-alkylaminoalkyl, aminohydroxyalkyl, N-alkyl-amino-hydroxyalkyl, fenyl, benzyl eller tolyl, hvilke alifatiske radikaler har opp til 7 carbonatomer, og hvis de er substituert

med amino og hydroxy/ bærer substituentene på forskjellige carbonatomer/og hvor X-j^ er hydroxyl/og farmasøytisk aksepteble syreaddisjonssalter derav/hvilken fremgangsmåte omfatter omsetning av et derivat av én av de ovenfor angitte 4,6-di-O-(aminoglycosyl) -2-deoxystreptaminer, hvori 2-deoxystreptamindelen er erstattet med 1,3-diaminocyclitol av formelen:

hvori, formelen R og X-^ er som ovenfor definert, og hvor amino-

og hydroxylgruppene forskjellig fra 5-hydroxygruppen i 4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptamin-derivatet er beskyttet av grupper som er mottagelige overfor reduktiv splitting eller overfor basisk eller mild syrehydrolyse, med et oxyderende middel, omsetning av det resulterende N-beskyttet-O-beskyttet-5-dehydro-4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptamin med et alkalimetallborhydrid, fjerning av de beskyttende grupper i det resulterende produkt, og om ønsket, alkylering av en forbindelse hvori R er hydrogen under dannelse av en forbindelse hvori R er gruppen -CH2Y hvor Y er som ovenfor definert, og isolering av derivatene som sådanne eller som et farmasøytisk akseptabelt syreaddisjonssalt.

I denne fremgangsmåte anvendes utgangsforbindelser som er per-N-beskyttet. og per-O-beskyttet unntatt den ekstremt hindrede hydroxylgruppe i 5-stilling, og som erholdes ved innføring av blokkerende grupper som ovenfor beskrevet.

I første trinn i denne reaksjon er det anvendte oxydasjonsmiddel fortrinnsvis valgt fra rutheniumtetroxyd, kromsyre i aceton og kromtrioxyd-pyridinkompleks i methylenklorid. Den resulterende 5-dehydroforbindelse avviker fra forbindelsen iføl-ge formel XIV - XXI bare ved at gruppen 5 er substituert

i stedet for 5-epiaz ido -gruppen. \5

N3

Oxydasjonstrinnet i denne prosess utføres vanligvis i

et organisk løsningsmiddel slik som aceton når kromsyre anvendes, eller et halogenert hydrocarbon, fortrinnsvis methylenklorid når kromtrioxyd-pyridinkompleks eller rutheniumtetroxyd anvendes.som oxydasjonsmiddel, ved temperaturer i området fra. 0 til» 40° C, fortrinnsvis ved. 20, - 40° C

I det annet trinn ved fremgangsmåten hvorved per-N- og 0-beskyttet-5-dehydro-4 ,6-di-O- (aminoglycosyl.) -mellomproduktene reduseres ved dannelse av det tilsvarende 5-epi-mellomprodukt,

er hindrede alkalimetallborhydrider foretrukne reagenser, f.eks. natrium, kalium eller lithiumtri-sek-butylborhydrider, selvom ethvert alkalimetallborhydrid kan anvendes, f.eks. natrium eller kaliumhorhydrid. Reaksjonen utføres vanligvis i en lavere alkanol (f.eks. methanol) eller ether (f.eks. dioxan eller fortrinnsvis tetrahydrofuran) ved temperaturer i området fra 0 til 50° C (fortrinnsvis ved 0 - 25° C) under betingelser kjent innen faget for utførelse av alkalimetallborhydridreduksjoner.

I en typisk utførelsesmåte av denne fremgangsmåte behandles et per-N-beskyttet-O-beskyttet-4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptamin (f.eks. 1,3,2',6<1>,3"-penta-N-benzyloxycarbonyl-2"-0-acetylgentamicin C-^a) løst i methylenklorid med kromtrioxyd-pyridinkompleks ved romtemperatur inntil reaksjonen er fullført som bestemt ved tynnskiktskromatografisk analyse av en prøve av reaksjonsblandingen (vanligvis ca. 28 timers reaksjonstid). Det resulterende 5-keto-mellomprodukt, dvs. O-beskyttet-per-N-beskyttet-5-dehydro-4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptamin, f.eks 1,3,2',6<1>,3"-penta-N-benzyloxycarbonyl-5-dehydro-2"-0-acetylgen-tamicin C-^, isoleres hensiktsmessig ved ekstraksjon med ether, fordampning av løsningsmidlet og rensing av residuet via kroma-tografisk metode. 5-keto-mellomproduktet løses deretter i en lavere alkanol eller ether, fortrinnsvis tetrahydrofuran og et alkalimetallhydrid (f.eks. lithium-tri-sek-butylborhydrid) til-settes (vanligvis 2-4 mol metallborhydrid anvendes pr. mol aminoglycosid-mellomprodukt) og reaksjonsblandingen omrøres ved romtemperatur i ca. 20 timer. Det derved dannede N-beskyttet-O- beskyttet-5-epiaminoglycosid Isoleres vanligvis ved tilsetning av saltvann til reaksjonsblandingen og ekstrahering med ethylacetat hvoretter løsningsmidlet fordampes. De N- og O-beskyttende grupper i 5-epI-amInoglycosid-mellomproduktet fjernes deretter som ovenfor beskrevet f.eks. ved behandling med natrium i . flytende ammoniakk for å fjerne benzyloxycarbonylgriippene etterfulgt av behandling med natriumhydroxyd ved forhøyede temperaturer.

Enhver forbindelse (5-epi-azido-, 5-epi-amino eller 5-epimerer) som kan erholdes ved de ovenfor beskrevne proses.ser ifølge oppfinnelsen og hvor 1,3-diaminocyclitoldelen., aminogrup— pen i 1-stilling er usubstituert kan alkyleres ifølge kjente metoder innen faget for å innføre gruppen -CI^Y --hvor Y er som tidligere angitt i 1-stilling i molekylet.

En alkyleringsprosess omfatter behandling av forbindelsen som kan ha amino-beskyttende grupper ved hver stilling unntatt 1-stillingen, med et aldehyd av formelen

Y' - CHO

hvor Y' er en gruppe som definert for Y ovenfor, hvori enhver tilstedeværende amino- eller hydroxylgruppe kan være beskyttet,

i nærvær av et hydrid-donator-reduserende middel, og om nødven-dig, fjerning av alle beskyttende tilstedeværende grupper i molekylet.

Denne fremgangsmåte.hvorved 1-aminofunksjonen i et 1-N-usubstituert derivat av et 4,6-di-O-(aminoglycosyl)-1,3-diami-noycyclitol-antibakterielt middel selektivt kondenseres med et aldehyd og ledsagende reduseres in situ under dannelse av et 1-N-CH2Y-derivatet av 4,6-di-0-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitol-antibakterielt middel, utføres vanligvis ved romtemperatur i nærvær av luft, selv det kan være fordelaktig å utføre reaksjonen under en inert atmosfære (f .eks. argon eller nitrogen) .

Hydrid-donator-reduserende midler innbefatter dialkyl-aminoboraner (f.eks. dimethylaminobaran, diethylaminoboran og fortrinnsvis morfolinoboran), tetraalkylammoniumcyanoborhydrid (f.eks. tetrabutylammoniumcyanoborhydrid), alkalimetallborhydrider (f.eks. natriumborhydrid) og fortrinnsvis alkalimetallcyano-borhydrid (f.eks. lithiumcyanoborhydrid og natriumcyanoborhydrid).

Denne fremgangsmåte utføres hensiktsmessig i ethvert løsningsmiddel. Selvom vannfri aprotiske løsningsmidler enkelte ganger med fordel kan anvendes ved denne fremgangsmåte (slik som tetrahydrofuran når det anvendes morfolinoboran som hydrid-donator-reduserende middel) utføres denne fremgangsmåte vanligvis i protiske løsningsmidler, f.eks. i en lavere alkanol eller fortrinnsvis i vann eller i en vandig lavere alkanol (f.eks. vandig methanol, vandig ethanol) , selv om andre, vann.-blandbare co.-løs:-ningsmiddelsystemer kan anvendes slik som vandig dimethylformamid, vandig hexamethylfosforamid, vandig tetrahydrofuran og vandig ethylenglycoldimethylether ..

Fremgangsmåtene utføres hensiktsmessig ved en pH i området fra 1 til 11, fortrinnsvis fra 2 til 5 og forløper best i området fra 2,5 til 3,5. Det sure medium som foretrekkes, kan oppnås ved tilsetning av en organisk syre slik som eddiksyre, trlfluoreddiksyre, eller p-toluensulfonsyre eller en uorganisk syre slik som saltsyre, svovelsyre, fosforsyre eller salpetersyre til aminocyclitolderivatet. Derved dannes syreaddisjonssalter og det er vanligvis mest hensiktsmessig å anvende addi-sjonssaltene avledet fra svovelsyre. Optimale resultater oppnås når alle tilstedeværende aminogrupper i molekylet er fullt ut nøytralisert. Det er vanligvis hensiktsmessig å fremstille det nødvendige utgangssyreaddisjonssalt in situ ved tilsetning av den ønskede syre (f .eks. svovelsyre) til en løsning eller suspensjon av derivatet av 4,6-di-O-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyc-. litol i et protisk løsningsmiddel (f.eks. vann) inntil pH på løs-ningen er justert til den ønskede verdi.

For å nedsette til et minimum konkurrerende bireaksjoner når et aminoaldehyd anvendes som et reagens, er det fordelaktig å beskytte aminofunksjonen i aldehydet, f.eks. med en acyl-blokkerende gruppe slik som acetamido, fthalimido eller lignende før utførelse av denne fremgangsmåte, og deretter fjerne den N-beskyttende gruppe i det resulterendé produkt.

Det kan også være fordelaktig å beskytte hydroxylgruppen i hydroxyl-holdige aldehyder ved utførelse av fremgangsmåten, imidlertid er dette generelt sett ikke nødvendig.

Alternativt kan delvis N-beskyttede mellomprodukter anvendes. Således kan man f.eks. anvende et 1-N-usubstituert derivat hvori aminofunksjonen ved 6'-carbonet er N-beskyttet, f.eks. svovelsyreaddisjonssaltet av 6<1->N-t-butoxycarbonyl-5-epi-azido-5-deoxysisomicin eller et 1-N-usubstituert derivat hvori aminofunksjonene ved C-2' og C-3 er N-beskyttet (f.eks. svovelsyreaddisjonssaltet av 2',3-di-N-trifluoracetyl-5-epigentamicin C-^) og det vil bli dannet det tilsvarende delvis N-beskyttede-l-N-alkylderivat (f.écs. l-N-ethyl-6'-N-t-butoxycarbonyl-5-epi-azido-5-deoxysisomicin og l-N-ethyl-21 ,3-di-N-trifl.uoracetyl-5*^epigentamicln C-^) som ved fjerning av de. N-beskyttende grupper,.. Ifølge kjente metoder gir l-N-alkyl-5-epi-forbindelser ifølge oppfinnelsen, f .eks. l-N-e.thyl.-5-epi-amino-5-deoxysisomicin. og

l-N-ethyl-5-epigentamicin C-^ .

I tillegg fremstilles l-N-CI^Y-deriva.tene av 4,6-di-0-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitolene ved reduksjon av et Schiff-basederivat av 1-aminofunksjonen i et delvis N-beskyttet derivat av en 4,6-di-O-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitol etterfulgt av fjerning av de N-beskyttende grupper. Således omvandles f.eks. 2<1>,3-di-N-trifluoracetyl-5-epigentamicin Ved reaksjon med et aldehyd (f.eks. benzaldehyd, fenylacetaldehyd eller acetaldehyd) til det tilsvarende 3",4"-oxazolidin-l-yliden-Schiff-base som ved reduksjon med natriumborhydrid og methanolisk natriummethoxyd gir det tilsvarende I-N-CH2Y-3",4"-oxazolidin, som ved behandling med syre gir en l-N-CH2<V->5-epi-forbindelse ifølge oppfinnelsen (f .eks. l-N-benzyl-5-epigen.tamicin C-^, 1-N-fenethyl-5-epigentamicin C-^ og l-N-ethyl-5-epigentamicin C-^) .

I disse fremgangsmåter er slike N-beskyttende grupper egnet som er kjent innen faget til lett å kunne fjernes etter fremstilling av l-N-CH2Y-5-epi-forbindelsene uten å påvirke 1-N-CH2v-substituentene deri. Eksempler på slike aminobeskyttende grupper er 2,4-dinitrofenyl, acylgrupper slik som acetyl, propionyl og benzoyl, alkoxycarbonylgrupper slik som methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, 2,2,2-triklorethoxycarbonyl, t-butoxycarbonyl og 2-jodethoxycarbonyl og arylalkoxycarbonylgrupper slik som benzyloxycarbonyl og 4-methoxybenzyloxycarbonylgrupper.

En annen alkyleringsprosess ved fremstilling av en forbindelse hvori i formel I, R er rettkjedet alkyl med opptil 5 carbonatomer omfatter behandling av en 1-N-usubstituert forbindelse som inneholder amino-beskyttende grupper ved enhver stilling forskjellig fra 1-stilling, og hvor 1-aminogruppen kan være i en aktivert tilstand, med et alkyleringsmiddel inneholdende den rettkjedede alkylgruppe med opp til 5 carbonatomer og en forlatende gruppe, og fjerning av de beskyttende grupper, og om nødvendig den aktiverende gruppe eller grupper som er tilstede i molekylet-.

Eksempler på alkylerende midler som med. fordel, anvendes, i denne fremgangsmåte er alkyljodid, alkylbromid., dialkylsulfa±., alkylfluorsulfonat og alkyl-p-toluensulfonat hvori alkylgruppen er den krevede rettkjedede alkylgruppe med opp til 5 car.bonato-mex. Andre alkylerende midler hvori alkylgruppen. fortrinnsvis; har 1 eller 2 carbonatomer er trialkylaniliniumhydroxyd,. tri-alkyloxoniumfluorborat, trialkylsulfoniumfluorborat eller tri-alkylsulfoxoniumfluorborat. Alle disse alkylerende midler inneholder en god forlatende gruppe slik som Br , I , OSO^F , di-alkylanilin eller dialkylether.

Aminogruppen i 1-stilling 'i - derivatet av 4,6-di-O-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitol kan være fri. eller aktivert. Et. eksempel på en aktiverende gruppe er trif luormethylsulfonyl. Disse aktiverende grupper kan innføres i molekylet ved .omsetning av et derivat av 4,6-di-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitolen, som utviser amino-beskyttende grupper ved enhver stilling forskjellig fra 1-stilling, med en forbindelse som tilveiebringer den aktiverende gruppe, slik som trifluormethylsulfonylklorid.

1-aminogruppen kan også alkyleres ved hjelp av det tilsvarende di-(2-cyanomethyl)-derivat som er avledet ved behandling med acrylonitril av derivatet av en 4,6-di-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitol som utviser amino-beskyttende grupper ved enhver stilling forskjellig fra 1-stilling. Det således fremstilte 1-N-di-(2-cyanoethyl)-derivat alkyleres deretter med én av de ovenfor angitte alkyleringsmidler etterfulgt av fjerning av cyanoethylgruppene.

Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen utføres ved betingelser lik de som anvendes innen de velkjente direkte alkyle-ringsprosedyrer av aminer.

En annen alkyleringsprosess ved fremstilling av en forbindelse hvori X i formel I er hydroxyl eller amino, omfat ter behandling av forbindelsen som kan ha amino-beskyttende grupper ved enhver stilling forskjellig fra l-stillingen, med et acyleringsmiddel valgt fra en syre av formelen

hvor Y' er en gruppe som definert for Y ovenfor:,, hvor.1. enhver; foreliggende amino- eller hydroxygruppe kan være beskyttet, i nærvær av et carbodiimid, og et reaktivt derivat av den ovenfor angitte syre, fjerning av alle beskyttende grupper tilstede- i det resulterende 1-N-acylderivat med et amid-reduserende hydrid-mlddel.

Reduksjonen av 1-N-acylforbindelsen utføres vanligvis

i et ikke-reaktivt organisk løsningsmiddel i hvilket 1-N-acyl-derivatét og det amid-reduserende middel er løselig og som ikke vil reagere med reagenset slik at det dannes minimalt av konkurrerende bireaksjoner. Ikke-reaktive organiske løsningsmidler som er mest anvendbare i denne reduksjonsprosess er ethere som dioxan, tetrahydrofuran, diethylenglycoldimethylether og lignende.

Foretrukne amid-reduserende hydridreagenser er alumi-niumhydrider og borhydrider innbefattet lithiumaluminiumhydrid, lithiumtrimethoxyaluminiumhydrid, aluminiumhydrid, diboran, di-isoamylboran og 9-BBN (dvs. 9-borbicyclo[3.3.1]nonan).

Generelt anvendes fortrinnsvis diboran som det amid-reduserende middel unntatt når utgangsforbindelsen utviser en dobbeltbinding, hvilke forbindelser hensiktsmessig reduseres ved hjelp av lithiumaluminiumhydrid.

Fremstillingen av 1-N-acyl-mellomproduktene beskrives

i det etterfølgende. 1-N-acyl-mellomproduktene utgjør en del av foreliggende oppfinnelse og kan isoleres som sådant. Følgelig angår oppfinnelsen en fremgangsmåte for fremstilling av derivater av 4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptaminene gentamicin A, gentamicin B, gentamicin B,, gentamicin C1, gentamicin C , gentamicin C2, gentamicin C2a,<ge>ntamicin C2b'gentamicin X2, tobramycin, verdamicin, kanamycin A, kanamycin B, 3<1>,4'-dideoxykanamycin B, Antibiotikum G-52, Antibiotikum 66-40B, Antibiotikum 6'6-4QD, Antibiotikum G-418, Antibiotikum .JI-20A, Antibio-

tikum JI-2QB og sisomicin, hvori 2-deoxystreptamindelen er erstattet med en 1,3-diaminocyclitol av formelen:

fl hvori formelen R-^er en gruppe -C-Y hvor Y er hydrogen, alkyl, alkenyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, hydroxyalkyl, aminoalkyl-, N-alkylaminoalkyl, aminohydroxyalkyl, N-alkylaminohydroxyalkyl, fenyl, benzyl eller tolyl, hvilke alifatiske radikaler har opptil 7 carbonatomer, og hvis de er substituert med amino og hydroxy, bærer substituentene på forskjellige carbonatomer, og hvor X er hydroxy, azido eller amino, forutsatt at når det gjelder derivater av sisomicin er substituenten X azido eller amino, og syreaddisjonssalter derav, hvilken fremgangsmåte omfatter behandling av et derivat av én av de ovenfor angitte 4,6-di-0-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptaminer, hvori 2-deoxystreptamin-delen er erstattet ved en 1,3-diaminocyclitol av formelen: hvori formelen X er som ovenfor definert, og hvilket derivat kan ha amino-beskyttende grupper ved enhver stilling forskjellig fra 1-stilling, med et acyleringsmiddel valgt fra en syre av formelen:

hvori Y<1>er en gruppe som definert for Y ovenfor, hvori enhver tilstedeværende amino- eller hydroxygruppe kan være beskyttet,

i nærvær av et carbodiimid slik som dicyclohexylcarbodiimid, og et reaktivt derivat av den ovenfor angitte syre, og om nødvendig, fjerning av alle beskyttende grupper tilstede i molekylet, hvoretter det siste fremgangsmåtetrinn etterfølges av isolering av derivatet som sådant eller som et syreaddisjonssalt.

Amino-beskyttende grupper som er' anvendbare, ved denne;-fremgangsmåte må være fjernbare under betingelser som ikke vil påvirke 1-N-acylgruppen, idet foretrukne beskyttende grupper er trifluoracetyl, t-butoxycarbonyl og benzyloxycarbonyl.

Utgangsforbindelsene ved denne fremgangsmåte kan ha fri aminogrupper eller beskyttede aminogrupper. Hvis aminogrupper er beskyttet i utgangsforbindelsene som har en 6<*->CH2NH2-gruppe, er det vanligvis 6<1->aminogruppen som er beskyttet. Derivater av gentamicin C-^ kan være beskyttet ved 2'- og 3-stilling. Utgangsforbindelsene kan anvendes som en fri nitrogenbase (med eller uten N-beskyttende grupper) eller som en forbindelse som er delvis nøytralisert ved dannelse av et syreaddisjonssalt.

Som anvendt heri menes med uttrykket "delvis nøytrali-sert ved dannelse av et syreaddisjonssalt" at hvert mol av 4,6-di-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitol .har tilknyttet derved mindre enn det støkiometriske antall mol av syre som er nødven-dig til å danne persyreaddisjonssaltet. Ennvidere menes med dette uttrykk at hvert mol 4,6-di-(aminoglycosyl)-1,3-diaminocyclitol har minst 1 mol syre tilknyttet derved.

For eksempel vil en ekvivalent 5-epi-gentamicin C-^med fem aminogrupper kreve fem ekvivalenter syre for å danne persyre-addis jonssaltet . Denne fremgangsmåte utføres på et syreaddisjonssalt av 5-epigentamicin C-^ som har mindre enn fem ekvivalenter og minst én ekvivalent syre (f.eks. 4,5, 4,0, 3,5, 3,0, 2,5, 2,0, 1,5 eller 1,0 ekvivalenter syre).

I en foretrukket utførelsesform av fremgangsmåten nøy-traliseres utgangsforbindelsen med (n-1)-ekvivalenter syre, idet n er antall aminogrupper i molekylet. Således nøytraliseres (n-1) aminogrupper ved dannelse av et syreaddisjonssalt. Det<y>ll imidlertid forståes at fremgangsmåten også med fordel kan utføres på delvis nøytraliserte utgangsforbindelser, h<y>ori mer eller mindre enn (n-1) ekvivalenter av syre gir oPphav til dannelse av syreaddisjonssalter innen de ovenfor angitte grenser. Uttrykt i pH-områder utføres fremgangsmåten i et område fra 5,0 til 9,0, fortrinnsvis fra 5,0 til 8,0. Det mest foretrukne område i reaksjonsmediet er en pH av fra 6,5 til 7,5, spesielt 6,8 til 7,2.

Uttrykket "syreaddisjonssalt" omfatter slike salter: som kan dannes mellom det basiske antibiotikum og en syre uten hensyn til om syren kan angis som uorganisk eller organisk. Eksempler på syrer som omfattes av uttrykket er: svovelsyre., saltsyre, fosforsyre, salpetersyre, trifluoreddiksyre eller lignende.

Hvis det ønskes å anvende som utgangsmateriale. et syre-addis jonssalt hvori (n-1) aminogrupper er protonert, dannes denne forbindelse fordelaktig in situ ved omsetning av et "per"-syreaddisjonssalt med en ekvivalent av en sterk base, f.eks. triethylamin.

Generelt foretrekkes det å anvende reaktive derivater

?■

av syren HO-C-Y' som acyleringsmidler. Reaktive derivater av syren omfatter estere, azider, imidazolderivater eller anhydrider. I disse tilfeller hvori Y' er usubstituert er. en av de foretrukne reaktive derivater anhydridet av den krevede syre. I andre tilfeller kan det være fordelaktig å anvende N-hydroxy-succinimi-dylesteren av syren.

Ved utførelse av fremgangsmåten hvorved et reaktivt derivat av en syre inneholdende en aminofunksjon anvendes, foretrekkes det å beskytte aminofunksjonen før utførelse av fremgangsmåten og deretter fjerne den N-beskyttende gruppe i den derved dannede forbindelse. Det kan også være fordelaktig å beskytte en tilstedeværende hydroxylgruppe i acyleringsmidlet, imidlertid er dette generelt sett ikke nødvendig.

De etterfølgende eksempler illustrerer oppfinnelsen.

Eksempel 1

Per- N- benzyloxycarbohylaminoglycosider

A. 1,3,21,6', 3"- penta- N- benzyloxycarbonylgentamicin C 1

Op<p>løs 4a g gentamicin. C, 1 2Q0 ml methanol og 20 ml mettet natrlumbicarbonat og avkjøl løsningen til 0 o C. Under omrøring av løsningen, tilsett dråpevis over et tidsrom på. 2 timer 88 ml carbobenzyloxyklorid og hold reaksjonstemperaturen mellom 0 og 5° C. Omrør blandingen over natten mens reaksjonstemperaturen fåe.stige til romtemperatur. Tilsett .500 ml kloroform til reaksjonsblandingen som deretter vil skilles i to lag. Vask den organiske fase med 4 x 100 ml. vann- og tørk over1 10.0 g natriumsulfat. Fordamp den organiske fase under vakuum1 ved en temperatur på lavere enn-40° C. Oppløs det resulterende urene produkt i 100 ml kloroform og tilsett dråpevis- til 250 ml. 75 % hexan/ether. Filtrer det resulterende bunnfall og vask med 100

ml hexan og lufttørk under dannelse av 87 g (87 %) 1,3 , 21 ,6' ,3"-penta-N-benzyloxy-carbonylgentamicin C-^a, smeltepunkt =' 185 - 190° C, [ ol] qS + 71,2 (CH3OH) . Infrarød (IR) (KC1) : 3300,

350Q cm"<1>, PMR (CDCI3).: 5 1,2 (C-Me) , 3,0 (N-Me) , 7,25 (aromatisk H) .

B. 1, 3, 2' , 6', 3"- penta- N- benzyloxycarbonylsisomicin

Oppløs 25 g sisomicin og 13 g natriumcarbonat i 625 ml vann.. Mens løsningen holdes under omrøring, tilsett.100 ml carbobenzyloxyklorid ved 25° C. Omrør blandingen i 16 timer og filtrer deretter fra det faste materiale og vask grundig med vann. Tørk det faste materiale i vakuum og vask deretter med hexan og tørk med luft under dannelse av 62 g 1,3 , 2' , 61 ,3"-penta-N-benzyloxycarbonylsisomicin. Smeltepunkt = 165 - 173° C, [a]^<6>+ 96,2 (CH3OH), infrarød (IR) =v maks (CHC13), 3600, 1720, 1515, 1215, 1050, 695 cm , PMR 6 (CDC13) 1,03 (3H, bred singlet, 4"-C-CH3), 3,02 (3H, bred singlet, 3"-N CH3), 5,02 (10H, bred singlet-CH2C6H5), 3,28, 3,30 g. (25H, bred singlet,

-CH2C6H5).

Eksempel 2

per- N- benzyloxycarbonyl- 3", 4"- N, 0- carbonylaminoglycosider A. 1,3,2'/6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-3",4,,-N,0-carbonyl-£Tentcmiic in. C-,

2—. xa , ■

Tilsett vtll en omrørt blanding av 60 mg natriumhydrid i. 5 ml tørr dimethylformamid en løsning av 2 g av produktet fra eksempel IA i 50 ml tørr dimethylformamid 1 løpet av 1/2 time ved romtemperatur og under nitrogenatmosfære. Omrør reaksjonsblandingen i 2 timer og flitter deretter fra uløselige bestanddeler. Tilsett til filtratet 100 ml kloroform og vask.den organiske fase med 3 x 50 ml vann. Tørk den organiske fase over

25 g natrlumsulfat og fordamp deretter under redusert trykk. Oppløs det resulterende residuum i 15 ml kloroform.og tilsett dråpevis til 75 % hexan:ether (15 ml). Filtrer bunnfallet og vask med 25 ml hexan under dannelse av 1,8:2. g (>95'%.)'av 1,3,2' ,6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-3"r,4"-N/0,-carbonylgentamlcin"

la

Smeltepunkt = 215° C (spaltning) [a]D 2 6 + 63,4 infrarød (IR)-(KCI) = 3300, 3500, 1680, 1545, PMR (CDCI3) 6 1,28 (C-Me), 2,58 (N-Me), 7,25 (aromatisk H).

B. 1,3,2',6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-3",4"-N,0-carbonylsisomicin

Tilsett til en omrørt løsning av 5 g av produktet fra eksempel IB i 50 ml dimethylformamid 250 mg natriumhydrid. Om-rør reaksjonsblandingen under argon i 2 timer ved romtemperatur. Filtrer og tilsett 2 ml iseddik til filtratet. Konsentrer filtratet i vakuum og ekstraher residuet med 200 ml kloroform (rensing ved passasje gjennom basisk aluminiumoxyd). Vask kloroformekstraktene med vann og tørk over natriumsulfat og fordamp under dannelse av 3,5.g 1,3,2',6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-3",4"-N,0-carbonyisisomicin. Smeltepunkt- 210 - 213° C, [a] 26•+ 68,8 (c 0,22) infrarød (IR) v maks (nujol) 3550.,

1760, 1580 cm"<1>PMR 6 (CDCI3) 1,34 (3H, singlet-4"-CH3),

2,68 (3H, singlet-3"-N-CH3), 5,04 (8H, bred singlet-CH2CgH5)..

Eksempel 3

per-N-benzyloxycarbonyl-2"-0-hydrocarboncarbonyl-3",4"-N,0-carbOnylaminoglycosider

A. 1,3,2<1>,6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-2"-O-benzoyl-3",4"-N, 0- carbonylgentamicin C-.

Tilsett dråpevis til en omrørt løsning av 10 g 1,3,2',6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-3",4"-N,0-carbonylgentamicin Cx, a I 50 ml tørr pyridin over et tidsrom på 10 - 15 minutter under en nitrogenatmosfære, 2 ml benzoylklroid. Omrør reaksjonsblandingen 1/2 time og fjern deretter pyridinet via en rotasjonsfordamper idet badet holdes, ved en lavere temperatur enn 30° C. Oppløs den lysegule restolje i. 100 kloroform. Vask denne organiske fase med 3 x 50 ml vann og tørk deretter over 25 g natrlumsulfat. Fordamp kloroformen .under vakuum. Triturér det gule skum med et lite volum ether under dannelse av 11,0 g (> 95 %) 1,3,2',6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-2"-O-benzoy1-3",4"-N,0-carbonylgentamicin C, '.' Smeltepunkt = 120 - 123° C

■yrla

W\£+ 73,8.

B. 1,3,2',6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-2"-O-benzoyl-3" , 4 "- N, 0- carbonylsisomicin

Tilsett . 1,7 ml benzoylklorid til en omrørt blanding av/"3 g av produktet fra eksempel 2B i 20 ml tørr pyridin ved 25° C

under argonatmosfære og over et tidsrom på 10 minutter.. Omrør Ved romtemperatur inntil utgangsmaterialet reagerer (overvåk ved tynnskiktskromatografi). Fordamp blandingen ved romtemperatur under høy vakuum, ekstraher det faste residuum med 100 ml kloroform (på forhånd ført gjennom basisk aluminiumoxyd). Vask kloroformekstraktene med 5 % vandig natriumbicarbonat, vann og tørr deretter over natriumsulfat. Fordamp løsningsmidlet under dannelse av 2,8 g 1, 3 ' , 2 ' ,6 1 -tetra-N-foenzyloxycarbonyl-2"-0-b.enzoyl-3",4"-N,0-carbonylsisomicin.

Sm.p. 157 - 160° C, U]^<6>+86 (c. 0,2) infrarød (IR) v maks (nujol) 3325, 1780, 1680, 1560 cm"<1>PMR 6 (CDCI3) 1,35 (4"-C-CH3), 2,74 (3"-N-CH3), 5 ,03 -(CHj-CgHg) .

C. 1,3,2',6<1->tetra-N-benzyloxycarbonyl-2"-O-acetyl-3",4"-N,0-carbonylgentamicin (1) 1, 3, 2', 6', 3"- penta- N- benzyloxycarbonyl- 2"- 0- acetyl-gentamicin C,

2la

Tilsett dråpevis 1,4 ml eddiksyreanhydrid til en om-rørt løsning av 10 g av 1,3,2',6<1>,3"-penta-N-benzyloxycarbonyl-gentamicin C±ai 50 ml tørr pyridin over et tidsrom på 10 - 15 minutter under en nitrogenatmosfære. Omrør reaksjonsblandingen i 1/2 time og fjern deretter pyridinet via en rotasjonsfordamper, hold badtemperaturen lavere enn 30° COppløs det resulterende residuum i. 10.0 ml syrefritt kloroform. Vask den organiske løs-ning med 3 x 50 ml vann, tørk. deretter over natriumsulf at og fordamp i vakuum. Ren'5 ^.et resulterende residuum ved triture- ' ring med små, volumer av ethex under dannelse av 1,3,2' ,6' ,3"-penta-N-benzyloxYcarbonYl-2"-0-ace'tylgentamicin C.^...

(2J„ 1, 3 , 2' , 6~' - tétra- N- benzvToxvcarborivl- 2"- O- acetyT- 3" , 4 " -

N, 0- c arboriylg entamic in C ^^

Behandl på lignende måte som beskrevet i eksempel 2A 1,3,2', 6',3"-penta-N-benzyloxycarbonyl-2"-O-acetylgentamicin C^a I tørr dimethylformamid med natriumhydrid. Isoler og rens det resulterende produkt på lignende måte som er beskrevet i eksempel 2A under dannelse av 1,3,2',6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-2"-0-. acetyl-3",4"-N,0-carbonylgentamicin Cx , a.

D. 1, 3, 2', 6'- tetra- N- benzyloxycarbonyl- 2"- 0- acetyl- 3", 4"- N, 0-carbonylsisomicin (1) Behandl på lignende måte som beskrevet i eksempel 3C (11 1,3 , 2' ,6',3"-penta-N-benzyloxycarbonylsisomicin med eddiksyreanhydrid i pyridin. Isoler og rens det resulterende produkt på lignende måte som beskrevet i eksempel 3C(1) under dannelse av 1,3,2',6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-2"-O-acetylsisomicin. (2) Behandl på lignende måte som beskrevet i eksempel 2 1,3,2',6'-3"-penta-N-benzyloxycarbonyl-2"-O-acetylsisomicin med natriumhydrid i dimethylformamid. Isoler og rens produktet på lignende måte som beskrevet i eksempel 2B under dannelse av 1,3,2<»>,6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-2"-0-acetyl-3",4",N,0-carbonylsisomicin .

Eksempel 4

per- N- benzyloxycarbonyl- 2"- O- hydrocarboncarbonyl- 5- 0- hydro-carbonsulf bnyl- 3", 4"- N, 0- carbonylaminoglycosider

A 1, 3, 2' r 6'- tetra- N- benzyloxycarbonyl- 5- O- methansulfonyl- 2"-O- benzoyl- 3", 4"- N, 0- carbonylgentamicin C n

Avkjøl en løsning av 1 g 1,3,2',6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-2 "-O-benzoyl-3 ", 4 "-N ,0-carbonylgentamicin C, i 5 ml triethylamin og 15 ml tetrahydrofuran til under 0° C. Omrør løsningen og tilsett til denne over et tidsrom på .15 minutter en løsning^av 1 ml methansulfonylklorid i 5 ml tetrahydrofuran. Omrør reaks.jonsblandingen i 2 timer ved 0° C. Held reaksjons-blandlngen over I 25 ml vann og 25 ml kloroform. Vask den organiske fase med 2 x 15 ml vann og tørk deretter den organiske fase over natriumsulf at. Fordamp kloroformen og. triturer det resulterende gule skum med små mengder av ether under dannelse av 1,2 g ( >95 %) av 1,3,2',6<1->tetra-N-benzyloxy-carbonyl-5-0-methansulfonyl-2"-O-benzoyl-3",4'WVo-carbonylgentamicin Cla»Smeltepunkt = 130° C [ a]* S + 53,4 (CHCI3) PMR (CHCI3) 6 1,35 (C-Me), 2,74 (N-Me), 2,99 (OS02CH3), 7,28 (4 x Cbz og benzoyl).

Behandl på lignende måte 1,3,2',6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-2 "-O-acetyl-3" ,4 "-N,0-carbonylgentamicin. Ci, . Sl i triethylamin og tetrahydrofuran med methansulfonylklorid under dannelse^av 1,3,2',6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-O-methansulfonyl-2"-0-acetyl-3",4"-N,0-carbonylgentamicin C J, L cl.

B. 1, 3, 2', 6'- tetra- N- benzyloxycarbonyl- 5- O- methansuIfonyl-2"- O- benzoyl- 3", 4"- N, 0- carbonylsisomicin

Oppløs 2 g av produktet fra eksempel 3B i 15 ml tørr pyridin. Avkjøl løsningen til 10° C og tilsett 4 ml methansulfonylklorid over et tidsrom på 10 minutter, la reaksjonsblandingen stå over natten og konsentrer deretter reaksjonsblandingen under vakuum ved 25° C. Ekstraher residuet med 150 ml syrefritt kloroform. Vask kloroformekstraktet med vann og tørk over natriumsulfat. Fordamp kloroformen under dannelse av 2,4 g 1,3,2', 6 '-tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-O-methansulfonyl-2"-0-

o 26 benzoyl-3" ^"-N^-carbonylsisomicin, sm.p. = 84 - 88 C, [a]D ■+ 21,3 (c 0,29) infrarød (IR) v maks (nujol) 3325, 1750, 1540 cm"<1>; PMR 6 (CDCI3) .1,32 (4"-C-CH3), 2,68 (3"-N-CH3), 3,04

5,00 (-CH2C6H5).

Eksempel 5

5- 0- methansulfonyl- 2"- O- benzoy1- O- yliden- N- benzyloxycarbonyl-amlnoqlycosider

A. (!) Tilsett 1 ml benzaldehyd og 300 mg tørr para-toluensulfonsyre til en løsning av .5 g 1,3,2<1>,6',3"-penta-N-benzyloxy-carbonyltobramycin 1 25 ml vannfri dimethylformamid. Oppvarm i en forseglet kolbe ved 110° C i 4 timer, avkjøl løsningen og .

■ (r) behandl deretter den avkjølte løsning med 6 ml Amberlite w IR-401S-harpi.ks i hydroxydformen. Filtrer fra harpiksen og fordamp filtratet i vakuum til et residuum omfattende 1,3,2',6',3"-penta-N-benzyloxycarbonyl-4",6"-0-benzylidentobramycin.

Behandl på lignende måte som' beskrevet i eksempel 3A 1,3,2', 6',3"-penta-N-benzyloxycarbonyl-4",6"-O-benzylidentobra-mycin med to ekvivalenter benzoylklorid i pyridin og isoler og rens det resulterende produkt på lignende måte som beskrevet i eksempel 3A under dannelse av 1,3,2<1>,6<1>,3"-penta-N-benzyloxycarbonyl-4',2"-di-0-benzoyl-4",6"-0-benzylidentbbramycin.

2. Tilsett 5 ml 1,1-dimethoxycyclohexan og 300 mg tørr para-toluensulfonsyre til en løsning av 5 g 1,3-di-N-benzyloxycarbonyl-6 ' ,4 ' ,3" ,4"-di-N,0-carbonylgentamicin B i 2.5 ml. vannfri dimethylformamid. Varm i en forseglet kolbe ved 110° C i 4 timer. Avkjøl løsningen og behandl deretter den avkjølte løsning med 6

CR) •

ml Amberlite IR-401S-harpiks i hydroxydformen. Filtrer fra harpiksen og fordamp filtratet i vakuum til et residuum omfat-- tende 1,3-di-N-benzyloxycarbonyl-2',3'-O-cyclohexyliden-6',4';

3",4"-di-N,0-carbonylgentamicin B.

Behandl på lignende måte som beskrevet i eksempel 3A l,3-di-N-benzyloxycarbonyl,2',3'-O-cyclohexyliden-6' ,4' ,3",4"-di-N,0-carbonylgentamicin B med en ekvivalent benzoylklorid i pyridin og isoler og rens det resulterende produkt på lignende måte som beskrevet i eksempel 3A under dannelse av 1,3-di-N-benzyloxycarbonyl-2 1 ,3 ' -O-cyclohexyliden-6 1 ,4 ' , 3 "., 4 "-di-N ,0-carbonyl-2"-0-benzoyl-gentamicin B.

B. Behandl på lignende måte som beskrevet i eksempel 4A hver av forbindelsene fremstilt i eksempel 5A med methansulfonylklorid i triethylamin og tetrahydrofuran. Isoler og rens hver av de resulterende produkter på lignende måte som beskrevet i eksempel 4A under dannelse av 1,3-di-N-benzyloxycarbonyl-5-0-methansulfonyl-2',3'-O-cyclohexyliden-6',4<1>,3",4"-di-N,0-carbonyl-2"-0-benzoylgentamicin B og 1,3,2',6',3"-penta-N-benzyloxycarbonyl-5-O-methansulfonyl-4',2"-di-0-benzoyl-4",6"-O-benzylidentobramycin.

Eksempel 6

5- epl~ a2ldo- 5- déoxv,- 2''- 0- ben2oyl- per- N- benzyloxvcarbonvl-aminog lyco sider

A. 13 , 2' ', 6 ' - tetra- W- benzyioxycarbonyl-- 5- epl- a2ido- 5- deoxy-2"- O- benzoyl- 3", 4"- N, 0- carbohylgentamicin

Oppvarm 12 g 1,3, 2*,6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-0-methansulfonyl-2"-O-benzoyl-3",4"-N,0-carbonylgentamicin CJ, . cl'. og: 2 g natriumazid i 30 ml dimethylformamid sammen ved..120° C i 24 timer. Avkjøl reaksjonsblandingen og fjern løsningsmidlet i' vakuum ved 60° C. Oppløs residuet i 50 ml vann og 100 kl kloroform. Vask den organiske fase med 2 x 50 ml. vann og tørk. over' 25 g av natriumsulfatet. Fordamp løsningsmidlet under dannelse av et hvitt fast materiale. Oppløs det faste materiale, i et lite volum kloroform og kromatografer over 200 g silicagel. Eluer kolonnen med 2CHCl3,/3% MeOH under dannelse av 6 g av det resulterende 1,3,2',6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-epi-azido-5-deoxy-2"-O-benzoyl-3",4"-N,0-carbonylgentamicin C, . Smeltepunkt =

O cz-1-3.

195 - 200° C [a]^b + 88,9 (CHCI3).

B . 1, 3, 2' , 6'- tetra- N- benzyloxycarbonyl- 5- epi- azido- 5- deoxy-2"- O- benzoy1- 3", 4"- N, 0- carbonylsisomicin 1) Oppløs 2 g av produktet fra eksempel 4B i 15 ml tørr dimethylformamid. Omrør blandingen og tilsett 1,5 g natriumazid. Hold reaksjonsblandingen under nitrogen ved 120° C over natten. Konsentrer løsningen under høyvakuum. Ekstraher residuet med 200 ml syrefritt kloroform.. Vask kloroformekstraktet med vann og tørk over natriumsulfat. Fordamp løsningsmidlet under dannelse av 1,3,2',6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-epi-azido-5-deoxy-2"-O-benzoyl-3",4"-N,0-carbonylsisomicin. Infrarød (nujol) v maks 2100 cm"<1.>2) Underkast på lignende måte en ekvivalent mengde av et tilsvarende produkt den foregående prosess under dannelse av 1,3,2',6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-epi-azido-5-deoxy-2"-0-benzoyl-3",4"-N,0-carbonylverdamicin.

C. Behandl på lignende måte som beskrevet i eksempel 6A hver av 5-0-me!hansulfonylaminoglycosidene fremstilt i eksempel 5 med natriumazid I dimethylformamid. Isoler og rens hver av de re sulterende produkter på lignende måte som beskrevet i eksempel 6A under dannelse av henholdsvis l,3-di-N-benzyloxycarbonyl-5-epi-azido-5-deoxy-2' , 3 ' -O-cyclohexyliden-6 1 , 4 ', 3 " , 4 " -di-N ,0-rcarbonyl-2"-0-benzoylgentamicin B og 1,3,2',6',3"<->penta-N-béhzyloxycarbo-nyl-5-epi-azIdo-5-deoxy-4' , 2 "-di-O-benzoyl-4",6"-O-benzyliden-tobramycin.

Eksempel 7

5- epi- amino- 5- deoxyaminoqlycosider-

A. 5- epi- amino- 5- deoxygentamicin C^a

Hydrogener over 1 g 30 % palladium/carbon ved 4 atmosfærer og ved romtemperatur en løsning av 6 g 1,3,2',6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-epi-azldo-5-deoxy-2"-O-benzoyl-3",4"-N,0-carbonylgentamicin C, i 50 ml iseddik. Fjern løsningsmidlet og katalysatoren (under dannelse av et gummiaktig residuum) og oppvarm deretter det resulterende residuum i 25 ml 2N natriumhydroxyd ved 100° C i 4 timer. Avkjøl blandingen og nøytraliser med eddiksyre. Filtrer fra det resulterende bunnfall og konsentrer filtratet til 10 ml. Før det konsentrerte filtrat gjennom en kolonne av IRC-50 (H+ form) harpiks. Vask kolonnen med 200 ml vann og eluer deretter kolonnen med 100 ml IN ammoniumhydroxyd. Konsentrer eluatet til tørrhet og lyofiliser residuet under dannelse av 1 g 5-epi-amino-5-deoxygentamicin C^a«.Sm.p. 112 - 116° C [a]^6 + 167,0 (H20), PMR (100 MHz - D20).

B. Gå frem på lignende måte som beskrevet i eksempel 7a og isoler de -resulterende produkter under dannelse av henholdsvis 5-epi-amino-5-deoxygentamicin C^, sm.p. 95 - 98° C, [ct]^ + 150,7° (c 0,6:4, H20) ,

5-epi-£unino—5-deoxygentanilciji C2,

5-epi-amijio-5-deoxygeatamicin C2a'

5-epi-amIno-5-deoxygentamlcin C2t)/

l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxygentamicin C-^a/ l-N-eth.yl-5-epI-amino~5-deoxygentamicin C±i l-N-ethyl-5-epi-ajnino-5-deoxygentamicin C2, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxygentamicin C2aog

l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxygentamicin G2b-*

C. 5- epi- amino- 5- deoxysisomicin

1) Oppløs produktet fra eksempel 6B—1 i. en blanding: av 10. ml tetrahydrofuran og 50 ml flytende ammoniakk. Tilsett langsomt 2 g natrium til den omrørte blanding og fortsett omrøringen ved^40° C i 2 timer. Tillat ammoniakken å fordampe ved romtemperatur over natten. Oppløs det resulterende residuum i 25 ml vann og oppvarm til 100° C over natten. Avkjøl løsningen og adsorber på Amberlite IRC-50 (H )-harpiks og eluer produktet med 500 ml lN ammoniumhydroxyd. Konsentrer ammoniumhydroxydeluatet under høyvakuum under dannelse av et oljeaktig produkt. Kromatografer dette materiale på 50 g silicagel under anvendelse av kloroform/ methanol/15 % ammoniumhydroxyd (2:1:1) under dannelse av 102 mg 5-epi-amino-5-deoxysisomicin, sm.p. = 110 - 116 C, [a]D 2 6 + 185,2 (c 0,32). 2) Gå frem på lignende måte som beskrevet i den foregående prosess og erhold henholdsvis 5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum G-52, 5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum 66-40D, 5-epi-amino-5-deoxyverdamicin, 5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum 66-4 OB, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum G-52, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum 66-40D, 1-N-ethy1-5-epi-amino-5-deoxysisomicin, 1-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxyverdamicin l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum 66-4OB, 1-N-propyl-5-epi-amino-5-deoxysisomicin, 1-N- (n-butyll--5-epi-amino-5-deoxysi.somicih, l-N-^( fi-aminobutyl) -5-epi-amino-5-deoxysisomicin, 1-N-(y-aminopropyl)-5-epi-amino-5-deoxysisomicin, 1-N-(3-meth^ylpropYl).-5-epi-aniino^5-deoxYsisojmicin, l-N-(n-pentyl)-S-epi-amino-S-deoxysisomicin, l-N-( Y-methylbutYli.-5-epi-ami;no-5-deoxysisomicin, 1-N-(p-methylbutyl)-5-epi-amino-5-deoxysisomicin, 1-N- (3,(3-dimethylpropyl) -5-epi-amino-5-deoxysisomicin, 1-N-(3-ethylbutyl).-5-epi-amino-5-deoxy s isomicin / 1-N-(n-octyl)-5-epi-amino-5-deoxysisomicin, 1-N-(3-propenyl)-5-epi-amino-5-deoxysisomicin, 1-N- (3-ethyl-p-hexenyl) -5-epi-amino-5-deoxysisomicin./. l-N-benzyl-5-epi-amino-5-deoxysisomicin/ 1-N-fenethyl-5-epi-amino-5-deoxysisomicin, 1-N-cyclohexyImethyl-5-epi-amino-5-deoxysisomicin, 1-N-(S-hydroxybutyl)-5-epi-amino-5-deoxysisomicin, 1-N-(w-hydroxyoctyl)-5-epi-amino-5-deoxysisomicin og 1-N-(3-aminoethyl) -5-epi-amino^-5-deoxysisomicin. •D. Hydrogener pa lignende måte som beskrevet i eksempel 7A hver av 5-epi-azido-5-deoxy-per-N-beskyttet-per-0-beskyttet-aminoglycosidene fremstilt i eksempel 6C og lignende forbindelser . Behandl ennvidere forbindelsene med 2N natriumhydroxyd som beskrevet, og behandl ytterligere disse forbindelser med 80 % eddiksyre/vann i 1 time på dampbad for å fjerne eventuelle åce-tal- eller ketal-beskyttende grupper.

Isoler og rens hver av de resulterende produkter på samme måte som beskrevet i eksempel 7A under dannelse av henholdsvis 5-epi-amino-5,3<1>,4'-trideoxykanamycin B, 5-epi-amino~5-deoxygehtamicin B, 5-epi-amino-5-deoxygentamicin B-^, 5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum JI-20A, 5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum JI-20B, 5-epi-amino-5-deoxykanamycin B, 5-epi-amino-5-deoxy-tobramycin, 5-epi-amino-5-deoxygentamicin X2, 5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum G-418, 5-epi-amino-5-deoxykanamycin A, 5-epi-amino-5-deoxygentamicin A, l-N-ethyl-5-epi-amino-5,3',4<1->trideoxykanamycin B, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxygentamicin B, l-N-ethyl-5-epi.-amino-5-deoxygentamicin B^, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxy-A'ntibiotikum JI-20A, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxy-Antiilotikum Ji-20B, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxykanamycin B, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxytobramycin/l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxygentamicin X2, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum G-418, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxykanamycin A,

l-N-ethyl-S-epi-amino—S-deoxygentamicin A.

Eksempel 8

5- ep1- amid o -5 -deoxyaminoq 1yco sider

A. 5 - ep i- am I do - 5 - d e oxy gen' t ami c in C^

Kok under tilbakeløp en løsning av 1 g 1,3, 2',6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-epi-azido-5-deoxy-2"-O-benzoy1-3" ,4"-N,0-carbonylgentamicin Clai. 25 ml 1:1. dioxan/vann. og 25 ml IQ %-ig natriumhydroxyd i 24 timer. Fordamp løsningen til tørr-het, oppløs residuet i 10 ml vann og nøytraliser med eddiksyre. Fordamp løsningen, ta residuet opp i. 5 ml vann og før det gjen-hom 20 g av en Amberlite IRC-50 (H+ form)-harpikskolonne, vask kolonnen med 200 ml vann og deretter med 100 ml IN ammoniumhydroxyd. Oppsaml ammoniumhydroxydeluatet og fordamp til et residuum. Frysetørk residuet (under dannelse av et lyst brunt fast materiale) og kromatografer deretter, på 25 g silicagelkolonne, eluer med kloroform:methanol:7% ammoniumhydroxyd (2:1:1). under dannelse av 186,4 mg 5-epi-azido-5-deoxy-gentamicin C, . Sm.p. = 115 - 121° C [a]^<6>+133,9.

i a d

B. Gå frem på lignende måte som beskrevet i eksempel 8A og isoler de resulterende produkter under dannelse av henholdsvis 5-epi-azido-5-deoxygentamicin C-^, sm.p. 95 - 98 o C, [a]D 2 6 + 129,5° (c 0,45, H20), 5-epi-azido-5-deoxygentamicin C2/

5-epi-azido-5-deoxygentamicin C2a,

5-epi-azido-5-deoxygentamicin C^,

5-epi-azido-5-deoxy-Antibiotikum G-52,

5-epi-azido-5-deoxy-Antibiotikum 66-40D,

l-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxygentamicin Ci , a, l-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxygentamicin C-^, l-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxygentamicin C2, l^N-^ethyl-5-epi-azido-5-deoxygentamicin C2a, l-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxygentamicin ^ 2h' l-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxy-Antibiotikum G-52 og

l-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxy-Antibiotikum 66-40D.

C. 5- ep i— az ido- 5- d eoxys i s omi ein

Gå frem på lignende måte som beskrevet i eksempel 8A

og isoler hver av de resulterende produkter under dannelse av 5-epi-azido-S-deoxysisomlcin, sm.p. = 165 - 170° C (spaltning) . Massespektrum (Ml+ m/e :472, monosaccharider m/é 160, 127, 2-deoxystreptaminer m/e 216", 198, 188, 170,disaccharider m/e 342, 314, 296" m/e 347, 375, 329 CMR (D20) : 5

PPM: 149,2, 102,4, 98,0, 97,2, 84,8, 79,7, 73,1, 69,9, 68,6, 6~3,9 (2c), 48,9, 47,7, 47,1, 42,9, 37,7, 36,2, 25,8, 22,4,

5-epi-azido-5-deoxyverdamicin,

l-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxysisomicin, l-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxyverdamicin, 1-N-propyl-5-epi-azido-5-deoxysisomicin, 1-N-(n-butyl)-5-epi-azido-5-deoxysisomicin, 1-N-(6-aminobutyl)-5-epi-azido-5-deoxysisomicin, 1-N-(y-aminopropyl)-5-epi-azido-5-deoxysisomicin, 1-N-(3-methylpropyl)-5-epi-azido-5-deoxysisomicin, 1-N-(n-pentyl)-5-epi-azido-5-deoxysisomicin, 1-N-(y-methylbutyl)-5-epi-azido-5-deoxysisomicin, 1-N-(3-methylbutyl)-5-epi-azido-5-deoxysisomicin, l-N-(3,0-dimethylprppyl)-5-epi-azido-5-deoxysisomicin, 1-N-(3-ethylbutyl)-5-epi-azido-5-deoxysisomicin, 1-N-(n-octyl)-5-epi-azido-5-deoxysisomicin, 1-N-(3-propenyl)-5-azido-5-deoxysisomicin, 1-N-(3-ethyl-3-hexenyl)-5-epi-azido-5-deoxysisomicin, 1-N-benzy1-5-epi-azido-5-deoxysisomicin, 1-N-fenethyl-5-epi-azido-5-deoxysisomicin, 1-N-cyclohexylmethyl-5-epi-azido-5-deoxysisomicin, 1-N-(6-hydroxubutyl)-5-epi-azido-5-deoxysisomicin, 1-N- (oj-hydroxyoctyl) -5-epi-azido-5-deoxysisomicin og 1-N-(3-aminoethyl)-5-epi-azido-5-deoxysisomicin. D. Behandl på lignende måte som beskrevet i eksempel 8A hver av de per-N-beskyttet-per-O-beskyttet-aminoglycosider fremstilt i eksempel 6C og lignende forbindelser med 10 % natriumhydroxyd i 24 timer. Behandl enhvidere hver av de resulterende mellomprodukter fra natriumhydroxydbehandlingen med 80 % eddiksyre/vann i. 1 time på dampbad -for å fjerne eventuelle acetaler eller ketalbeskyttende grupper.

Isoler og rens hver av de resulterende produkter under

dannelse av henholdsvis

5-epi-azido-5,3<1>,4'-trideoxykanamycin B,

5-epi-azido-5-deoxygentamicin B,

5-epi-azido-5-deoxygentamlcin B-^,

5-epi-azido-5-deoxy-Antibiotikum JI-20A,

5-epI-azido-5-deoxy-Antibiotikum JI-20B,

5-epi-azido-5-deoxykanamycin B,

5-epi-amido-5-deoxytobramycin,

5-epi-azido-5-deoxy-Antibiotlkum 66-4OB,

5-epi-azido-5-deoxygentamicin X->,

5-epi-azido-5-deoxy-Antibiotikum G-418,

5-epi-azido-5-deoxykanamycin A,

5-epi-azido-5-deoxygentamicin A,

l-N-ethyl-5-epi-azido-5,3<1>,4<1->trideoxykanamycin B, l-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxygentamicin B, l-N-ethyl-5-epi-azido-5'-deoxygentamicin B-^, l-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxy-Antibiotikum JI-20A, l-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxy-Antibiotikum JI-20B, l-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxykanamycin B, l-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxytobramycin, l-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxy-Antibiotikum 66-40B, l-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxygentamicin X2/ l-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxy-Antibiotikum G-418, l-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxykanamycin A og

l-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxygentamicin A.

Eksempel 9

5- epigentamicin

A. Tilsett 2 g 1,3,2',6<1->tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-0-methansulf onyl-2 "-O-benzoyl-3" , 4 "-N ,0-carbonylgentamicin C-^ til 15 ml dimethylformamid, oppvarm til tilbakeløpstemperatur i 18 timer og fordamp deretter løsningen til et residuum-omfattende et N-beskyttet-O-beskyttet-mellomprodukt.

B. Oppløs dette residuum i eddiksyre, tilsett 500 mg 30 %-rig palladium-på-benkull og hydrogener ved romtemperatur under anvendelse av 4 atmosfærers begynnelseshydrogentrykk. Fjern katalysatoren ved filtrering og fordamp filtratet til et residuum,. Oppløs residuet 1 25 ml 5 % natriumhydroxyd og oppvarm ved 100° C i, 4 timer. Avkjøl løsningen og før den gjennom en IRC-5Q (H+ f orm).^kolonne, vask kolonneharpiksen godt med vann, eluer produktet deretter med 200 ml IN ammoniumhydroxyd. Konsentrer ammoniumhydroxydeluatet til et residuum omfattende 5-epi-gentamicin C-^. Rens produktet ved kromatografering på en silicagelkolonne og eluer med den. nedre fase av et kloroform:methanol:

15 % ammoniumhydroxyd (2:1:1) løsningsmiddelsystem. Kombiner

de like. eluater som bestemt ved tynnskiktskromatografi og' lyofi.-liser til et residuum under dannelse av 5-epigentamicin C, søm et hvitt fast materiale, sm.p.' 115 - 120° C, [a] + 136,5°

(c, 0,32 vann), massespektrum: (M) m/e 477, (M + 1 m/e 478.

- Monosaccharider m/e 157 - purpurosamin A. ion

m/e 160, 14 2 - garosamin-ion

m/e 191, 173, 163, 145-5-epi-2-deoxystreptamin-ion

Disaccharider 350, 322, 304,

347, 319, 301

NMR: 6 (100 MH . D00)

Z2.

5,08, d, J=3, 8Hz

H'-l' og H-l"

4,99, d, J=3 Hz

4,39, bred singlet H-5

3,93 d, J=12, 5Hz H-5".eq

3,77, dd, J=ll, J=~3,6Hz H-2"

3,30, d, J=12.5Hz H-5" ax

2,66 d, J=10,5 Hz H-3"

2,53, singlet N-CH3(3")

2,33, singlet N-CH3(6<1>)

2,05, m H-2 e.q.

1,23, s C-CH3(4")

1,04, d, J=7Hz CH-CH3(6')

C. Alternativt fjernes de N-beskyttende og O-beskyttende grupper i mellomproduktene fremstilt i eksempel 9 ved oppvarming av mellomproduktet med 1 til 2 N natriumhydroxyd ved 100° C inntil tynnskiktskromagrafisk analyse av prøver av reaksjonsblandingen indikerer at de beskyttende grupper er fjernet (vanligvis 24 til 48 timer). Isoler og rens det resulterende produkt på lignende måte som beskrevet i eksempel 9B. D. Alternativt kan de N-beskyttende og O-beskyttende grupper fjernes fra mellomproduktet fremstilt som beskrevet i eksempel 9'A på følgende måte. Oppløs produktet fra eksempel 9A

i en blanding av 10 ml tetrahydrofuran og 50 ml flytende ammoniakk. Tilsett langsomt 2 g natrium til den omrørte blanding og fortsett omrøringen i 2 timer. Tillat ammoniakken å fordampe ved oppvarming til romtemperatur over natten. Oppløs det resulterende residuum i 10 ml 5 % natriumhydroxyd og, oppvarm, ved.

100° C i 4 timer. Avkjøl og før løsningen gjennom IRC-50 (H<+>)-harpiks. Vask harpiksen godt med vann og eluer produktet med 100 ml IN ammoniumhydroxyd. Konsentrer ammoniumhydroxydeluatet. til et residuum og rens dette residuum på lignende måte som beskrevet i eksempel 9B under dannelse av 5-epigentamicin C-^.

Eksempel 10

Andre 5- epi- 4, 6- di- O- aminoglycosyl)- 2- deoxystreptaminer

A.l Behandl på lignende måte som beskrevet i eksempel 9A og 9B hver av de følgende aminoglycosidderivater med dimethylformamid ved tilbakeløpstemperatur og hydrogener deretter hver av de resulterende O-beskyttede-N-beskyttede mellomprodukter som ••.derved dannes i eddiksyre i nærvær av palladium-på-benkull, og behandl tilslutt hver av de resulterende 2"-0-benzoyl-3" ^"--N/O-carbonyl-S-epiaminoglycosider med natriumhydroxyd ved 100° C: 1) 1,3,2',6<1->tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-O-methansulfonyl-2"-0-benzoyl-3",4"-N,0-carbonylgentamicin CX , a., 2) 1,3,2',6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-O-methansulfonyl-2"-0-benzoyl-3",4"-N,0-carbonylgentamicin C2, 3) 1, 3 , 2 1 , 6 ' -tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-0-me'thansulfonyl-2"-0-benzoyl-3",4"-N,0-carbonylgentamicin C2a,

4L 1,3,2',6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-O-methansulfonyl-2"-O-benzoyl-3 " , 4 "-N,0-carbonylgentam'icin C^.

Isoler og rens hver av de resulterende produkter på lignende måte som beskrevet i eksempel 9B under dannelse av henholdsvis 5-epigentamicin C-^a, 5-epigentamicin C2, 5-epigentamicin C2a og 5-epigentamicin C^. 2. Etter behandling av hver av utgangsmaterialene i eksempel 10A med dimethylformamid ved tilbakeløpstemperatur kan alternativt de beskyttende grupper i hvert av de derved dannede mellomprodukter fjernes ved behandling med natriumhydroxyd ifølge prosedyren ifølge eksempel 9C eller ved reduksjon med natrium i ammoniakk etterfulgt av behandling med natriumhydroxyd på lignende måte som beskrevet i eksempel 9D.

B. Behandl på lignende måte som beskrevet i eksempel 9A og 9D hver av de følgende aminoglycosidderivater med dimethylformamid ved tilbakeløpstemperatur, behandl deretter det resulterende-N-beskyttet-O-beskyttede mellomprodukt med natrium i flytende ammoniakk etterfølgt ved behandling med natriumhydroxyd ved 100°C: 1\ 1,3,2',6<1->tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-O-methansulfonyl-2"-0-benzoyl-3",4"-N,0-carbonylsisomicin, 2) .1,3,2 ' , 6 1 -tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-O-methansulfonyl-2"-O-benzoyl-3",4"-N,0-carbonylverdamicin, 3) 1,3,2'■,61-tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-O-methansulfonyl-2"-0-benzoyl-3",4"-N,0-carbonyl-Antibiotikum G-52, 4) 1, 3 , 2 ' , 6 '-tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-0-methansulfonyl-2"-0-benzoyl-3",4"-N,0-carbonyl-Antibiotikum 66-40D, 5) . 1/3,2 1 ,6 1 /3"-penta-N-benzyloxycarbonyl-5-0-methansulfonyl-2",4"-di-0-benzoyl-Antibiotikum 66-40B.

Isoler og rens hver av de resulterende produkter.på lignende måte som beskrevet i .eksempel 9D under dannelse av henholdsvis 5-episisomicin Sm.p. 135 - 138° C (spaltning)

5-epIverdamicin Sm.p. 110 - 113 C, [a]Q + 159,7

(H20)

5-epi-Antibiotikum G-52

5-epi-Antibiotikum 66.-40D,

5-epi-Antibiotikum 66-40B.

2. Etter behandling med dimethylformamid ved tilbakeløps-tmperatur kan alternativt de beskyttende grupper i hver av de derved dannede mellomprodukter fjernes ved behandling med natriumhydroxyd som beskrevet i keksempel 9C under dannelse av det tilsvarende 5-epiaminoglycosid.

Cl' Behandl på lignende måte som beskrevet i eksempel 9A og 9B hver av de etterfølgende aminoglycosidderivater med dimethylformamid yed tilbakeløpstemperatur, hydrogener deretter hver av de resulterende .mellomprodukter i eddiksyre over palladium-på-benkull etterfulgt av behandling av det resulterende produkt med natriumhydroxyd: 1) . 1,3,2* ,3"-tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-G—methansulf.onyl.-' 3 1 , 2" , 4 "-tri-0-benzoyl-4 1 ,6 1 -O-benzyliden-gen.tamlein1 A, 2) l,3-di-N-benzyloxycarbonyl-5-0-methansulfonyl-2<*>,3'-0-cyclohexyllden-6 ' ,4' ,3" ,4."-di-N,0-carbonyl-2"-0-benzoylgentamicin B', 3) 1,3-di-N-benzyloxycarbonyl-5-0-methansulfonyl-2<1>,3'-0-cyclohexyliden-6',4',3",4"-di-N,0-carbonyl-2"-0-benzoylgentamicin B-^, 4) 1, 3 , 2 1 -tri-N-benzyloxycarbonyl-S-^O-methansulf onyl-4',6'-0-cyclohexyliden-2"-0-benzoyl-3",4"-N,0-carbonylgentamicin X2/5) 1,3 ,21-tri-N-benzyloxycarbonyl-5-0-methansulfonyl-4<1>,6'-O-cyclohexyliden-2"-O-benzoyl-3",4"-N,0-carbonyl-Antibiotikum G-418, 6) . 1, 3 , 2 1 , 6 1 -tetra-N-benzyloxycarb0nyl-5-0-methansulfonyl-31,4'-0-benzyliden-2"-0-benzoyl-3",4"-N,0-carbonyl-Antibiotikum JI-20A, 7) 1,3,2',6<1->tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-0-methansulfonyl-3',4'-0-benzyliden-2"-0-benzoyl-3",4"-N,0-carbOnyl-Antibiotikum JI-20B, 8) 1,3,2',3"-penta-N-benzyloxycarbonyl-5-0-methansulfonyl-3 ' , 4 ' ,4" , 6"-di-0-benzyliden-2"-O-benzoylkanamycin B, 9) 1, 3 ,21,6',3"-penta-N-benzyloxycarbonyl-5-0-methansulfonyl-4<1>,2"-di-O-benzoy1-4",6"-O-benzylidentobramycin, 10) 1,3,6',3"-tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-O-methansulfonyl-2',3<1>,4",6"-di-0-bensyliden-4<1>,2"-di-0-benzoyl-kanamycln A i. blanding med 1, 3, 6 ' , 3 "-tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-0-methansulfonyl-3',4',4",6"-di-0-ben-zyliden-2',2"-di-0-benzoylkanamycin A, 11 i 1/3,2' ,6.' ,3"-penta-N-henzy;loxYcarbonYl-5-0-jnethansui-fonYl-2"-0-benzOYl-4"/6."-0-benzYliden-3' ,4'.-dideoxy-' kanamycin B. 2. Oppløs hver av de 0-yliden-5-epiaminoglycosider erholdt som beskrevet i det ovenfor beskrevne eksempel 10C(1) i 50 % vandig eddiksyre og varm løsningen på dampbad i 1 time. Fordamp reaksjonsblandingen i vakuum til ét residuum omfattende hver av de respektive 5-epiamInoglycosider. Rens;, ennvidere-. hver av disse forbindelser via kromatografiske metoder lik de som er'beskrevet i eksempel 9B under dannelse av henholdsvis:

5-epigentamicin. A,

5-epigentamicin B,

5-epigentamicin B-^,

5-epigentamitin X2,

5-^epI-Antibiotikum G-418,

5-epi-Antibiotikum JI-20A75-epi-Antibiotikum JI-20B, NMR: (D20 ext, TMS): 5,17 (d.J=4Hz,

1"-M); 5,13 (d,J=3Hz) l'-H);

2,62 (N-Me) ; 1,20 (d, J-Hz, CgI,-CH3) 1,20 8 (C4,-CH3).

CMR: (D20, diox,ref.): 102 ( C1,)} 96,4 (C1„); 85,8 og 80,5

ppm (C4pg C6) .

5-epikanamycin B,

5-epitobramycin,

5-eplkanamycin A,

5-epi-3',4'-dideoxykanamycin B.

Eksempel 11

5- episisomicin og l- N- alkyl- 5- episisomicin

A. 5- episisomicin

1. Tilsett 1,2 g 1,3/2<1>,6<1->tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-0-methansulfonyl-2"-O-benzoyl-3"/4"-N/O-carbonylsisomicin og 1,0 g tetra-n-butylammoniumacetat til 10 ml dimethylformamid. Oppvarm ved 120° C i 16 timer, fordamp til et residuum og ekstraher residuet med kloroform. Vask kloroformløsningen med vann, tørk o<y>er natriumsulfat, fordamp deretter i vakuum til et residuum. omfattende 1,3,2',6-tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-epi-0-acetyl-2"-

O-benzoyl-^3 " -4 " -N, O-carbonyl sisomic in.

2. Oppløs residuet erholdt i det ovenfor angitte eksempel 11A(1) I 10 ml dimethylsulfoxyd. Tilsett en løsning av 2 g kallumhydroxyd i 4 ml vann og oppvarm ved 100° C i 24 timer. Avkjøl reaksjonsblandingen, tilsett 80.ml Amberlite IRC-50 (H+) , omrør blandingen i 1 time og fraskill derétter harpiksen, vask med vann og eluer deretter med ION ammoniumhydroxyd. Konsentrer de kombinerte ammonlumhydroxydeluater; i vakuum og-- kromatograf er. det resulterende residuum over 25 g silicagel og eluer med den nedre fase av et 2:1:1 kloroform:methanol:ION ammoniumhydroxyd-løsningsmiddelsystem. Kombiner de like eluater inneholdende 5-epl.sisomicin som bestemt ved tynnskiktskromatografi og fordamp de kombinerte eluater til et residuum av 5^-episisomicin. Sm.p. 135 - 138° C (spaltning), [a]^6 + 187,3 (D20); massespektrum (M)<+>m/e 447, (M + 1)<+>m/e 448.

Monosaccharider m/e 160, 127.

2- deoxy- 5- epistreptaminer m/e 191, 173, 163, 145

Disaccharider m/e 317, 289, 271

m/e 350, 322, 304

PMR (6) D20:

CMR (D20):

PPM: 6 150,3, 102,6, 97,1 (2C), 85,8, .80,9, 73,3, 70,3, 69,7, 68,5å 64,0, 48,1, 47,2, 47,1, 43,2, 37,7; 36,4, 25,6, 22,4.

B. l- N- ethyl- 5- episisomicin

(1}. Det nødvendige mellomprodukt, dvs. 1-N-ethyl-l, 3 ,2 ' ,6 ' - tetra-N-benzyloxycarbonyl-5-0-methansulfonyl-2"-O-benzoy1-3",4"-N,0-carbonylsis6micin fremstilles ved omsetning av 1-N-ethylsisomicin ifølge de prosedyrer som er beskrevet i eksempel 1 til 4.

Behandl på lignende måte som beskrevet i. écsempel 11A. 1-N-ethyl-l, 3 ,2 " , 6 ' -tetra-N-benzyloxycarbonyl-5.-0-methansul.f onyl-2"-0-benzoyl-3",4"-N,0-carbonylsisomicin i dimethylformamid i nærvær av tetra-n-butylammoniumacetat ved 120° C i 16 timer. Isoler det resulterende 5-epi-O-acetatderivat på samme måte. som. beskrevet i eksempel 11A(1), behandl deretter dette derivat med vandig kaliumhydroxyd som beskrevet i eksempel 11A(2) etterfulgt av rensing via kromatografiske metoder som tidligere beskrevet under dannelse av l-N-ethyl-5-episisomicin, sm.p. 118 - 122° C (spaltning), massespektrum (M) m/e 475, (M + 1) m/e 476. - Monos acchar ider m/e 160, 127 . l- N- ethyl- 2- deoxy- 5- epistreptaminer m/e 219, 201, 191, 173.

Disaccharider m/e 345, 317, 299,

m/e 378, 350, 322.

PMR (6) D20:

PPM: 6 149,8, 102,9, 97,4, 97,0, 83,9, 80,5, 73,2, 70,1, 69,6, 68,5, 63,9, 54,5, 47,1, . 47,0, 43,1, 40,8, 37,5, 33,0, 25,6, 22,4, 14,6.

C. Andre l- N- alkyl- 5- epiaminoglycosyl- derivater

(1) Gå frem på lignende måte som beskrevet i eksempel 11-A og erhold via det tilsvarende 5-epi-O-acetylderivat henholdsvis:

l-N-propyl-5-episisomicin,

1-N-(n-butyl)-5-episisomicin,

1-N-(6-aminobutyl)-5-episisomicin

1-N-(y-aminopropyl)-5-episisomicin,

1-N-(3-methylpropyl)-5-episisomicin,

1-N-(n-pentyl)-5-episisomicin,

1-N-(Y-methylbutyl)-5-episisomicin,

1-N-(p-methylbutyl)-5-episisomicin,

1-N-(3,3-dimethylpropyl)-5-episisomicin, l-N-(3-ethylbutyl)-5-episisomicin,

1-N-(n-octyl)-5-episisomicin,

1-N-(3-propenyl)-5-episisomicin,

1-N-(3-ethyl-3-hexenyl)-5-episisomicin,

l-N-benzyl-5-episisomicin,

1-N-fenethyl-5-episisomicin, l-N-cyclohexylmethyl-5-episicomicin,

1-N-(6-hydroxybutyl)-5-episisomicin,

1-N-(w-hydroxyoctyl)-5-episisomidin,

1-N-(3-aminoethyl)-5-episisomicin,

l-N-ethyl-5-epigentamicin Cla,

l-N-ethyl-5-epigentamicin C-^,

l-N-ethyl-5-epigentamicin C2,

l-N-ethyl-5-epigentamicin C2a,

l-N-ethyl-5-epigentamkcin C2b,

l-N-ethyl-5-epi-Antibiotikum G-52,

l-N-ethyl-5-epiverdamicin,

I- N-ethyl-5-epi-Antibiotikum 66-4OD.

(2) Behandl på lignende måte som beskrevet i eksempel II- A(l) en ekvivalent mengde av 1-N-ethyl-derivatet av 5-0-methansulfonyl-2"-O-benzoyl-O-yliden-N-benzyloxycarbonyl-mellomproduktene med dimethylformamid i nærvær av tetra-n-butylammo niumacetat etterfulgt av behandling av det resulterende 5-epi-0- acetyl-N-beskyttede-O-beskyttede-mellomprodukt med vandig kaliumhydroxyd på lignende måte beskrevet i eksempel 11-A(2) etterfulgt av behandling av de derved erholdte 0-yliden-5-epi-4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptaminer med 50 % vandig eddiksyre på lignende måte som beskrevet i eksempel 10-C under dannelse av henholdsvis: 1- N-ethyl-5-epi-3',4'-dideoxykanamycin B,

l-N-ethyl-5-epigentamicin B,

l-N-ethyl-5-epigentamicin B-^,

l-N-ethyl-5-epi-Antibiotikum JI-20A,

l-N-ethyl-5-epi-Antibiotikum JI-20B,

l-N-ethyl-5-epikanamycin B,

l-N-ethyl-5-epitobramycin,

l-N-ethyl-5-epi-Antibiotikum 66-40B,

l-N-ethyl-5-epigentamicin X2,

l-N-ethyl-5-epi-Antibiotikum G-418,

l-N-ethyl-5-epikanamycin A,

l-N-ethyl-5-epigentamicin A.

Eksempel 12

5- epigentamicin

A. 1, 3, 21, 6'- tetra- N- benzyloxycarbonyl- 2"- O- benzoyl- 3", 4"-N, 0- carbonyl- 5- dehydrogéntamicin

Til en løsning av 1,2 g 1,3,2',6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-2"-0-benzoyl-3",4"-N,0-carbonylgentamicin C, -L 3. i 5 ml aceton ved 20° C, tilsett over en 20 minutters periode Jones reagens fremstilt fra 1 g kromtriocyd i 1 ml konsentrert svovelsyre og 1 ml vann. Fortsett omrøringen av løsningen ved romtemperatur i 16 timer og ekstraher deretter med kloroform, vask kloroformekstraktet méd vann, tørk over natriumsulfat og fordamp løsningsmidlet til et residuum (0,619 g) omfattende 1,3,2',6'-tetra-N-benzyloxycarbonyl-2"-O-benzoyl-3",4"-N,0-carbonyl-5-de-hydrogentamicin Cl,- a.

B. 1, 3, 2', 6 '- tetra- N- benzyloxycarbonyl- 2"- O- benzoy1-3", 4"- N, O- carbonyl- 5- epigentamicin Cla

Oppløs det N-beskyttede-O-beskyttede-5-dehydrogentami-cin C-^a fremstilt i eksempel 12-A i 10 ml methanol. Tilsett 100 mg natriumborhydrid og varm blandingen ved 40° C i 4 timer. Av-kjøl løsningen, fjern løsningsmidlet i vakuum og ekstraher det resulterende residuum med kloroform. Vask. de.kombinerte kloro-formekstrakter med vann, tørk over natriumsulfat og fordamp løs-ningsmidlet til et residuum inneholdende. 1,3.,,2 ',-6 '-tetra-N-benzyloxycarbonyl-2 "-O-benzoyl-3",4"-N,0-carbonyl-5-epigentami-

cin C, .

la

C. 2"- O- benzoy1- 3", 4"- N, 0- carbonyl- 5- epigentamicin C, __

Oppløs produktet erholdt i eksempel 12-B i 15 ml eddiksyre og hydrogener over 200 mg 30 % palladium-på-benkull' ved romtemperatur i 18 timer.ved 4 atmosfærers starttrykk. Filtrer og fordamp filtratet i vakuum til et residuum omfattende 2"-0-benzoyl-3",4"-N,0-carbonyl-5-epigentamicin C, .

D . 5- epigentamicin C^a

Oppløs produktet fra eksempel 12-C i 10 ml 5 % natriumhydroxyd og oppvarm ved 100° C i 4 timer, avkjøl og før løsningen, gjennom IRC-50 (H )-harpiks, vask harpiksen godt med vann og eluer deretter produktet med 100 ml IN ammoniumhydroxyd. Fordamp ammoniumhydroxydeluatet til et residuum omfattende 5-epigentamicin C, . Rens ved kromatografering på silicagél-kolonne og eluer med den nedre fase av et kloroform:methanol: 15% ammoniumhydroxyd (2:1:1) løsningsmiddelsystem. Kombiner like eluater som bestemt ved tynnskiktskromatografi og fordamp de kombinerte eluater til et residuum omfattende 5-epigentamicin C1 . Sm.p. 145 - 152° C, [ct]^<6>+ 149° C (c 0,55, H20) .

E. 1, 3 , 2' , 6', 3"- penta- N- benzyloxycarbonyl- 2"- 0- acétyl-5- dehydrogentamicin C^a

Tilsett til en løsning av .10 g 1,3,2' , 6' , 3"-penta-N-benzyloxycarbonyl-2"-0-acetylgentamicin C^ai 600 ml methylenklorid under argonatmosfære 11,2 g kromtriocyd-pyridinkompleks. Oppvarm den resulterende oppslemming ved tilbakeløpstemperatur. Tilsett 12,1 g ytterligere kromtrioxyd-pyridinkompleks etter 22

timer og 11,2 g kromtriocyd-pyridinkompleks etter 25 timer.

Når reaksjonen er fullført som vist ved tynnskiktskromatografi (vanligvis ca. 28 timer) fordamp ca. 500 ml av løsningen i vakuum, tilsett 600 ml ether til den resulterende løsning, dekanter etherløsningen fra det resulterende tjæreaktige bunnfall og vask bunnfallet med 200 ml ether. Vask de kombinerte etherløsninger med mettet natriumbicarbonatløsning (2 ganger) med IN saltsyre (3 ganger) og deretter med vann (2 ganger). Tørk. over natriumsulf at og fordamp i vakuum til et residuum (8,2 g) omfattende 1,3,2<1>,6<1>,3"-penta-N-benzoyloxycarbonyl-2"-0-acetyl-5-dehydrogentamicin CJ, - a. Rens ytterligere ved kromatografering på en 700 g silicagel "tørr" kolonne. Fremkall, kolonnen med 6Q % ethylacetat/40 % kloroform, eluer deretter produktet med ethylacetat og fordamp de kombinerte eluater til et.residuum (4,6 g) omfattende 1,3,2<1>,6<1>,3"-penta-N-benzyloxycarbonyl-2"-0-acetyl-5-dehydrogentamicin Cla, NMR: (CDC13-CD30D, (3:1)),

fi 2,93 (N-CH3), 1,90 (CH3COO), 1,04 (C-CH3) PPM, CMR:

(CDC13-CD30D) (3:1)), 201 PPM (C=0).

Behandl på lignende måte som beskrevet ovenfor 1,3,2<1>,6<1->tetra-N-benzyloxycarbonyl-2"-O-acetyl-3",4"-N,0-carbonylgentamicin CX , 3. med kromtrioxyd-pyridinkompleks. Isoler og rens de resulterende produkter på lignende måte som ovenfor beskrevet under dannelse av 1,3 ,2 ' , 6 '-tetra-N^-benzyloxycarbonyl-2"-O-acetyl-3",4"-N,0-carbonyl-5-dehydrogentamicin CX .et.

F. Tilsett til en løsning av 2,1 g 1,3,2<1>,6<1>,3"-penta-N-benzyloxycarbonyl-2"-0-acetyl-5-dehydrogentamicin CX , 3 i 40 ml tørr tetrahydrofuran under en argonatmosfære 8 ml 1 M "L-Selectride" (litium-tri-sek-butyl-borhydrid i tetrahydrofuran). Omrør blandingen under en nitrogenatmosfære ved romtemperatur i

20 timer, held den over i 400 ml vandig natriumklorid og ekstraher med 3 x 80 ml porsjoner av ethylacetat. Vask det kombinerte ethylacetatekstrakt tre ganger med vann (inneholdende noe natriumklorid).• Tørk over natriumsulfat og fordamp i vakuum til et residuum (2,2 g) omfattende et 1,3,2<1>,6<1->tetra-N-benzyloxycarbonyl-3",4"-N,0-carbonylderivat av gentamicin C, , . som anvendes uten ytterligere rensing ved fremgangsmåten ifølge eksempel 12-G. Alternativt kan den ovenfor angitte prosedyre utføres på 1,3,2',6<1->tetra-N-benzyloxycarbonyl-2"-O-acetyl-

3",4"-N,0-carbonyl-5-dehydrogentamicin C X , Et under dannelse av det samme produkt som ble erholdt i det ovenfor angitte avsnitt.

G. 3", 4"- N, 0- carbonyl- 5- epigentamicin.

Oppløs produktet (2,2 g) erholdt i det første avsnitt av det ovenfor angitte 'eksempel 12-F i 20 ml tørr tetrahydrofuran, avkjøl løsningen til -75° til -85° C og kondenser 300 ml ammoniakk i reaks jonskaret. Tilsett. 2 ,2 g natriummetall' og. om— rør reaksjonsblandingen kraftig i 2,5 timer. Tilsett langsomt" 20 ml vann til blandingen og tillat ammoniakken å fordampe under oppvarming til romtemperatur. Absorber res.tløsnin<g>en:. på en. BioRex 70 kationbytterharpiks (100 ml, H. form). Vask de nøy-trale urenheter fra med vann (400 ml), eluer deretter produktet med 1,5 N ammoniumhydroxyd. Kombiner de like ammoniumhydroxyd-eluater som bestemt ved tynnskiktskromatografi og fordamp i<y>akuum til et residuum'omfattende 3", 4"-N,0-carbonyl-5-epigentamicin C-, L a, som anvendes uten ytterligere rensing i fremgangsmåten ifølge eksempel 12-H.

H. 5- epigentamicin C, _

Oppløs 143 mg 3",4"-N,0-carbonyl-5-epigentamicin Cl, a-. fremstilt som beskrevet i eksempel 12-G i 20 ml 2N natriumhydroxyd. Oppvarm løsningen ved tilbakeløpstemperatur i 4 timer og avkjøl deretter til romtemperatur og plaser løsningen på en BioRex 70 kationbytterharpikskolonne (100 ml, H form). Vask fra nøytrale salter med 200 ml vann, eluer deretter med 200 ml I. 5N ammoniumhydroxyd. Konsentrer det kombinerte ammoniumhydr-oxydeluat i vakuum til et residuum omfattende 5-epigentamicin C-, L cl, utbytte på 139 mg. Rens ved kromatografering på en 33 g silicagelkolonne og eluer med den nedre fase av et kloroform: methanol:konsentrert ammoniumhydroxydløsningsmiddelsystem (1:1:1). Kombiner de like fraksjoner som bestemt ved tynnskiktskromatografi og fordamp i vakuum under dannelse av renset 5-epigentamicin CJ, _ ci. Massespektrum: m/e 450 (M + H)<+>, 322, 304, 160, 129.

Eksempel 13

A. 1- N-( S- aminohydroxyalkyl)- 5- epi- amino- 5- deoxy- aminoglycosider og - 5- epi- aminoglycosider

(1) 1- N- ( S-( S- amino- 3- hydroxybutyl) - 5- epi- amino- 5- deoxygentamicin C-^

Suspender 98 mg 1-N-(S-6-amino-3-hydroxybutyl)-5-epi-amino-5-deoxygentamicin C-^i 8 ml tetrahydrof uran.. Tilsett. 14

ml IM diboran i tetrahydrof uran og oppvarm ved tilbakeløpstempe*— råtur , i 6 timer under nitrogenatmosfære. Tilsett forsiktig 2 ml vann for å spalte eventuelt overskudd av diboran og fordamp. Oppløs det resulterende residuum i hydrazinhydrat og oppvarm til tllbakeløpstemperatur under nitrogenatmosfære i 16 timer. Fordamp løsningen og ekstraher residuet med varm vandig ethanol. Fordamp de kombinerte ethanolekstrakter og kromatografer det resulterende residuum over 10 ml silicagel og eluer med den nedre fase av et kloroform:methanol.'konsentrert ammoniumhydroxyd (2:1:1) løsningsmiddelsystem. Kombiner og fordamp de like fraksjoner som bestemt ved tynnskiktskromatografi under dannelse av 1-N- (S-<S-amino-3-hydroxybuty 1) -5-epiamino-5-deoxygentamicin . Erhold på samme måte 1-N-(S-6-amino-3-hydroxybutyl)-5-epigentamicin C-^.

(2) Erstatt i den ovenfor angitte prosedyre l-N-(S-y-amino-3-hydroxypropionyl-derivatene med 1-N-(S-fi-amino-3-hydroxybutyryl)-derivatene og erhold 1-N-(S-y-amino-3-hydroxypropyl)-5-epi-amino-5-deoxygentamicin C^og 1-N-(S-y-amino-3-hydroxypropyl)-5-epigentamicin G-^. (3) Erholdt på en lignende måte som beskrevet i eksempel 13-A(1) henholdsvis 1-N-(S-6-amino-3-hydroxybutyl)-5-epi-amino-5-deoxygentamicin A, 1-N-(S-6-amino-3-hydroxybutyl)-5-epi-amino-5-deoxygentamicin B, 1-N-(S-S-amino-3-hydroxybutyl)-5-epi-amino-5-deoxygentamicin B^, 1-N-(S-6-amino-3~hydroxybutyl)-5-epi-amino-5-deoxygentamicin C, j_a, 1-N-(S-6-amino-3-hydroxybutyl)-5-epi-aminO-5-deoxygentamicin C2, 1-N- (S-6-am.ino-3-hydroxybutyl) -5-epi-amino-5-deoxygentamicin C2a/ 1-N-(S-S-amino-3-hydroxybutyl)-5-epi-amino-5-deoxygentamicin C^, l-N-(S-<5-amino-3~hydroxybutyl)-5-epi-amino-5-deoxygentamicin X2, 1-N-(S-S-amino-3- hydroxYbutYl)--5-epi-amijio-5-deoxYtobramYcin/ 1-N-(S-6-amino-3-hydroxybutyl)-5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum G-418, l-N-(S-6-amino-p-hydroxybutyl)-5-epi-amino-5-deoxy^Antibiotikum JI-20A, 1-N-(S-5-amino-3-hydroxybutyl)-5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum JI-20B, lTN-(S-6-amIno-3-hydroxybutyl)-5-epi-amino-5,3',4<1->trideoxykanamycin B, 1-N-(S-6-amino-3-hydroxybutyl)-5-epi-amino-. 5-deoxykanamycin A, 1-N-(S-6-amino-3-hydroxybutyl)-5-epigentamicin A, 1-N-(S-6-amino-3-hydroxybutyl)-5-epigentamicin, B, 1-N— (S-6-amino-3_hydroxybutyl)-5-epigentamicin B^, 1-N—(S-6-amino-3-'hydroxybutyl)-5-epigentamicin Cl, a, 1-N-(S-<S-amino-3-hydroxybutyl) - 5-epigentamicin C2/l-N-(S-<5-amino-3-hydroxybutyl)-5-epigentami-ein C2a'1-N-(S-6-amino-3-hydroxybutyl)-5-epigentamicin C' , , 1-N-(S-fi-amino-3-hydroxybutyl)-5-epigentamicin X2, 1-N-(S-6-amino-3-hydroxybutyl)-5-epitobramycin, 1-N-(S-<5-amino-3-hydroxybutyl)-5-epi-Antibiotikum G-418, 1-N-(S-S-amino-3-hydroxybutyl)-5-epi-Antibiotikum JI-20A, 1-N- (S-6.-amino-3-hydroxybutyl) -5-epi-Antibiotikum JI-20B. (4) Anvend ved fremgangsmåten ifølge* eksempel 13-A(2) som utgangsmaterialer de tilsvarende l-N-(S-y-amino-3-hydroxypropio-nyl)-derivater under dannelse av de tilsvarende 1-N-(S-y-amino-3-hydroxypropyl)-derivater, dvs. 1-N-(S-Y-amino-3-hydroxypropyl)-5-epl-amino-5-deoxygentamicin A, 1-N-(S-y-amino-3-hydroxypropyl— 5-epi-amino-5-deoxygentamicin B, 1-N-(S-Y-amino-3_hydroxypropyl)-5-epi-amino-5-deoxygentamicin B-^, 1-N-(S-Y-amino-3-hydroxypropyl) - 5-epi-amino-5-deoxygentamicin C J, L sl, 1-N-(S- -amino-3_hydroxypropyl)-5-epi-amino-5-deoxygentamicin C2, 1-N-(S-y-amino-3-hydroxy-prbpyl)-5-epi-amino-5-deoxygentamicin C& - a , 1-N-(S-y-amino-3-hydroxypropyl)-5-epi-amino-5-deoxygentamicin C2b,l<->N-(S-y-amino-3-hydroxypropyl)-5-epi-amino-5-deoxygentamiciri X2, 1-N-(S-Y-amino-3-hydroxypropyl)-5-epi-amino-5-deoxytobramycin, 1-N-(S-y-amino-3-hydroxypropyl)-5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum G-418, 1-N-(S-Y-amino-3_hydroxypropyl)-5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum JI-20A, 1-N-(S-Y-amino-3-hydroxypropyl)-5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum JI-20B, 1-N-(S-y-amino-3-hydroxypropyl)-5-epi-amino-5,3',4<1->trideoxykanamycin B, 1-N-(S-y-amino-3-hydroxypropyl)-5-epi-amino-5-deoxykanamycin B, 1-N-(S-Y-amino-p-hydroxypropyl)-5-epi-amino-5-deoxykanamycin A, 1-N-(S-y-amino-3-hydroxypropyl)-5-epigentamicin A, 1-N-(S-y-amino-3-hydroxypropyl)-5- epigentamicin B, 1-N-(S-y-amino-3-hydroxypropyl)-5-epigentamicin B-^, 1-N-(S-y-amino-p-hydroxypropyl)-5-epigentamicin C^&, 1-N-(S-y-amino-p-hydroxypropyl)-5-epigentamicin C2/ 1-N-(S-y-amino-3-hydroxypropyl)-5-epigentamicin C2a, 1-N- (S-y-amino-3-hydroxypropyl) -5-epigentamicin C2t), 1-N-(S-y-amino-3-hydroxypropyl)-5-epigentamicin X2, 1-N-(S-y-amino-3-hydrocypropyl)-5-epitobramycin,

1-N-(S-y-amino-3-hydroxypropyl)-5-epi-Antibiotikum G-418, 1-N-(S-y-amino-3-hydroxypropyl) -5-epi-Åntibiotikum J.I-20A., 1-N-(S-y-amino-3-hydroxypropyl)-5-epi-Antibiotikum JI-20B.

B. l- N- alkyl- 5- epi.- amino- 5- deoxy- aminoglycosidér og

- 5- epi- aminoglycosider

(1) . l- N- ethyl- 5- epi- amino- 5- deoxygentamicin C^

Behandl på lignende måte som beskrevet i eksempel 13-A(l) l-N-acetyl-5-epi-amino-5-deoxygentamicin C-^ eller 1-N-acetyl-5-epigentamicin C-, med diboran i tetrahydrofuran. Isoler og rens de resulterende produkter på lignende måte som beskrevet

i eksempel 13-A(1) under dannelse av l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxygentamicin C-^eller l-N-ethyl-5-epigentamicin C±.

(2) Erhold .på lignende måte som beskrevet henholdsvis l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxygentamicin A, l-N-ethyl-^5-epi-amino-5-deoxygentamicin B, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxygentamicin B-^, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxygentamicin Cx , a, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxygentamicin C2, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxygentamicin C2a, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxygentamkcin C2b'1-N~ethyl-5-epi-amino-5-deoxygentamicin X2/l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxytobramycin, 1-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum G-418/l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum JI-20A, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum JI-20B, 1-N-ethyl-5-epi-amino-5,34'-trideoxykanamycin B, l-N-ethyl-5-amino-5-deoxykanamycin B, 1-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxykanamycin A, l-N-ethyl-5-epigentamicin A, l-N-ethyl-5-epigentamicin B, l-N-ethyl-5-epigentamicin B--,L / l-N-ethyl-5-epigentamicin C_, L cl l-N-ethyl-5-epigentamicin C2, l-N-ethyl-5-epigentamicin C2a, l-N-ethyl-5-epigentamicin C2b, l-N-ethyl-5-epigentamicin X2, l-N-ethyl-5-epitobramycin7l-N-ethyl-5-epi-Antibiotikum G-418, 1-N-ethy1-5-epi-Antibiotikum JI-20A, l-N-ethyl-5-epi-Antibiotikum JI-20B.

(3) l- N- ethyl- 5- epi- amino- 5- deoxysisomicin

Suspender 1 g l-N-acetyl-5-epi-amino-5-deoxysisomicin i 100 ml tetrahydrof uran. Tilsett 1 g lithiumaluminiumhydrid*. omrør deretter den resulterende suspensjon ved tilbakeløpstempe-reatur i 24 timer under nitrogenatmosfære. Avkjøl og spalt overskuddet av hydrid ved forsiktig tilsetning av ethylacetat. Fordamp reaksjonsblandingen til et lite volum og fortynn med vann. Fraskill de uløselige faste bestanddeler ved filtrering-og vask godt med eddiksyre. Fordamp det kombinerte filtrat og vaskevann og oppløs det resulterende residuum i vann. Juster pH på den vandige løsning til, ca. 7 ved tilsetning av ammoniumhydroxyd. Før løsningen gjennom en kolonne av IRC-50-harpiks I ammoniumcyklus og vask kolonnen godt med vann. Eluer med 0,5N, ammoniumhydroxyd, fordamp eluatet og kromatografer det resulterende residuum over 20 g silicagel og eluer med den nedre fase av et 2:1:1 kloroform:methanol:konsentrert ammoniumhydroxyd-løsningsmiddelsystem. Kombiner og fordamp de like fraksjoner som bestemt ved tynnskiktskromatografi under dannelse av 1-N-ethy 1-5-epi-amino-5-deoxysisomicin. (4) På lignende måte som beskrevet i prosedyren ifølge eksempel 13-B(3) erhold henholdsvis l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxyverdamicin, l-N-ethyl-5-amino-5-deoxy-Antibiotikum 66-40B, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum 66-40D, 1-N-ethyl-5-amino-5-deoxy-Antibiotikum G-52, l-N-ethyl-5-epiverdamicin, l-N-ethyl-5-epi-Antibiotil'um 66-40B, l-N-ethyl-5-epi-Antibiotikum 66-40D, l-N-ethyl-5-epi-Antibiotikum G-52.

Eksempel 14

A. 1- N- ethy1- 5- epiverdamicin

Tilsett til en løsning av 5 g 5-epiverdamicin i 250 ml vann IN svovelsyre inntil pH av løsningen er innstilt til ca. 5. Tilsett til løsningen av det derved dannede 5-epiverdamicin-svovelsyresyreaddisjonssalt 2 ml acetaldehyd, omrør i 10 minutter og tilsett deretter 0,85 g natriumcyanoborhydrid. Fortsett omrøringen ved romtemperatur i 15 minutter, konsentrer deretter' løsningen i vakuum til et volum på ca. 100 ml, behandl løsnin-gen med en basisk ionebytterharpiks (f.eks. Amberlite IRA 401S

(OH XL, lyofiJLiser deretter til et residuum omfattende 1-N-ethyl-5-epiverdami.ci.n.

Rens ved kromatografering på 200 g silicagel, eluer:'.. med nedre fase av et kloroform:methanol:7% vandig ammoniumhydroxyd (2:1:1) system. Kombiner like eluater som bestemt ved tynnskiktskromatografi og konsentrer de kombinerte eluater av hovedkomponenten i vakuum til et residuum omfattende.1-N-ethy1-5-epiverdamicin.. Rens ytterligere ved kromatograf ering på 1.0-0: g silicagel og eluer med et kloroform:methanol:3,5 % ammoniumhydroxyd (1:2:1) system. Før de kombinerte, like eluater (som bestemt ved tynnskiktskromatograf i) gjennom'en' kolonne av basisk, ionebytterharpiks og lyofiliser eluatet under dannelse av 1-N-ethyl-5-epiverdamicin.

B. Substituer i fremgangsmåten ifølge eksempel 14-A ekvivalente mengder av andre 5-epi-aminoglycosider og 5-epi-azido (og 5-epi-amino)-5-deoxyaminoglycosider under dannelse av henholdsvis l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxygentamicin CX . cl, 1-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxygentamicin C-^, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxygentamicin C^ 9, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxygentamicin ' C £- . cl, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxygentamicin Q^ b' 1-N-e'tny1~5-epi-amino-5-deoxysisomicin, 1-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum G-52, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum 66-40D, 1-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxyve.rdamicin, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum 66-40B, l-N-ethyl-5-epi-amino-5,3',41 - trideoxykanamycin B,l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxygentamicin B, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxygentamicin B-^, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum JI-20A, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum JI-20B, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxykanamycin B, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxytobramycin, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxygentamicinX2, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum G-418, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxykanamycin A, l-N-ethyl-5-epi-amino-5-deoxygentamicin A, l-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxygentamicin Cla/.l-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxygentamicin C-^, l-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxygentamicin C2, l-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxygentamicin C £ -, a, l-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxygentamicin C2t), 1-N""ethy1-5-epi-azido-5-deoxy-aisomicin, l-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxy-Antibiotikum G-52, l-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxy-Antibiotikum 66-40D, 1-N-ethyl- 5-epi-azido-5-deoxyverdamicin, l-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxy-Antiblotikum 66-4QB, l-N-ethyl-5-epi-azido-5,3 ' , 4 '-trideoxykanamycin B, l-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxygentamicin B, 1-N-ethyl-5-epl-azido-5-deoxygentamicin B-^, l-N-ethyl-5-epi-azido-5-^deoxy-Antibiotikum JI-20A, l-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxy-Antibiptikum JI-20B, l-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxy-kanamycin B, 1-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxytobramycin, l^-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxygentamicin X2, l-N-ethyl-5-epi-azido-5-deoxy-Antibiotikum B-418, l-N-ethyl.-5-epi-azido-5-de.oxykanamycin A„ 1-N-ethyI— 5-epi-azido-5-deoxygentamicin A, l-N-ethyl-5-epigentamicin C-^, l^N-ethyl-5-epigentamicin C2, 1-N-ethyl-5-epigentamic.in. C2a, l-N-ethyl-5-epigentamici.n C2b, l-N-ethyl-5-epi-Antibiotikum. G-52,. l-N-ethyl-5-epi-Antibiotikum 66-40D, l-N-ethyl-5-epigentamicin A,.. l-N-ethyl-5-epigentamicin B, l-N-ethyl-5-epigentamicin B^, l-N-ethyl-5-epigentamicin X2, l-N-ethyl-5-epi-Antibiotikum G-418, l-N-ethyl-5-epi-Aritibiotikum JI-20A, l-N-ethyl-5-epi-Antibiotikum JI-20B, l-N-ethyl-5-epikanamycin B, l-N-ethyl-5-epitobramycin, l-N-ethyl-5-epikanamycin A, l-N-ethyl-5-epi-3',4<1->dideoxykanamycin B. C. Anvend ved fremgangsmåten ifølge eksempel 14-A og B ekvivalente mengder av andre aldehyder f.eks. propenal, butanal og 6-acetamidobutanal, istedenfor acetaldehyd og erhold de tilsvarende 1-N-propyl, 1-N-butyl og l-N-6-acetamidobutylderivater av de 5-epiaminoglycosider, 5-epi-amino-5-deoxy- og 5-epi-azido-5-^deoxy-aminoglycosider som er oppført deri. Behandling med 1-N-(6-acetamidobutyl)-derivatene.med base gir.de tilsvarende 1-N-(6-aminobutyl)-derivater.

Eksempel 15 A. 2 ' , 3, 6' - tri- N- butoxycarbonyl- 3", 4"- N, 0- carbonyl- 5- epiverdamicin

Oppløs 25,5 g 5-epiverdamicin o 13 g natriumcarbonat 1. 6.25 ml destillert vann. Tilsett 100 ml carbobenzoxyklorid til den omrørte løsning ved 25° C og omrør blandingen i 16 timer. Filtrer fra de faste bestanddeler, vask grundig med vann, tørk

i vakuum og vask deretter med hexan og erhold penta-N-carbo-benzoxy-5-epiverdamicin som et farveløst amorft fast materiale. Oppløs 51 g derav i 50 ml dimethylformamid, tilsett 250 mg

natriumhydrid til den omrørte løsning og omrør reaksjonsblandingen under argon ved romtemperatur i 2 timer. Filtrer og tilsett iseddik (2 ml), til filtratet som deretter konsentreres i vakuum. Ekstraher residuet med kloroform (200 ml, på forhånd ført gjennom basisk aluminiumoxyd), vask ekstraktet med vann *og tørk over natriumsulfat. Løsningen fordampes under dannelse av tetra-N-carbobenzoxy-3",4"-N,0-carbonyl-5-epiverdamicin som et amorft pulver.

Tilsett til en løsning av 10 ,2 g 1,3 ,2' 6 '"-tetra-N-benzyloxycarbonyl-3",4"-N,0-carbonyl-5-epiverdamicin i 200 ml tetrahydrof uran 1 liter flytende ammoniakk (redes till.ert fra. natrium) . Tilsett til den omrørte løsning : 6 g. natrium i små stykker. Ødelegg overskudd av natrium ved. tilsetning av ammo-niumklorid etter omrøring i 3 timer. Tillat løsningsmidlene å fordampe under en nitrogenstrøm. Oppløs residuet i vann og før løsningen gjennom et medium av Amberlite IRC-50 harpiks (H+ form) og vask harpiksen godt med vann og eluer deretter produktet med 2N ammoniumhydroxydløsning. Fordamp ammoniumhydroxydeluatet i vakuum under dannelse av 3"/4"-N/0-carbonyl-5-epiverdamicin.

Oppløs 1,4 g 3",4"-N,0-carbonyl-5-epivercamicin i

10 ml 50 %-ig vandig methanol inneholdende 3,5 mmol triethylamin. Tilsett under omrøring 3,5 mmol t-butoxycarbonylazid dråpevis. Omrør blandingen i. 2 dager ved romtemperatur. Tilsett 5 ml Amberlite IRA-401S (OH )-ionebytterharpiks sammen med 5 ml methanol og omrør i 1/2 time. Fjern harpiksen ved filtrering og vask med methanol. Konsentrer filtratet og kromatografer .residuet på en kolonne av silicagel (60 - 100 mesh,

20,0 g) under anvendelse av kloroformtmethanol:ammoniumhydroxyd (30:10:0,4) som løsningsmiddelsystem. Saml de homogene fraksjoner inneholdende titalmaterialet og fjern løsningsmidlet ved fordampning i vakuum. Oppløs residuet i methanol og utfell med overskudd av ether. Isoler det faste produkt ved filtrering og tørk.

B. 1- N- ethy1- 5- epiverdamicin

(1). Oppløs 0,77 g 3% ,4"-N,0-carbonyl-2 ' , 3 , 6'-tri-N-t-butoxycarbonyl-5-epiverdamicin i 20 ml tetrahydrofuran og av-kjøl l. et isbad. Tilsett 0,14 g ethylfluorsulfonat og tillat blandingen å oppvarmes til romtemperatur. Fjern løsningsmidlet og oppløs residuet i trifluoreddiksyre. Fjern trifluoreddik-syren i vakuum etter 5 minutter ved romtemperatur og behandl residuet med 10 % kaliumhydroxydløsning ved 100° C i 5 timer.

Før den avkjølte løsning ned gjennom en kolonne av Amberlite IRC-50 (H ) ionebytterharpiks og eluer med 2N vandig ammoniumhydroxyd. Konsentrer eluatet og lyofilisert under dannelse av det urene titelprodukt.

Kromatografer det urene materiale på silicagel i den nedre fase av et kloroform:methanol: 7 % ammoniumhydroxyd (2::1.:1) løsningsmiddelblanding under dannelse av l-N-e.thyl-5-epiverd'a-micin. (2) Behandl 0,77 g .2•,3,61-tri-N-t-butoxycarbonyl-3",4"-N,0-carbonyl-5-epiverdamicin i 2 5 ml THF med 101 mg methylamin og 290 mg trifluormethylsulfonsyreanhydrid ved 0° C i 18 timer. Reduser løsningen til tørrhet og oppløs residuet i 10 ml DMF og omrør med 330 mg ethyljodid og 130 mg kaliumcarbonat i ytterligere 18 timer. Fjern løsningsmidlet ved fordampning og behandl residuet med 10 % vandig kaliumhydroxyd ved 100° C i 12 timer. Før den avkjølte løsning gjennom en kolonne av Amberlite IRC 50 (H<+>) ionebytterharpiks. Det urene produkt elueres med 2N vandig ammoniumhydroxyd. Det kombinerte eluat reduseres til tørrhet i vakuum og residuet kromatograferes på silicagel (200 g) i den nedre fase av et kloroform:methanol:7 % ammoniumhydroxyd (2:1:1) løsningsmiddelsystem under dannelse av l-N-ethyl-5-epiverdamicin. (3) Oppløs 0,77 g 2',3,6<1->tri-N-t-butoxycarbonyl-3",4"-N,0-carbonyl-5-epiverdamicin i 100 ml diklormethan med 0,24 g acrylonitril og etterlat blandingen ved romtempeatur i 24 timer. Fjern løsningsmidlet i vakuum til.et residuum som løses i dimethylformamid, og behandl med 200 mg ethyljodid ved 50° Ci 12 timer. Fjern løsningsmidlet og behandl residuet med 10 % vandig kaliumhydroxyd ved 100° C i 8 timer. Den avkjølte løsning føres ned gjennom en kolonne av Amberlite IRC-50 (H<+>) ionebytterharpiks og det urene produkt elueres med 2N vandig ammoniumhydroxyd. Det kombinerte eluat reduseres til tørrhet i vakuum og residuet kromatograferes på silicagel (200 g) i den nedre fase av et kloroform:methanol:7 % ammoniumhydroxyd (2:1:1) løsningsmiddelsystem under dannelse a<y>l-N-ethyl-5-epiverdamicin.

Eksempel 16

Syreaddisjonssalter

A.. Sulfatsalter (svovelsyreaddisjonssalter)

Oppløs 5,0 g 5-epigentamicin C-^eller 5-epi-amino-5-deoxygentamicin C-^i 25 ml vann og juster pH av løsningen til 4/5 med IN svovelsyre.-- Held. i ca. 300 ml. methanol under, kraftig, omrøring/fortsett omrøringen i 10 - 20 minutter og filtrer. Vask bunnfallet med methanol og tørk ved 60° C i vakuum under dannelse av 5-epigentamicin C-^-sulfat eller 5-epi-amino>-5-deoxy—• gentamicin C^-sulfat..

B. Hydrokloridsalter

Oppløs' 5/0 g. 5-epigehtamicin C-, L aog 5-epi-amino-5-deoxygentamicln CX , cl i 25 ml vann. Surgjør med 2N saltsyre til pH 5. Lyofilisert under '.dannelse av 5-epigentamicin CX . Sl, hydroklorid eller 5-epi-amino-5-deoxygentamicin CX , a.-hydroklorid.

Eksempel 17

A. l- N- acetyl- 5- epi- azido- 5- deoxysisomicin

Oppløs 1,25 g 5-epi-azido-5-deoxysisomicinsulfat i

200 ml vann:methanol (2:3 v:v) og avkjøl løsningen. Tilsett 1,5 ml eddiksyreanhydrid og etter ca. 10 minutter tilsett 0,125 ml triethylamin i 10 ml methanol over en 15 minutters periode. Tillat reaksjonsblandingen å oppvarmes til romtemperatur over en 2 timers periode og fordamp deretter løsningsmid-. let i vakuum. Oppløs residuet i vann og omdann produktet til den fri base ved at en vandig løsning derav føres gjennom Amberlite IRA-401S-harpiks i hydroxydioncyklus. Lyofiliser kolonneeluatet og kromatografer residuet på 50 g silicagel under anvendelse av den nedre fase av (2:1:1) kloroform: methanol:7% ammoniumhydroxyd-løsningsmiddelsystem som elueringsmiddel. Overvåk fraksjonene via tynnskiktskromatografi og kombiner like fraksjoner og fordamp til et residuum omfattende l-N-acetyl-5-epi-^azido-5-deoxysisomicin.

B. Behandl på lignende måte en ekvivalent mengde av sulfatsaltet av andre 5-ept-azido- og 5-epi-amino-4,6-di-0-(aminoglycosyl)-2,5-dideoxystreptaminer og av 5-epi-aminoglycosider ved fremgangsmåten- ifølge eksempel 17A under dannelse av henholdsvis l-N-acetyl-5-epI-amino-5-deoxysisomIcin/1-N-acetyl-5-epi-azido-5-deoxygentamicin CJ, _a, l-N-acetyl-5-epi-amino-5-depxygentamlcin C_, l a, l-N-acetyl-5-epi-azido-5-deoxygentamicin C^, l-N-acetyl-5-epi-amino-5-deoxygentamicin C^, l-N-acetyl-5-epI-azido-5-deoxygentamicin C2, l-N-acetyl-5!-epi-amino-5-deoxy-" gentamicin C2, l-N-acetyl-5-epl-azido-5-deoxygentamicin C2a/l^N-acetyl-5-epi-amino-5-deoxygentamicin C_/ l-N-acetyl-5-epi-azido-5-deoxygentamicin / l-N-acetyl-5-epi-amino-5-deoxygen— tamicin C2b, l-N-acetyl-5-epi-azido-5-deoxy-Antlbiotikum G-52, l-N-acetyl-5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum G-52, l-N-acetyl-5-epi-azido-5-deoxy-Antibiotikum 66-50D, l-N-acetyl-5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum 66-40D, l-N-acetyl-5-epi-azido-5-deoxyverdamicin, l-N-acetyl-5-epi-amino-5-deoxyverdamicin, 1-N-acetyl-5-epi-azido-5,3',4<1->trideoxykanamycin B, l-N-acetyl-5-epi-amino-5,3',41-trideoxykanamycin B, l-N-acetyl-5-epi-azido-5-deoxygentamicin B, l-N-acetyl-5-epi-amino-5-deoxygentamicin B, 1-N-acetyl-5-epI-azido-5-deoxygentamicin B-^, l-N-acetyl-5-epi-amino-5-deoxygentamicin B-^, l-N-acetyl-5-epi-azido-5-deozy-Antibiotikum JI-2 0A, 1-N-acety1-5-epi-amiho-5-deoxy-Antibiotikum JI-20A, l-N-acetyl-5-epi-azido-5-deoxy-Antibiotikum JI-20B, l-N-acetyl-5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum JI-20B, 1-N-acetyl-5-epi-azido-5-deoxykanamycin B, l-N-acetyl-5-epi-amino-5-deoxykanamycin B, l-N-acetyl-5-epi-azido-5-deoxytobramycin, 1-N-acetyl-5-epi-amino-5-deoxytobramycin, l-N-acetyl-5-epi-azido-5-^deoxy-Antibiotikum 66-40B, l-N-acetyl-5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum 66-40B, l-N-acetyl-5-epi-azido-5-deoxygentamicin X2, l-N-acetyl-5-epi-amino-5-deoxygentamicin X2, l-N-acetyl-5-epi-azido-5-deoxy-Antibiotikum G-418, l-N-acetyl-5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum G-418, l-N-acetyl-5-epi-azido-5-deoxykanamycin A, l-N-acetyl-5-epi-amino-5-deoxykanamycin A, 1-N-acetyl-5-epi-azido-5-deoxygentamicin A, l-N-acetyl-5-épi-amino-5-deoxygentamicin A, l-N-acetyl-5-epigentamicin C^, l-N-acetyl-5-epigentamicin Cx-, a , l-N-acetyl-5-epigentamicin Cz0., l-N-acetyl-5-epigentamicin C2a, l-N-acetyl-5-epigentamicin C., , l-N-acetyl-5-eplgentamicin X2, l-N-acetyl-5-epigentamicin A, l-N-acetyl-5-epigentamicin B, l-N-acetyl-5-epigentamicin E-^, 1-N-acetyl-5- epi-AntiU3i.otikiun G-418, l-N-acetyl-5-epi-Antibiotikum 66-40B, l-N-acetyl-5-epi-epi-Antlbiotikum 66-40D, l-N-acetyl-5-epi-Antibiotikum JI-20A, l-N-acetyl-5-epi-Antibiotikum JI-20B, l-N-acetyl-5-epi-AntIbiotikum G-52, l-N-acetyl-5-epiverdamicin, l-N-acetyl-5-epitobramycin. C.<y>ed å gå frem som beskrevet i eksempel 17-A og B men anvende andre syreanhydrider, f.eks. propionsyreanhydrid, N— octanoinsyreanhydrid, fenyleddlksyreanhydrid". og' trans-3-feriyl— acrylsyreanhydrid erholdes de tilsvarende 1-N-acylderivater, f.eks. 1-N-propionyl., 1,-N-(n-octanoyl) ,. 1-N-fenylacetyl og. 1-N-(trans-3-fenylpropenoyl)-derivater.

D. (1) 1- N-( 5- Aminopentanoyl)- 5- epi- azido- 5- deoxysisomicin

(a) 1- N-( 5- fthalimidopentanoyl)- 5- epi- azido- 5- deoxysisomicin

Oppløs 2,5 g 5-epl-azido-5-deoxysisomicinsulfat i 250

ml vann og tilsett 100 ml methanol. Tilsett 0,35 g triethyl-

amin og omrør i 10 minutter. Tilsett en løsning av 1,2 g N-(5- . fthallmidopentanoyloxy)-succinimid i 20 ml tørr dimethylforma-

mid dråpevis under omrøring til løsningen av antibiotikumet.

Omrør blandingen ved omgivende temperatur i 16 timer. Konsentrer reaksjonsblandingen til et residuum i vakuum og triturer residuet med methanol under dannelse av 3,4 g av hvitt fast. materiale. Kromatografer residuet på 200 g silicagel i den nedre, fase av et kloroformrmethanol:7% ammoniumhydroxyd (2:1:1) system under dannelse av. 1-N-( 5-f thalimidopentanoyl)-5-epi-azido-5-deoxysisomicin. Erhold på samme måte 1-N-(5-fthalimido-pentanoyl) -5-epigentamicin Cj.

(b) 1- N- aminopentanoyl)- 5- epi- azido- 5- deoxysisomicin

Oppvarm 0,4. g 1-N-(5-fthalimidopentanoyl)-5-epi-azido-5-deoxysisomicin i 5 ml 5 % ethanolisk hydrazinhydrat under tilbakeløp i 4 6imer. Konsentrer løsningen og tilsett tetrahydrof uran for å utfelle 1-N-( 5-aminopentanoyl ).-5-epi-azido-5-deoxysisomicin som oppsamles ved filtrering. Erhold på samme måte 1-N-(5-aminopentanoyl)-5-epigentamicin C-^.

(2). Behandl på lignende måte en ekvivalent mengde av syre-addis jonssaltet av hver 5-epi-azido-5-deoxy-aminoglycosid og 5- epi-amijio-5-deoxY-ami.noglycosid-utgangsforbindelse som anvendt i eksempel 17-B ved fremgangsmåten ifølge- eksempel 17-D(1). Isoler og rens hver av de resulterende produkter på lignende måte som beskrevet under dannelse av det tilsvarende l-N-(5-aminopentanoyl)-5-epI-azido-5-deoxy-aminoglycosid og l-N-(5-aminopentanoylJ-5-epi-amino-5-deoxy-aminoglycosid-derivatav hver av 5-epi-azido- og 5-epi-amino-5-deoxy-utgangsforbindelsene.

(3) Underkast på lignende måte en ekvivalent mengde av syreaddisjonssaltet av de etterfølgende 5-epiaminoglycosider ved fremgangsmåten ifølge eksempel 17-D(1): 5-epigentamicin C^a, 5-epigentamicln C^/5-epigentamicin. ^ 2a.' 5-epigentamicin.<C>2b'5-epigentamicin. X^, 5-epigentamicin A, 5-epigentamicin

B^, 5-epiverdamicin, 5-epitobramycin.

Isoler de resulterende produkter på lignende måte som beskrevet i eksempel 17-D(1) under dannelse av det tilsvarende 1-N-(5-aminopentanoyl5-5-epIaminoglycosid-derivat av hver av de angitte 5-epiaminoglycosid-utgangsforbindelser.

E. (1) 1- N-( 5- hydroxypentanoyl)- 5- epi- azido- 5- deoxysisomicin

Oppløs 2,5 g 5-epi-azido-5-deoxysisomicin i 250 ml vann og tilsett 100 ml methanol. Tilsett 0,35 g triethylamin og omrør i 15 minutter. Tilsett en løsning av 1,0 g N-(5-acetoxypentanoyloxy)-succinimid under omrøring til løsningen av antibiotikumet, og omrør ved omgivende temperatur i 16 timer. Fordamp løsningen i vakuum til et fast residuum. Oppløs residuet i 5 ml 5 % ehthanolisk hydrazinhydrat og oppvarm under til-bakeløpskjøling i 15 minutter. Konsentrer løsningen i vakuum til et oljeaktig residuum og kromatografer det på 200 g silicagel 1 den nedre fase av et løsningsmiddelsystem bestående av kloroformrmethanol:7% ammoniumhydroxyd (2:1:1) under dannelse av 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epi-azido-5-deoxysisomicin. Erhold på samme måte 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epigentamicin . (2) Behandl på lignende måte en ekvivalent mengde av syre-addis j onssaltet av de 5-epi-azido (og 5-epi-amino-) -5-deoxy-aminoglycosid-utgangsforbindelser som ble anvendt i eksempel 17-B og av de 5-epiaminoglycosid-utgangsforbindelser som er angitt i eksempel 17-D(3) ved fremgangsmåten ifølge eksempel 17-E(1).

Isoler og rens de resulterende, produkter på lignende måte som

er beskrevet under dannelse av 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epi-amIno-5-deoxysisomIcin, 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epi-azido-5-deoxygentamicin CJ. . a, 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epi-amino-5-deoxy-gentamicin C la , 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epi-azido-5-deoxygentamicin C-^, 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epiamino-5-deoxygentamicin C-^, 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epi-azido-5-deoxygentamicin C2>1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epi-amino-5-deoxygentamicin 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epi-azido-5-deoxygentamicin C0z a=, 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epi-åmino-5-deoxygentamicin C2a*1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epi-azido-5-deoxygentamicin C2J-,/ 1-N- ( 5-hydroxypep.':anoyl) -5-epi-amino-5-deoxygentamicin C^b' ±_N~^5-hydroxypentanoyl)-5-epi-azido-5-deoxy-Antibiotikum G-52, 1-N- ( 5-^hydroxypentanoyl) -5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum G-52, 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epi-azido-5-deoxy-Antibiotikum 66-4'OD , 1-N- ( 5-hydroxypentanoyl) -5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotkum 66-4OD, 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epi-azido-5-deoxyverdamicin, 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epi-amino-5-<.

deoxyverdamicin , 1-N- (5-hydroxypentanoyl) -5-epi^-azido-5,3 * ,4 '-trideoxykanamycin B, 1-N-(5-hydroxypentanoy1)-5-epi-amino-5,3<1>,4<1->trideoxykanamycin B, 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epi-azido-5-deoxygentamicin B, 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epi-amino-5-deoxygentamicin B, 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epi-azido-5-deoxygentamicin B-^ , 1-N-( 5-hydroxypentanoyl)-5-epi-amino-5-deoxygentamicin B-^, 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epi-azido-5-deoxy-Antibiotikum JI-20A, 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum JI-20A, 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epi-azido-deoxy-Antibiotikum JI-20B, 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum JI-20B, 1-N-(5-hydroxypentanoyl )-5-epi-azido-5-deoxykanamycin B, 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5"-epi-amino-5-deoxykanamycin B, 1-N- ( 5-hydroxypentanoyl)-5-epi-azido-5-deoxytobramycin, 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epi-amino-5-deoxytobramycin, 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epi-azido-5-deoxy-Antibiotikum 66-40B, 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epi-amino-5-deoxy-Antibiotikum 66-40B, 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-azido-5-deoxygentamicin X2/1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epi-amino-5-deoxygentamicin X2, 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epi-azido-5-deoxy-Antibiotikum G-418, 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-api-amino-5-deoxy-Antibiotikum G-418, 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epi-

azIdo-5-deoxykanamycIn A, 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epi-amino-5-deoxykanamycin A, 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epi-azido-5-deoxygentamlcin A, 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epi-amino-5-deoxygentamicin A, 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epigentamicin C, , 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epigentamicin C2, 1-N-(5-hydroxypentanoyl) -5-epigentamicin C0 . 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epi-gentamicin C^, ±-N~ (5-hydroxypentanoyl)-5-epigentamicin &2, 1-N-( 5-hydroxypentanoyl)-5-epigentamicin A,.. l.-N- ( 5-hydroxypentanoyl)-5-epigentamicin B-^ , 1-N-(■5-hydroxypentanoyl) -5-epi— verdamicin, 1-N-(5-hydroxypentanoyl)-5-epitobramycin.

F. (1) 1- N- formyl- 5- epi- azido- 5- deoxysisomicin

Oppløs 2,5 g 5-epi-azido-5-deoxysisomicinsulfat i 250 ml vann og tilsett 100 ml methanol. Tilsett 0,35 g triéthylamin og omrør i 10 minutter. Tilsett en løsning av 2,0 g N-formyl-oxysuccinimid i 20 ml tørr dimethylformamid dråpevis og under omrøring. Omrør reaksjonsblandingen ved romtemperatur i 16 timer. Konsentrer reaksjonsblandingen i vakuum til et residuum. Triturer residuet med methanol, filtrer og tørk det resulterende faste materiale under dannelse av 1-N-formyl-5-epi-azido-5-deoxysisomicin. Erhold på lignende måte 1-N-formyl-5-epigentami-r ein C-^. (2) Behandl på lignende måte en ekvivalent mengde av syre-addis jonssaltet av 5-epi-azido- og 5-epi-amino-5-deoxy-aminoglycosid-utgangsforbindelsene anvendt i eksempel 17-B og av de 5-epi-aminoglycosid-utgangsforbindelser ifølge eksempel 17-D(3) ved fremgangsmåten beskrevet i eksempel 17-F(1). Isoler og rens de resulterende produkter på lignende måte som beskrevet under dannelse av de tilsvarende 1-N-formy1-derivater.

G. (1) 1- N-( S- 4- amino- 2- hydroxybuturyl)- 5- epi- amino- 5-deoxygentamicin

(a) 1- N-( S- 4- benzyloxycarbonylamino- 2- hydroxybutyryl)-5- epi- azido- 5- deoxygentamicin

Oppløs 2,8 g (4 mmol). 5-epi-azido-5-deoxygentamicin Cli a -sulfat i 30 ml vann og 3 tilsett 15 ml methanol. Tilsett Q.,56 ml (4 mmol) triéthylamin og omrør i 10 minutter. Tilsett en løsning Inneholdende 4 mmol N-(S-4-benzyloxycarbonylamino-2- hydroxybutyryloxy)-succlnimid i 20 ml tørr dimethylformamid dråp,evis, under omrøring til aatiblotika-løsningen, Omrør blandingen over natten (16 timer), ved omgivende temperatur. Tynnskiktskromatografi av reaksjonsblandingen på silicagel under anvendelse av den nedre fase av et løsningsmiddelsystem bestående av kloroform:methanol:ammoniumhydroxyd (1:1:1) viser nærvær av et flertall mindre komponenter og én hovedkomponent. Konsentrer reaks jonsblandingen til et residuum i vakuum'og triturer. residuet med methanol under dannelse av 3,2 g hvite faste materialer inneholdende 1-N-(S-4-benzyloxycarbonylamino-2-hydroxybutyryl)-5-epi-azido-5-deoxygentamicin CX , cl. Erhold på lignende: måte 1-N-(S-4-benzyloxycarbonylamino-2-hydroxybutyryl)-5-epi-gentamicin C, .

la

(b) 1- N-( S- 4- amino- 2- hydroxybutyryl)- 5- epi- amino- 5-deoxygentamicin

Oppløs produktet fra eksempel 17-G(la) i en blanding bestående av 12 ml methanol og 3 ml vann, og tilsett 20 mg 10 % palladium-på-carbon og hydrogener ved 4 atmosfærer ved romtemperatur. Etter 3 timer er reaksjonen fullført. Fjern katalysatoren ved filtrering og lyofiliser filtratet under dannelse av 1-N-(S-4-amino-2-hydroxybutyryl)-5-epi-amino-5-deoxygentamicin CX , cl. Erhold på lignende måte 1-N-(S-4-amino-2-hydroxybutyryl)-

5-epigentamicin C,,.

XcL

(2) 1- N-( S- 4- amino- 2- hydroxybutyryl)- 5- epi- amino- 5-deoxygentamicin B

(a) 1- N-( S- 4- benzoyloxycarbonylamino- 2- hydroxybutyryl-5- epi- amino- 5- deoxygentamicin B

Oppløs 3,39 g 5-epi-amino-5-deoxygentamicin B-

sulfat i 48,4 ml vann og fortynn med 23,7 ml methanol. Tilsett 0,7 ml triéthylamin dråpevis under omrøring. Oppløs 1,67 g N-(S-4-benzyloxycarbonyl-amino-2-hydroxybutyryloxy)-succinimid i dimethylformamid og tilsett løsningen dråpevis under omrøring til antibiotika-løsningen. Omrør den resulterende løsning ved romtemperatur i 18 timer og konsentrer deretter til et residuum i vakuum. Oppløs residuet i vann og behandl med fortynnet barlumhydroxydløsning under omrøring inntil pH når ca. 8,0. Fjern det utfelte bariumsulfat ved filtrering under anvendelse

av en filtermasse. Vask. bunnfallet med vann, kombiner filtratet og vaskevannene og konsentrer til tørrhet i vakuum. Kromatografer residuet på en kolonne inneholdende 600 g silicagel under anvendelse av den nedre fase av et løsningsmiddelsystem bestående av kloroformrmethanol:ammoniumhydroxyd (1:1:1) som elueringemiddel.. Kombiner de like fraksjoner inneholdende 1-N-(S-4-benzyloxycarbonylamino-2-hydroxybutyryl)-5-epi-amino-5-deoxygentamicin B som bestemt ved tynnskiktskromatografi. og konsentrer de kombinerte fraksjoner til et residuum omfattende-1-N-(S-4-benzyloxycarbonylamino-2-hydroxybutyryl)-5-epi-amino-5-deoxygentamicin B. Erhold på lignende måte. 1,-N-(S-4-benzyloxycarbonylamino-2-hydroxybutyryl)-5-epigentami'c.In B.

(b) 1- N-( S- 4- amino- 2- hydroxybutyryl)- 5- epi- amino- 5-deoxygentamicin B

Oppløs produktet fra det ovenfor angitte eksempel 17-G(2a) i en blanding bestående av 20 ml vann og 8 ml methanol. Hydrogener.produktet i nærvær av 60 mg 5 % palladium-på-carbon ved 3,5 atmosfærer og romtemperatur i 3 timer. Fjern katalysatoren ved filtrering gjennom en filtermasse. Vask filterkaken med vann og kombiner filtratet og vaskevannene. Konsentrer det kombinerte filtrat og vaskevann til tørrhet i vakuum. Kromatografer residuet på en silicagelkolonne inneholdende 100 g silicagel under anvendelse av en løsning bestående av kloroform: mehtanol:ammoniumhydroxyd (1:2:1) som elueringsmiddel. Fraksjoner inneholdende den mest polare komponent oppsamles, konsentreres og lyofiliseres under dannelse av l-N-(S-4-amino-2-hydroxybutyryl)-5-epi-amino-5-deoxygentamicin B. Erhold på lignende måte 1-N-(S-4-amino-2-hydroxybutyryl)-5-epigentamicin

B.

(3 ).. 1- N-( S- 4- amino- 2- hydroxybutyryl) - 5- epi- azido- 5-deoxyverdamicin

(a) 1- N-( S- 4- fthalimido- 2- hydroxybutyryl)- 5- epi- azido-5- deoxyverdamicin

Oppløs 5,00 g 5-epi-'azido-5-deoxyverdamicin-sulfat i 50 ml vann og tilsett 25 ml methanol. Tilsett 0,50 ml triéthylamin og omrør i 10 minutter. Tilsett en løsning inneholdende 2,5 g N-(S-4-fthalimido-2-hydroxybutyryloxy)-succinimid i 10 ml dimethylformamid dråpevis og under omrøring. Omrør blandingen over natten ved omgivende temperatur og konsentrer deretter til et residuum 1 vakuum. Kromatografer residuet over 160 g silicagel, eluer med den nedre fase av et kloroform:methanolrkonsen-trert ammoniumhYdroxyd (1:1:1) løsningsmiddelsystem. Kombiner og fordamp fraksjoner inneholdende hovedkomponenten av reaksjonen (bestemt ved TLC på silicagelplater) og. erhold derved 1-N-(S-4-f thalimido-2-hydroxybutyryl) -5-epi.-azido-5-deoxyverdami.cIn. Erhold på lignende måte 1-N- (S-4-f thalimido-2-hydroxybuturyl.)i-5-epiverdamicin.

(b) 1- N-( S- 4- amino- 2- hydroxybutyryl)- 5- epi- azido- 5-deoxyverdamicin

Oppløs produktet fra eksempel 17-G(3a) i 40 ml ethanol og tilsett 0,2 g hydrazinhydrat. Kok løsningen under tilbakeløp i. 3 timer, fordamp deretter 'til tørrhet i vakuum. Kromatografer residuet over 160 g silicagel og eluer med den nedre fase av et kloroform:methanol:konsentrert ammoniumhydroxyd (1:1:1) løsningsmiddelsystem. Kombiner og fordamp fraksjoner inneholdende hovedkomponenten av fraksjonen (bestemt ved TLC på silicagelplater) og erhold derved 1-N-(S-4-amino-2-hydroxybutyryl)-5-epi-azido-5-deoxyverdamicin. Erhold på lignende måte 1-N-(S-4-amino-2-hydroxybutyryl-)-5-epiverdamicin.

Foreliggende oppfinnelse innbefatter innen dets ramme farmasøytiske komposisjoner omfattende derivatene av 4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptaminene gentamicin A, gentamicin B, gentamicin B-^, gentamicin C^, gentamicin C^a-/ gentamicin Q.^, gentamicin C. 2a' 9entami-c;Ln C2b'9entamicin X2'tobramYcin/verdamicin, kanamycin A, kanamycin B, 3<1>,4'-dideoxykanamycin B, Antibiotikum G-52, Antibiotikum 66-4OB, Antibiotikum 66-40D, Antitiobikum G-418, Antibiotikum JI-20A, Antibiotikum JI-20B

og sisomicin, hvori 2-deoxystreptamindelen er erstattet med en 1,3-diaminocyclitol av formelen:

hvori formelen R er hydrogen eller en gruppe . CH2Y hvor Y,. er hydrogen, alkyl, alkenyl, cyeloalkyl, cycloalkylalkyl, hydroxyalkyl, aminoalkyl, N-alkylaminoalkyl, aminohydroxyalkyl., N-alkylaminohydroxyalkyl, fenyl, benzyl eller tolyl, hvilke, alifatiske radikaler har opp til 7 carbonatomer, og hvis de er substituert med amino og hydroxy, bærer substituentene på forskjellige carbonatomer, og hvor X er hydroxy, azido eller amino, forutsatt at når det gjelder derivater av sisomicin, er substi-tuent X azido eller amino, eller de farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter derav med en forenlig, farmasøytisk aksep-tabel bærer eller belegg. Også innbefattet innen oppfinnelsen er en metode for fremkalling av en antibakteriell respons i. et varmblodig dyr ■•som har en mottagelig bakterieinfeksjon som omfatter administrering av en ikke-toksisk, antibakteriell effektiv mengde av et ovenfor angitt derivat til dyret.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen og de ikke-toksiske, farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter derav er bredspektrede antibakterielle midler som fordelaktig utviser aktivitet overfor mange organismer som er resistente overfor deres 5-hydroxyforløpere. Således kan forbindelsene ifølge oppfinnelsen anvendes alene eller i kombinasjon med andre antibiotiske midler for å forhindre veksten eller redusere antallet av bakterier i forskjellige omgivelser. De kan f.é'ks. anvendes for å desinfisere laboratorieglassvarer, dentalt og medisinsk utstyr forurenset med Staphylococcus aureus eller andre bakterierier som inhiberes av aminoglycosidene ifølge oppfinnelsen. Aktivi-teten av forbindelsene ifølge oppfinnelsen overfor gramnegative bakterier gjør dem anvendbare for å bekjempe infeksjoner bevir-ket av gramnegative organismer, f.eks. arter av Proteus og Pseudomonas. Forbindelsene, f.eks. 5-epi-azido- eller 5-epi-amIno-5-deoxysisomicin, 5-epi-azido- eller 5-epiamino-5-deoxy verdamicin./5-epI.gentamicin og 5-epigentamicin C^a kan anvén-des innen veterinær-området/i særdeleshet ved behandling av mastitis i kveg og Salmonella Indusert diaré i husdyr slik som hunn og katt.

Det forbedrede spekter til forbindelsene ifølge pppfin- , nelsen består i en øket styrke overfor mange organismer som er resistente overfor moderforbindelsen. Således er f.eks. forbindelser ifølge oppfinnelsen, f.eks. 5-epi-4-0-aminoglycosyl-6-0-garosaminyl-2-déoxystreptamirier eller 5-epI-amino-4-0-amino— glycosyl-6-0-garosåminyl-2/5-dideoxystreptaminer mer aktive overfor mange organismer som inaktiverer moderantlbiotikaene'. ved acetylering av 3-aminogruppen og/eller adenylylering av 2'-hydroxylgruppen. Av disse utviser noe anti-protozoal, anti-amøbisk og antthelmintiske egenskaper. 1-N-alkyl-derivatene ifølge oppfinnelsen, i særdeleshet l-N-ethyl-5-epi-4-0-aminoglycosyl-6-0-garosaminyl-2-deoxystreptaminene og l-N-ethyl-5-epi-amino-4-0-aminoglycosyl-6-0-garosaminyl-2, 5-dideoxystreptaminene utviser også forbedret spekter overfor Pseudomonas samnenlignet med deres 1-N-usubstituerte forløpere som har den normale konfi-gurasjon ved C-5.

Særlig verdifulle forbindelser ifølge oppfinnelsen er 5-epi-4-0-aminoglycosyl-6-0-garosaminyl-2-deoxystreptaminer., spesielt 5-epi-derivatene av gentamicin CX ,/ gentamicin CX . ei/ gentamicin C2, gentamicin C2a/gentamicin C,,^, ver<^amicin/ Antibiotikum G-52 og Antibiotikum 66-40D7og 5-epi-amino- og 5-epi-azido-4-0-aminoglycosyl-6-0-garosaminyl-2,5-dideoxystrep-taminer, i særdeleshet derivatene av gentamicin C-^, gentamicin

C, , gentamicin C0, gentamicin C» , gentamicin C„, , sisomicin,

x az zazd

verdamicin, Antibiotikum G-52 og Antibiotikum 66-40D. Disse forbindelser er bredspektrede antibakterielle midler som er aktive overfor grampositive bakterier (f.eks. Staphylococcus aureus) og gramnegative bakterier (f.eks. Escherichia coli og Pseudomonas aeruginosa) som bestemt ved standard fortynningstester, innbefattet bakterier som er resistente overfor moderforbindelsene. I tillegg utviser 1-N-ethyl-derivatene av de foregående aminoglycosider forbedret styrke overfor Pseudomonas.

Generelt vil den dose som administreres av derivatene av 4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptaminene være avhengig av alder og vekt av den dyreart som behandles, administrerings-måten og typen og strengheten av bakterieinfeksjonen som skal forhindres eller reduseres. Generelt vil det anvendes en dose av derivatene av 4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptaminene for å bekjempe en gitt bakteriell infeksjon som er lik doserings-kravene for tilsvarende 4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptaminer.

Derivatene av 4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxystrepta-minene og de farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter derav kan administreres oralt. De kan også påføres topisk i form av salver, både hydrofile og hydrofobe, i form av lotions som. kan-være vandige, ikke-vandige eller av emulsjonstypen eller i form av kremer. Farmasøytiske bærere som er anvendbare for fremstilling av slike formuleringer vil innbefatte for eksempel slike substanser som vann, oljer, fett, polyestere, polyoler bg lignende .

For oral administrering kan forbindelsene ifølge oppfinnelsen bearbeides i form av tabletter, kapsler, eliksirer eller lignende eller de kan også iblandes med dyrefor. Det er 1 disse doseringsformer at de antibakterielle midler er mest effektive for behandling av bakterieinfeksjoner i den gastro-intestinale traktus, hvilke infeksjoner fremkaller diaré.

Generelt vil topiske preparater inneholde: fra 0,1

til 3,0 g aktiv bestanddel pr. 100 g salve, krem eller lotion. Topiske preparater påføres forsiktig på lesioner 2 til 5 ganger pr. dag.

De antibakterielle midler ifølge oppfinnelsen kan anvendes i væskeform slik som løsninger, suspensjoner og lignende for otisk og optisk anvendelse og kan også administreres paren-teralt via intramuskulær injeksjon. Den injiserbare løsning eller suspensjon vil vanligvis administreres med fra 1 mg til 10 mg antibakterielt middel pr. kg kroppsvekt pr. dag oppdelt i 2 til 4 doser. Den nøyaktige dose avhenger av graden og streng- . heten av infeksjonen, den infiserende organismes mottagelighet overfor det antibakterielle middel og de individuelle karakte-ristika til den dyreart som behandles.

De etterfølgende formuleringer eksemplifiserer enkelte av de doseringsformer i. hvilke de antibakterielle midler ifølge oppfinnelsen kan anvendes:

5 %.overskudd

I den ovenfor angitte formulering kan den aktive bestanddel erstattes med den samme mengde av 5-epi-amino-5-deoxygentamicin C^&.

Prosedyre

Fremstill en oppslemming bestående av 5-epigentamicin C, (eller 5-epi-amino-5-deoxygentamicin Cl. a) lactose og poly-vinylpyrrolidon. Støvtørk oppslemmingen. Tilsett maisstivelse og magnesiumstearat. Bland og press til tabletter.

Formulering 2

Prosedyre

(1) Smelt petrolatumet.

(2) . Bland 5-epigentamicin Ci , a, methylparaben og propylparaben med ca. 10 % av det smeltede petrolatum.

(3) Førr. blandingen gjennom en kolloidmølle.

(4)1 Tilsett resten av petrolatumet under omrøring og av-kjøl blandingen inntil den blir halvfast. Ved dette trinn kan produktet anbringes i egnede beholdere.

Salver av andre forbindelser ifølge oppfinnelsen fremstilles" ved å anvende en ekvivalent mengde av slike forbindelser, f .eks . 5-?epi.-azido-5-deoxygentamicin C^a, istedenfor 5-epigentamicin Ci, a i det foregående eksempel og følge den prosedyre som er angitt ovenfor.

Formulering 3

Prosedyre: for en 50 liters sats

Tilsett ca. 35 liter vann for injeksjon til et egnet rustfritt stålkar utstyrt med varmemantel og oppvarmet til ca. 70° C. Tilsett methylparaben og propylparaben til det oppvarme-de vann for injeksjon og oppløs under omrøring. Når parabenene er fullstendig løst, avkjøl innholdet i tanken til 25 - 30° C ved sirkulering av kaldt vann gjennom tankmantelen. Spyl løs-ningen med nitrogengass i minst 10 minutter og hold den dekket med nitrogen under den etterfølgende bearbeidelse. Tilsett og oppløs dinatrium-EDTA og natriumbisulfit. Tilsett og oppløs 5-eplgentamicin C-^-sulfat. Bring satsen opp til 50 liter med vann for injeksjon og omrør inntil det er homogent.

Filtrer under sterile betingelser løsningen gjennom et egnet bakterietilbakeholdende filter og oppsaml filtratet i en oppfyllingstank. Fyll filtratet aseptisk i sterile pyrogen-fri ampuller, og forsegl.

På lignende måte kan injiserbare løsninger av andre forbindelser ifølge oppfinnelsen og spesielt syreaddisjonssalter av slike forbindelser fremstilles ved anvendelse av en ekvivalent mengde av slike forbindelser, f.eks. 5-epi-amino-5-deoxy-gentamtcin C, -sulfat, i stedet for 5-epigentamicin C, -sulfat

0 jl a x a

og ved a følge den prosedyre som er angitt ovenfor.

Claims

1. Fremgangsmåte for fremstilling av derivater av 4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptaminene gentamicin A, gentamicin B, gentamicin B^ , gentamicin Cj , gentamicin la, gentamicin C^ i gentamicin2a, gentamicin C2fc) , gentamicin X2 , tobramycin, verdamicin, kanamycin A, kanamycin B, 3',4 <1-> dideoxykanamycin B, Antibiotikum G-52, Antibiotikum 66-40B, Antibiotikum 66-40D, Antibiotikum G-418, Antibiotikum JI-20A, Antibiotikum JI-20B og sisomicin, hvori 2-deoxystreptamindelen er erstattet med 1,3-diaminocyclitol av formelen

hvori R 1 er en gruppe

hvor Y er hydrogen, alkyl, alkenyl, cycloalkyl, cycloalkyl-alkyl, hydroxyalkyl, aminoalkyl, N-alkylaminoalkyl, aminohydroxyalky1, N-alkylaminohydroxyalkyl, fenyl, benzyl eller tolyl hvilke alifatiske radikaler har opptil 7 car-conatomer, og hvis disse er substituert med amino og hydroxy, bærer substituentene på forskjellige carbonatomer, og hvor X er hydroxy, azido eller amino, forutsatt at når det gjelder derivater av sisomicin er substituenten X azido eller amino, og syre-addis jonssaltet derav, karakterisert ved at et derivat av en av de ovenfor angitte 4,6-di-O-(amino-glycosyl)-2-deoxy-^ treptaminer hvori 2-deoxy-streptamindelen er erstattet med en 1.3-diaminocvclitol av formelen

hvori X er som ovenfor angitt, og hvilket derivat kan ha amino-beskyttende grupper ved en hvilken som helst stilling forskjellig fra 1 stillingen, behandles med et acyleringsmiddel valgt fra en svre av formelen

hvor Y <1> er en gruppe som definert for Y, hvori enhver tilstedeværende amino eller hydroxygruppe, kan være beskyttet, i nærvær av et carbodiimid, og et reaktivt derivat av angitte syre, og om nødvendig, at alle tilstedeværende beskyttende grupper i molekylet fjernes, hvoretter det siste trinn etterfølges av isolering av derivatet som sådan eller som et syreaddisjonssalt.

2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at derivatet av 4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptaminet som behandles med acyleringsmidlet delvis nøytraliseres ved dannelse av et syreaddisjonssalt.

3. Fremgangsmåte ifølge krav 2, karakterisert ved at derivatet av 4,6-di-O-(aminoglycosyl)-2-deoxystreptaminet som behandles med acyleringsmidlet nøytraliseres med (n-1) ekvivalenter av syre, hvor n er antall aminogrupper i molekylet.

4. Fremgangsmåte ifølge hvilket som helst av kravene 1 til 3, karakterisert ved at X er som definert i krav 1, og er acetyl.

5. Fremgangsmåte ifølge hvilket som helst av kravene 1 til 3, karakterisert ved at X er som definert i krav 1 og R^ er S-4-amino-2-hydroxybutyryl.

6. Fremgangsmåte ifølge hvilket som helst av kravene 1 til 3, karakterisert ved at X er som definert i krav 1, og R^ er S-3-amino-2-hydroxypropionyl.