NO783180L - Fremgangsmaate for fremstilling av clavulansyre-etere - Google Patents

Description

Oppfinnelsen vedrører nye etere av klavulansyre, farma-

søytiske preparater som inneholder disse og en fremgangsmåte for fremstilling av dem.

I belgisk patentskrift nr. 847045 ble det åpenbart at

etere av klavulansyre kunne fremstilles ved omsetning av en ester

av klavulansyre med en diazoforbindelse eller et annet foretrings-

middel. Det er nå funnet at visse nye etere kan fremstilles ved en enkel reaksjon. Denne reaksjon er mer egnet for industrielle formål enn fremgangsmåten i henhold til belgisk patent nr. 847045

slik at produktene fra denne fremgangsmåte gir fordelen av lettere fremstilling i større skala. I tillegg gir forbindelser i hen-

hold til denne oppfinnelse et anvendelig område av i3-laktamase-inhiberende egenskaper og tjener således til å forbedre spektret av penicilliner og. cefalosporiner.

Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer forbindelsene av

formel (I) :

og salter og estere derav, hvor er et hydrogenatom eller en lavere alkyl-, aryl- eller aralkylgruppe, R2og R3er uavhengig ay hverandre hydrogen, aryl, aralkyl, lavere alkyl eller substituert lavere alkyl, eller R3er knyttet til R1slik at de danner en 4-, 5- eller 6-leddet ring, eller er knyttet til R2slik at de danner en 5- eller 6-leddet ring.

I denne beskrivelse betyr betegnelsen "lavere" at gruppen ikke inneholder mer enn 6 karbonatomer, og mer passende ikke mer enn 4 karbonatomer.

Ved anvendelse i denne beskrivelse betyr betegnelsen "aryl" en fenyl-, tienyl- eller furylgruppe eller en fenylgruppe som er substituert med fluor- eller kloratom eller en lavere alkyl- eller lavere alkoksygruppe.

Anvendt i denne beskrivelse betyr betegnelsen "aralkyl"

en lavere alkylgruppe som er substituert med en arylgruppe.

Anvendt i denne beskrivelse betyr betegnelsen "substituert alkyl" en lavere alkylgruppe som er substituert med en lavere alkoksygruppe, en aryloksygruppe, en karboksylsyregruppe eller et salt eller en lavere alkyl- eller aralkylester av nevnte karboksylsyregruppe eller av en aminogruppe eller en arylgruppe.

Anvendt i denne beskrivelse betyr betegnelsen "aryloksy-alkyl" en lavere alkylgruppe som er substituert med en O-arylgruppe.

Forbindelsen i henhold til oppfinnelsen har passende formel (II)

eller et salt derav, hvor R^er et hydrogenatom og R^er et hydrogenatom eller en aryl-, aralkyl-, lavere alkyl- eller substituert lavere alkylgruppe, eller R.^ og R3 ■ er forbundet slik at CHR^NH.CO.R^-andeleh danner en gruppe av subformel (a):

hvor R4er et hydrogenatom eller en NH.CO.-gruppe hvor R5er en lavere alkyl-, lavere alkoksy-lavere alkyl-, aryl-, aralkyl-eller aryloksyalkylgruppe. R5kan også være lavere alkoksy eller aryloksy.

En egnet under-gruppe av forbindelser av formel (II) er de av formel (III):

og salter og estere derav, hvor R fi er et hydrogenatom eller en aryl-, aralkyl-, lavere alkyl- eller substituert lavere alkylgruppe.

Rg. er gjerne et hydrogenatom; en alkylgruppe med opp til

4 karbonatomer; en alkylgruppe med opp til 4 karbonatomer som er substituert med en alkoksygruppe med opp til 4 karbonatomer; en fenylgruppe; en fenylgruppe som er substituert med et fluor-

eller kloratom eller en metyl- eller metoksylgruppe; en benzylgruppe; eller en benzylgruppe som er substituert med et fluor-eller kloratom eller en metyl- eller metoksylgruppe.

Foretrukne verdier for Rg inkluderer metylgruppen, etylgruppen og fenylgruppen.

En ytterligere egnet under-gruppe av forbindelser av

formel (II) er de som har formel (IV):

og salter og estere derav, hvor R^er som definert med hensyn til subformel (a).

R^er gjerne et hydrogenatom.

R4er gjerne en NH.CO.R7-gruppe, hvor R7er en alkylgruppe. med opp til 4 karbonatomer; en alkylgruppe med opp til 4 karbonatomer som er substituert med en alkoksygruppe med opp til 4 karbonatomer; en arylgruppe; en aralkylgruppe; eller en aryloksyalkylgruppe. Likeledes kan R? være en alkoksygruppe med opp til 4 karbonatomer eller en aryloksygruppe.

Foretrukne verdier for R? inkluderer metyl, etyl, fenyl, benzyl, fenoksymetyl, p-metoksyfenyl, p-metoksyfenoksymetyl, etoksyetyl og lignende grupper.

Spesielt egnede verdier for R? inkluderer fenoksymetyl- og benzylgruppene.

En ytterligere egnet under-gruppe av forbindelser av formel (I) er den som har formel (V):

og salter og estere derav, hvor Rg er en lavere alkyl-, aryl-

eller aralkylgruppe, og R^ er et hydrogenatom eller en aryl-, aralkyl-, lavere alkyl- eller substituert lavere alkylgruppe.

Egnede verdier for RQinkluderer metyl, etyl, n-propyl, n-butyl og fenyl. En foretrukken verdi for Rg er metylgruppen.

Rg er gjerne et hydrogenatom; en alkylgruppe med opp til

4 karbonatomer; en alkylgruppe med opp til 4 karbonatomer substituert med en alkoksygruppe med opp til 4 karbonatomer; en fenylgruppe; en fenylgruppe substituert med et fluor- eller kloratom eller en metyl- eller metoksylgruppe; en benzylgruppe; eller en benzylgruppe som er substituert med et fluor- eller kloratom eller en metyl- eller metoksylgruppe.

Foretrukne verdier for Rg inkluderer metylgruppen, etylgruppen og fenylgruppen.

En annen egnet under-gruppe av forbindelser av formel (I)

er den som har formel (VI):

og salter og estere derav, hvor R^Qer et hydrogenatom eller en lavere alkylgruppe og R^ er en lavere alkylgruppe substituert med en aminogruppe og eventuelt med en arylgruppe, eller R^ og R1]Ler forbundet slik at CHR-^Q-NH-CO-R-^-andelen utgjør en gruppe av subformel (b):

R10er fjerne et hydrogenatom. R^ er gjerne metyl, etyl, n-propyl eller n-butyl, idet metyl og etyl foretrekkes.

En egnet under-gruppe av forbindelser av formel (VI) er den som har formel (VII):

og salter og estere derav, hvor er en alkylgruppe med opp til 4 karbonatomer substituert med en amihogruppe, eller R-^ er en alkylgruppe med opp til 4 karbonatomer substituert med en aminogruppe og med en arylgruppe.

Foretrukne verdier for R-^ inkluderer slike grupper hvor aminosubstituenten er på a-karbonatomet, for eksempel aminometyl, a-aminoetyl, a-aminobenzyl og lignende grupper.

En ytterligere egnet under-gruppe av forbindelser av formel (VI) er forbindelsen av formel (VIII):

og salter og estere derav. Forbindelsen av formel (VIII) kan ha cis- eller trans-stereokj emi omkring det monocykliske /3-laktam eller kan være i form av blandinger av slike forbindelser.

En annen egnet under-gruppe av forbindelser av formel (i) er de som har formel (IX):

og salter og estere derav, hvor R^2er et hydrogenatom eller en lavere alkyl-, aryl- eller aralkylgruppe, R-^er aryl-, aralkyl-,

lavere alkyl- eller substituert lavere alkylgruppe, og R^4er en lavere alkylgruppe eller er forbundet med R-^til en 4-, 5- eller 6-leddet ring eller er forbundet med R^3til en 5- eller 6-leddet ring.

Egnede acykliske verdier for R-^inkluderer hydrogen-

atomet og metyl-, etyl-, n-propyl-, n-butyl- og fenylgruppene. Hydrogenatomet er en spesielt egnet acyklisk verdi for R^2, noe

også metylgruppen er.

Egnede acykliske verdier for R^3inkluderer en alkyl-

gruppe med opp til 4 karbonatomer; en alkylgruppe med opp til 4 karbonatomer substituert med en alkoksygruppe med opp til 4 karbonatomer; en fenylgruppe; en fenylgruppe som er substituert med et fluor- eller kloratom eller en metyl- eller metoksyl-

gruppe; en benzylgruppe; eller en benzylgruppe som er substituert med et fluor- eller kloratom eller en metyl- eller 'metdksylgruppe.

Foretrukne acykliske verdier for R^3inkluderer metylgruppen, etylgruppen .og fenylgruppen og den eventuelt saltdannede eller forestrede karboksymetylgruppe.

Egnede verdier for -CHR12-N(R13)C0R14når R12 og R14er knyttet sammen, inkluderer dem som har subformel (c):

hvor n er 1, 2 eller 3 og R13er en acyklisk del som definert med hensyn til formel (VII).

Egnede verdier for -CHR12-N-(R13)C0R14 når R13og R14 er knyttet sammen, inkluderer dem som har subformel (d):

hvor m er 1 eller 2 og R12er en acyklisk del som definert med hensyn til. formel (IX).

Med hensyn til subformel (c) er n fortrinnsvis lik 1 og R13en eventuelt saltdannet eller forestret karboksymetylgruppe.

Med hensyn til subformel (d) er R fortrinnsvis et hydrogenatom.

Et foretrukket aspekt ved oppfinnelsen tilveiebringes ved forbindelsen av formel (X):

og salter og estere derav. Salter av forbindelsen av formel (X) har vist seg å produsere gode blodspeil av/3-laktamase-inhibitoren etter administrering ad oral eller parenteral vei. Det vil således forstås at de farmasøytisk akseptable salter.av forbindelsen av formel (X) er et spesielt foretrukket aspekt ved oppfinnelsen.

Ytterligere foretrukne aspekter ved oppfinnelsen tilveiebringes av forbindelsene av formlene (XI) - (XIV):

16

og salter og estere derav, hvor R er H eller CC^H.

Forbindelsene av formel (i) presenteres gjerne som den

frie syre i og for seg eller som et salt derav.

Forbindelsene av formel (I) presenteres gjerne som den

frie syre, men mer fortrinnsvis er forbindelsene av formel (I)

i form av et salt.Egnede salter inkluderer alkali- eller jordalkalimetallsalter, f.eks. litium-, natrium-, kalium-,

kalsium- eller magnesiumsaltene. Andre passende salter inkluderer ammoniumsaltet og salter av aminer, f.eks. lavere alkylaminsalter, f.eks. metylamin, etylamin, dimetylamin eller lignende salter, eller salter av cykliske baser, f.eks, pyrrolidin eller kvater-nære ammoniumsalter, f.eks. tetrametylammoniumsaltet.

Spesielt egnede salter inkluderer litium-, natrium-, kalium-, kalsium- og magnesiumsaltene.

Ét foretrukket salt er natriumsaltet. Et annet foretrukket salt er kaliumsaltet. Et ytterligere foretrukket salt er litiumsaltet. Enda et foretrukket salt er magnesiumsaltet. Et alternativt foretrukket salt er t-butylamin[ (CH^ ) ^CN^ ]-saltet.

Ovennevnte salter foretrekkes også med hensyn til forbindelsene av formlene (II), (III) og (VII) - (XII).

En unntagelse fra den foranstående regel inntreffer når forbindelsen av formel (i) inneholder en aminogruppe. Under denne omstendighet er forbindelsen av formel (i) helst zwitter-ionisk.

Egnede estere av forbindelsene av (i) - (XII) inkluderer dem som har subformlene (e) og (f):

hvor A"<*>" er en alkylgruppe med 1-6 karbonatomer som eventuelt er

substituert med en alkoksyl- eller acyloksygruppe med 1-7 karbon-

2

atomer; A er en alkenylgruppe med opp til 5 karbonatomer eller er en fenylgruppe som eventuelt er substituert med fluor, klor, brom, .nitro eller alkyl eller alkoksyl med opp til 4 karbonatomer; og A 3 er et hydrogenatom, en alkylgruppe med opp til 4 karbonatomer eller en fenylgruppe som eventuelt er substituert med fluor, klor, brom, nitro eller alkyl eller alkoksyl med opp til 4 karbonatomer.

Visse foretrukne grupper A inkluderer metyl, etyl, metoksymetyl, acetoksymetyl, acetoksyetyl, ftalidyl, etoksy-karbonyloksymetyl, a-etoksykarbonyloksyetyl, pivaloyloksymetyl og lignende grupper.

Visse foretrukne grupper A inkluderer fenyl, metoksyfenyl og nitrofenyl. En spesielt foretrukket del A 3 er hydrogenatomet.

Saltene av forbindelsene av formlene (I) - ■ (XIV) betraktes primært som farmasøytiske midler, selv om de også kan anvendes som mellomprodukter, for eksempel ved fremstilling av andre salter eller ved fremstilling av morsyren eller ved fremstilling av estere. Forbindelsene av formlene (I) - (XIV) betraktes primært som mellomprodukter ved fremstilling av de ikke-toksiske salter, men kan også anvendes som farmasøytiske midler.

Forbindelsene i henhold til oppfinnelsen i hvilke side-kj ede-karbonatomet mellom oksygen- og nitrogenatomene er substir-tuert med annet enn hydrogen, kan være i R- eller S-formene, selv om det for bekvemmelighets skyld er fordelaktig med R,S-blandingen.

Oppfinnelsen tilveiebringer også et farmasøytisk preparat som omfatter en forbindelse i henhold til oppfinnelsen og en farmasøytisk akseptabel bærer.

Preparatene i henhold til oppfinnelsen inkluderer slike som er i en form som er tilpasset for oral, topisk eller parenteral bruk og kari .anvendes for behandling av infeksjon hos pattedyr, inklusive mennesker.

Egnede former av preparatene i henhold til oppfinnelsen inkluderer tabletter, kapsler, kremer, siruper, suspensjoner, løsninger, rekonstituerbare pulvere og sterile former som er egnet for injeksjon eller infusjon. Slike preparater kan inneholde ' konvensj onelle farmasøytisk akseptable materialer, f.eks. fortynningsmidler, bindemidler, farvemidler, aromastoffer, konserveringsmidler, smuldremidler og lignende i overensstemmelse med konvensjonell farmasøytisk praksis på den måte som forstås av fagmannen på området når det gjelder fremstilling av antibiotika, f. eks. /3-laktamholdige antibiotika. Slike prepa-

rater kan settes sammen på kjent måte, f.eks. ved blanding. Fortrinnsvis fremstilles slike preparater i tørre omgivelser og ut fra tørre ingredienser.

Injiserbare eller infuserbare preparater av salter av en forbindelse av formel (I) er spesielt egnet da høye blodspeil av en forbindelse av formel (I) kan inntreffe etter administrering ved injeksjon eller infusjon. Således omfatter ett foretrukket preparat-aspekt i henhold til oppfinnelsen et injiserbart salt av en forbindelse av formel (I) i steril form,.for eksempel det sterile natrium- eller kaliumsalt. Preparatet er helst i enhetsdose-form.

Enhetsdose-preparater som omfatter en forbindelse av

formel (I) eller et salt eller en ester derav,.som - er tilpasset for oral administrering, utgjør et ytterligere foretrukket preparataspekt ved oppfinnelsen.

Preparater i henhold til oppfinnelsen omfatter fortrinns-

vis et ikke-toksisk salt av en forbindelse i henhold til oppfinnelsen, f.eks. et natrium- eller kaliumsalt eller et salt med et ikke-toksisk amin. Et foretrukket salt for denne.anvendelse er natriumsaltet. Et annet foretrukket salt for denne anvendelse er kaliumsaltet.

Forbindelsen av formel (I) eller dets salt eller esteren

■ kan være til stede i preparatet som eneste terapeutiske middel

eller kan være til stede sammen med andre terapeutiske midler,

f", eks . et /3-laktam-antibiotikum. Egnede /3-laktam-antibiotika for innlemmelse i preparatene i henhold til oppfinnelsen inkluderer benzylpenicillin, fenoksymetylpenicillin, carbenicillin,

azidocillin, propicillin, ampicillin, amoxycillin, epicillin, ticarcillin, cyclacillin, cefatriazin, pirbenicillin, a-sulfonyloksybenzylpenicillin, cefaloridin, cefalotin, cefazolin, cefalexin, cefacetril, cefamondol-nafat, cefapirin, cefradin,

4- hdroksycefalexin, cefaparol, cefaloglycin, og andre velkjente penicilliner og cefalosporiner eller pro-droger for disse, f.eks. hetacillin, metampicillin, 4-acetoksyampicillin, acetoksymetyl-, a-etoksykarbonyloksyetyl-, pivaloyloksymetyl- eller ftalidyl-esterne av ampicillin eller amoksycillin eller fenyl-, tolyl-

eller indanylesterne av carbenicillin eller ticarcillin e.l.

Slike forbindelser anvendes ofte i form av et hydrat og/eller

salt, f.eks. et natrium- eller kaliumsalt av en karboksylgruppe, eller et hydroklorid av aminfunksjoner og lignende.

Naturligvis, hvis penicillinet eller cefalosporinet som

er til stede i preparatet, ikke er egnet for oral administrering,

så vil preparatet bli tilpasset for parenteral administrering.

Ved tilstedeværelse sammen med et cefalosporin eller penicillin kan forholdet mellom en forbindelse av formel (I)

eller dens salt eller ester som er til stede, og det annet antibakterielle middel variere over et vidt område av forhold, f.eks.

3:1 til 1:10 og fordelaktig være fra 1:1 til 1:8, f.eks. 1:2, 1:3, 1:4, 1:5 eller 1:6.

Den samlede mengde av forbindelse av formel (I) i hvilken

som helst enhetsdose-form vil normalt være mellom 25 og 1000 mg og vil vanligvis være mellom 50 og 500 mg, f.eks. 62,5, 100",' 125, 150, 200 eller 250 mg.

Preparater i henhold til oppfinnelsen kan anvendes for behandling av infeksjoner i bl.a. åndedrettsveiene, urinveiene og det bløte vev hos mennesker og ved mastitis hos kveg.

Normalt vil mellom 50 og 1000 mg av forbindelsene i hen-

hold til' oppfinnelsen bli administrert hver behandlingsdag, men vanligere vil mellom 100 og 750 mg av forbindelsene i henhold til oppfinnelsen bli administrert pr. dag, f.eks. som 1-6 doser, vanligere 2-4 doser, f.eks. som 3 doser.

Penicillinet eller cefalosporinet i synergistiske preparater i henhold til oppfinnelsen vil normalt være til stede i tilnærmet den mengde som de vanligvis anvendes i.

Spesielt foretrukne preparater i henhold til oppfinnelsen

vil inneholde 150-1000 mg amoxycillin, ampicillin eller en pro-

droge for disse, og 25-500 mg av en forbindelse av formlene

(I) - (XIV) eller et salt eller en ester derav, og mer passende 200-750 mg amoxycillin eller et salt derav og 50-250 mg av et salt av en forbindelse av formlene (I) - (XIV).

Mest egnet anvendes et farmasøytisk akseptabelt salt av forbindelsen av formel (X).

Mest egnet vil denne form av preparatet omfatte

ampicillin eller dets salt eller amoxycillin eller dets salt. Ampicillinet er gjerne til stede som ampicillin-anhydrat, ampicillin-trihydrat eller natrium-ampicillin. Amoxycillinet er gjerne til stede som amoxycillin-trihydrat eller natrium-

amoxycillin. De oralt administrerbare preparater vil normalt omfatte zwitterionet, og det■ injiserbare preparat vil normalt omfatte natriumsaltet.

Vektmengdene av antibiotika i slike preparater uttrykkes på basis av antibiotikumet som sådant, som er teoretisk til-gjengelig fra preparatet.

Preparatene i henhold til oppfinnelsen kan anvendes for behandling av infeksjoner som forårsakes av stammer av gram-positive og gram-negative bakterier, f.eks. Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Klebsiella aerogenes, Haemophilus influenzae, Neisseria gonhorrea, Proteus mirabilis, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Bacteroides fragilis og lignende, inklusive mange penicillinase-produserende stammer.

Preparatene i henhold til oppfinnelsen kan administreres slik at den terapeutiske effekt oppnås uten noen klare tegn" "pa akutt toksisitet.

Preparatene i henhold til oppfinnelsen blir best når de lages under tørre betingelser.

Oppfinnelsen tilveiebringer en fremgangsmåte for fremstilling av forbindelser av formel (I) eller et salt eller en ester derav, omfattende omsetning av en ester av klavulansyre med en forbindelse av formel (XV):

hvor R-^, R2°9R3er som definert med hensyn til formel (I) og Y er en forskyvbar gruppe; og deretter, om ønskes, omdannelse av den således produserte ester til den frie syre eller et salt derav.

Egnede andeler Y inkluderer konvensjonelle forskyvbare

15

grupper, f.eks. karboksylatesterne, f.eks. O.CO.R eller. O.CO.OR 15 hvor R 15 er en inert organisk gruppe, f.eks. en lavere alkylgruppe (f.eks. en,metyl-, etyl-, propyl- eller butylgruppe), en fenyl-, benzyl-, metoksyfenyl-, metylfenyl-, halogenfenyl-, nitrofenyl- eller lignende gruppe; eller en 0.CO.H-gruppe; eller en annen del som er forskyvbar ved hjelp av en nukleofil, f.eks. et halogenatom, f.eks. klor eller brom; eller en hydroksylgruppe.

Generelt vil fremgangsmåten i henhold til oppfinnelsen finne sted i nærvær av en katalysator, f.eks. sinkdiacetat eller dets kjemiske ekvivalent når Y er en karboksylatester, eller i nærvær av en ikke-nukleofil base og/eller sølvoksyd og/eller et løselig sølvsalt når Y er et halogenatom, eller i nærvær av en

Lewis-syre, f. eks.' bortrif luorid (f. eks. i form av eteratet)

eller et dehydratiseringsmiddel, f.eks. p-toluensulfonsyre når Y er en hydroksylgruppe.

Naturligvis vil en eventuell aminogruppe som er til stede

i forbindelsen av formel (XV) være beskyttet under foretringen,

og den beskyttende gruppe fjernes deretter.

Foretringen kan utføres ved en ikke-ekstrem nedsatt, omgivelses- eller forhøyet temperatur, f.eks. fra -10 til 120°C;

for eksempel kan temperaturen for reaksjonen forhøyes svakt eller moderat (f.eks. 30-100°C) ved anvendelse av sinkacetat som katalysator, eller senkes (f.eks. 0-15°C) når BF^ anvendes som katalysator.

Foretringsreaksjonen utføres generelt i et inert ikke-hydroksylisk miljø, f.eks. et hydrokarbon-, halogenhydrokarbon-eller esterløsningsmiddel, f.eks. benzen, toluen, metylenklorid, etylacetat, kloroform eller blandinger derav.

Etter at reaksjonen er ferdig, kan den ønskede ester oppnås ved inndampning av løsningsmidlet og rensning av produktet kromatografisk, for eksempel ved gradienteluering under anvendelse av løsningsmiddelblandinger, f.eks. etylacetat/cykloheksan eller etylacetat/petroleter (60-80°) under anvendelse av silikagel eller lignende som stasjonær fase.

I et ytterligere aspekt tilveiebringer oppfinnelsen også

en fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse av formel (I) eller et salt derav, omfattende deforestring av en ester av forbindelsen av formel (I) som eventuelt har nærvær av en base.

En slik deforestring kan innebære hydrolyse eller hydrogenolyse. Således kan for eksempel en ester, f.eks. en metyl-, etyl-, metoksymetyl-, etoksymetyl-, acetoksymetyl- eller lignende ester utsettes for mild basehydrolyse slik at man får et salt' av

en forbindelse av formel (i). Disse estere kan gjerne hydro-lyseres ved opprettholdelse av pH-verdien til miljøet ved 7,5-9 inntil hydrolysen er ferdig. Mest passende anvendes en lett hydrolyserbar ester, f.eks. metoksymetylesteren, ved denne fremgangsmåte. pH-verdien kan opprettholdes i det ønskede område i en pH-stat ved tilsetning av en løsning eller suspensjon av en base, f.eks. LiOH, NaOH, KOH, Ca(0H)2, Mg(0H>2, NaHC03, Na2C03, MgC03eller lignende, i en hastighet som forhindrer akkumulering

av overskudd av base som ville bevirke at pH-verdien økte uakseptabelt.

Egnede metoder for hydrogenolyse av estere av forbind-

elsene av formel (I) inkluderer hydrogenering i nærvær av en overgangsmetallkatalysator. Egnede hydrogenolyserbare estere av forbindelsen av formel (I) inkluderer slike hvor ester-andelen

2 3

har subformel CC^CHA A som tidligere definert, og av disse er benzyl- og p-metoksybenzylesterne spesielt egnet. Også egnet er ip-nitrobenzylesteren.

Hydrogentrykket som anvendes ved reaksjonen, kan være

lavt, middels eller høyt, men generelt foretrekkes et tilnærmet atmosfærisk eller lett superatmosfærisk trykk av hydrogen. Overgangsmetallkatalysatoren som anvendes, er fortrinnsvis

palladium, for eksempel palladium på trekull, palladium på bariumsulfat, palladium på kalsiumkarbonat eller lignende. Hydrogeneringen kan utføres i ethvert passende løsningsmiddel som esteren er løselig i, f.eks. tetrahydrofuran, etylacetat,■etanol, vandig etanol eller lignende. Hvis denne hydrogenering utføres i nærvær av en base, så fremstilles et salt av forbindelsene av formel (I). Egnede baser for innlemmelse inkluderer NaHCO^, Na2C03, K2C03, CaC03, MgC03, LiHC03, N(C2H5)3.H02C.CH3 og lignende. Hvis ingen base er til .stede, så fører hydrogeneringen til fremstilling- av en syre av formel (I) som deretter kan bli nøytrali-

sert om ønskes til et salt.Egnede baser for en slik nøytralisa-sjon inkluderer LiOH, NaHC03, KOH, Ca(OH)2, Ba(OH)2, Mg(OH)2,

NH4OH, N(C2H5)3, N(C2H5)3.H02 CCH3, Na-etylheksanoat, K etylheksanoat og lignende, f.eks. MgO og NH2C(CH3)3.^

Litiumsaltene av forbindelsene i henhold til formel (I)

hår tendens til å være lettere å fremstille i ren krystallinsk form enn andre salter av forbindelsene av formel (i). Det er derfor ofte bekvemt først å danne litiumsaltet og deretter om-

danne dette til et ytterligere salt ved ionebytting, for eksempel ved å føre en løsning av litiumsaltet gjennom et sjikt av en kationebytteharpiks i natrium-, kalium-, kalsium-, ammonium-

eller lignende form. Egnede kationebytteharpikser inkluderer "Amberlite" IR 120 og ekvivalente harpikser. Et annet salt som er egnet for anvendelse som'mellomprodukt på denne måte, er t-butylaminsaltet.

Zwitterionene av formlene (VI) - (VIII) dannes normalt

ved en samtidig deforestrings- og debeskyttelsesreaksjon. En deforestring/debeskyttelsesreaksjon som er bekvemt for labora-toriebruk, omfatter den katalytiske hydrogenering av en

forbindelse som inneholder en benzyloksykarbonylaminogruppe og

en benzylester. Denne reaksjon anvender fortrinnsvis en palladiumkatalysator, f.eks. palladium på trekull, og kan anvende et lavt, omgivelses- eller høyt hydrogentrykk. Hydrogeneringen utføres generelt i et organisk løsningsmiddel ved en ikke-ekstrem temperatur, for eksempel i vandig tetrahydrofuran ved omgivelsestemperatur.

Andre aminbeskyttende grupper som kan anvendes, inkluderer azidogruppen, den protonerte aminogruppe, enamin-beskyttede former og lignende. Disse kan også fjernes ved milde fremgangs-måter, f.eks. reduksjon av et azid, hydrolyse av et enamin (f.eks. som avledet fra en /3-ketosyreester, f. eks. etylacetoacetat) eller en lignende metode.

Krystallinske salter av forbindelsene av formel (I) kan være solvatert, for eksempel hydratisert. • ■ '•■TT

Saltene (for eksempel natriumsaltet) av forbindelsene av formel (I) kan omdannes til de tilsvarende estere på konvensjonell måte, for eksempel ved omsetning med et reaktivt halogenid i løsning i dimetylformamid eller et lignende løsningsmiddel.

Estere kan likeledes fremstilles ved omsetning i et inert løs-ningsmiddel av eri forbindelse av formel (I) med en diazoforbindelse eller med en alkohol i nærvær av et kondensasjons-fremkallende middel, f.eks. dicykloheksylkarbodiimid. Andre reagenser for anvendelse på denne måte inkluderer trietyloksonium-tetrafluorborat eller lignende. Egnede reaktive halogenider for anvendelse ved ovennevnte prosess inkluderer ftalidylbromid, pivaloyloksymetylbromid, benzylbromid, metyljodid og lignende. Aminofunksjoner vil normalt være beskyttet under reaksjonen.

En foretrukken fremgangsmåte i henhold til oppfinnelsen omfatter omsetning av en ester av klavulansyre med en forbindelse av formel (XVIII):

hvor R. er som definert med hensyn til formel (I), og Y er en v gruppe av formel O.CO.R 15 hvor R 15 er som definert med hensyn til

formel (XV); og deretter, om ønskes, omdannelse av den innled-ningsvis produserte ester av forbindelsen av formel (IV) til syren av formel (IV) eller dens salt.

Ved denne fremgangsmåte er R<15>mest egnet en lavere

alkyl-, aryl- eller aralkylgruppe.

Ved denne fremgangsmåte er Y"*" fortrinnsvis en acetoksy-gruppe.

Ved denne fremgangsmåte er R^fortrinnsvis hydrogen.

Denne fremgangsmåte kan istandbringes ved anvendelse av

de generelle reaksjonsbetingelser som er beskrevet tidligere.

Enda en annen foretrukken fremgangsmåte i henhold til oppfinnelsen omfatter hydrolyse eller hydrogenolyse av en hydrolyserbar eller hydrogenolyserbar ester av en forbindelse av formel (X) for frembringelse av syren av formel (X) eller et salt derav. Oppfinnelsen tilveiebringer'også forbindelser av formel (XIX):

og salter og estere derav, hvor Rnner som definert med hensyn til formel (VI) og R2 1 er en gruppe R^ som definert med hensyn til formel (VI) i hvilken aminogruppen er beskyttet. Disse forbindelser er nyttige som mellomprodukter.

For fremstilling av forbindelser' av formel (XIV) er det ofte bekvemt å utvikle den passende forbindelse av formel (XV) ved elektrolyse av dimetylformamid i nærvær av en ester av klavulansyre. En inert elektrolytt, f.eks. LiBF^ eller LiClO^, vil være til stede under elektrolysen.

Elektrolysen utføres gjerne ved passering av en strøm på 200-300 mA mellom et par platinafolie-elektroder anbrakt i en avstand av 1-5 mm. Eventuelt kan et inert fortynningsmiddel, f.eks. nitrometan, være til stede. Reaksjonstemperaturen opprettholdes på rundt 30-20°C ved anvendelse av utvendig kjøling.

Analoge forbindelser av formel (XV) kan likeledes ut-vikles ved elektrolyse av en forbindelse av formel R^Ct^N (R2) COR^'.

Esterne av forbindelsene av formel (XIX) er spesielt egnede mellomprodukter, og spesielt slike som er spaltbare ved hydrogenolyse, for eksempel benzyl- og de substituerte benzyl-estere. De forbindelser av formel (XIX) hvor den beskyttede aminogruppe er en benzyloksykarbonylaminogruppe, er også spesielt egnede mellomprodukter. Forbindelsene av formel (XIX) som inneholder begge disse trekk, foretrekkes.

Følgende eksempler illustrerer oppfinnelsen.

(OCHR^N(R2)COR^-sidekjedene [se formel (i)] som er illustrert i eksemplene, er spesielt godt egnet).

Eksempel ' 1

Benzyl- 9- 0-( azetidin- 2'- on- 4'- yl) klavulanat

Benzylklavulanat (5,78 g, 0,02 mol) (<±>)-4-acetoksyazetidin-2-on (1,29 g, 0,01 mol) og sinkacetat-dihydrat (0,218 g, 0,001 mol) ble oppvarmet under tilbakeløp i 50 ml benzen i 1,5 timer. Suspensjonen ble filtrert og filtratet konsentrert til lite volum i vakuum. Inndampningsresten ble fraksjonert på silikagel under eluering med etylacetat/cykloheksan (1:1) slik at man fikk det viskøse, oljeaktige produkt (2,42 g) i form av en blanding av to diastereo-isomerer; Vmaks(CHCl3), 1805, 1750-1775 (bred), og 1695 cm"<1>; n.m.r. <5 (CDClg) 2,91 (2H, m, 3 ' -CH_2) , 3,06 (1H, d,

J 16,5 Hz, 6/3-CH) , 3,53 (1H, dd, J 16,5 og 2,5 Hz, 6a-CH) ,

4,16 (2H, d, J 7,5 Hz, =CH-CH_2-) , 4,83 (1H, br.t., J 7,5 Hz, =CH-) , 5,02 (1H, m, 4'-CH), 5,18 (1H, br.s, 3-CH) , 5,23 (2H, s, -C02CH_2), 5,73 (1H, d, J 2,5 Hz, 5-CH), 7,08 (1H, br., NH), 7,40 ppm (5H, s, C6H5).

Eksempel 2

Natrium- 9- 0-( azetidin- 2'- on- 4'- yl) klavulanat

0,84 g benzyl-9-0-(azetidin-2'-on-4'-yl)klavulanat i

20 ral tetrahydrofuran ble hydrogenert over 10% Pd/C (0,28 g) ved omgivelsestemperatur og -trykk i 15 minutter. Etter dette tidsrom viste debenzyleringen seg (tic) å være fullstendig. Katalysatoren ble filtrert og filtratet konsentrert i vakuum slik at man fikk en klar, viskøs olje som var 9-0-(azetidin-2'-on-4'-yl)-klavulansyre. Behandling av denne olje med natriumhydrogenkarbonat (186 mg, 0,95 ekvivalenter) i 10 ml vann ga en. vandig løsning av den diastereo-isomere blanding av natriumsalter. Inndampning av vannet i vakuum ga en olje. Triturering med etanol og gjen-inndampning av løsningsmidlet i vakuum ble utført flere ganger slik at man fikk en halvfast rest. Triturering med eter ga da et hvitt, fast stoff (610 mg) som viste seg, ut fra de følgende spektroskopiske egenskaper, å være det ønskede produkt; Hnaks(KBr) 1750-1790, 1695 og 1620 cm<-1><$ (D20) ; (CH3CN intern standard ved 6= 2,00 ppm) 2,72 (1H, d, J 16 Hz, 3'-CH),

3,03 (1H, d, J 17,5 Hz, 6/3-CH) , 3,12 (1H, dd, J 3,5 og 16 Hz, 3'-CH), 3,52 (1H, dd, J 17,5 og 2,5 Hz, 6a-CH) , 4,16 (2H, d,

J 7,5 Hz, 9-CH2), 4,85 (1H, br.t., J 7,5 Hz, 8-CH), 4,92 (1H, br.s., 3-CH), 5,15 (lH, d, J 3,5 Hz, 4'-CH), 5,68 (lH,d, J 2,5 Hz,. 5-CH)...

Eksempel 3

Benzyl- 9- 0[ 3'-( S)- fenoksyacetamido- 2'- oksoazetidin- 4'-( S)- yl]-klavulanat og benzyl- 9- Q[ 3'-( S)- fenoksyacetamido- 2'- oksoazetidin-4'-( R)- yllklavulanat

En løsning av 1,734 g benzylklavulanat og 1,112 g 4-acetoksy-3-fenoksyacetamido-azetidin-2-on i 15 ml benzen ble behandlet med 87 mg sinkacetat og behandlet under tilbakeløp under anvendelse av en Dean og Stark-vannseparator i 1,5 timer. Blandingen ble så avkjølt og løsningsmidlet fjernet under vakuum. Produktene ble separert ved søylekromatografi under anvendelse

av gradienteluering (kiselgel, 1:1 etylacetat:cykloheksan som gikk over til 2:1 etylacetat:cykloheksan). Overskudd av benzylklavulanat ble først eluert, fulgt av benzyl-9-0[3'-(S)-fenoksyacetamido-2 ' -oksoazetidin-4 '( S ) -yl ] klavulanat (557 mg),

smp. 127-128°C (fra etylacetat/cykloheksan) .'

I.r. Vmaks (nujol) 3270, 1795,1775, 1755,1693 og 1665 cm<-1>. N.m.r. (S (CDCl3) 3,02 (lH, d, J = 17 Hz), 3,41 (1H, dd,J=3 og 17 Hz), 4,16 (2H, d, J=7 Hz), 4,44 (2H, s), 4,5-4,9 (2H, m),

5,06 (2H, bred s) 5,15 (2H, s), 5,63 (lH, d, J=?3 Hz), 6,2-7;5

(2H, meget bred, utskiftbar), 6,75-7,55 (10H, m).

Analyse: funnet: C, 61,73; H, 5,18; N, 8,24;

C26H25N3°8 krever: c'61,53; H, 4,97; N, 8,24.

Ytterligere eluering ga benzyl-9-0[3'-(S)-fenoksyacetamido-2 '-oksoazetidin-4'-(R)-yl]klavulanat [520 mg;

smp. 82-85° (fra etylacetat/cykloheksan)].

I.r. V IT13.. K.S (<n>ujol) 3280, 3170, 1802, 1780,1755,1692)og 1658 cm"<1>.. N.m.r. 6 (CDC13) 2,98 (lH, d, J=17 Hz), 3,39 (lH, dd, J=3 og

17 Hz) 4,07 (2H, d, J=7 Hz), 4,45 (2H, s), 4,67 (lH, bred t,

J=7 Hz), 4,95-5,06 (2H, m), 5,11 (2H, s) 5,35 (lH, kompleks d, J-9 Hz), 5,59 (1H, d, J=3 Hz), 6,7-7,7 (12H, m).

Analyse: funnet: C, 61,72; H, 5,17; N, 8,02;

CnrHocN,0o krever: C, 61,53; H, 4,97; N, 8,24.

(Produktene ble oppnådd fra løsning i elueringsløsningsmidlet ved inndampning av løsningsmidlet under redusert trykk.)

Eksempel 4

Benzyl- 9- 0( N- benzoylaminometyl) klavulanat

234 mg benzylklavulanat i 6 ml metylenkldrid ble behandlet med 122 mg N-hydroksymetylbenzamid i 6 ml etylacetat og avkjølt til 0°. Til den magnetisk omrørte løsning ble det tilsatt en krystall av p-toluensulfonsyre, og løsningen fikk opp-varme seg til romtemperatur. Etter 1 time ble ytterligere 244 mg N-hydroksymetylbenzamid tilsatt, og løsningen ble omrørt natten over ved romtemperatur. Den resulterende suspensjon ble filtrert og filtratet konsentrert i vakuum. Inndampningsresten ble fraksjonert på silikagel under eluering med etylacetat/heksan (1:1) slik at man. fikk tittelproduktet etter inndampning av løsnings-midlet, som en viskøs olje (105 mg); i.r. (kloroform) 1805, 1750, 1695 og 1665 cm"<1>, n.m.r. 6(CDCl3), 2,93 (lH, d, J 17,5 Hz, 6/3-CH) , 3,41 (1H, dd, J 17,5 og 2,5 Hz, 6a-CH) , 4,20 (2H, d,

J 7,5 Hz, 9-CH2), 4,85 (lH, t, J 7,5 Hz, 8-CH), 4,90 (2H, d,

J 7 Hz, 0-CH2NH) , 5,10 (lH, bs, 3-CH) , 5,17 (2H, s,. OC^CgHg) , • 5,72 (lH, d, J 2,5 Hz, 5-CH) , 7-8,1 ppm (11H, m,. 2 x C^, NH) .

Eksempel 5

Benzyl- 9- 0( N- benzoylaminometyl) klavulanat

2 73 mg- benzylklavulanat i 10 ml etylacetat ble behandlet med 286 mg N-hydroksymetylbenzamid fulgt av 5 dråper bortri-'fluorid-eterat ved romtemperatur. Etter 1 time ble løsningen vasket med fortynnet vandig natriumhydrogenkarbonat, vann og deretter tørket (MgS04). Det organiske sjikt ble inndampet og resten fraksjonert på silikagel, som angitt i eksempel 4, slik at man fikk 46 mg benzyl-9-0-(N-benzoylaminometyl)klavulanat. Eksempel 6 Benzyl- 9- 0-( N- benzoylaminometyl) klavulanat

1,45 g benzylklavulanat, 0,97 g N-acetoksymetylbenzamid og 109 mg pulverisert sinkacetat-dihydrat ble oppvarmet under tilbakeløp i toluen (65 ml, natriumtørket) i 4 timer. Den av-kjølte, overstående væske ble dekantert og inndampet i vakuum. Fraksjonering av resten på silikagel, som angitt i .eksempel.-4, ga tittelproduktet (335 mg).

N-acetoksymetylbenzamidet ble oppnådd som følger:

5 g N-hydroksymetylbenzamid ble oppvarmet ved 80°C i 1 time i 50 ml iseddik. Den avkjølte løsning ble inndampet i vakuum, og inndampningsresten ble fordelt mellom 50 ml vann og 50 ml etylacetat..Det organiske sjikt ble vasket med fortynnet vandig natriumhydrogenkarbonat og vann og deretter tørket (MgS04). Fordampning av løsningsmidlet i vakuum ga en olje som ble fraksjonert på silikagel under eluering med étylacetat/heksan (1:1) slik at man fikk en olje (3,52 g) som til slutt stivnet.

0

N.m.r. 6 (CDC13) 2,03 (3H, s, CCH_3) , 5,58 (2H, d, 7 Hz,CH2NH), 7,3 - 8,1 (6H, m, CgHg, NH).

Eksempel 7

Natrium- 9- 0-( N- benzoylaminometyl) klavulanat

300 mg benzyl-9-0-(N-benzoylaminometyl)klavulanat i 10 ml tetrahydrofuran ble hydrogenert over 10% Pd/c (100 mg) ved omgivelsestemperatur og -trykk i 10 minutter. Katalysatoren ble filtrert og filtratet konsentrert til lite volum i vakuum. Den oljeaktige rest ble behandlet med 58 mg natriumhydrogenkarbonat i 3 ml vann, og den resulterende løsning ble ekstrahert med 1 ml etylacetat. Den vandige løsning ble inndampet i vakuum og den resterende olje triturert flere ganger med aceton/eter til opp-nåelse av et halvfast stoff. Triturering med etylacetat ga så et kremaktig faststoff som ble filtrert fra og tørket under redusert trykk i en eksikator slik at man fikk natrium-9-0-(N-benzoylaminometyl)klavulanat (191 mg) i form av et fast stoff. I.r. (KBr) 1780, 1695, 1610 - 1660 cm"<1>.

N.m.r. 6 (D20) 2,91 (lH, d, J 18 Hz, 6j3-CH) , 3,48 (lH, dd, J 18 Hz og 2,5 Hz, 6a-CH) , 4,18 (2H, d, J 7,5 Hz, 9-CH_2),

4,84 (2H, s, 0CH2N), 4,90 (lH, s, 3-CH), 5,72 (lH, d, J 2,5 Hz, 5-CH) , 7,4 - 7,9 (5H,' m, CgH5).

Eksempel 8

Benzyl- 9- 0-( 1- formamidoetyl) klavulanat

N-(1-acetoksyetyl)formamid (520 mg, 4 m-mol) og benzylklavulanat (1,2 g, 4,15 m-mol) ble oppløst i 30 ml tørr benzen. Finpulverisert sinkacetat-dihydrat (400 mg, 1,8 m-mol) ble tilsatt til løsningen, og blandingen ble omrørt og tilbakeløps-behandlet med azeotropisk fjerning av vann i 4 timer. Blandingen ble avkjølt, fortynnet med 100 ml etylacetat og filtrert. Filtratet ble vasket med mettet natriumbikarbonatløsning (50 ml), vann (50 ml) og mettet saltvann (50 ml). Løsningen ble tørket over natriumsulfat og løsningsmidlet fordampet under redusert trykk slik at man fikk en gul gummi. Gummien ble kromatografert på 25 g silikagel under anvendelse av 1:3 > 3:2 etylacetat/ petroleter (kp. 60-80°). 15 ml-fraksjoner ble oppsamlet, og de som inneholdt tittelforbindelsen (identifisert under anvendelse av silikagel, tic) ble kombinert. Fordampning av løsningsmiddel under redusert trykk fra de kombinerte fraksjoner ga tittelforbindelsen i form av en farveløs gummi (0,91 g, 2,53 m-mol), = +40,1° (c0,8 CHC13) ^maks (CHC13); 3420,. 1800, 1740, 1700(sh), 1690 cm<-1>.

a(CDCl3): 1,3 (m, 3H), 2,9-3,6 (m, 2H), 3,9-4,2 (m, 2H), 4,6-4,9 (m, lH), 5,05 (d, J 1 Hz, lH), 5,2 (s, 2H), 5,3-6 (kompleks, 3H), 7,32 (s, 5H), 7,9-8,2 (kompleks, lH).

Eksempel 9

Litium- 9- 0-( 1- formamidoetyl) klavulanat

Benzyl-9-0-(1-formamidoetyl)klavulanat (900 mg, 2,5 m-mol) ble oppløst i tetrahydrofuran og løsningen rystet med 10% palladium-på-trekull (300 mg) under 1 atmosfære hydrogen ved romtemperatur i 25 minutter. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og ble vasket med 20 ml tetrahydrofuran og 70 ml vann. Filtratets pH-verdi ble justert til 7,0 under anvendelse av 1,OM litiumhydroksydløsning (2,4 ml). Løsningsmidlet ble så fordampet under redusert trykk, og den resulterende rest ble omrørt med en blanding av 15 ml aceton og 30 ml eter. Det faste stoff ble oppsamlet ved filtrering, vasket med eter og tørket i vakuum. Tittelforbindelsen ble således oppnådd i form av et blekgult, amorft pulver (620 mg, .2,25 m-mol), [ a]^° =+35,6° (c 0,675, H20). ^maks (RBr): 1780'1700(sh), 1690, 1620 cm"<1>. c$.(D20): 1,25 (d,

J 5,5 Hz, 3H), 3,00 (d, J 16 Hz, lH), 3,49 (dd, J 16, 2 Hz, lH), 4,07 (d, J 7,5 Hz, 2H), 4,6-5,1 (m, en del formørket av DOH), 5,2-5,4 (m, 1H), 5,67 (m, lH), 8,10 (m, lH).

Eksempel 10

Benzyl- 9- 0-( 2- benzyloksykarbonylaminoacetamidometyl) klavulanat

N-acetoksymetyl-2-(benzyloksykarbonylamino)-acetamid (5 60 mg, 2 m-mol) og benzylklavulanat (600 mg, 2,08 m-mol) ble oppløst i 30 ml tørr benzen. Finpulverisert sinkacetat-dihydrat (200 mg, 0,9 m-mol) ble tilsatt til løsningen, og blandingen ble omrørt og tilbakeløpsbehandlet med azeotropisk'fjerning av vann i 4 timer. Blandingen ble avkjølt, fortynnet med 100 ml etylacetat og filtrert. Filtratet ble vasket med 50 ml mettet natriumbikarbonatløsning, 50 ml vann og 50 ml mettet saltvann. Løsningen ble tørket over natriumsulfat og løsningsmidlet fordampet under redusert trykk slik at man fikk en gul gummi. Gummien ble kromatografert på 25 g silikagel under anvendelse av 1:3 > 3:2 etylacetat/petroleter (kp. 60-80°). 15 ml-fraksjoner ble oppsamlet, og de som inneholdt tittelforbindelsen (identifisert under anvendelse av silikagel, tic) ble kombinert. Fordampning av løsningsmidlet under redusert trykk fra de kombinerte fraksjoner ga tittelforbindelsen i form av en farveløs gummi

.(560 mg, 1,1 m-mol), ia]^ ° = +22,1° (c 0,92, CHCl3).

V, (CHCl-.): 3870, 1800, 1740, 1690 cm"1. &(CDCl,): 3,03 (dd, rn.cl.rCS -J *3

J 16, 1 Hz, 1H), 3,40 (dd, J 16, 2 Hz, lH), 3,80 (d, J 6 Hz, 2H), 4,06 (d, J 7 Hz, 2H), 4,63 (d, J 6 Hz, 2H), 4,75 (dt, J 1,7 Hz, 1H), 5,05 (d, J 1 Hz, 1H), 5,10 (s, 2H), 5,20 (s, 2H), 5,50 (t, J 6 Hz, 1H), 5,62 (d, J 2 Hz, lH), 6,80 (t, J 6 Hz, lH),

7,32 (s, 10H).

Eksempel 11

9- 0-( qlycylaminometyl) klavulansyre

Benzyl-9-0-(2-benzyloksykarbonylaminoacetamidometyl)-- klavulanat (530 mg, 1,04 m-mol) ble oppløst i en blanding av 20 ml tetrahydrofuran og 10 ml vann, og løsningen ble rystet med 10% palladium-på-trekull (180 mg) under 1 atmosfære hydrogen ved romtemperatur i 25 minutter. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og ble vasket godt med vann. Løsningsmidlet ble fordampet under redusert trykk fra filtratet, og den resulterende rest ble omrørt med en blanding av 5 ml aceton og 10 ml eter. Det faste stoff ble oppsamlet ved filtrering og ble vasket med eter og deretter tørket i vakuum. Tittelforbindelsen ble således oppnådd i form av et svært blekgult, amorft pulver (280 mg, 0,98 m-mol), [a]^<1>= +30,8° (c 0,55, H20) .

ju (KBr) : 1780, 1700 (sh), 1695, 1605, 1555 cm.

in ci KS

(5 (D20) : 2,90 (d, J 17 Hz, lH) 3,35 (dd, J 17, 2 Hz, 1H) , 3,65

(s, 2H) ,. 3,97 (d, J 7 Hz, 2H) , 4,3 - 5,0 (m, en del formørket av DOH) , -5,55 (d, J 2 Hz, lH) .

Eksempel 12

Benzyl- 9- 0-[( 3S, 4S)- 2'- okso- 3'- benzyloksykarbonylaminoazetidin-4'- yl]- klavulanat og benzyl- 9- 0-[( 3S, 4R)- 2'- okso- 3'-benzyloksykarbonylaminoazetidin- 4'- yl]- klavulanat

Benzylklavulanat (600 mg, 2,07 m-mol) og (3S,4S)-4-acetoksy-3-benzyloksykarbonylaminoazetidin-2-on (520 mg, 1,87 m-mol) ble oppløst i 25 ml tørr benzen. 200 mg finpulverisert sinkacetat-dihydrat ble tilsatt til løsningen som deretter ble omrørt og tilbakeløpsbehandlet med azeotropisk fjerning av vann i 6 timer. Blandingen ble avkjølt, fortynnet med 100 ml etylacetat og filtrert. Filtratet ble vasket med 50 ml vann, 50 ml mettet natriumbikarbonatløsning og 50 ml mettet natrium-kloridløsning. Løsningen ble tørket over magnesiumsulfat, og løsningsmidlet ble fordampet under redusert trykk slik at man fikk en gul gummi. Gummien ble kromatografert på silikagel under anvendelse av etylacetat/petroleter (kp. 60-80°).

Benzyl-9-0-[(3S,4S)-2-okso-3-benzyloksykarbonylamino-. azetidin-4-yl]-klavulanat ble således oppnådd i form av en farve-løs gummi (280 mg, 29,5%), [a]^<1>= +12,7° (c 1,0, CHCl-J .

<V>maks (CHC13): 3420, 3310, 1790, 1505 cm .

J (CDCl3): 298 (d, J 17 Hz, lH), 3,39 (dd, J 17 og 2'Hz, lH), 4,15 (d, J 7 Hz,. 2H) , 4,37 (d, J 7,5 Hz, lH) , 4,76 (t, J 7 Hz, 1H), 4,98 (s, lH), 5,07 (s, 3H), 5,16 (e, 2H), 5,61 (d, J 2 Hz, 1H), 5,77 (d, J 7,5 Hz, lH), 6,98 (br.s, lH), 7,30 og 7,32.

(begge s, 10H),

Benzyl-9-0-[(3S,4R)-2-okso-3-benzyloksykarbonylaminoazetidin-4-yl]-klavulanat ble også oppnådd i form av en farveløs gummi (290 mg, 30,5%), [a]^<1>= +42,0° (c 1,16, CHC13).

Vmaks(CHCl3): 3440', 3280, 1795, 1720, 1510 cm<-1>. 6 (CDC13): 2,98 (d, J 16,5 Hz, lH), 3,39 (dd, J 16,5 og 2 Hz, 1H), 4,10 (d, J 7 Hz, 2H), 4,74 (t, J 7 Hz, lH), 4,9-5,2 (m), 5,10 (s), og 5,17 (s) (total 7H), 5,5-5,7 (m, 2H), 7,05 (br.s, 1H), 7,32 (s, 10H).

Eksempel 13

' 9- 0-[( 3S, 4S)- 2'- okso- 3'- aminoazetidin- 4'- yl] klavulansyre

190 mg benzyl-9-0-[(3S,4S)-2-okso-3-benzyloksykarbonylaminoazetidin-4-yl ] klavulanat ble oppløst i en blanding av 15 ml tetrahydrofuran og 7 ml vann, og løsningen ble rystet med 10% palladium-på-trekull (60 mg) under 1 atmosfære hydrogen ved romtemperatur i 25 minutter. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og ble vasket med vann (5 x 10 ml). Det kombinerte filtrat og vaskevann ble inndampet til tørrhet under redusert trykk.

Den resulterende inndampningsrest ble omrørt med 5 ml aceton mens 10 ml dietyleter ble tilsatt langsomt. Det resulterende utfellingsprodukt ble oppsamlet ved filtrering, vasket med eter og tørket i vakuum. Tittelforbindelsen ble således oppnådd i form av et blekgult pulver (100 mg), [a]^<2>= -19,4° (c 0,7, vann), ^maks (KBr): 1775<1690, 1600, 1385 cm<-1>. 6 (D20): 3,02 (d, J 17 Hz, 1H) , 3,50 (dd,- J 17 og 2 Hz, lH) , 4,18 (d, J 8 Hz, 2H) , 5,65 (d, J 2 Hz, lH); andre signaler overlappet og delvis for-mørket av HOD-absorpsjoner.

Eksempel 14

9- 0-[( 3S, 4R)- 2'- okso- 3'- aminoazetidin- 4'- yl]- klavulansyre

280 mg benzyl-9-0-[(3S,4R)-2-okso-3-benzyloksykarbonylaminoazetidin-4-yl]klavulanat ble omdannet til tittelforbindelsen under anvendelse av den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 13. Tittelforbindelsen ble oppnådd i form av et blekgult pulver (150 mg), [a]22 = +34,7° (c 0,6, vann) ^ ma]^ s (KBr) : 1785 (sh) , 1770, 1690, 1605, 1385 cm"<1>. 5 (D20): 2,95 (d, J 17 Hz, lH),

3,45 (dd, J 17 og 2 Hz, lH), 4,17 (d, J 7 Hz, 2H), 5,25 (d,

J 4 Hz, lH), 5,62 (d, J 2 Hz, lH); andre signaler overlappet og delvis formørket av HOD-absorpsjoner.

Eksempel 15

Benzyl- 9- 0-( 2'- oksopyrrolidin- 1'- ylmetyl) klavulanat

440 mg l-hydroksymetylpyrrolidin-2-on og 700 mg 2,6-lutidin ble oppløst i 15 ml tørt tetrahydrofuran, og løsningen ble omrørt ved -30° med utelukkelse av fuktighet mens 700 mg tionylklorid i 5 ml tørt tetrahydrofuran ble tilsatt dråpevis i løpet av 5 minutter. Blandingen ble omrørt i ytterligere 30 minutter ved -30° til -20° og ble deretter fortynnet med 50 ml tørr benzen og oppvarmet til romtemperatur. Blandingen ble filtrert, og løsningsmidlet ble fordampet fra.filtratet slik at man fikk l-klormetylpyrrolidin-2-on i form av en gul olje.

Oljen ble oppløst i 10 ml tørt tetrahydrofuran, og 1,0 g benzylklavulanat og 420 mg 2,6-lutidin ble tilsatt til løsningen. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur under utelukkelse av fuktighet i 1,5 timer. Blandingen ble fortynnet med 100 ml etylacetat og vasket med vann (2 x 50 ml) og 50 ml mettet natrium-kloridløsning. Løsningen ble tørket over magnesiumsulfat, og løsningsmidlet ble fordampet under redusert trykk slik at man fikk 1,2 g av en blekgul gummi. Gummien ble kromatografert på silikagel under anvendelse av etylacetat/petroleter (kp. 60-80°) slik at man fikk tittelforbindelsen i form av en farveløs gummi (275 mg), [ a]^ ° = +28,8° (c 1,0, CHCl3).

^maks (CHC13): 1800'1740'1700 <sh)'1685 cm"<1>. £(CDCl3): 1,80-2,15 (m, 2H) , 2,30-2,50 (m, 2H) , 3,05 (d, J 16,5 Hz,, lH) , 3,30-3,55 (m, 3H), 4,03 (br.d, J 7 Hz, 2H), 4,66 (s, 2H), 4,79 (dt, J 1 og 7 Hz, lH), 5,05 (s, lH), 5,18 (s, 2H) , 5,65 (d,

J 2 Hz, 1H), 7,33 (s, 5H).

Eksempel 16

Benzyl- 9- 0-( 21- okso- 1'- benzyloksykarbonylmetylazetidin- 4'- yl)-klavulanat

2,65 g l-benzyloksykarbonylmetyl-4-metyltioazetidin-2-on ble oppløst i 50 ml metylendiklorid, og løsningen ble omrørt og isavkjølt mens en løsning av 0,71 g klor i 7 ml karbontetraklorid ble tilsatt i én porsjon.Blandingen ble omrørt i 3 minutter, og deretter ble løsningsmidlet fordampet under redusert trykk slik at man fikk l-benzyloksykarbonylmetyl-4-klorazetidin-2-on i form av en blekgul olje (2/65 g).

Ovennevnte klorid ble oppløst i 25 ml tørt metylendiklorid, og tii løsningen ble tilsatt 2,89 g benzylklavulanat, 30 mg 2,6-lutidin, 2,5 g tørt sølvoksyd og 4A molekylsiktpulver (2,5 g).. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur med utelukkelse av fuktighet i 40 timer. Blandingen ble filtrert og løsnings-midlet fordampet fra filtratet. Den resulterende gummi ble opp-løst i 100 ml etylacetat, og løsningen ble vasket med 50 ml fortynnet citronsyreløsning og 50 ml vann. Løsningen ble tørket over magnesiumsulfat, og løsningsmidlet ble fordampet under redusert trykk slik at man fikk en mørkfarvet gummi. Gummien ble kromatografert på 25 g silikagel under anvendelse av etylacetat/ petroleter (kp. 60-80°) slik at man fikk tittelforbindelsen i form av en blekgul gummi (3,05 g), [a]<2>° = +24,6° (c 1,1, CHCl3). 'maks (CHCl3): 1800<1760 (sh)'1740'1700 (sh) cm"<1>. 6(CDCl3): 2,7-3,2 (kompleks, 3H), 3,44 (dd, J 16 og 2 Hz, lH), 3,70 (d,

J 19 Hz, 1H), 4,12 (d, J 7 Hz, 2H) 4,25 (d, J 19 Hz, lH), 4,75 (t, J 7 Hz, lH), 5,05 (s, 1H) 5,14 (s, 2H), 5,17 (s, overlappet av m, 3H), 5,63 (d, J 2 Hz, lH), 7,33 (s, 10H).

Eksempel 17

Dilitium- 9- 0-( 2'- okso- 1'- karboksymetylazetidin- 4'- yl) klavulanat

1,0 g benzyl-9-0-(2'-okso-1'-benzyloksykarbonylmetylazetidin-4'-yl)klavulanat ble oppløst i 40 ml tetrahydrofuran, og løsningen ble rystet med 10% palladium-på-trekull (350 mg) under 1 atmosfære hydrogen ved romtemperatur i 25 minutter. Katalysatoren ble ved filtrering og ble vasket med 35 ml tetrahydrofuran og 75 ml vann. Filtratets pH-verdi ble justert til 7,0 ved dråpe- . vis tilsetning av 1,OM litiumhydroksydløsning. Løsningsmidlet ble fordampet under redusert trykk, og den resulterende rest ble oppløst i 5 ml metanol. Langsom tilsetning av 15 ml aceton og . déretter 40 ml eter til denne løsning ga et utfellingsprodukt som ble oppsamlet ved filtrering, vasket med eter<p>g tørket i vakuum. Tittelforbindelsen ble således oppnådd i form av et farveløst pulver (550 mg), [a]^<1>= +27,8° (c 0,6, vann).

Hnaks (KBr): 1780'1745,.1690, 1605, 1400, 1310 cm"<1>.

S (D20): 2,83 (br.d, J 16 Hz, lH), 3,10 (br.d, J 17 Hz, lH),

3,22 (dd, J 16 og 4 Hz, lH), 3,57 (dd, J 17 og 2 Hz, lH),

3,65 (d, J 18 Hz, 1H), 3,98 (d, J 18 Hz, lH), 4,25 (d, J 7,5 Hz, 2H) , 4,90 (t, J 7,5 Hz, lH), 4,95 (s, lH) , 5,26.(dd, J 4 og 2 Hz, 1H), 5,70 (d, J 2 Hz, lH).

Eksempel 18

Benzyl- 9- 0-( N- formyl- N- metylaminometyl) klavulanat

2,89 g benzylklavulanat og 150 mg litiumtetrafluorborat ble oppløst i tørt N,N-dimetylformamid, og den' resulterende løs-ning ble isavkjølt mens den ble elektrolysert (2 cm x 1,5 cm platinafolie-elektroder anbrakt med en avstand av lmm) under anvendelse av en strøm på 300 mA i 2,25 timer. Løsningen .ble...fortynnet med 150 ml etylacetat og ble vasket med vann (4 x 50 ml) og 50 ml mettet natriumkloridløsning. Løsningen ble tørket over magnesiumsulfat, og løsningsmidlet ble fordampet under redusert trykk slik at man fikk 2,15 g av en gul gummi.Gummien ble kromatografert på silikagel under anvendelse av etylacetat/petroleter (kp. 60-80°) slik at man fikk tittelforbindelsen i form av en blekgul gummi (740 mg), [a]<20>= +38,3° (c 1,05, CHCl3). v/ . '(CHC1-): 1800, 1740, 1690 (sh), 1680 cm"1. (?(CDClQ): maks 3 o 2,85 (s, 3H), 3,05 (dd, J 16 og 1 Hz, LH), 3,05 (dd, J 16 og 2 Hz, 1H), 3,95 (d, J 7 Hz, 2H), 4,50 (s, 2H), 4,70 (dt, J 1 og 7 Hz, 1H), 5,05 (d, J 1 Hz, 1H), 5,13 (s, 2H), 5,65 (dd, J 2 og 1 Hz, 1H) , 7,30 (s, 5H) , 8,00.(s, lH) .

Eksempel 19

Litium- 9- 0-( N- formyl- N- metylaminometyl) klavulanat

510 mg benzyl-9-0-(N-formyl-N-metylaminometyl)klavulanat

ble oppløst i 40 ml tetrahydrofuran, og løsningen ble rystet med 10% palladium-på-trekull (150 mg) under 1 atmosfære hydrogen ved romtemperatur i 25 minutter. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og ble vasket med 50 ml tetrahydrofuran og 100 ml vann. Filtratets pH-verdi ble justert til 7,0 ved dråpevis tilsetning av 1,OM litiumhydroksydløsning.Løsningsmidlet ble fordampet under redusert trykk, og den resulterende rest ble omrørt med 10 ml aceton mens 20 ml eter ble langsomt tilsatt. Utfellingsproduktet ble oppsamlet ved filtrering, vasket med eter,

og tørket i vakuum slik at man fikk tittelforbindelsen i form av et blekgult pulver (275 mg), [ o>] ^ = +47,6° (c 0,5, vann),

^maks (KBr): 1780'1690, 1660, 1610 cm"<1>. (D20): 2,90 (s, 3H),

3,15 (d, J 16 Hz, 1H) , 3,65 (dd, J 16 og 2 Hz, lH) , 4,15 (d,

J 7 Hz, 2H), 4,85 (s, 2H), 4,6-5,0 (m, delvis formørket av•HOD-absorpsjon), 5,75 (d, J 2 Hz, lH), 8,15 (s, lH).

Eksempel 20

Benzyl- 9- 0-( N- acetyl- N- metylaminometyl) klavulanat

En løsning av.2,0 g benzylklavulanat og 0,2 g litiumtetrafluorborat i 15 ml N,N-dimetylacetamid ble omdannet til tittelforbindelsen under anvendelse av den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 18. Tittelforbindelsen ble oppnådd i form av en blekgul gummi (300 mg), [a]20 = +40,5° (c 1,0, CHCl3). \J mak, s (CHC13_): 1800, 1740, 1695, 1650 cm"1,

Eksempel 21

Litium- 9- 0-( 2'- oksopyrrolidin- 1'- ylmetyl) klavulanat

270 mg benzyl-9-0-(2-oksopyrrolidin-l-ylmetyl)klavulanat ble oppløst i 20 ml tetrahydrofuran, og løsningen ble rystet med 10% palladium-på-trekull (100 mg) under 1 atmosfære hydrogen ved romtemperatur i 35 minutter. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og ble vasket med 30 ml tetrahydrofuran og 50 ml vann. Filtratet ble justert til pH 7,0 ved dråpevis tilsetning av

1,OM litiumhydroksydløsning, og så ble løsningsmidlet fordampet under redusert trykk. Den resulterende rest ble oppløst i 2 ml metanol, og 5 ml aceton fulgt av 15 ml eter ble langsomt tilsatt. Det resulterende utfellingsprodukt ble oppsamlet ved filtrering, vasket med eter og tørket i vakuum. Tittelforbindelsen ble således oppnådd i form av et blekgult pulver (195 mg),

[a]20 = +30,6° (c 0,55, vann).Vmaks(KBr): 1780, 1705, 1675,

1610 cm"<1>. S (D20): 1,9-2,2 (2H, m), 2,35-2,55 (2H, m), 3,07

(1H, d, J 17,5 Hz), 3,4-3,7 (3H, m), 4,12 (2H, d, J 7,5 Hz),

4,70 (2H, s), 4,87 (lH, t, J 7,5 Hz) , 4,95 (lH, s.) , 5,69 (lH, d,

J 2 Hz).

Eksempel 22

Litium- 9- 0-( N- acetyl- N- metylaminometyl) klavulanat

2 90 mg benzyl-9-0-(N-acetyl-N-metylaminometyl)klavulanat

i 20 ml tetrahydrofuran ble rystet med 10% palladium-på-trekull (100 mg) under 1 atmosfære hydrogen ved romtemperatur i 30

minutter. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og ble vasket med 30 ml tetrahydrofuran og 50 ml vann.Filtratet ble justert til pH 7,0 ved dråpevis tilsetning av 1,0 M litiumhydroksyd-

r

løsning, og deretter ble løsningsmidlet fordampet under redusert trykk. Den resulterende gule gummi ble oppløst i 2 ml metanol,

og til løsningen ble det langsomt tilsatt 5 ml aceton og der-

etter 15 ml eter. Utfellingsproduktet ble oppsamlet ved filtrering, vasket med eter og tørket i vakuum slik at man fikk tittelforbindelsen i form av et blekgult pulver (200 mg), [a]<2*>"<*>= +30,8°

(c 0,525, vann), 'v k (KBr) : 1780, 1690, 1670, 1615 cm<-1>. 5 (D20): 2,06 og 2,08 (3H, begge s), 2,86 og 2,98 (3H, begge s),

3,00 (1H, d, J 17,5 Hz), 3,52 (lH, dd, J 17,5 og 2 Hz) , 4,05- og 4,10 (2H, begge d, J 7,5 Hz), 4,73 og 4,75 (2H, begge s),

ca. 4,90 (2H, kompleks), 5,65 (lH, d, J 2 Hz).

Eksempel 2 3

Natrium- 9- 0-[( 3S, 4R)- 3'- fenoksyacetamido- 2'- oksoazetidin- 4'- yl]-klavulanat

237 mg benzyl-9-0-[(3S,4R)-3'-fenoksyacetamido-2'-oksoazetidin-4'-yl]klavulanat ble omdannet til tittelforbindelsen under anvendelse av den.fremgangsmåte som er beskrevet i,eksempel 25. Tittelforbindelsen ble oppnådd i form av et blekgult pulver

(172 mg).VmaRs(KBr): 1770, 1670 og 1610 cm"<1>. 6 (D20): 2,94 (1H, d, J 17 Hz), 3,44 (lH, dd, J 3 og 17 Hz), 4,07 (2H, d,

J 7 Hz), 4,79 (lH,' t, J 7 Hz), 4,89 (lH, s), 5,13 (lH, d, J 4 Hz), 5,23 (1H, d, J 4 Hz), 5,62 (lH, d, J 3 Hz), 6,8-7,5 (5H, m).

Eksempel - 2 4

Benzyl- 9- 0-[ acetamidometyl]- klavulanat

En løsning av 1,445 g benzylklavulanat og 980 mg acetamidometylacetat i 15 ml benzen ble tilbakeløpsbehandlet under anvendelse av en Dean og Stark-vannseparator i 15 minutter. 110 mg sinkacetat-dihydrat ble deretter tilsatt og blandingen tilbakeløpsbehandlet i ytterligere 2 timer. Løsningen ble så av-kjølt og filtrert, og løsningsmidlet ble fordampet under redusert trykk. Produktet ble isolert fra resten ved søylekromatografi under anvendelse av gradienteluering (kiselgel; 1:1 etylacetat/ cykloheksan som gikk over til rent etylacetat). Tittelforbindelsen ble således oppnådd i form av en gul gummi (1,017 g).

<v>maks (film): 3320, 1805, 1750 og 1690 cm"1. 6(CDCl3): 2,01 (3H, s),'3,07 (1H, d, J 17 Hz), 3,53 (lH, dd, J 3 og 17 Hz),

4,15 (2H, d, J 7 Hz), 4,69 (2H, d, J 7 Hz), 4,76 (lH, t, J 7 Hz), 5,14 (1H, bred s), 5,25 (2H, s), 5,74 (1H, d, J 3 Hz), 6,48

(1H, bred), 7,43 (5H, s).

Eksempel 25

Natrium- 9- 0-[( 3S, 4S)- 3'- fenoksyacetamido- 2'- oksoazetidin- 4'- yl]-klavulanat

En løsning av 384 mg benzyl-9-0-[(3S,4S)-3 *-fenoksyacetamido-2 '-oksoazetidin-4-yl]-klavulanat i 20 ml tetrahydrofuran ble rystet med 10% palladium-på-trekull (80 mg) under 1 atmosfære hydrogen ved romtemperatur i 1 time. Løsningen ble filtrert gjennom "Celite", og filterkaken ble vasket med tetrahydrofuran. De kombinerte filtrater ble behandlet med en løsning av 63 mg natriumbikarbonat i vann. Mesteparten av tetrahydrofuranet ble fjernet på en roterende inndamper, og den resterende vandige løsning ble vasket 3 ganger med etylacetat, filtrert gjennom "Celite" og inndampet. Inndampningsresten ble tørket over fos forpentoksyd slik at man fikk tittelforbindelsen i form av et blekgult amorft pulver (270 mg).Umaks(KBr): 1765, 1665 og 1610 cm<_1>. 5 (D20): 2,98 (lH, d, J 17 Hz), 3,45 (lH, dd,

J 3 og 17 Hz), 4,18 (2H, d, J 8 Hz), 4,52 (2H, s), 4,65 - 5,05 (2H, m), 4,90 (lH, s), 5,15 (lH, s), 5,67 (lH, d, J 3 Hz),

6,8 - 7,5 (5H, m).

Eksempel 2 6

Natrium- 9- 0- ( acetamidometyl) - klavulanat

En løsning av 1,017 g benzyl-9-0-(acetamidometyl)-klavulanat i 30 ml tetrahydrofuran ble rystet med 10% palladium-på-trekull (300 mg) under 1 atmosfære hydrogen ved romtemperatur i 15 minutter. Løsningen ble filtrert gjennom "Celite" og filterkaken vasket med tetrahydrofuran. En løsning av 237 mg natriumbikarbonat i vann ble deretter tilsatt, og mesteparten av tetrahydrofuranet ble fjernet under redusert trykk. Den gjen-værende vandige løsning ble ekstrahert 3 ganger med etylacetat, filtrert gjennom "Celite" og vannet ble fordampet under redusert trykk. Resten ble tørket over fos forpentoksyd slik at man fikk tittelforbindelsen i form av et off-white amorft pulver (652 mg). ^maks (KBr): 1783'1665 og 1620 cm<-1>-& (D20): 2,05 (3H, s), 3,13 (1H, d, J 17 Hz), 3,61 (lH, dd, J 3 og 17 Hz), 4,17 (2H, d, J 7 Hz), 4,93 (1H, bred t, J 7 Hz), 5,00 (lH, s), 5,77 (lH, d,

J 3 Hz).

Eksempel 2 7

Litium- 9- 0-( 2'- oksoazetidin- 4'- yl)- klavulanat

Benzyl-9-0-(2'-oksoazetidin-4'-yl)-klavulanat (17,2 g,

48 m-mol) ble delt i fire tilnærmet like porsjoner. Hver porsjon (3,8 - 4,7 g) ble oppløst i tetrahydrofuran (100 - 120 ml) og

ble rystet med 10% palladium-på-trekull (1,3 - 1,5 g) ved romtemperatur under 1 atmosfære hydrogen. I alle tilfeller bie., den teoretiske hydrogenmengde tatt opp ved en konstant hastighet i løpet av 20-25 minutter, og deretter ble hydrogenopptaket stanset. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og ble vasket med 50 ml tetrahydrofuran og 150 ml vann. De kombinerte filtrater ble brakt til pH 7,0 ved dråpeyis tilsetning av 1,OM litiumhydroksyd (45 ml).. Fra den resulterende løsning ble løsningsmidlet fordampet under redusert trykk (roterende fordamper ved < 30°C). Til den resulterende blekgule sirup ble 200 ml aceton tilsatt langsomt under omrøring, og deretter ble 300 ml etylacetat langsomt tilsatt. Det resulterende utfellingsprodukt ble oppsamlet ved filtrering, vasket med eter (3 x 30 ml) og tørket over fos forpentoksyd i vakuum i 17 timer. Tittelforbindelsen ble således oppnådd i form av et svært blekgult amorft pulver (11,75 g, 43 m-mol), tee]<20>= +25,6° (c 1,0, vann). maks (KBr): 1775,

1750 (sh), 1700, 1620 cm<-1>.

Eksempel 28

9- 0-( 2'- oksoazetidin- 4'- yl)- klavulansyre

2,0 g benzyl-9-0- (2 .' -oksoazetidin-4 ' -yl) -klavulanat ble oppløst i 40 ml tetrahydrofuran og løsningen rystet med 10% palladium-på-trekull (0,5 g) under 1 atmosfære hydrogen ved romtemperatur i 20 minutter. Katalysatoren ble fjernet ved filtrer-

ing og vasket med tetrahydrofuran (3 x 20 ml). Fra filtratet ble løsningsmidlet fordampet under redusert trykk slik at man fikk tit<i>telforbindelsen i form av en farveløs gummi (1,57 g; minst 90%

ren, bedømt ved n.m.r. og t.l.c), [ a] D° = +27,1° (c 1,0, etylacetat). På tynnsjiktkromatografi (silikagel; 50:50:7 kloroform:aceton: eddiksyre) produserte produktet en enkelt sone (Rf =0,12) da platen ble dusjet med en 0,4% løsning av p-dimetylaminobenzaldehyd i etanol som inneholdt 1% HCl, og ble oppvarmet. "0 maks (CHC13):3400 - 2400, 1800, 1760 (sh) , 1740,

1700 (sh) cm"<1>. (CD3SOCD3): 2,60 (lH, d, J 15 Hz), 2,98 (lH,

dd, J 15 og 3 Hz), 3,09 (lH, d, J 17 Hz) , 3, 67 ■ (lH/ dd, J 1-7" og 2 Hz), 4,06 (2H, d, J•7 Hz), 4,80 (lH, t, J 7 Hz), 5,00 (lH, d,

J 3 Hz), 5,12 (1H, s), 5,75 (lH, d, J 2 Hz), 7,2 - 8,2 (br.,

skifter med D20), 8,60 (lH, br.s, skifter med D20).

Eksempel 2 9

Kalium- 9- 0-( 2'- oksoazetidin- 4'- yl)- klavulanat

0,79 g 9-0-(2'-oksoazetidin-4'-yl)-klavulansyre ble opp-løst i en blanding av 30 ml tetrahydrofuran og 30 ml vann. Løsningen ble omrørt mens 1,0 M kaliumhydroksydløsning ble tilsatt dråpevis inntil løsningen hadde pH 7,2.'Løsningsmidlet ble så fordampet under redusert trykk, og den resulterende gule gummi ble oppløst i 5 ml metanol. Til denne løsning ble 15 ml aceton og deretter 20 ml eter langsomt tilsatt. Det resulterende utfellingsprodukt ble oppsamlet ved filtrering, ble vasket med eter og tørket over fos forpentoksyd i vakuum. Tittelforbindelsen ble således oppnådd i form av et blekgult pulver (0,80 g),

[a] 20 = +20,0° (c 0, 85 , vann) .

Umaks (KBr):1780 - 1750 (br.), 1690 (sh)., 1655 (sh) , 1615 cm .

Eksempel 30

t- butylammonium- 9- 0-( 2'- oksoazetidin- 4'- yl)- klavulanat

.0,70 g 9-0-.(2 ' -oksoazetidin-4 ' -yl) -klavulansyre ble opp-løst i 30 ml tørt tetrahydrofuran, og løsningen ble omrørt mens 0,18 g t-butylamin ble tilsatt dråpevis. Den resulterende';'' klare, farveløse løsning ble konsentrert til ca. 10 ml ved fordampning av løsningsmidlet under redusert trykk. Petroleter (kp. 60-80°)

ble deretter tilsatt langsomt inntil løsningen akkurat holdt seg tåket. Blandingen ble avkjølt til 4° og holdt ved denne tempera-

tur i 1,5 timer.. De resulterende krystaller ble oppsamlet ved filtrering, vasket med 1:1 tetrahydrofuran/petrileter og tørket i vakuum. Tittelsaltet ble således oppnådd som meget små, farve-

løse prismer (0,71 g), smp. 124-126°, [a]<2>°'= +24,4° (c 0,9, etanol). 0 maks (KBr): 1790, 1760, 1690, 1625, 1585, 1390, 1300,

1195 cm"<1>.

En prøve (100 mg) av ovennevnte salt ble oppløst i 1 ml

tørr etanol, og 4:1 eter/pentan (5 ml) ble tilsatt langsomt. Blandingen ble avkjølt til 4° i 1 time, og deretter ble krystal-

lene oppsamlet ved filtrering, vasket med 4:1 eter/pentan og tørket over fos forpentoksyd i vakuum i 17 timer. Saltet ble så-

ledes oppnådd i form av farveløse prismer (85 mg), smp. 127-129°, [a]2<0>= +25,8° (c 0,875, etanol)..

Eksempel 31

N, N- dicykloheksylammonium- 9- 0-( 2'- oksoazetidin- 4'- yl)- klavulanat

9-0-(2'-oksoazetidin-4'-yl)-klavulansyre(fra 0,6 g benzylester) i 30 ml tetrahydrofuran ble behandlet med- 0, 3' g- -. N,N-dicykloheksylamin ved romtemperatur. Løsningen ble konsen-

trert til 10 ml ved fordampning av løsningsmiddel under redusert trykk. 10 ml eter og deretter 20 ml n-pentan ble langsomt til-

satt til løsningen. Utfellingsproduktet ble oppsamlet ved filtrering, vasket med eter (2 x 5 ml) og tørket i vakuum slik

at man fikk tittelforbindelsen i form av et farveløst pulver (0,53 g) , ta]<21>= +16,0° (c 1,1,EtOH). maks (KBr) : 1775,

1750, 1690, 1615 cm"<1>.

Eksempel 32

Magnesium- di[ 9- 0-( 2'- oksoazetidin- 4'- yl) klavulanat]

9-0-(2'-oksoazetidin-4'-yl)-klavulansyre (fra 0,6 g benzylester) i 30 ml tetrahydrofuran og 30 ml vann ble behandlet med med 35 mg magnesiumoksyd, og blandingen ble omrørt i 0,5 time ved romtemperatur. I dette tidsrom gikk pH-verdien til løsningen fra 3,0 til 7,3. Blandingen ble filtrert, og løsningsmidlet ble fordampet fra filtratet under redusert trykk slik at man fikk en gul gummi. Gummien ble oppløst i 1 ml kald metanol og 5 ml aceton, og deretter ble 10 ml eter langsomt tilsatt til løsningen. Utfellingsproduktet ble oppsamlet ved filtrering, vasket med aceton og tørket i vakuum over fos forpentoksyd i 16 timer. Tittelforbindelsen ble således oppnådd i form av et svært blekgult pulver (4,35 mg), [ a] = +22,4° (c 1,0, vann).<0>maks (KBr): 1780, 1750, 1690,^1605 cm"<1>. Eksempel 33 Pivaloyloksymetyl- 9- 0-( 2'- oksoazetidin- 4'- yl)- klavulanat 400 mg kalium-9-0-(2'-oksoazetidin-4'-yl)-klavulanat ble oppløst i 4 ml tørt N,N-dimetylformamid, og 330 mg pivaloyloksymetylbromid ble tilsatt til løsningen. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur med utelukkelse av fuktighet i 17 timer. Blandingen ble fortynnet med 50 ml etylacetat og ble vasket med vann (3 x 20 ml) og mettet saltvann (20 ml). Løsningen ble tørket over natriumsulfat, og løsningsmidlet ble fordampet under redusert trykk slik at man fikk 350 mg av en gul gummi. Gummien ble kromatografert på 20 g silikagel under anvendelse av gradienteluering fra 1:2 til 3:2 etylacetat/petroleter (kp. 60-80°). Tittelforbindelsen ble således oppnådd i form av en farveløs gummi (50 mg), +21,9° (c 1,0, CHClg). maks (CHCl-j); 3420, 3200, 1800, 1765, 1700 cm"<1>. & (CDClg): 1,21 (9H, s), 2,82 (1H, d, J 15 Hz), 2,95 - 3,25. (2H, kompleks), 3,52 (1H, dd, J 17 og 2,5 Hz), 4,14 (2H, d, J 7 Hz), 4,81 (lH, t, J 7 Hz), '5,00 - 5,15 (2H, kompleks), 5,65 - 5,90 (3H, kompleks), 6,90 (1H, br.s). Eksempel 34 Benzyl- 9- 0-( 2'- okso- 1'- metylazetidin- 4'- yl)- klavulanat

0,8 g l-metyl-4-metyltioazetidin-2-on ble oppløst i 25 ml tørt metylendiklorid, og løsningen ble omrørt og isavkjølt mens

en løsning av 0,45 g klor i 3,5 ml karbontetraklorid ble tilsatt i én porsjon. Blandingen ble omrørt i 3 minutter, og deretter

ble løsningsmidlet fordampet under redusert trykk slik at man fikk 4-klor-l-metylazetidin-2-on i form av en farveløs olje.

Kloridet ble tilsatt til en løsning av 1,8 g benzylklavulanat og 0,65 g 2,6-lutidin i tørt tetrahydrofuran, og blandingen ble omrørt ved romtemperatur med utelukkelse av fuktighet i 24 timer. Blandingen ble filtrert, og det faste stoff ble vasket med etylacetat. Løsningsmidlet ble fordampet fra filtratet under redusert trykk, og den resulterende rest ble oppløst i 100 ml etylacetat. Løsningen ble vasket med fortynnet citronsyre-løsning, fortynnet natriumbikarbonatløsning, vann og mettet saltvann. Løsningen ble tørket over magnesiumsulfat, og løsnings-midlet ble fordampet under redusert trykk slik at man fikk 2,0 g av en gul gummi. Gummien ble kromatografert på silikagel (25 g) under anvendelse av gradienteluering fra 1:3 til 2:3 etylacetat/ petroleter (kp. 60-80°). Tittelforbindelsen ble således oppnådd i form av en farveløs gummi (0,4 g).•

(Funnet: M , 372,132<1;><c>i9<H>2o<N>2<0>6 krever 372,1319) [ &■] 21<=>+36,0°

(c1,0, CHC13). Y> maks (CHCl3):1803, 1750, 1698 cm"<1>. 6 (CDCl3): 2,77 (3H, s) overlapping 2,65 - 2,95 (2H, m), 3,03 (lH, d,

J 17 Hz), 3,48 (1H, dd, J 17 og 2 Hz), 4,14 (2H, d, J 7 Hz),

4,70 - 4,90 (2H, kompleks), 5,08 (lH, s), 5,18 (2H, s), 5,68 (lH,

d, J 2 Hz), 7,32 (5H, s). m/e: 372 (M<+>, 2%), 272 (70), 230

(15), 91 (100). Eksempel 3 5 Litium- 9- 0-( 2'- okso- 1'- metylazetidin- 4'- yl)- klavulanat

0,4 g benzyl-9-0-(2'-okso-1'-metylazetidin-4'-yl)-klavulanat ble oppløst i 30 ml tetrahydrofuran, og løsningen ble rystet med 10% palladium-på-trekull (0,13 g) under 1 atmosfære hydrogen ved romtemperatur i 2 5 minutter. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og ble vasket med 1:1 tetrahydrofuran/vann (3 x 10 ml). Filtratets pH-verdi ble justert til 7,1 ved dråpevis tilsetning av 0,2 M litiumhydroksyd.Løsningsmidlet ble fjernet fra filtratet under redusert trykk, og den resulterende rest ble oppløst i 2 ml metanol, og 5 ml aceton og 15 ml eter ble langsomt tilsatt. Utfellingsproduktet ble oppsamlet ved filtrering, vasket med eter og tørket i vakuum. Tittelsaltet ble således oppnådd i form av et farveløst pulver (0,28 g),

[ a]^ ° = +26,4° (c 0,55, vann). \) , (KBr): 1775, 1750, 1690, 1615 cm" . (D20): 2,75 (3H, s) overlapping 2,65 - 3,05 (2H, m), 3,06 (1H, d, J 17 Hz), 3,53 (lH, dd, J 17 og 2 Hz), 4,23 (2H, d, J 7 Hz), 4,80 - 5,00 (2H, kompleks),•5,07 (lH, d, J 3,5 Hz),

5,68 (1H, d, J 2 Hz) .

Eksempel 3 6

Metyl- 9- 0-( 2'- oksoazetidin- 4'- yl) klavulanat

0,55 g finpulverisert sinkacetat-dihydrat ble suspendert i 25 ml tørr benzen, og blandingen ble omrørt og tilbakeløps-behandlet med azeotropisk fjerning av vann i 30 minutter. En løsning av 1,06 g metylklavulanat og 0,65 g 4-acetoksyazetidin-2-on i 5 ml tørr benzen ble deretter tilsatt, og omrøring og tilbakeløpsbehandling ble fortsatt i ytterligere 5 timer. Blandingen ble avkjølt og filtrert, idet det faste stoff ble godt vasket med mer benzen. Filtratet og vaskevannet ble vasket med natriumbikarbonatløsning og mettet saltvann. Løsningen ble tørket (natriumsulfat), og løsningsmidlet ble fordampet under redusert trykk slik at man fikk én gul gummi. Gummien ble kromatografert på silikagel under anvendelse av gradienteluering fra 1:3 til 4:1 etylacetat/cykloheksan. Tittelforbindelsen ble således oppnådd i form av en farveløs gummi (0,71 g). <5 (CDCl^): 2,70-3,25 (3H, kompleks), 3,49 (lH, dd, J 17 og 3 Hz) , 3,78-(3H, s), 4,15 (2H, d, J 7 Hz), 4,82 (lH, br. t, J 7 Hz), 5,00-5,15 (2H, kompleks), 5,68 (lH, d, J 3 Hz),•6,80 (lH, br.s).

Eksempel 37 -

Litium- 9- 0-( 2'- oksoazetidin- 4'- yl) klavulanat

0,2 g metyl-9-0-(2'-oksoazetidin-4'-yl)klavulanat ble oppløst i' 10 ml tetrahydrofuran, og 25 ml vann ble tilsatt til løsningen. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur, og pH-verdien ble justert til 8,5 ved tilsetning av 0,25 M litiumhydroksyd. Blandingens pH-verdi ble opprettholdt ved 8,5 i 1 time og ble deretter hevet til 9,5 og holdt der i ytterligere 0,5 time, ved tilsetning av 0,25 M litiumhydroksyd (totalt=2,3 ml). Løsningsmidlet ble fjernet ved fordampning under redusert trykk, og den resulterende rest ble kromatografert på cellulosepulver ("Whatman" CC31) under anvendelse av toppfasen av 5:1:5 n-butanol/etanol/vann som elueringsmiddel. 10 ml fraksjoner ble oppsamlet, og de som inneholdt tittelforbindelsen ble gjenkjent

under anvendelse av t.l.c. Disse ble kombinert og inndampet til tørrhet under redusert trykk. Tittelsaltet ble således oppnådd i form av et farveløst pulver (55 mg). v> (KBr): 1770, 1745,

— i rn.ci.Ks

1690, 1620 cm .

Eksempel 38

Preparater

(a) 100 mg sterilt natrium-9-0-(azetidin-2'-on-4'-yl)-klavulanat kan oppløses i sterilt vann for injeksjon BP (1 ml) for dannelse av en løsning for injeksjon. 9-0-(azetidin-2'-on-4<1->yl)klavulanatet kan være forseglet i en glassbeholder på konvensjonell måte. (b) 80 mg sterilt natrium-9-0-(azetidin-2'-on-4'-yl)-klavulanat og sterilt natrium-amoxycillin (ekvivalent med 250 mg) kan oppløses i sterilt vann for injeksjon BP (1 ml)' for dannelse av .en løsning for injeksjon. De to forbindelser kan være forseglet i en glassampulle sammen på konvensjonell måte. (c) 125 mg natrium-9-0-(azetidin-2'-on-4'-yl)klavulanat kan blandes med 20 mg laktose og magnesiumstearat og blandingen fylles i en gelatinkapsel nr. 3. Dette preparat kan administreres oralt.

Beskrivelse 1

N-( 1- acetoksyetyl) formamid

N-formyl-D,L-anilin (1,17 g, 10 m-mol) og vannfritt natriumacetat (300 mg, 3,6 m-mol) ble oppløst i 12 ml iseddik. Den resulterende løsning ble omrørt og isavkjølt mens den ble elektrolysert (to 1,5 cm 2 •platinafolie-elektroder anbrakt i en avstand av 1 mm) under .anvendelse av en strøm på 250-300 mA i 2 timer.Eddiksyren ble så fjernet ved fordampning under redusert trykk, dg resten ble kromatografert på 15 g silikagel under anvendelse av 1:1 etylacetat/petroleter (kp. 60-80°). 25 ml-fraksjoner ble oppsamlet, og de som inneholdt tittelforbindelsen ble identifisert under anvendelse av t.l.c. (silikagel, 1:1 etylacetat/petroleter). De aktuelle fraksjoner ble kombinert, og løsningsmidlet ble fordampet under redusert trykk slik at man fikk tittelforbindelsen i form av en farveløs olje (0,65 g).

Beskrivelse 2

N- acetoksymetyl- 2-( benzyloksykarbonylamino) acetamid

Benzyloksykarbonylglycylglycin (3,99 g, 15 m-mol) ble suspendert' i en løsning av vannfritt natriumacetat (0,9 g, 11 m-mol)i 75 ml iseddik. Blandingen ble omrørt og isavkjølt mens den ble elektrolysert (to 5 cm 2 platinafolieelektroder anbrakt i en avstand av 2 mm) under anvendelse av en strøm på 200-250 mA i 5 timer. Eddiksyren ble fordampet under redusert trykk, og resten ble oppløst i 150 ml etylacetat. Løsningen ble vasket med mettet natriumbikarbonatløsning (5 ml-porsjoner, inntil vaskevannet forble alkalisk) og derétter med vann (50 ml). Løsningen ble tørket, over magnesiumsulfat, og løsningsmidlet ble fordampet under redusert trykk slik at man fikk tittelforbindelsen i form av farveløse krystaller (1,85 g, 6,6 m-mol).

Beskrivelse 3

( 3S, 4S)- 4- acetoksy- 3- benzyloksykarbonylaminoazetidin- 2- on

Benzyl-6-j3-benzyloksykarbonylaminopenicillanat ble omdannet til (3S,4S)-4-acetoksy-3-benzyloksykarbonylamino-l-(l-benzyloksykarbonyl-2-metyl-prop-l-enyl)-azetidin-2-on i .61% utbytte under anvendelse av merkuriacetat i iseddik analogt med den fremgangsmåte som er beskrevet i J. Chem. Soc, Perkin I, 1973, 32-35. Produktet ble oppnådd i form av en farveløs gummi, [a]20 = -24,7° (c 1,1,CHCl3), fulgt av rensning ved kromatografi på silikagel under anvendelse av etylacetat/petroleter (kp. 60-80°).

Ovennevnte produkt ble omdannet til tittelforbindelsen i 58% utbytte ved omsetning med kaliumpermanganat og pyridin i vandig dimetylformamid, analogt med en fremgangsmåte som er beskrevet i J. Chem. Soc._, Perkin I, 1976, 447. Etter kromatografi på silikagel ble tittelforbindelsen oppnådd i form av en farve-løs gummi, [ a] = -54,5° (c 1,0, etylacetat).

Demonstrasjon 1

Aktivitet av natrium- 9- 0-( azetidin- 2'- on- 4'- yl) klavulanat

a. Subkutan administrering: Grupper av mus ble infisert inter-peritonealt med Escherichia coli JT39. Ved 1 og 5 timer post infeksjon ble musene behandlet med amoxycillin (Amox.) eller med amoxycillin og synergist. Løsningene ble tillaget i

fosfatpuffer. Resultatene var som følger:

b. Oral administrering: Grupper av mus ble infisert inter-peritonealt medEscherichia coli JT39. Ved 1, 3 og 5 timer post-infeksjon ble musene behandlet med amoxycillin eller med amoxycillin og synergist. Løsningene ble tillaget i fos fat-puffer. Resultatene var som følger: c. In vitro aktivitet: Følgende resultater ble oppnådd på en standard MIC-test under anvendelse av ampicillin og natrium-9-0- (azetidin-2'-on-4'-yl)klavulanat: d. Oppsummering: De foranstående tester viser at natrium-9-0-(azetidin-2'-on-4'-yl)klavulanat er en effektiv synergist for penicilliner, f.eks. amoxycillin, mot gram-negative bakterier,

f.eks.Escherichia og Klebsiella og gram-positive bakterier, f.eks. Staphylococcus. Det ble ikke observert noen tegn på droge-toksisitet under in vivo-testene.

Demonstrasjon 2

Aktivitet av litium- 9- 0-( 1- formamidoetyl) klavulanat

a. Den antibakterielle og synergistiske aktivitet for tittel-•

forbindelsen (referert til som "synergist" i tabellen) ble bestemt ved en konvensjonell mikroliter metode. Dataene som ble oppnådd er som følger:

. b. Ved testing i en intraperitoneal infeksjon som skyldesEscherichia coli JT 39 hos mus, viste tittelforbindelsen seg å forbedre effektiviteten av amoxycillin. Doseringen var subkutan og 1 og 5 timer post-infeksjon. Resultatene var:

Demonstrasjon 3

Aktivitet av 9- 0-[( N- glycyl)- 2- aminoetyl] klavulansyre 9-0-[(N-glycyl)-2-aminoetyl]klavulansyre ble testet i en standard mikroliter-MIC-test for bestemmelse av dens antibakterielle aktivitet og dens synergistiske aktivitet med ampicillin. De målte MIC-verdier (^.ug/ml) var som følger:

Demonstrasjon 4

Aktivitet av 9- 0-[( 3S, 4R)- 3'- amino- 2'- okso- azetidin- 4'- yl]-klavulansyre

9-0-[(3S,4R)-3'-amino-2'-okso-azetidin-4'-yl]-klavulansyre ble testet i en standard mikroliter-MIC-test for bestemmelse av dens'antibakterielle aktivitet og dens synergistiske aktivitet med ampicillin. De målte MIC-verdier (^ug/ml) var som følger:

Demonstrasjon 5

Aktivitet av 9- 0-[( 3S, 4S)- 3'- amino- 21- okso- azetidin- 4'- yl] klavulansyre

9-0-[(3S,4S)-3'-amino-2'-okso-azetidin-4'-yl]-klavulansyre ble testet i" en standard mikroliter-MIC-test for bestemmelse av dens antibakterielle aktivitet og dens synergistiske aktivitet med ampicillin. De målte MIC-verdier (^ug/ml) var som følger:

Demonstrasjon 6

Blodspeil og uringjenvinning av litium- 9- 0-( azetidin- 2'- on- 4'- yl)-klavulanat

Litium-9-0-(azetidin-2'-on-4'-yl)klavulanat ble administrert oralt til en gruppe på åtte hunder som veide 9 - 12 kg,

i en dosering av 5 mg/kg.

Nivået av forbindelsen i blodet ble målt etter 0,25, 0,5, 1, 2, 4 og 6 timer. Resultatene er vist i tabell 1, idet verdiene for natriumklavulanat er tatt med for sammenligningens skyld.

Uringjenvinningen av forbindelsen i løpet av 24 timer ble også målt. Resultatene er vist i tabellene 2 og 2a.

Claims (23)

1. Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse av formel (I):

eller et salt eller en ester derav, hvor R, er et hydrogenatom eller en lavere alkyl-, aryl- eller aralkylgruppe; R2 og R^ er uavhengig av hverandre hydrogen, aryl, aralkyl, lavere alkyl eller' substituert lavere alkyl; eller R^ er knyttet, til R^.slik at de danner en 4-, 5- eller 6-leddet ring eller er knyttet til R2 slik at de danner en 5- eller 6-leddet ring, karakterisert ved omsetning av en ester av en klavulansyre med en forbindelse av formel (XV):

hvor R^ , R2 og R^ er som definert for formel (I) og Y er en forskyvbar gruppe; og deretter, om ønskes, omdannelse av den således dannede ester til den frie syre eller et salt derav.

2. Fremgangsmåte som angitt i krav 1 for fremstilling av en forbindelse av formel (I) eller et salt derav hvorR2 er H,R^ er et hydrogenatom og R^ er et hydrogenatom eller en aryl-, aralkyl-, lavere alkyl- eller substituert lavere alkylgruppe eller R^ og R^ er knyttet sammen slik at CHR^NH CO R3~ andelen danner eh gruppe av subformel (a):

hvor R^ er et hydrogenatom eller en NH.CO.R^ -gruppe hvor R^ er en lavere alkyl-, lavere alkoksy-lavere alkyl-, aryl-, aralkyl-eller aryloksyalkylgruppe.

3. Fremgangsmåte som angitt i krav 1 for fremstilling av en forbindelse av formel (III):

eller et salt eller en ester derav hvor Rg er et hydrogenatom eller en aryl-, aralkyl-, lavere alkyl- eller substituert lavere alkylgruppe.

4. Fremgangsmåte som angitt i krav 1 for fremstilling av en forbindelse av formel (IV):

eller et salt eller en ester derav hvor R. er som definert med hensyn til subformel (a) i krav 2.

5. Fremgangsmåte som angitt i krav 4, karakterisert ved at R4 er et hydrogenatom.

6. Fremgangsmåte som angitt i krav 1 for fremstilling av en forbindelse av formel (V):

eller et salt eller en ester derav hvor Rg er en lavere alkyl-, aryl- eller aralkylgruppe ogR g er et hydrogenatom eller en aryl-, aralkyl-, lavere alkyl- eller substituert lavere alkylgruppe.

7. Fremgangsmåte som angitt i krav 6, karakterisert ved at Rg er en metylgruppe.

8. Fremgangsmåte som angitt i krav 1 for fremstilling av en forbindelse av formel (VI):

eller et salt eller en ester derav hvor R^Q er et.hydrogenatom eller en lavere alkylgruppe og R^^ er en lavere alkylgruppe substituert med en aminogruppe og eventuelt med en arylgruppe, eller R^Q og R^ er knyttet til hverandre slik'at CHR^ q-NH-CO-R-^ -andelen utgjør en gruppe av subformel (b):

9. Fremgangsmåte som angitt i krav 8, karakterisert ved at R1Q er hydrogen og er en alkylgruppe med opp til 4 karbonatomer substituert med en aminogruppe, eller R-^ er en alkylgruppe med opp til 4 karbonatomer substituert med en aminogruppe og med en arylgruppe.

10. Fremgangsmåte som angitt i krav 9, karakterisert ved at R-^ er en aminometyl-, a-aminoetyl- eller a-aminobenzylgruppe.

11.F remgangsmåte som angitt'i krav 1 for fremstilling av en forbindelse av formel (IX):

eller et salt eller en ester derav, hvor R^2 er et hydrogenatom eller en lavere alkyl-, aryl- eller aralkylgruppe, R.-, er en aryl-, aralkyl-, lavere alkyl- eller substituert lavere alkylgruppe og R-^4 er en lavere alkylgruppe eller er knyttet til R^2 slik at de danner en 4-, 5- eller 6-leddet ring eller er knyttet til R^3 slik at de danner en 5- eller 6-leddet ring.

12. Fremgangsmåte som angitt i krav 1 for fremstilling av en forbindelse av formel (X ):

eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.

13. Fremgangsmåte som angitt i hvilket som helst av kravene 1-11 for fremstilling av et litium-, natrium-, kalium-, magnesium- eller t-butylaminsalt.

14. Fremgangsmåte som angitt i hvilket som helst av kravene 1 eller 3-11 for fremstilling av en ester hvor ester-andelen har subformel (e) eller (f):

hvor A <1> er en alkylgruppe med 1-6 karbonatomer som eventuelt er substituert med en alkoksyl- eller acyloksylgruppe med 1-7 karbonatomer; A <2> er en alkenylgruppe■med opp til 5 karbonatomer eller er en fenylgruppe som eventuelt er substituert med fluor, klor,.brom, nitro eller alkyl eller alkoksyl med opp til 4 karbonatomer; og A 3 er et hydrogenatom, en alkylgruppe med opp til 4 karbonatomer eller en fenylgruppe som eventuelt er substituert med fluor, klor, brom, nitro eller alkyl eller alkoksyl med opp til 4 karbonatomer.

15. Fremgangsmåte som angitt i hvilket som helst av kravene 1-14, karakterisert ved at Y er en karboksylat-estergruppe eller et forskyvbart halogenatom eller en hydroksylgruppe.

16.F remgangsmåte for fremstilling av en forbindelse -av formel (I) i form av den frie syre eller et salt derav, karakterisert ved deforestring- av en tilsvarende ester, eventuelt i nærvær av base.

17. Fremgangsmåte som angitt i krav 16, karakterisert ved hydrogenering av en hydrogenolyserbar ester.

18. Fremgangsmåte som angitt i krav 17, karakterisert ved at esteren er en benzyl eller substituert benzylester. •

19. Fremgangsmåte som angitt i krav 16, karakterisert ved basehydrolyse av en ester av en forbindelse av formel (I).

20. Synergistisk farmasøytisk preparat som omfatter en forbindelse av formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller en slik ester derav og et penicillin eller cefalosporin, og en farmasøytisk akseptabel bærer.

21. Farmasøytisk preparat som angitt i krav 20, karakterisert ved at det omfatter 150 - 1000 mg amoxycillin, ampicillin eller en pro-droge for disse og 2'5 - 500 mg av forbindelsen av formel (I) eller saltet eller esteren derav.

22. Farmasøytisk preparat som angitt i krav 21, karakterisert ved at det omfatter 200 - 750 mg amoxycillin og 50 - 250 mg av forbindelsen av formel (x) som definert i krav 12, eller et salt derav.

23. Anvendelse av en forbindelse av formel (I) eller et salt eller en ester derav, som en /3-laktamase-inhibitor.