NO310408B1 - Nye trienoiske retinoidforbindelser, fremgangsmåter og anvendelse - Google Patents

Nye trienoiske retinoidforbindelser, fremgangsmåter og anvendelse Download PDF

Info

Publication number
NO310408B1
NO310408B1 NO19973017A NO973017A NO310408B1 NO 310408 B1 NO310408 B1 NO 310408B1 NO 19973017 A NO19973017 A NO 19973017A NO 973017 A NO973017 A NO 973017A NO 310408 B1 NO310408 B1 NO 310408B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
trienoic acid
butylphenyl
methylocta
mmol
compounds
Prior art date
Application number
NO19973017A
Other languages
English (en)
Other versions
NO973017L (no
NO973017D0 (no
Inventor
Marcus F Boehm
Lin Zhang
Youssef L Bennani
Alex M Nadzan
Original Assignee
Ligand Pharm Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US08/481,877 external-priority patent/US6083977A/en
Application filed by Ligand Pharm Inc filed Critical Ligand Pharm Inc
Publication of NO973017D0 publication Critical patent/NO973017D0/no
Publication of NO973017L publication Critical patent/NO973017L/no
Publication of NO310408B1 publication Critical patent/NO310408B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/58—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/02—Nutrients, e.g. vitamins, minerals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C311/00—Amides of sulfonic acids, i.e. compounds having singly-bound oxygen atoms of sulfo groups replaced by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C311/48—Amides of sulfonic acids, i.e. compounds having singly-bound oxygen atoms of sulfo groups replaced by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of sulfonamide groups further bound to another hetero atom
    • C07C311/49—Amides of sulfonic acids, i.e. compounds having singly-bound oxygen atoms of sulfo groups replaced by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of sulfonamide groups further bound to another hetero atom to nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C45/00—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
    • C07C45/27—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by oxidation
    • C07C45/29—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by oxidation of hydroxy groups
    • C07C45/298—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by oxidation of hydroxy groups with manganese derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C45/00—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
    • C07C45/27—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by oxidation
    • C07C45/30—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by oxidation with halogen containing compounds, e.g. hypohalogenation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C45/00—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
    • C07C45/44—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by reduction and hydrolysis of nitriles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C45/00—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
    • C07C45/45—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by condensation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C45/00—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
    • C07C45/45—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by condensation
    • C07C45/46—Friedel-Crafts reactions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C45/00—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
    • C07C45/51—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by pyrolysis, rearrangement or decomposition
    • C07C45/511—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by pyrolysis, rearrangement or decomposition involving transformation of singly bound oxygen functional groups to >C = O groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C57/00—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C57/30—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms containing six-membered aromatic rings
    • C07C57/42—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms containing six-membered aromatic rings having unsaturation outside the rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C57/00—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C57/46—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms containing six-membered aromatic rings and other rings, e.g. cyclohexylphenylacetic acid
    • C07C57/48—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms containing six-membered aromatic rings and other rings, e.g. cyclohexylphenylacetic acid having unsaturation outside the aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C57/00—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C57/52—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms containing halogen
    • C07C57/58—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms containing halogen containing six-membered aromatic rings
    • C07C57/60—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms containing halogen containing six-membered aromatic rings having unsaturation outside the rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C59/00—Compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C07C59/40—Unsaturated compounds
    • C07C59/58—Unsaturated compounds containing ether groups, groups, groups, or groups
    • C07C59/64—Unsaturated compounds containing ether groups, groups, groups, or groups containing six-membered aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/612—Esters of carboxylic acids having a carboxyl group bound to an acyclic carbon atom and having a six-membered aromatic ring in the acid moiety
    • C07C69/618—Esters of carboxylic acids having a carboxyl group bound to an acyclic carbon atom and having a six-membered aromatic ring in the acid moiety having unsaturation outside the six-membered aromatic ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/66—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety
    • C07C69/73—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety of unsaturated acids
    • C07C69/732—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety of unsaturated acids of unsaturated hydroxy carboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/66—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety
    • C07C69/73—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety of unsaturated acids
    • C07C69/738—Esters of keto-carboxylic acids or aldehydo-carboxylic acids

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Non-Silver Salt Photosensitive Materials And Non-Silver Salt Photography (AREA)
  • Pyrane Compounds (AREA)

Description

Foreliggende oppfinnelse gjelder forbindelser som har aktivitet for retinoinsyrereseptorer og retinoide X-reseptorer, og farmasøytisk preparat inneholdende nevnte forbindelser.
Vitamin A-metabolitten, retinoinsyre, har lenge vært kjent for å indusere et bredt spekt-rum av biologiske effekter. I tillegg er en rekke strukturelle analoger av retinosk syre syntetisert, som også er funnet å være bioaktive. Noen, slik som Retin-A® og Accuta-ne®, har funnet anvendelse som terapeutiske midler for behandling av forskjellige pato-logiske tilstander. I tillegg er syntetiske retinoider funnet å etterligne mange av de farmakologiske virkningene til retinoinsyre.
Medisinske yrkesutøvere har blitt meget interesserte i de terapeutiske anvendelser av retinoider. Blant deres anvendelser som er godkjent av FD A, er behandlingen av alvorli-ge former av acne og psoriasis. Det foreligger også en stor mengde bevis på at disse forbindelsene kan anvendes for å stanse og i en viss grad reversere virkningene av hudødeleggelse som stammer fra forlenget eksponering for solen. Andre bevis foreligger som viser at disse forbindelsene kan være anvendbare ved å behandle og hindre en rekke cancerøse og pre-cancerøse tilstander, slik som melanoma, cervical cancer, noen former av leukemi, oral leukoplaki og basale og platecelle carcinomer. Retinoider er også vist å ha evnen til og være effektive ved å behandle og hindre sykdommer i øynene, hjerte-kar systemet, immunsystemet, huden, åndedretts- og fordøyelseskanalene, og som midler for å lette sårhelbredelse og modulere programmert celledød (apoptose).
Avgjørende innsikt i den molekylære mekanismen ved retinoinsyre signaltransduksjon ble oppnådd i 1988, da et medlem av den steroide/tyroide, intracellulære hormonreseptor superfamilien ble vist å transdusere et retinoinsyre-signal. Evans, Science, 240:889-95
(1988); Giguere et al., Nature, 330:624-29 (1987); Petkovich et al., Nature, 330:444-50
(1987). Det er nå kjent at retinoider regulerer aktiviteten til to distinkte, intracellulære reseptor underfamilier, retinoinsyre-reseptorene (RARs) og de retinoide X-reseptorene (RXRs), inkludert deres isoformer, RARa, B, y. I dette henseende er en endogen ligand med lav molekylvekt som modulerer den transkripsjonale aktiviteten til RARs all-trans-retinoinsyre (ATRA), mens en endogen ligand for RXRs er 9-cis retinoinsyre (9-cis). Heyman et al., Cell, 68:397-406 (1992) og Levin et al. Nature, 355:359-61 (1992).
Selv om både RARs og RXRs svarer på ATRA in vivo, på grunn av in vivo-omdannelsen av noe av ATRA til 9-cis, skiller reseptorene seg i mange viktige henseender. For det første er RARs og RXRs signifikant forskjellige i primærstruktur (for eksempel har de ligandbindende områdene av RARa og RXRa bare 27% aminosyreidentitet). Disse strukturelle forskjellene reflekteres i de forskjellige relative grader av mottagelighet av RARs og RXRs for forskjellige vitamin A-metabolitter og syntetiske retinoider. I tillegg finnes distinkt forskjellige mønstere for vevfordeling for RARs og RXRs. I motsetning til RARs, som ikke uttrykkes ved høye nivåer i innvollsvevene, er det for eksempel vist at RXRa mRNA er mest rikelig i leveren, nyren, lungen, muskelen og tarmen. Endelig har RARs og RXRs forskjellig målgenspesifisitet. Responselementer er for eksempel nylig identifisert i de cellulære retinale bindingproteintype II (CRBPII)- og apolipoprotein AI-genene som overfører mottagelighet til RXR, men ikke til RAR. Videre er det nylig vist at RAR undertrykker RXR-formidlet aktivering gjennom CRBPII RXR-responselemen-tet (Manglesdorf et al., Cell, 66:555-61 (1991)). Disse data indikerer at to retinoinsyre-svarende veier ikke bare er overflødige, men manifisterer i steden et komplekst samspill.
I betraktning av den relaterte, men klart distinkte, naturen av disse reseptorene, vil retinoider som er mere selektive for RAR-underfamilien eller RXR-underfamilien være av stor verdi for selektivt å regulere prosesser som formidles av en eller flere av RAR- eller RXR-isoformene, og ville tilveiebringe evnen til uavhengig regulering av de fysiologiske prosessene som formidles av RAR eller RXR. I tillegg vil også pan-agonist-retinoider som aktiverer en eller flere isoformer av både RAR og RXR være verdifulle for å regulere prosesser som formidles av begge disse underfamilier av retinoidreseptorer. I tillegg gir retinoider som fortrinnsvis påvirker en eller flere, men ikke alle reseptorisoformene også muligheten for øket terapeutisk effektivitet og reduserte bieffektprofiler når de anvendes for terapeutiske formål.
Forskjellige polyenforbindeiser er beskrevet å være anvendbare for behandling av beten-nelsestilstander, psoriasis, allergiske reaksjoner og for anvendelser som solbeskyttelse i
kosmetiske preparater. Se for eksempel US-PS 4.534.979 og 5.320.833. I tillegg har tri-endiolater av heksadienoiske syrer vist seg å være anvendbare ved syntesen av retinoin-og nor-retinoinsyrer. Se M.J- Aurell, et al., 49 Tetrahedron, 6089 (1993). Ingen retinoid aktivitet er imidlertid tilskrevet til disse forbindelsene.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer nye trienoiske forbindelser som har selektiv aktivitet på RAR og RXR eller pan-agonist aktivitet på en eller flere av hver av RAR- og RXR-isoformene. Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer også farmasøytiske preparater som inneholder disse nye trienoiske forbindelsene og fremgangsmåter for å bestemme nærværet av RAR- og/eller RXR-reseptorer.
Disse og forskjellige andre fordeler og nyhetstrekk som karakteriserer oppfinnelsen er med nøyaktighet påpekt i de medfølgende krav og danner en del av disse. For å forstå oppfinnelsen bedre, dets fordeler og formål som oppnås ved anvendelsen av den, skal det refereres til den medfølgende beskrivende del, i hvilken foretrukne utførelsesformer av oppfinnelsen er illustrert og beskrevet.
Overensstemmende med foreliggende oppfinnelse og slik de anvendes her, defineres føl-gende uttrykk med følgende betydninger, med mindre annet uttrykkelig er konstatert.
Uttrykket alkyl refererer til lineære, forgrenede eller cykliske strukturer som eventuelt er mettet eller umettet (for derved å resultere i alkenyl- og alkynyl-strukturer), så vel som kombinasjoner derav.
Uttrykket aryl refererer til en evnetuelt substituert, 6-leddet, aromatisk ring.
Uttrykket heteroaryl refererer til en eventuelt substituert, 5-leddet eller 6-leddet, hetero-cyklisk ring inneholdende et eller flere heteroatomer valgt fra gruppen bestående av ok-sygen, nitrogen og svovel.
Uttrykkene retinoid eller retinoider refererer til forbindelser som binder og/eller aktiverer en eller flere retinoid reseptorer, for derved å påvirke den transkripsjonale aktiviteten til et målgen til hvilket den aktiverte reseptor og forbindelse kompleksbindes.
Uttrykket pan-agonist refererer til et retinoid som aktiverer minst et medlem av både RAR-underfamilien (dvs., RARa, RARfi eller RARy) og RXR-underfamilien (dvs. RXR a, RXRI3 eller RXRy). Slike pan-agonist-retinoider aktiverer fortrinnsvis alle medlemmer av både RAR- og RXR-underfamiliene av retinoidreseptorer.
Slik de anvendes her, refererer isotopiske merker eller radiomerker til substituenter som er merket med deuterium, tritium, karbon 13 og/eller karbon 14, inkludert, men ikke begrenset til 14CH3, <13>CH3, CD3, C<3>H3 og <13>CD3.
Foreliggende oppfinnelse omfatter en forbindelse kjennetegnet ved at den har formelene: eller
hvor:
R<1>, R<2> og R<4> hver uavhengig er hydrogen, CF3 eller C2-Cg-allcyl;
R<3> og R<5> hver uavhengig er hydrogen, Ci-C4-alkyl eller OR^, hvor R^ er Cj-C2-alkyl eller C3-C7-cykloalkyl;
R9 erC^C^alkyl,
R^ til R^ hver uavhengig er hydrogen;
X er COOR<16>, hvor R^ representerer hydrogen;
Y er O, forutsatt at når Y er O, eksisterer ikke R<14> og R<15>;
R<i9> er
n er 1 eller 2.
De prikkede linjene betegner eventuelle dobbeltbindinger og de bølgede linjene avbilder karbon- til -karbon-bindinger i enten cis- eller trans-konfigurasjoner.
Foreliggende oppfinnelse omfatter også et farmasøytisk preparat kjennetegnet ved at det omfatter en forbindelse som nevnt ovenfor og en farmasøytisk akseptabel bærer, og at preparatet er sammensatt for oral, topisk, intravenøs, suppositorie- eller parenteral admi-nistrering.
Videre omfatter oppfinnelsen anvendelse av forbindelsene nevnt ovenfor, for fremstilling av et medikament til påvirkning av RAR- og/eller RXR-aktivitet.
Fortrinnsvis representerer R}, R<2> og R<4> uavhengig C3-Cg-forgrenede alkyler, fluoralky-ler eller perfluoralkyler, mere foretrukket representerer R<2> og R<4> uavhengig C3-Cg-forgrenede alkyler, mens R<1>, R<3> og R^ alle er hydrogen, og mest foretrukket er R<2> og R<4 >valgt fra gruppen bestående av isopropyl, t-butyl og CF3, mens R<*>, R<3> og R^ alle er hydrogen.
Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse omfatter også alle farmasøytisk godtagbare salter, så vel som estere, amider og formedisiner. Slike salter, estere og amider vil fortrinnsvis bli dannet i R^-, R<17-> og/eller R^-stillingene. Farmasøytisk godtagbare salter slik det anvendes i foreliggende beskrivelse, omfatter, men er ikke begrenset til: pyridin, ammonium, piperazin, dietylamin, nikotinamid, maursyre, urea, natrium, kalium, kalsium, magnesium, sink, litium, kanelsyre, metylamino, metansulfonsyre, picrinsyre, vinsyre, tri-etylamino, dimetylamino og tris(hydroksymetyl)aminometan. Ytterligere farmasøytisk akseptable salter er kjent for fagmannen.
Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse oppviser retinoid aktivitet og er spesielt anvendbare ved behandling av hudrelaterte sykdommer, inkludert uten begrensning, akti-niske keratoser, arsenikk keratoser, inflammatorisk og ikke-inflammatorisk acne, psoriasis, ichthyoser og andre forhornings- og hyperformerende sykdommer i huden, eksem, atopisk dermatitt, Darriers sykdom, ringorm, prevensjon og reversjon av glukokortikoid ødeleggelse (steroid atropi), som et lokalt anti-mikrobielt stoff, som hudpigmenterings-midler og for å behandle og reversere effektene av alder og fotoødeleggelse på huden. Forbindelsene er også anvendbare for å hindre og behandle cancerøse og pre-cancerøse tilstander, inkludert premaligne og maligne overformerende sykdommer slik som cancer i bryst, hud, prostata, hals, livmor, kolon, blære, spiserør, mave, lunge, strupehode, munn-hulen, blod- og lymfesystem, metaplasier, dysplasier, neoplasier, leukoplakier og papil-lomer i slimhinnemembranene og ved behandling av Kaposis sarcoma. I tillegg kan de foreliggende oppfinnelsene anvendes som midler for å behandle sykdommer i øyet, inkludert, uten begrensning, raskt formerende vitreoretinopati (PVR), retinal løsgjøring, tørt øye og andre corneopatier, så vel som ved å behandle og hindre forskjellige hjerte-kar sykdommer, inkludert, uten begrensning, sykdommer forbundet med lipidmetabolismen, slik som dyslipidemier, å hindre restenose og som et middel for å øke nivået av sirkuler-ende vevplasminogen aktivator (TPA). Andre anvendelser for forbindelsene ifølge oppfinnelsen omfatter å hindre og behandle tilstander og sykdommer forbundet med humant papilloma virus (HPV), inkludert vorter og genitale vorter, forskjellige betennelsessyk-dommer slik som lungefibrose, ileitt, colitt og Krohns sykdom, neurodegenerative sykdommer slik som Alzheimers sykdom, Parkinsons sykdom og amyotrofisk lateral sklero-se (ALS), uriktig slimavsondrende funksjon, inkludert utilstrekkelig produksjon av veksthormon, modulasjon av apoptose, inkludert både induksjonen av apoptose av inhi-bering av T-celle aktivert apoptose, gjenopprettelse av hårvekst, inkludert kombinasjonsterapier med foreliggende forbindelser og andre midler slik som Minoxidil®, sykdommer forbundet med immunsystemet, inkludert anvendelse av foreliggende forbindelser som immunoundertrykkere og immunostimulanter, modulasjon av organ transplantat avvisning og lettelse av sårhelbredelse, inkludert modulasjon av chelose. Det vil også forstås av fagmannen at retinoid forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse vil vise seg anvendbare i en hvilken som helst terapi i hvilken retinoider, inkludert RAR-selektive retinoider, RXR-selektive retinoider, og pan-agonist retinoider vil finne anvendelse.
Videre vil det forstås av fagmannen at forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse, inkludert farmasøytiske preparater og blandinger som inneholder disse forbindelsene, kan anvendes i en lang rekke kombinasjonsterapier for å behandle de tilstander og sykdommer som er beskrevet ovenfor. Således kan forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse anvendes i kombinasjon med andre terapier, inkludert, uten begrensning, kjemoterapeu-tiske midler slik som cytostatiske og cytotoksiske midler, immunologiske modifiserings-midler slik som interferoner, interleukiner, veksthormoner og andre cytokiner, hormonte-rapier, kirurgi og strålningsterapi.
Representative forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse vil omfatte uten begrensning, (2E, 4E, 6E)-7-(3,5-di-t-butylfenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoat; etyl-(2E, 4E, 6Z)-7-(3,5-di-t-butylfenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoat; (2E, 4E, 6E)-7-(3,5-di-t-butylfenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6Z)-7-(3,5-di-t-butylfenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoisk syre; etyl-(2E-4E)-7-(3,5-di-t-butylfenyl)-3-metylokta-2,4-dienoat; (2E,4E)-7-(3,5-di-t-butylfenyl)-3-metylokta-2,4-dienoisk syre; [etyl-(2E, 4E, 6E)-7-(3,5-di-t-butylfenyl)-3-metyldeka-2,4,6-trienoat; etyl-(2E, 4E, 6E)-7-(3,5-di-t-butylfenyl)-3-metyldeka-2,4,6-trienoat]; (2E, 4E, 6E)-7-(3,5-di-t-butylfenyl)-3-metyldeka-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6Z)-7-(3m5-di-t-butylfenyl)-3-metyldeka-2,4,6-trienoisk syre; etyl-(2E, 4E, 6E)-6-(6,8-di-t-butylkroman-4-yliden)-3-metylheksa-2,4,6-trienoat; etyl-(2E,4E,6Z)-6-(6,8-di-t-butylkroman-4-yliden)-3-metylheksa-2,4,6-trienoat; (2E, 4E, 6E)-6-(6,8-di-t-butylkroman-4-yliden)-3-metylheksa-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6Z)-6-(6,8-di-t-butyl-kroman-4-yliden)-3-metylheksa-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6E)-7-(3,5-di-trifluorme-tylfenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6Z)-7-(3,5-di-trifluormetylfenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6E)-7-(3,5-di-isopropylfenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6Z)-7-(3,5-di-isopropylfenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6E)-7-(4-t-butylfenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6E)-7-(3,5-di-t-butyl-4-metoksyfenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6E)-3-metyl-7-(3,5-di-t-butyl-4-metoksyfenyl)okta-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6E)-3-metyl-7-(3,4-dietylfenyl)okta-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6Z)-3-metyl-7-(3,4-di-etylfenyl)okta-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6E)-3-metyl-7-(3,5-di-t-butyl-4-etoksyfenyl)okta-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6E)-3-metyl-7-(3,4-di-t-butylfenyl)okta-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6E)-3-metyl-7-cykloheksyl-7-(3,5-di-t-butylfenyl)hepta-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6E)-3-metyl-7-(3,5-di-t-butylfenyl)nona-2,4,6-trienoisk syre og (2E, 4E, 6Z)-3-metyl-7-(3,4-dietyl-6-metylfenyl)nona-2,4,6-trienoisk syre.
Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse kan oppnås ved kjemisk rutinesyntese for fagmannen, for eksempel ved modifikasjon av de forbindelser som er beskrevet eller ved en total syntesemetode. I dette henseendet følger syntesen av forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse vel etablerte retinoidsynteseskjemaer og -teknikker slik de er beskrevet i M. I. Dawson og W. H. Okamura, "Chemistry and Biology of Synthetic Retinoids", kapittel 3, 8, 14 og 16, CRC Press, Inc., Florida (1990); M. I. Dawson og P D. Hobbs, The Synthetic Chemistry og Retinoids, i kapittel 2: "The Retinoids, Biology, Chemistry and Medicine", M.B. Sporn et al., utg. (andre utg.), Raven Press, New York, side 5-178 (1994) og R.S.H. Liu og A. E. Asato, "Photochemistry and Synthesis of Ste-reoisomers of Vitamin A, "40 Tetrahedron, 1931 (1984), hvilke beskrivelser inntas her som referanse. Rekkefølgen av trinnene i de generelle fremgangsmåtene for syntetisering av de nevnte forbindelsene er vist nedenfor. I tillegg vil mere detaljerte og illustrerende syntetiske skjemaer for spesifikke forbindelser finnes i de eksempler som er inkludert her.
Generell fremgangsmåte 1
I den generelle fremgangsmåte 1 kan forbindelsene fremstilles ved behandling av et aryl-keton A med et fosfonat, slik som dietylcyanometylfosfonat, for å gi nitrilet B, fulgt av reduksjon av B (hvor de eventuelle enkelt- eller dobbeltbindinger er illustrert med strekede linjer) i nærvær av et reduksjonsmiddel, slik som diisobutylaluminiumhydrid (Dibal) for å gi aldehydet C. cis- og trans-isomerene av aldehyd C kan separeres i dette trinn ved hjelp av tynnsjiktskromatografi (TLC), eller ved hjelp av andre anerkjente fremgangsmåter som er kjent for fagmannen. Disse separerte aldehydene C behandles så med et fosfonat, slik som trietyl-3-alkyl-4-fosfonokrotonat, for å gi trienoatesterene D, som i sin tur kan forsåpes under basiske betingelser for å gi karboksylsyren E.
Alternativt kan ved å anvende den generelle fremgangsmåte 2, som er vist nedenfor cis-isomeren av aldehyd C fremstilles fra alkinet F. Spesielt fremstilles arylalkyn F fra aryl acetofenon A ved behandling med et fosforyleringsmiddel, slik som CIPO(EtO)2, i nærvær av en sterk base, slik som litiumdiisopropylamid (LDA). Arylalkin F behandles så med en passende nitrilkilde, slik som PhOCN, i nærvær av en base, slik som nBuLi, for å gi nitril G, som så underkastes reduktiv metylering for å gi utelukkende cis-isomeren av nitril B. Nitril B reduseres så til det tilsvarende aldehyd C og homologeres på samme måte som beskrevet i generell fremgangsmåte 1 ovenfor for å gi forbindelsene D og E.
Generell fremgangsmåte 2
Andre analoger av forbindelser kan fremstilles ved hjelp av generell fremgangsmåte 3, men først å redusere dobbeltbindingen i nitril B (hvor de eventuelle enkelt- eller dobb-beltbindinger er illustrert med strekede linjer) for å gi nitril I. Deretter reduseres nitril I i nærvær av Dibal for å gi aldehyd J, som i sin tur behandles med et fosfonat, slik som trie-tyl-3-alkyl-4-fosfonokrotonat, for å gi dienoatester K. Forsåpning av dienoatester K via base, slik som KOH/MeOH, gir den dienoiske syren L.
Generell fremgangsmåte 3
Radiomerkede homologer av forbindelsene kan fremstilles ved hjelp av den generelle fremgangsmåte 4 vist nedenfor. Spesielt oksyderes forbindelse A til metylester B, som så reduseres med en tritiumhydridkilde, slik som LiAP<t>L}, til alkohol C. Oksidasjon av den tritierte alkohol C til aldehyd D, fulgt av kondensasjon med ylidet av trietylfosfonokrotonat gir den tritierte esteren E. Ester E kan så forsåpes for å gi den endelige tritiummerke-de syren F i høyt utbytte med høy (>20 Ci/mmol) spesifikk aktivitet. Denne metoden er beskrevet i detalj i Boehm et al., "Synthesis of High Specific Activity [<3>H]-9-cis-Retinoic Acid and Its Application for Identifying Retinoids with Unusual Binding Properties", 37 J. Med. Chem., 408-414 (1994), hvis beskrivelse inntas her som referanse. Generell fremgangsmåte 4
Det vil forstås av fagmannen at visse modifikasjoner kan foretas i de ovenfor beskrevne fremgangsmåtene slik at de forblir innenfor foreliggende oppfinnelses område. Forbindelsene kan for eksempel fremstilles i form av de tilsvarende amider eller estere, passende fosforaner kan anvendes i stedenfor fosfonater, og andre reduksjonsmidler enn LiAl<3>H4 kan anvendes i de synteser som er angitt ovenfor. Videre vil det forstås at andre isotopiske merker kan anvendes, inkludert <13>CH3, <*3>CD3 og lignende. Disse merkene kan inn-føres ved anvendelse av det passende merkede MeLi (for eksempel l3CH3Li) som vist i skjema 1. Deretter er resten av syntesen som vist i skjema 1.
I et annet aspekt kombineres retinoid forbindelsene, deres farmasøytisk akseptable salter eller hydrolyserbare estere ifølge foreliggende oppfinnelse i en blanding med en farma-søytisk akseptabel bærer for å tilveiebringe farmasøytiske preparater som kan anvendes for behandling av de biologiske tilstandene eller sykdommene som er anført her hos pat-tedyrarter, og mere foretrukket hos mennesker. Den spesielle bæreren som anvendes i disse farmasøytiske preparatene kan ha en lang rekke former avhengig av den type administrasjon som ønskes, for eksempel intravenøs, oral, topisk, suppositorium eller parenteral.
Ved fremstilling av preparatene i oral væskedoseringsform (for eksempel suspensjoner, eliksirer og løsninger), kan det anvendes typiske farmasøytiske medier, slik som vann, glykoler, oljer, alkoholer, smaksstoffer, konserveringsmidler, farvestoffer og lignende. På lignende måte vil det når det fremstilles orale faste doseringsformer (for eksempel pulve-re, tabletter og kapsler), anvendes bærere slik som stivelser, sukkere, fortynningsmidler, granuleringsmidler, smøremidler, bindemidler, desintegreringsmidler og lignende. På grunn av at de er lette å administrere representerer tabletter og kapsler den mest fordel-aktige orale doseringsformen for farmasøytiske preparater ifølge oppfinnelsen.
For parenteral administrasjon vil bæreren typisk omfatte sterilt vann, selv om andre ingredienser som hjelper til med løselighet eller tjener som konserveringsmidler også kan tilsettes. Videre kan det også fremstilles injiserbare suspensjoner, i hvilket tilfelle passende væskeformige bærere, suspenderingsmidler og lignende vil anvendes.
For topisk administrasjon kan forbindelsene ifølge oppfinnelse sammenblandes ved anvendelse av milde, fuktende baser, slik som salver eller kremer. Eksempler på egnede salvebaser er vaselin, vaselin pluss flyktige silikoner, lanolin og vann i olje-emulsjoner slik som Eucerin<TM> (Beiersdorf). Eksempler på egnede krembaser er Nivea^<M> Cream (Beiersdorf), kald krem (USP), Purpose Cream^<M> (Johnson & Johnson) hydrofil salve (USP), og Lubriderm™ (Warner-Lambert).
De farmasøytiske preparatene og forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse vil gene-relt administreres i form av en doseringsenhet (for eksempel tablett, kapsel osv.) med fra ca 1 ug/kg kroppsvekt til ca 500 mg/kg kroppsvekt, mere foretrukket fra ca 10 ug/kg til ca 250 mg/kg, og mest foretrukket fra ca 20 ug/kg til ca 100 mg/kg. Slik det er anerkjent av fagmannen, vil den spesielle mengde farmasøytisk preparat ifølge foreliggende oppfinnelse som skal administreres til en pasient avhenge av en rekke faktorer, inkludert uten begrensning, den ønskede biologiske aktiviteten, pasientens tilstand og toleranse for me-disinen.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer en fremgangsmåte for bestemmelse av nærværet av en eller flere RAR- og/eller RXR-reseptorer i en prøve, kjennetegnet ved at den omfatter å kombinere forbindelsen nevnt ovenfor med en prøve som inneholder en eller flere ukjente retinoidreseptorer, og å bestemme om nevnte forbindelser bindes til en reseptor i prøven.
Isotopisk merkede og radiomerkede forbindelser og fremgangsmåter for syntese av dem, inkludert homologer merket med deuterium, tritium, karbon 13 og karbon 14, kan anvendes. De merkede forbindelsene oppviser en spesifikk aktivitet på minst 15 Ci/mmol, og mere foretrukket minst 25 Ci/mmol og mest foretrukket minst 40 Ci/mmol. Slike merkede forbindelser vil også vise seg å være anvendbare ved identifikasjon av forbindel-semetabolitter ved undersøkelser av stoffskifte hos dyr.
På grunn av den selektive spesifisiteten til forbindelsene ifølge oppfinnelsen for retinoid reseptorer, kan disse forbindelsene også anvendes for å rense prøver av RAR og RXR in vitro. Slik rensing kan utføres ved å blande prøver inneholdende retinoidreseptorer med en eller flere av forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse, slik at forbindelsen (ligand) bindes til reseptoren, og så separere ut den bundne ligand/reseptor-kombinasjonen ved separasjonsteknikker som er kjente for fagmannen. Disse teknikkene omfatter kolonne-separasjon, filtrering, sentrifugering, merking og fysisk separasjon, og antistoff komp-leksdannelse blant andre.
Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse omfatter også racemat, individuelle stereo-isomerer og blandinger derav. Disse isomerene isoleres så ved hjelp av standard oppløs-ningstekniker, inkludert fraksjonert krystallisasjon og chiral kolonnekromatografi.
Forbindelsene og de farmasøytiske preparatene ifølge foreliggende oppfinnelse kan med fordel anvendes ved behandling av de sykdommer og tilstander som er beskrevet her. I dette henseendet vil forbindelsene og preparatene vise seg spesielt anvendbare ved behandling av hud-relaterte sykdommer og tilstander, slik som acne, psoriasis og fotoødeleggelse, cancerøse og precancerøse tilstander, sykdommer i øyet, hjerte-kar sykdommer, betennelses- og neurodegenerative sykdommer, sykdommer forbundet med humant pa-pillomavirus, ufullstendig slimavsondrende funksjon, modulasjon av apoptose, sykdommer i immunsystemet, sårhelbredelse og gjenopprettelse av hårvekst.
Videre har forbindelsene og de farmasøytiske preparatene ifølge foreliggende oppfinnelse en rekke fordeler sammenlignet med tidligere identifiserte retinoidforbindelser. For eksempel er forbindelsene ekstremt kraftige aktivatorer av RAR og RXR som vist i den ko-transfeksjonsanalyse som er beskrevet senere her, som fortrinnsvis oppviser 50% maksi-mal aktivering (dvs. EC50) av en e^er Aere av retinoid reseptorene i en konsentrasjon på mindre enn 100 nM, mere foretrukket en konsentrasjon på mindre enn 50 nM, enda mere foretrukket i en konsentrasjon på mindre enn 20 nM og mest foretrukket i en konsentrasjon på mindre enn 10 nM. De RAR og RXR-selektive forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse aktiverer også fortrinnsvis en underfamilie av retinoidreseptorer på et styrkenivå som er minst to ganger større, fortrinnsvis minst fem ganger større, mere foretrukket minst 10 ganger større og mest foretrukket på et styrkenivå på minst 100 ganger større enn den andre underfamilien av retinoidreseptorer. I tillegg er forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse også lettere å syntetisere, gir større stabilitet og biotilgjengelig-het, og synes å være mindre teratogen sammenlignet med henholdsvis all-trans retinoinsyre og 9-cis retinoinsyre, kjente RAR- og RXR-aktive forbindelser.
Oppfinnelsen skal illustreres ytterligere med henvisning til de følgende, ikke-begrensende eksemplene.
Eksempler 1- 2
(2E, 4E, 6E)-7-(3,5-Di-t-butylfenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoisk syre (9) og (2E, 4E, 6Z)-7-(3,5-di-t-butylfenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoisk syre (10), fremstilt ifølge skjema 1 som er illustrert og beskrevet nedenfor.
3. 5- di- t- butvlacetofenon ( 2 ). Til 20g (85,5 mmol) 3,5-di-tertbutylbenzosyre 1 i 100 ml tørt THF ved -78°C ble det tilsatt 94,0 ml (188,0 mmol) av en 2N eterløsning av MeLi. Reaksjonsblandingen ble langsomt oppvarmet til romtemperatur og omrørt i ytterligere 30 minutter, så helt i mettet, vandig NH4CI (200 ml). Det organiske produktet ble ekstrahert med heksaner (2 X 100 ml), tørket (MgSOa), filtrert, konsentrert og renset ved kromatografi (Si02, 2 EtOAc-heksaner) for å gi 15 g (64,7 mmol) av keton 2 (75,7% utbytte): TLC (5% EtOAc-95% heksaner) Rf 0,8; <i>H-NMR (CDCI3) 5 1,39 (s, 18H), 6(CH3)), 2,61 (s, 3H, CH3), 7,64 (t, J=l Hz, 1H, Ar-H), 7,80 (d, J=l Hz, 2H, Ar-H).
3-( 3. 5- di- t- butvlfenvnbut- 2- enitril ( 3) ( trans^ l oe ( 4 ) ( cisY Til 2,43 g (13,7 mmol) dietylcyanometylfosfonat i 10 ml i tørt THF ble det tilsatt 440 mg (10,96 mmol) NaH (60% i mineral olje). Reaksjonsblandingen ble omrørt i 30 minutter, fulgt av tilsetning av 1,59 g (6,85 mmol) keton 2 i 5 ml tørt THF. Etter omrøring i 12 timer ble blandingen tilsatt mettet, vandig NH4CI (50 ml) og produktene ble ekstrahert med eter (2 x 50 ml). Eterekstraktene ble vasket (vann så saltløsning), tørket (MgSOa), filtrert, konsentrert og renset ved preparativ TLC (SiC>2, 2,5% EtOAc-heksaner) for å gi 1,1 g (4,4 mmol) av trans-isomeren 3 og 104 mg (0,4 mmol) av cis-isomeren 4 (70% kombinert utbytte). Trans-isomer 3: TLC (5% EtOAc-95% heksaner) Rf 0,9; ^H-NMR (CDCI3) 5 1,32 (s, 18H, 6(CH3)), 2,49 (s, 3H, CH3), 5,59 (s, 1H, =CH), 7,25 (d, J = 1 Hz, 2H, Ar-H), 7,50 (d, J = 1 Hz, 1H, Ar-H). Cis-isomer 4: TLC (5% EtOAc-95% heksaner) Rf 0,8; <i>H-NMR (CDCI3) 5 1,42 (s, 18H, 6(CH3)), 2,31 (s, 3H, CH3), 5,34 (s, 1H, =CH), 7,39 (d, J = 1 Hz, 2H, Ar-H), 7,49 (d, J = 1 Hz, 1H, Ar-H).
3- r3. 5- di- t- butvlfenvnbut- 2- enal ( 5) Ctrans- isomerl Til 736 mg (2,89 mmol) av 3 i 5 ml CH2CI2 ved -78°C ble det tilsatt 2,31 ml (3,47 mmol) av en 1,5 M løsning av DIBAL i toluen. Etter omrøring i 15 minutter ved -78°C ble reaksjonsblandingen stanset med 10 ml av en mettet, vandig løsning av Rochelle salt. Produktet ble ekstrahert med eter (2 X 20 ml), vasket (vann, så saltløsning), tørket (MgSOa), filtrert, konsentrert og renset ved kromatografi (Si02, 3% EtOAc-heksaner) for å gi 462,3 mg (1,80 mmol) av 5 (62% utbytte): TLC (10% EtOAc-90% heksaner) Rf 0,5; ^H-NMR (CDCI3) 8 1,34 (s, 18H, 6(CH3)), 2,59 (s, 3H, CH3), 6,50 (d, J = 8,0 Hz, 1H, =CH), 7,39 (d, J = 1 Hz, 2H, Ar-H), 7,51 (d, J = 1 Hz, 1H, Ar-H), 10,18 (d, J = 8,0 Hz, 1H, CHO).
3-( 3. 5- di- t- butylfenyl) but- 2- enal ( 6) ( cis- isomer). Cis-isomeren 6 ble fremstilt fra den tilsvarende cis-isomer 4 ved å anvende den samme fremgangsmåte som beskrevet for 5: TLC (10% EtOAc-90% heksaner) Rf 0,55; <i>H-NMR (CDCI3) 5 1,34 (s, 18H, 6(CH3)), 2,34 (s, 3H, CH3), 6,12 (d, J = 8,0 Hz, 1H, =CH), 7,10 (d, J = 1 Hz, 2H, Ar-H), 7,46 (t, J = 1 Hz, 1H, Ar-H), 9,45 (d, J = 8,0 Hz, 1H, CHO).
Etvl ( 2E. 4E. 6EV7-( 3. 5- di- t- butvlfenvl)- 3- metvlokta- 2. 4. 6- trienoat ( 7V Til 790 mg (3,0 mmol) trietyl-3-metyl-4-fosfonokrotonat i 8 ml tørt THF ved -78°C ble det tilsatt 1,2 ml av en 2,5 M nBuLi-løsning i heksaner. Etter omrøring i 15 minutter ble løsningen inneholdende ylidet av trietylfosfonokronatet tilsatt til 258 mg (1,0 mmol) av trans-isomeren 5 i 8 ml tørt THF ved -78°C. Reaksjonsblandingen ble varmet opp til RT, stanset med mettet, vandig NH4CI (20 ml) og produktene ble ekstrahert med eter (2X50 ml). Eterekstraktene ble vasket (vann, så saltløsning), tørket (MgS04), filtrert, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (Si02, 5% EtOAc-heksaner) for å gi 294 mg (0,8 mmol) av E,E,Eisomeren av 7 (49% utbytte): TLC (5% EtOAc-95% heksaner) Rf 0,78; <!>H-NMR (CDCI3) 5 1,30 (t, J = 7,7 Hz, 3H, CH2CH3), 1,34 (s, 18H,6(CH3)), 2,28 (s, 3H, CH3), 2,39 (s, 3H, CH3), 4,17 (m, 2H, CH2CH3), 5,82 (s, 1H, =CH), 6,40 (s, J = 15 Hz, 1H, =CH), 6,54 (d, J = 15 Hz, 1H, =CH), 7,04 (m, 1H, =CH), 7,21 (d, J = 1Hz, 2H, Ar-H), 7,39 (d, J = 1 Hz, 1H, Ar-H).
Etvl( 2E. 4E. 6ZV7-( 3. 5- di- t- butvlfenvl)- 3- metvlokta- 2. 4. 6- trienoat ( 8). 2E, 4E, 6Z-isomeren 8 ble fremstilt på samme måte som 2E, 4E, 6E-isomeren 7, bortsett fra at 6 ble anvendt i stedenfor 5: TLC (5% EtOAc-95% heksaner) Rf 0,82; <J>H-NMR (CDC13) 5 1,27 (t, J = 7,7 Hz, 3H, CH2CH3), 1,34 (s, 18H, 6(CH3)), 2,17 (s, 3H, CH3), 2,22 (s, 3H,CH3), 4,15 (m, 2H, CH2CH3), 5,74 (s, 1H, =CH), 6,26 (dd, J = 8 Hz, 2H, =CH), 6,80 (m, 1H, =CH), 7,10 (d, J=l Hz, 2H, Ar-H), 7,37 (t, J = 1 Hz, 1H, Ar-H).
( 2E. 4E. 6EV7-( 3. 5- di- t- butvlfenvlV3- metvlokta- 2. 4. 6- trienoisk syre ( 9). Til 180 mg (0,49 mmol) av 2E, 4E, 6E-etylesteren 7 i 5 ml meOH ble det tilsatt 1 ml 5N vandig NaOH løsning. Blandingen ble oppvarmet til tilbakeløp i 10 minutter, avkjølt til RT, surgjort med 20% vandig HCl-løsning og de organiske produktene ekstrahert med eter (2x10 ml). Etersjiktet ble vasket (H20, saltløsning), tørket (MgS04), filtrert og konsentrert. Rensing ved kolonnekromatografi (Si02, 20% EtOAc-heksaner) ga 157 mg (0,46 mmol) av 2E, 4E, 6E-isomer 9 (93% utbytte): TLC (10% MeOH-90% CHC13) Rf 0,6; smp. 196-198T; <i>H-NMR (CDCI3) 5 1,35 (s, 18H, 6(CH3)), 2,29 (s, 3H, CH3), 2,41 (s, 3H, CH3), 5,84 (s, 1H, =CH), 6,41 (d, J = 15 Hz, 1H, =CH), 6,54 (d, J = 15 Hz, 1H, =CH), 7,08 (m, 1H, =CH), 7,32 (d, J - 1Hz, 2H, Ar-H), 7,39 (t, J=lHz, 1H, Ar-H).
( 2E. 4E. 6ZV7-( 3. 5- di- t- butvlfenvlV3- metvlokta- 2. 4. 6- trienoisk syre ( 10V 2E. 4E, 6Z-isomer 10 ble fremstilt på samme måte som 9 bortsett fra at 8 ble anvendt i stedenfor 7: TLC (10% MeOH-90% CHC13) Rf 0,57, smp. 221-222°C, ^H-NMR (CDCI3) 8 1,34 (s, 18H, 6(CH3)), 2,18 (s, 3H, CH3), 2,23 (s, 3H, CH3), 5,77 (s, 1H, =CH), 6,27 (m, 2H, =CH), 6,84 (m, 1H, =CH), 7,10 (d, J = 1 Hz, 2H, Ar-H), 7,37 (t, J = 1 Hz, 1H, Ar-H).
Eksempel 3
(2E, 4E)-7-(3,5-di-t-butylfenyl)-3-metylokta-2,4-dienoisk syre (14), fremstilt ifølge i skjema 2 som er illustrert og beskrevet nedenfor.
3-( 3. 5- di- t- butvlfenvnbutanitril fl IV Til 300 mg (1,18 mmol) 3-(3,5-di-t-butylfenyl)-but-2-enitril 3 i 5 ml EtOAc ble det tilsatt 20 mg (katalytisk mengde) 10% Pd/C. Blandingen ble plassert under vakuum i 0,5 minutt, fulgt av tilsetning av H2-gass. Etter omrøring i 2 timer under H2-gass ble løsningen filtrert gjennom celitt, celitten vasket med EtOAc (3 x 5 ml) og løsningen konsentrert for å gi 300 mg (1,17 mmol) av det reduserte produktet 11 (99% utbytte): TLC (5% EtOAc-95% heksaner) Rf 0,8; ^H-NMR (CDCI3) 8 1,34 (s, 18H, 6(CH3)), 1,50 (d, 3H, CH3), 2,60 (m, 2H, CH2), 3,15 (m, 1H, CH), 7,05 (d, J = 1 Hz, 2H, Ar-H), 7,33 (t, J=l Hz, 1H, Ar-H).
3- f3. 5- di- t- butvlfenvl) butanairi2). Til 300 mg (1,17 mmol) av nitrilen 11 i 5 ml CH2C12 ved -78°C ble det tilsatt 0,93 ml (1,4 mmol) av en 1,5 M DIBAL-løsning i toluen. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 5 minutter, stanset med mettet vandig NH4CI 10 ml), ekstrahert med eter (2 x 20 ml), tørket (MgS04), filtrert, konsentrert og renset ved kromatografi (Si02, 5% EtOAc-heksaner) for å gi 188 mg (0,72 mmol) av det ønskede aldehydet 12 (62% utbytte): TLC (5% EtOAc-95% heksaner) Rf0,8; ^H-NMR (CDC13) 5 1,34 (s, 18H, 6(CH3)), 1,35 (d, 3H, CH3), 2,70 (m, 2H, CH2), 3,36 (m, 1H, CH), 7,06 (d; J = 1 Hz, 2H, Ar-H), 7,28 (t, J = 1Hz, 1H, Ar-H), 9,70 (t, 1H, CHO).
Etvl-( 2E. 4EV7-(, 3. 5- di- t- butvlfenvlV3- metvlokta- 2. 4- dienoat 03Y Forbindelse 13 ble fremstilt fra 12 på lignende måte som beskrevet for forbindelse 7: TLC (5% EtOAc-95% heksaner) Rf 0,88; ^H-NMR (CDCI3) 5 1,30 (m, 6H, CH2CH3+CH3), 1,34 (s, 18H, 6(CH3)), 2,20 (s, 3H, CH3), 2,40 (m, 2H, CH2), 2,85 (m, 1H, CH), 4,14 (m, 2H, CH2CH3), 5,62 (s, 1H, =CH), 6,03 (m, 2H, =CH), 7,00 (d, J = 1 Hz, 2H, Ar-H), 7,24 (t, J = 1 Hz, 1H, Ar-H).
( 2E. 4EV7- 0. 5- di- t- butvlfenvlV3- metvlokta- 2. 4- dienoisk syre ( 14). Forbindelse 14 ble fremstilt fra 13 på lignende måte som beskrevet for forbindelse 9: TLC (10% MeOH-90% CHC13) Rf 0,5; smp. 127-128T; ^H-NMR (CDCI3) 6 1,28 (d, J = 8 Hz, 3H, CH3), 1,32 (s, 18H, 6(CH3)), 2,23 (s, 3H, CH3), 2,46 (m, 2H, CH2), 2,86 (m, 1H, CH), 5,69 (s, 1H, =CH), 6,10 (m, 2H, =CH), 7,01 (d, J = 1Hz, 2H, Ar-H), 7,26 (t, J = 1 Hz, 1H, Ar-H).
Eksempel 4
(2E, 4E, 6Z)-7-(3,5-di-t-butylfenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoisk syre (10), alternativ fremstilling av forbindelse (10) ifølge skjema 3 som er illustrert og beskrevet nedenfor.
1. 3- di- t- butyl- 5- etvnvlbenzen ( 15V Til 9,86 ml (24,7 mmol) av en 2,5 N LDA-løsning i THF ved -78°C ble det tilsatt 4,75 g (20,47 mmol) keton 2 (fra eksempler 1-2) i 3 ml tørt THF. Etter omrøring i 30 minutter ble det tilsatt 2,96 ml (20,47 mmol) dietylfosfonylklo-rid og reaksjonsblandingen ble oppvarmet til RT i 1 time. Reaksjonsblandingen ble igjen avkjølt til -78°C, fulgt av tilsetning av 19,7 ml (49,2 mmol) av en 2,5 N LDA-løsning i THF og oppvarmet til RT. Vann (50 ml) ble tilsatt og blandingen ble ekstrahert med heksaner (2 x 40 ml). Den kombinerte organiske ekstrakten ble vasket (vann, så saltløsning), tørket (MgSOa), filtrert, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (SiC>2, 2% EtOAc-heksaner) for å gi 3,02 g (14,1 mmol) av forbindelse 15 (69% utbytte): TLC (heksaner) Rf 0,9; <i>H-NMR (CDC13) 6 1,31 (s, 18H, 6(CH3)), 3,02 (s, 1H, C=CH), 7,36 (d, J=l Hz, 2H, Ar-H), 7,42 (t, J=l Hz, 1H, Ar-H).
3 -( 3. 5- di- t- butvlfenvl) propvnitril ( 16). Til 1,67 g (7,80 mmol) propyn 15 i 25 ml tørt THF ved -78°C ble det tilsatt 3,75 ml (9,38 mmol) nBuLi (2,5 M i heksaner). Etter om-røring i 15 minutter ble 1,12 g (9,41 mmol) PhOCN tilsatt og reaksjonsblandingen ble
oppvarmet til RT. Blandingen ble tilsatt 25 ml vandig 6 N NaOH, ekstrahert (EtOAc, 2 x 25 ml), vasket (vann, så saltløsning), tørket (MgSOa), filtrert, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (Si02, 5% EtOAc-heksan) for å gi 1,71 g (7,16 mmol) av 16 som et hvitt fast stoff (92% utbytte): TLC (heksaner) Rf 0,4; <i>H-NMR (CDCI3) 5 1,32 (s, 18H, 6(CH3)), 7,45 (d, J - 1 Hz, 2H, Ar-H), 7,58 (t, J = 1 Hz, 1H, Ar-H).
3-( 3. 5- di- t- butylfenyl) but- 2- enitril ( 4) ( cis- isomer). En 250 ml flammedreiet rundkolbe ble tilsatt 3,27 g (17,17 mmol) vannfritt kobberiodid og 25 ml tørt THF. Blandingen ble avkjølt til 0°C, fulgt av langsom tilsetning av 24,5 ml (34,3 mmol) MeLi (1,4 M i eter). Etter at løsningen var blitt klar og farveløs ble den avkjølt til -78°C og en løsning av 1,71 g (7,16 mmol) av 16 i 10 ml tørt THF ble tilsatt dråpevis. Blandingen ble omrørt ved - 78°C i 45 minutter og tilsatt 40 ml av en 1:1-blanding av MeOH og mettet, vandig NHaCl-løsning. Produktet ble ekstrahert med EtOAc (2 x 40 ml), vasket (2% NaOH fulgt av mettet NH4CI, så vann, så saltløsning), tørket (MgS04), filtrert, konsentrert og renset gjennom en kort silikagelpute for å gi 1,64 g (6,80 mmol) av cis-isomer 4 (95% utbytte): TLC (5% EtOAc-95% heksaner) Rf0,8; <i>H-NMR (CDCI3) 5 1,42 (s, 18H, 6(CH3)), 2,31 (s, 3H, CH3), 5,34 (s, 1H, =CH), 7,39 (d, J=l Hz, 2H, Ar-H), 7,49 (d, J= 1 Hz, 1H, Ar-H).
Den gjenværende syntese av forbindelser 6, 8 og sluttprodukt 10 ble utført som beskrevet i eksempler 1-2 ovenfor.
Eksempler 5- 6
(2E,4E,6E)-7-(3,5-di-t-butylfenyl)-3-metyldeka-2,4,6-trienoisk syre (27) og (2E, 4E, 6Z)-7-(3,5-di-t-butylfenyl)-3-metyldeka-2,4,6-trienoisk syre (28), fremstilt overensstemmende med kjerna 4 som er illustrert og beskrevet nedenfor.
3. 5- di- t- butvlbenzvlalkohol (" 17Y Til 10,0 g (42,7 mmol) av syre 1 i 20 ml tørt THF ved 0°C ble det tilsatt 42,7 ml (42,7 mmol) LAH (1,0 M i THF). Reaksjonsblandingen ble varmet opp til 50°C og omrørt i 15 minutter. Etter avkjøling av reaksjonen til RT ble det tilsatt 20% vandig HC1 inntil løsningen ble klar. Oppløsningen ble ekstrahert med EtOAc (2x50 ml), og den kombinerte EtOAc-ekstrakt ble vasket (vann, så saltløsning), tørket (MgSOd), filtrert og konsentrert for å gi 8,8 g (40,0 mmol) av 17 (94% utbytte): produktet ble direkte anvendt i det neste trinnet. TLC (20% EtOAc-80% heksaner) Rf0,4; <i>H-NMR (CDC13) 6 1,33 (s, 18H, 6(CH3)), 4,68 (s, 2H, CH2) 7,22 (d, J= 1 Hz, 2H, Ar-H), 7,38 (t, J = 1 Hz, 1H, Ar-H). 3. 5- di- t- butvlbenzaldehvd Q8Y Til 8,8 g (40,0 mmol) av alkohol 17 i 20 ml CH2Cl2 ble det tilsatt 50,0 g (575 mmol) Mn02. Reaksjonsblandingen ble kraftig omrørt i 8 timer og filtrert gjennom en pute bestående av et toppsjikt av celitt og et bunnsjikt av silisiumdi-oksid. Filteret ble vasket gjentatte ganger med 50 ml alikvoter av CH2C12 inntil det ikke ble eluert mer produkt fra filteret. Den resulterende forbindelse 18 (8,3 g (38,1 mmol)) ble fastslått å være ren ved hjelp av ^H-NMR og ble anvendt direkte i det neste trinnet (95% utbytte): TLC (20% EtOAc-80% heksaner) Rf0,6; ^H-NMR (CDCI3) 5 1,34 (s, 18H, 6(CH3)), 7,72 (m, 3H, Ar-H), 10,01 (s, 1H, CHO). 1 -( 3. 5- di- t- butvlfenyHbutan- 1 - olf 19Y Til 2,0 g (9,17 mmol) av aldehyd 18 i 10 ml tørr eter ved 0°C ble det tilsatt 5,5 ml (11,0 mmol) propylmagnesiumklorid (2,0 M i eter). Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til RT og reaksjonen stanset med vann (50 ml), ekstrahert (eter, 2 x 50 ml), vasket (vann og så saltløsning), tørket (MgSOa), filtrert og konsentrert for å gi 2,37 g (9,05 mmol) av alkohol 19 (ren ved ^H-NMR) som ble direkte anvendt i det neste trinnet (98% utbytte): TLC (20% EtOAc-80% heksaner) Rf 0,5; <*>H-NMR (CDCI3) 5 0,96 (t, 3H, CH2CH3), 1,34 (s, 18H, 6(CH3)), 1,66 (m, 2H, CH2), 1,84 (m, 1H, CH), 4,66 (m, 1H, CHOH), 7,18 (d, J = 1 Hz, 2H, Ar-H), 7,34 (t, J = 1 Hz, 1H, Ar-H). 1 -( 3. 5- di- t- butvlfenvnbutan- 1 - one ( 20). Til 2,37 g (9,05 mmol) av alkohol 19 i 18 ml CH2C12 ble det tilsatt 7,86 g (90,45 mmol) av Mn02. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 3 timer, så filtrert (celitt over silikagelpute) og puten ble vasket gjentatte ganger med 20 ml alikvoter av CH2C12. Etter konsentrering ble keton 20 renset ved kromatografi (Si02, 3% EtOAc-heksaner) for å gi 941 ml (3,62 mmol) av 20 (40% utbytte): TLC (10% EtOAc-90% heksaner) Rf 0,7; ^H-NMR (CDCI3) 5 1,01 (t, 3H, CH2CH3), 1,34 (s, 18H, 6(CH3)), 1,78 (m, 2H, CH2CH3), 2,96 (t, J = 7 Hz, 2H, CH2CH2CH3), 7,63 (t, J = 1 Hz, 1H, Ar-H), 7,83 (d, J = 1 Hz, 2H, Ar-H).
3-( 3. 5- di- t- butvlfenvnheks- 2- enitril ( 21) ( trans) oe ( 22) ( cis). Til 661 mg (3,73 mmol)
dietylcyanometylfosfonat i 5 ml tørt THF ble det tilsatt 127 mg (3,17 mmol) natriumhydrid (60% dispersjon i mineralolje). Blandingen ble omrørt i 5 minutter, fulgt av tilsetning av 484 mg (1,87 mmol) av keton 20 i 2 ml tørt THF. Reaksjonen ble oppvarmet til tilba-keløp i 30 minutter, avkjølt til RT, stanset med mettet, vandig NH4CI (15 ml), ekstrahert med eter (2x15 ml), vasket (vann og så saltløsning), tørket (MgSC>4), filtrert og konsentrert. Rensing ved kromatografi (preparativ TLC, Si02, 10% EtOAc-heksaner) ga 329 mg (1,16 mmol) av trans-isomeren 21 og 70,5 mg (0,25 mmol) av cis-isomeren 22 (75% kombinert utbytte). Trans-isomer 21 TLC (10% EtOAc-90% heksaner) Rf 0,8; <i>H-NMR (CDCI3) 5 0,97 (t, J 7 Hz, 3H, CH2CH3), 1,33 (s, 18H, 6(CH3)), 1,54 (m, 2H, CH2CH2CH3), 2,88 (t, J 7 Hz, 2H, CH2CH2CH3), 5,50 (s, 1H, =CH), 7,23 (d, J = 1 Hz, 2H, Ar-H), 7,50 (t, J = 1 Hz, 1H, Ar-H). Cis-isomer 22: TLC (10% EtOAc-90% heksaner) Rf 0,9; ^H-NMR (CDCI3) 6 0,93 (t, J = 7 Hz, 3H, CH2CH3), 1,34 (s, 18H 6(CH3)), 1,48 (m, 2H, CH2CH2CH3), 2,57 (t, J = 7 Hz, 2H, CH2CH2CH3), 5,32 (s, 1H, =CH), 7,28 (d, J - 2 Hz, 2H, Ar-H), 7,45 (t, J = 2 Hz, 1H, Ar-H).
3-( 3. 5- di- t- butvlfenvl) heks- 2- enal ( 23) ( trans ). Til 166 mg (0,59 mmol) av nitril 21 i 4 ml CH2C12 ved -78°C ble det tilsatt 0,59 ml (0,88 mmol) DIB AL (1,5 M i toluen). Reaksjonsblandingen ble omrørt i 10 minutter og reaksjonen stanset med 10 ml mettet, vandig løsning av Rochelle salt. Produktet ble ekstrahert med eter (2 x 20 ml), vasket (vann og så saltløsning), tørket (MgS04), filtrert, konsentrert og renset ved kromatografi (preparativ TLC, Si02, 3% EtOAc-heksaner) for å gi 141 mg (0,49 mmol) av 23 som en olje (83% utbytte): TLC (10% EtOAc-90% heksaner) Rf 0,7; <i>H-NMR (CDC13) 6 0,97 (t, J = 7 Hz, 3H, CH2CH3), 1,34 (s, 18H, 6(CH3)), 1,57 (m, 2H, CH2CH2CH3), 3,03 (t, J = 7 Hz, 2H, CH2CH2CH3), 6,32 (d, J = 8 Hz, 1H, =CH), 7,33 (d, J= 1Hz, 2H, Ar-H), 7,48 (t, J= 1 Hz, 1H, Ar-H), 10,15 (d, J = 8Hz, 1H, CHO).
3-( 3. 5- di- t- butylfenvl) heks- 2- enal ( 24) ( cisY Forbindelse 24 ble fremstilt på samme måte som 23 bortsett fra at cis-isomeren 22 ble anvendt i stedenfor 21: TLC (10% EtOAc-90% heksaner) Rf 0,8; <i>H-NMR (CDC13) 5 0,94 (t, J = 7 Hz, 3H, CH2CH3), 1,34 (s, 9H, CH3), 1,35 (s, 9H, CH3), 1,51 (m, 2H, CH2CH2CH3), 2,58 (t, J = 7 Hz, 2H, CH2CH2CH3), 6,10 (d, J = 8 Hz, 1H, =CH), 7,04 (d, J = 2 Hz, 2H, Ar-H), 7,43 )t, J = 2 Hz, 1H, Ar-H), 9,42 (d, J = 8 Hz, 1H, CHO).
Etvl-( 2E. 4E- 6E)- 7-( 3. 5- di- t- butvlfenvl)- 3- metvldeka- 2. 4. 6- trienoat ( 25). Til 391 mg (1,48 mmol) trietyl-3-metyl-4-fosfonokrotonat i 5 ml tørt THF ved -78°C ble det tilsatt 0,59 ml (1,48 mmol) av en 2,5 M nBuLi-løsning i heksaner og 2,5 ml DMPU. Etter om-røring i 15 minutter ble løsningen inneholdende ylidet av trietylfosfonokrotonat tilsatt til 141 mg (0,49 mmol) 23 i 5 ml tørt THF ved -78°C. Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til RT, stanset med mettet, vandig NH4CI (20 ml) og produktene ble ekstrahert med eter (2 x 25 ml). Eterekstraktene ble vasket (vann, så saltløsning), tørket (MgS04), filtrert, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi ( Si02, 5% EtOAc-heksaner) for å gi 171 mg (0,43 mmol) av all-trans-isomeren 25 (88% utbytte): TLC (5% EtOAc-95% heksaner) Rf 0,5; ^H-NMR (CDCI3) 6 0,94 (t, J = 7 Hz, 3H, CH2CH3), 1,29 (t, J = 7 Hz, 3H, CH2CH3), 1,34 (s, 18H, 6(CH3)), 1,52 (m, 2H, CH2CH2CH3), 2,39 (s, 3H, CH3), 2,70 (t, J = 7 Hz, 2H, CH2CH2CH3, 4,18 (m, 2H, CH2CH3), 5,80 (s, 1H, =CH), 6,42 (d, J = 15 Hz, 2H, =CH), 6,47 (d, J=15Hz, 1H, =CH), 7,03 (m, 1H, =CH), 7,27 (d, J=l Hz, 2H, Ar-H), 7,36 (t, J=l Hz, 1H, Ar-H).
Etvl-( 2E. 4E. 6EV7-(' 3. 5- di- t- butvlfenvl)- 3- metvldeka- 2. 4. 6- trienoat ( 26). Forbindelse 26 ble fremstilt på samme måte som 25, bortsett fra at cis-isomeren 24 ble anvendt i stedenfor 23: TLC (5% EtOAc-95% heksaner) Rf 0,5; ^H-NMR (CDCI3) 6 0,94 (t, J = 7 Hz, 3H, C<H>2CH3), 1,29 (t, J = / Hz, 3H, CH2CH3), 1,33 (s, 18H<6>(CH3)), 1,44 (m, 2H, CH2CH2CH3), 2,15 (s, 3H, CH3), 2,48 (t, J = 7 Hz, 2H, CH2CH2CH3), 4,16 (m, 2H, - COCH2CH3), 5,73 (s, 1H, =CH), 6,22 (d, J = 11 Hz, 1H, =CH), 6,26 (d, J = 11 Hz, 1H, =CH), 6,74 (dd, J - 11 Hz, 1H, =CH), 7,26 (d, J = 2 Hz, 2H, Ar-H), 7,34 (t, J = 2 Hz, 1H, Ar-H).
( 2E. 4E. 6EV7- r3. 5- di- t- butvlfenvl)- 3- metvldeka- 2. 4. 6- trienoisk syre ( 271 Til 171 mg (0,44 mmol) av 25 i 5 ml MeOH ble det tilsatt 1 ml 5N vandig NaOH-løsning. Blandingen ble oppvarmet til tilbakeløp i 10 minutter, avkjølt til RT, surgjort med 20% vandig HCl-løsning og de organiske løsningene ekstrahert med eter (2x10 ml). Etersjiktet ble vasket (vann, så saltløsning) tørket (MgS04), filtrert og konsentrert. Rensing ved kromatografi (preparativ TLC, Si02, 20% EtOAc-heksaner) ga 28 mg (0,08 mmol) av all-trans-isomeren 27 (80% utbytte): TLC (10% MeOH-90% CHC13) Rf 0,8; smp. 143-144°C; <i>H-NMR (CDCI3) 5 0,94 (t, J = 7 Hz, 3H, CH2CH3), 1,34 (s, 18H, 6(CH3)), 1,52 (m, 2H, CH2CH2CH3), 2,40 (s, 3H, CH3), 2,71 (t, J = 7 Hz, 2H, CH2CH2CH3), 5,84 (s, 1H, =CH), 6,41 (d, J = 15 Hz, 1H, =CH), 6,47 (d, J = 15 Hz; 1H, =CH), 7,08 (m, 1H, =CH), 7,26 (d, J = 1 Hz, 2H, Ar-H), 7,37 (t, J = 1 Hz, 1H, Ar-H).
( 2E. 4E. 6ZV7- f3. 5- di- t- butvlfenvn- 3- metvldeka- 2. 4. 6- trienoisk syre ( 28V Forbindelse 28 ble fremstilt på samme måte som 27, bortsett fra at cis-isomeren 26 ble anvendt i ste
den for 25: TLC (10% MeOH-90% CHCI3) Rf 0,8; smp. 166-169°C; 'H-NMR (CDCI3) 5 0,89 (t, J = 7Hz, 3H, CH2CH3), 1,31 (s, 9H, CH3), 1,32 (s, 9H, CH3), 1,32 (s, 9H, CH3), 1,42 (m, 2H, CH2CH2CH3), 2,15 (s, 3H, CH3), 2,49 (t, J = 7 Hz, 2H, CH2CH2CH3), 5,76 (s, 1H, =CH), 6,23 (d, J = 11 Hz, 1H, =CH), 6,28 (d, J = 15 Hz, 1H, =CH), 6,78 (dd, J = 15 Hz, 1H, =CH), 7,04 (s, 2H, Ar-H), 7,35 (s, 1H, Ar-H).
Eksempler 7- 8
(2E, 4E, 6E)-6-(6,8-di-t-butylkroman-4-yliden)-3-metylheksa-2,4,6-trienoisk syre (39) og (2E, 4E, 6Z)-6-(6,8-di-t-butylkroman-4-yliden)-3-metylheksa-2,4,6-trienoisk syre (40), fremstilt som illustrert og beskrevet i skjema 5 nedenfor.
3, 5- di- t- butvl- 2- hvdroksvacetofenon ( 30). Til 10 g (48,5 mmol) 2,5-di-t-butylfenol 29 og 4,56 g (58,16 mmol) acetylklorid i 60 ml dikloretan ble det tilsatt 11,9 ml (97.0 mmol) av BF3.0Et2, og blandingen ble oppvarmet til tilbakeløp i 10 minutter. Reaksjonsblandingen ble avkjølt og helt i 1:1 is -20% vandig HC1, omrørt og ekstrahert (2 x 100 ml EtOAc). Den organiske ekstrakten ble vasket (vann, så saltløsning), tørket (MgSOa), konsentrert og renset (Si02 kromatografi, 5% EtOAc-heksaner) for å gi 7,0 g (28,22 mmol) av 30 som en olje (58% utbytte): TLC (5% EtOAc-heksaner) Rf0,l; <i>H-NMR (CDC13) 5 1,32 (s, 9H, CH3), 1,42 (s, 9H<3>(CH3)), 2,68 (s, 3H, CH3), 7,55 (m, 2H, Ar-ti). 6, 8- di- t- butyl- 2- hydroksykroman- 4- one ( 31). Til 1,8 g (78,26 mmol) natriumetall i en flammetørket, 500 ml rundkolbe, ble det dråpevis tilsatt 7,5 g (30,24 mmol) fenol 30 i 120 ml etylformat. Så snart tilsetningen var ferdig, ble blandingen omrørt ved 40°C i 1 time, så avkjølt til RT og helt i 1 N vandig HC1. Da blandingen ble gjennomskinnelig, ble de organiske stoffene ekstrahert (2 x 150 ml EtOAc), vasket (vann, så saltløsning), tør-ket (MgSOa) og konsentrert for å gi 7,4 g (26,81 mmol) av 31 som en olje (omtrentlig utbytte, 89%). Dette produkt ble anvendt direkte i det neste trinnet: TLC (20% EtOAc-heks) Rf 0,4; }H-NMR (CDCI3) 5 1,30 (s, 9H 3 (CH3)), 1,42 (s, 9H, 3CH3), 2,87 (dd, J = 16,0, 5,5 Hz, 1H, CH2), 3,01 (dd, J= 16,0, 3,1 Hz, 1H, CH2), 5,87 (dd, J = 5,5, 3,3 Hz, 1H, CHOH), 7,58 (d, J = 2,5 Hz, 1H, Ar-H), 7,79 (d, J = 2,5 Hz, 1H, Ar-H). 4H- 6. 8- di- t- butvl- benzopvran- 4- one ( ikke vist). Til 7,4 g (26,81 mmol) av 30 i 20 ml MeOH ble det tilsatt 8 ml vandig 20% HC1 og blandingen ble oppvarmet på tilbakeløp i 20 minutter. Etter avkjøling til RT ble vann tilsatt (30 ml) og produktene ble ekstrahert (2 x 30 ml av EtOAc), vasket (vann, så saltløsning), tørket (MgSOa) og konsentrert for å gi ca 6,0 g (25,00 mmol) 4H-6,8-di-t-butyl-benzopyran-4-one som en olje som etter henstand i noen timer ble fast (omtrentlig utbytte 93%). Dette produkt ble direkte anvendt i neste trinn: TLC (5% EtOAc-heks) Rf 0,5; <J>H-NMR (CDCI3) 8 1,37 (s, 9H, 3CH3), 1,49 (s, 9H, 3CH3), 6,35 (d, J = 5,6 Hz, 1H, CH=CH), 7,70 (d, J = 2,4 Hz, 1H, Ar-H), 7,91 (d, J = 5,6 Hz, 1H, CH=CH), 8,10 (d, J = 2,4 Hz, 1H, Ar-H). 6. 8- di- t- butyl- kroman- 4- one ( 32). Til 1,0 g (3,87 mmol) 4H-6,8-di-t-butyl-benzopyran-4-one i 8 ml EtOAc ble det tilsatt 200 mg 10% Pd/C. Blandingen ble avgasset, fulgt av tilsetning av H2-gass og omrørt under NH2-gassatmosfære i 2 timer ved RT. Etter filtrering (celitt), ble produktet konsentrert og renset (Si02-kromatografi, 5% EtOAc-heksaner) for å gi 857 ml (3,29 mmol) av 32 som et hvitt fast stoff (85% utbytte): TLC (5% EtOAc-heks) Rf 0,7; <i>H-NMR (CDCI3) 5 1,32 (s, 9H, CH3), 1,42 (s, 9H, CH3), 2,78 (t, J = 6,0 Hz, 2H, CH2), 4,52 (t, J = 6,0 Hz, 2H, CH2), 7,53 (d, J = 2,4 Hz, 1H, Ar-H), 7,81 (d, J = 2,4 Hz, 1H, Ar-H). ( 6. 8- di- t- butvlkroman- 4- vliden) acetoiiitril ( 33) ( trans) oe ( 34) feis). Til 891 mg (5,03 mmol) cyanometylfosfonat i 6 ml tørt THF ble det tilsatt 188 mg (4,69 mmol) NaH (60% 1 olje) og blandingen ble omrørt i 20 minutter. Til denne løsningen ble det tilsatt 436 mg (1,80 mmol) av 32 i 2 ml tørt THF og reaksjonsblandingen ble oppvarmet på tilbakeløp i 2 timer. Etter avkjøling til RT ble reaksjonen stanset med mettet NH4CI (10 ml) og ekstrahert (2 x 10 ml EtOAc), vasket (vann, så saltløsning), tørket (MgS04), konsentrert og renset (Si02-kromatografi, 5% EtOAc-heksan) for å gi 358 mg (1,32 mmol) av trans-isomeren 33 og 95 mg (0,35 mmol) av cis-isomeren 34 (93% kombinert utbytte) transi-somer 33: TLC (5% EtOAc-heks) Rf0,5;<l>H-NMR (CDCI3) 8 1,30 (s, 9H, 3CH3), 1,36 (s, 9H, 3CH3), 3,00 (t, J = 6,0 Hz, 2H, CH2), 4,27 (t, J = 6,0 Hz, 2H, CH2), 5,73 (s, 1H, =CH-CN), 7,35 (d, J = 2,4 Hz, 1H, Ar-H), 7,41 (d, J = 2,4 Hz, 1H, Ar-H); cis-isomer 34: TLC (5% EtOAc-heks), Rf 0,4; <i>H-NMR (CDCI3) 8 1,34 (s, 9H, 3CH3), 1,39 (s, 9H, 3CH3), 2,76 (t, J = 6,0 Hz, 2H, CH2), 4,29 (t, J = 6,0 Hz, 2H, CH2), 5,11 (s, 1H, =CH-CN), 7,42 (d, J = 2 Hz, 1H, Ar-H), 8,28 (d, J = 2 Hz, 1H, Ar-H).
( 6. 8- di- t- butvlkroman- 4- yliden) acetaldehyd ( 35) ( trans). Til 100 mg (0,36 mmol) av nitril 33 i 5 ml heksan ved -78°C ble det tilsatt 0,35 ml (0,53 mmol) av en 1,5 M løsning av DIB AL i toluen. Blandingen ble omrørt i 5 minutter fulgt av tilsetning av 10 ml mettet, vandig Rochelle-salt og oppvarmet til RT. Løsningen ble ekstrahert (2 x 10 ml EtOAc), vasket (vann, så saltløsning), tørket (MgS04), filtrert og konsentrert for å gi 86 mg (0,30 mmol) av det relativt rene aldehydet 35 (83% utbytte): TLC (5% EtOAc-heks) Rf0,5, <*>H-NR (CDCI3) 8 1,32 (s, 9H, 3CH3), 1,41 (s, 9H, 3CH3), 3,27 (t, J = 6,0 Hz, 2H, CH2), 4,30 (t, J = 6,0 Hz, 2H, CH2), 6,57 (d, J = 8 Hz, 1H, = CH-CHO), 7,41 (d, J=2,4 Hz, 1H, Ar-H), 7,51 (d, J = 2,4 Hz, 1H, Ar-H), 10,14 (d, J = 8 Hz, 1H, CHO).
( 6. 8- di- t- butvlkroman- 4- yliden) acetalehyd ( 36) ( cis). Forbindelse 36 ble fremstilt på samme måte som 35, bortsett fra at cis-isomeren 34 ble anvendt i stedenfor 33: TLC (5% EtOAc-heks) Rf 0,4, <*>H-NMR (CDCI3) 8 1,30 (s, 9H, 3CH3), 1,38 (s, 9H, 3CH3), 2,80 (t, J = 6,5 Hz, 2H, CH2), 4,42 (t, J = 6,5 Hz, 2H, CH2), 5,95 (d, J = 8 Hz, 1H, =CH), 7,12 (d, J = 2,4 Hz, 1H, Ar-H), 7,44 (d, J = 2,4 Hz, 1H, Ar-H), 10,00 (d, J = 8 Hz, 1H,
CHO).
Etvl-( 2E. 4E. 6E)- 6-( 6. 8- di- t- butvlkroman- 4- vliden)- 3- metvlheksa- 2. 4. 6- tirenoat ( 37)
Til 238 mg (0,902 mmol) trietyl-3-metyl-4-fosfonokrotonat i 3 ml tørt THF ved -78°C ble det tilsatt 0,36 ml (0,90 mmol) av en 2,5 nBuLi-løsning i heksaner og 3 ml DMPU. Etter omrøring i 15 minutter ble løsningen inneholdende ylidet av trietylfosfonokrotonat overført til 86 mg (0,30 mmol) av 35 i 4 ml av 1:1 THF-DMPU ved -78°C. Reaksjonsblandingen ble varmet til RT, reaksjonen stanset med mettet, vandig NH4CI (20 ml) og produktene ble ekstrahert med EtOAc (2 x 20 ml). Ekstraktene ble vasket (vann, så salt-løsning), tørket (MgS04), filtrert, konsentrert og renset ved kolonnekromatografi (Si02, 5% EtOAc-heksaner) for å gi 85,3 mg (0,22 mmol) av 2E,4E,6E-isomeren av 37 (73% utbytte) og 5,6 mg (0,014 mmol) av 2Z,4E,6E-isomeren (5% utbytte). Forbindelse 37: TLC (5% EtOAc-heks) Rf0,5, ^H-NMR (CDCI3) 5 1,30 (t, J = 7 Hz, 3H, CH2CH3), 1,33 (s, 9H, 3CH3), 1,37 (s, 9H, 3CH3), 2,37 (s, 3H, CH3), 2,88 (t, J = 6,0 Hz, 2H, CH2), 4,17 (q, 2H, CH2), 4,23 (t, J = 6,0 Hz, 2H, CH2), 5,81 (s, 1H, =CH), 6,43 (d, J = 15 Hz, 1H, =CH), 6,73 (d, J = 15 Hz, 1H, =CH), 6,96 (m, 1H, =CH), 7,25 (d, J = 2,4 Hz, 1H, Ar-H), 7,50 (d, J = 2,4 Hz, 1H, Ar-H).
Etvl-( 2E. 4E. 6Z)- 6-( 6. 8- di. t. butvlkroman- 4- vlidenV3- metvlheksa- 2. 4. 6- trienoat ( 38) Forbindelse 38 ble fremstilt på samme måte som 37, bortsett fra at cis-isomeren 36 ble anvendt i stedenfor 35, forbindelse 36: TLC (5% EtOAc-heks) Rf0,5, ^H-NMR (CDCI3) 5 1,30 (t, J = 7 Hz, 3H, CH2CH3), 1,30 (s, 9H, 3CH3), 1,38 (s, 9H, 3CH3), 3,32 (s, 3H, CH3), 2,66 (t, J = 6,0 Hz, 2H, CH2), 4,16 (m, 2H, CH2), 4,35 (t, J=6,0 Hz, 2H, CH2), 5,80 (s, 1H, =CH), 6,08 (d, J = 11 Hz, 1H, =CH), 6,36 (d, J = 15 Hz, 1H, =CH), 7,27 (d, J = 2 Hz, 1H, Ar-H), 7,29 (d, J = 2 Hz, 1H, Ar-H), 7,28 (dd, J = 15, 11 Hz, 1H, Ar-H).
( 2E. 4E. 6E)- 6-( 6. 8- di- t- butvlkroman- 4- vliden)- 3- metvlheksa- 2. 4. 6- trienoisk syre ( 39). Til 85,3 mg (0,22 mmol) av ester 37 i 6 ml 1:1 THF-MeOH ble det tilsatt 3 ml av en vandig 5N KOH-løsning. Løsningen ble oppvarmet til tilbakeløp i 10 minutter, avkjølt til RT, surgjort (20% vandig HC1) og ekstrahert (2 x 6 ml av EtOAc). Ekstraktene ble kombinert, vasket (vann, så saltløsning), tørket (MgS04), filtrert og konsentrert. Rensing ved preparativ TLC (5% MeOH-CHCl3), fulgt av krystallisasjon (EtOAc-heksan, 1:4) ga 74,5 mg (0,20 mmol) av syre 39 som et blekgult fast stoff (94% utbytte): TLC (5% EtOAc-heks) Rf0,5; smp. 237-239°C; <i>H-NMR (CDCI3) 5 1,33 (s, 9H, 3CH3), 1,38 (s, 9H, 3CH3), 2,37 (s, 3H, CH3), 2,89 (t, J = 6,0 Hz, 2H, CH2), 4,23 (t, J = 6,0 Hz, 2H, CH2), 5,86 (s, 1H, =CH), 6,43 (d, J = 15 Hz, 1H, =CH), 6,74 (d, J = 11 Hz, 1H, =CH), 6,97 (dd, 11,15 Hz, 1H, =CH), 7,25 (d, J - 2,3 Hz, 1H, Ar-H), 7,50 (d, J 2,3 Hz, 1H, Ar-H).
( 2E. 4E. 6ZV 6- f 6. 8- di- t- butvlkroman- 4- vlidenV3 - metvlheksa- 2. 4. 6- trienoisk svre ( 40). Forbindelse 40 ble fremstilt på samme måte som 39, bortsett fra at cis-isomeren 37 ble anvendt i stedenfor 36, forbindelse 37: TLC (5% EtOAc-heks) Rf0,5.; smp. 233-235°C; <i>H-NMR (CDC13) 5 1,32 (s, 9H, 3CH3), 1,37 (s, 9H, 3CH3), 2,33 (s, 3H, CH3), 2,68 (t, J = 6,0 Hz, 2H, CH2), 4,35 (t, J = 6,0 Hz, 2H, CH2), 5,83 (s, 1H, =CH), 6,10 (d, J = 11 Hz, 1H, =CH), 6,39 (d, J = 15 Hz, 1H, =CH), 7,26 (d, J = 2 Hz, 1H, Ar-H), 7,30 (d, J = 2 Hz, 1H, Ar-H), 7,35 (dd, H = 11,15 Hz, 1H, =CH).
Eksempel 9
(2E,4E,6E)-7-(3,5-di-trifluormetylfenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoisk syre (41), fremstilt ifølge skjema 1.
Denne forbindelse ble syntestisert på analog måte som 9, bortsett fra at 3,5-di-trifluor-metylacetofenon ble anvendt i stedenfor 3,5-di-t-butylacetofenon: TLC (5% EtOAc-heks) Rf 0,5; smp. 225-227°C; ^H-NMR (CDC13) 5 2,30 (s, 3H, CH3), 2,40 (s, 3H, CH3), 5,90 (s, 1H, =CH), 6,52 (d, J = 15 Hz, 1H, =CH), 6,66 (d, J = 12 Hz, 1H, =CH, 7,03 (m, 1H, =CH), 7,78 (s, 1H, Ar-H), 7,87 (s, 1H, Ar-H).
Eksempel 10
(2E,4E,6E)-7-(3,5-di-isopropylfenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoisk syre (42), fremstilt ifølge skjema 1.
Denne forbindelse ble syntestisert på analog måte som 9, bortsett fra at 3,5-di-isopropyl-acetofenon ble anvendt i stedenfor 3,5-di-t-butylacetofenon: TLC (5% EtOAc-heks) Rf 0,5; smp. 157-160°C; ^H-NMR (CDC13) 8 1,28 (d, J = 8 Hz, 12H, CH3), 2,27 (s, 3H,
CH3), 2,42 (s, 3H, CH3), 2,90 (p, J = 8 Hz, 2H, =CH), 5,83 (s, 1H, =CH). 6,42 (d, J = 15 Hz, 1H, =CH), 6,60 (d, J = 15 Hz, 1H=CH(, 7,02 (s, 1H, Ar-H), 7,08 (m, 1H, =CH), 7,45 (s, 2H, Ar-H).
Eksempel 11
(2E,4E,6Z)-7-(3,5-di-isopropylfenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoisk syre (43), fremstilt ifølge skjema 1.
Denne forbindelse ble syntestisert på analog måte som 10, bortsett fra at 3,5-di-isopro-pylacetofenon ble anvendt i det første trinnet i stedenfor 3,5-di-t-butylacetofenon: TLC (5% EtOAc-heks) Rf 0,5; smp. 177-179°C; <i>H-NMR (CDC13) 8 1,25 (d, J = 7 Hz, 12H, CH3), 2,18 (s, 3H, CH3), 2,21 (s, 3H, CH3), 2,90 (p, J = 7 Hz, 2H, CH), 5,77 (s, 1H, =CH), 6,25 (d, J = 11 Hz, 1H, =CH), 6,27 (d, J = 15 Hz, 1H=CH), 6,85 (dd, J = 11, 15 Hz, 1H, Ar-H), 6,94 (d, J = 2 Hz, 2H, Ar-H), 7,02 (bs, H, Ar-H).
Eksempel 12
(2E,4E,6E)-7-(4-T-butyl-fenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoisk syre (44), fremstilt ifølge skjema 1.
Denne forbindelse ble syntestisert på analog måte som 9, bortsett fra at 4-t-butylacetofenon ble anvendt i stedenfor 3,5-di-t-butylacetofenon: TLC (5% EtOAc-heks) Rf 0,5; smp. 198-200°C; ^H-NMR (CDCI3) 6 1,33 (s, 9H, 3CH3), 2,26 (s, 3H, CH3), 2,39 (s, 3H3), 5,84 (s, 1H, =CH), 6,40 (d, J = 15 Hz, 1H, =CH), 6,60 (d, J = 12 Hz, 1H, =CH, 7,07 (m, 1H, =CH), 7,38 (s, 1H, Ar-H), 7,43 (s, 1H, Ar-H).
Eksempel 13
(2E,4E,6E)-7-(3,5-di-t-butyl-metoksyfenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoisk syre (45), fremstilt ifølge skjema 1.
Denne forbindelse ble syntestisert på analog måte som 9, bortsett fra at 3,5-di-t-butyl-4-metoksyacetofenon ble anvendt i stedenfor 3,5-di-t-butylacetofenon: TLC (5% EtOAc-heks) Rf 0,5; smp. 244-246°C, 'H-NMR (CDCI3) 5 1,30 (s, 9H, 3CH3), 1,42 (s, 9H, 3CH3), 2,27 (s, 3H, CH3), 2,42 (s, 3H, CH3), 3,67 (s, 3H, OCH3), 5,83 (s, 1H, =CH), 6,34 (d, J = 15 Hz, 1H, =CH), 6,35 (d, J = 15 Hz, 1H, =CH, 7,00 (d, J = 2Hz, 1H, Ar-H), 7,06 (m, 1H, =CH), 7,27 (d, J - 2 Hz, 1H, Ar-H).
Eksempel 14
(2E,4E,6Z)-7-(3,5-di-trifluormetylfenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoisk syre (46), fremstilt ifølge skjema 1.
Denne forbindelse ble syntestisert på analog måte som 10, bortsett fra at 3,5-di-trifluor-metyl-acetofenon ble anvendt i stedenfor 3,5-di-t-butyl-acetofenon: TLC (5% EtOAc-heks) Rf 0,5; smp. 225-227°C; <]>H-NMR (CDCI3) 5 2,15 (s, 3H, CH3), 2,24 (s, 3H, CH3), 5,82 (s, 1H, =CH), 6,36 (d, J = 15 Hz, 1H, =CH), 6,39 (d, J = 9,7 Hz, 1H, =CH, 6,53 (dd, J=15Hz, 9,7Hz, 1H, =CH), 7,70 (s, 2H, Ar-CH), 7,83 (s, 1H, Ar-CH).
Eksempel 15
(2E,4E,6E)-3-metyl-7-(3,5-di-t-butyl4-metoksyfenyl)-okta-2,4,6-trienoisk syre (47), fremstilt ifølge skjema 1.
Denne forbindelse ble syntestisert på analog måte som 9, bortsett fra at 3,5-di-t-butyl-4-metoksyacetofenon ble anvendt i stedenfor 3,5-di-t-butylacetofenon: TLC (50% EtOAc-50% heksaner) Rf 0,5; smp. 213-216°C; ^H-NMR (CDCI3) 5 1,45 (s, 18H, 6(CH3)), 2,25 (s, 3H, CH3), 2,40 (s, 3H, CH3), 3,70 (s, 3H, OCH3), 5,84 (s, 1H, =CH), 6,41 (d, J = 15 Hz, 1H, =CH), 6,52 (d,J=ll,2Hz, 1H, =CH), 7,08 (m, 1H, =CH), 7,35 (s, 2H, Ar-H).
Eksempel 16
(2E,4E,6E)-3-metyl-7-(3,4-dietylfenyl)-okta-2,4,6-trienoisk syre (48), fremstilt ifølge skjema 1.
Denne forbindelse ble syntestisert på analog måte som 9, bortsett fra at 3,4-di-etylaceto-fenon ble anvendt i stedenfor 3,5-di-t-butylacetofenon: TLC (20% EtOAc-80% heksaner) Rf 0,5; smp. 153-155°C; iH-NMR (CDC13) 6 1,45 (dd, J=14,lHz, 7,5 Hz, 6H, 2CH3), 2,25 (s, 3H, CH3), 2,39 (s, 3H, CH3), 2,66 (s, 4H, 2CH2), 5,83 (s, 1H, =CH), 6,40 (d, J - 15 Hz, 1H, =CH), 6,59 (d, J=l 1,2Hz, 1H, =CH), 7,07 (m, 1H, =CH), 7,14 (d, J=7,8Hz, 1H, Ar-H), 7,27 (d, J=7,8Hz, 1H, Ar-CH), 7,28 (s, 1H, Ar-CH).
Eksempel 17
(2E,4E,6Z)-3-metyl-7-(3,4-di-etylfenyl)okta-2,4,6-trienoisk syre (49), fremstilt ifølge skjema 1.
Forbindelse 49 ble fremstilt på samme måte som 10, bortsett fra at 3,4-dietylacetofenon ble anvendt i stedenfor 3,5-di-t-butylacetofenon: TLC (20% EtOAc-80% heksaner) Rf
0,32; <!>H-NMR (CDCI3) 5 1,23 (dd, J=14, 1Hz, 7,5Hz, 6H, 2CH3), 2,18 (s, 6H, 2CH3), 2,67 (m, 4H, 2CH2), 5,76 (s, 1H, =CH), 6,23 (d, J=l 1,8Hz, 1H, =CH), 6,28 (d, J=15Hz, 1H, =CH), 6,83 (m, 1H, =CH), 7,04 (d, J=7,8Hz, 1H, Ar-H), 7,06 (s, TH, Ar-CH), 7,17 (d, J=7,8Hz,lH, Ar-CH).
Eksempel 18
(2E,4E,6E)-3-metyl-7-(3,5-di-t-butyl-4-metoksyfenyl)-okta-2,4,6-trienoisk syre (50), fremstilt ifølge skjema 1.
Denne forbindelse ble syntestisert på analog måte som 9, bortsett fra at 3,5-di-t-butyl-4-etoksyacetofenon ble anvendt i stedenfor 3,5-di-t-butylacetofenon: TLC (50% EtOAc-50% heksaner) Rf 0,5; smp. 236-239°C; <i>H-NMR (CDCI3) 5 1,41 (t, J = 7,0 Hz, 3H, CH3), 1,44 (s, 18H, 6(CH3)), 2,26 (s, 3H, CH3), 2,40 (s, 3H, CH3), 3,77 (q, J = 7 Hz, 2H.OCH2CH3), 5,84 (s, 1H, =CH), 6,41 (d, J = 15 Hz, 1H, =CH), 6,51 (d, J=l 1,2Hz, 1H, -CH), 7,08 (m, 1H, -CH), 7,35 (s, 2H, Ar-H).
Eksempel 19
(2E,4E,6E)-3-metyl-7-(3,4-di-t-butylfenyl)-okta-2,4,6-trienoisk syre (51), fremstilt ifølge skjema 1.
Denne forbindelse ble syntestisert på analog måte som 9, bortsett fra at 3,4-di-t-butyl-acetofenon ble anvendt i stedenfor 3,5-di-t-butylacetofenon: TLC (20% EtOAc-80% heksaner) Rf 0,3; smp. 195-199°C; 'H-NMR (CDCI3) 5 1,56 (s, 9H, 3CH3), 1,58 (s, 9H, 3CH3), 2,26 (s, 3H, CH3), 2,40 (s, 3H, CH3), 5,84 (s, 1H, =CH), 6,41 (d, J = 15 Hz, 1H, =CH), 6,59 (f, J=l 1Hz, 1H, =CH), 7,08 (m, 1H, =CH), 7,23 (dd, J=8,5, 2,3 Hz, 1H, Ar-H), 7,57 (d, J = 8,5 Hz, 1H, Ar-H), 7,72 (d, J =2,3 Hz, 1H, Ar-H).
Eksempel 20
(2E,4E,6E)-3-metyl-7-cykloheksyl-7-(3,5-di-t-butylfenyl)hepta-2,4,6-trienoisk syre (52), fremstilt ifølge skjema 4.
Denne forbindelse ble syntestisert på analog måte som 27, bortsett fra at 3,4-di-t-butyl-fenylcykloheksylketon ble anvendt i stedenfor 3,5-di-t-butylbutan-l-one: : TLC (20% EtOAc-80% heksaner) Rf 0,3; <i>H-NMR (CDC13) lU NMR (CDC13) 5 1,35 (s, 9H), 1,9-1,1 (m,m, 8H), 2,40 (s, 3H), 2,85 (m, 1H), 5,81 (s, 1H), 6,08 (d, 1H, J= 11,3 Hz), 6,30 (d, 1H, J = 15,8 Hz), 7,02 (s, 2H, Ar-H), 7,14 (dd, 1H, J = 15,2, 15,2 Hz), 7.33 (s, 1H, Ar-H).
Eksempel 21
(2E,4E,6E)-3-metyl-7-(3,5-di-t-butylfenyl)nona-2,4,6-trienoisk syre (53), fremstilt ifølge skjema 1.
Denne forbindelse ble syntestisert på analog måte som 9, bortsett fra at 3,5-di-t-butyl-4-metoksyacetofenon ble anvendt i stedenfor 3,5-di-t-butylacetofenon: TLC (50% EtOAc-50% heksaner) Rf 0,5; smp. 213-216°C; iH-NMR (CDCI3) 6 1,45 (s, 18H, 6(CH3)), 2,25 (s, 3H, CH3), 2,40 (s, 3H, CH3), 3,70 (s, 3H, OCH3), 5,84 (s, 1H, =CH), 6,41 (d, J = 15 Hz, 1H, =CH), 6,52 (d,J=l 1,2Hz, 1H, =CH), 7,08 (m, 1H, =CH), 7,35 (s, 2H, Ar-H).
Eksempel 22
(2E,4E,6Z)-3-metyl-7-(3,4-dietyl-6-metylfenyl)nona-2,4,6-trienoisk syre (54), fremstilt ifølge skjema 1.
Denne forbindelse ble syntestisert på analog måte som 10, bortsett fra at 3,4-dietyl-6-metylacetofenon ble anvendt i stedenfor 3,5-di-t-butylacetofenon: TLC (20% EtOAc-80% heksaner) Rf 0,3; <i>H-NMR (CDCI3) 5 1,22 (t, J = 7,5 Hz, 3H, CH3), 1,24 (t, J = 7,5 Hz, 3H, CH3), 2,08 (s, 3H, CH3), 2,09 (s, 3H, CH3), 2,17 (s, 3H, CH3), 2,60 (m, 4H, 2(CH2)), 5,73 (s, 1H, =CH), 6,25 (m, 3H, 3(=CH)), 6,81 (s, 1H, Ar-H), 7,01 (s, 1H, Ar-H).
Eksempel 23
(2E,4E,6E)-7-(3,5-di-t-butylfenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoisk syre (69), fremstilt ifølge skjema 6 som er illustrert og beskrevet nedenfor.
5- tert- butyl- 1, 3- benzendimetanol ( 56). En løsning av 5-tert-butyl-l,3-benzen dikarbok-sylsyre (55) 20,0 g (89,9 mmol) i THF (200 ml) ble avkjølt til 0°C og en løsning av bo-ran- THF-kompleks i THF (190 ml) ble langsomt tilsatt ved hjelp av en tilsetningstrakt i
løpet av 20 minutter med kraftig omrøring. Blandingen ble varmet opp til RT og omrørt i ytterligere 90 minutter. En blanding av vann-THF (1:1, 200 ml) ble langsomt tilsatt, fulgt av ytterligere 200 ml vann. Blandingen ble ekstrahert med etylacetat. Det vandige sjiktet ble ekstrahert med EtOAc (2 x 100 ml) og de kombinerte, organiske sjiktene ble vasket
med vann (2 x 100 ml), saltløsning (2 x 100 ml) og tørket over MgSOzi. Løsningsmidde-let ble inndampet for å gi den rene diolen i 98% utbytte: <*>H MMR (CDCI3, 400 MHz) 5 (ppm): 7,32 (s, 2H); 7,19 (s, 1H); 4,69 (s, 4H); 1,75 (br, s; 2H); 1,33 (s, 9H).
5- tert- butvl - 1. 3- terefthaldehvd. 5-tert-butyl-1,3-benzendimetanol (56) (20,0 g, 103 mmol) ble tilsatt til en kraftig omrørt blanding av pyridinium klorkromat (66,0 g, 306 mmol) og celitt (130 g) i diklormetan (DCM) (500 ml). Blandingen ble omrørt i 3 timer ved RT inntil reaksjonen er ferdig (TLC). Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom en kort pute av silikagel (50 mm x 100 mm) og eluert med DCM (IL). Løsningsmiddelet ble fordampet for å gi 18,7 g, 94% utbytte av den ønskede dialdehyden: <*>H NMR (CDCI3; 400 MHz) 5 (ppm): 10.11 (s, 2H); 8,18 (s, 3H); 1,41 (s 9H).
( RS)- 5- tert- butvl- 1. 3- benzen- r2. 2'- dietanol1 ( 57). En løsning av 5-tert-butyl-l,3-tereft-aldehyd (18,7 g, 96,4 mmol) i THF (400 ml) ble avkjølt til -78°C, og en løsning av me-tylmagnesiumbromid (80,0 ml av en 3M løsning) ble langsomt tilsatt, og reaksjonsblandingen ble oppvarmet til RT. Etter omrøring i 60 minutter ble reaksjonen stanset med en mettet NH^Cl-løsning (100 ml), fulgt av HC1 (1 N, 50 ml) og ekstraksjon med EtOAc. Det organiske sjiktet ble vasket med vann (2 x 100 ml), saltløsning (2 x 100 ml) og tør-ket over MgSOa. Løsningsmiddelet ble fordampet. Den rå resten ble oppløst i varm
EtOAc (30 ml) og pentan (200 ml) ble tilsatt. Den klare løsningen ble avkjølt i et -4°C kjøleskap i 3 timer. Det oppnådde hvite faststoffet ble filtrert og skylt med kald pentan. Faststoffet ble tørket i vakuum for å gi 15,3 g (70% utbytte) av den ønskede forbindelsen: <*>H NMR (CDC13; 400 MHz) 5 (ppm): 7,32 (s, 2H); 7,2 (s, 1H); 4,92 (m, 2H); 1,82 (d, 2H, J=2,5Hz); 1,52 (d, 6 H, J=6,5 Hz); 1,35 (s, 9H).
( R. S)- 5- tert- butvl- 1. 3- fenvl- r2- etanol. 2'- etan- tert- butvl- dimetvl- silvleter1 ( 581 Natriumhydrid (2,75 g av en 60% mineraloljeholdig blanding) ble skylt med heksaner (2 x 10 ml), suspendert i THF (200 ml) og 5-tert-butyl-l,3-benzen-2,2'-dietanol (12,69 g, 57 mmol) ble tilsatt med kraftig omrøring. Blandingen ble omrørt i 45 minutter ved RT for å gi en hvit opp slemming og så ble tert-butyldimetylsilylklorid (8,61 g, 57 mmol) tilsatt på en gang. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 2 timer og vann (25 ml) ble tilsatt. Blandingen ble ekstrahert med EtOAc (350 ml). Det organiske sjiktet ble vasket med en mettet NH^Cl-løsning (100 ml), vann (2 x 100 ml), saltløsning (2 x 100 ml) og tørket over MgSOa. Løsningsmiddelet ble fordampet og resten renset ved flashkromatografi over silikagel for å gi det ønskede monosilylerte produktet (14,45 g, 75% utbytte) som en olje (2,14 g av utgangsmaterialet ble gjenvunnet): ^H NMR (CDCI3; 400 MHz) 6 (ppm): 7,32 (s, 1H); 7,28 (s, 1H); 7,12 (2s, 1H); 4,92 (m, 2H), 1,85 (s, 1H); 1,5 (d, 3H, J=6,5Hz); 1,43 (d, 3H, J=6,5 Hz), 1,35 (s, 9H); 0,9 (sm 9H); 0,05 (s, 6H).
( R, S)- 3-( etyl- 2- tert- butyldimetvl- silyl- eter)- 5- tert- butylacetaofenon ( 59). Pyridiniumklorkromat (15,0 g, 69 mmol) og celitt (30 g) ble blandet i DCM (500 ml) mens 5-tert-butyl-l,3-benzen-(2-etanol, 2'-etan-tert-butyldimetylsilyleter) (14,45 g, 44 mmol) i DCM (100 ml) ble tilsatt med kraftig omrøring. Etter 3 timer ved rt ble blandingen filtrert via en kort pute av silikagel (50 mm x 100 mm) og eluert med DCM (500 1). Løsningsmiddelet ble fordampet for å gi det ønskede keton (14,4 g, 99% utbytte). AH NMR (CDCI3, 400 MHz) 5 (ppm). 7,89 (s, 1H), 7,73 (s, 1H); 7,65 (s, 1H); 4,94 (q, 1H, J=6,3 Hz); 2,63 (s, 3H); 1,45 (d, 3H, J=6,3 Hz); 1,37 (s, 9H); 0,96 (s, 9H); 0,12 (s, 3H); -0,05 (s, 3H).
5- tert- butyl- l-( 2- etanol)- 3-( 2-[ 2- metvlpropan- l- al])- benzen ( 60). En flammetørket tre-halsrundkolbe ble tilsatt THF (90 ml) og avkjølt til -78°C. n-BuLi (12 ml av en 2 M løs-ning, 24 mmol) ble langsomt tilsatt og blandingen omrørt i 10 minutter. En løsning av N-benzyliden-dietyl-aminometyl-fosfonat (6,14 g, 24 mmol) i THF (15 ml) ble tilsatt og den resulterende blanding omrørt i 60 minutter ved -78°C. En løsning av 5-tert-butyl-3-(etan-2-tert-butyldimetylsilyleter]acetofenon (7,0 g, 20,9 mmol) i THF (15 ml) ble tilsatt til den ovenstående løsningen og blandingen oppvarmet til romtemperatur, omrørt i 30 minutter
og så tilbakeløpsbehandlet i 2 timer. Blandingen ble avkjølt til RT og løsningsmiddelet ble fordampet. Dietyleter (400 ml) ble tilsatt og løsningen ble vasket med natriumklorid (200 ml). Det vandige sjiktet ble ekstrahert med eter (200 ml) og de kombinerte organiske sjiktene ble vasket med saltløsning (200 ml) og tørket over MgSOa. Løsningsmiddelet ble fordampet for å gi en gul rest som ble tørket under høyvakuum (1 mm Hg) i 1 time. THF (90 ml) ble tilsatt til denne resten og avkjølt til -78°C. n-BuLi (12,0 ml av en 2M løsning, 24 mmol) ble langsomt tilsatt og den mørkfarvede løsningen ble omrørt i 60 minutter. Metyliodid (6,52 ml) ble tilsatt og blandingen ble varmet til romtemperatur og omrørt i 4 timer. Reaksjonen ble stanset med HC1 (3N, 100 ml) og to-fase løsningen ble omrørt i 16 timer ved RT. EtOAc (300 ml) ble tilsatt og det organiske sjiktet ble separert og vasket med vann (2 x 100 ml), saltløsning (2 x 100 ml) og tørket over MgSOa. Løs-ningsmiddelet ble fordampet for å gi en rest som ble renset ved silikagelkromatografi for å gi 3,3 g av den ønskede aldehyd i 65% utbytte: <l>H NMR (CDC13; 400 MHz) 5 (ppm): 9,5 (s, 1H), 7,33, (s, 1H), 7,17 (s, 1H), 7,11 (s, 1H), 4,91 (m, 1H), 1,80 (d, 1H, J=3,4 Hz), 1,5 (d, 3H, J-6,3 Hz); 1,47 (s, 3H), 1,32 (s, 9H).
5- tert- butyl- 3-( 2- metylpropan- l- ol] acetofenon ( 61). En oppløsning av tert-butyl-1-(2-etanol)-3-(2-[2-metylpropan-l-al]benzen (1,77 g, 7,53 mmol) i MeOH (50 ml) ble av-kjølt til 0°C og NaBHa (300 mg, 7,93 mmol) ble tilsatt porsjonsvis. Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til RT og omrørt i 30 minutter. Løsningsmiddelet ble fordampet og resten tatt opp i EtOAc (50 ml) og vasket med HC1 (10%, 3x10 ml), vann (3 x 20 ml) og salt-løsning (3 x 20 ml). Det organiske sjiktet ble tørket over MgSOa og inndampet til tørrhet for å gi den ønskede diolen 1,76 g, 99% utbytte. Denne diol (1,65 g, 6,78 mmol) ble
oppløst i DCM (20 ml) og Mn02 (18,7 g, 0,17 mmol) ble tilsatt på en gang. Reaksjonsblandingen ble omrørt kraftig i 4 timer og så filtrert gjennom en kort celittpute. Løsnings-middelet ble fordampet for å gi 1,63 g (97% utbytte) av det ønskede ketonet: ^H NMR (CDCI3; 400 MHz) 5 (ppm): 7,85 (s, 1H); 7,8 (s, 1H); 7,63 (s, 1H); 3,64 (d, 2H, J=4,5 Hz); 2,6 (s, 3H), 1,38 (s, 6H), 1,35 (s, 9H).
5- tert- butyl- 3-( 2-[ 2- metylpropan- l- tert- butyldifenylsilyleterl) acetofenon ( 62). Til en oppløsning av 5-tert-butyl-3-(2-metylpropan-l-ol]acetofenon (1,63 g, 6,96 mmol) i DCM (30 ml) ble det tilsatt imidazol (500 mg, 7,35 mmol). En dråpe DMF og tert-butyldifenylsilylklorid (2,01 g, 7,33 mmol). Blandingen ble rørt over natten ved RT og reaksjonen stanset med overskudd mettet NH4CI. DCM (50 ml) ble tilsatt og det organiske sjiktet vasket med vann (3 x 20 ml) og saltløsning (3 x 20 ml). Det organiske sjiktet ble tørket over MgS04 og inndampet til tørrhet for å gi en rest som ble renset ved silikagelkromatografi for å gi den ønskede eter 2,77 g (83% utbytte): <*>H NMR (CDCI3; 400
MHz) 6 (ppm): 7,85 (s, 1H), 7,76, (s, 1H); 7,63 (1H); 7,48-7,25 (mm, 10 H); 3,62 (s, 2H); 2,56 (s, 3H); 1,38 (s, 6H); 1,33 (s, 9H); 0,94 (s, 9H).
5 - tert- butvl- 3 -( 2- [ 2- metvlpropan- 1 - tert- butvldifenvlsilvleterl V1 -( 2EV3 - f 2-butenitriDbenzen ( 63). Til en løsning av dietylcyanometylfosfonat (1,7 g, 9,55 mmol) i THF (30 ml) ved 0°C ble det tilsatt n-BuLi (4,64 ml av en 2,0 M løsning i heksaner). Løsningen ble omrørt i 10 minutter, hvoretter en løsning av 5-tert-butyl-3-(2-[2,2'-dimetylpropan-tert-butyldifenylsilyl-eter])acetofenon i THF (10 ml) ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 30 minutter og reaksjonen stanset med en mettet NH4CI-løsning. EtOAc (50 ml) ble tilsatt og det organiske sjiktet ble vasket med vann (3 x 20
ml) og saltløsning (3 x 20 ml). Det organiske sjiktet ble tørket over MgS04 og inndampet til tørrhet for å gi en rest som ble renset ved silikagelkromatografi for å gi det ønskede nitrilet som en trans:cis-blanding (~4:1 med <*>H NMR). Silikagelkromatografi ga den ønskede trans-isomeren, 1,70 g, 63% utbytte: <]>HNMR (CDCI3; 400 MHz) 6 (ppm); 7,85 (s, 1H), 7,48-7,22 (mm, 13H, ArH); 5,5 (s, 1H); 3,59 (s, 2H); 2,43 (s, 3H); 1,35 (s, 6H); 1,27 9s, 9H); 0,94 (s, 9H).
5- tert- butvl- 3 -( 2-[ 2- metvlpropan- 1 - tert- butvldifenvlsilvleterl)- 1 -( 2E)-( 3-\ 2 - butenaPbenzen ( 64). En løsning av 5-tert-butyl-3-(2-[2-metylpropan-l-tert-butyldifenyl-silyleter])-l-(3-[3-metyl-2-propenitril)benzen (1,7 g; 3,42 mmol) i vannfritt DCM (20 ml) ble avkjølt til -78°C og Dibal (3,5 ml av en IM løsning i toluen) ble tilsatt dråpevis. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved -78°C i 60 minutter, reaksjonen stanset med overskudd Rochelle-salt, fikk så varme seg til RT. EtOAc (50 ml) ble tilsatt og blandingen vasket med vann (3 x 20 ml) og saltløsning (3 x 20 ml). Det organiske sjiktet ble tørket over MgS04 og inndampet til tørrhet for å gi en rest som ble renset ved silikagelkromatografi for å gi 1,25 g av det ønskede aldehydet (74% utbytte): *H NMR (CDCI3; 400 MHz) 8 (ppm): 10,17 (d, 1H; J=8 Hz); 7,48-7,22 (mm, 13H, ArH); 6,36 (d, 1H, J=8 Hz); 3,60 (s, 2H); 2,54 (s, 3H); 1,37 (s, 6H); 1,32 (s, 9H); 0,94 (s, 9H).
Etvl-( 2E. 4E. 6EV7-( 5- tert- butvl- 3- r2-( 2- metvlpropan- l- oni- l'- benzen')- 3- metvlokta-2, 4. 6- trienoat ( 66). En løsning av dietyl 3-etoksykarbonyl-2-metylprop-2-enylfosfonat (1,20 g, 4,52 mmol) i vannfritt THF (20,0 ml) ble avkjølt til 0°C og tilsatt vannfritt DMPU (3,5 ml) og n-BuLi i heksaner (2,15 ml av 2,0 M løsning, 4,50 mmol). Blandingen ble omrørt ved denne temperatur i 20 minutter, så avkjølt til -78°C. En løsning av 5-tert-butyl-3-(2-[metyl-propan-l-tert-butyldifenylsilyleter])-l-(3-[3-metyl-2-propenal)-benzen (1,25 g, 2,52 mmol) i THF (10,0 ml) ble sakte tilsatt og reaksjonsblandingen om-rørt ved -78°C i ytterligere 60 minutter. Blandingen fikk lov å varme seg opp til 23°C i 1 time med omrøring. En mettet løsning av ammoniumklorid (5 ml) ble tilsatt og blandingen ble ekstrahert ved anvendelse av EtOAc (3x10 ml). De organiske sjiktene ble vasket med vann (2 x 25 ml) og saltløsning (50 ml), tørket over MgSOa og konsentrert. Resten ble renset på en kort silikagelkolonne for å gi 1,35 g (86% utbytte) av den ønskede esteren (65). Den ovenstående silyleteren (1,05 g, 1,68 mmol) ble oppløst i THF (20 ml) og tetrabutylammoniumfluorid (17 ml av 1 M løsning i THF) ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 12 timer og EtOAc (50 ml) ble tilsatt, fulgt av vas-king med vann (2 x 20 ml), saltløsning (20 ml). Det organiske sjiktet ble fraskilt, tørket over MgSOa og inndampet til tørrhet. Resten ble renset ved silikagelkromatografi for å gi 479 mg (80%) utbytte) av den ønskede alkoholen: <!>H NMR (CDCI3; 400 MHz) 5 (ppm): 7,9 (d, 1H; J=16 Hz, 2:cis-isomer; -15%); 7,34 (s, 2H), 7,29 (s, 1H), 7,03 (dd, 1H, J=16Hz); 6,53 (d, 1H, J=12 Hz); 6,38 (d, 1H, J=16 Hz); 5,72 (s, 1H); 5,68 (s, 1H, 2:cis-isomer; -15%); 4,15 (q, 2H, J=6,7 Hz); 3,62 (s 2H); 2,38 (s, 3H); 2,28 (s, 3H), 1,6 (br.s; 1H); 1,37 (s, 6H); 1,33 (s, 9H), 1,26 (t, 3H, J=6,7 Hz).
Etyl-( 2E. 4E. 6E)- 7-( 5- tert- butvl- 3-\ 2 -( 2- metvlpropan- 1 - al)]- 1 '- fenvl)- 3- metvlokta-2. 4. 6- trienoat ( 67). Til en kraftig omrørt blanding av pyridiniumklorkromat (350 mg, 1,39 mmol) og celitt (750 mg) i DCM (20 ml) ble det tilsatt en løsning av etyl-(2E,4E,6E)-7-(5-tert-butyl-3-[2-(2-metylpropan-l-ol)]-l'-fenyl)-3-metylokta'-2,4,6-trienoat (330 mg; 0,889 mmol) i DCM (10 ml). Blandingen ble omrørt i 3 timer ved RT og filtrert over en kort silikagelpute. Løsningsmiddelet ble fordampet og resten renset ved silikagelkromatografi for å gi det ønskede aldehydet 290 mg (87% utbytte): <*>H NMR (CDCI3; 400 MHz) 8 (ppm): 9,5 (s, 1H); 7,9 (d, 1 HM J = 16 Hz, 2:cis-isomer; -15%); 7,34 (s, 2H), 7,29 (s, 1H), 7,03 (dd, 1H, J = 16 Hz); 6,53 (d, 1H, J = 12 Hz); 6.38 (s, 1H, J = 16 Hz); 5,79 (s, 1H); 5,68 (s, 1H, 2:cis-isomer; -15%); 4,15 (q, 2H, J=6,7 Hz); 3,62 (s, 2H); 2,38 (s, 3H); 2,28 (s, 3H); 1,37 (s, 6H); 1,33 (s, 9H), 1,26 (t, 3H, J=6,7 Hz).
Etvl-(' 2E. 4E. 6E)- 7-(' 5- tert- butvl- 3-[ 2-( 2- metvlpropan- l- al) l- l'- fenvl)- 3- metvlokta- 2. 4. 6.-trienoat- p- toluensulfonyl- hydrazon ( 68). Til en løsning av etyl-(2E,4E,6E)-7-(5-tert-butyl-3-[2-(2-metyl-propanal)]-l'-fenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoat (250 mg, 0,67 mmol) i etanol (5 ml) ble det tilsatt p-toluensulfonylhydrazid (137 mg, 0,73 mmol) og -10 ml av konsentrert HC1. Blandingen ble oppvarmet til 40-45°C i 15 minutter. Løsningsmiddelet ble fordampete og resten renset ved silikagelkromatografi for å gi 330 mg (89% utbytte): <J>H NMR (CDCI3, 400 MHz) 8 (ppm): 7,82 (d, 2H, J=7,4Hz); 7,5 (2s, 2H); 7,3 (d, 2H, J=7,4 Hz); 7,18 (s, 1H); 7,05 (s, 1H); 7,0 (dd, 1H, J=16 Hz); 6,45 (d, 1H, J=12 Hz);
6,38 (d, lHm J=12Hz); 5,82 (s, 1H); 4,2 (q, 2H, J=6,7 Hz); 3,62 (s 2H); 2,42 (s, 3H); 2,38 (s, 3H)M 2,28 (s, 3H); 1,37 (s, 6H); 1,33 (s, 9H), 1,26 (t, 3H, J=6,7 Hz).
( 2E. 4E. 6E)- 7-( 3. 5- di- tert- butvlfenvlV3- metvlokta- 2. 4. 6- trienoisk svre ( 69)**. Til en løsning av etyl-(2E,4E,6E)-7-(5-tert-butyl-3-[2-(2-metylpropan-l-al)]-l'-fenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoat-p-toluensulfonyl-hydrazon (68) (80 mg) i eddiksyre (2,0 ml) ble det tilsatt natriumborhydrid<*> (80 mg) i små porsjoner. Blandingen ble oppvarmet til 50°C i 1 time, avkjølt til RT og tilsatt til is, tillatt og oppvarmes til omgivelsestemperatur og ekstrahert med EtOAc (3 x 10 ml). Det organiske sjiktet ble vasket med vann (3x10 ml), NaHC03 (2x10 ml), vann (3x10 ml), saltløsning (3x10 ml), tørket over MgSOa og inndampet. Resten ble renset ved silikagelkromatografi for å gi den ønskede esteren. Denne ester (20 mg) ble oppløst i EtOH og KOH 1 M (1 ml) ble tilsatt og blandingen oppvarmet på tilbakeløp i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til RT, nøytralisert med HC1 (10%) og ekstrahert med EtOAc. Det organiske sjiktet ble vasket med vann (3 x 10 ml), saltløsning (3x10 ml), tørket over MgSOa og inndampet for å gi den ønskede syre.
Fagmannen vil forstå at den ovenstående protokollen kan tilpasses for anvendelse av merket og radiomerket NaB<n>H4 (n=l,2,3) for å generere de merkede (dvs. tritium-merkede) forbindelsene som er vist i skjema 6.
Videre vil fagmannen også forstå at den samme merkede (deuterio og tritio)-forbindelsen (69) kan oppnås fra hydrazon (68) med oppvarming i 8 timer i metanol i nærvær av NaCNB<n>H3 (n=l,2,3) og ZnCl2, fulgt av forsåpning (KOH, EtOH). I en annen alternativ utførelsesform reduseres aldehydet (67) med radiomerket NaB<n>H4 (n=l,2,3), og den resulterende alkoholen oksyderes så til det tilsvarende tritierte aldehydet. Omdannelse av et slikt aldehyd til dets tosylhydrazon, fulgt av reduksjon med natriumcyanoborhydrid og ZnCl2 i metanol og forsåpning gir den tilsvarende syre (se 68 til 69 i skjema 6).
Evaluering av retinoidreseptor underfamilie aktivitet
Ved å anvende den "cis-trans" eller "ko-transfeksjons"-analysen som er beskrevet av Evans et al, Science, 240:889-95 (mai 13, 1988) hvis beskrivelse inntas her som referanse, ble retinoidforbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse testet og funnet å ha sterk, spesifikk aktivitet som enten selektive RAR-agonister, selektive RXR-agonister eller som pan-agonist-aktivatorer av både RAR- og RXR-reseptorer. Denne analyse er beskrevet mere detaljert i US-patenter 4.981.784 og 5.071.773, hvis beskrivelse inntas her som referanse.
Ko-transfeksjonsanalysen tilveiebringer en fremgangsmåte for å identifisere funksjonelle agonister som etterligner, eller antagonister som inhiberer, effekten av native hormoner, og kvantifiserer deres aktivitet for responsive IR-proteiner. I dette henseendet etterligner ko-transfeksjons-analysen et in vivo-system i laboriatoriet. Det er viktig at aktiviteten i ko-transfeksjonsanalysen korrelerer meget godt med kjent in vivo-aktivitet, slik at ko-transfeksjons-analysen fungerer som en kvalitativ og kvantitativ prediktor for en testet forbindelse i in vivo-farmakologi. Se for eksempel T. Berger et al. 41 J. Steroid Biochem. Molec. Biol. 773 (1992), hvis beskrivelse inntas her som referanse.
I ko-transfeksjons-analysen innføres en klonet cDNA for en IR (for eksempel human RARa, RARB, RXRy) under kontroll av en konstitutiv promoter (for eksempel SV40-promotoren) ved transfeksjon (en fremgangsmåte for å indusere celler til å ta opp frem-mede gener) til en bakgrunnscelle som er i det vesentlige fri for endogene IR. Dette inn-førte genet dirigerer mottakercellene til å gjøre IR-proteinet av interesse. Et andre gen innføres også (ko-transfekteres) i de samme cellene i forbindelse med IR-genet. Dette andre genet som omfatter cDNA for et rapportørprotein, slik som ildflue-luciferase (LUC), kontrolleres av en passende hormonresponsiv promoter inneholdende et hormon-responselement (HRE). Dette rapportørplasmidet fungerer som en rapportør for mål-IRs transkripsjons-modulerende aktivitet. Således virker rapportøren som et surrogat for de produkter (mRNA, så protein) som normalt uttrykkes av et gen under kontroll av målre-septoren og dens native hormon.
Ko-transfeksjonsanalysen kan påvise små molekylagonister eller- antagonister av mål-IR. Eksponering av de transfekterte cellene for en agonistligandforbindelse øker rapportør aktiviteten i de transfekterte cellene. Denne aktivitet kan hensiktsmessig måles, for eksempel ved å øke luciferase-produksjonen, hvilket reflekterer forbindelse-avhengige, IR-formidlede økninger i rapportørtranskripsjon. For å påvise antagonister utføres ko-transfeksjonsanalysen i nærvær av en konstant konsentrasjon av en agonist til mål-IR (for eksempel, all-trans-retinoinsyre for RARa) som er kjent å indusere et definert rapportør-signal. Økende konsentrasjoner av en mistent antagonist vil minske rapportørsignalet (for eksempel luciferaseproduksjon). Ko-transfeksjons-analysen er derfor nyttig for å påvise både agonister og antagonister av spesifikke IR. Videre bestemmer den ikke bare om en forbindelse samvirker med en spesiell IR, men om denne samvirkningen etterligner (ago-niserer) eller blokkerer (antagoniserer) effektene av de native reguleringsmolekylene og målgenekspresjon, så vel som spesifisiteten og styrken av denne samvirkning. Aktiviteten til retinoidforbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse ble evaluert ved anvendelse av ko-transfeksjonsanalysen overensstemmende med det følgende illustrerende eksempel 23.
Eksempel 23
Ko- transfeksj onsanalvse
CV-1 celler (nyrefibroblaster fra afrikansk grønnape) ble dyrket i nærvær av Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) tilsatt kvegfosterserum hvorfra harpiks var fjernet med 10% kull, som så ble overført til 96-brønners mikrotiterplater en dag før transfeksjon.
For å bestemme RAR- og/eller RXR-agonistaktivitet for forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse ble CV-1 cellene kortvarig transfektert ved kalsiumfosfat-samutfelning ifølge fremgangsmåten til Berger et al., 41 J. Steroid Biochem. Mol. Biol., 733 (1992) med de følgende reseptor-uttrykkende plasmider. pRShRARa: Giguere et al., 330 Nature , 624 (1987); pRShRARB og pRShRARy, Ishikawa et al., 4 Mol. Endocrin., 837
(1990); pRShRXRa, Mangelsdorf et al., 345 nature, 224 (1990) og pRSmRXRB og pRSmRXRy, Mangelsdorf et al., 6 Genes & Devel., 329 (1992), hvis beskrivelse inntas her som referanse. Hver av disse reseptoruttrykkende plasmidene ble ko-transfektert i en konsentrasjon på 5 ng/brønn, sammen med et basalt rapportørplasmid på 100 ng/brønn, det indre kontrollplasmidet pRS-B-Gal med 50 ng/brønn og fyllstoffet DNA, pGEM med 45 ng/brønn.
Det basale rapportørplasmidet D-MTV-LUC (Hollenberg and Evans, 55 Cell, 899
(1988), hvis beskrivelse inntas her som referanse) inneholdende to kopier av det TRE-palindromiske responselement som er beskrevet i Umesono et al., 336 Nature, 262
(1988), hvis beskrivelse inntas her som referanse, ble anvendt i transfeksjonene av RAR, og det rapportørplasmid CRBPIIFKLUC, som inneholder en RXRE (retinoid X-reseptor responselement, som beskrevet i Mangelsdorf et al., 66 Cell, 555 (1991), hvis beskrivelse inntas her som referanse) ble anvendt i transfeksj oner for RXR. Hver av disse rapportør-plasmidene inneholder cDNA for ildflue-luciferase (LUC) under konstitutiv promoter inneholdende det passende RAR- eller RXR-responselement. Som bemerket ovenfor, ble pRS-B-Gal, som koder for konstitutiv ekspresjon av E. coli-B-galaktosidase (B-Gal), innført som en indre kontroll for evaluering av transfeksjonseffektivitet og forbindelse toksisitet. Seks timer etter transfeksjon ble media fjernet og cellene ble vasket med fosfat-buffret saltløsning (PBS). Media inneholdende forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse i konsentrasjoner som varierte fra 10"^<2> til 10~5 M ble tilsatt til cellene. På lignende måte ble referanseforbindelsene all-trans-retinoinsyre (ATRA) (Sigma Chemical), en kjent RAR-selektiv forbindelse og 9-cis-retinoinsyre (9-cis) (syntetisert som beskrevet i Heyman et al., Cell, 68:397-406 (1992)), en forbindelse med kjent aktivitet på RXR, tilsatt i lignende konsentrasjoner for å tilveiebringe et referansepunkt for analyse av aktiviteten til forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse. Retinoid renhet ble fastslått å være større enn 99 ved hjelp av høyytelsesvæskekromatografi i motsatt fase. Retinoider ble oppløst i dimetylsulfoksid for anvendelse i de transkripsjonale aktiveringsanalysene. Tre til fire kopier ble anvendt for hver prøve.
Etter 40 timer ble cellene vasket med PBS, lysert med en Triton X-100-basert buffer og analysert på henholdsvis LUC- og B-Gal-aktiviteter ved anvendelse av et luminometer eller spektrofotometer. For hver kopi ble den normaliserte responsen (NR) beregnet som:
LUC-respons/B-Gal-grad
hvor B-Gal-grad = B-Gal lxlO-5/B-Gal-inkuberingstid.
Middels- og standardfeil for middelet (SEM) av NR ble beregnet. Data ble avsatt som respons av forbindelsen sammenlignet med referanseforbindelsene over området av dose-respons-kurven. For agonistforbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse ble den effektive konsentrasjon som ga 50% av den maksimale respons (EC50) kvantifisert.
Kraften (nM) for utvalgte retinoidforbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse er gjengitt i tabell 1 nedenfor.
Slik det fremgår av tabell 1 er forbindelsene 9, 39, 41 og 47 meget sterke RAR-aktive forbindelser, og hvor forbindelse 9 oppviser sub-nanomolar aktivitet på RARy, og forbindelse 47 oppviser selektivitet på RARB og RARy. Disse forbindelsene er faktisk 10 til over 100 ganger sterkere enn den kjente RAR-aktive forbindelsen ATRA på RAR. Like-ledes er forbindelse 28 en meget sterk og selektiv RXR-aktiv forbindelse. Videre oppviser pan-agonist-forbindelsene 10 og 43 en overlegen styrkeprofil sammenlignet med den kjente RXR-aktive pan-agonistforbindelsen 9-cis-retinoinsyre. Mens effektivitet ikke er rapportert i tabell 1, anses de forbindelser som oppviser en effektivitet på mindre enn 20% å være inaktive som retinoid aktivatorer (styrke definert som >10.000), selv om forbindelsene oppviser marginal styrke. I dette henseendet oppviste alle sammenligningseksempelforbindelser bortsett fra sammenligningsforbindelse A og RARfi, effektiviteter på mindre enn 20%.
Retinoid aktiviteten til forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse for RAR- og/eller RXR-reseptorer oppvises ikke av andre kjente strukturelt lignende forbindelser. Som det videre vises i tabell 1, har sammenligningseksempelforbindelser som synes å være strukturelt lik forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse, slik som (2E, 4E, 6E)-3-metyl-7-(3,4-dimetoksyfenyl)okta-2,4,6-trienoisk syre (A) og (2E, 4E, 6E)-3-metyl-7-(4-met-oksyfenyl)okta-2,4,6-trienoisk syre (B) beskrevet i M.J. Aurell, et al., 49 Tetrahydron, 6089 (1993) (skjema 2, forbindelser d og e), (2E, 4E, 6E)-2-metyl-7-(2,3,6-trimetyl-4-metoksyfenyl)hepta-2,4,6-trienoisk syre (C) beskrevet i US-PS 4.534.979 (eksempel 17) og (2E, 4É, 6E)-3-metoksy-7-(4-t-butylfenyl)okta-2,4,6-trienoisk syre (D) som er beskrevet i US-PS 5.320.833 (forbindelse 80), ingen eller praktisk talt ingen aktivitet på noen av RAR eller RXR.
Eksempel 24
I tillegg til de ko-transfeksjonsdataene fra eksempel 15 ble også bindingen av utvalgte forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse til RAR- og RXR-reseptorene undersøkt overensstemmende med den metode som er beskrevet i M. F., Boehm, et al. "Synthesis and Structure-Activity Relationships of Novel Retinoid X Receptor Selective Retinoids", 37 J. Med. Chem., 2930 (1994); MF. Boehm, et al., "Synthesis of High Specific Activity [<3>H]-9-cis Retinoic Acid and Its Application for Identifying Retinoids with Unusual Binding Properties", 37 J. Med. Chem., 408 (1994) og E. A. Allegretto, et al., "Charac-terization and Comparison of Hormone-Binding and Transactivation Properties of Retinoic Acid and Retinoid X Receptors Expressed in Mammalian Cells and Yeast", 268 J. Biol. Chem., 22625 (1993), hvis beskrivelser inntas her som referanse.
Ikke-spesifikk binding ble definert som den binding som blir igjen i nærvær av 500 nm av den passende, umerkede forbindelsen. Ved slutten av inkuberingsperioden ble bundet separert fra fri ligand. Mengden av bundne tritierte retinoider ble bestemt ved væske scintillasjonstelling av en alikvot (700 ml) av supernatantfluidet eller hydroksylapatitt pelleten.
Etter korrigering for ikke-spesifikk binding ble IC5o-verdier bestemt. IC5Q-verdien defineres som den konsentrasjon av konkurrerende ligand som kreves for å redusere spesifikk binding med 50%. ICso-verdien ble bestemt grafisk fra en logg-logitt avsetning av dataene. Kj-verdiene ble bestemt ved å anvende Cheng-Prussof ligningen på IC50-verdiene, den merkede ligandkonsentrasjonen og Kjj for den merkede ligand.
Bindingsaktivitets (Kj i nM)-resultatene for valgte retinoidforbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse, og referanseforbindelsene ATRA, og 9-cis-RA, fremgår av tabell 2 nedenfor.
Slik det fremgår av tabell 2, viser forbindelsene 9 og 10 ifølge foreliggende oppfinnelse lik eller bedre binding til den kjente RAR-aktive forbindelsen ATRA, og den kjente RXR-aktive forbindelsen 9-cis. Alle sammenligningseksempelforbindelsene fra eksempel 14 viser til sammenligning absolutt ingen binding til noen av retinoidreseptorene, med unntagelse av sammenligningseksempelforbindelsen A, som viser svak binding på 312 nm til RARa.
Eksempel 25
Enda et anerkjent mål på retinoidaktiviteten til forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse er ornitin dekarboksylase-analysen, slik den opprinnelig ble beskrevet av Verma and Boutwell, 37 Cancer Research, 2196 (1977), hvis beskrivelse inntas her som referanse. I orginalarbeidet til Verma & Boutwell ved anvendelse av retinoinsyre, ble det fastslått at ornitindekarboksylase (ODC)-aktivitet økte i forhold til polyaminbiosyntese. I sin tur var det tidligere fastslått at økninger i polyaminbiosyntese er korrelert med cellulær formering. Dersom ODC-aktivitet kunne inhiberes, kunne således cellehyperformering kunne moduleres. Selv om alle årsaker til økete ODC-aktivitet fortsatt er ukjent, er det kjent at 12-O-tetradekanoylforbor-13-acetat (TPA) induserer ODC-aktivitet. Retinoinsyre inhiberer denne induksjonen av ODC av TPA.
En ODC-analyse som i det vesentlige følger de fremgangsmåter som er angitt i 35 Cancer Research, 1662 (1975), hvis beskrivelse inntas her som referanse, ble anvendt for å vise inhiberingen av TPA-induksjon av ODC ved forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse. Resultatene av denne analyse av valgte eksempelforbindelser, og referanseforbindelsene ATRA og (E)-4-[2-(5,6,7,8-tetrahydro-5,5,8,8-tetrametyl-2-naftalenyl)-l-propenyljbenzolsyre (TTNPB), kjente RAR-aktive forbindelser, er vist nedenfor i tabell 3. Alle verdier er uttrykt som konsentrasjonen av de angitte forbindelser i nM som kreves for å inhibere TPA-induksjonen av ODC med 80%, dvs. IC-80 i nM.
Forbindelser 7 og 8, som er estere av henholdsvis forbindelse 9 og 10, er inkludert for å vise at slike esteranaloger oppviser retinoidaktivitet. Uten å være bundet til noen opera-sjonsteori, antas det at slike estere kan operere som pro-medisiner in vivo, muligens på grunn av spaltning av esteren til den aktive syreformen av forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse.
Eksempel 26
Påvirkningen in vitro av valgte forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse og de kjente cancer cellelinjene, RPMI 8226, ME 180 og AML-193 oppnådd fra American Type Cul-ture Collection (ATCC, Rockville, MD), ble undersøkt.
RPMI 8226 er en human hematopoetisk cellelinje oppnådd fra det perifere blodet hos en pasient med multippel myeloma, og som sådan er en anerkjent modell for multiple mye-lomer og relaterte ondartetheter. Y. Matsuoka, G E. Moore, Y. Yagi og D. Pressman, "Production of free light chains of immunoglobulin by a hematopoietic cell line derived from a patient with multiple myeloma", 125 Proe. Soc. Exp. Biol. Med., 1246 (1967), hvis beskrivelse inntas her som referanse. Cellene ligner de lymfoblastoide cellene i andre humane lymfocytcellelinjer og utskiller lette immunoglobinkjeder av ?i-typen. RPMI 8226-celler ble dyrket i RPMI-medium (Gibco) tilsatt 10% kvegfosterserum, glutamin og antibiotika. Cellene ble holdt som suspensjonskultur dyrket ved 37°C i en fuktete atmosfære med 5% CO2 i luft. Cellene ble fortynnet til en konsentrasjon på 1 x 10^/ml to ganger i uken.
ME 180 er en human epidermoid carcinoma cellelinje oppnådd fra livmorhalsen, og er som sådan en anerkjent modell for platecellecarcinomer og relaterte ondartetheter. J. A. Sykes, J. Whitescarver, P. Jernstrom, J.F. Nolan og P. Byatt, "Some properties of new epithelial cell line of human origin", 45 MH-Adenoviridae J. Nati. Cancer Inst., 107
(1970), hvis beskrivelse inntas her som referanse. Tumoren var et meget invasivt skjell-cellecarcinom med irregulære celleklinger og ingen signifikant horndannelse. ME 180-celler ble dyrket og bibeholdt i McCoy's 5a medium (Gibco) tilsatt 10% kvegfosterserum, glutamin og antibiotika. Cellene ble vedlikeholdt som monosjiktkulturer dyrket ved 37°C i en fuktet atmosfære med 5% CO2 i luft.
AML-193-cellelinjen ble fastslått i blast celler fra en pasient med leukemi og ble klassifi-sert som M5 akutt monocytisk leukemi, og som sådan en anerkjent modell for leukemier og relatertee ondartetheter. G. Rovera, et al., 139 J. Immunol. 3348 (1987), hvis beskrivelse inntas her som referanse. Over 75% av disse cellene er positive ved immunofluore-scens for det myelomonocytiske antigenet CS15. Cellene ble dyrket i Iscove's modifiserte Dulbeccos medium med 5 ug/ml overføring, 5 ug/ml insulin og 2 ng/ml rh GM-CSF. Cellene ble holdt som suspensjonskulturer dyrket ved 37°C i en fuktet atmosfære med 5% CO2 i luft. Cellene ble fortynnet til en konsentrasjon på 1 x lO^/ml to ganger i uken.
Innføring av ^ H- thymidin
Måling av nivået av radiomerket thymidin innført i de ovenfor nevnte cellelinjene gir et direkte mål på de antiformerende egenskapene til forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse. Den fremgangsmåte som anvende for bestemmelse av innføring av radiomerket thymidin var tilpasset fra den fremgangsmåte som er beskrevet av S. Shrivastav et al., "An in vitro assay procedure to test chemotherapeutic drugs on cells from human solid tumors", 40 Cancer Res., 4438 (1980), hvis beskrivelse inntas her som referanse. RPMI 8226 eller AML-193-celler ble plassert i en 96 brønners rundbunnet mikrotiterplate (Costar) med en densitet på 1000 celler/brønn. Til passende brønner ble retinoid testforbindelser tilsatt i de sluttkonsentrasjoner som er angitt for et sluttvolum på 150 ul/brønn. Platene ble inkubert i 96 timer ved 37°C i en fuktet atmosfære med 5% CO2 i luft. Deretter ble 1 uCi av [5'-<3>H]-thymidin (Amersham, U.K. 43 Ci/mmol spesifikk aktivitet) i 25 ul dyrkningsmedium tilsatt til hver brønn og cellene ble inkubert i ytterligere 6 timer. Kulturene ble behandlet videre som beskrevet nedenfor.
ME 180-celler, høstet ved trypsinisering ble påført i en 96 brønners flatbunnet mikrotiterplate (Costar) med en densitet på 2.000 celler/brønn. Kulturene ble behandlet som
beskrevet ovenfor for RPMI 8226 med følgende unntagelser. Etter inkubering ble super-natanten omsorgsfullt fjernet, og cellene ble vasket med en 0,5 mM løsning av thymidin i fosfatbuffret saltløsning. ME 180-celler ble kortvarig behandlet med 50 (il av 2,5% tryp-sin for å løsne cellene fra platen. Begge cellelinjer ble så behandlet som følger: den cellulære DNA ble utfelt med 10% trikloreddiksyre og glassfiberfiltermatter ved anvendelse
av en SKATRON multi-brønn-cellehøster (Skatron Instruments, Sterling VA). Radioak-tivitet som var innført i DNA, som et direkte mål på cellevekst, ble målt ved væske scin-tilleringstelling. De midlere desintegreringer pr minutt av innført thymidin fra tredobbelte brønner ble bestemt. IC50 (nM-konsentrasjon som kreves for å inhibere 50% av den maksimalt observerte innføring av thymidin) for forbindelser 9 og 10 ifølge foreliggende oppfinnelse, og referanseforbindelsene ATRA og TTNBP er vist nedenfor i tabeller 4, 5 og 6 for cellelinjene henholdsvis RPMI 8226, ME 180 og AML-193.
Levedyktighet
Utvalgte forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse ble også målt for å bestemme deres cytotoksisitet på de ovenfor identifiserte cellelinjer. Den fremgangsmåte som ble anvendt var identisk, med bare små modifikasjoner, med den analyse som er beskrevet i T. Mos-mann, "Rapid colometric assay for cellular growth and survival: application to prolifera-tion and cytotoxicity assays", 65 J. Immunol. Meth., 55 (1983), hvis beskrivelse inntas her som referanse. RPMI 8226- eller AML-193-celler ble påført på en 96 brønners rundbunnet mikrotiterplate (Costar) med densitet på 1.000 celler/brønn. Til passende brønner ble retinoid testforbindelser tilsatt i de sluttkonsentrasjoner som er angitt for et sluttvolum på 150 ul/brønn. Platene ble inkubert i 96 timer ved 37°C i en fuktet atmosfære med 5% CO2 i luft. Deretter ble 15 ul av et filtersterilisert tetrazolium farvestoff i fosfat-buffret saltløsning (Promega, Madison, WI) tilsatt til hver brønn og cellene ble inkubert i ytterligere 4 timer. Etterfølgende håndteringer av kulturene var som beskrevet nedenfor. ME 180-celler, som var høstet ved trypsinisering, ble påført på en 96 brønners flatbunnet mikrotiterplate (Costar) med en densitet på 2.000 celler/brønn. Kulturene ble behandlet som beskrevet ovenfor for RMPI 8226.
Etter fire timers inkubering ble 100 ul av en solubiliserings/stoppløsning tilsatt til hver brønn (Promega, Madison, WI). Platene fikk stå over natten ved 37°C i den fuktede at-mosfæren. Absorpsjon ved 570-600 nm bølgelengde ble notert for hver brønn ved anvendelse av en Biomek ELISA plateleser (Beckman Instruments). IC50 (nM-konsentrasjon som kreves for å inhibere 50% av den mitokondriale funksjonen, og til slutt celle-nes levedyktighet) for forbindelsene 9 og 10 ifølge oppfinnelsen, og referanseforbindelsene ATRA og TTNBP er som vist nedenfor i tabell 4, 5 og 6 for cellelinjene henholdsvis RPMI 8226, ME 180 og AML-193.
Eksempel 27
De følgende eksemplene tilveiebringer illustrerende, farmakologiske preparatsammenset-ninger:
harde gelatinkapsler fremstilles ved anvendelse av følgende ingredienser:
De ovenstående ingrediensene blandes og fylles i harde gelatinkapsler i 250 mg mengder.
En tablett fremstilles ved anvendelse av ingrediensene nedenfor:
Bestanddelene blandes og komprimeres for å danne tabletter som hver veier 360 mg.
Tabletter som hver inneholder 60 mg aktiv ingrediens, fremstilles som følger:
Den aktive ingrediens, stivelse og cellulose føres gjennom en US-sikt med maske nr. 45 og blandes grundig. Løsningen av PVP blandes med det resulterende pulver, som så føres gjennom en US-sikt med maske nr. 14. De således fremstilte granulene tørkes ved 50°C og føres gjennom en US-sikt med maske nr. 18. CSMS, magnesiumstearat og talk, som på forhånd var ført gjennom en US-sikt med maske nr. 60, tilsettes så til granulene som etter blanding komprimeres på en tablettmaskin for å gi tabletter som hver veier 150 mg.
Suppositorier, som hver inneholder 225 mg aktiv ingrediens, kan fremstilles som følger:
Den aktive ingrediens føres gjennom en US-sikt med maske nr. 60 og suspenderes i de
mettede fettsyreglyceridene som på forhånd var smeltet ved anvendelse av den minimale nødvendige varme. Blandingen helles så i en suppositorieform som normalt rommer 2 g og får kjøles.
Et intravenøst preparat kan fremstilles som følger:
Forbindelsen oppløses i glycerolen og løsningen fortynnes så langsomt med isotonisk saltløsning. Løsningen av de ovenstående ingrediensene administreres så intravenøst med en hastighet på 1 ml pr minutt til en pasient.

Claims (10)

1. Forbindelse, karakterisert ved at den har formlene: hvor. R<1>, R2 og R<4> hver uavhengig er hydrogen, CF3 eller C2-Cg-alkyl; R<3> og R<5> hver uavhengig er hydrogen, C]-C4-alkyl eller OR<6>, hvor R<6> er Ci-C2-alkyl eller C3-C7-cykloalkyl; R<9>erCi-C4-alkyl, R I® til R15 hver uavhengig er hydrogen; X er COOR<16>, hvor R<16> representerer hydrogen; Y er O, forutsatt at når Y er 0, eksisterer ikke R<14> og R<15>, R<l9>er n er 1 eller 2, de prikkede linjene betegner eventuelle dobbeltbindinger og de bølgede linjene avbilder karbon- til -karbon-bindinger i enten cis- eller trans-konflgurasjoner.
2. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at R<*>, R<2> og R<4> uavhengig representerer C3-Cg-forgrenede alkyler, eller at R<4> uavhengig representerer C3-Cg-forgrenede alkyler, og R<*>, R<3> og R^ alle er hydrogen.
3. Forebindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at R<2> og R<4> uavhengig representerer isopropyl, t-butyl eller CF3, og Ri, R<3> og R^ alle er hydrogen.
4. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at den er valgt fra gruppen bestående av (2E, 4E, 6E)-7-(3,5-di-t-butylfenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoat; etyl-(2E, 4E, 6Z)-7-(3,5-di-t-butylfenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoat; (2E, 4E, 6E)-7-(3,5-di-t-butylfenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6Z)-7-(3,5-di-t-butylfenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoisk syre; etyl-(2E-4E)-7-(3,5-di-t-butylfenyl)-3-metylokta-2,4-dienoat; (2E,4E)-7-(3,5-di-t-butylfenyl)-3-metylokta-2,4-dienoisk syre; [etyl-(2E, 4E, 6E)-7-(3,5-di-t-butylfenyl)-3-metyldeka-2,4,6-trienoat; etyl-(2E, 4E, 6E)-7-(3,5-di-t-butylfenyl)-3-metyldeka-2,4,6-trienoat]; (2E, 4E, 6E)-7-(3,5-di-t-butylfenyl)-3-metyldeka-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6Z)-7-(3,5-di-t-butylfenyl)-3-metyldeka-2,4,6-trienoisk syre; etyl-(2E, 4E, 6E)-6-(6,8-di-t-butylkroman-4-yliden)-3-metylheksa-2,4,6-trienoat; etyl-(2E,4E,6Z)-6-(6,8-di-t-butylkroman-4-yliden)-3-metylheksa-2,4,6-trienoat; (2E, 4E, 6E)-6-(6,8-di-t-butylkroman-4-yliden)-3-metylheksa-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6Z)-6-(6,8-di-t-butylkroman-4-yliden)-3-metylheksa-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6E)-7-(3,5-di-trifluormetylfenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6Z)-7-(3,5-di-trifluormetylfenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6E)-7-(3,5-di-isopropylfenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6Z)-7-(3,5-di-isopropylfenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6E)-7-(4-t-butylfenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6E)-7-(3,5-di-t-butyl-4-metoksyfenyl)-3-metylokta-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6E)-3-metyl-7-(3,5-di-t-butyl-4-metoksyfenyl)okta-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6E)-3-metyl-7-(3,4-dietylfenyl)okta-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6Z)-3-metyl-7-(3,4-di-etylfenyl)okta-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6E)-3-metyl-7-(3;5-di-t-butyl-4-etoksyfenyl)okta-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6E)-3-metyl-7-(3,4-di-t-butylfenyl)okta-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6E)-3-metyl-7-cykloheksyl-7-(3,5-di-t-butylfenyl)hepta-2,4,6-trienoisk syre; (2E, 4E, 6E)-3-metyl-7-(3,5-di-t-butylfenyl)nona-2,4,6-trienoisk syre og (2E, 4E, 6Z)-3-metyl-7-(3,4-dietyl-6-metylfenyl)nona-2,4,6-trienoisk syre.
5. Farmasøytisk preparat, karakterisert ved at det omfatter en forbindelse ifølge krav 1 og en farmasøytisk akseptabel bærer og at preparatet er sammensatt for oral, topisk, intravenøs, suppositorie- eller parenteral administrasjon.
6. Farmasøytisk preparat ifølge krav 5, karakterisert ved at forbindelsen administreres til en pasient som en doseringsenhet med fra 1 ug/kg kroppsvekt til 500 mg/kg kroppsvekt, med fra 10 ug/kg kroppsvekt til 250 u.g/kg kroppsvekt eller med fra 20 ug/kg kroppsvekt til 100 mg/kg kroppsvekt.
7. Farmasøytisk preparat ifølge krav 5, karakterisert ved at preparatet er effektivt ved behandling av hud-relaterte sykdommer og tilstander, cancerøse og pre-cancerøse tilstander, sykdommer i øyet, hjerte-kar sykdommer, betennelse-sykdommer, neurodegenerative sykdommer, sykdommer som omfatter modulering av apoptose, sykdommer i immunsystemet, feilaktig slimavsondrende funksjon, sykdommer omfatter humant papilloma virus, sårhelbredelse eller gjenopprettelse av hårvekst.
8. Anvendelse av forbindelsene ifølge krav 1, for fremstilling av et medikament til påvirkning av RAR- og/eller RXR-aktivitet.
9. Anvendelse av forbindelsene ifølge krav 1, for fremstilling av et medikament for modulering av fremgangsmåter som formidles av RAR- og/eller RXR-reseptorer.
10. Fremgangsmåte for bestemmelse av nærværet av en eller flere RAR- og/eller RXR-reseptorer i en prøve, karakterisert ved at den omfatter å kombinere en forbindelse ifølge krav 1 med en prøve som inneholder en eller flere ukjente retinoidreseptorer, og å bestemme om nevnte forbindelser bindes til en reseptor i prøven.
NO19973017A 1994-12-30 1997-06-27 Nye trienoiske retinoidforbindelser, fremgangsmåter og anvendelse NO310408B1 (no)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US36661394A 1994-12-30 1994-12-30
US08/481,877 US6083977A (en) 1994-12-30 1995-06-07 Trienoic retinoid compounds and methods
US08/480,127 US5721103A (en) 1994-12-30 1995-06-07 Trienoic retinoid compounds and methods
PCT/US1995/016695 WO1996020913A1 (en) 1994-12-30 1995-12-21 Novel trienoic retinoid compounds and methods

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO973017D0 NO973017D0 (no) 1997-06-27
NO973017L NO973017L (no) 1997-08-28
NO310408B1 true NO310408B1 (no) 2001-07-02

Family

ID=27408763

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO19973017A NO310408B1 (no) 1994-12-30 1997-06-27 Nye trienoiske retinoidforbindelser, fremgangsmåter og anvendelse

Country Status (14)

Country Link
EP (1) EP0800503B1 (no)
JP (1) JP4001913B2 (no)
CN (1) CN1121374C (no)
AT (1) ATE192731T1 (no)
AU (1) AU712187B2 (no)
CA (1) CA2208981C (no)
DE (1) DE69516903T2 (no)
DK (1) DK0800503T3 (no)
ES (1) ES2148593T3 (no)
GR (1) GR3033676T3 (no)
MX (1) MX9704878A (no)
NO (1) NO310408B1 (no)
PT (1) PT800503E (no)
WO (1) WO1996020913A1 (no)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7115728B1 (en) 1995-01-30 2006-10-03 Ligand Pharmaceutical Incorporated Human peroxisome proliferator activated receptor γ
US6028052A (en) * 1995-09-18 2000-02-22 Ligand Pharmaceuticals Incorporated Treating NIDDM with RXR agonists
JPH10158192A (ja) 1996-10-03 1998-06-16 Eisai Co Ltd 移植片対宿主疾患（ｇｖｈｄ）の治療および臓器移植時の移植片拒絶反応抑制のための医薬組成物
AU4676999A (en) 1998-06-12 1999-12-30 Ligand Pharmaceuticals, Inc. Treatment of anti-estrogen resistant breast cancer using rxr modulators
AU9556298A (en) * 1998-11-03 2000-05-22 Ligand Pharmaceuticals Incorporated Trienoic retinoid compounds as retinoic acid receptor antagonists
US6326397B1 (en) 1998-11-10 2001-12-04 Hoffman-La Roche Inc. Retinoid antagonists and use thereof
EP1149067B1 (en) 1998-12-17 2004-02-25 F. Hoffmann-La Roche Ag 7-aryl-6(z)heptatrienoic acid retinamides as apoptosis inducing compounds and their use as anti-cancer agents
FR2787789B1 (fr) * 1998-12-29 2002-06-14 Lipha Benzopyranes et benzoxepines utilisables dans le traitement de dyslipidemies, de l'atherosclerose et du diabete, compositions pharmaceutiques les contenant et procedes de preparations
ATE266616T1 (de) * 1999-03-08 2004-05-15 Basilea Pharmaceutica Ag Retinoid antagonisten und ihre verwendung
NZ514662A (en) 1999-04-07 2004-01-30 Sankyo Co Amine derivatives
AU6941200A (en) 1999-08-27 2001-03-26 Ligand Pharmaceuticals Incorporated 8-substituted-6-trifluoromethyl-9-pyrido(3,2-g)quinoline compounds as androgen receptor modulators
CZ2002711A3 (cs) 1999-08-27 2003-11-12 Ligand Pharmaceuticals Incorporated Modulátory androgenních receptorů, způsoby jejich výroby a způsoby jejich použití
US6566372B1 (en) 1999-08-27 2003-05-20 Ligand Pharmaceuticals Incorporated Bicyclic androgen and progesterone receptor modulator compounds and methods
WO2001019770A2 (en) * 1999-09-14 2001-03-22 Ligand Pharmaceuticals Incorporated Rxr modulators with improved pharmacologic profile
BRPI0107715B8 (pt) 2000-01-21 2021-05-25 Novartis Ag produto farmacêutico compreendendo um inibidor de dipeptidilpeptidase-iv e metformina, bem como usos do dito produto farmacêutico e do inibidor de dipeptidilpeptidase-iv
JPWO2003051382A1 (ja) * 2001-12-14 2005-04-21 株式会社サンドリー アポトーシスを誘導する方法およびそのための組成物
JP5877466B2 (ja) * 2012-02-29 2016-03-08 国立大学法人 岡山大学 テルペノイド由来レチノイド化合物
KR101556439B1 (ko) 2013-07-01 2015-10-15 서울대학교산학협력단 미토콘드리아 역행성 신호 경로와 관련된 ＲＸＲα의 기능 및 용도
US20160263189A1 (en) 2013-10-23 2016-09-15 Acadia Pharmaceuticals Inc. Treatment of a neurodegenerative disease or disorder
CN103759895B (zh) * 2013-11-26 2016-03-23 四川蓝讯宝迩电子科技有限公司 气体减压阀进气端的装配测试基台
CN113302206A (zh) 2018-11-26 2021-08-24 戴纳立制药公司 治疗脂质代谢失调的方法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3845089A (en) * 1972-07-27 1974-10-29 Zoecon Corp Phenylheptadienoates
US3882157A (en) * 1972-07-27 1975-05-06 Zoecon Corp Thiolesters of phenylheptadienoic acids
LU77254A1 (no) * 1977-05-04 1979-01-18
FR2719041B1 (fr) * 1994-04-26 1996-05-31 Cird Galderma Nouveaux composés polyéniques, compositions pharmaceutiques et cosmétiques les contenant et utilisations.

Also Published As

Publication number Publication date
JP4001913B2 (ja) 2007-10-31
EP0800503B1 (en) 2000-05-10
DE69516903D1 (de) 2000-06-15
CN1121374C (zh) 2003-09-17
PT800503E (pt) 2000-11-30
CA2208981A1 (en) 1996-07-11
DE69516903T2 (de) 2000-10-26
CA2208981C (en) 2008-08-26
AU712187B2 (en) 1999-10-28
WO1996020913A1 (en) 1996-07-11
ES2148593T3 (es) 2000-10-16
JPH10511948A (ja) 1998-11-17
GR3033676T3 (en) 2000-10-31
NO973017L (no) 1997-08-28
CN1220656A (zh) 1999-06-23
AU4643096A (en) 1996-07-24
ATE192731T1 (de) 2000-05-15
NO973017D0 (no) 1997-06-27
EP0800503A1 (en) 1997-10-15
DK0800503T3 (da) 2000-08-07
MX9704878A (es) 1997-11-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6083977A (en) Trienoic retinoid compounds and methods
NO310408B1 (no) Nye trienoiske retinoidforbindelser, fremgangsmåter og anvendelse
EP0873295B1 (en) Dimer-selective rxr modulators and methods for their use
US5780676A (en) Compounds having selective activity for Retinoid X Receptors, and means for modulation of processes mediated by Retinoid X Receptors
US5770378A (en) Tricyclic retinoids, methods for their production and use
EP0678087B1 (en) Compounds having selective activity for retinoid x receptors, and means for modulation of processes mediated by retinoid x receptors
US5770382A (en) Tricyclic retinoids, methods for their production and use
EP1216221A2 (en) Rxr modulators with improved pharmacologic profile
US5998654A (en) Retinoic acid receptor antagonist compounds and methods
US7655699B1 (en) Compounds having selective activity for retinoid X receptors, and means for modulation of processes mediated by retinoid X receptors
US6005007A (en) Retinoids, methods for their production and use
US5968989A (en) Means for the modulation of processes mediated by retinoid receptors and compounds useful therefor
US20040248919A1 (en) Fluorinated trienes and their use as rxr modulators
DE69513689T2 (de) Trizyclische retinoidverbindungen verfahren zu ihrer herstellung und verwendung
AU2002255732A1 (en) Fluorinated trienes and their use as RXR modulators
US5932622A (en) Method for in vivo modulation of non-malignant skin-related processes with 9-cis-retinoic acid
AU2002319583A1 (en) (Pyridinyl and pyrimidyl) trienoic acid derivatives as retinoid X receptor modulators
WO2000026173A1 (en) Novel retinoids, methods for their production and use
AU767255B2 (en) Dimer-selective RXR modulators and methods for their use
KR20060079254A (ko) 다이머-선택적 ｒｘｒ 변조물질 및 그의 사용방법
AU2004200443A1 (en) Dimer-selective RXR modulators and methods for their use

Legal Events

Date Code Title Description
MM1K Lapsed by not paying the annual fees