NO20100359A1 - Peptidmateriale og preparater og anvendelser derav. - Google Patents

Peptidmateriale og preparater og anvendelser derav. Download PDF

Info

Publication number
NO20100359A1
NO20100359A1 NO20100359A NO20100359A NO20100359A1 NO 20100359 A1 NO20100359 A1 NO 20100359A1 NO 20100359 A NO20100359 A NO 20100359A NO 20100359 A NO20100359 A NO 20100359A NO 20100359 A1 NO20100359 A1 NO 20100359A1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
approx
peptide
accordance
size
peptides
Prior art date
Application number
NO20100359A
Other languages
English (en)
Inventor
Anders Aksnes
Rolf Kristian Berge
Kjartan Sandnes
Original Assignee
Marine Bioproducts As
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Marine Bioproducts As filed Critical Marine Bioproducts As
Priority to NO20100359A priority Critical patent/NO20100359A1/no
Priority to PCT/NO2011/000078 priority patent/WO2011112099A1/en
Publication of NO20100359A1 publication Critical patent/NO20100359A1/no

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/80—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for aquatic animals, e.g. fish, crustaceans or molluscs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J3/00—Working-up of proteins for foodstuffs
    • A23J3/30—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis
    • A23J3/32—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents
    • A23J3/34—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents using enzymes
    • A23J3/341—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents using enzymes of animal proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/20—Animal feeding-stuffs from material of animal origin
    • A23K10/22—Animal feeding-stuffs from material of animal origin from fish
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/142—Amino acids; Derivatives thereof
    • A23K20/147—Polymeric derivatives, e.g. peptides or proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/189—Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21026—Prolyl oligopeptidase (3.4.21.26), i.e. proline-specific endopeptidase
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Insects & Arthropods (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

Peptidmateriale og preparater og anvendelser derav.
OMRÅDE FOR OPPFINNELSEN.
Den foreliggende oppfinnelse vedrører et peptidpreparat, en fremgangsmåte for fremstilling av et peptidpreparat, og anvendelser derav.
BAKGRUNN FOR OPPFINNELSEN.
Fiskeoppdrettsindustrien har vokst enormt både i Norge og resten av verden i løpet av de siste år, spesielt oppdrett av laks. Det meste av fisken selges til forbrukeren som slaktet hel fisk, men betydelige mengder selges som fileter. Kun 50-70 % av laksen er fileter, mens resten selges som lawerdiprodukter så som fiskemel og fiske ensilasje.
Gjennom enzymatisk behandling av fiskekjøttet og også fiskeskjelettet kan det separeres til en vandig fraksjon som er rik på proteiner, benevnt fiskeproteinhydrolysat (FPH). Den enzymatiske hydrolyseprosess kan kontrolleres, og produktene er reproduserbare og godt definerte.
Et slikt proteinmateriale, det vil si fiskeproteinhydrolysat (FPH) har fere nyttige biologiske effekter, og et slikt materiale kan anvendes som et farmasøytisk materiale og som et emæringsmateriale. Søkers egen patentsøknad PCT/NO04/00202 beskriver av anvendelse av et slikt FPH-materiale senker konsentrasjon av plasmakolesterol og homocystein, og også senker konsentrasjon av hepatiske triacylglyseroler.
Vi har nå overraskende funnet at vi kan behandle et enzymbehandlet proteinmateriale videre, det vil si behandle det enzymbehandlete proteinmateriale i en sekundær andre behandling og at vi kan oppnå et nytt peptidmateriale som er forskjellig med hensyn til størrelsesfordeling av peptidfragmentene.
Vi har fremstilt flere nye peptidmaterialer og vi har overraskende påvist at de biologiske aktiviteter forandres blant de forskjelllige peptidmaterialer, og også at de nye peptidmaterialer har effekter som er avvikende fra proteinmaterialet som kun har blitt behandlet en gang med ett enzym. Disse nye materialer kan anvendes for bedre å skreddersy materialene for spesifikke ernæringseffekter, medisinske indikasjoner eller sykdommer.
Det spesifikke peptidmaterialet ifølge foreliggende oppfinnelse, benevnt som E1, representerer en forbedring av det kjente fiskeproteinhydrolysat (FPH) som har blitt behandlet med kun en primær enzymbehandling. Vi antar at også enzymbehandlete ikke-fiskeproteinmaterialer kan anvendes som en basis for en andre enzymatisk behandling, og foreliggende oppfinnelse er således ikke begrenset til fiskeproteinmaterialer.
Uten å være bundet av teori antar vi at virkningsmekanismen er relatert til størrelses-fordeling av peptidblandingen, og ikke til opprinnelsen av proteinprøven.
Peptidmaterialet i samsvar med foreliggende oppfinnelse er spesielt nyttig som et funksjonelt protein i ernæringsprodukter, spesielt idet det anvendes som et substitutt for naturlig plasma i dyrefor og i for for kjæledyr. Dersom det anvendes i for eller for for kjæledyr, kan ytterligere ingredienser tilsettes produktet så som fett, sukker, salt, smaksmidler, mineraler, etc. Produktet kan deretter formes til klumper som ligner naturlige kjøttklumper i utseende og tekstur. Produktet ifølge oppfinnelsen har de ytterligere fordeler at det enkelt kan formuleres til å inneholde nødvendige ernæringsmidler, at det er enkelt å fordøye av dyrene og velsmakende for dyrene.
Peptidmaterialet i samsvar med foreliggende oppfinnelse kan også anvendes for fremstilling av et nutrasøytisk eller farmasøytisk sammensetning for hindring og/eller behandling av forskjellige sykdommer, som angitt i kravseksjonen.
DETALJERT BESKRIVELSE AV OPPFINNELSEN.
Et første aspekt av foreliggende oppfinnelse vedrører et peptidpreparat fremstilt med enzymatisk behandling av et proteinmateriale hvor proteinene kuttes til mindre peptidfragmenter, kjennetegnet ved at størrelsen av peptidfragmentene er fra 0 til 10.000 Dalton, mer fortrinnsvis fra 0 til 1000 Dalton, og mer foretrukket fra 0 til 100 Dalton.
En foretrukket utførelse vedrører anvendelse av et fiskeproteinmateriale, fortrinnsvis et materiale fra laks.
I en foretrukket utførelse er peptidpreparatet fremstilt med enzymatisk behandling med en sur protease, fortrinnsvis Acid Protease A.
En ytterligere foretrukket utførelse involverer også en enzymatisk behandling med et Bacillus protease kompleks, fortrinnsvis før behandlingen med en sur protease.
En foretrukket utførelse vedrører et peptidpreparat hvor minst 75 % av peptidene har en størrelse på 1000 Dalton eller mindre.
Mer foretrukket, minst 35 % av peptidene har en størrelse på ca. 100-1000 Dalton, mer foretrukket at minst 40 % av peptidene har en størrelse på ca. 100-1000 Dalton, og mer foretrukket at ca. 50 % av peptidene har en størrelse på ca. 100-1000 Dalton.
Mer fortrinnsvis, minst 25 % av peptidene haren størrelse på mindre enn ca. 100 Dalton, mer fortrinnsvis at minst 28 % av peptidene har en størrelse på mindre enn ca. 100 Dalton.
Mer fortrinnsvis,
- minst 35 % av peptidene har en størrelse på ca. 100-1000 Dalton, mer fortrinnsvis at minst40 % av peptidene haren størrelse på ca. 100-1000 Dalton, og mer fortrinnsvis at ca. 50 % av peptidene har en størrelse på ca. 100-1000 Dalton, og - minst 25 % av peptidene har en størrelse på mindre enn ca. 100 Dalton, mer fortrinnsvis at minst 28 % av peptidene har en størrelse på mindre enn ca.. 100 Dalton.
Mer fortrinnsvis, en fraksjon av peptidpreparatet korresponderende til peptidstørrelse på ca. 1200 til 200 Dalton har en aminosyresammensetning som angitt i tabell 3.
Mer fortrinnsvis, en fraksjon av peptidpreparatet korresponderende til peptidstørrelser på ca. 200 til 100 Dalton haren aminosyresammensetning som angitt i tabell 3.
Fortrinnsvis,
- en fraksjon av peptidpreparatet korresponderende til peptidstørrelser på ca. 1200 til 200 Dalton har en aminosyresammensetning som angitt i tabell 3, og - en fraksjon av peptidpreparatet korresponderende til peptidstørrelser av ca. 200 til 100 Dalton av en aminosyresammensetning som angitt i tabell 3.
En utførelse av dette aspekt vedrører et peptidpreparat hvor den relative mengde av aminosyren arginin er minst 5 % høyere enn sammenlignet med fiskeproteinhydro-lysater.
En foretrukket utførelse vedrører et peptidpreparat hvor den relative mengde av aminosyren arginin i peptidpreparatet korresponderende til peptidstørrelse av ca. 1200 til 200 Dalton er minst 5 % høyere sammenlignet med fiskeproteinhydrolysatet.
En foretrukket utførelse vedrører et peptidpreparat hvor den relative mengde av aminosyren arginin i peptidpreparatet korresponderende til peptidstørrelser på ca. 200 til 100 Dalton er minst 5 %, mer fortrinnsvis 10 %, mer fortrinnsvis 20 % og mer foretrukket 30 % høyere sammenlignet med fiskeproteinhydrolysatet.
En ytterligere utførelse av dette aspekt vedrører et peptidpreparat hvor den relative mengde av aminosyren tyrosin er 5 %, mer fortrinnsvis 10 %, mer fortrinnsvis 15 % lavere enn sammenlignet med fiskeproteinhydrolysatet.
En foretrukket utførelse vedrører et peptidpreparat hvor den relative mengde av aminosyren tyrosin i peptidpreparatet korresponderende til peptidstørrelse av ca. 1200 til 200 Dalton er 5 %, mer fortrinnsvis 10 %, mer fortrinnsvis 15 % lavere enn sammenlignet med fiskeproteinhydrolysatet.
En foretrukket utførelse vedrører et peptidpreparat hvor den relative mengde av aminosyren tyrosin i peptidpreparatet korresponderende til peptidstørrelse av ca. 200 til 100 Dalton er 20 %, mer foretrukket 30 %, mer foretrukket 40 %, mer foretrukket 50 % lavere enn sammenlignet med fiskeproteinhydrolysatet.
Et andre aspekt av foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte for fremstilling av et peptidpreparat, hvor fremgangsmåten omfatter et trinn hvor et protein eller peptidmateriale behandles med en sur protease for å redusere størrelsene av peptidfragmentene.
Fortrinnsvis, nevnte sure protease er Acid Protease A.
Fortrinnsvis, fremgangsmåten inkluderer en ytterligere enzymatisk behandling av materiale, fortrinnsvis før behandlingen med en sur protease, og fortrinnsvis er nevnte ytterligere enzymatiske behandling med en Bacillus protease kompleks.
Et tredje aspekt ved foreliggende oppfinnelse vedrører anvendelse av et peptidpreparat i samsvar med trekkene angitt over, for fremstilling av et farmasøytisk eller nutrasøytisk preparat for å hindre og/eller behandle hypertriglyseridemia, aterosklerose, hjertesykdom, overvekt eller obesitet.
DEFINISJONER AV TERMER ANVENDT I SØKNADEN.
Dyr
I denne konteksten inkluderer termen "dyr" pattedyr så som mennesker og husdyr (landbruksdyr), spesielt dyr av økonomisk viktighet så som hønsefugler, bovine, ovine, caprine og porcine dyr, spesielt de som produserer produkter egnet for humant forbruk, så som kjøtt, egg og melk. Videre, termen er tiltenkt å inkludere fisk og skalldyr, så som laks, torsk, Tilapia, skjell og østers. Termen inkluderer også husdyr så som hunder og katter.
Behandling
I relasjon til de farmasøytiske applikasjoner ifølge oppfinnelsen angir termen "behandling" en reduksjon av alvorligheten av sykdommen.
Hindring
Termen "hindring" refererer til å hindre en gitt sykdom, det vil si en forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse administreres før start av tilstand. Dette betyr at forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse kan anvendes som profylaktiske midler eller som ingredienser i funksjonelle matvarer eller for for å hindre risiko for start av en gitt sykdom.
FPH - Enzvmbehandlet fiskeproteinhvdrolvsat
FPH-materialet er et proteinhydrolysat resulterende fra en primær enzymatisk behandling av et fiskemateriale med enzymet Protamex™. FPH-materialet inneholder høye andeler av proteiner og peptider og anvendes som en kontroll i den eksperimentelle seksjon. Peptidmaterialet ifølge foreliggende oppfinnelse er forskjellig fra dette FPH-materialet med hensyn til størrelsesfordeling av peptidene og biologisk aktivitet.
Peptidmateriale i samsvar med oppfinnelsen
Peptidmaterialet i samsvar med foreliggende oppfinnelse er basert på en primær enzymatisk behandlet proteinmateriale, og en sekundær enzymatisk behandling har blitt utført for å redusere størrelsene av peptidfragmentene.
Protease
En protease, (også benevnt peptidase eller proteinase) bryter ned proteinene. En protease er et enzym som utfører proteolyse, det vil si, starter proteinkarabolisme ved å hydrolysere peptidbindinger som forbinder aminosyrer sammen i polypeptid-kjeden som danner proteinet.
Sur protease
En sur protease er et proteolytisk enzym med et pH-optimum for aktivitet under pH 5. En variant av enzymet kan være produsert av soppen Aspergillus niger.
ADMINISTRERING AV FORBINDELSENE IFØLGE FORELIGGENDE OPPFINNELSE.
Som et farmasøytisk medikament kan materialene ifølge foreliggende oppfinnelse administreres direkte til dyret med enhver egnet teknikk, inkluderende parenteralt, intranasalt, oralt, eller ved absorpsjon gjennom huden. Det kan administreres lokalt eller systemisk. Den spesifikke administrasjonsrute for hvert middel vil avhenge for eksempel av den medisinske historie til dyret. Den foretrukne administrasjonsrute er oralt.
Eksempler på parenteral administrering inkluderer subkutanøs, intramuskulær, intravenøs, intraarteriell og intraperitoneal administrering.
Dersom de gis kontinuerlig administreres forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse typisk med 1-4 injeksjoner per dag eller med kontinuerlig subkutanøse infu-sjoner, for eksempel ved anvendelse av en minipumpe. En intravenøs poseløsning kan også benyttes. Nøkkelfaktoren for å velge en egnet dosering er resultatet som skal oppnås, som målt med reduksjon i totalt kroppsfett eller forholdet av fett til mager masse, eller med andre kriterier for å måle kontroll eller hindring av obesitet eller for å hindre obesitets relaterte tilstander, slik det er hensiktsmessig av den praktiserende.
For parenteral administrering, i en utførelse, formuleres forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse generelt ved å blande hver i en ønsket grad av enhet, i en enhetsdoserings injiserbar form (løsning, suspensjon eller emulsjon), med en farma-søytisk akseptabel bærer, det vil si en som er ikke-toksisk til mottakeren i de doseringer og konsentrasjoner som benyttes og som er kompatibel med de andre ingredienser i formuleringen.
Generelt, formuleringene fremstilles ved å sette forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse hver uniformt og intimt i kontakt med væskebærere eller finfordelte faststoffbærere, eller begge deler. Deretter, dersom nødvendig, formes produktene til den ønskete formulering. Fortrinnsvis er bæreren en parenteral bærer, mer fortrinnsvis en løsning som er isoton med blodet til mottakeren. Eksempler på slike bærervehikler inkluderer vann, saltløsning, Ringers løsning og dekstrose løsning. Ikke-vandige vehikler så som faste oljer og etyl oleat er også nyttige heri og likeledes liposomer.
Bæreren kan hensiktsmessig inneholde mindre mengder av tilsetningsstoffer så som substanser som forsterker isotonisitet og kjemisk stabilitet. Slike materialer er ikke-toksiske til mottakerne i de doseringer og konsentrasjoner som benyttes, og inkluderer buffere så som fosfat, sitrat, sukinat, eddiksyre, og andre organiske syrer eller deres salter; antioksidanter så som askorbinsyre, immunglobuliner; hydrofile poly-merer så som polyvinyl polidon; aminosyrer, så som glysin, glutamisk syre, aspara-ginsyre eller arginin; monosakkarider, disakkarider og andre karbohydrater inkluderende cellulose eller dets derivater, glukose, mannose eller dekstriner, kela-terende midler så som EDTA; sukkeralkoholer så som mannitol eller sorbitol; motion så som natrium; og/eller ikke-ioniske surfaktanter så som polysorbater, poloks-amerer eller PEG.
For orale farmakologiske sammensetninger kan slike bærer materialer være for eksempel vann, gelatin, gummi, laktose, stivelser, magnesium stearat, talg, oljer, polyalkenglykol, petroleum jelly og lignende benyttes. Slike farmasøytiske preparater kan være i enhets doseringsform og kan ytterligere inneholde andre terapeutiske verdifulle substanser eller konvensjonelle farmasøytiske adjuvanter så som konser-verende midler, stabiliserende midler, emulsifiserende midler, buffere og lignende. De farmasøytiske preparater kan være i konvensjonelle væskeformer så som tablet-ter, kapsler, drageer, ampuller og lignende, i konvensjonelle doseringsformer så som tørrampuller, og som stikkpiller og lignende.
I tillegg, forbindelsen ifølge foreliggende oppfinnelse administreres hensiktsmessig i kombinasjon med andre behandlinger for å bekjempe eller hindre spesifikk sykdom.
Oppfinnelsen vil forstås bedre med referanse til de påfølgende eksempler. Disse skal imidlertid ikke vurderes som begrensende for rammen av oppfinnelsen.
En foretrukket utførelse av foreliggende oppfinnelse vedrører en ernæringssammen-setning omfattende peptidmaterialet ifølge foreliggende oppfinnelse formulert på enhver konvensjonell måte til et for eller matprodukt.
FIGUR FORKLARINGER
Figur 1 viser kontroll (FPH) og forskjellige filtreringsfunksjoner etter behandling med enzympreparatet Acid protease A ved pH 3 som beskrevet i eksempel 1. X-aksen viser logMW for peptidene.
Figur 2 viser effekten av peptidpreparatet E1 på vektøkning relativt til kontroll.
Figur 3 viser effekten av peptidpreparatet E1 for spesifikk vekstrate relativt til kontroll. Figur 4 viser effekten av peptidpreparatet E1 for konsentrasjon av plasma TAG relativt til kontroll. Figur 5 viser korrelasjon av vektøkning og plasma TAG relativ som en effekt av peptidpreparatet E1 relativt til kontroll.
EKSPERIMENTELL SEKSJON
Eksempel 1
Primær enzymatisk behandling, fremstilling av hvdrolvsat materialet anvendt som kontroll i eksempel 2.
Kontrollmaterialet er et enzymbehandlet fiskeproteinhydrolysat (FPH) og har flere nyttige biologiske effekter.
FPH ble produsert fra fiskekjøttrester av laksebenskjeletter etter filetering. Skjelet-tene uten hoder fra fersk filetert Atlantisk laks { Salmo salar, L.) ble tatt direkte fra produksjonslinjen og frosset ved -20 ± 2 °C: Innen en uke ble de frosne kroppene anvendt i den enzymatiske hydrolyseprosess.
Den enzymatiske hydrolyse ble utført med Protamex™ ved en pH på ca. 6,5 og ved en temperatur på 55 ± 2 °C. Protamex™ (E.C. 3.4.21.62/3.4.24.28) er et Bacillus protease kompleks fra Novozymes AS (Bagsvaerd, Denmark) og tilfredsstiller ren-hetskravene for ernæringsgraderte enzymer. Forholdet av laksekropper til vann var 1,14. Et enzym til substratforhold på 11,1 AU/kg ubearbeidet protein ble anvendt i hydrolysene. Etter 60 minutters enzymatisk behandling ble temperaturen økt til 98 °C, som ble nådd etter 105 minutter.
Store ben ble tilbakeholdt i hydrolysetanken, mens små ben ble fjernet med filtrering av hydrolysatet gjennom et gitter. Deretter ble de uløselige fraksjoner fjernet i en tofase separator (Westfalia, Germany, SC.35-26-177, 15 kW, 7200 rpm), før den resulterende blanding ble separert i en trefase separator (Westfalia, Germany, SB-7-36-+76, 4 kW, 8520 rpm) til lakseolje, emulsjonsfraksjon og en vandig fraksjon. Den vandige fraksjon ble konsentrert i en 4-trinns fallende film evaporator (APV Anhydro) til en pasta med ca. 60 % tørrstoff.
Det evaporerte hydrolysat benevnes som fiskeproteinhydrolysat (FPH), det vil si kontrollprøvene i eksempel 2, og inneholder ca. 83 % protein, 10 % aske og ca. 2 % lipider, basert på tørrvekt. Aminosyresammensetningen er gitt i tabell 1.
Eksempel 2
Sekundær enzymatisk behandling - Enzymatisk behandling av FPH ( kontroll) med Acid Protease A ved pH 3
Fortynning av prøver:
Substratprøven (FPH) (pasta) ble oppløst i forvarmet springvann (50 °C) til 10 % tørrstoff. pH ble justert til forventet optimal pH for enzymet ved anvendelse av konsentrert (47 %) HCI. Ingen forbehandling av prøven (for eksempel filtrering) ble utført.
Enzymreaksjoner
Ingen spesifikk inaktivering av enzymet ble utført etter inkubering. Inaktiveringen av enzymene ble utført under filtreringstrinnet og under evaporering av de aktuelle fraksjoner. I disse prosesseringstrinn oversteg temperaturen flere ganger inaktiverings-temperaturen for enzymene som er inkludert i forsøket.
pH ble redusert til 3 ved tilsetting av 4,0 liter konsentrert (37 %) HCI til 36,8 kg hydrolysat (60 % tørrstoff). Hydrolysatløsningen ble behandlet med Acid Protease A, som er en sur proteolytisk enzympreparat tilgjengelig fra Amano Enzyme Inc. Enzympreparatet fremstilles med en unik fermenteringsprosess av en utvalgt stamme av Aspergillus niger. Acid protease A er et svakt gult pulver og løselig i vann, stabil i surt pH-område fra 3,0 til 6,0, med en optimal pH rundt 2,5. Enzympreparatet er ikke-patogent og appliserbart innen farmasøytisk industri, og ernærings- og for-industrien.
Hydrolysatløsningen ble inkubert med enzympreparatet i 20 timer. Temperaturen ble holdt ved 38-48 °C i arbeidstimer men ble redusert til 23 °C over natten.
Figur 1 viser peptidfordelingen av kontrollprøven (FPH) og filtreringsfraksjoner etter behandling med Acid Protease A, ved pH 3. Peptidfordelingen ble bestemt som beskrevet i Rubin-rapporten nummer 4617/115, 2004.
Fraksjonering med filtrering
Den enzymbehandlete løsning E1 ble foredlet med mikrofiltrering og ultrafiltrering i løsning med ca. 10 % tørrstoff ved 50-60 °C. Filtreringene ble utført i filtreringsenhet (Membralox SD 3-A modules M-3P1940, Pall.USA) med keramiske membraner med 100 nm og 20 nm porestørrelse (Membralox EP 1940, Pall, USA). Kun permeatene ble samlet for evaluering av bioaktive peptider, selv om små prøver av retentatene ble samlet for analytiske formål for å gi informasjon om utbytte og utførelse under de spesifikke filtreringstrinn.
Detaljert informasjon om utførelse under mikro- og ultrafiltrering er gitt i tabell 2, nedenfor.
Permeatet etter ultrafiltreringstrinnet ble anvendt for de biologiske eksperimenter beskrevet i eksempel 3, nedenfor.
Peptidstørrelsesfordeling
Ca. 2 ml av den primære og sekundære enzymatisk behandlete løsning E1 eller en kontrollprøve (nullprøve) av FPH ble tilsatt 20 ml buffer, blandet, sentrifugert og filtrert før applisering til HPLC for separasjon med størrelseseksklusjonskromatografi som beskrevet i Rubin-rapporten 4617/115, 204;
http://www.rubin.no/files/documents/4617-115_peptidstorrelse_hydrolysat2.pdf.
Samling av peptidfraksjoner av spesifikk lengde og analyser av disse for å karakterisere den generelle aminosyreprofil av den spesifiserte peptidfraksjon oppnådd etter enzymbehandling med de forskjellige protolytiske enzymer ble evaluert. Følgende fraksjoner ble samlet etter størrelseseksklusjonskromatografi med fremgangsmåten beskrevet i Rubin-rapporten 4617/115, 204). Eluert væske ble samlet ved spesifikke elueringstider for å karakterisere peptidene som foreligger i det oppfinneriske produkt. Under gis elueringstidene for prøver samlet for å analyseres for aminosyreprofil: Fraksjon 1: 18-22 min (korresponderende til peptider av ca. 8500 - 1200 Dalton<*>) Fraksjon 2: 22-26 min (korresponderende til peptider av ca. 1200 - 200 Dalton<*>) Fraksjon 3: 26-30 min (korresponderende til peptider av ca. 200 - 100 Dalton<*>) Fraksjon 4: 30-34 min (korresponderende til peptider av ca. <100 Dalton<*>)
Fraksjon 5: 34-40 min
Størrelsen av peptidene beregnes i samsvar med korrelasjonen mellom elueringstid og logMW beskrevet i Rubin-rapporten 4617/115, 2004.
Utbytter
Utbyttene i permeatet etter ultrafiltrering ble analysert med forskjellen mellom innledende tørrstoff og retentatet etter mikro- og ultrafiltrering: Utbytte = 100 - ((tørrstoff ved start hydrolysat - (mikrofiltrat retentat tørrstoff + ultrafiltrerings retentat tørrstoff))/ (tørrstoff ved start hydrolysat)<*>100)).
Et utbytte på 79 % ble oppnådd på E1-materialet i samsvar med foreliggende oppfinnelse.
Peptidstørrelsesfordeling:
Fig 1 viser peptidfordelingen oppnådd i forskjellige filtreringsfraksjoner etter enzymatisk behandling med enzymene Acid protease A ved pH 3.
Som det fremgår av resultatene over, har den enzymatiske behandling signifikant redusert mengden av de største peptider og i varierende grad forandret forholdet av de andre peptidfraksjoner. Det skal bemerkes at foreliggende enzymstudier er preliminære i den betydning av enzymbetingelsene og utbyttet ikke er optimalisert.
Aminosyreanalyse av samlete fraksjoner etter størrelseseksklusionskromatografi. De sekundære enzymbehandlete preparater (eksempel 2) det vil si E1 -materialet i samsvar med foreliggende oppfinnelse, og det primære enzymbehandlete preparat (eksempel 1) det vil si FPH (kontroll), ble samlet og analysert for totalt innhold av aminosyrer. Kun fraksjon 1, 2 og 3 ble analysert.
Fraksjon 1: 18-22 min (korresponderende til ca. 8500 - 1200 Dalton<*>
Fraksjon 2: 22-26 min (korresponderende til ca. 1200 - 200 Dalton<*>
Fraksjon 3: 26-30 min (korresponderende til ca. 200 - 100 Dalton<*>
Tabell 2 viser den relative mengde av totale aminosyrer detektert i de forskjellige fraksjoner. Generelt, hovedpeptidene forekom i fraksjoner 2 og fraksjoner 3 for enzymene som viser det høyeste utbyttet i enzymhydrolysene.
Tabell 3 viser at hydrolysatet som er behandlet med et andre enzym (sur protease A) inneholder et høyere nivå av aminosyrer foreliggende i mindre peptider (fraksjon 2 og fraksjon 3) sammenlignet med kontroll (FPH).
Tabell 3, nedenfor, viser den relative mengde av de forskjellige aminosyrer i fraksjon 2 og 3.
Aminosyreanalyse ble analysert etter hydrolyse i 6 M i 221 ved 110 °C med HPLC ved anvendelse av en fluoressens teknikk for deteksjon (Cohen and Michaud, Anal. Biochem. 1993, 211, 279-287).
Eksempel 3
Biologisk aktivitet av enzvmpreparatene
Dyr og dyrehold
80 hannkjønn Wistar rotter (Mollegaard og Blomholtgaard, Danmark) 12 uker gamle, ble huset individuelt i bur av typen Makrolon III i et åpent system. De ble holdt under standard laboratoriebetingelser med temperatur 22±1 °C, mørke/lys-sykluser av 12/121, relativ fuktighet 55±5 % og 20 luftforandringer per time.
Rottene har fri aksess til intervensjonsdiettene på dager 1-29. Alle rotter ble drept på dag 30. På dag 30 ble alle rottene anestetisert ved inhalering av Sevoflurane 2 % i et anestesikammer. Torakotomi, hjertepunktuering og blodtømming ble utført.
Prøvesamling og analyser av biokjemiske parametere under foringsperioden.
Kroppsvekt og forinntak. (dag 0-7-14-21, 23-29)
Blodprøver (fra lår, plasma) ble opptatt i en heparininneholdende Vacutainer, plas-sert på is i 10 minutter, og sentrifugert ved 2000 rpm i 10 min ved 4 °C. (Dag 0-22-30 og plasma ble lagret ved -80 °C).
Urinprøver for målinger av protein, isoprostaner, natrium og kreatinin (dag 0-22-30), urin ble lagret ved -80 °C.
Avføringsprøver ble samlet på dag 29 og holdt under 20 °C inntil analyse for GMP. Kort forklart, 1 g av det føkale materiale fortynnes i 4 ml ekstraheringsbuffer og homogeniseres grundig ved anvendelse av en Ultra Turrax (20,000 rpm) før sentrifugering ved 45,000g i 20 minutter. De øvre halvdeler av supernatanten høstes forsiktig og kjøres på en standard 1-trinns enzymkoplet immunosorbentanalyse (ELISA) som beskrevet tidligere (10).
Helblod ble spunnet, plasma tatt ut, og prøven ble lagret midlertidig på is, og overført til -80 °C fryser.
Fettsyrer i plasma og i rektale prøver ble analysert som tidligere beskrevet. Den samme metode ble anvendt for analyse av fettsyreprofil i plasma og homogeniserte biopsiprøver tatt fra rektal mukosa. Plasma lipid/fettsyrer, triglyserider, kolesterol, LDL kolesterol, HDL kolesterol, EPA, DHA, docosapentanoisk syre (DPA, C22:5n-3), AA, total n-3 og total n-6 PUFAer ble analysert.
Fremstilling av subcellulære fraksjoner.
Lever fra rottene ble homogenisert individuelt i iskald sukroseløsning (0,25 mol/l sukrose i 10 mmol/l HEPES-buffer pH 7,4 og 1 mmol/l EDTA) ved anvendelse av en Potter-Elvehjem homogeniserer. De subcellulære fraksjoner ble isolert som beskrevet i Berge, R. K. et al (Berge, R. K., Flatmark, T. & Osmundsen, H. (1984), Enhancement of long-chain acyl-CoA hydrolase activity in peroxisomes and mitochondria of rat liver by peroxisomal proliferators. Eur J Biochem 141: 637-644). Kort forklart, homogenatet ble sentrifugert ved 1000 x g i 10 min for å separere post-nukleære fra nukleær fraksjon. En mitokondriell-anriket fraksjon ble fremstilt fra den post nukleære fraksjon ved 10000 x g i 10 min. En peroksisom anriket fraksjon ble fremstilt med sentrifugering av den post-mikrokondrielle fraksjon ved 23500 x g i 30 min. En mikrosomal anriket fraksjon ble isolert fra den post-peroksisomal fraksjon ved 100000 x g i 75 min. Den resulterende supernatant ble samlet som den cytosoliske fraksjon. Prosedyren ble utført ved 0-4 °C, og fraksjonene ble lagret ved - 80 °C. Protein ble analysert ved anvendelse av BioRad protein analyse kit (BioRad, Heraules, CA) og bovin serum albumin som standard.
Lipid analyser
Lipider i hellever og heparinisert plasma ble målt i Tecnicon Axon system (Miles, Tarrytown, NY), med Bayer triglyserid og kolesterol enzymatiske kit (Bayer, Terrytown, NY) og PAP 150 fosfolipid enzymatisk kit (bioMérieux, Lyon, France). Leverlipider ble først ekstrahert i samsvar med Bligh and Dyer (Bligh, E. G. & Dyer, W. J. (1959) A rapid method of total lipid extraction and purification. Can J Biochem Physiol 37: 911-91.
Fettsvresammensetning
Fettsyrer ble ekstrahert fra prøvene med 2:1 kloroform: metanol (v/v) (35). Prøvene ble filtrert, forsåpet og esterifisert i 12 % BF3i metanol (v/v). Fettsyresammensetningen total lipider fra lever og plasma ble analysert ved anvendelse av metodene beskrevet av Lie og Lambertsen (Lie, O. & Lambertsen, G. (1991) Fatty acid composition of glycerophospholipids in seven tissues of cod (Gadus morhua), determined by combined high-performance liquid chromatography and gas chromatography. J Chromatogr 565: 119-129). Fettsyre metylestere ble separert ved anvendelse av en Carlo Erba gasskromatograf ("kald på kolonne" -injeksjon, 69 °C i 20 s, øker med 25 °C min"<1>til 160 °C og holdes ved 160 °C i 28 min, øker med 25 °C min"<1>til 190 °C og holdes ved 190 °C i 17 min, øker ved 25 °C min"<1>til 220 °C og holdes ved 220 °C i 9 min) utstyrt med en 50 m CP-sil 88 (Chrompack, Middelburg, The Netherlands) brent silica kappilærkolonne (i.d. 0,32 mm). Fettsyrene ble identifisert med retensjonstid ved anvendelse av standard blandinger av metylestere (Nu-Chek-Prep, Elyian, MN, USA). Fettsyresammensetningen (vekt prosentandel) ble beregnet ved anvendelse av en integrator (Turbochrom Navigator, Version 4,0) koplet til GLC.
Lipider ble ekstrahert fra plasma triacylglyserol-anriket lipoproteinfraksjon ved anvendelse av en blanding av kloroform og metanol, og separert med tynnsjikt-kromatografi på silicagelplater (0.25mm Silica gel 60, Merck) utviklet i heksan-dietyleter-eddiksyre (80:20:1, v/v/v) og visualisert ved anvendelse av Rhodamine 6G (0,05 % i metanol, Sigma) og UV-lys. Flekkene ble skrapet av, og overført til rør inneholdende heneicosanoisk syre (21:0) som indre standard. BF3-metanol ble tilsatt til prøvene for transesterifisering. For å fjerne nøytrale steroler og ikke-forsåpet materiale, ble ekstrakter av fettacylmetylestere oppvarmet i 0,5mol/l KOH i etanol-vann-løsning (9:1). Gjenvunnet fettsyrer ble deretter reesterifisert ved anvendelse av BF3-metanol. Metylesterene ble analysert på en GC8000Top gasskromatograf (Carlo Erba Instrument), utstyrt med en flammeioniserings detektor (FID), programmerbar temperatur av dampinjektor, AS 800 autosampler (Carlo Erba Instrument) og en kappelær kolonne (60m x 0,25mm) inneholdende en sterkt polar SP 2340 fase med filmtykkelse 0,20^m (Supelco). Innledende temperatur var 130 °C, oppvarming 1,4 °C/min til final temperatur 214 °C. Injektortemperaturen var 235 °C. Detektor-temperatur var 235 °C, ved anvendelse av hydrogen (25ml/min), luft (350 ml/min) og nitrogen som make-up gass (30 ml/min). Prøvene ble kjørt med konstant strømning ved anvendelse av hydrogen som bærergass (1,6 ml/min). Splittingsforholdet var 20:1. Metylesterene ble positivt identifisert med sammenligning til kjente standard (Larodan Fine Chemicals, Malmo, Sweden) og verifisert med massespektrometri. Kvantifisering av fettsyrene ble utført med Chrom-Card A/D 1,0 kromatografistasjon (Carlo Erba Instruments) basert på heneicosanoisk syre som en indre standard.
Isolering av plasma triacvlglvserol- rik lipoproteinfraksion
Plasma triacylglyserol-rik lipoproteinfraksjon ble fremstilt med ultrasentrifugering av 3 ml plasma med en tetthet på 1,063 g/ml i 19 t ved 105000 x g ved 15 °C. Rørene ble fordelt, og den flytende fraksjon i topp 1 ml av hvert rør ble høstet. Fraksjonen ble deretter dialysert mot 150 mmol/l natriumklorid, 16 mmol/l natriumfosfat og 4 mmol/l kaliumfosfat, pH 7,5, mettet med nitrogen.
Resultater av biologisk aktivitet.
De biologiske eksperimentelle data for enzympreparat E1 er vist i tabell 4 nedenfor og gitt i figurer 2 til 5.
Sammenlignet med kontrollmaterialet reduserer E1 -materiale ifølge foreliggende oppfinnelse vektøkningen med ca. 33 %. Også den spesifikke vekstrate er signifikant redusert. Det vurderes således at E1 -materialet ifølge foreliggende oppfinnelse kan anvendes som et vektreduserende middel, for eksempel for å hindre eller behandle en overvektig eller obes tilstand.
Tabell 4 viser også at plasmanivået av triacylglyseroler (TAGer) er signifikant redusert for E1-materialet sammenlignet med kontroll (FPH). Høye nivåer av triglyserider i blodstrømmen har blitt koplet til aterosklerose, og risiko for hjertesykdom og slag. Det vurderes således at foreliggende oppfinneriske E1-materiale kan anvendes for å hindre og/eller behandle hypertriglyseridemia, aterosklerose, hjertesykdommer og slag.

Claims (42)

1. Peptidpreparat fremstilt med enzymatisk behandling av et proteinmateriale hvor proteinene kuttes til mindre peptidfragmenter,karakterisert vedat størrelsen av peptidfragmentene er fra 0 til 10 000 Dalton, mer fortrinnsvis fra 0 til 10.000 Dalton, og mer fortrinnsvis fra 0 til 1000 Dalton, og mer fortrinnsvis fra 0 til 100 Dalton.
2. Peptidpreparat i samsvar med krav 1,karakterisert vedat nevnte proteinmateriale er et fiskeproteinmateriale.
3. Peptidpreparat i samsvar med krav 2,karakterisert vedat nevnte fiskeproteinmateriale er et proteinmateriale fra laks.
4. Peptidpreparat i samsvar med et av de foregående krav,karakterisert vedat peptidpreparatet fremstilles med enzymatisk behandling med en sur protease.
5. Peptidpreparat i samsvar med krav 4,karakterisert vedat nevnte sure protease er Acid Protease A.
6. Peptidpreparat i samsvar med krav 4 eller 5,karakterisert vedat nevnte enzymatiske behandling også involverer en enzymatisk behandling med et Bacillus protease kompleks, fortrinnsvis før behandlingen med en sur protease.
7. Peptidpreparat i samsvar med et av de foregående krav,karakterisert vedat minst 75 % av peptidene har en størrelse på 1000 Dalton eller mindre.
8. Peptidpreparat i samsvar med et av de foregående krav,karakterisert vedat minst 35 % av peptidene har en størrelse på ca. 100-1000 Dalton, mer fortrinnsvis at minst 70 % av peptidene har en størrelse på ca. 100-1000 Dalton, og mer foretrukket at ca. 50 % av peptidene har en størrelse på ca. 100-1000 Dalton.
9. Peptidpreparat i samsvar med et av de foregående krav,karakterisert vedat minst 25 % av peptidene har e størrelse på mindre enn ca. 100 Dalton, mer fortrinnsvis at minst 28 5 av peptidene har en størrelse på mindre enn ca. 100 Dalton.
10. Peptidpreparat i samsvar med et av de foregående krav,karakterisert vedat - minst 35 % av peptidene har en størrelse på ca. 100-1000 Dalton, mer fortrinnsvis at minst 40 % av peptidene har en størrelse på ca. 100-1000 Dalton, og mer foretrukket at ca. 50 % av peptidene har en størrelse på ca. 100-1000 Dalton, og - minst 25 % av peptidene har en størrelse på mindre enn ca. 100 Dalton, mer fortrinnsvis at minst 28 % av peptidene har en størrelse på mindre enn ca. 100 Dalton.
11. Peptidpreparat i samsvar med et av de foregående krav,karakterisert vedat en fraksjon av peptidpreparatet korresponderende til peptid-størrelser av ca. 1200 til 200 Dalton har en aminosyresammensetning som angitt i tabell 3.
12. Peptidpreparat i samsvar med et av de foregående krav,karakterisert vedat en fraksjon av peptidpreparatet korresponderende til peptid-størrelse av ca. 200 til 100 Dalton har en aminosyresammensetning som angitt i tabell 3.
13. Peptidpreparat i samsvar med et av de foregående krav,karakterisert vedat : - en fraksjon av peptidpreparatet korresponderende til peptidstørrelse av ca. 1200 til 200 Dalton har en aminosyresammensetning som angitt i tabell 3, og - en fraksjon av peptidpreparatet korresponderende til peptidstørrelse av ca. 200 til 100 Dalton har en aminosyresammensetning som angitt i tabell 3.
14. Peptidpreparat i samsvar med et av de foregående krav,karakterisert vedat den relative mengde av aminosyren arginin er minst 5 % høyere sammenlignet med fiskeproteinhydrolysatet.
15. Peptidpreparat i samsvar med krav 14,karakterisert vedat den relative mengde av aminosyren arginin i peptidpreparatet korresponderende til peptidstørrelser av ca. 1200 til 200 Dalton er minst 5 % høyere enn sammenlignet med fiskeproteinhydrolysatet.
16. Peptidpreparat i samsvar med krav 14,karakterisert vedat den relative mengde av aminosyren arginin i peptidpreparatet korresponderende til peptidstørrelse av ca. 200 til 100 Dalton er minst 5 %, mer fortrinnsvis 10 %, mer fortrinnsvis 20 % og mer foretrukket 30 % høyere enn sammenlignet med fiskeproteinhydrolysatet.
17. Peptidpreparat i samsvar med et av de foregående krav,karakterisert vedat den relative mengde av aminosyren tyrosin er 5 %, mer foretrukket 10 %, mer foretrukket 15 % lavere enn sammenlignet med fiskeproteinhydrolysatet.
18. Peptidpreparat i samsvar med krav 17,karakterisert vedat den relative mengde av aminosyren tyrosin i peptidpreparatet korresponderende til peptidstørrelse av ca. 1200 til 200 Dalton er 5 %, mer foretrukket 10 %, mer foretrukket 15 % lavere enn sammenlignet med fiskeproteinhydrolysatet.
19. Peptidpreparat i samsvar med krav 17,karakterisert vedat den relative mengde av aminosyren tyrosin i peptidpreparatet korresponderende til peptidstørrelser på ca. 200 til 100 Dalton er 20 %, me r foretrukket 30 %, mer foretrukket 40 %, mer foretrukket 50 % lavere enn sammenlignet med fiskeproteinhydrolysatet.
20. Fremgangsmåte for fremstilling av et peptidpreparat,karakterisertved at fremgangsmåten omfatter et trinn hvor et protein eller peptidmateriale behandles med en sur protease for å redusere størrelsen av peptidfragmentene.
21. fremgangsmåte i samsvar med krav 20,karakterisert vedat nevnte sure protease er Acid Protease A.
22. Fremgangsmåte i samsvar med et av kravene 20 til 21,karakterisertved at fremgangsmåten inkluderer en ytterligere enzymatisk behandling av materialet, fortrinnsvis før behandlingen med en sur protease.
23. Fremgangsmåte i samsvar med krav 22,karakterisert vedat nevnte ytterligere enzymatiske behandling er med et Bacillus protease kompleks.
24. Fremgangsmåte i samsvar med et av kravene 20-23,karakterisertved at nevnte behandling med en sur protease utføres ved en pH på ca. 2 til ca.
5, fortrinnsvis ved en pH på ca. 2,5 til 4,5, fortrinnsvis ved en pH på ca. 3 til 4, eller mer foretrukket ved en pH på ca. 3.
25. Anvendelse av et peptidpreparat ifølge krav 1, for fremstilling av en farma-søytisk eller nutrasøytisk preparat for hindring og/eller behandling av hypertriglyseridemia, aterosklerose, hjertesykdom, overvekt eller obesitet.
26. Anvendelse i samsvar med krav 25, hvor nevnte proteinmateriale er et fiskeproteinmateriale.
27. Anvendelse i samsvar med krav 25, hvor peptidpreparatet er fremstilt med enzymatisk behandling med en sur protease.
28. Anvendelse i samsvar med krav 27, hvor nevnte sure protease er Acid Protease A.
29. Anvendelse i samsvar med krav 28, hvor nevnte enzymatiske behandling også involverer en enzymatisk behandling med et Bacillus protease kompleks, fortrinnsvis før behandlingen med en sur protease.
30. Anvendelse i samsvar med krav 25, hvor minst 75 % av peptidene har en størrelse på 1000 Dalton eller mindre.
31. Anvendelse i samsvar med krav 25, hvor minst 35 % av peptidene har en størrelse av ca. 100-1000 Dalton, mer fortrinnsvis at minst 40 % av peptidene har en størrelse på ca. 100-1000 Dalton, og mer foretrukket at ca. 50 % av peptidene har en størrelse på ca. 100-1000 Dalton.
32. Anvendelse i samsvar med krav 25, hvor minst 25 5 av peptidene har en størrelse på mindre enn ca. 100 Dalton, mer foretrukket at minst 28 % av peptidene har en størrelse på mindre enn ca. 100 Dalton.
33. Anvendelse i samsvar med krav 25, hvor - minst 35 % av peptidene har en størrelse på ca. 100-1000 Dalton, mer foretrukket at minst 40 5 av peptidene har en størrelse på ca. 100-1000 Dalton, og mer foretrukket at ca. 50 5 av peptidene har en størrelse på ca. 100-1000 Dalton, og - minst 25 % av peptidene har e størrelse på mindre enn ca. 100 Dalton, mer foretrukket at minst 28 5 av peptidene har en størrelse på mindre enn ca. 100 Dalton.
34. Anvendelse i samsvar med krav 25, hvor en fraksjon av peptidpreparatet korresponderende til peptidstørrelse av ca. 1200 til 200 Dalton har en aminosyresammensetning som angitt i tabell 3.
35. Anvendelse i samsvar med krav 25, hvor en fraksjon av peptidpreparatet korresponderer til peptidstørrelser av ca. 200 til 100 Dalton av en aminosyresammensetning som angitt i tabell 3.
36. Anvendelse i samsvar med krav 25, hvor: - en fraksjon av peptidpreparatet korresponderende til peptidstørrelse av ca. 1200 til 200 Dalton har en aminosyresammensetning som angitt i tabell 3, og - en fraksjon av peptidpreparatet korresponderende til peptidstørrelse av ca. 200 til 100 Dalton har en aminosyresammensetning som angitt i tabell 3.
37. Anvendelse i samsvar med et av de foregående krav, hvor den relative mengde av aminosyren arginin er minst 5 % høyere enn sammenlignet med fiskeproteinhydrolysatet.
38. Anvendelse i samsvar med krav 37, hvor den relative mengde av aminosyren arginin i peptidpreparatet korresponderende til peptidstørrelse av ca. 1200 til 200 Dalton er minst 5 % høyere enn sammenlignet med fiskeproteinhydrolysatet.
39. Anvendelse i samsvar med krav 37, hvor den relative mengde av aminosyren arginin i peptidpreparatet korresponderende til peptidstørrelse av ca. 200 til 100 Dalton er minst 5 %, mer foretrukket 10 %, mer foretrukket 20 % og mer fortrinnsvis 30 % høyere enn sammenlignet med fiskeproteinhydrolysatet.
40 . Anvendelse i samsvar med et av de foregående krav, hvor den relative mengde av aminosyren tyrosin er 5 %, mer foretrukket 10 %, mer foretrukket 15 % lavere enn sammenlignet med fiskeproteinhydrolysatet.
41. Anvendelse i samsvar med krav 40, hvor den relative mengde av aminosyren tyrosin i peptidpreparatet korresponderende til peptidstørrelse av ca. 1200 til 200 Dalton er 5 %, mer foretrukket 10 %, mer foretrukket 15 % lavere enn sammenlignet med fiskeproteinhydrolysatet.
42. Anvendelse i samsvar med krav 40, hvor den relative mengde av aminosyren tyrosin i peptidpreparatet korresponderende til peptidstørrelse av ca. 200 til 100 Dalton er 20 %, mer foretrukket 30 %, mer foretrukket 40 %, mer fortrinnsvis 50 % lavere enn sammenlignet med fiskeproteinhydrolysatet.
NO20100359A 2010-03-08 2010-03-08 Peptidmateriale og preparater og anvendelser derav. NO20100359A1 (no)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
NO20100359A NO20100359A1 (no) 2010-03-08 2010-03-08 Peptidmateriale og preparater og anvendelser derav.
PCT/NO2011/000078 WO2011112099A1 (en) 2010-03-08 2011-03-08 Peptide material, and preparations and uses thereof

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
NO20100359A NO20100359A1 (no) 2010-03-08 2010-03-08 Peptidmateriale og preparater og anvendelser derav.

Publications (1)

Publication Number Publication Date
NO20100359A1 true NO20100359A1 (no) 2011-09-09

Family

ID=44114311

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20100359A NO20100359A1 (no) 2010-03-08 2010-03-08 Peptidmateriale og preparater og anvendelser derav.

Country Status (2)

Country Link
NO (1) NO20100359A1 (no)
WO (1) WO2011112099A1 (no)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103923963B (zh) * 2014-04-10 2016-05-25 江南大学 一种制备鱼皮胶原蛋白及ace抑制肽的方法
GB201522443D0 (en) * 2015-12-18 2016-02-03 Bergen Teknologioverføring As Use
CN105624250A (zh) * 2016-03-09 2016-06-01 广东海洋大学 一种酶解-发酵偶联的制备水产蛋白活性肽方法

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS58152498A (ja) 1982-03-06 1983-09-10 Terumo Corp 低分子ペプチド混合物の製造方法
JPH02113859A (ja) 1988-10-24 1990-04-26 Nitto Denko Corp タンパク質加水分解物の製造方法
JP3130080B2 (ja) 1990-12-27 2001-01-31 日清製粉株式会社 ペプチドおよびその製造方法
NO322425B1 (no) * 2003-07-04 2006-10-02 Berge Biomed As Anvendelse av et hydrolysat av proteinholdig fiskemateriale for fremstilling av et farmasoytisk middel for behandling og/eller hindring av patologisk hoye nivaer av tracylglyceroler, hyperkolesterolemia, hyperhomocysteinemia, eller patologisk lave nivaer av beta-oksidasjon i et dyr eller menneske.
US20070207944A1 (en) 2004-07-12 2007-09-06 Luppo Edens Blood Pressure Lowering Oligopeptides
US7179793B2 (en) 2005-02-14 2007-02-20 Ocean Nutrition Canada Limited Anti-hypertensive dietary supplement
CA2639880A1 (en) * 2005-02-14 2006-08-17 Ocean Nutrition Canada Limited Anti-diabetic or anti-hypertensive dietary supplement
FR2927335B1 (fr) * 2008-02-12 2012-04-20 Cie Des Peches Saint Malo Sante Hydrolysat de proteines de poissons presentant une activite satietogene, compositions nutraceutiques et pharmacologiques comprenant un tel hydrolysat et procede d'obtention
WO2009128713A1 (en) 2008-04-14 2009-10-22 Newtricious B.V. Egg protein hydrolysates

Also Published As

Publication number Publication date
WO2011112099A1 (en) 2011-09-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2004253441B2 (en) Fish protein hydrolyzate
Lapeña et al. Comparative assessment of enzymatic hydrolysis for valorization of different protein-rich industrial byproducts
EP3238551B1 (en) Process for reducing the fluoride content when producing proteinaceous concentrates from krill
Khora Marine fish-derived bioactive peptides and proteins for human therapeutics
Jafarpour et al. Characterization of cod (Gadus morhua) frame composition and its valorization by enzymatic hydrolysis
WO2007080515A1 (en) Thrombosis preventing krill extract
JP2003515662A (ja) ω−３系脂肪酸に富む海産哺乳動物油を精製する方法、及び該油を包含する組成物
Du et al. Simultaneous extraction by acidic and saline solutions and characteristics of the lipids and proteins from large yellow croaker (Pseudosciaena crocea) roes
Hussein et al. Toxicity study and blood pressure–lowering efficacy of whey protein concentrate hydrolysate in rat models, plus peptide characterization
NO20100359A1 (no) Peptidmateriale og preparater og anvendelser derav.
KR102191527B1 (ko) 홍어콜라겐 펩타이드를 이용한 근손실 예방, 개선 또는 치료용 조성물
NO20100369A1 (no) Peptidmateriale, fôrsammensetning og preparater og anvendelser derav.
NO20100370A1 (no) Peptidmateriale, fôrsammensetninger og preparater, og anvendelser derav.
US20070141083A1 (en) Use of a single-cell protein material
WO2015170988A2 (en) Novel protein hydrolysate
JP4050799B2 (ja) タイトジャンクション形成促進剤
Dhakal et al. Bioprocessing of Beef and Pork Industries, Meat Processing ‘Waste to Value-Add’
TR2021012454A2 (tr) Mekani̇k ayrilmiş hi̇ndi̇ eti̇nden i̇zole edi̇len protei̇n hi̇droli̇zatinin üreti̇m yöntemi̇ ve bu yöntemle elde edi̇len protei̇n hi̇droli̇zati
Park et al. Cholesterol lowering effect of enzymatic hydrolysates of squid in rats
KR20040098738A (ko) 닭식도로부터 콘드로이틴황산을 추출하는 방법
NO324533B1 (no) Materiale fremstilt fra en kombinasjon av ikke-β-oksiderbare fettsyreanaloger og et proteinmateriale, samt anvendelse derav.

Legal Events

Date Code Title Description
FC2A Withdrawal, rejection or dismissal of laid open patent application