NO173939B - Analogifremgangsmaate for fremstilling av oksygentransporterende hemoglobinkomplekser - Google Patents
Analogifremgangsmaate for fremstilling av oksygentransporterende hemoglobinkomplekser Download PDFInfo
- Publication number
- NO173939B NO173939B NO89890249A NO890249A NO173939B NO 173939 B NO173939 B NO 173939B NO 89890249 A NO89890249 A NO 89890249A NO 890249 A NO890249 A NO 890249A NO 173939 B NO173939 B NO 173939B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- hemoglobin
- group
- compound
- oxygen
- formula
- Prior art date
Links
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 title claims description 29
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 title claims description 29
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 15
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 title claims description 15
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 title claims description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 13
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 30
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 12
- -1 N-bromoacetylaminoethylamino group Chemical group 0.000 claims description 9
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 8
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- DKIDEFUBRARXTE-UHFFFAOYSA-N 3-mercaptopropanoic acid Chemical compound OC(=O)CCS DKIDEFUBRARXTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 claims description 4
- 235000013878 L-cysteine Nutrition 0.000 claims description 4
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 claims description 4
- ZNZYKNKBJPZETN-WELNAUFTSA-N Dialdehyde 11678 Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1[C@H](C[C@H](/C(=C/O)C(=O)OC)[C@@H](C=C)C=O)NCC2 ZNZYKNKBJPZETN-WELNAUFTSA-N 0.000 claims description 3
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 claims description 3
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 2
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 7
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000003633 blood substitute Substances 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 108010002751 dextran-hemoglobin complex (deoxygenated) Proteins 0.000 description 5
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- BNCJEZWKLUBUBB-QXEWZRGKSA-N 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-n-(2-aminoethyl)pentanamide Chemical group N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)NCCN)SC[C@@H]21 BNCJEZWKLUBUBB-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 3
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 3
- NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N pyridoxal 5'-phosphate Chemical compound CC1=NC=C(COP(O)(O)=O)C(C=O)=C1O NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000007682 pyridoxal 5'-phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000011589 pyridoxal 5'-phosphate Substances 0.000 description 3
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 3
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000006213 oxygenation reaction Methods 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N teixobactin Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H]1C(N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C[C@@H]2NC(=N)NC2)C(=O)N[C@H](C(=O)O[C@H]1C)[C@@H](C)CC)=O)NC)C1=CC=CC=C1 LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N 0.000 description 2
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 206010008111 Cerebral haemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000000066 S-methyl group Chemical group [H]C([H])([H])S* 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003855 balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000009582 blood typing Methods 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- YPTUAQWMBNZZRN-UHFFFAOYSA-N dimethylaminoboron Chemical compound [B]N(C)C YPTUAQWMBNZZRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N guanidine group Chemical group NC(=N)N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003278 haem Chemical group 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 229960001327 pyridoxal phosphate Drugs 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/795—Porphyrin- or corrin-ring-containing peptides
- C07K14/805—Haemoglobins; Myoglobins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/06—Antianaemics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K17/00—Carrier-bound or immobilised peptides; Preparation thereof
- C07K17/02—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier
- C07K17/10—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier the carrier being a carbohydrate
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
- C08B37/0009—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid alpha-D-Glucans, e.g. polydextrose, alternan, glycogen; (alpha-1,4)(alpha-1,6)-D-Glucans; (alpha-1,3)(alpha-1,4)-D-Glucans, e.g. isolichenan or nigeran; (alpha-1,4)-D-Glucans; (alpha-1,3)-D-Glucans, e.g. pseudonigeran; Derivatives thereof
- C08B37/0021—Dextran, i.e. (alpha-1,4)-D-glucan; Derivatives thereof, e.g. Sephadex, i.e. crosslinked dextran
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08H—DERIVATIVES OF NATURAL MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08H1/00—Macromolecular products derived from proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Diabetes (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører fremstilling av oksygentransporterende hemoglobinkomplekser.
Pyridoksal-5-fosfat er kjent for å bindes til hemoglobin på en reversibel måte, og det er også kjent at denne binding kan gjøres irreversibel ved reduksjon, idet både de rever-sibelt og de irreversibelt bundede produktene har mindre sterke oksygenbindingsegenskaper enn selv- e hemoglobinet. Det har imidlertid blitt funnet at kovalent derivatisering med pyridoksal-5'-fosfat svikter m.h.t. å redusere oksygen-affiniteten for dekstran-hemoglobin, slik at denne kan nærme seg den for hemoglobin derivatisert med pyridoksal-5'-fosfat (PLP-HB). En oksygenaffinitet nær eller under den for PLP-HB anses som ønskelig for en tilfredsstillende hemoglobinbasert bloderstatning.
TJS patent 4.064.118 beskriver et preparat som er egnet som en bloderstatning eller et bloddrøyemiddel som omfatter det vannoppløselige produktet av kovalent kobling av hemoglobin med dekstran som har en molekylvekt fra ca. 5.000 til ca. 2.000.000.
Det har imidlertid blitt funnet at produktene ifølge US patent 4.064.118, sammenlignet med hemoglobin, har tendens til å vise en noe større affinitet for oksygen, men bibehol-der den vesentlige oksygentransporterende og —frigjørende evne til hemoglobin.
US patent 4.650.786 beskriver et modifisert dekstran-hemoglobin-kompleks som har redusert oksygenaffinitet. Dette modifiserte dekstran-hemoglobin-komplekset fremstilles ved først å aktivere dekstrandelen og deretter omsette det aktiverte dekstran med hemoglobin eller et hemoglobin-inositoltetrakisfosfatdialdehyd (FPA)-kompleks.
Dekstran-hemoglobin-komplekser og modifiserte dekstran-hemoglobin-komplekser har imidlertid den ulempe at viskositeten til en vandig oppløsning øker ved lagring, f.eks. i 12 dager eller mer, i en slik grad at de gjøres uegnet for administråsjon.
Man har nå overraskende funnet at de aktiverte setene på dekstrandelen kan blokkeres, og viskositeten ved lagring forbedres uten å påvirke hemoglobinkompleksets oksygen-transportegenskaper.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer oksygentransporterende, vannoppløselige hemoglobinkomplekser som har formelen:
hvor PS er en dekstran med molekylvekt på 200.000, X er en
gruppe,
(Hem) er en gruppe Hb eller HB-Z, hvor
Hb er en hemoglobinrest, og
Z er en oksygenaffinitetsreduserende ligand oppnådd fra inositoltetrakisfosfatdialdehyd,
B er en blokkert, aktiverende gruppe,
og denne fremgangsmåten er kjennetegnet ved at man omsetter en forbindelse med formelen:
hvor X, Hem og PS har de ovenfor angitte betydninger, og A er en N-bromacetylaminoetylaminogruppe, med 3-merkaptopropionsyre, L-cystein eller 2-merkaptoetanol.
Den aktiverende gruppen Å som er en N-bromacetylaminoetylaminogruppe reagerer med hydroksylgruppene i polysakkaridet. I tillegg er den i stand til etterfølgende reaksjon med hemoglobin. Blant de tilgjengelige gruppene på hemoglobin er f.eks. amino-, fenol-, sulfhydryl-, tiometyl-, imidazo-, karboksyl- og guanidingrupper.
Innholdet av aktiverende grupper kan bestemmes ved hydrolyse, fortrinnsvis basisk hydrolyse, f.eks. med NaOE, av forbindelsen. Når f.eks. den aktiverende gruppen inneholder brom, omdanner hydrolyse med NaOH på en 1-til-l-basis de aktiverende gruppene til bromidioner. Innholdet av aktiverende grupper kan bestemmes ved bruk av i og for seg kjente konvensjonelle analytiske teknikker, f.eks. ved ionekromatografi, eller ved bruk av en bromidelektrode når den aktiverende gruppen inneholder brom.
P5Q-verdien til forbindelsene med formel I kan bestemmes fra deres oksygendissosiasjonskurver som bestemt f.eks. ved metoden ifølge Benesch, MacDuff og Benesch (1965), Anal. Biochem. 11, 81-87.
Forbindelsene med formel I kan ha en Psø-verdi ved 24° C på over 7 mm Hg, fortrinnsvis over 8 mm Hg, mer foretrukket over 9 mm Hg, og mest foretrukket over 10 mm Hg.
Den bromacetylaminoetylamino-aktiverende gruppe blokkeres ifølge oppfinnelsen ved omsetning med en egnet forbindelse inneholdende en sulfhydrylgruppe, nemlig 3-merkaptopropionsyre, L-cystein eller 2-merkaptoetanol.
Høye forhold mellom sulfhydrylforbindelse og hemoglobin kan lede til skade på Hem-gruppen og blir derfor fortrinnsvis unngått. Når forbindelsen med formel II befinner seg ved en konsentrasjon på 6-8 io vekt/vekt m.h.t. hemoglobin, så er konsentrasjonen av benyttet sulfhydrylforbindelse fortrinnsvis mindre enn 160 mM, fortrinnsvis mindre enn 80 mM, og mer foretrukket mindre enn 50 mM. Det er særlig foretrukket at konsentrasjonen av sulfhydrylforbindelse er ved en konsentrasjon på 15-20 mM, f.eks. ca. 60 mM.
For en effektiv reaksjon og en som unngår skade på hemoglobinet er pH-verdien fortrinnsvis i området 7-11,5, mer foretrukket i området 8,5-10,5, og mest foretrukket i området 9-10, f.eks. ca. 9,5.
Reaksjonen med en forbindelse som kan deaktivere aktiverende grupper, utføres fortrinnsvis under 25"C, og mer foretrukket mellom 0 og 5°C.
Etter reaksjon med en forbindelse som kan deaktivere aktiverende grupper kan forbindelsen med formel I isoleres ved hjelp av i og for seg kjente konvensjonelle metoder, f.eks. ved dialyse.
Polysakkaridet er en dekstran med gjennomsnittlig molekylvekt 200.000.
Det er foretrukket at (Hem) er en Hb-Z gruppe. Det er også foretrukket at Z er en polyol, hvori to eller flere av hydroksygruppene er forestret med fosforsyre. Det er spesielt foretrukket at Z inneholder 2-6, og mer foretrukket 2-4, fosfatgrupper. Når Z er en fosfatester av en polyol, har minst 2, og fortrinnsvis alle, hydroksygruppene blitt forestret med fosforsyre. Det er også foretrukket at Z inneholder 4-8 karbonatomer, og at den er en rettkjedet gruppe. Det er videre foretrukket at Z omfatter en polyol hvori hver av karbonatomene (andre enn i det minste ett av de terminale karbonatomene) bærer en eventuelt fosforsyreforestret hydroksygruppe.
Z-gruppen kan bindes til hemoglobinet ifølge fremgangsmåten beskrevet i US patent 4.650.786.
Det er foretrukket at antall mol av aktiverende grupper til antall mol hemoglobin er mindre enn 0,2 og mer foretrukket mindre enn 0,1.
Hemoglobininnholdet i forbindelsen som fremstilles ifølge oppfinnelsen kan bestemmes ved bruk av i og for seg kjente konvensjonelle teknikker, f.eks. ved spektrofotometrisk analyse (måling av optisk densitet ved en gitt bølgelengde, f.eks. 415 mm) eller ved metoden ifølge D. L. Drabkin og J. H. Austin, J. Biological Chemistry, vol. 112, sidene 51-65 (1935 ).
Forbindelse med formel II kan f.eks. fremstilles som beskrevet i eksempel 1 i EP-patent 0.140.640.
Hemoglobinet referert til i foreliggende sammenheng kan oppnås fra et hvilket som helst passende dyr, f.eks. et dyr tilhørende kveg-gruppen, men er fortrinnsvis humant hemoglobin .
Industriell anvendbarhet
Forbindelsene fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse er nyttige idet de har oksygentransporterende evne. Således er forbindelsene nyttige som immobiliserte oksygenekstraksjons-midler, f.eks. i det system som er beskrevet i "US patent 4.343.715. Forbindelsene er også indikert for bruk i bloderstatnings- eller bloddrøyepreparater. Forbindelsene kan således benyttes for å tilveiebringe forbedret oksygenering av dårlig perfuserte vev. Slike dårlig perfuserte vev kan være til stede i kreftholdige vekster, i tilfeller av myokardialt infarkt eller i tilfeller av hjerneblødning. Forbindelsene kan også benyttes som bloderstatninger, f.eks. for ofrene etter ulykker eller vold; der blodtypebestemmelse og —tilpasning ikke er mulig eller ikke er mulig i den tid som er tilgjengelig; der pasienter står i fare for å ikke få, eller avslår, normal blodtransfusjon; for det formål å levere oksygen til vev eller organer som skal bevares; for prepa-rering før bruk av ekstrakorporlige sirkulasjonssystemer; eller for andre situasjoner hvor erytrocytter normalt er indikert.
Forbindelsen med formel I kan anvendes som et farmasøytikum, spesielt for behandling av dårlig oksygenerte vev.
Forbindelsene kan administreres i blanding med en farmasøy-tisk akseptabel eksipiens, fortynningsmiddel eller bærer, f. eks. som en vandig oppløsning, som kan være en buf ret, balansert saltoppløsning.
Generelt vil forbindelsene administreres ved bruk av typer av preparater, pakninger og former for administrasjon som er konvensjonelle for administrasjon av blodplasma-drøyemidler. Forbindelsene kan også frysetørkes, eventuelt med et kryobeskyttende middel, og senere rekonstitueres for bruk.
Mengden av forbindelsen som administres, vil variere med størrelsen av og tilstanden til pasienten, og den behandling som ønskes. I visse alvorlige tilfeller kan imidlertid vesentlig alt pasientens blod erstattes med et preparat inneholdende en forbindelse ifølge oppfinnelsen.
Forbindelsene med formel I er fordelaktige siden de er i besittelse av mer ønskede oksygenabsorpsjons- og —fri-gjøringsegenskaper og har en lenger holdbarhet, f.eks. er økninger i viskositet ved lagring redusert, enn lignende kjente fobindelser. Forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen er også fordelaktige idet de kan fremstilles på lett måte og i relativt høyt utbytte.
Forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen kan administres til pattedyr for å erstatte vertens hemoglobin. Det tilveie-bringes videre en forbindelse ifølge oppfinnelen for bruk som et farmasøytikum for erstatning av opptil 99 # v/v hemoglobin, fortrinnsvis opptil 98 # v/v, mer foretrukket opptil 96 v/v, og spesielt opptil 95 % v/v.
Oppfinnelsen er illustrert av følgende eksempler hvor temperaturer er i grader Celcius og viskositeter ble målt ved bruk av et Ostwald-viskometer ved 37°C.
Eksempel 1
Fremstilling av en forbindelse med formel I
a) Dannelse av en forbindelse med formel II
Følgende fremgangsmåte ble utført ved 0-4°. N-bromacetylaminoetylamino-dekstran-hemoglobin (Br-dxHb) ble fremstilt ved en inkubasjon over natten av N-bromacetylaminoetylamino-dekstran (Br-dx) (fremstilt ved fremgangsmåten i eksempel 1 i US patent 4.064.118) og hemoglobin (Hb) i 0,05 M natriumbikarbonat. 100 ml iskald 6 % vekt/vol (m.h.t. Hb) Br-dxHb i 0,05 M natriumbikarbonat (pH = 9,5) ble kombinert med 4,45 ml 2 M bis[2-hydroksyetyl]-imino-tris-[hydroksymetyl]metan (bis-Tris) (pH 7,5). Til denne blanding ble det tilsatt 0,5 g inositoltetrakisfosfatdialdehyd (FPA) i 68 ml 0,05 M natriumacetat (pH = 5,2). pH-verdien ble justert til 7,4 ved bruk av 0,1 N NaOH, 10 ml 0,5 M dimetylaminoboran ble tilsatt og blandingen inkubert i 2 timer ved 0° under omrøring. En 8 % vekt/vol vandig oppløsning ble fremstilt.
b) Behandling med 3- merkaptopropionsyre
Natriumbikarbonat ble deretter tilsatt til produktet fra
trinn a) ovenfor, til en sluttkonsentrasjon på 0,2 M og pH-verdien ble justert til 9,5 ved bruk av 0,1 N NaOH. 3-merkaptopropionsyre ble tilsatt til en sluttkonsentrasjon på 16 mM. Blandingen ble deretter dialysert mot 0,1 M tris-[hydroksymetyl]aminometanhydroklorid (Tric-Cl)-buffer (pH 8,5) inneholdende 1 M NaCl og deretter mot nyredialyse-buffer (pH 7,4). En 8 % vekt/vol vandig oppløsning ble fremstilt.
Innholdet av bromacetylaminoetylamino (BAEÅ)-gruppen i produktene fra eksemplene 1 a) og 1 b) ble målt ifølge metoden i eksempel 4.
Viskositetene til oppløsningene fremstilt ifølge eksemplene 1 a) og 1 b) ble målt ved intervaller. Resultatene er angitt i tabell I.
Eksempel 2
Fremgangsmåten i eksempel 1 b) ovenfor ble utført ved bruk av:
a) L-cystein
b) merkaptoetanol
istedenfor 3-merkaptopropionsyre. 8 % vekt/vol vandige opp-løsninger av produktene ble fremstilt.
BAEA-gruppeinnholdet i produktene ble målt ifølge metoden i eksempel 4.
Viskositetene til oppløsningene ble målt ved intervaller. Resultatene er angitt i tabell I.
Eksempel 3
a) en 6 % vekt/vol vandig oppløsning av produktet i eksempel 1 a) ble fremstilt. b) en 6 % vekt/vol vandig oppløsning av produktet i eksempel
1 b) ble fremstilt.
Vi skositetene til oppløsningene ble målt ved intervaller. Resultatene er angitt i tabell I.
Eksempel 4
BAEA- gruppeinnhold
BAEA-gruppeinnholdet i bloderstatningene fremstilt som beskrevet i eksemplene 1 og 2 ) og b) ovenfor ble målt ved hjelp av følgende metode.
Produktet i eksemplene 1 og 2 a) og b) ble inkubert i 0,1 N NaOH i 30 min. ved 100°. Blandingene ble deretter avkjølt på is, nøytralisert til pH 7,0 (ved bruk av 1 N eddiksyre), filtrert og analysert med henblikk på bromidinnhold ved bruk av ionekromatografi.
Eksempel 5
Oksygendissosiasjonskurvene til produktene i eksemplene 1 og 2 a) og b) ble bestemt ved bruk av metoden til Benesch, MacDuff og Benesch (1965), Anal. Biochem. 11 81-87 (men ved bruk av en temperatur på 24° og 0,05 M bis-Tris (pH 7,4) ). Resultatene er vist på fig. 1 hvor:
x-aksen er Log P0£ (partialtrykkfor O2 ),
y-aksen er prosent oksygenering,
1) forbindelse i eksempel 1 a)
2) forbindelse i eksempel 1 b)
3) forbindelse i eksempel 2 b)
4) forbindelse i eksempel 2 a)
Følgende Psø-verdier ved 24° ble bestemt fra fig. 1:
1) 10,3 mm Hg
2) 10,3 mm Hg
3) 8,7 mm Hg
4) 9,5 mm Hg
Claims (1)
- Analogifremgangsmåte for fremstilling av oksygentransporterende, vannoppløselige hemoglobinkomplekser som har formelen:hvor PS er en dekstran med molekylvekt på 200.000,X er engruppe, (Hem) er en gruppe Hb eller Hb-Z, hvorHb er en hemoglobinrest, ogZ er en oksygenaffinitetsreduserende ligand oppnådd fra inositoltetrakisfosfatdialdehyd,B er en blokkert, aktiverende gruppe, karakterisert ved at man omsetter en forbindelse med formelen: hvor X, Hem og PS har de ovenfor angitte betydninger, og A er en N-bromacetylaminoetylaminogruppe, med 3-merkaptopropionsyre, L-cystein eller 2-merkaptoetanol.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB878712240A GB8712240D0 (en) | 1987-05-23 | 1987-05-23 | Pharmaceutical formulation |
| PCT/GB1988/000399 WO1988009346A1 (en) | 1987-05-23 | 1988-05-23 | Haemoglobin complexes |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO890249D0 NO890249D0 (no) | 1989-01-19 |
| NO890249L NO890249L (no) | 1989-01-19 |
| NO173939B true NO173939B (no) | 1993-11-15 |
| NO173939C NO173939C (no) | 1994-02-23 |
Family
ID=10617836
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO890249A NO173939C (no) | 1987-05-23 | 1989-10-19 | Analogifremgangsmaate for fremstilling av oksygentransponderende hemoglobinkomplekser |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4900816A (no) |
| EP (1) | EP0314749B1 (no) |
| JP (1) | JP2716497B2 (no) |
| AU (1) | AU613921B2 (no) |
| DE (1) | DE3884744T2 (no) |
| FI (1) | FI94592C (no) |
| GB (1) | GB8712240D0 (no) |
| HK (1) | HK141895A (no) |
| NO (1) | NO173939C (no) |
| WO (1) | WO1988009346A1 (no) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK0519953T3 (da) * | 1990-03-14 | 1996-07-01 | Univ Toronto | Acylphosphatestere og modificering af proteiner dermed |
| US5248766A (en) * | 1990-08-17 | 1993-09-28 | Baxter International Inc. | Oxirane-modified hemoglobin based composition |
| US5981710A (en) * | 1997-07-21 | 1999-11-09 | Baxter International, Inc. | Therapeutic hemoglobin composition having isotropically increased size |
| US6018035A (en) * | 1997-07-21 | 2000-01-25 | Baxter International Inc. | Reagents for isotropic size enhancement of a peptide, protein, nucleotide or other substrate |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NO763384L (no) * | 1975-10-07 | 1977-04-13 | Imp Metal Ind Kynoch Ltd | |
| CA1055932A (en) * | 1975-10-22 | 1979-06-05 | Hematech Inc. | Blood substitute based on hemoglobin |
| DE3029307A1 (de) * | 1980-08-01 | 1982-03-04 | Dr. Eduard Fresenius, Chemisch-pharmazeutische Industrie KG, 6380 Bad Homburg | Haemoglobin enthaltendes blutersatzmittel |
| DE3144705C2 (de) * | 1981-11-11 | 1983-12-08 | Biotest-Serum-Institut Gmbh, 6000 Frankfurt | Verfahren zur Herstellung eines lagerstabilen, vernetzten Hämoglobinpräparates mit hoher Sauerstoff-Transportkapazität, sowie das nach diesem Verfahren hergestellte Hämoglobinpräparat |
| GB8328917D0 (en) * | 1983-10-28 | 1983-11-30 | Fisons Plc | Blood substitute |
-
1987
- 1987-05-23 GB GB878712240A patent/GB8712240D0/en active Pending
-
1988
- 1988-05-23 DE DE88904572T patent/DE3884744T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-05-23 AU AU17850/88A patent/AU613921B2/en not_active Expired
- 1988-05-23 JP JP63504191A patent/JP2716497B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1988-05-23 WO PCT/GB1988/000399 patent/WO1988009346A1/en active IP Right Grant
- 1988-05-23 EP EP88904572A patent/EP0314749B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-05-23 US US07/197,443 patent/US4900816A/en not_active Expired - Lifetime
-
1989
- 1989-01-20 FI FI890303A patent/FI94592C/fi not_active IP Right Cessation
- 1989-10-19 NO NO890249A patent/NO173939C/no not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-09-07 HK HK141895A patent/HK141895A/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3884744D1 (de) | 1993-11-11 |
| WO1988009346A1 (en) | 1988-12-01 |
| FI94592C (fi) | 1995-10-10 |
| US4900816A (en) | 1990-02-13 |
| NO890249D0 (no) | 1989-01-19 |
| HK141895A (en) | 1995-09-15 |
| JPH01503308A (ja) | 1989-11-09 |
| AU1785088A (en) | 1988-12-21 |
| EP0314749B1 (en) | 1993-10-06 |
| NO890249L (no) | 1989-01-19 |
| EP0314749A1 (en) | 1989-05-10 |
| FI890303A (fi) | 1989-01-20 |
| JP2716497B2 (ja) | 1998-02-18 |
| FI890303A0 (fi) | 1989-01-20 |
| FI94592B (fi) | 1995-06-30 |
| DE3884744T2 (de) | 1994-02-10 |
| GB8712240D0 (en) | 1987-07-01 |
| AU613921B2 (en) | 1991-08-15 |
| NO173939C (no) | 1994-02-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI74979B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av en vattenloeslig som blodsubstitut anvaendbar foerening. | |
| JPS63122629A (ja) | 代用血液 | |
| DE3877811T2 (de) | Pasteurisierbares, lyophilisierbares blutsurrogat auf haemoglobinbasis. | |
| JPS61215329A (ja) | 血液代用物および血漿増量剤として使用する製剤並びにその製造方法 | |
| US20040023851A1 (en) | Method for the porduction of artificial oxygen carriers from covalently cross linking haemoglobin with improved functional properties of haemoglobin by cross- linking in the presence of chemically non- reacting effectors of the oxygen affinity of the haemoglobin | |
| Wong | Conjugated Hemoglobin: Rightshifted Dextran-Hemoglobin as Blood Substitute | |
| US5387672A (en) | Hemoglobin intramolecularly cross-linked withlong chain divalent reagents | |
| WO2002044214A1 (en) | Methods for the synthesis of a modified hemoglobin solution | |
| NO173939B (no) | Analogifremgangsmaate for fremstilling av oksygentransporterende hemoglobinkomplekser | |
| US6956025B2 (en) | Mammalian haemoglobin compatible with blood plasma, cross-linked and conjugated with polyalkylene oxides as artificial medical oxygen carriers, production and use thereof | |
| US5998361A (en) | Polymerized hemoglobin | |
| EP1163010B1 (en) | Hemoglobin-antioxidant conjugates | |
| US5290919A (en) | Hemoglobin intramolecularly cross-linked with trivalent reagents | |
| US7307150B2 (en) | Dextran-hemoglobin conjugates as blood substitutes | |
| GB1576752A (en) | Haemoglobin preparation | |
| Cerny et al. | Acellular resuscitative compounds | |
| JPH03215499A (ja) | ヘモグロビン複合体 | |
| CA2422908A1 (en) | Dextran-hemoglobin conjugates as blood substitutes |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK1K | Patent expired |