NO166373B - Substratopploesning, utstyr og fremgagnsmaate for bestemmelse av gamma-glutamyltransferaseaktivitet. - Google Patents
Substratopploesning, utstyr og fremgagnsmaate for bestemmelse av gamma-glutamyltransferaseaktivitet. Download PDFInfo
- Publication number
- NO166373B NO166373B NO84841695A NO841695A NO166373B NO 166373 B NO166373 B NO 166373B NO 84841695 A NO84841695 A NO 84841695A NO 841695 A NO841695 A NO 841695A NO 166373 B NO166373 B NO 166373B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- substrate
- glutamyl
- group
- substrate solution
- nitroanilide
- Prior art date
Links
- 239000000758 substrate Substances 0.000 title claims description 60
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims description 10
- 108020004206 Gamma-glutamyltransferase Proteins 0.000 title claims description 8
- 102000006640 gamma-Glutamyltransferase Human genes 0.000 title claims description 8
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 claims description 23
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 claims description 14
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 9
- -1 alkyl polyols Chemical class 0.000 claims description 9
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 9
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 9
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 7
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 7
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 7
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 claims description 4
- 125000002642 gamma-glutamyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims description 2
- WMZTYIRRBCGARG-VIFPVBQESA-N (2s)-2-azaniumyl-5-(4-nitroanilino)-5-oxopentanoate Chemical class OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WMZTYIRRBCGARG-VIFPVBQESA-N 0.000 claims 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 31
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 13
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 5
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 4
- 229960004063 propylene glycol Drugs 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 2
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 229940113115 polyethylene glycol 200 Drugs 0.000 description 2
- 229940068886 polyethylene glycol 300 Drugs 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000010457 zeolite Substances 0.000 description 2
- DNIAPMSPPWPWGF-VKHMYHEASA-N (+)-propylene glycol Chemical compound C[C@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N (+/-)-1,3-Butanediol Chemical compound CC(O)CCO PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YPFDHNVEDLHUCE-UHFFFAOYSA-N 1,3-propanediol Substances OCCCO YPFDHNVEDLHUCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 4-[[(3ar,5ar,5br,7ar,9s,11ar,11br,13as)-5a,5b,8,8,11a-pentamethyl-3a-[(5-methylpyridine-3-carbonyl)amino]-2-oxo-1-propan-2-yl-4,5,6,7,7a,9,10,11,11b,12,13,13a-dodecahydro-3h-cyclopenta[a]chrysen-9-yl]oxy]-2,2-dimethyl-4-oxobutanoic acid Chemical compound N([C@@]12CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@H]5C(C)(C)[C@@H](OC(=O)CC(C)(C)C(O)=O)CC[C@]5(C)[C@H]4CC[C@@H]3C1=C(C(C2)=O)C(C)C)C(=O)C1=CN=CC(C)=C1 QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 0.000 description 1
- TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 4-nitroaniline Chemical compound NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IDIDJDIHTAOVLG-UHFFFAOYSA-N S-methyl-L-cysteine Natural products CSCC(N)C(O)=O IDIDJDIHTAOVLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IDIDJDIHTAOVLG-VKHMYHEASA-N S-methylcysteine Chemical compound CSC[C@H](N)C(O)=O IDIDJDIHTAOVLG-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229920002494 Zein Polymers 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000003544 deproteinization Effects 0.000 description 1
- HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N dioxosilane;oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical class O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940093476 ethylene glycol Drugs 0.000 description 1
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical class I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- UWJJYHHHVWZFEP-UHFFFAOYSA-N pentane-1,1-diol Chemical compound CCCCC(O)O UWJJYHHHVWZFEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000098 polyolefin Polymers 0.000 description 1
- 229920000166 polytrimethylene carbonate Polymers 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005019 zein Substances 0.000 description 1
- 229940093612 zein Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/48—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører substratoppløsning, utstyr og fremgangsmåte for bestemmelse av 7-glutamyltransferaseaktivitet.
■y-glutamyltransf erase [("Y-glutamyl )-peptid :-aminosyre 7-glutamyltransferase (EC 2.3.2.2)] oppdaget i 1950 av Hanes et al. (1, 2), katalyserer overføringen av ^-glutamylgruppen fra et -Y-glutamylpeptid til en aminosyre eller et annet peptid.
Selv om -y-glutamyltransf erase er vidt fordelt i menneskelige organer, er en økning i dens aktivitet i serum nesten spesi-fikt en indikator på sykdommer i den hapatobi1iære bane eller på hepatisk implikasjon i primærelementene (3-7).
For bestemmelse av -y-glutamyltransferaseaktivitet blir L-7-glutamyl-p-nitroanilin (8) i dag nesten ufravikelig benyttet som et substrat, fordi det tillater en direkte måling av reaksjonshastighet uten deproteinisering eller noen kjemisk behandling av spaltningsproduktet, p-nitroanalin. Nylig har et mer oppløselig derivat av L-^-glutamyl-p-nitroanilid, nemlig L-^-glutamyl-S-kaboksy-p-nitroanilid blitt beskrevet som et alternativt substrat i ~ i-glutamyltransf eraseanalysen (9).
Tidligere kjente oppløsninger av både L-7-glutamyl-3-karboksy-p-nitroanilid og L-^-glutamyl-p-nitroanilid er forbundet med stabilitets- og oppløselighetsproblemer i deres for tiden benyttede vandige omgivelser. Den relativt korte holdbarheten for vandige oppløsninger av både L-7-glutamyl-3-karboksy-p-nitroanilid og L-^-glutamyl-p-nitroanilid har f.eks. nødvendiggjort frysetørking derav for å forlenge disse produkters lagringstid. For å rekonstituere det frysetørkede produkt er det nødvendig at man anbringer det i vann og opp-varmer den resulterende blanding til ca. 50°C. Dette re-konstitueringstrinn er tidkrevende, forårsaker store variasjoner i den resulterende reagens samt et tap av substrat. I tillegg skaper selve frysetørkingsmetoden store variasjoner fra sats til sats. Det ville følgelig være meget fordelaktig å utvikle en ny substratoppløsning for bruk i analysen av -y-glutamyltransferase hvor en slik substratoppløsning omfatter et substrat oppløst i en matrise slik at den resulterende substratoppløsningen er i besittelse av forøket stabilitet og overkommer oppløselighetsproblemene som foreligger i den tidligere teknikk.
Ifølge foreliggende oppfinnelse er det tilveiebragt en stabilitet av substratoppløsning for bruk i en analyse av 7-glutamyltransferase, og mer spesielt er det tilveiebragt en vesentlig vannfri substratoppløsning, som er kjennetegnet ved at den innbefatter: (a) et substrat valgt fra gruppen bestående av salter av
L-^-glutamyl-p-nitroanilid; og
(b) en polyol valgt fra gruppen bestående av alkylpolyoler inneholdende 2-10 karbonatomer og 2-10 hydroksygrupper og polyetylenglykol med en gjennomsnittlig molekylvekt på 200-600 i en mengde som er tilstrekkelig til å oppløseliggjøre og stabilisere substratet.
Videre tilveiebringer oppfinnelsen et utstyr for bestemmelse av "v-glutamyltransferaseaktivitet innbefattende: (a) et bufret medium omfattende en buffer og en -y-glutamylrestakseptor, og
,(b) en substratoppløsning,
kjennetegnet ved at forvalgte aliquoter av substratoppløsningen kan reagere i nærvær av -y-glutamyltransf erase til dannelse av et absorberende spaltningsprodukt, og at substratoppløsningen er vesentlig vannfri og innbefatter bestanddelene som angitt ovenfor i (a) og (b).
Dessuten tilveiebringer oppfinnelsen en fremgangsmåte for bestemmelse av "y-glutamyltransferaseaktivitet hvor: (a) en aliquot av et bufret medium omfattende en buffer og en ■y-glutamylrestakseptor, en aliquot av en substratoppløsning, og en aliqiuot av en prøve som skal analyseres, bringes i kontakt for derved å danne et spaltingsprodukt, og
(b) absorbansen til spaltningsproduktet måles,
og denne fremgangsmåten er kjennetegnet ved at det anvendes en substratoppløsning som i det vesentlige er vannfri, og innbefatter bestanddelene (a) og (b) ovenfor.
Nevnte anbringelse i kontakt av nevnte aliquoter kan foretas i en hvilken som helst på forhånd valgt rekkefølge.
Den nye substratoppløsningen ifølge foreliggende oppfinnelse innbefatter som nevnt et substrat og en polyol. Praktisk talt et hvilket som helst salt av L-^-glutamyl-p-nitroanilid kan benyttes som substrat i foreliggende oppfinnelse. Substratet velges fortrinnsvis fra gruppen bestående av L-7-glutamyl-p-nitroanilidhydrohalogenider. Mer foretrukket velges substratet fra gruppen bestående av hydroklorid-, hydrobromid- og hydroiodidsaltene av L-7-glutamyl-p-nitro-anilid. L-7-glutamyl-p-nitroanilidhydrokloridsaltet er det foretrukne substrat.
Substratoppløsningen ifølge foreliggende oppfinnelse kan om-fatte fra 25-250 mmol/1 substrat. Foreliggende preparat omfatter fortrinnsvis 40-100 mmol/1 substrat. Optimalt omfatter preparatet ca. 50 mmol/1 substrat.
Den polyol som benyttes i substratoppløsningen ifølge foreliggende oppfinnelse, er valgt fra en gruppe bestående av alkylpolyoler inneholdende 2-10 karbonatomer og 2-10 hydroksygrupper og polyetylenglykol som har en gjennomsnittlig molekylvekt fra 200 til 600. Polyolen velges fortrinnsvis fra gruppen bestående av alkylpolyoler inneholdende 2-5 karbonatomer og 2-4 hydroksylgrupper og polyetylenglykol som har en gjennomsnittlig molekylvekt fra 200 til 400. Mer foretrukket velges polyolefinen fra gruppen bestående av glycerol, etylenglykol, propylenglykol, 1,3-propandiol, butylenglykol, pentandiol, polyetylenglykol 200, og polyetylenglykol 300. Etylenglykol, propylenglykol, polyetylenglykol 200 og polyetylenglykol 300 er de foretrukne polyoler for bruk i substratoppløsningen ifølge foreliggende oppfinnelse.
Substratoppløsningen ifølge foreliggende oppfinnelse er fortrinnsvis et vannfritt system. Et vanninnhold på ikke større enn 10%, fortrinnsvis ikke større enn 5$, v/v er imidlertid akseptabelt. Substratoppløsningen ifølge foreliggende oppfinnelse omfatter følgelig eventuelt ytterligere opp til 20$ v/v av et inert hydroskopisk fast stoff. Mer foretrukket omfatter substratoppløsningen ifølge foreliggende oppfinnelse ytterligere opp til 5$ v/v av det inerte hydroskopiske faste stoff. Virkningen til det eventuelle inerte hydroskopiske faste stoff er å oppnå den foretrukne vannfrie utførelse av substratoppløsningen ifølge foreliggende oppfinnelse. Det hydroskopiske faste stoff må være inert, et effektivt vann-absorberende middel og av nøytral eller alkalisk pH. Det faste stoff er fortrinnsvis et hydroskopisk middel med stort areal slik som en naturlig eller syntetisk molekylarsikt med en partikkelstørrelse fra 2 til 26 mesh. Omfanget av over-flatearealet er viktig fordi materialet virket slik at det absorberer vann i porene.
Molekylarsikter er zeolitter hvis atomer er anordnet i et krystallgitter på en slik måte at det er et stort antall av små hulrom innbyrdes forbundet med mindre åpninger eller porer av nøyaktig ensartet størrelse. Normalt inneholder disse hulrom vannmolekyler, men ved oppvarming under vakuum blir dette vannet avdrevet uten noen forandring i det reste-rende krystallgitter. Nettverket av hulrom og porer kan oppta 50$ av krystallenes totale volum. Molekylarsikter har en sterk tendens til å reabsorbere vann og andre væsker med liten molekylvekt.
Noen naturlige zeolitter viser molekylarsiktegenskaper i be-grenset grad. Syntetiske zeolitter er tilgjengelige i flere størrelser (poreåpninger med diameter 3, 4 og 10 Ångstrøm-enheter) med høy kapasitet for absorpsjon og regenerering selv når de benyttes ved forhøyede temperaturer.
Generelt kan substratoppløsningen ifølge foreliggende oppfinnelse fremstilles ved oppløsning av et hydrohalogenidsalt av L-^-glutamyl-p-nitroanilid i en polyol, fortrinnsvis en vannfri polyol, ved romtemperatur.
En alternativ fremgangsmåte for fremstilling av substrat-oppløsningen er å tilsette L-^-glutamyl-p-nitroanilid fri base til polyolen fulgt av tilsetning av en hydrohalogenid-syre i vandig oppløsning (for dannelse av et hydrohalogenidsalt in situ). Dersom man ønsker en vannfri substratoppløs-ning, ville denne fremgangsmåte kreve tilsetning av en molekylarsikt for å fjerne det tilsatte vann.
Den foretrukne teknikk for fremstilling av substratoppløsningen ifølge foreliggende oppfinnelse medfører tilsetning av L--v-glutamyl-p-nitroanilidhydroklorid til vannfri propylenglykol ved romtemperatur under konstant blanding for opp-nåelse av den ønskede oppløsning.
Buffere som kan benyttes i bufringsmediet i utstyret ifølge foreliggende oppfinnelse, innbefatter tris(hydroksymetyl)-aminometan og en hvilken som helst annen buffer som kan opp-rettholde den ønskede pH-verdi, fortrinnsvis ca. 8,1 ± 0,2, og som ikke forstyrrer gjenvinningen av "y-glutamyltransferaseaktivitet. Den foretrukne buffer er tris-(hydroksymetyl)aminometan.
Egnede -Y-glutamylrest-akseptorer innbefatter glycidin og S-metyl-L-cystein. Den foretrukne 'y-glutamylrest-akseptor er glyciglycin.
En arbeidsreagens kan fremstilles ved blanding av en aliquot av substratoppløsningen med en aliquot av det bufrede medium. Arbeidsreagensen fremstilles fortrinnsvis ved tilsetning av ca. 1 del av substratoppløsningen til ca. 10 deler av det bufrede medium og blanding av den resulterende oppløsningen.
Substratoppløsningen og det bufrede medium bør formuleres slik at etter blanding av en aliquot av substratoppløsningen med en aliquot av det bufrede medium i et forhold på fra 1:5 til 1:50 for dannelse av arbeidsreagensen, så er konsentra-sjonen av substratet i arbeidsreagensen fra 1 til 10 mmol/1.
Selv om forholdet for prøve til totalt volum kan variere, er et forhold på 1:21 blitt funnet meget tilfredsstillende.
Følgende eksempler er tilveiebragt for ytterligere å illu-strere oppfinnelsen.
Eksempel 1
Et foretrukket "Y-glutamyltransferasereagens-utstyr har føl-gende formulering:
Bestanddeler
Substratoppløsning Propylenglycol, Forskjellige kontroll- og pasientsera-prøver ble analysert i en hurtig sentrifugalanalysator i et korrelasjonsstudium ved anvendelse av det optimale -Y-glutamyltransf erasereagens-utstyr i eksempel 1 og et kommersielt tilgjengelig 7-glutamyltransferasereagens-utstyr, og de derfra oppnådde resultater er angitt i tabell T.
Dataene angitt i tabell I gir en korrelasjon på Y = 0,993 X 0,5 IU/L og en korrelasjonskoeffisient (r) på 0,999. Disse data indikerer følgelig at resultatene oppnådd via en 7-glutamyltransferasereagens innen oppfinnelsens ramme korrele-rer godt med den oppnådd med et kommersielt tilgjengelig utstyr.
Eksempel 3
Stabil itetsstudium
En frisk reagens innen foreliggende oppfinnelses ramme og med en formulering som angitt i "optimal"-kolonnen I eksempel I, ble benyttet for å fastsette et parti avgjørelse TM-kontrol-ler og en "in-house"-serie av linearitetskontrollmaterialer. Disse verdifastsettelser er angitt i tabell II.
Den friske reagensen ble deretter pakket og inkubert ved 41°C i 2 dager for å tilveiebringe en tilnærmelse av ett års lagring ved 5°C.
Etter den andre dagen ved 41°C ble reagensen oppdelt i to sett. Ett sett ble deretter lagret ved en inkubasjonstemperatur på 30°C, og det andre settet ble så lagret ved en inkubasjonstemperatur på 37°C. Det ble periodisk tatt aliquoter fra begge settene, og disse aliquoter ble benyttet i en 'y-glutamyltransf eraseanalyse. De oppnådde resultater er også angitt i tabell II. Dataene angitt i tabell II indikerer den gode stabiliteten til gamma-glutamyltransferasereagensene ifølge foreliggende oppfinnelse.
Litteraturfortegnelse
1. Hanes et al., Nature, 166:288-299 (1950).
2. Hanes et al., Biocbem. J., 51:25-35 ( 1952).
3. Kokot et al., Z. Gesamte Inn. Med. Ihre Grenzgeb, 18:851-856 (1963).
4. Rutenburg et al.j Gastroenterology, 45:43-48 (1963).
5. Zein, Lancet, ii:748-750 (1970).
6. Mayr, Wien. Klin. Wochenschr., 85:83-87 (1973).
7. Schmidt et al., Dtsch. Med. Wochenschr., 98:1572-1578
( 1973) . 8. Orlowski et al., Biochim. Biophys. Acta, 73:679-681
(1963) .
9. Persijn et al.j LAB., 3:108 (1976). Abstract.
Claims (6)
1. Vesentlig vannfri substratoppløsning, karakterisert ved at den innbefatter: (a) et substrat valgt fra gruppen bestående av salter av L-^-glutamyl-p-nitroanilid; og (b) en polyol valgt fra gruppen bestående av alkylpolyoler inneholdende 2-10 karbonatomer og 2-10 hydroksygrupper og polyetylenglykol med en gjennomsnittlig molekylvekt på 200-600 i en mengde som er tilstrekkelig til å oppløseliggjøre og stabilisere substratet.
2. Substratoppløsning ifølge krav 1, karakterisert ved at (a) substratet er valgt fra gruppen bestående av L-^-glutamyl-p-nitroanilidhydrohalogenidsalter, og at (b) polyolen er valgt fra gruppen bestående av alkylpolyoler inneholdende 2-5 karbonatomer, og 2-4 hydroksylgrupper, og polyetylenglykol med en gjennomsnittlig molekylvekt på 200-400.
3. Utstyr for bestemmelse av "Y-glutamyltransferaseaktivitet innbefattende: (a) et bufret medium omfattende en buffer og en ~)-glutamylrestakseptor, og (b) en substratoppløsning,
karakterisert ved at forvalgte aliquoter av substratoppløsningen kan reagere i nærvær av 7-glutamyl-transferase til dannelse av et absorberende spaltnings
produkt, og at substratoppløsningen er vesentlig vannfri og Innbefatter: (a) et substrat valgt fra gruppen bestående av salter av L-^-glutamyl-p-nitroanilid, og (b) en polyol valgt fra gruppen bestående av alkylpolyoler inneholdende 2-10 karbonatomer og 2-10 hydroksygrupper, og polyetylenglykol med en gjennomsnittlig molekylvekt på 200-600 i en mengde som er tilstrekkelig til å oppløseliggjøre og stabilsere substratet.
4. Utstyr ifølge krav 3, karakterisert ved at (a) substratet er valgt fra gruppen bestående av L-^-glutamyl-p-nitroanilidhydrohalogenidsalter, og at (b) polyolen er valgt fra gruppen bestående av alkylpolyoler inneholdende 2-5 karbonatomer og 2-4 hydroksylgrupper, og polyetylenglykol med en gjennomsnittlig molekylvekt på 200-400.
5. Fremgangsmåte for bestemmelse av •y-glutamyltransf eraseaktivitet hvor: (a) en aliquot av et bufret medium omfattende en buffer og en -y-glutamylrestakseptor, en aliquot av en substratoppløsning, og en aliqiuot av en prøve som skal analyseres, bringes i kontakt for derved å danne et spaltingsprodukt, og (b) absorbansen til spaltningsproduktet måles, karakterisert ved at det anvendes en substratoppløsning som i det vesentlige er vannfri og innbefatter: (a) et substrat valgt fra gruppen bestående av L-"y-glutamyl-p-nitroanilidsalter, og (b) en polyol valgt fra gruppen bestående av alkylpolyoler inneholdende 2-10 karbonatomer og 2-10 hydroksygrupper, og polyetylenglykol med en gjennomsnittlig molekylvekt på 200-600 i en mengde som er tilstrekkelig til å oppløseliggjøre og stabilisere substratet.
6. Fremgangsmåte ifølge krav 5, karakterisert ved at det anvendes (a) et substrat valgt fra gruppen bestående av L-*y-glutamyl-p-nitroanilidhydrohalogenidsalter; og (b) en polyol valgt fra gruppen bestående av alkylpolyoler inneholdende 2-5 karbonatomer og 2-4 hydroksylgrupper, og polyetylenglykol med en gjennomsnittlig molekylvekt på 200-400.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US41304282A | 1982-08-30 | 1982-08-30 | |
| PCT/US1983/001299 WO1984000978A1 (en) | 1982-08-30 | 1983-08-25 | METHOD FOR DETERMINING gamma-GLUTAMYLTRANSFERASE ACTIVITY AND KITS CONTAINING A NOVEL SUBSTRATE SOLUTION FOR USE THEREIN |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO841695L NO841695L (no) | 1984-04-27 |
| NO166373B true NO166373B (no) | 1991-04-02 |
| NO166373C NO166373C (no) | 1991-07-10 |
Family
ID=23635572
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO84841695A NO166373C (no) | 1982-08-30 | 1984-04-27 | Substratopploesning, utstyr og fremgagnsmaate for bestemmelse av gamma-glutamyltransferaseaktivitet. |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0118534B1 (no) |
| JP (1) | JPS59501535A (no) |
| DE (1) | DE3370821D1 (no) |
| DK (1) | DK215984D0 (no) |
| NO (1) | NO166373C (no) |
| WO (1) | WO1984000978A1 (no) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4916059A (en) * | 1985-06-20 | 1990-04-10 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Reagent sheet and integral multilayer analytical element for measurement of GGT activity |
| CN113045446A (zh) * | 2021-03-29 | 2021-06-29 | 合肥金锦生物科技有限公司 | 一种转肽酶生化检验试剂底物的制备方法 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AT308050B (de) * | 1970-08-28 | 1973-06-25 | Boehringer Mannheim Gmbh | Reagens zur Bestimmung der γ-Glutamyltranspeptidase |
| US3892631A (en) * | 1972-08-21 | 1975-07-01 | Warner Lambert Co | Diagnostic reagents used for the determination of gamma-glutamyl transpeptidase in biological fluids |
| US3986931A (en) * | 1972-12-05 | 1976-10-19 | Boehringer Mannheim G.M.B.H. | γ-GLUTAMYL-4-NITROANILIDE COMPOUNDS AND THEIR USE IN DETERMINING γ-GLUTAMYL TRANSPEPTIDASE |
| US4310624A (en) * | 1977-02-02 | 1982-01-12 | Modrovich Ivan Endre | Stabilized liquid coenzyme compositions for diagnostic determinations |
| CA1091174A (en) * | 1976-03-17 | 1980-12-09 | Ivan E. Modrovich | Stabilized liquid enzyme |
| US4310625A (en) * | 1976-03-17 | 1982-01-12 | Modrovich Ivan Endre | Stabilized liquid enzyme compositions for diagnostic determinations |
| US4153511A (en) * | 1976-03-17 | 1979-05-08 | Modrovich Ivan Endre | Stabilized liquid coenzyme compositions |
| CA1132034A (en) * | 1978-06-26 | 1982-09-21 | Ivan E. Modrovich | Stabilization of hydrolysis prone labile organic reagents in liquid media |
| JPS5526870A (en) * | 1978-08-17 | 1980-02-26 | Wako Pure Chem Ind Ltd | Method of measuring activity of gamma-glutamyl transpeptidase |
| DE2917999A1 (de) * | 1979-05-04 | 1980-11-13 | Behringwerke Ag | Substrat zur bestimmung der gama -glutamyltranspeptidase |
| JPS5614657A (en) * | 1979-07-11 | 1981-02-12 | Japanese National Railways<Jnr> | Lubricant liquid feed system for reduction gear for railway train |
-
1983
- 1983-08-25 WO PCT/US1983/001299 patent/WO1984000978A1/en active IP Right Grant
- 1983-08-25 EP EP83902968A patent/EP0118534B1/en not_active Expired
- 1983-08-25 JP JP83503042A patent/JPS59501535A/ja active Pending
- 1983-08-25 DE DE8383902968T patent/DE3370821D1/de not_active Expired
-
1984
- 1984-04-27 NO NO84841695A patent/NO166373C/no unknown
- 1984-04-30 DK DK2159/84A patent/DK215984D0/da not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO841695L (no) | 1984-04-27 |
| DK215984A (da) | 1984-04-30 |
| WO1984000978A1 (en) | 1984-03-15 |
| EP0118534A1 (en) | 1984-09-19 |
| DE3370821D1 (en) | 1987-05-14 |
| JPS59501535A (ja) | 1984-08-30 |
| EP0118534B1 (en) | 1987-04-08 |
| DK215984D0 (da) | 1984-04-30 |
| NO166373C (no) | 1991-07-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA2634654C (en) | Reagent compositions for analytical testing | |
| USRE37872E1 (en) | Storage of materials | |
| Tamiya et al. | Freeze denaturation of enzymes and its prevention with additives | |
| AU2019283839A1 (en) | Customized quality controls for analytical assays | |
| CN114729949A (zh) | 凝血酶溶液、试剂盒、凝血酶的稳定化方法、检测试剂、凝血酶时间的测定方法以及消泡剂的用途 | |
| US5250429A (en) | Glassified restriction enzymes | |
| EP0596218B1 (en) | Formulation for stabilizing enzymatic activity and immuno-reactivity of creatine kinase and creatine kinase isoenzymes | |
| Chapman et al. | The coagulation of plasma by staphylococci | |
| NO166373B (no) | Substratopploesning, utstyr og fremgagnsmaate for bestemmelse av gamma-glutamyltransferaseaktivitet. | |
| US4567138A (en) | Method for determining γ-glutamyltransferase activity and kits containing a novel substrate solution for use therein | |
| NO871501L (no) | Fremgangsmaate for paavisning og telling av sulfatreduserende bakterier. | |
| McNeil et al. | Similarity of ribulose-1, 5-bisphosphate carboxylases of isogenic diploid and tetraploid ryegrass (Lolium perenne L.) cultivars | |
| McGANN et al. | Purification and characterization of a mutant tRNA nucleotidyltransferase | |
| EP0719345B1 (en) | Reagent for enzymatic determination of serum bicarbonate levels | |
| NO760768L (no) | ||
| CA1205364A (en) | Time-stable liquid cholesterol assay compositions | |
| US20040132207A1 (en) | Method for stabilizing blood, serum, or plasma specimen and container containing pH buffer agent | |
| Wu et al. | K+ stimulation of ATPase activity associated with the chloroplast inner envelope | |
| CN112557665B (zh) | 一种狼疮抗凝物的确认试剂及其制备方法 | |
| US6579707B2 (en) | Stabilization of enzymes during freezing | |
| CA1132034A (en) | Stabilization of hydrolysis prone labile organic reagents in liquid media | |
| Dracup et al. | Determination of free space, growth, solute concentrations and parameters of water relations of suspension‐cultured tobacco cells | |
| NO842259L (no) | Stabilisert produkt for multiparameterregulering | |
| JPWO2010101206A1 (ja) | 管理試料の安定化剤、当該安定化剤を含有する管理試料、及び、当該管理試料を含む測定用キット | |
| Hederstedt | Studies of the Treponema pallidum immobilizing activity in normal human serum. I. A method |