NO142961B - Steroidbindende globulin til anvendelse ved in vitro-diagnostikk og ved fremstilling av antisera - Google Patents
Steroidbindende globulin til anvendelse ved in vitro-diagnostikk og ved fremstilling av antisera Download PDFInfo
- Publication number
- NO142961B NO142961B NO743852A NO743852A NO142961B NO 142961 B NO142961 B NO 142961B NO 743852 A NO743852 A NO 743852A NO 743852 A NO743852 A NO 743852A NO 142961 B NO142961 B NO 142961B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- steroid
- globulin
- binding
- neuraminic acid
- antisera
- Prior art date
Links
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 title claims description 59
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 title claims description 19
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 title claims description 19
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 23
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 23
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 claims description 18
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 claims description 18
- CERZMXAJYMMUDR-QBTAGHCHSA-N 5-amino-3,5-dideoxy-D-glycero-D-galacto-non-2-ulopyranosonic acid Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)CC(O)(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO CERZMXAJYMMUDR-QBTAGHCHSA-N 0.000 claims description 14
- CERZMXAJYMMUDR-UHFFFAOYSA-N neuraminic acid Natural products NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO CERZMXAJYMMUDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 claims description 8
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 claims description 7
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 claims description 6
- SQVRNKJHWKZAKO-PFQGKNLYSA-N N-acetyl-beta-neuraminic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-PFQGKNLYSA-N 0.000 claims description 5
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 5
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 2-Amino-2-Deoxy-Hexose Chemical compound NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 claims description 4
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 claims description 4
- OVRNDRQMDRJTHS-BKJPEWSUSA-N N-acetyl-D-hexosamine Chemical compound CC(=O)NC1C(O)O[C@H](CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-BKJPEWSUSA-N 0.000 claims description 4
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 150000002402 hexoses Chemical class 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 4
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 3
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 claims description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 20
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 14
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 14
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 8
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 8
- -1 diaminoethyl Chemical group 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 6
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 6
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 6
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 6
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 6
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 6
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 5
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 4
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 4
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 4
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 229940118696 vibrio cholerae Drugs 0.000 description 4
- VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 17β-estradiol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 3
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 150000001251 acridines Chemical class 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 3
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 description 3
- 229930182833 estradiol Natural products 0.000 description 3
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 3
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 3
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VRQURTHVUQBIMS-UHFFFAOYSA-N 2-acridin-1-yloxyethane-1,1-diamine;2-hydroxypropanoic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O.C1=CC=C2C=C3C(OCC(N)N)=CC=CC3=NC2=C1 VRQURTHVUQBIMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 5,5-diethylbarbituric acid Chemical compound CCC1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000006734 Beta-Globulins Human genes 0.000 description 2
- 108010087504 Beta-Globulins Proteins 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 229960002319 barbital Drugs 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000007693 zone electrophoresis Methods 0.000 description 2
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000013 Ammonium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000193468 Clostridium perfringens Species 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920006385 Geon Polymers 0.000 description 1
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010029719 Nonspecific reaction Diseases 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 1
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000012817 gel-diffusion technique Methods 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 102000035118 modified proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005573 modified proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 238000011403 purification operation Methods 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4717—Plasma globulins, lactoglobulin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/909—Vibrio
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/811—Test for named disease, body condition or organ function
- Y10S436/814—Pregnancy
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/815—Test for named compound or class of compounds
- Y10S436/817—Steroids or hormones
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/85—Reproductive organs or embryos
- Y10S530/851—Placenta; amniotic fluid
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Description
Oppfinnelsen vedrører et steroid-bindende globulin til anvendelse ved in vitro-diagnostikk og ved fremstilling av antisera.
Med steroid-bindende globulin menes steroid-bindende 3-globulin som spesielt binder steroidhormonene testosteron og østradiol med stor affinitet.
Oppfinnelsen vedrører videre anvendelsen av det steroidbindende globulin til utvinning av antisera.
Det er kjent at blant de som 3-globuliner betegnede plasmaproteiner forekommer et eggehvitestoff, som har en spesiell affinitet til steroidhormoner og derfor be-tegnes som steroidbindende B-globulin resp. testosteron-bindende globulin. Det er allerede foreslått å isolere dette , også som (E^AP-glykoprotein betegnede protein, fra placentaer eller fra blod av svangre. (Norsk alm. tilgj. søknad 1758-73 og BRD (DE)Off.Schr. 2221261). Det er imidlertid hittil ikke lykkes å fremstille dette [3-globulin i ren form. Det har spesielt den ulempe at ved utvinning av antiserum som er rettet mot dette protein, fører forurens-ningene også, selvom de forekommer i små konsentrasjoner,
til dannelse av antistoffer i de immuniserte.dyr og betinger derved uspesifikke reaksjoner av antiseret.
Det er nå funnet et derivat av det steroid-bindende 3-globulin som oppstår ved behandling av dette stoff med enzymet Neuraminidase, og som kan fremstilles i meget ren form. Dette derivat er et testosteron- eller østradiol-bindende globulin og blir i det følgende kalt "steroidbindende globulin" og tilsvarer i sine biologiske egenskaper sterkt det opprinnelige steroidbindende 3-globulin, spesielt utvinnes det fra dermed immuniserte dyr et antiserum av høy spesifitet.
Fra norsk søknad nr. 3482-72 er det kjent et glykoprotein for anvendelse til utvinning av antisera.
Det dreier seg her om et 3~l_glykoprotein som likeledes finnes i blodserum, men imidlertid adskiller seg med dets egenskaper fra det steroidbindende globulin ifølge oppfinnelsen. Det kjente produkt har et kullhydratinnhold på 27-30%, mens produktet ifølge oppfinnelsen har et innhold på 10 resp. 12%, mens molekylvekten i det kjente produkt ligger ved ca. 100.000, ligger molekylvekten ved produktet ifølge oppfinnelsen ved 56.000 og innholdet av neuraminsyre er ved det kjente produkt 7,0-8,0%, mens ved produktet ifølge søknaden er neuraminsyreinnholdet 0,5 resp. 2,9%.
Oppfinnelsens gjenstand er følgelig et steroid-bindende globulin til anvendelse ved in vitro-diagnostikk og ved fremstilling av antisera, idet globulinet er karakterisert ved at det a) har en spesiell affinitet til steroidhormoner, b) har et innhold av kullhydrater på 10,4 - 2,6%, herav 5,8 - 1,2% heksoser, 4,0 - 0,8% heksosamin,
beregnet som N-acetylheksosamin, 0,5 - 0,5% neuraminsyre, beregnet som N-acetyl-neuraminsyre
og 0,1 - 0,1% fukose,
c) kan utfelles med antisera rettet mot steroid-bindende (3-globulin, d) har en elektroforetisk bevegelighet tilsvarende gammaglobulinet, e) har en sedimentasjonskonstant på 4,1 1,0 S, målt i fosfatpuffer ved pH 6,8, f> har en sedimentasjonskonstant på 1,1 0,3 S målt i 1%-ig natriumdodecylsulfatoppløsning og g) har en molekylvekt på 65.000 - 5.000, idet det er fremstilt ved at et steroid-bindende 3-globulin med følgende egenskaper:
a) en spesiell affiniet til steroidhormoner,
b) et innhold av kullhydrater på 12,5 - 3%, herav 5,7 1,2% heksoser, 3,9 - 0,8% heksosamin, beregnet som N-acetyl-heksosamin, 2,9 - 0,9% neuraminsyre, beregnet som N-acetyl-neuraminsyre og 0,1 - 0,1% fukose,
c) utfellbarhet med spesifikke antisera,
d) en elektroforetisk bevegelighet tilsvarende 3-^-globuliner, e) en sedimentasjonskonstant på 4,1 - 1,0 S, målt i fosfatpuffer ved pH 6,8, f) en sedimentasjonskonstant på 1,1 0,3 S målt i 1%-ig natriumdodecylsulfatoppløsning og
g) en molekylvekt på 65.000 - 5.000,
behandles med neuraminidase inntil neuraminsyreinnholdet i
proteinet er nedsatt til 0,5 - 0,5%, og deretter fremstilles i ren form i et rensetrinn fortrinnsvis ved ione-utvekslingskromatografi eller elektroforese.
Oppfinnelsen vedrører også anvendelsen av
dette steroidbindende globulin til utvinning av antisera.
Det steroidbindende globulin kan fremstilles
ved at man fra kroppsvæske eller vevsekstrakter som inneholder dette protein i målbare konsentrasjoner, eksempelvis fra menneskelige sera, fortrinnsvis fra blod fra svangre, retroplasentaserum eller plasentaekstrakter isolerer steroidbindende 3-globulin, deretter behandler med neuraminidase og i et avsluttende rensetrinn fremstilles det i ren form, fortrinnsvis ved kromatografi på en ioneutveksler eller ved en tilsvarende forholdsregel, f.eks. en elektroforese .
Isoleringen av det steroid-bindende p-globulin foregår ved en utvalgt kombinasjon av metoder, som på den ene side fører til anrikning av det steroid-bindende |3-globulin, på den annen side til adskillelse av dette protein fra de øvrige plasmaproteiner. I det følgende skal det eksempelvis påvises de muligheter som er tilstede for å opp-nå ett for fremstilling av derivatet av steroid-bindende 3-globulin egnet utgangsmateriale.
Til dette formål ekstraheres knuste placentaer med vann eller en fortynnet saltoppløsning, fortrinnsvis med ca. 0,5%-ig kokesaltoppløsning. Fra ekstraktet utvinnes ved tilsetning av en vandig oppløsning av et vannoppløselig derivat av en akridinbase, fortrinnsvis diaminoetoksyakrin-dinlaktat, som tilsettes inntil en konsentrasjon på 0,25 til 0,55, fortrinnsvis på 0,4% av oppløsningen, til svakt surt til nøytralt pH i området fra pH 5 til pH 7, fortrinnsvis ved pH 6, en forutfelling som ikke inneholder det ønskede protein eller bare i spor.
Deretter utfelles i alkalisk pH-område på pH 7 til pH 9, fortrinnsvis pH 8,5 fra det ovenstående fra første utfelling det steroid-bindende (3-globulin ved tilsetning av en vandig oppløsning av et vannoppløselig derivat av en akridinbase, fortrinnsvis igjen med diaminoetoksy-akridinlaktat, som tilsettes inntil en konsentrasjon på
0,55 til 1,1%, fortrinnsvis på 0,9% av oppløsningen. Utfellingen bringes etter dets suspensjon i vann og etter-følgende nedsettelse av pH-verdi ved hjelp av svake syrer i oppløsning og befris ved tilsetning av egnede adsorbsjons-midler, f.eks. aktivkull, for utfellingsmidlet og fraskilles ved sentrifugering. Spesielt enkelt foregår fraskillelsen av utfellingsmidlet fra proteinet ved oppslemming av utfellingen i en kloridholdig vandig oppløsning, fordelaktig i en ca. 5%-ig kokesaltoppløsning, hvorved utfellingsmidlet utfelles og deretter fjernes ved filtrering eller sentrifugering, mens proteinene går i oppløsning. For ytterligere anrikning av det steroid-bindende (3-globulin gjennomføres en utfelling med egnede salter, fortrinnsvis med ammoniumsulfat, således at saltets konsentrasjon fortrenger det steroid-bindende globulin fra oppløsningen. Hertil er det kjent at globulinet utfelles av ammoniumsulfat ved dets metningskonsentrasjon på ca. 50%. Etter gjenoppløsning av den ved sentrifugering eller filtrering utvundne utfelling tilsettes til oppløsningen en lavere alkohol, fortrinnsvis etanol, til en konsentrasjon, hvor det steroidbindende 3-globulin ennu ikke faller ut, en rekke av forurensninger kan imidlertid utskilles som utfelling. Det har vist seg hen-siktsmessig å tilsette ca. 25% etanol, idet etanolens tilsetning for unngåelse av denatureringsforeteelser foregår under værelsestemperatur, fortrinnsvis ved en temperatur rundt 0 - 4°C. Ved fraksjoneringsmetoder som er istand til å anrike proteiner med molekylvekter mellom 50.000 og 150.000 i definert områder, kan det steroidbindende 3-globuli.n videre-renses. Spesielt egnet hertil er gelfiltrering, eksempelvis
søylekromatografitrinn under anvendelse av med epiklor-hydrin nettdannet dekstran, eksempelvis "Sephadex" G-150
fra firma Pharmacia, Uppsala. Gelfiltreringen kan, hvis ønsket også gjennomføres i tilknytning til en dialyse mot en fortynnet pufferoppløsning, f.eks. mot 0,01 molar trishydroksymetylaminometan-saltsyre-pufferoppløsning av pH 7,5 til 8,5, fortrinnsvis pH 8,0. Til eluering kan det eksempelvis tjene 0,1 molar trishydroksymetylaminometan-saltsyre-puffer av pH-verdi 8, som pr. liter inneholder 1 molar natriumklorid. Ved denne elueringsfremgangsmåte elueres det steroidbindende B-globulin i området av molekylvekter på ca. 100.000, hyppig umiddelbart etter 7-S-gammaglobulinet av plasmaet.
Under utnyttelse av det steroidbindende 3-globulins elektriske egenskaper, lar det seg til dets rensing imidlertid også anvende elektroforese og trinn med ione-utvekslingskromatografi. Det steroidbindende B-globulin adsorberes av basiske ioneutvekslere, eksempelvis av diaminoetyl-utvekslere på basis av nettdannet dekstran, opp-nåelig i handelen som diaminoetyl-"Sephadex"- fra firmaet Pharmacia, i pH-området fra 4,5 til 9 og er å utvinne herav ved eluering med pufferoppløsningen av stigende ionestyrke. Fortrinnsvis utføres to fraksjoneringer på basiske ioneutvekslere, en gang ved adsorbsjon og fraksjonert eluering av det steroidbindende B-globulin ved svak sur pH-verdi, eksempelvis pH 5,0 og en annen gang i nøytralt til svakt alkalisk pH-område, eksempelvis pH 7.0.
Spesielt egnet som renseoperasjon er den preparative soneelektroforese, som viser gode resultater i kombinasjon med molekylsiktfremgangsmåten.
Også den soneelektroforetiske fremgangsmåte
ved hjelp av bærestoffer gjennomføres fortrinnsvis i to forskjellige pH-områder, en gang i alkalisk pH-område, eksempelvis pH 8,6, idet sonen av B-området av plasmapro-teinet utvinnes, og annen gang i svakt surt pH-område, eksempelvis pH 5, idet den tilsvarende steroidbindende B-globulin-holdige sone uttas. Rekkefølgen av disse forholdsregler er
derved ikke avgjørende.
Foretas elueringen av preoteinet fra bærematerialet fra elektroforese med en flyktig puffer, eksempel-
vis ammoniumhydrogenkarbonat, lar det seg direkte tilknytte en frysetørkning av fremgangsmåteproduktet.
Ved anvendelse av plasma som utgangsmateriale
for utvinning av steroid-bindende B-globulin kan det gåes frem nøyaktig således som ved placentaekstrakt. Det synes bare ikke nødvendig med forutfelling med akridinsalter i svakt surt pH-område.
Til utvinning av derivater av det steroid-bindende B-globulin ifølge oppfinnelsen oppløses det i henhold til ovennevnte eller sammenlignbare renseopera-sjoner dannede stoff i en puffer, hvis pH-verdi tilsvarer de tilnærmet optimale betingelser for neuraminidase for avspaltning av neuraminsyre fra substratet ved hjelp av neuraminidase.
Det steroid-bindende B-globulins inkubasjon med neuraminidase gjennomføres så lenge inntil dette proteins neuraminsyreinnhold er sunket til 0,5 - 0,5%, altså mindre enn 1%.
For behandling av det steroidbindende B-globulin er det egnet glykoprotein N-acetylneuraminylhydrolaser, klassifisert under EC. 3.2.1.18, såkalt neuraminidase, fortrinnsvis av mikrobiell opprinnelse, spesielt bakterielle neuraminidaser som de tilsvarende enzymer fra Vibrio cholerae, pneumokokker eller Clostridium perfringens. Ved anvendelse av neuraminidase fra Vibrio cholerae gjennomføres inkubasjonen i pH-området 5 til 7, fortrinnsvis ved pH 5,5, i en i enzymologien vanlig puffer, fortrinnsvis i en pufferopp-løsning av trishydroksymetylaminometan eller natriumacetat. Derved tilsettes pr. 100 mg protein 50-500 enheter neuraminidase og inkubasjonen gjennomføres i temperaturområdet 0-37°C, fortrinnsvis 4°C eller ved værelsestemperatur på 20°C, idet 20 timer ved 4°C omtrent viser samme nedsettelse av neuraminsyreinnholdet av proteinet, nemlig til ca. 0,5%, som
5 timer ved 2 0°C.
Som det er kjent for enhver enzymolog gjennom-føres reaksjoner av denne type under de forskjelligste betingelser, således at det også med en annen lavere konsentrasjon enn den angitte konsentrasjon av neuraminidase ved tilsvarende lengre inkubasjonstid, spesielt ved noe forhøyede temperaturer og tilsetning av aktivatorer for enzymet, kan oppnås samme effekt, nemlig fjerning av neura-minsyren fra det steroid-bindende B-globulin, med andre ord derivatet ifølge oppfinnelsen av dette protein kan fremstilles. Noen neuraminidaser aktiveres ved jordalkaliioner. Spesielt egnet for aktivering av neuraminidase fra Vibrio cholerae er som kjent kalsiumioner som kan tilsettes i form av vannoppløselige salter som kalsiumklorid i en konsentrasjon fra 0,1 til 1 mg/ml av inkubasjonsoppløsningen.
Mengden av neuraminidasen som skal anvendes er gitt følgende definisjon av enhetene: En neuraminidase-enhet er den mengde av enzymet som kreves til å frigjøre 1 mikrogram N-acetylneuraminsyre fra humant c^-glykoprotein i 0,05 molar natriumacetat-puffer av pH-verdi 5,5 med tilsetning av 9 mg/ml kokesalt og 1 mg/ml kalsiumklorid iløpet av 15 minutter ved 37°C
(E. Mohr og Gti. Schramm, Z. Naturf. 15 b, side 568 (1960)).
Det proteinderivat som ved neuraminsyreavspalt-ning er blitt sterkere basisk i forhold til utgangsmaterialet, bindes mindre til basiske anionutvekslere og er derfor ved hjelp av en kromatografering på eksempelvis diaminoetyl-ioneutveksler å befri for resterende forurensninger og også for et eventuelt ennu tilstedeværende uendret utgangsmateriale.
Ladningsegenskapene av det nyutvunnede derivat muliggjør adskillelse av forurensninger også på elektroforetisk måte. Eluatet som inneholder derivatet av det steroid-bindende B-globulin kan konsentreres, dialyseres og uten denatureringsforeteelser lyofiliseres. Det steroid-bindende globulin gir i den elektroforetiske analyse en enhetlig linje og i ultrasentrifugeanalyse et enhetlig bånd. Det reagerer med antiserummot det steroid-bindende 3-^-globulin som det opprinnelige protein. Det binder som det opprinnelige protein steroider, spesielt testosteron og østradiol.
Det fremstilte proteinderivat har en diagnos-tisk betydning ved at på den ene side kan det rene antigen og på den annen side det ved immunisering med det rene antigen utvunnede spesifikke antiserum anvendes i bestem-melsesmetoder for steroid-bindende B-globulin. Denne metode muliggjør å fastslå eller å forfølge forstyrrelser av steroidhusholdninger resp. endringer i innhold av det steroid-bindende B-globulin i plasma eller vev, f.eks. i løpet av sykdommer.
Oppfinnelsen skal forklares nærmere ved hjelp av følgende eksempel-.
E ksempel
Isolering av det steroidbindende B~globulin fra placenter: 10 kg menneskelig placenta knuses i dypfrossen tilstand og ekstraheres med 10 liter av en 0,"5%-ig natrium-kloridoppløsning (1 time ved 5°C). Alle i det følgende omtalte operasjoner gjennomføres, hvis intet annet er be-merket, ved 4°C. For å holde den anvendte pufferoppløsning steril tilsettes 0,05% w/v natriumazid.
10 liter ekstraheringsoppløsning innstilles
med 20%-ig eddiksyre på pH 6,0 og blandes i første rekke med 1500 ml av en 3%-ig 6,0-diamino-2-etoksyakridinlaktat-oppløsning ("Akridinsaltoppløsning"). Den inaktive forutfelling fraskilles ved sentrifugering og kasseres. Den ovenstående væske innstilles med 2N natriumhydroksydoppløs-ning på pH 8,5 og utfelles med 3 liter akridinsaltoppløs-ning. Utfellingen som inneholder det steroid-bindende globulin, sentrifugeres. Den flytende ovenstående væske kasseres, utfellingen suspenderes i 6 liter av en 5%-ig natriumkloridoppløsning. Etter frasentrifugeringen av den
dannede utfelling settes det til den ovenstående væske fast ammoniumsulfat til en 50%-ig metning. Derved danner det seg en utfelling som frasentrifugeres.
Den som sentrifugat dannede fuktige ammonium-sulf atholdige pasta (250 g) oppløses i 100 ml vann, dialyseres mot avionisert vann og blandes for utskillelse av en del av følgeproteinet ved pH 7,0, en elektrisk ledeevne på 10 millisiemens (innstilling med en 5%-ig koksaltopp-løsning) og en temperatur på 0°C, tilsettes etanol til en konsentrasjon på 25%. Den derved dannede utfelling fra-sentrif ugeres og kasseres; den ovenstående væske inneholder hovedmengden av det steroid-bindende B-globulin dialyseres mot vann og lyofiliseres.
Vidererensning foregår ved gel filtrering på "Sephadex" G-150 (søyle 20 x lOOcm) under anvendelse av en 0,01 molar trishydroksymetylaminometan-HCl-puffer pH 7,0.
Påvisning av det steroidbindende B-globulin
i eluatene gjennomføres immunologisk med et spesifikt antiserum i geldiffusjonsprøve. De positive fraksjoner - 1400 ml - samles og adsorberes for ytterligere kromatogra-fisk rensning på en diaminoetyl-"Sephadex"-søyle (5x20 cm).
Elueringen av proteinet fra diaminoetyl-VSepha-dex"-søylen foregår med 0,01 molar trishydroksymetylaminometan-HCl-puffer under anvendelse av en koksaltgradient på 0-2%. Påvisningen av det steroidbindende B-globulin i eluatet utføres igjen immunologisk; de fraksjoner som inneholder det steroid-bindende B-globulin forenes (900 ml) og utfelles med 35% w/v ammoniumsulfat. Den derved dannede utfelling utvinnes ved sentrifugering og utfellingen opp-løses i vann, dialyseres, først mot vann og deretter mot 0,1 molar natriumdietylbarbituratpuffer av pH 8,6. Den videre oppdeling av dialysatets proteiner i det elektriske felt foregår med den av Heide et al. (Behringwerke Mitteilung 43, side 161 ff) (1964) omtalte apparatur og metode; som inert bæremateriale tjener polyvinylklorid ("Geon" X 427), fremstilt av Goodrich Chem,Comp., Cleveland/Ohio,USA, som puffer anvendes en 0,1 molar natriumdietylbarbituratoppløs-ning (pH 8,6). Det steroid-bindende B-globulin vandrer i B^-sonen, elueres herav med flere ganger volumet av bæreren med 0,9%-ig koksaltoppløsning og utfelles etter fjerning av saltet ved en dialyse overfor vann med ammoniumsulfat (35% w/v). Utfellingen oppløses i 500 ml trishydroksymetylaminometan-HCl-puffer pH 5,0 og dialyseres mot en 0,01 molar trishydroksymetylaminometan-HCl-puffer pH 5,0. Deretter lar man oppløsningen løpe over en diaminoetyl-"Sephadex"-søyle (5 x 25 cm) som var ekvilibrert med samme puffer (pH 5,0). En del av proteinene forblir adsorbert sammen med det steroidbindende B-globulin på
søylen og kan deretter elueres under anvendelse av en lineær koksaltgradient på 0-2%. Eluatene som inneholder det steroidbindende B~globulin, forenes, nøytraliseres og utfelles ved tilsetning av 4 0% w/v ammoniumsulfat. For dert etterfølgende preparative soneelektroforese ved pH 5,0 er bærematerialet igjen "Geon" X427; som puffer anvendes en 0,15 molar natriumacetatoppløsning av pH 5,0. Det steroid-bindende B-globulin vandrer ved denne pH anodisk; elueres med fysiologisk koksaltoppløsning fra den tilsvarende sone og utfelles etter oppløsningens nøytralisasjon ved tilsetning av 4 0% (w/v) ammoniumsulfat.
Steroidbindende B-globulin kan utvinnes på samme måte fra serum, spesielt retroplacentaserum. Hertil anvendes som utgangsmateriale for fraksjoneringen tilsvarende ovennevnte eksempel i stedet for 10 liter vevekstrakt 5 liter serum, som fortynnes med 5 liter destillert vann.
Neuraminidasebehandling av det steroidbindende B-glogulin: For avspaltning av neuraminsyre oppløses 150 mg steroidbindende B-globulin i 30 ml 0,01 molar trishydroksy-metylaminometanpuffer ved pH 5,5, som inneholder 0,2 mg CaCl2 pr. ml og inkuberes med 500 enheter neuraminidase fra Vibrio cholerae i 20 timer ved 4°C. Deretter renser man
det modifiserte protein ved kromatografi på diaminoetyl-"Sephadex" (2,5 x 20 cm) under anvendelse av en 0,01 molar trishydroksymetylaminometan-HCl-puffer av pH 5,5. Derivatet
av det steroidbindende B-globulin vandrer derved uhindret gjennom søylen, mens de i utgangsmaterialet ennu tilstedeværende forurensninger forblir adsorbert. Det protein-
holdige eluat inndampes i en kollodiumhylse (Sartorium-Membranfilter-Gesellschaft), dialyseres grundig mot vann
og lyofiliseres deretter.
Claims (2)
1. Steroidbindende globulin til anvendelse ved in vitro-diagnostikk og ved fremstilling av antisera, karakterisert ved at det a) har en spesiell affinitet til steroidhormoner, b) har et innhold av kullhydrater på 10,4 - 2,6%, herav 5,8 - 1,2% heksoser, 4,0 - 0,8% heksosamin, beregnet som N-acetyl-heksosamin, 0,5 - 0,5% neuraminsyre, beregnet som N-acetyl-neuraminsyre og 0,1 - 0,1% fukose, c) kan utfelles med antisera rettet mot steroid-bindende B-globulin, d) har en elektroforetisk bevegelighet tilsvarende gammaglobulinet, e) har en sedimentasjonskonstant på 4,1 1,0 S målt i fosfatpuffer ved pH 6,8, f) har en sedimentasjonskonstant på 1,1 0,3 S målt i 1%-ig natriumdodecylsulfatoppløsning og g) har en molekylvekt på 65.000- 5.000, idet det er fremstilt ved at et steroidbindende B-globulin med følgende egenskaper: a) en spesiell affinitet til steroidhormoner, b) et innhold av kullhydrater på 12,5 - 3%, herav 5,7 - 1,2% heksoser, 3,9 - 0,8% heksosamin, beregnet som N-acetyl-heksosamin, 2,9- 0,9% neuraminsyre, beregnet som N-acetyl-neuraminsyre og 0,1 - 0,1% fukose, c) utfellbarhet med spesifikke antisera, d) en elektroforetisk bevegelighet tilsvarende B-, - globuliner, e) en sedimentasjonskonstant på 4,1 1,0 S målt i fosfatpuffer ved pH 6,8, f) en sedimentasjonskonstant på 1,1 0,3 S målt i 1%-ig natriumdodecylsulfatoppløsning og g) en molekylvekt på 65.000 - 5.000,
behandles med neuraminidase inntil neuraminsyreinnholdet i proteinet er nedsatt til 0,5 - 0,5%, og deretter fremstilles i ren form i et rensetrinn fortrinnsvis ved ioneut-vekslingskromatografi eller elektroforese.
2. Anvendelse av det steroidbindende globulin ifølge krav 1 til utvinning av antisera.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE2353973A DE2353973C3 (de) | 1973-10-27 | 1973-10-27 | Steroid-bindendes Globulin und Verfahren zu dessen Herstellung |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO743852L NO743852L (no) | 1975-05-26 |
NO142961B true NO142961B (no) | 1980-08-11 |
NO142961C NO142961C (no) | 1980-11-19 |
Family
ID=5896636
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO743852A NO142961C (no) | 1973-10-27 | 1974-10-25 | Steroidbindende globulin til anvendelse ved in vitro-diagnostikk og ved fremstilling av antisera |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4018885A (no) |
JP (1) | JPS58404B2 (no) |
AT (1) | AT336783B (no) |
BE (1) | BE821534A (no) |
DE (1) | DE2353973C3 (no) |
DK (1) | DK139627C (no) |
FR (1) | FR2249093B1 (no) |
GB (1) | GB1459617A (no) |
IE (1) | IE40191B1 (no) |
IL (1) | IL45931A (no) |
IT (1) | IT1034074B (no) |
LU (1) | LU71184A1 (no) |
NL (1) | NL7413812A (no) |
NO (1) | NO142961C (no) |
SE (1) | SE420412B (no) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA1064396A (en) * | 1975-02-18 | 1979-10-16 | Myer L. Coval | Fractional precipitation of gamma globulin with polyethylene glycol |
US4165370A (en) * | 1976-05-21 | 1979-08-21 | Coval M L | Injectable gamma globulin |
DE2640387C3 (de) * | 1976-09-08 | 1981-01-22 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Gewebespezifisches Protein und Verfahren zu dessen Herstellung |
DE2718326A1 (de) * | 1977-04-25 | 1978-10-26 | Behringwerke Ag | Neues protein und verfahren zu dessen herstellung |
US4230684A (en) * | 1978-03-16 | 1980-10-28 | Cornell Research Foundation, Inc. | Method for determining steroids in human body liquids |
DE3013724A1 (de) * | 1980-04-10 | 1981-10-15 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Neues protein pp (pfeil abwaerts)9(pfeil abwaerts), verfahren zu seiner anreicherung und gewinnung sowieseine verwendung |
KR0123107B1 (ko) * | 1992-02-27 | 1997-11-12 | 아끼야마 요시히사 | 연소배기가스중의 2산화탄소의 제거방법 |
-
1973
- 1973-10-27 DE DE2353973A patent/DE2353973C3/de not_active Expired
-
1974
- 1974-10-22 NL NL7413812A patent/NL7413812A/xx not_active Application Discontinuation
- 1974-10-24 US US05/517,764 patent/US4018885A/en not_active Expired - Lifetime
- 1974-10-24 GB GB4607074A patent/GB1459617A/en not_active Expired
- 1974-10-24 IL IL45931A patent/IL45931A/en unknown
- 1974-10-25 AT AT861274A patent/AT336783B/de active
- 1974-10-25 IE IE2202/74A patent/IE40191B1/xx unknown
- 1974-10-25 LU LU71184A patent/LU71184A1/xx unknown
- 1974-10-25 DK DK560474A patent/DK139627C/da active
- 1974-10-25 IT IT28819/74A patent/IT1034074B/it active
- 1974-10-25 SE SE7413467A patent/SE420412B/xx unknown
- 1974-10-25 NO NO743852A patent/NO142961C/no unknown
- 1974-10-26 JP JP49123046A patent/JPS58404B2/ja not_active Expired
- 1974-10-28 BE BE149923A patent/BE821534A/xx unknown
- 1974-10-28 FR FR7435940A patent/FR2249093B1/fr not_active Expired
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US4018885A (en) | 1977-04-19 |
IE40191L (en) | 1975-04-27 |
SE420412B (sv) | 1981-10-05 |
JPS58404B2 (ja) | 1983-01-06 |
JPS5071819A (no) | 1975-06-14 |
FR2249093B1 (no) | 1978-06-16 |
BE821534A (fr) | 1975-04-28 |
IT1034074B (it) | 1979-09-10 |
NO142961C (no) | 1980-11-19 |
DK139627C (da) | 1979-10-29 |
DK560474A (no) | 1975-06-23 |
AT336783B (de) | 1977-05-25 |
DE2353973B2 (de) | 1979-02-15 |
GB1459617A (en) | 1976-12-22 |
NO743852L (no) | 1975-05-26 |
FR2249093A1 (no) | 1975-05-23 |
NL7413812A (nl) | 1975-04-29 |
IL45931A0 (en) | 1974-12-31 |
DE2353973C3 (de) | 1979-10-04 |
DE2353973A1 (de) | 1975-05-07 |
IL45931A (en) | 1977-08-31 |
DK139627B (da) | 1979-03-19 |
LU71184A1 (no) | 1976-08-19 |
ATA861274A (de) | 1976-09-15 |
SE7413467L (no) | 1975-04-28 |
IE40191B1 (en) | 1979-03-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4217339A (en) | Glycoprotein and process for isolating it | |
IE58854B1 (en) | Process for the extraction and purification of proteins from culture media producing them | |
Burke | The purification of interferon | |
EP0011032B1 (en) | Method for isolation of hbsag | |
Rafter et al. | Studies on the pathogenesis of fever: VII. Preliminary chemical characterization of leucocytic pyrogen | |
US4269825A (en) | New glycoprotein and process for isolating it | |
US4247452A (en) | Purification of pertussis haemagglutinins | |
NO142961B (no) | Steroidbindende globulin til anvendelse ved in vitro-diagnostikk og ved fremstilling av antisera | |
Marr et al. | Studies on the growth-promoting glycoprotein fraction of foetal calf serum | |
CA1239345A (en) | Method for the production of pertussis component vaccine and combined vaccine of pertussis antigen, diphtheria toxoid and tetanus toxoid | |
US4065445A (en) | Pregnancy-specific β1 -glycoprotein and process for isolating it | |
Blobel et al. | Purification of staphylococcal coagulase | |
IE44824B1 (en) | Process for the isolation of a placenta-specific glycoprotein | |
Athineos et al. | Comparative Antigenicity of Native and “Desialized” Orosomucoid in Rabbits. | |
Casillas et al. | Chromatographic behaviour of clotting factors | |
US3184394A (en) | Process for the preparation of enzymes, toxins and toxoids | |
Stylos et al. | Splitting of human thyroglobulin. II. Enzymatic digestion | |
US4189535A (en) | Serum cell growth promoting materials | |
Pardoe | The inducible neuraminidase (N-acyl-neuraminyl hydrolase EC 3.2. 1.18) of Klebsiella aerogenes NCIB 9479 | |
US4308204A (en) | Process for preparing the third component of the complement from human blood plasma | |
Boesken et al. | Purification and chemical characterization of a basement membrane glycoprotein present in the urine of nephritic rabbits | |
NO141051B (no) | Fremgangsmaate til isolering av et svangerskapsspesifikt beta1-glykoprotein | |
AT349649B (de) | Gewinnung von antiseren | |
US3477913A (en) | Method of production of urokinase | |
US4859766A (en) | Purified appetite-regulating substances of biological orgin, their antibodies, immunocomplexes of the appetite--regulating substances formed with the antibodies and processes for preparing same |