NO139562B - Analogifremgangsmaate til fremstilling av derivater av antibiotikum xk-62-2 - Google Patents

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører fremstilling av tera-

peutisk aktiv l-N-[L-(-)-a-hydroksy-Y-aminobutyryl]-XK-62-2 med formelen:

eller farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter derav.

Antibiotikum XK-62-2 og fremstillingen av dette ved

gjæring er beskrevet i britisk patent nr. 1.399•578. Som angitt i dette patent produseres antibiotikum XK-62-2 lett ved dyrking av aktinomyceter slik som Micromonospora sagamiensis, Micromono-

spora echinospora og Micromonospora purpurea, ved metoder som vanligvis anvendes ved dyrking av aktinomyceter. Nærmere bestemt innpodes stammer av de ovennevnte mikroorganismer i et flytende medium inneholdende en karbonkilde som mikroorganismen kan utnytte,

slik som sukkerstoffer, hydrokarboner, alkoholer, organiske syrer osv.; uorganiske eller organiske nitrogenkilder og uorganiske salter og veksthemmende faktorer og dyrkes ved 25-^0°C i 2-12

dager. Isoleringen og rensingen av XK-62-2 utføres ved en passende kombinasjon av adsorpsjon og desorpsjon fra ioneut-

vekslerharpikser og aktivkull og søylekromatografi under anvendelse av cellulose, "Sephadex"® og silisiumdioksydgel. På denne måte kan XK-62-2 oppnås i form av sulfatet eller i den frie form.

XK-62-2 er et basisk stoff og oppnås som et hvitt pulver. XK-62-2 har molekylformele<n><c>2<oH>4l<N>5°7 og molekvlvekt ^63. Stoffet er lett oppløselig i vann og metanol, tungt oppløselig i etanol og aceton og uoppløselig i kloroform, benzen, etylacetat og n-heksan.

Derivatene av XK-62-2 fremstilt ifølge oppfinnelsen har

en sterk antibakteriell aktivitet overfor en rekke gram-positive og gram-negative bakterier og har spesielt en betydelig antibakteriell aktivitet overfor de bakterier som er resistente overfor kjente aminoglykosid-antibiotika. Som en følge av dette er de fremstilte antibiotika nyttige til å rense og sterilisere laboratorieglassutstyr og kirurgiske instrumenter og kan også anvendes i kombinasjon med forskjellige såper til hygieneformål og til rensing og sterilisering av hospitalrom og områder som anvendes til fremstillingrav-matvarer. Videre forventes derivatene å være effektive til behandling av forskjellige infeksjoner, slik som urinveisinfeksjonseTP: pg luftveisinfeksjoner, forårsaket

-av "frrrskjellige flogogene bakterier.

På tegningen viser

fig. 1 det infrarøde -absorpsjonsspektrum av l-N-[L-(-)-a-hydroksy-Y-aminobutyryl]-XK-62-2 (.forbindelse I);

fig. 2 NMR-spektret av l-N-fL—(-)-a-hydroksy-y-amino-butyryl]-XK-62-2.

Ifølge foreliggende oppfinnelse fremstilles forbindelsen med formel I ved at en forbindelse med formelen:

acyleres med et acyleringsmiddel med formelen: 1 2 Y betyr hydrogen, og Y betyr en beskyttende gruppe valgt blant 12 .. hvor R og R kan være like eller forskjellige og betyr H, OH, N0~, Cl, Br, I, alkyl med 1-5 karbonatomer eller alkoksy med 3 12 1-5 karbonatomer, og R betyr H, Cl, Br eller I, eller Y og Y sammen danner en ftaloylgruppe, for dannelse av en forbindelse med formelen:

1 2

hvor Y og Y har den ovenfor angitte betydning, hvoretter de beskyttende grupper Y 1 og Y 2 fjernes på i og for seg kjent måte, og, om ønsket, den resulterende forbindelse overføres til et farmasøytisk akseptabelt syreaddisjonssalt.

Acyleringsmidlet er avledet av-a-hydroksy-y-aminosmørsyre.

Acyleringsmetoder er beskrevet i M. Bodansky et. al: Synthesis, side 435 (1972) og i M. Bodansky et al: Peptide Synthesis, side 75-135 (1966) (John Wiley & Sons., U.S.A.).

Acyleringsreaksjonen i foreliggende fremgangsmåte utføres fortrinnsvis ved' anvendelse av et acyleringsmiddel med formelen: 12 .

hvor Y og Y har den ovenfor angitte betydning.

I dette tilfellet kan en forbindelse med formelen:

hvor Y 3 og Y 2 har den ovenfor angitte betydning, på forhånd omsettes med N-hydroksysuccinimid i nærvær av dicykloheksylkarbodiimid til fremstilling av en forbindelse med ovennevnte formel, som kan isoleres og omsettes med XK-62-2.

Alternativt omsettes en forbindelse med formelen:

hvor Y 1 og Y 2 har den ovenfor angitte betydning, N-hydroksysuccinimid og dicykloheksylkarbodiimid, og den resulterende reaksjonsblanding omsettes med XK-62-2.

I en annen utførelsesform kan acyleringsreaksjonen ut-føres ved tilsetning av dicykloheksylkarbodiimid til en blanding av XK-62-2 og en forbindelse med formelen:

Det skal forstås at de ovennevnte reaksjoner kan anvendes hvor acyleringsreaksjonen av XK-62-2 utføres ved enhver annen metode, og det kan velges en egnet måte avhengig av det bestemte acyleringsmiddel som benyttes.

Vanligvis benyttes 0,4-2,5 mol, fortrinnsvis 0,7-1,5

mol, av acyleringsmidlet pr. mol XK-62-2. Reaksjonen utføres ved en temperatur mellom -50 og 50°C, fortrinnsvis mellom -20 og 20°C, i fra 15 minutter til 24 timer, fortrinnsvis 5-15 timer.

Egnede oppløsningsmidler for reaksjonen kan utvelges blant tetrahydrofuran, dimetylacetamid, dimetylformamid, lavere-alkoholer, dioksan, etylenglykol-dimetyleter, pyridin, vann og blandinger derav; Fortrinnsvis anvendes en blanding av etylalko-hol og vann i volumforholdet 2:1.

Mellomproduktet IA for det ønskede produkt fremstilt på den ovenfor angitte måte, kan isoleres og renses til bruk i den andre reaksjon. Imidlertid foretrekkes det å anvende reaksjonsblandingen som den er, uten isolering og rensing av de acylerte forbindelser. Ved den etterfølgende reaksjon isoleres og renses forbindelsene oppnådd fra mellomproduktet. Sistnevnte metode er fordelaktig ved at den forenkler prosedyren og forhøyer ut-byttet .

Om nødvendig kan mellomproduktet IA, dvs. inneholdende beskyttende gruppe, lett isoleres og renses ved enhver av de kjente metoder, f.eks. søylekromatografi under anvendelse av et adsorpsjonsmiddel slik som ioneutvekslerharpikser, silisiumdioksydgel, aluminiumoksyd, cellulose, "Sephadex"® osv., og tynnsjiktskromatografi under anvendelse av silisiumdioksydgel, aluminiumoksyd, cellulose osv.

Mellomproduktet IA, enten isolert eller i blanding, om-

1 2 settes deretter for fjerning av de beskyttende grupper Y og Y på kjent måte og dannelse av den ønskede forbindelse med formel I som angitt ovenfor.

Fjerning av den beskyttende gruppe utføres på kjent måte. F.eks. der den beskyttende gruppe utgjøres av en ftaloylgruppe, utføres fjerningen med hydrazin; der den beskyttende gruppe er en metoksykarbonylgruppe eller etoksykarbonylgruppe, utføres fjerningen med bariumhydroksyd; der den beskyttende gruppe er en tertiær butoksykarbonylgruppe, utføres fjerningen med maursyre eller trifluoreddiksyre; der den beskyttende gruppe er en o-nitrofenylsulfenylgruppe, utføres fjerningen med eddiksyre eller saltsyre; og der den beskyttende gruppe er en klor-acetylgruppe, utføres fjerningen med 3-nitropyridin-2-tion (rapportert av K. Undheim et al: Journal of the Chemical Society, Parkin Transactions, Part I, side 829 (1973)).

Det er foretrukket at den beskyttende gruppe er

12 i

hvor R og R har den ovenfor angitte betydning, og fjerningen utføres ved hydrogenolyse i nærvær av en metallkatalysator valgt blant palladium, platina, rhodium og. Raney-nikkel, fortrinnsvis palladium på en bærer av aktivkull, i minst ett oppløsningsmiddel valgt blant tetrahydrofuran, dimetylacetamid, dimetylformamid, lavere-alkoholer, dioksan, etylenglykol-dimetyleter, pyridin og vann, fortrinnsvis en blanding av vann og metanol i volumforholdet 1:1; i nærvær av en liten mengde saltsyre, hydrogenbromidsyre, hydrogenjodidsyre eller eddiksyre, fortrinnsvis eddiksyre, og ved romtemperatur og atmosfæretrykk.

Det skal forstås at enhver egnet forbindelse kan anvendes ved den ovenfor angitte fremgangsmåte til beskyttelse av aminogruppene i a-hydroksy-y-aminosmørsyre, som er forstadiet til forbindelse med formelen:

hvor Y , Y og Z har den ovenfor angitte betydning. En slik teknikk er velkjent. Innføring av en lett fjernbar beskyttende gruppe er en teknikk som hyppig anvendes ved peptidsyntese. Beskyttelsen av aminogrupper med slike beskyttende grupper og fjerning derav, er beskrevet i M. Bodansky et al: Peptide Synthesis, side 21-41 (1966) (John Wiley & Sons, Inc., U.S.A.);

og A. Kapoor: Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol. 59,

side 1-27 (1970).

Forbindelse I, enten fremstilt fra isolert og renset mellomprodukt eller et urenset medium, isoleres og renses fra reaksjonsblandingen på kjent måte. F.eks. isoleres og renses forbindelsene ved søylekromatografi under anvendelse av et adsorpsjonsmiddel slik som ioneutvekslerharpikser, silisiumdioksydgel, aluminiumoksyd, cellulose osv., og tynnsjiktskromatografi under anvendelse av silisiumdioksydgel, aluminiumoksyd, cellulose osv.

Om ønsket, kan forbindelse I overføres til farmasøytisk akseptable, ikke-toksiske syreaddisjonssalter (mono-, di-, tri-, tetra- eller penta-salter) ifølge konvensjonelle metoder.

Ifølge oppfinnelsen inkluderer ikke-toksiske syrer uorganiske syrer, slik som saltsyre, hydrogenbromidsyre, hydrogenjodidsyre, svovelsyre, fosforsyre, karbonsyre osv., og organiske syrer slik som eddiksyre, fumarsyre, eplesyre, sitronsyre, mandelsyre, vinsyre, askorbinsyre osv. Metodene til fremstilling av syre-addis j onssaltene er velkjente innen teknikken. Det halvsyn-tetiske derivat 1 har en utmerket antibakteriell aktivitet. Det er spesielt bemerkelsesverdig at det har en sterk antibakteriell aktivitet overfor stammer av Escherichia coli med en R-faktor som viser resistens overfor kjente aminoglykosid-antibiotika.

Tabell I viser det antibakterielle spektrum av kanamycin A, "Gentamicin C-, L cl", XK-62-2 og 1-N-(L(-)-ct-hydroksy-y-amino-butyryl) XK-62-2 (forbindelse I) overfor forskjellige gram-positive og gram-negative bakterier, målt ved agarfortynnings-metoden ved pH 8,0.

Ved en sammenligning av den i tabell I anførte minimale inhiberende konsentrasjon er det klart at forbindelse I har en sterk antibakteriell aktivitet. Karakteristisk viser forbindelsen spesielt sterk antibakteriell aktivitet overfor Escherichia coli KY 8327 og 8348.

I den ovenstående tabell produserer Escherichia coli

KY 8327 og KY 8348 henholdsvis gentamicin-adenyltransferase og gentamicin-acetyltransferase type I intracellulært. Den først-nevnte bakterie inaktiverer kanamycin og gentamiciner ved adenylering, og den sistnevnte inaktiverer gentamiciner ved acetylering.

Det antibakterielle spektrum av 1-N-[L-(-)-a-hydroksy~Y-aminobutyryl]-XK-62-2 i sammenligning med kanamycin A, gentamicin-kompleks (C,, C, og C„) og XK-62-2, målt ved agarfortynnings-metoden ved pH 7,2, er vist i tabell II nedenfor.

1: produserer gentamicin-adenyltransferase

2: produserer gentamicin-adenyltransferase og neomycin-kanamycin-f osf otr-ansf erase type- II

3: produserer gentamicin-acetyltransferase type I

4: produserer neomycin-kanamycin-fosfotransferase type I

5: produserer kanamycin-acetyltransferase

6: produserer gentamicin-acetyltransferase type I og neomycin-kanamycin-fosfotransferase type I'

7: produserer neomycin-kanamycin-fosfotransferase type I og

type II og streptomycin-fosfotransferase

8: produserer sannsynligvis kanamycin-acetyltransferase 9: produserer gentamicin-acetyltransferase type II

De ovennevnte enzymer produseres intracellulært og med enzymet inaktiverer bakteriene antibiotikaene.

Fra den ovenfor angitte tabell I fremgår det at 1-N-(L(-)-a-hydroksy-Y-aminobutyryl)-XK-62-2 har en meget sterk antibakteriell aktivitet overfor forskjellige bakterier med resistens overfor minst ett av gentamicin-antibiotika og XK-62-2, aom produserer gentamicin-adenyltransferase og/eller gentamicin-acetyltransf erase type I og type II intracellulært og derved inaktiverer gentamicin-antibiotika og XK-62-2.

Videre har den fremstilte forbindelse ved forskjellige forsøk med hensyn til beskyttelsen mat infeksjoner fremkalt av stammene av de ovennevnte resistente bakterier, vist seg å be-vare a-hydroksy-y-aminobutyrylgruppen in vivo og å utvise meget høyere antibakteriell aktivitet enn gentamicin-antibiotika og XK-62-2.

Fra DE-OS 2.234.315 er det kjent en fremgangsmåte til innføring av L-(-)-a-hydroksy-Y-aminobutyrylgruppen (i det følgende betegnet "HABA") på aminogruppen i 1-stillingen i kanamycin A eller kanamycin B (i det følgende betegnet henholdsvis "KMA" og KMB") for dannelse av henholdsvis 1-N-HABA-KMA og 1-N-HABA-KMB. I følgende tabell III er det anført data til sammenligning av det antibakterielle spektrum overfor 63 mikroorganisme st amme r for den ifølge oppfinnelsen fremstilte forbindelse I (l-N-HABA-XK-62-2) og den kjente forbindelse 1-N-HABA-KMA. Den minimale inhiberende konsentrasjon (i det følgende betegnet "MIC") er målt ved samme metode som forklart for tabell II ovenfor.

Fra tabell III fremgår det at l-N-HABA-XK-62-2 er vesent-lig bedre enn 1-N-HABA-KMA fordi det er mer effektivt overfor 30 stammer og ekvivalent med 1-N-HABA-KMA overfor de andre stammer. Ved bedømmelsen av antibakteriell aktivitet ansees en forskjell på én størrelsesorden (2- eller 1/2 ganger) i MIC for å være usignifikant og en forskjell på mer enn to størrelses-ordner (4- eller lM-ganger) i MIC ansees for å være signifikant.

Videre har l-N-HABA-XK-62-2 følgende spesielle trekk.

Det er kjent at et aminoglykosid-antibiotikurn so in har en. primær amonigruppe i 6'-stillingen, inaktiveres av en mikroorganisme som inneholder acetyltransferase. 1-N-HABA-KMA og 1-N-HABA-KMB har en primæraminogruppe i 6'-stillingen. Det antas derfor at disse antibiotika inaktiveres av en mikroorganisme som inneholder acetyltransferase og at de er ineffektive overfor en slik mikroorganisme. På den annen side, siden aminogrupper i 6'-stillingen av l-N-HABA-XK-62-2 er beskyttet av en metylgruppe, inaktiveres dette antibiotikum ikke av en mikroorganisme som inneholder acetyltransferase, og den er derfor effektiv overfor en slik mikroorganisme. Dette bevises av at l-N-HABA-XK-62-2 har en høyere antibakteriell aktivitet enn 1-N-HABA-KMA overfor en mikroorganisme som inneholder kanamycin-acetyltransf erase .

I tabell III er Escherichia coli KY Z-3^3, Pseudomonas aeruginosa KY 8510, Pseudomonas aeruginosa KY 8516 og Serratia marcescens POE 1065 mikroorganismer som inneholder kanamycin-acetyltransf erase . Fra de i tabell III angitte data for MIC fremgår det at l-N-HABA-XK-62-2 er mer effektiv enn 1-N-HABA-KMA overfor disse fire mikroorganismer.

Selv om det ikke er noen forsøksdata i tilfelle av 1-N-HABA-KMB, må det naturligvis forventes at 1-N-HABA-KMB med en primær aminogruppe i 6'-stillingen er mindre effektiv enn l-N-HABA-XK-62-2 overfor de fire ovennevnte mikroorganismer.

Det er også kjent at et aminoglykosid-antibiotikurn som har en hydroksygruppe i 3'-stillingen, inaktiveres av en mikroorganisme som inneholder fosfotransferase, KMA, KMB, 1-N-HABA-KMA og 1-N-HABA-KMB har en hydroksygruppe i 3'-stillingen. Det antas derfor at disse antibiotika fosforeres av en mikroorganisme som inneholder fosfotransferase, og at de er ineffektive overfor en slik mikroorganisme. Det angis faktisk i tabell IV 1 US-patent nr. 3.781.268 at MIC for KMA og BBK-26 (1-N-HABA-KMB) overfor Pseudomonas aeruginosa D113, som inneholder fosforylase, er henholdsvis >50 og 50. De høye MIC-verdier viser at KMA og 1-N-HABA-KMB er ineffektive overfor Ps. aeruginosa D113.

På den annen side antas det at et aminoglykosid-antibiotikurn uten en hydroksygruppe i 3'-stillingen, slik som XK-62-2 og l-N-HABA-XK-62-2, ikke fosforeres av en mikroorganisme som inneholder fosforylase, og at antibiotikumet er effektivt overfor en slik mikroorganisme. F.eks. er Escherichia coli KY 8349 og Pseudomonas aeruginosa KY 8512 i foregående tabell II mikroorganismer som inneholder neomycin-kanamycin-fosfotransferase type I. Det er klart at XK-62-2 og l-N-HABA-XK-62-2 er effektive overfor disse mikroorganismer ettersom MIC for XK-62-2 overfor disse mikroorganismer er henholdsvis 0,4 og 0,78, og MIC for l-N-HABA-XK-62-2 overfor den er henholdsvis 0,2 og 0,78. På

den annen side er det klart at KMA overfor den er henholdsvis

>100 og 12,5.

Fra de foregående tabeller fremgår det klart at forbindelsen I utviser en bemerkelsesverdig sterk antibakteriell aktivitet overfor en rekke gram-positive bakterier og gram-negative bakterier., omfattende de som er resistente overfor aminoglykosid-antibiotika. Derfor forventes den å være effektiv ved behandling av forskjellige infeksjoner hos mennesker og dyr, frembragt av slike flogogene bakterier. F.eks. forventes forbindelse I å være effektiv ved behandling av urinveisinfeksjoner og luftveisinfeksjoner fremkalt av Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa og stammer av slekten Proteus.

Ved administrasjon av forbindelsen eller dens syreaddisjonssalter foretrekkes parenti.ral inngivning med en effektiv dose på 1,6-6 mg/kg pr. dag.

Den akutte toksisitet (LD^) til l-N-[L-(-)-a-hydroksy-Y-aminobutyryl]-XK-62-2 hos mus er 250 mg/kg ved intravenøs administrasjon, mens toksisiteten til XK-62-2 og gentamicin-komplekset (en blanding av C^ C og C^) er henholdsvis 93 mg/kg og 72 mg/kg.

Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen illustreres nærmere ved følgende representative eksempler.

Eksempel 1

Fremstilling_av_l-N;[L-(-);a-h^

En prøve av XK-62-2 (2,778 g, 6,0 mmol) oppløses i

30 ml vannfri 50? tetrahydrofuran. Til oppløsningen tilsettes en oppløsning av N-hydroksysuccinimidesteren av L-(-)-a-hydroksy-y-karbobenzoksyaminosmørsyre (fremstillingen av denne forbindelse fra L-(-)-a-hydroksy-y-aminosmørsyre er beskrevet i the Journal of Antibiotics, Vol. XXV, side 695-708 (1972).

Fremstillingen av L-(-)-a-hydroksy-Y-aminosmørsyre er beskrevet

i Tetrahedron Letters, side 2625-2628 (197U). (2,94 g, 84 mmol) i 20 ml tetrahydrofuran under omrøring, mens temperaturen holdes mellom -5 og 0°C. Tilsetningen er fullført på en time og blandingen får lov å reagere natten over.

Ved silisiumdioksydgel-tynnsjiktskromatografi (utviklings-middel: isopropanol/konsentrert amoniakkvann/kloroform i volumforholdet 2:1:2, fargemiddel: ninhydrid) bekreftes tilstede-værelsen av mellomproduktet, dvs. l-N-[L-(-)-a-hydroksy-y-karbobenzoksyaminobutyryl]-XK-62-2, (Rf 0,81), sammen med bl.a. en liten mengde ureagert XK-62-2. Reaksjonsblandingen konsentreres under forminsket trykk hvorved det oppnås en svakt gul rest. Denne blanding inneholdende mellomproduktet oppløses i 40 ml vandig. 50% metanol. Til oppløsningen tilsettes 0,3 ml eddiksyre og blandingen underkastes hydrogenolyse i nærvær av 250 mg 5$ palladium-på-aktivkull ved romtemperatur og atmosfæretrykk i 6 timer. Ved silisiumdioksydgel-tynnsjiktskromatografi (under de samme betingelser som i eksempel 1) bekreftes tilstede-værelsen av forbindelse I (Rf 0,40). Katalysatoren fjernes ved filtrering og filtratet konsentreres under forminsket trykk. Til den resulterende rest tilsettes 15 ml vann til oppløsning

av resten og oppløsningen føres gjennom en søyle (diameter 2,5 cm) av "Alberlite^CG - 50" (ammonium-form, 150 ml). Søylen vaskes med 200 ml vann. Deretter utføres eluering med 0,2 N vandig ammoniakk og eluatet opptas fraksjonsvis i 10- ml porsjon-er .

For oppnåelse av den ønskede forbindelse oppsamles fraksjonene nr. 225-250. Disse fraksjoner kombineres og konsentreres til tørrhet under forminsket trykk, hvorved det oppnås 0,69 g av forbindelse I som et fargeløst produkt.

Analyse av forbindelse I viser følgende:

Smeltepunkt: 120-124°C

Spesifikk dreiing: (a)^9 =.+99,0° (C = 0,10, vann)

Infrarødt absorpsjonsspektrum (KBr) (cm<-1>): 3700-3100, 2940, 1640, 1565, 1480, 1385, 1340, 1282, lill, 1054, 1022, 973, 8l6, 700-600 (fig. 3).

NMR-spektrum (i deuteriumoksyd) 6 (i ppm fra DSS):

1»20 (3H, singlet), 2,36 (3H, singlet), 2,52 (3-H, singlet),

5,14 (1H, dublet, J=4,0 Hz), 5,22 (1H, dublet, J=4,Q Hz) (fig.4).

Elementæranalyse:

Beregnet for C^H^gNgC^ • 1/2H2CC>3: C 49,39% - H 8, 29% - N 14,11% Funnet: C 48,96% - H 8,37% - N 13,95%

Fra det ovenstående bekreftes at forbindelsen I har

den tidligere angitte strukturformel.

Eksempel 2

Fremstilling av sulfatet av forbindelse I hvor 1 mol forbind-_S£_kom!2i2eE£_2e^_2z5_raol_svovels^re

0,1 mol l-N-[L-(-)-a-hydroksy-Y-aminobutyryl]-XK-62-2 (forbindelse I) oppløses i 200 ml vann. Til oppløsningen tilsettes en oppløsning av 1 mol svovelsyre i 50 ml under avkjøling. Etter 30 minutter tilsettes etanol til oppløsningen for dannelse av et bunnfall, inntil utfellingen er fullstendig. Bunnfallet fraskilles ved filtrering og tørkes for oppnåelse av et hvitt pulver.

Analyse av pulveret viser følgende:

Smeltepunkt: 242,8°C.

pc; n

Spesifikk dreiing: (a)n^ = +95.-9 (C = 1,0, vann)

Infrarødt absorpsjonsspektrum (KBr) (cm _ i): 3400, 1625, 1122. NMR-spektrum (i deuteriur-icksyd) 6 (i ppm fra DSS):

1,33 (3H, singlet), 2,77 (3H, singlet), 2,9.3 (3H, singlet),

5,20 (1H, dublet, J = 3,9 Hz), 5,93 (1H, dublet, J=3,9 Hz). Elementæranalyse:

Beregnet for C24<H>48<N>6°9'1 H2SCVH20: C 3l+>95%, H 7,14%,

N 10,04%, S 9,40%;

Funnet: C 34,82%, H 6,70%, N 10,15%, S 9,68%.

Fra ovenstående analyse identifiseres pulveret som sulfatet av forbindelse I med molekylformelen

<C>24<H>48<N>6°9 2 <H>2<S0>4 <H>2<0>'

Claims (1)

1. Analogifremgangsmåte til fremstilling av terapeutisk aktiv l-N-[L-(-)-ct-hydroksy-Y-aminobutyryl]-XK-62-2 med formelen: formelen:

   eller farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter derav,karakterisert ved at en forbindelse med formelen: acyleres med et acyleringsmiddel med formelen: 1 2 Y betyr hydrogen, og Y betyr en beskyttende gruppe valgt blant hvor. Æ'..og R kan være like eller forskjellige og betyr H, OH, ;.;Cli Br, I, alkyl med 1-5 karbonatomer eller alkoksy med ^—■•' 3 12 1-5 karbonatomer, og R betyr H, Cl, Br eller I, eller Y og Y sammen danner en ftaloylgruppe, for dannelse av en forbindelse med formelen: 1 2 hvor Y og Y har den ovenfor angitte betydning, hvoretter de beskyttende grupper Y 1 og Y 2 fjernes på i og for seg kjent måte, og, om ønsket, den resulterende forbindelse overføres til et farmasøytisk akseptabelt syreaddisjonssalt.