NO138578B - Instrument til bruk av direkte paavisning av neisseria gonorrheae uten dyrkning - Google Patents

Description

Foreliggende oppfinnelse angår et instrument til bruk

ved direkte påvisning av Neisseria Gonorrhoeae uten dyrkning,

ved å fremkalle en intial distinkt fargeforandring på en vatt-

pinne i instrumentet etter oppsamling av en prøve på denne.

Det er kjent at det i USA og i mesteparten av verden

forøvrig foreligger en epidemi med henblikk på veneriske syk-

dommer. I De Forente Stater alene har sykdommen nådd pande-

miske dimensjoner. Det er anslått at kun 1/5 av tilfellene rapporteres og at kun 1/3 kommer frem til leger eller til de offentlige helsemyndigheter for behandling. Hvis det forelå

en enkel, hurtig og billig prøvemetode, ville dette understøtte påvisningen og kontrollen av denne sykdom.

Det vanlige kliniske tegn på en gonorrhoé-infeksjon hos mannen, er en materieutflod fra urinrøret og uringåpningen. En rutineundersøkelse er nødvendig for å foreta en differensial-

diagnose med henblikk på arten av utfloden før antibiotika kan foreskrives. Som en regel er den første prøven å bestemme

hvorvidt urinrørsbetennelsen skyldes gonokokker eller er av ikke-spesifikk art.

Fra US-PS 2.970.945 er det kjent å anvende en tørket

reagens i tabelttform samt et fuktemiddel for aktivering av reagensen ved undersøkelse av kliniske preparater for diagnose av Neisseria Gonorrhoeae. Som fargereagens anvendes derved et fenylendiamin. Fra US-PS 2.721.552 og US-PS 3.360.440 er det

kjent innretninger som er bygget opp av en eller flere ikke-kommuniserende beholdere, hvorved en av beholderne inneholder en vandig- og den andre en tørr substans, som på egnet måte kan blandes med hverandre. Likeledes kan fra det sistnevnte patent, utleses en fremgangsmåte for undersøkelse av kliniske preparater for diagnoseformål. De kjente innretninger.har den

mangel at de ved rutineundersøkelser av de direkte tatte prøver

av eksudater i et mistenkelig tilfelle, ikke er enkle nok, slik at en hurtig og enkel differensialdiagnose ikke kan stilles.

Til slutt skal nevnes US-PS 3.450.129 som gjør bruk

av en sprø beholder for transport av reagens til et laborator-'

ium og tar sikte på å holde bakteriene i live inntil de kan dyrkes.

Gjenstand for oppfinnelsen er derfor å frembringe et

system som anvendes direkte på pasienten, og som gir den behand-lende lege et differnsialdiagnoseverktøy som er tidsbesparende, billig og pålitelig.

Foreliggende oppfinnelse angår således et instrument til

bruk ved direkte påvisning av Neisseria Gonorrhoeae uten dyrkning ved å fremkalle en intial distinkt fargeforandring på en vatt-

pinne i instrumentet etter oppsamling av en prøve på denne, og instrumentet karakteriseres ved at det omfatter en tørr bærer for en oksydaseprøvende reagens som er p-amino-dimetylanilinoksalat, N,N-dimetyl-p-fenylendiamin-dihydroklorid, N,N-dimety1-P-fenylendiaminoksalat, N,N,-dimetyl-p-fenylendiaminmonohydroklorid eller N,N,N', NHietrametyl-p-fenylendiamin-dihydroklorid, og en knus-

bar beholder for en aktiveringsvæske som består av vann, physiologisk saltløsning eller en bufferløsning med pH 6,5-7,2, begge deler som i og for seg kjent anbrakt i et fleksibelt rør med teleskopisk hette, samt en i og for seg kjent vattpinne beregnet for innføring av en prøve i det fleksible rør, idet det på vattpinnen inntrer en fargeforandring når prøven er innført og beholderen knuses.

Som en bedømmelsesprøve på gonbrrhoé i offentlige klin-

ikker for veneriske sykdommer, hospitaler, legekontorer og i de væpnede.styrker, vil foreliggende innretning tjene som et billig og nøyaktig differensialdiagnosehjelpemiddel for å hjelpe legen eller klinikken med valget av legemiddelbehandling.

Behovet for et enkelt og billig diagnosesystem, som kan benyttes i marken uavhengig av bakteriologiske og mikroskopiske prøver,

er således stort. En a<y> vanskelighetene ved å foreta en hurtig og pålitelig diagnose av infeksjonen hos mannen, er den opprinne-lige til forveksling foreliggende likhet med urinveisbetennelse.

En urinveisutflod hos mannen kan forekomme som resultat av følgende andre tilfeller, prostatitis, trauma, Escherichia coli, staphylococcus, tuberculosis, balanitis, intatte stoffer som irriterer urinveiene, cantharades, vegetabilske stoffer som er rike på oksalater og andre som kan medføre urinveisbetennelser. Pellagra, diabetes og podagra er ansvarlig i enkelte tilfelle. Trichomonas vaginalis kan finnes hyppig ved abacterial urethritis. Entomoeba histolytica, som årsak til urethral utflod, finnes utelukkende ved nærvær av recto-urethral eller vesical fistula. Bilfarizia er en metozo som gir urethritis heller hyppig i endemiske områder. Slike systemiske sykdommer som tyfus, kusma, influensa og.kopper kan, hvis de er septicemiske, gi urethritis.

Hos en stor prosentandel av individer med akutt eller kronisk urethral utflod er påvisning av neisseria ikke mulig, selv om det foreligger mistanke for en gonorrhoé-irifeksjon. Mange av disse behandles, som gonorrhoé-infeksjoner, og det-er kun hvis de er hårdnakkede etter flere terapeutiske behandlinger, at deres abakterielle art kan erkjennes. Etterfølgende grundig undersøkelse av hele den fremre og bakre uringang og øvre urintrakt kan tøpe at tegnene på betennelse er tilstede, med at. strukturell deformitet ikke er predisponert, og at videre etio-logiske organismer helt er fraværende.

Det er anslått at 80% av ikke-spesifikk urethritis er. abakteriell. To former er fremherskende: den akutte type som minner om akutt gonorrhoé og den subakutte eller Walisiske type. Abakterielle pyuriske betingelser for prostata og den øvre urintrakt er kjent i lang tid, og leilighetsvis er urethritis for-bundet med symptomer som skyldes den øvre urintrakt. Den akutte abakterielle urethritis har vanligvis sin begynnelse 1-5 dager etter samleie. En voldsom materieutflod inntrer mens urinåp-ningen blir rød, og det inntrer ledsagende dysuria. At den bakre urinvei er betent, indikeres av hyppig vannlating, trykk og tilslutt hematuria. Det kliniske bilde er så likt det som opptrår. ved gonorrhoé, at det er forbløffende når neisseria ikke er påvisbar. Den differensielle diagnose av en urethral utflod beror på utelukkelse, av den urethritis som foreligger som gonorrhoé, som det første trinn etter utelukkelse av andre, bakterier, fremmedlegemer, trauma, lokale svulster og spesi-fikke betennelsessykdommer, sensitivitetsreaksjoner,. urethral bekreftelse av systemisk sykdom og angrep av protozor, metazor

.og fungi.

Hovedgjenstanden for foreliggende oppfinnelse er, som

nevnt ovenfor, å frembringe et instrument som vil påvise Neiss-

eria Gonorrhoeae hos mannen, uten bruk av dyrkning eller den klassiske gram-fargemetode, hvilke begge er tidskrevende og dyre å gjennomføre, og hvilke begge krever trenet personell og laboratorieutstyr.

Instrumentet ifølge oppfinnelsen omfatter, som nevnt, en bærer for en reagens fra gruppen oksydaseprøvende reagenser,

kjent som fenylendiaminer, og man benytter en reagens valgt blant følgende: p-aminodimetylanilinoksalat, N,N-dimety1-p-fenylendiamin-dihydroklorid, N,N-dimetyl-p-fenylendiaminoksalat, N,N-dimetyl-p-fenylendiamin-mono-hydroklorid og N,N,N',N'-tetrametyl-p-fenylendiamin-dihydroklorid. En bærer av et hvilket som helst egnet materiale, slik som dakronfiber, bomullsfiber eller et annet porøst materiale, impregneres eller mettes med en av disse reagenser under spesielle betingelser, som beskrives nedenfor, og tørkes deretter. Den forblir i tørr tilstand inntil den aktiveres med et fuktemiddel.

Bæreren er en av hovedkomponentene i instrumentet ifølge oppfinnelsen, og den inneholder den reaktive kjemiske forbind-

else som er i stand til å identifisere gonokokker. I tørr tilstand vil bæreren forbli stabil og ha en lang levetid. En annen viktig komponent er fuktemidlet, som er adskilt fra bæreren ved at det inneholdes i en knusbar beholder. Når den knusbare beholder knuses, frigjøres fuktemidlet i den, og dette aktiverer reagensen på bæreren. Denne bringes etter at den er gjort følsom, i kontakt med prøven, på spissen av en vattpinne, reagerer med tilstedeværende gonokokker og forårsaker at prøven på vattpinnen, antar en karakteristisk farge, avhengig av den valgte reagens.

Bæreren er nær fargeløs av utseende og forårsaker ingen forstyrrende reaksjon da den Ikke reagerer kolorimetrisk. Fargeforandringen inntrer på prøven som er samlet på vattpinnen. Reaksjonstiden for å.indikere en positiv prøve, ligger vanlig-

vis innen området 30-120 sek.

Fuktemidlet i beholderen kan bestå av vann, fysiologisk

salt, pH-bufferoppløsninger eller en hvilken som helst oppløsn-ing eller kombinasjon av oppløsninger som fremmer oksydasereak-sjonen eller gjør den følsom. Reguleringen av pH-verdien i

fuktemidlet er ønskelig for å forhindre autooksydasjon av reag-ensen på bæreren. Det foretrukne pH-område for fuktemidlet eir ' 6,5-7,2. For nærmere å illustrere fremgangsmåten til gjennom-føring av prøven ved bruk av de foran nevnte reagenser, henvises det til tegningen hvor: fig. 1 viser en type instrument som er egnet til bruk ved gjennomføring av fremgangsmåten til påvisning av Neisseria Gonorrhoeae, og den viser instrumentet før bruk i en prøve i

den form det selges, som et pakket system bestående av to hoved-, deler; og

fig. 2 viser instrumentet som er. vist i fig. 1, etter at det har vært benyttet til en prøve.

Med nærmere henvisning til tegningene; som viser en type instrument til gjennomføring av fremgangsmåten, er 10^et før av transparent fleksibel plast i hvilket det er skjøvet inn en bærer 12 av bomull, som er imprégnert eller mettet med reagensen, og tørket. Bæreren er anbragt i en knusbar beholder 14, som er anbrakt i den lukke ende av røret, og en hette 16 er anbrakt over den åpne ende av røret, mens en steril vattpinne 18 med et plasthåndtak 20, som skal benyttes til oppsamling av en.prøve •

av eksudatet, er forseglet i en separat steril konvolutt 22,

og røret og konvolutten er pakket sammen i et omslag eller en annen egnet beholder som ikke er vist. Mens veggstrukturen i plastrøret er fleksibel, har røret tilstrekkelig stivhet til - vanligvis å holde en generell sylindrisk form og til å tillate lett innføring av vattpinnen etter at en prøve av eksudatet er tatt.. Beholderen inneholder et egnet fuktemiddel, slik som. beskrevet heri, og er tilstrekkelig sprø til. at den lett kan V. knuses når sidene av det fleksible rør presses innover mellom tommel og pekefiner, hvorved beholderen splintres slik at, væske-:-innholdet fukter materialet som er impregnert.Ti bæreren, tiyilkén"-;' vanligvis presses inn i fluidet og det knuste glass, når vattpinnen føres inn i røret. Når vattpinnen, som inneholder prøven, kommer i kontakt med bæreren, skjer øyeblikkelig - en - reaksjon mellom prøven på vattpinnen dg reagensen i bæreren, og, ;:>; " hvis gonokokker er tilstede, vil prøven på vattpinnen forandre '; farge, vanligvis til purpur, rødoransjé eller mørkegrå, avhengig av reagensen, som benyttes i bæreren, for således .å indikere en •_ . positiv prøve. Reaksjonstiden for å indikere én' pos-itiv prøve.,/,' ligger vanligvis innen området 30-120 sek..'; - v

Foretrukne bestanddeler av instrumentet ifølge oppfinnelsen illustreres nedenfor.

En 1%-ig oppløsning av N,N,N',N'-tetrametyl-p-fenylendiamin-dihydroklorid prepareres som følger: 1 gram av reagenser tilsettes til 35 ml destillert vann som er brakt til koking og deretter avkjølt. Oppløsningen bevirkes ved hurtig omrøring.

64 ml etylalkohol ("Fisher A-407") tilsettes deretter og dette omrøres. Strimler av bomull "vebril", 19,05 mm brede og 508 mm lange, dyppes deretter en av gangen i oppløsningen, anbringes på en nylonsjikt i horisontal stilling og tillates å lufttørke. De tørre strimler skjæres deretter opp i stykker med en lengde

på 14,29 mm. Dette er bærerne.

En fysiologisk saltoppløsning fremstilles ved å tilsette 85 gram natriumklorid til 99 ml destillert vann, og pH-verdien

justeres til 7,0. Denne oppløsning blir fuktemidlet. Knusbare beholdere, som inneholder \ ml av denne oppløsning, fremstilles, da dette er den mengde som er nødvendig til helt å fukte en 19,05 mm bred og 14,29 mm lang bærer.

Beholderen, som har en omtrentlig diameter på 7 mm og en lengde på 35 mm, anbringes på bunnen av et fleksibelt glassrør med en innvendig diamter på omtrent 8 mm og en lengde på 160 mm. En bærer, som er fremstilt ved den ovenfor angitte teknikk, rulles opp og presses ned i røret slik at den kommer i kontakt med beholderen. En teleskophette med en J.engde på omtrent 65 mm, anbringes over. den åpne ende av plastrøret for å lukke systemet. En steril dakron-vattpinne, anbrakt på en plastikkpinne, med en lengde på omtrent 150 mm, pakkes sammen med reagens-systemet, og denne kombinasjon blir diagnoseinstrumentet. Denne vattpinne foreligger separat i sin egen sterile pergamynkonvolutt.

Den ovenfor angitte enkle pakning bestående av to enheter, er tilpasset salg gjennom vanlige farmasøytiske kanaler til leger, klinikker og hospitaler, og pakningen er umiddelbart til-gjengelig for en prøve, og hurtig diagnose av pasientens tilstand på stedet hvor prøven tas. Når en diagnoseprøve på gonorrhoé skal gjennomføres, åpnes pakningen, og den sterile vattpinne fjernes fra sitt omslag og en prøve av eksudatet samles på vattpinnens spiss. Den teleskopiske hette fjernes deretter fra plastrøret, og vattpinnen føres med spissen først inn i plast-røret. Teleskophetten settes deretter på igjen. Det fleksible . rør presses deretter der hvor beholderen ligger for å knuse denne og firgjøre inneholdet. Samtidig presses teleskophetten ned og tvinger den prøvebærende vattpinne i kontakt med bæreren. Dette tvinger også bæreren ned i fuktemidlet for å aktivere systemet. Prøven på vattpinnen blir purpurfarget i løpet av to minutter, hvis det er en positiv prøve på gonorrhoé. Vattpinnen kan trekkes ut fra bæreren omkring 2,5 cm for å lette avlesning av prøveresultatet, dvs. fargeforandringen som foregår i prøven på vattpinnen. Bruken av denne prøve gir derfor legen eller klinikken et hurtig og nøyaktig diagnoseverktøy idet første trinn i den differensielle diagnose.

For ytterligere å vise følsomheten i dette system og evnen til å påvise gonokokker nøyaktig på det sted hvor prøven samles på pinnen, gjentas den ovenfor angitte fremgangsmåte og en kultur av Neisseria Gonorrhoeae, benyttes som representativ for eksudatet i det foregående eksempel. I dette eksempel benyttes vattpinnen til å samle noen kolonier fra en petriskålkul-tur. Den samme fremgangsmåte gjennomføres med dette instrument. En distinkt purpurfarging av bakteriene på vattpinnen vil be-merkes i løpet av 1 min. Den nær fargeløse bærer og den hvite bakgrunn av dakron-vattpinnen gjør identifiseringen av organis-mene på vattpinnen klar og distinkt, akkurat som den vil gjøre med eksudatet direkte fra en pasient.

Claims (1)

1. Instrument til bruk ved direkte påvisning av Neisseria Gonorrhoeae uten dyrkning ved å fremkalle en initial distinkt fargeforandring på en vattpinne i instrumentet etter oppsamling av en prøve på denne, karakterisert ved at instrumentet omfatter en tørr bærer for et oksydaseprøvende reagens som er p-amino-dimetylanilinoksalat, N,N-dimety1-p-f enylendiamin-dihydroklorid, N,.N-dimetyl-p-f enylendiaminoksalat, N,N-dimetyl-p-fenylendiamin-monohydroklorid eller N,N,N',N'-tetra-metyl-p-fenylendiamin-dihydroklorid, og en knusbar beholder for en aktiveringsvæske som består av vann, physiologisk saltoppløs-ning eller en bufferoppløsning med pH 6,5-7,2, begge deler som

   i og for seg kjent anbrakt i et fleksibelt rør med téleskopisk hette, samt en i og for seg kjent vattpinne beregent for inn-

   føring av en prøve i det fleksible rør, idet det på vattpinnen inntrer en fargeforandring når prøven er innført og beholderen knuses.