NO136205B - - Google Patents
Download PDFInfo
- Publication number
- NO136205B NO136205B NO3755/68A NO375568A NO136205B NO 136205 B NO136205 B NO 136205B NO 3755/68 A NO3755/68 A NO 3755/68A NO 375568 A NO375568 A NO 375568A NO 136205 B NO136205 B NO 136205B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- growth
- agar
- positive
- hydrolysis
- negative
- Prior art date
Links
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 49
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 49
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 49
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 39
- ROWKJAVDOGWPAT-UHFFFAOYSA-N Acetoin Chemical compound CC(O)C(C)=O ROWKJAVDOGWPAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 27
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims description 24
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 24
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 21
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 claims description 21
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 19
- GFAZHVHNLUBROE-UHFFFAOYSA-N hydroxymethyl propionaldehyde Natural products CCC(=O)CO GFAZHVHNLUBROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 claims description 16
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 13
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 8
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 claims description 6
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 claims description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 241000193752 Bacillus circulans Species 0.000 claims description 3
- 241000193747 Bacillus firmus Species 0.000 claims description 3
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 claims description 3
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 claims description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 3
- 241000194103 Bacillus pumilus Species 0.000 claims description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 2
- 235000021184 main course Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 claims 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 187
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 102
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 85
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 66
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 66
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 54
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 54
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 51
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 51
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 50
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 50
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 50
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 49
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 34
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 34
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 34
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 24
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 22
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 19
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 19
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 19
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 19
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 18
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 18
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 18
- 241000894007 species Species 0.000 description 18
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 17
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 17
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 17
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 17
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 17
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 17
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 17
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 17
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 17
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 17
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 17
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 17
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 17
- 230000009604 anaerobic growth Effects 0.000 description 16
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 16
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 15
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 15
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 15
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 15
- CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M methylene blue Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 15
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 13
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 8
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 7
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 7
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 7
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 4
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 235000019832 sodium triphosphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 3
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-I triphosphate(5-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 241001624918 unidentified bacterium Species 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L calcium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ca+2] AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000920 calcium hydroxide Substances 0.000 description 2
- 229910001861 calcium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000010871 livestock manure Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 229910000031 sodium sesquicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000018341 sodium sesquicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- WCTAGTRAWPDFQO-UHFFFAOYSA-K trisodium;hydrogen carbonate;carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].OC([O-])=O.[O-]C([O-])=O WCTAGTRAWPDFQO-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 description 2
- LTSFKYMMVSEWPP-BVFKYQGHSA-N (2r,3r,4r,5r)-hexane-1,2,3,4,5,6-hexol;(2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O LTSFKYMMVSEWPP-BVFKYQGHSA-N 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 235000003276 Apios tuberosa Nutrition 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 1
- 235000010744 Arachis villosulicarpa Nutrition 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 1
- VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N Methyl methacrylate Chemical compound COC(=O)C(C)=C VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920005372 Plexiglas® Polymers 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000006394 Sorghum bicolor Species 0.000 description 1
- 235000011684 Sorghum saccharatum Nutrition 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 230000004308 accommodation Effects 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 229940005348 bacillus firmus Drugs 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 238000005842 biochemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005266 casting Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- -1 cornmeal Chemical compound 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 230000003861 general physiology Effects 0.000 description 1
- 230000003648 hair appearance Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- DGMJZELBSFOPHH-KVTDHHQDSA-N mannite hexanitrate Chemical compound [O-][N+](=O)OC[C@@H](O[N+]([O-])=O)[C@@H](O[N+]([O-])=O)[C@H](O[N+]([O-])=O)[C@H](O[N+]([O-])=O)CO[N+]([O-])=O DGMJZELBSFOPHH-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 229950003934 mannite hexanitrate Drugs 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- KELXKDDAALYTDI-BTVCFUMJSA-N nitric acid;(2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal Chemical compound O[N+]([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O KELXKDDAALYTDI-BTVCFUMJSA-N 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000007065 protein hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229940071207 sesquicarbonate Drugs 0.000 description 1
- 239000010865 sewage Substances 0.000 description 1
- 235000017550 sodium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960001922 sodium perborate Drugs 0.000 description 1
- GRVFOGOEDUUMBP-UHFFFAOYSA-N sodium sulfide (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[S-2] GRVFOGOEDUUMBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 description 1
- YKLJGMBLPUQQOI-UHFFFAOYSA-M sodium;oxidooxy(oxo)borane Chemical compound [Na+].[O-]OB=O YKLJGMBLPUQQOI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/52—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea
- C12N9/54—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea bacteria being Bacillus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
- A61K8/66—Enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q9/00—Preparations for removing hair or for aiding hair removal
- A61Q9/04—Depilatories
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
- C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
- C11D3/16—Organic compounds
- C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
- C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C14—SKINS; HIDES; PELTS; LEATHER
- C14C—CHEMICAL TREATMENT OF HIDES, SKINS OR LEATHER, e.g. TANNING, IMPREGNATING, FINISHING; APPARATUS THEREFOR; COMPOSITIONS FOR TANNING
- C14C1/00—Chemical treatment prior to tanning
- C14C1/06—Facilitating unhairing, e.g. by painting, by liming
- C14C1/065—Enzymatic unhairing
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Zoology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Birds (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Treatment And Processing Of Natural Fur Or Leather (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Denne oppfinnelse angår en fremgangsmåte for fremstilling av nye enzymer som oppviser en markert og nyttig proteolytisk aktivitet ved høye alkaliteter.
Innen forskjellige felter er det et behov for proteolytiske enzymer,
og i noen av disse felter er det viktig at enzymene utøver optimal proteo-
lytisk aktivitet ved høye pH-verdier på opptil lo til 12 og enda høyere, og at enzymene er i besittelse av andre nyttige egenskaper, så som stabilitet ved forhøyet temperatur og/eller stabilitet i nærvær av ikke-enzymatiske stoffer som utgjør en del av de enzymholdige preparater»
Det er kjent at proteolytiske enzymer, kan fremstilles ved dyrkning
av visse bakterier under aerobe betingelser, men de proteolytiske enzymer som fremstilles ved de kjente dyrkningsmetqder, oppviser optimal proteolytisk aktivitet overfor hemoglobin ved en pH-verdi som i de gunstigste tilfeller ikke. er høyere enn 9.
Foreliggende oppfinnelse er basert på den iaktagelse at det i naturen eksisterer et stort antall hittil ukjente bakterier som under sitt stoffskifte danner proteolytiske enzymer som utøver optimal proteolytisk aktivitet overfor hemoglobin ved høye pH-verdier på opptil lo til 12, og som har andre egenskaper som gjør dem velegnet til bruk innen forskjellige felter av industrien.
Fra prøver av jord, dyregjødsel og en rekke andre kilder i naturen
har oppfinnerene isolert ca. loo stammer av bakterier, utført taksonomiske undersøkelser og funnet at alle de hittil ukjente bakterier hører til slekten Bacillus, men at ingen av dem tilhører noen art som oppfinnerene kjenner til, og at de etter oppfinnerenes vurdering ikke hører til de samme arter. Innenfor den samme art var det dessuten i de fleste tilfeller forskjellige stammer og flere varianter.
For å isolere de ovenfor omtalte, hittil ukjente bakterier har man benyttet seg av en ny teknikk som kjennetegnes ved at isoleringen utføres på næringsmedier som har en pH-verdi i området 9 til 11, for å finne frem til bakterier som danner proteolytiske enzymer.
Prøvene fra jord, dyregjødsel eller andre kilder fra naturen er med andre.ord spredd ut på næringsmedier med den ovenfor angitte høye pH-verdi, og de bakterier som kan vokse under slike alkaliske betingelser, blir deretter isolert og underkastet ytterligere undersøkelser med hensyn til art og evne til å danne enzymer.
I de fleste tilfeller har man i henhold til oppfinnelsen også benyttet seg av en rekke forskjellige anrikningsmetoder.
Anrikningsmetoder er kjente innen teknikken. Det kan f.eks. henvises til Hayaishi, Methods in Enzymology, Vol. 1, 126-131. Et prinsipp er å la en prøve fra naturen vokse på et næringsmedium som har en spesiell og utvalgt' sammensetning som begunstiger veksten av en mikroorganisme som danner stoff-skifteprodukter med de tilsiktede egenskaper. Et annet prinsipp er å lagre prøven fra naturen sammen med en forbindelse, så som et uorganisk salt, som fremmer utviklingen av den ønskede mikroorganisme, jfr. M.A. El-Nakeeb and H.A. Lechevalier, Appl. Microbiol., Vol. 11, 75 (1963), og deretter å spre prøven ut på et egnet næringsmedium som er regulert til en pH-verdi i området 8 til 12.
Noen av de hittil ukjente stammer av slekten Bacillus som er isolert og undersøkt taksonomisk og med hensyn til dannelse av proteolytiske enzymer, er angitt i den følgende tabell I, hvor den første spalte inneholder oppfinnerenes referansenummer, den annen spalte det nummer under hvilket bakteriene er deponert ved The National Collection of Industrial Bacteria, Torry Research Station, Aberdeen, Skotland, den tredje spalte isoleringskilden, og den fjerde spalte den anvendte anrikningsmetode.
De taksonomiske undersøkelser av alle disse medlemmer av slekten Bacillus er utført under anvendelse av metodene beskrevet av Smith, Gordon og Clark i "Aerobic Sporé-forming Bacteria", U.S. Dep-artment of Agr., Monograph No. 16 (1952). Disse metoder har til nu vært ansett som de mest egnede, men det var nødvendig å modifisere disse på grunn av åt alle næringsmidlene måtte reguleres til en mye høyere pH-verdi enn den som er angitt av Smith, Gordon og Clark fordi alle Baeillusartene angitt i tabell I vokser ved høyere pH-verdier.
pH-reguleringen er skjedd ved aseptisk tilsetning av 0,1 M natriumseskvikarbonat til mediet efter autoklavering. Dette er skjedd i alle de tilfeller, hvor intet annet er anført.
Bakteriene kan deles forholdsvis nøyaktig i morfologiske grupper. Disse grupper skiller seg fra hverandre i en slik grad at de faktisk representerer adskilte arter. Artene nr. I-III har en del likhetspunkter med Bacillus subtilis, Bacillus pumilus, Bacillus licheniformis og Bacillus firmus, og artene nr. IV-VI minner en del om Bacillus circulans.
Innenfor de morfologiske grupper finner man variasjoner i de biokjemiske reaksjoner. På grunnlag av disse variasjoner er gruppene delt i varianter som representeres ved en eller flere stammer.
Art nr. I (tilhørende morfologisk gruppe I ifølge Bergey)•
Varietet a;
C 300, C 301, C 360, C 372, C 374.
Morfologi:
Grampositive.
Vekst på næringsagar, pH 7,3, like så god eller bedre enn på næringsagar pH 9,7.
Maksimal veksttemperatur 50-55 C.
Ingen eller bare liten vekst på glukose-mannitolagar pH 9,7 med nitrat som eneste nitrogenkilde.
Hydrolyse av stivelse: Positiv, smal hydrolysesone efter 7 dager. Hydrolyse av gelatin: Positiv.
Hydrolyse av kasein: Positiv.
Veksten på glukose-næringsagar er den samme som veksten på nærings-agar eller kraftigere.
Veksten på sojabønneagar er kraftigere og bløtere enn på næringsagar. Veksten på tyrosinagar er den samme som på næringsagar.
Veksten på flytende substrat gir medium uklarhet med kraftig sedi-mentering. Det er ingen hinnedannelse eller, den dannede hinne er tynn og skjør.
NaCl-substrat. God vekst i 5% NaCl, vekst i 7% NaCl.
Produksjon av acetoin: Negativ.
Reduksjon av nitrat til nitrit: Positiv.
Anaerob vekst i glukosesubstrat: Ingen eller liten vekst; pH 7,8 ellér høyere efter 14 dager (pH-verdien er mediet innstilt på 9 før podning).
Indolproduksjon: Negativ
Katalasedannelse: Positiv
Ureasedannelse: Negativ
Metylenblåttreduseres
Varietet b:
C 302, C 334.
Morfologi:
Vekst på næringsagar, pH 7,3, temmelig langsom de første to dager, hvorefter veksten nesten kan sammenlignes med veksten på nær-
ingsagar, pH 9,7.
Maksimal veksttemperatur 40-50°C.
Ingen eller liten vekst på glukose- eller mannitolagar pH 9,7 med nitrat som eneste nitrogenkilde.
Hydrolyse av stivelse: Positiv, bred hydrolysesone.
Hydrolyse av gelatin: Positiv.
Hydrolyse av kasein: Positiv.
Veksten på glukose-næringsagar er den samme som veksten på nærings-agar eller kraftigere.
Veksten på sojabønneagar er kraftigere og bløtere enn på nærings-agar.
Veksten på tyrosinagar er den samme som på næringsagar.
Veksten på flytende substrat gir medium uklarhet med kraftig sedi-mentering. Det er ingen hinnedannelsé eller den dannede hinne er tynn og skjør.
NaCl-substrat. God vekst i 5% NaCl, vekst i 7% NaCl.
Produksjon av acetoin: Negativ.
Reduksjon av nitrat til nitrit: Negativ.
Anaerob vekst i glukosesubstrat: Ingen eller liten vekst; pH 7,8 eller høyere efter 14 dager (pH-verdien er mediet innstilt på 9 før podning).
Indolproduksjon: Negativ Katalaseproduksjon: Positiv
Ureasedannelse.: Negativ
Metylenblått reduseres
Varietet c:
C 323, C 339, C 352, C 369.
Morfologi:
Bevegelige eller gramvariable.
Moderat til liten vekst på næringsagar pH 7,3.
Maksimal veksttemperatur 37-50°C.
Ingen eller liten vekst på glukose- eller matinitolågar med nitrat som eneste nitrogenkilde.
Hydrolyse av stivelse: Positiv, bred hydrolysesone.
Hydrolyse av gelatin: Positiv.
Hydrolyse av kasein: Positiv.
Veksten på glukose-næringsagar er den samme som veksten på nærings-agar eller kraftigere.
Veksten på sojabønneagar er kraftigere og bløtere enn på nærings-agar. Veksten på tyrosinagar er den samme som på næringsagar.
Veksten på flytende substrat gir medium uklarhet med kraftig .sedi-mentering. Det er ingen hinnedannelse eller den dannede hinne er tynn og skjør.
NaCl-substrat. God vekst i 5% NaCl,.vekst i 7% NaCl.
Produksjon av acetoin: Negativ. Reduksjon av nitrat til nitrit: Negativ.
Anaerob vekst i glukosesubstrat: Ingen eller liten vekst; pH 7,8 eller høyere efter 14 dager (pH-verdien er mediet innstilt på- 9 før podning).
Indolproduksjon: Negativ
Katalasedannelse: Positiv Ureasedannelse: Negativ
Metylenblått reduseres
Varietet d:
C304, C 311, C 336.
Morfologi:
Moderat til liten vekst på næringsagar ved pH 7,3.
Maksimal veksttemperatur 37°C.
Liten vekst på glukose- eller mannitolagar ved pH 9,7 med nitrat som eneste nitrogenkilde.... Hydrolyse av stivelse: Negativ.
Hydrolyse av gelatin: Positiv.
Hydrolyse av kasein: Positiv.
Veksten på glukose-næringsagar er den samme som veksten på nærings-agar eller kraftigere.
Veksten på sojabønneagar er kraftigere og bløtere enn på næringsagar. Veksten på tyrosinagar er den samme som på næringsagar.
Veksten på flytende substrat gir medium uklarhet med kraftig sedi-mentering. Det er ingen hinnedannelse eller den dannede hinne er tynn og skjør.
NaCl-substrat. God vekst i 5% NaCl, vekst i NaCl.
Produksjon av acetoin: Negativ.
Reduksjon av nitrat til nitrit: Negativ.
Anaerob vekst i glukosesubstrat: Ingen eller liten vekst: pH 7,8 eller høyere efter 14 dager (pH-verdien er mediet innstilt på 9 før podning).
Indolproduksjon: Negativ
Katalasedannelse: Positiv
Ureasedannelse: Negativ
Metylenblått reduseres
A rt nr. II (tilhørende den morfologiske gruppe I ifølge Bergey)
C 335, C 341
Morfologi:
Meget liten vekst på næringsagar ved pH 7,3.
Maksimal veksttemperatur 37°C.
Ingen eller liten vekst på glukose- eller mannitolagar med nitrat som eneste nitrogenkilde.
Hydrolyse- av stivelse: Negativ.
Hydrolyse av gelatin: Positiv.
Hydrolyse av kasein: Positiv.
Veksten på glukose-næringsagar er den samme som veksten på nærings-agar eller kraftigere.
Veksten på sojabønneagar er kraftigere og bløtere enn på næringsagar.
Veksten på tyrosinagar er den samme som på næringsagar.
Veksten på flytende substrat gir medium uklarhet.med kraftig sedi-mentering. Det er ingen hinnedannelse eller den dannede hinne er tynn og skjør.
NaCl-substrat. God vekst i 5% NaCl, vekst i 7% NaCl.
Produksjon av acetoin: Negativ.
Reduksjon av nitrat til nitrit: Negativ. Anaerob vekst i glukosesubstrat: Ingen eller liten vekst; :pH 7,8 eller høyere efter 14 dager (pH-verdien er mediet innstilt på .9 før podning).
Indolproduksjon: Negativ Katalasedannelse: Positiv
Ureasedannelse: Negativ
Metylenblått reduseres
Art nr. III
•
Varietet a:
C 326, C 342
Morfologi:
Ingen eller liten vekst på næringsagar ved pH 7,3.
Maksimal veksttemperatur 50°C.
Ingen eller liten vekst på glukose- eller mannitolagar ved pH 9,7 med nitrat som eneste nitrogenkilde.
Hydrolyse av stivelse: Positiv{ bred hydrolysesone.
Hydrolyse av gelatin: Positiv.
Hydrolyse av kasein: Positiv.-
Veksten på glukose-næringsagar er den samme som veksten på nærings-agar eller kraftigere.
Veksten på sojabønneagar er kraftigere og bløtere enn på nærings-agar.
Veksten på tyrosinagar er den samme som nærings-agar.
Veksten på flytende substrat gir medium uklarhet med kraftig sedi-mentering. Det er ingen hinnedannelse eller den dannede hinne er tynn og skjør.
NaCl-substrat: God vekst i 5% NaCl, vekst i 7.% NaCl.
Produksjon av ace.toin: Negativ.
Reduksjon av nitrat til nitrit: Positiv. Anaerob vekst i glukosesubstrat: Ingen eller liten vekst:; pH. 7,8 eller høyere 'efter 14 dager .(,pH-verdien er mediet innstilt på 9. før
.podning) .
Indo lp rod uk s J o n-: Negativ
Katalasedaftinelse.: 'Positiv
Ureasedannelse;: .Negativ
Metylenblått reduseres
Varietet b . :
C 347, C 350.
' Morfologi.:
Moderat vekst på næringsagar ved pH 7., 3.
Maksimal veksttemperatur 50°C.
Liten vekst på glukose- eller mannitolagar ved pH 9,7 med nitrat som eneste nitrogenkilde.
Hydrolyse av stivelse: Positiv, bred hydrolysesone.
Hydrolyse av gelatin: Positiv.
Hydrolyse av kasein: Positiv.
Veksten på glukose-næringsagar er den samme som veksten på nærings-agar eller kraftigere.
Veksten på sbjabønneagar er kraftigere og bløtere enn på nærings-agar. Veksten på tyrosinagar er den samme som på næringsagar.
Veksten på flytende substrat gir medium uklarhet med kraftig sedi-mentering. Det er ingen hinnedannelse eller den dannede hinne er tynn og skjør.
NaCl-substrat. God vekst i 5% NaCl, vekst i 7% NaCl.
Produksjon åv acetoin: Negativ.
Reduksjon av nitrat til nitrit: Positiv.
Anaerob vekst i glukosesubstrat: Ingen eller liten vekst;.pH 7,8 eller høyere efter 14 dager (pH-verdien er mediet innsilt på 9. før podning).
Indolproduksjon: Negativ
Katalasedannelse: Positiv
Ureasedannelse: Negativ
Metylenblått reduseres
Varietet c:
C' 337, C 340.
Morforlogi:
Gramnegatiye eller gramvariable. Moderat vekst på næringsagar ved pH 7,3.
Maksimal veksttemperatur henholdsvis 37 og 50°C.
Liten vekst på glukose- eller mannitolagar ved 9,7 med nitrat som eneste nitrogenkilde.
Hydrolyse av stivelse: Positiv, bred hydrolysesone.
Hydrolyse av gelatin: Positiv.
Hydrolyse av casein: Positiv. Veksten på glukose-næringsagar er den samme som veksten på nærings-agar eller kraftigere.
Veksten på sojabønneagar er kraftigere og bløtere enn på nærings-agar.
Veksten på tyrosinagar er den samme som på næringsagar.
Veksten på flytende substrat gir medium uklarhet med kraftig sedi-mentering. Det er ingen hinnedannelse eller den dannede hinne er tynn og skjør.
NaCl-substrat. God vekst i 5% NaCl, vekst i 7% NaCl.
Produksjon av acetoin: Negativ.
Reduksjon av nitrat til nitrit: Negativ.
Anaerob vekst i glukosesubstrat: Ingen eller liten vekst; pH 7,8 eller høyere efter 14 dager (pH-verdléh er mediet innstilt på 9 før podhing).
indolproduksjon: Negativ
Katålasedannelse: Positiv
Ureasedannelse: Negativ Metylenblått reduserés Varietet d: C 338, C 343, C 346, C 348, C 349
Morfologi:
Gramvariable eller gramnegative.
Ingen eller bare liten vekst på næringsagar ved pH 7,3.
Maksimal veksttemperatur 45-50°C.
Ingen eller meget liten vekst på glukose- eller mannitolagar ved pH 9,7 med nitrat som eneste nitrogenkilde.
Hydrolyse av stivelse: Positiv, bred hydrolysesone.
Hydrolyse av gelatin: Positiv.
Hydrolyse av kasein: Positiv.
Veksten på glukose-næringsagar er den samme som veksten på nærings-agar eller kraftigere.
Veksten på sojabønneagar er kraftigere og bløtere enn på nærings-agar. Veksten på tyrosinagar er den samme som på næringsagar.
Veksten på flytende substrat gir medium uklarhet med kraftig sedi-mentering. Det er ingen hinnedannelse eller den dannede hinne er tynn og skjør.
NaCl-substrat. God vekst i 5% NaCl, vekst i 7% NaCl.
Produksjon av acetoin: Negativ.
Reduksjon av nitrat til nitrit: Negativ.
Anaerob vekst i glukosesubstrat. Ingen eller liten vekst; pH 7,8 eller høyere efter 14 dager (pH-verdlen er mediet innstilt på 9 før podning).
Indolproduksjonen: Negativ
Katalasedannelse: Positiv
Ureasedannelse: Negativ
Metylenblått reduseres
Varietet e:
C 324, C 355.
Morfologi:
Bevegelige.
Grampositive.
Ingen eller bare meget liten vekst på næringsagar ved pH 7,3. Maksimal veksttemperatur 45-50°C.
Moderat vekst på glukose- eller mannitolagar ved pH 9,7 med nitrat som eneste nitrogenkilde. Hydrolyse av stivelse: Positiv, bred hydrolysesone.
Hydrolyse av gelatin: Positiv.
Hydrolyse av kasein: Positiv.
Veksten på sojabønneagar er kraftigere og bløtere enn på nærings-agar.
Veksten på tyrosinagar er den samme som på næringsagar.
Veksten på flytende substrat gir medium uklarhet med kraftig sedi-mentering. Det er ingen hinnedannelse eller den dannede hinne er tynn og skjør.
NaCl-substrat. God vekst i 5% NaCl, vekst i 7% NaCl.
.Produksjonen av acetoin: Negativ,
reduksjon av nitrat til nitrit: Positiv.
Anaerob vekst i glukosesubstrat: Ingen eller liten vekst; pH 7,8 eller høyere efter 14 dager (pH-verdien er mediet innstilt på 9 før podning).
Indolproduksjon: Negativ
Katalasedannelse: Positiv
Ureasedannelse: Negativ
Metylenblått reduseres
Varietet f:
C 353.
Morfologi:
Bevegelig.
Gramnegativ.
Moderat vekst på næringagar ved pH 7,3.
Maksimal veksttemperatur 50°C.
Moderat vekst på glukose- eller mannitolagar ved pH 9,7 med nitrat som eneste nitrogenkilde.
Hydrolyse av stivelse: Positiv, bred hydrolysesone.
Hydrolyse av gelatin: Positiv.
Hydrolyse av kasein: Positiv.
Veksten på glukose-næringsagar er den samme som veksten på nærings-agar eller kraftigere.
Veksten på sojabønneagar er kraftigere og bløtere enn på nærings-agar.
Veksten på tyrosinagar er den samme som på næringsagar.
Veksten på flytende substrat gir medium uklarhet med kraftig sedi-mentering. Det er ingen hinnedannelse eller den dannede hinne er tynn og skjør.
NaCl-substrat. God vekst i 5% NaCl, vekst i 7% NaCl.
Produksjon av acetoin: Negativ.
Reduksjon av nitrat til nitrit: Positiv.
Anaerob vekst i glukosesubstrat. Ingen eller liten vekst; pH 7,8 eller høyere efter 14 dager (pH-verdien er mediet innstilt på 9 før p<p>dning).
Indolproduksjon: Negativ
Katalasedannelse: Positiv
Ureasedannelse: Negativ
Metylenblått reduseres.
Art nr. IV (tilhørende den morfologiske gruppe II ifølge Bergey) .
Varietet a:
C 303, C 354, C 357, C 366, C 367, C 370, C 371, C 375, C 378.
Morfologi:
Moderat til god vekst på næringsagar ved pH 7,3.
Maksimal veksttemperatur 57°C.
Moderat til god vekst på glukose- eller mannitolagar ved pH 9,7 med nitrat som eneste nitrogenkilde. Hydrolyse av stivelse: Positiv, moderat hydrolysesone.
Hydrolyse av gelatin: Positiv.
Hydrolyse av kasein: Positiv.
Veksten på glukose-næringsagar er den samme som veksten på nærings-agar eller kraftigere.
Veksten på sojabønneagar er kraftigere og bløtere enn på nærings-agar.
Veksten på tyrosinagar er den samme som på næringsagar.
Veksten på* flytende substrat gir medium uklarhet med kraftig sedi-mentering. Det er ingen hinnedannelse eller den dannede hinne er tynn og skjør. ;NaCl-substrat. God vekst i 5% NaCl, vekst i 7% NaCl. ;Produksjon av acetoin: Negativ. ;Reduksjon av nitrat til nitrit: Positiv. ;Anaerob vekst i glukosesubstrat: Positiv. ;Indolproduksjon: Negativ ;Katålasedannelse: Positiv ;Ureasedannelse: Negativ ;Metylenblått reduseres ;Varietet b: ;C 351, C 356, C 364, C 376, C 377, C 411. ;Morfologi: ;;Moderat til god vekst på næringsagar ved pH 7,3. Maksimal veksttemperatur 57°C. ;Moderat til god vekst på glukose- eller mannitolagar ved pH 9,7. med nitrat som eneste nitrogenkilde. ;Hydrolyse av stivelse: Positiv, moderat hydrolysesone. Hydrolyse av gelatin: Positiv. ;Hydrolyse av kasein: Positiv. ;Veksten på glukose-nræingsagar er den samme som veksten på nærings-agar eller kraftigere. ;Veksten på sojabønneagar er kraftigere og bløtere enn på nærings-agar. ;Veksten på tyrosinagar er den samme som på næringsagar. ;Veksten på flytende substrat gir medium uklarhet med kraftig sedi-mentering. Det er ingen hinnedannelse eller den dannede hinne er tynn og skjør. ;NaCl-substrat. God vekst i 5% NaCl, vekst i 7% NaCl. ;Produksjon av acetoin: Negativ. ;Reduksjon av nitrat til nitrit: Positiv. ;Anaerob vekst i glukosesubstrat: Liten vekst; pH 7,8 eller høyere efter 14 dager (pH-verdien er mediet innstilt på 9 før podning). ;Indolproduksjon: Negativ ;Katalasedannelse: Positiv ;Ureasedannelse: Negativ ;Metylenblått reduseres ;Varietet c: ;C 358, C 410 ;Morfologi: ;;Moderat til god vekst på næringsagar ved pH 7,3. ;Maksimal veksttemperatur 57°C. ;Moderat til god vekst på glukose- eller mannitolagar ved pH 9,7 med nitrat som eneste nitrogenkilde. ;Hydrolyse av stivelse: Positiv, moderat hydrolysesone. ;Hydrolyse av gelatin: Positiv. ;Hydrolyse av kasein: Positiv. ;Veksten på glukose-næringsagar er den samme som veksten på nærings-agar eller kraftigere. ;Veksten på sojabønneagar er kraftigere og bløtere enn på nærings-agar. ;Veksten på tyrosinagar er den samme som på næringsagar. ;Veksten på flytende substrat gir medium uklarhet med kraftig, sedi-mentering. Det er ingen hinnedannelse eller den dannede hinne er tynn og skjør. ;NaCl-substrat. God vekst i 5% NaCl, vekst i 7% NaCl. ;Produksjon av acetoin: Negativ. ;Reduksjon av nitrat til nitrit:..Positiv. Indolproduksjon: Negativ ;Katalasedannelse: Positiv ;Ureasedannelse: Negativ ;Méthyleriblått reduseres ;Art, nr. V: (tilhørende den morfologiske gruppe II ifølge Bergey). C 365, C 412. ;Morfologi: ;;Moderat til god vekst på næringsagar ved pH 7,3. ;Maksimal veksttemperatur 57°C. ;God vekst på glukose- eller mannitolagar ved pH 9,7 med nitrat som eneste nitrogenkilde. ;Hydrolyse av stivelse: Positiv, moderat til bred hydrolysesone. Hydrolyse av gelatin: Positiv. ;Hydrolyse av kaséin: Positiv. ;Veksten på glukose-næringsagar er den samme som veksten på nærings-agar eller kraftigere. ;Veksten på sojabønneagar er kraftigere og bløtere enn på nærings-agar. ;Veksten på tyrosinagar er den samme som på næringsagar. ;Veksten på flytende substrat gir medium uklarhet med kraftig sedi-mentering. Det er ingen hinnedannelse eller den dannede hinne er tynn og skjør. ;NaCl-substrat. God vekst i 5% NaCl, vekst i 7% NaCl. ;Produksjon av acetoin: Negativ. ;Reduksjon av nitrat til nitrit: Positiv. ;Anaerob vekst i glukosesubstrat: Positiv ;Indolproduksjon: Negativ ;Katalasedannelse: Positiv ;Ureasedannelse: Negativ ;Art, nr. VI; (tilhørende den morfologiske gruppe II ifølge Bergey) ;Varietet a: ;C 373. ;Morfologi: ;Ingen eller bare liten vekst på næringsagar ved pH 7,3. ;Maksimal veksttemperatur 50°C. ;Ingen eller bare meget liten vekst på glukose- eller mannitolagar ved pH 9,7 med nitrat som eneste nitrogenkilde. ;Hydrolyse av stivelse: Positiv, bred hydrolysesone. ;Hydrolyse av gelatin: Positiv. ;Hydrolyse av kasein: Positiv. ;Veksten på glukose-næringsagar er den samme som veksten på nærings-agar eller kraftigere. ;Veksten på sojabønneagar er kraftigere og bløtere enn på nærings-agar. ;Veksten på tyrosinagar er den samme som på næringsagar. ;Veksten på flytende substrat gir medium uklarhet med kraftig sedi-mentering. Det er ingen hinnedannelse eller den dannede hinne er tynn og skjør. ;NaCl-substrat. God vekst i 5% NaCl, vekst i 7% NaCl. ;Produksjon av acetoin: Negativ. ;Reduksjon av nitrat til nitrit: Positiv. ;Anaerob vekst i glukosesubstrat: Ingen eller liten vekst; på 7,8 eller høyere efter 14 dager (pH-verdien er mediet innstilt på 9 før podning)... ;Indolproduksjon: Negativ ;Katalasedannelse: Positiv ;Ureasedannelse: Negativ ;Metylenblått reduseres. ;Varietet b: ;C 325, C 413. ;Morfologi: ;;Moderat vekst på næringsagar ved pH 7,3. ;Maksimal veksttemperatur 50°C. ;Ingen eller bare meget liten vekst på glukose- eller mannitolagar ved pH 9,7 med nitrat som eneste nitrogenkilde. ;Hydrolyse av stivelse: Positiv, bred hydrolysesone. ;Hydrolyse av gelatin: Positiv. ;Hydrolyse av kasein: Positiv. ;Veksten på glukose-næringsagar er den samme som veksten på nærings-agar eller kraftigere. ;Veksten på sojabønneagar er kraftigere og bløtere enn på nærings-agar . ;Veksten på tyrosinagar er den samme som på nærings-agar. ;Veksten på flytende substrat gir medium uklarhet med kraftig sedi-mentering. Det er ingen hinnedannelse eller den dannede hinne er tynn og skjør. ;NaCl-substrat. God vekst i 5% NaCl, vekst i 7% NaCl. ;Produksjon av acetoin: Negativ. ;Reduksjon av nitrat til nitrit: Negativ. ;Anaerob vekst i glukosesubstrat. Ingen eller liten vekst; pH 7,8 eller høyere efter 14 dager (pH-verdien er mediet instilt på 9 før podning). ;Indolproduksjon: Negativ ;Katalasedannelse: Positiv ;Ureasedannelse: Negativ ;Metylenblått reduseres. ;På grunnlag av oppfinnerenes taksonomiske undersøkelser skulle medlemmene av slekten Bacillus som er angitt i tabell I, kunne klassifiseres slik som angitt i den følgende tabell II. ;Alle de angitte stammer er også dyrket på næringsagar og soya-agar og noen av dem på glukosenitratagar og mannitolnitratagar for å undersøke formen, utseendet og farven på koloniene, men ettersom verdien av disse observasjoner kan diskuteres, er resultatene av oppfinnerenes iaktagelser ikke angitt her. ;Den følgende tabell III angir imidlertid egenskapene, og variasjonene av disse danner grunnlag for oppdeling av variantene innenfor de forskjellige morfologiske grupper: ;Alle artene og stammene i tabell I og II er dyrket med henblikk på produksjon ;av proteolytiske enzymer. Denne dyrkning er utført både i rysteflasker og i tanker i pilotanlegg med kunstig luftning. De oppnådde utbytter er bestemt ved den velkjente Anson hemoglobinmetode, jfr. Journal of General Physiology, 22, 79-89 (1959). En Anson enhet betyr her den mengde proteo- ;lytisk enzym som spalter hemoglobin ved en pH-verdi på lo,l og en temperatur på 25°C i løpet av en reaksjonstid på lo minutter, med en slik opprinnelig hastighet at det pr. minutt dannes en så stor mengde spaltningsprodukter som ikke kan utfelles med trikloreddiksyre, at disse spaltningsprodukter gir den samme farve med fenolreagens som en milliekvivalent tyrosin gjør. ;I henhold til oppfinnelsen tilveiebringes en fremgangsmåte til fremstilling ;av ekstracellulære, proteolytiske enzymer av serintypén i så hoye utbytter som tillater en okonomisk lonnsom utvinning derav, hvilke enzymer oppviser optimal proteolytisk aktivitet overfor hemoglobin, bestemt ved Anson-metoden i nærvær av urinstoff, ved en pH-verdi på minst 10, ved aerob dyrkning av bakterier tilhørende slekten Bacillus i et næringsmedium inneholdende assimilerbare kar-bon-og nitrogenkilder. Fremgangsmåten karakteriseres ved at man anvender pro-toinasedannende stammer, som opprinnelig er isolert fra naturen på et næringsmedium med en pH-verdi i området fra 9 til 11, og hvis egenskaper svarer til egenskapene for de kjente bacillusarter B. subtilis, B. licheniformis, B. pura- ;ilus, B. firmus. eller B. circulans, bortsett fra at de ikke eller bare meget vanskelig kan vokse ved pH verdier under 7, og idet de alle oppviser negativ acetoinreaksjon, og at man under dyrkningens hovedforlo'p opprettholder en pH-verdi- ;i næringsmediet på 7,5 til' 10,5- ;For å oppnå verdifulle enzymer i hoye utbytter og med hoy aktivitet er det ifolge oppfinnelsen særlig hensiktsmessig, at man anvender én eller flere av de i tabell I oppforte bakteriestammer, og av samme grunn er det ifolge oppfinnelsen også særlig hensiktsmessig, at man utvinner enzymer, hvis proteolytiske aktivitet utgjor 80-100^ av deres maksimale aktivitet, når den måles efter Anson-metoden ved en pH-verdi på 12. ;Næringsmediet er sammensatt i overensstemmelse med kjente prinsipper. ;Egnede assimilerbare karbonkilder er karbohydrater, så som sakkarose, ;glukose, stivelse, kornmel, malt, ris, durra osv. Karbohydratkonsentrasjonen kan variere innenfor temmelig vide grenser, f.eks. opp til 25% og ned til 1-5%, men 8 - lo% er vanligvis egnet (den prosentvise mengde er beregnet som dekstrose). Det er funnet at tilstedeværelse av karbohydrater i næringsmediet vil medføre dannelse av sure komponenter, hvilket resulterer i en senkning av pH-verdien under dyrkningen. Ettersom det er av vesentlig betydning å holde en pH-verdi i næringsmédiet innenfor området 7 til 12 under dyrkningen, må man ta forholdsregler for å sikre at pH-verdien ikke synker lavere enn 7 i noen vesentlig tid under dyrkningen. For å holde pH-verdien innenfor det ønskede område, kan en begrenset mengde karbohydrater anvendes sammen med en buffer som kan opprettholde den ønskede pH-verdi. Det er funnet at karbonater, og særlig seskvikarbonater, anvendt i en konsentrasjon på opptil o,2 M i mediet, kan gi en pH-verdi på henholdsvis ca. lo,5 og 9,3. ;Også andre buffersystemer så som fosfatbuffere kan anvendes. ;Det er også mulig å starte dyrkningen med et lavt karbohydratinnhold ;og å tilsette små mengder av karbohydrater suksessivt under dyrkningen. ;En tredje mulighet er å anvende automatisk pH-kontroll ved tilsetning av forskjellige basisk-reagerende stoffer som anvendes på dette felt. ;Anvendelse av karbonater og seskvikarbonater som pH-regulerende ;stoffer er meget nyttig, og det er overraskende at det er mulig under dyrkningen å anvende disse forbindelser i de angitte konsentrasjoner. ;Nitrogenkildeh i næringsmediet kan være av uorganisk og/eller organisk ;natur. Egnede uorganiske nitrogenkilder er noen ganger nitrater og ammonium-salter, og blant de organiske nitrogenkilder er det ganske mange som er kjent til bruk ved fermenteringsprosesser og dyrkning av bakterier. Illustrerende eksempler er soyamel, bomullsfrømel, jordhøttmel, kasein, maisstøpevæske, gjærekstrakter, urihstoff, albumin osv. ;Dessuten bør næringsmediet naturligvis inneholde de vanlige sporstoffer. ;Den temperatur som dyrkningen finner sted ved, er normalt innenfor det ;samme område som ved den kjente dyrkning av kjente arter av slekten Bacillus. Vanligvis er en temperatur mellom 25 og 55°C hensiktsmessig. Temperaturen er fortrinnsvis 3o til 4o°Co ;Ettersom dyrkningen må utføres under aerobe betingelser, er det, når fermenteringstanker anvendes, nødvendig å benytte seg av kunstig lufting. Luftmengden er den samme som anvendes ved de kjente dyrkningsprosesser. ;Generelt vil maksimalt utbytte av de proteolytiske enzymer oppnås etter ;en dyrkhingstid på 1 til 5 dager. ;Selv om de fleste forsøk i forbindelse med fremstilling av proteo- ;lytiske enzymer fra arter og stammer angitt i tabell II er utført i ryste- ;flasker eller i tanker i pilotanlegg, er det også benyttet overflatevekst. ;I såfall besto næringsmediet av lo g hvetekli, 2 g NagPOy^O og ca. lo ml ;vann. Før podning ble pH-verdien regulert til'ca. lo med 2 ml IN NaOH. På ;dette medium ble stammene C 3oo og C 3o3 dyrket ved overflatevekst, og for begge stammer var utbyttet av proteolytiske enzymer ca. 2o Ansonenheter pr. ;kg hvetekli ved pH lo. ;For dyrkning av artene og stammene angitt i tabell II ble de følgende ;to medier anvendt: ;1) Medium BPFA med følgende sammensetning: ;2) Medium BSX med følgende sammensetning: ;Begge disse medier ble regulert til den ønskede pH-verdi ved tilsetning av seskvikarbonat eller soda under sterile betingelser. ;Stivelsen til stede i mediene ble gjort flytende ved hjelp av d-amylase før sterilisering. ;Forsøkene i rysteflasker ble utført i 500 ml rysteflasker som hver inneholdt 100 ml av henholdsvis næringsmedium BPFA og BSX, som på forhånd var sterilisert ved autoklavering i 90 minutter ved 120°C, og efter autoklaveringen ble pH-verdien regulert til 9,3-10,5 med natriumseskvikarbonat. Det ble anvendt fire flasker for hver bakterie, og prøver fra kulturmediene for bestemmelse av enzyminnholdet uttrykt i Ansonenheter, ble tatt efter dyrkning i henholdsvis 3, 4, 5 og 6 dager. Under dyrkningen ble flaskene anbragt på et roterende bord som gjorde 240 omdreininger pr. minutt. ;I den følgende tabell IV er angitt de maksimale enzym-utbytter og de tilhørende pH-verdier. ;De to kulturmedier BPFA og BSX er også anvendt til dyrkning i tanker under neddykkede betingelser og kunstig luftning under anvendelse av 55o 1 tanker av rustfritt stål. For å illustrere slik dyrkning i pilotanlegg henvises til den følgende tabell V som angir de anvendte stammer, dyrknings-betingelser og de erholdte resultater. ;Ved andre dyrkninger i pilotanlegg er det benyttet andre stammer og varierende sammensetninger av dyrkningsmediet. I de ovenfor angitte stål-tanker er stamme C 3o3 dyrket i 4- timer under forskjellige betingelser. Sammensetningene av dyrkningsmediene, dyrkningsbetingelsene og de erholdte resultater er gjengitt i den følgende tabell VI. ;De proteolytiske enzymer kan utvinnes fra dyrkningsmediet ved å underkaste mediet sentrifugering, utfelling av enzymet fra den således erholdte væske ved tilsetning av NajSO^ eller etanol, fraskilling av bunnfallet fra væsken ved filtrering med kiselgur som filtreringshjelpemiddel t og tørring av bunnfallet for å danne et pulver inneholdende de aktive proteolytiske enzymer. ;Utvinningsprosessene, som kun ansees som eksempler, kan illustreres ved henvisning til den følgende tabell VII. ;Utgangsmaterialene nevnt i tabell VII er fremstilt ved dyrkning i 55o liter tanker av rustfritt stål under kunstig lufting. Næringsmediene ble regulert til den opprinnelige pH-verdi ved en 2 M Na^ CO^ oppløsning tilsatt under sterile betingelser før podning. ;Undersøkelse av de proteolytiske enzymer fremstilt ved hjelp av stammene angitt i tabell II, har vist at det er vesentlige forskjeller mellom enzymene med hensyn til en rekke av deres egenskaper. ;Når det gjelder proteolytisk aktivitet, ser det ut til at enzymene kan oppdeles i tre grupper eller typer når den proteolytiske aktivitet måles ved pH 12 og uttrykkes i prosent av maksimal aktivitet, nemlig ;Type 1: loo til 8o% ;Type 2: 80 til 5o% ;Type 3: 5o til 0% ;Det er kjent at kalsiumioner stabiliserer aktiviteten av de fleste proteolytiske enzymer. De nye enzymer som er fremstilt ved bakteriene angitt i tabell I og oppdelt i arter og varianter i tabell II, er undersøkt med hensyn til stabiliserende virkning av kalsiumioner i en konsentrasjon på o,ol M ved pH lo,5 eller 11, og stabiliseringen er angitt i prosent av gjenværende aktivitet etter henstand i 3o minutter ved 5o°C. Resultatene av enzymtype-undersøkelsen og kalsiumione-stabiliseringsvirkningen er angitt i tabell VIII, hvor pluss betyr at den gjenværende proteolytiske aktivitet i fravær av kalsiumioner er lavere enn 80% av den tilsvarende aktivitet av kontroll-prøven i nærvær av. kalsiumioner, og minus betyr at den gjenværende proteolytiske aktivitet i fravær av kalsiumioner er høyere enn 80% av den tilsvarende aktivitet av kontrollprøven i nærvær av kalsiumioner. ;Den proteolytiske aktivitet for enzymene fremstilt ved hjelp av stammene angitt i tabell VIII, er undersøkt ikke bare ved pH 12, men også ved lavere pH-verdier for å gi et mer detaljert inntrykk av den proteolytiske aktivitet ved forskjellige pH-verdier og mer opplysning vedrørende aktiviteten av de tre typer enzymer. Som en illustrasjon henvises til tegningene hvor ;Fig. 1 viser den proteolytiske aktivitet for enzymet fremstilt ved ;hjelp av stammen C 311, hvilket enzym hører til type 1, ;Fig* 2 viser på samme måte aktiviteten av enzymet fremstilt ved
hjelp av stamme C 335, hvilket enzym hører til type 2, og
Fig. 3 viser på samme måte aktiviteten for enzymet fremstilt ved
hjelp av stammen C 324, hvilket enzym hører til type 3.
Det skal forstås at formålet med aktivitetskurvene vist på tegningene, er å illustrere prinsipielt forskjellen i aktivitet mellom de tre typer proteolytiske enzymer ved varierende pH-verdier og at aktivitetskurven for hver type kan variere noe uten å tape sitt karakteristiske utseende.
De nye enzymer i henhold til oppfinnelsen er dessuten underkastet følgende prøver:
a) Stabilitet overfor tripolyfosfat ( TPP)
Stabiliteten av enzymene i en oppløsning inneholdende tripolyfosfat
i en mengde på o,2% ble bestemt. Stabiliteten er uttrykt som prosent.av . gjenværende aktivitet etter 3o minutter ved 5o°C og ved pH lo. Enzymkonsentrasjonen var o,l Anson-enhet pr. liter, og analysemetoden var Anson-metoden.
Resultatene er angitt i den følgende tabell IX.
De tilsvarende oppløsninger med o,ol M CaCl2 viste i alle tilfeller en gjenværende aktivitet på 8o til loo%.
b) Stabilitet overfor perborat
Aktiviteten av en oppløsning inneholdende enzymet og natriumperborat
i en mengde på o,l% ble bestemt. Stabiliteten ble uttrykt som prosent gjenværende aktivitet etter 3o minutter ved 5o°C og pH lo. Enzymkonsentrasjonen og analysemetoden var som i prøve a).
Resultatene er angitt i den følgende tabell IX.
c) Stabilitet overfor overflateaktive midler.
Stabiliteten av oppløsninger inneholdende enzymet og forskjellige
overflateaktive midler ble bestemt under anvendelse av tre typiske overflateaktive midler i konsentrasjoner svarende til de som anvendes i vaske-oppløsninger:
Enzymkonsentrasjonen var o,l Ansonenheter pr. liter. Forsøksbetingelsene var 3o minutter ved 5o°C. ved pH lo, og analysemetoden var nitro-kasein-metoden, jfr. E.V. Pechmann, Biochemische Zeitschrift, Bd. 321, 248-26o (195o).
Tallene i tabell IX skal forstås som følger:
Tallet over streken viser prosentdel gjenværende aktivitet når man utfører analysen umiddelbart etter tilsetning av det overflateaktive middel, dvs. dette tall er et tegn på den øyeblikkelige inaktiveringsgrad.
Tallet under streken er forskjellen mellom denne øyeblikkelige gjenværende aktivitet og prosent gjenværende aktivitet etter 3o minutter.
d) Temperatur- optimum
I tabell IX er angitt temperaturen i °C ved hvilken det ble funnet
maksimal aktivitet ved pH lo. Analysemetoden var Ansonmetoden.
e) Enzymtype
Det er funnet at alle enzympreparatene hemmes momentant og fullstendig av fenylmetylsulfonylfluorid, hvilket betyr at alle enzymene har serin i det aktive, senter.
f) pH- stabilitet
I forbindelse med fem enzympreparater er stabiliteten ved forskjellige
pH-verdier bestemt under anvendelse av de følgende betingelser:
I tabell IX er angitt det pH-området innenfor hvilket det ble funnet en gjenværende aktivitet på 80 til loo%.
Undersøkelse av enzympreparatene fremstilt ved hjelp av stammene C 3o3 og C 347 overfor natriumsulfit har vist at enzymene ikke er følsomme overfor dette reduksjonsmiddel, hvilket kan tyde på at S-S-broer ikke er vesentlig for enzymenes tertiære struktur.
Åv tabell IX vil det sees at en rekke av enzympreparatene oppviser meget gode stabilitetsegenskaper.
Enzympreparatene består generelt av en
fast eller flytende blanding av de proteolytiske enzymer fremstilt i henhold til oppfinnelsen og andre komponenter, i det mengden og sammensetningen av de andre komponenter er avhengig av formålet og det tekniske eller viten-skapelige felt som enzympreparatene skal anvendes for. Når enzympreparatene foreligger i fast form, kan de bestå av korn som
enzymene er innarbeidet i, f.eks. sammen med andre enzymer eller stoffer med annen aktivitet enn enzymatisk, som er nyttig ved anvendelse av enzympreparatene. Når enzymene ikke anvendes i krystallinsk form, kan de ledsages
av forurensninger av organisk natur, så som proteiner og karbohydrater fra kulturmediet.
Enzympreparatene i flytende form kan være oppløsninger eller"suspensjoner som eventuelt kan inneholde stabilisatorer.
Vanligvis anvendes de nye enzymer i små mengder. Av
denne grunn har enzympreparatene til industriell bruk normalt et enzyminnhold som ikke overstiger ca. 10 vekt%.
De nye enzymer kan f.eks. anvendes i vaskemidler, hår-fjerningspreparater, i preparater for hydrolyse av proteiner, i oppvaskmidler og som tilsetninger til septiktanker og installasjoner for rensning av kloakkvann.
Vår avdelte søknad 14 50/70 er rettet på en vaskemiddel-blanding inneholdende anioniske, ikke-ioniske eller amfotære vaskemiddelbestanddeler og proteolytiske enzymer, og den kjennetegnes ved at ett eller flere av enzymene oppviser en proteolytisk aktivitet på 80-100% av maksimal aktivitet, målt ved pH 12 efter Anson-metoden, og er fremstilt ved fremgangsmåten i henhold til foreliggende oppfinnelse.
Det er en vesentlig fordel ved bruk i vaskemidler at
mange av enzymene fremstilt i henhold til oppfinnelsen oppviser optimal proteolytisk aktivitet ved høye pH-verdier og forbedret stabilitet i nærvær av perborater.
Som nevnt i det foregående kan enzymene fremstilt i
henhold til oppfinnelsen også anvendes for å fjerne hår fra skinn og huder. Ved de gamle hårfjerningsprosessene ble hudene anbragt i. et bad inneholdende kalsiumhydroksyd og natriumsulfid, med en. pH-verdi på ca. 12. Denne hårfjerningsprosess er skadelig for hårene som kan være kommersielt verdifulle.
I de senere år har det vært benyttet enzymatiske hårfjerningsprosesser hvor man har brukt proteolytiske enzymer, og hårfjerningen er utført ved en lavere pH-verdi på 7 til. 10, som ikke påvirker hårenes kvalitet. På den annen side oppnås ingen vesentlig svelling av skinnene eller hudene slik som tilfellet var ved de gamle hårfjerningsprosesser, 'hvilket vanskeliggjør den videre behandling av skinnene eller hudene.
Disse vanskeligheter er kjent innen teknikken, og det
er foreslått å anvende proteolytiske enzymer som har tilstrekkelig aktivitet ved en høyere pH-verdi enn 10.
Eftersom noen av enzymene oppviser optimal proteolytisk aktivitet ved en pH-verdi opptil 12, er disse enzymer velegnet til bruk ved hårfjerningsprosesser. De følgende forsøk skal tjene til å illustrere nytten av noen av enzymene fremstilt i henhold til oppfinnelsen for hårfjerningsformål.
En saltet kuhud (bakparten) deles opp i stykker på
ca. 20 x 4 cm. Stykkene bløtes i 24 timer, og fett og kjøtt skrapes av. Hudstykkene anbringes derefter i 400 ml av forskjellige enzymoppløsninger i glass med volum på 500 ml. Glassene inkuberes ved 30°C i 24 timer. Stykkene tas derefter ut av oppløsningene,
og hårene skrapes av med et stykke plexiglass. Hårfjernings-effekten bedømmes efter den følgende skala:
1. Lett og fullstendig fjerning av hårene.
2. Lett fjerning av hårene, men flekker av hår tilbake på huden.
3. Ingen eller vanskelig fjerning av hårene.
De anvendte proteolytiske enzymoppløsninger inneholder
1 g kalsiumhydroksyd pr. 130 g vann. Enzymmengden fremgår av den følgende tabell XIV, som også angir pH-verdiene ved begynnelsen og slutten av hårfjerningsprosessen, samt resultatene derav.
Claims (1)
- Fremgangsmåte til fremstilling av ekstracellulære, proteolytiske enzymer av serintypen i så høye utbytter som tillater en økonomisk lønnsom utvinning derav, hvilke enzymer oppviser optimal proteolytisk aktivitet overfor hemoglobin, bestemt ved Anson-metoden i nærvær av urinstoff, ved en pH-verdi på minst 10, ved aerob dyrkning av bakterier tilhørende slekten Bacillus i et næringsmedium inneholdende assimilerbare karbon-og nitrogenkilder, karakterisert ved at man anvender proteinasedannende stammer som opprinnelig er isolert fra naturen på et næringsmedium med en pH-verdi i området fra 9 til 11, og hvis egenskaper svarer til egenskapene for de kjente bacillusarter B. subtilis, B. licheniformis, B. pumilus, B. firmus eller B. circulans, bortsett fra at de ikke eller bare meget vanskelig kan vokse ved pH-verdier under 7, og idet de alle oppviser negativ acetoinreaksjon, og at man under dyrkningens hoved-forløp opprettholder en pH-verdi i næringsmediet på 7,5 til 10,5.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NO145070A NO136370C (no) | 1967-10-03 | 1970-04-16 | Proteolytisk enzymholdige rense- og vaskemiddelblandinger. |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB4504667 | 1967-10-03 | ||
| GB35921/68A GB1243784A (en) | 1967-10-03 | 1968-07-26 | Proteolytic enzymes, their production and use |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO136205B true NO136205B (no) | 1977-04-25 |
| NO136205C NO136205C (no) | 1977-08-03 |
Family
ID=26262911
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO3755/68A NO136205C (no) | 1967-10-03 | 1968-09-23 | Fremgangsm}te for fremstilling av enzymer. |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (2) | JPS535361B1 (no) |
| CS (1) | CS152308B2 (no) |
| DK (1) | DK136162B (no) |
| ES (2) | ES358722A1 (no) |
| FI (1) | FI46974C (no) |
| HU (1) | HU162292B (no) |
| IL (1) | IL30749A (no) |
| NO (1) | NO136205C (no) |
| SE (2) | SE367021B (no) |
| YU (1) | YU34596B (no) |
-
1968
- 1968-09-20 IL IL30749A patent/IL30749A/en unknown
- 1968-09-23 FI FI682676A patent/FI46974C/fi active
- 1968-09-23 DK DK456868AA patent/DK136162B/da not_active IP Right Cessation
- 1968-09-23 NO NO3755/68A patent/NO136205C/no unknown
- 1968-09-23 SE SE12805/68A patent/SE367021B/xx unknown
- 1968-10-01 CS CS6815A patent/CS152308B2/cs unknown
- 1968-10-02 YU YU2293/68A patent/YU34596B/xx unknown
- 1968-10-02 ES ES358722A patent/ES358722A1/es not_active Expired
- 1968-10-02 HU HUNO128A patent/HU162292B/hu unknown
-
1970
- 1970-01-15 ES ES375481A patent/ES375481A1/es not_active Expired
-
1971
- 1971-12-10 JP JP9959871A patent/JPS535361B1/ja active Pending
- 1971-12-10 JP JP46099599A patent/JPS518401B1/ja active Pending
- 1971-12-27 SE SE7116685A patent/SE409725B/sv unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS535361B1 (no) | 1978-02-27 |
| SE367021B (no) | 1974-05-13 |
| FI46974C (fi) | 1973-08-10 |
| YU34596B (en) | 1979-10-31 |
| NO136205C (no) | 1977-08-03 |
| ES358722A1 (es) | 1970-06-16 |
| FI46974B (no) | 1973-05-02 |
| HU162292B (no) | 1973-01-29 |
| CS152308B2 (no) | 1973-12-19 |
| ES375481A1 (es) | 1973-01-01 |
| YU229368A (en) | 1979-04-30 |
| DK136162B (da) | 1977-08-22 |
| IL30749A0 (en) | 1968-11-27 |
| JPS518401B1 (no) | 1976-03-16 |
| DK136162C (no) | 1978-01-30 |
| IL30749A (en) | 1972-11-28 |
| SE409725B (sv) | 1979-09-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hammami et al. | Proteolytic and amylolytic enzymes from a newly isolated Bacillus mojavensis SA: characterization and applications as laundry detergent additive and in leather processing | |
| JP2690339B2 (ja) | 新規プロテアーゼ | |
| US3723250A (en) | Proteolytic enzymes, their production and use | |
| Arvidson et al. | Influence of cultivation conditions on the production of extracellular proteins by Staphylococcus aureus | |
| US3674643A (en) | Preparation of proteolytic enzymes having maximum activity at high alkalinity | |
| DK146964B (da) | Proteolytisk enzymprodukt og fremgangsmade til dets fremstilling | |
| Ravikumar et al. | A protease from the medicinal mushroom Pleurotus sajor-caju; production, purification and partial characterization | |
| Okorie et al. | Growth and extracellular enzyme production by microorganisms isolated from Ugba-an indigenous Nigerian fermented condiment | |
| JPH05252949A (ja) | アルカリプロテアーゼ、その製造方法、用途およびそのプロテアーゼを生産する微生物 | |
| Sabry | Microbial degradation of shrimp‐shell waste | |
| Sehar et al. | Extracellular alkaline protease by a newly isolated halophilic Bacillus sp | |
| Joshi | Purification and characterization of a novel protease from Bacillus firmus Tap5 isolated from tannery waste | |
| US3960665A (en) | Production of proteolytic enzymes | |
| US3840433A (en) | Dehairing of leather | |
| JPH01240179A (ja) | 酒類の品質改良法 | |
| NO180642B (no) | Alkalipullulanase og renisolert kultur av Bacillus sp. mikroorganisme som produserer denne | |
| Ozdenefe et al. | Optimization of culture conditions for alkaline protease production from waste breads using Bacillus subtilis | |
| NO136205B (no) | ||
| NO180643B (no) | Alkalisk pullulanase Y med <alfa>-amylaseaktivitet og en biologisk renkultur av Bacillus sp. mikroorganisme som produserer denne | |
| EP0871719A1 (en) | Psychrophilic protease and psychrophilic bacteria | |
| Manikandan et al. | Isolation, optimization and characterization of alkaline protease producing bacteria from collagen layer of decaying skin (sheep upper) leather industry. World J | |
| Kurniatanty et al. | Enzymatic Activity of Protease Producing Bacteria from Tofu Waste | |
| SU379101A1 (ru) | Способ получения протеолитических ферментов | |
| Rostami et al. | Protease production using Bacillus licheniformis by submerged fermentation | |
| Deviga et al. | Studies on The Optimization of Protease Production by Thermophilic Bacillus subtilis Isolated from Raw Milk Sample |