NO134009B - - Google Patents

Description

Analyser av væskeprover for nærvær av mikroorganismer utfores .vanligvis innen medisinen, industrien og av statlige organer for å bestemme gråden av mikrobiologisk forurensning av forskjellige prover. I mange analyser av denne type er nærværet av mikroorganismer ofte av sekundær viktighet, det er konsentrasjonen av mikroorganismene i prbven som er den viktigste faktor å bestemme. For eksempel fast-slåes bacteriuria ved bestemmelse av konsentrasjonen av mikroorgan'-ismer i en urinprove, og ikke ved det blotte nærvær av mikroorgani-ismer i denne. Likeledes ansees melk- og vannprover å være "for-urenset" bare når konsentrasjonen av tilstedeværende 'mikroorganismer overskrider en på forhånd bestemt maksimumsgrense.

Selvsagt er det så snart konsentrasjonen av mikroorganismene overskrider den angitte grense, til stor hjelp og ofte nodvendig å identifisere mikroorganismen for best og raskt utfore behandling av infeksjonen eller for å bestemme og avbote årsaken til forurens-ningen.

En kvantitativ analysemetode for mikroorganismer innbefatter

å fremstille seriefortynninger av en oppmålt mengde av proven, inokulere et næringsmedium med en oppmålt mengde av en fortynning, og inkubere det inokulerte medium i ca. 2h timer. Hvis proven er for-urenset kan individuelle kolonier av de formerte mikroorganismer visuelt observeres og telles. Konsentrasjonen av mikroorganismer pr. milliliter av proven beregnes derefter ved å multiplisere antallet av mikroorganismekolonier med fortynningen av proven. De således formerte spesifikke kolonier utgjor en ren kilde av mikroorganismen for dyrkning av disse på selektive eller differensierte media for å identifisere denne. Denne dyrkning krever hyppig re-inkubering i ytterligere 2h timer.

Ulempene forbundet med den angitte fremgangsmåte er nødvendig-heten av å fremstille seriefortynninger av proven, nødvendigheten av å fremstille et agarmedium, den nodvendige tid for å tilveiebringe både en kvantitativ test og en differensiert test, og nødvendig-heten av en betydelig mengde rent og sterilisert laboratorieutstyr.

En annen metode er utviklet, i hvilken oppmålte volumer av

en prove filtreres gjennom en semi-permeabel membran. Vanskelig-heten med metoden er å velge en membran som har en porositet slik at mikroorganismene forhindres fra å passere gjennom membranen. Efter filtreringstrinnet fjernes membranen fra filteret og anbringes på

et næringsmedium hvorved næringsmidler i dette kan diffundere gjennom membranen. Ved inkubering formeres mikroorganismene på membranen og kan derefter observeres og telles som tidligere beskrevet.

Mens den sistnevnte fremgangsmåte er en forbedring med hensyn til den tidligere fremgangsmåte, er filtreringsutstyr nodvendig, og i tillegg er det nodvendig å vaske og resterilisere filterutstyret. Proven må i tillegg fremdeles måles for filtrering, hvorved ytterligere- tid og utstyrskreves.

Den nye testanordning ifolge oppfinnelsen omfatter en oppsugende matrise impregnert med et næringsmedium inneholdende test-reagenser, og et suspenderingsmiddei. I bruk dyppes den impregnerte matrise øyeblikkelig i eller på annen måte mettes med væsken for å inokulere matrisen som absorberer et kjent volum av proven. Avhengig av næringsmediet og det anvendte reagens kan en semikvan-titativ eller differensiert test utfores. Likeledes kan et antall anordninger, hver inneholdende et forskjellig medium og reagens, inokuleres, og både semi-kvantitative og differenserte tester kan utfores samtidig. I tillegg er det funnet at pålitelige semi-kvantitative og differensierte testresultater kan erholdes på mindre enn 12 timer.

En testanordning som benytter en metode til å inokulere en matrise impregnert med et næringsmedium ved direkte dypping i den prove som skal undersokes, er tidligere kjent. Denne anordning er beskrevet i norsk patent 92.507, svarende til US patent-skrift nr. 2.904.474, og innbefatter en papirremse impregnert med et næringsmedium inneholdende en testsubstans, remsen har et avtagbart håndtak, og en slire for å innelukke remsen for inkube-ringsformål.

Fravær av et suspenderingsraiddel i den angitte anordning er funnet å være årsak til folgende ulemper: (1) utvaskning av de opploselige næringsmidler og testsubstanser i mediet under dyppingen av anordningen i proven, (2) de opploselige substanser som forblir i remsen efter dyppingen er tilboyelige til å diffundere til det laveste punkt på remsen på grunn av gravitasjpns-flyt, og (3) de mobile mikroorganismer mislykkes i å lokaliseres og mislykkes således i å danne distinkte kolonier eller lokalise-ringer som er nodvendige for semi-kvantitativ testing.

Anvendelse av et suspenderingsmiddel i testanordningen ifolge foreliggende oppfinnelse gjor det mulig å overkomme de ulemper som her er beskrevet. Testanordningen ifolge foreliggende oppfinnelse er således tilpasset inokulering med proven direkte og det unngåes således på forhånd å oppmåle og/eller fortynne proven. Direkte og ufortynnet inokulering tilveiebringer dyrkningsmediet med hovedsakelig det samme miljo som proven, og reduserer derved den nodvendige tid som kreves av mikroorganismene for å tilpasset et nytt, strengt miljo, og fremskynder derved propageringen av disse. Tilveiebringelse av en testanordning for utforelse av differensierte tester og som er istand ti 1 å inokuleres direkte med proven tillater semi-kvantitative og differensierte tester og utfores samtidig.

Foreliggende oppfinnelse angår således en testanordning for analyse av en prove for innhold av makroorganismer, hvilken anordning er beregnet på å inokuleres med en prove og inkuberes i en forseglbar beholder, og hvilken anordning omfatter en matrise av et flatt oppsugende materiale som har en kjent, konstant absorps jonskapasi-tet, og som er impregnert med et næringsmedium og en farveindikator, hvilken testanordning er kjennetegnet ved at matrisen er tilsatt som lokaliseringsmiddel for de dannede mikroorganismekolonier "0,1 - 5 vekt% av et suspenderingsmiddel som omfatter en opplbselig forbindelse som er istand til å danne en viskos kolloidal suspensjon i en vandig opplosning.

Suspenderingsmidlet er valgt fra gruppen bestående av inerte gummier, polysaccharider og alginater, og er fortrinsvis natriumalginat eller et lineært polysaccharid.

Testanordningen beskrives i det folgende under henvis-ning til den vedlagte tegning.. Fig. 1 viser en testanordning ifolge denne oppfinnelse innelukket i en beholder, Fig. 2 er et forstorret utsnitt av anordningen i fig. 1 fjernet fra beholderen, idet utsnittet er tatt langs linjen 2-2 i fig. 1, og Fig. 3, 4, 5 og 6 viser matrisene med kolonilokaliseringer.

I den vedlagte tegning, og spesielt i fig. 1 er testanordningen generelt angitt ved nummerangivelse 10. Testanordning IO innbefatter vanligvis en absorberende matrise 11 forbundet med en beholder 12 og innesluttbar innen en forseglbar beholder 13.

Matrisen 11 er dannet av et flatt oppsugende materiale slik som absorberende filterpapir eller lignende, impregnert med et egnet næringsmedium innbefattet et reagens og et suspenderL ngs-middel. Matrisen 11 er tilpasset til å inokuleres ved å dyppes i proven som skal analyseres, og derved unngå den tidligere beskrevne nødvendighet av å oppmåde og/eller fortynne proven. Derfor er det nodvendig at matrisen 11 har en kjent konstant absorpsjonskapasitet for det formål å foreta semi-kvantitative bestemmelser. Hvis således matrisen 11 er kjent for; å kunne absorbere et kjent volum av proven, f.eks. 0.2 ml, kan konseatrasjonen av mikroorganismer i proven lett bestemmes, som senere skal .forklares.

Ved rehydratisering av den oppsugende matrise 11 i en væskeprove absorberes et spesifikt volum av proven av matrisen 11

og eventuelle tilstedeværende mikroorganismer i den absorberte prove absorberes likeledes av matrisen 11. På denne måte inokuleres matrisen 11. Når den inokulerte matrise 11 som er impregnert med et egnet næringsmedium derefter inkuberes, dyrkes mikroorganismene og danner kolonier.

Således angir uttrykket "mikroorganismer" i denne sam-menheng den generelle klasse mikroorganismer omfattende gjær, andre sopparter eller bakterier; som foreligger i den prove som skal analyseres. Uttrykket "koloni" henviser til "mikroorganismene" efter dyrkningen. Uttrykket "kolonilokalisering" angir plasering av en koloni som den observeres på 11, og er synonymt med uttrykket "koloni".

Næringsmediet kan være et konvensjonelt medium eller en modifikasjon derav, kjent for å tilveiebringe et egnet miljo for den utvalgte test. Hvis der onskes en semi-kvantitativ test, kan der benyttes næringsmedium slik som "Bacto Brain Heart Infusion". Denne type medium er betraktet som et generelt medium og er kjent for å være istand ti 1 å dyrke de fleste mikroorganismer. Om det onskes å utfore en differensiert test, velges et næringsmedium som enkelte mikroorganismer kan styrkes på, men som ikke er istand til å tilveiebringe vekst av andre mikroorganismer. Eksempler på egnede media som er nyttige for dette formål er Christensen's formulering som beskrives i Journal of Bacteriology,

42, 461, som er kjent for å gi en positiv reaksjon overfor arter av Proteus, men som gir en negativ reaksjon overfor andre gram-negative mikroorganismer, og Simmons Citrat som er vel kjent for sin evne ti 1 å dyrke eitrat-forbrukende organismer, slike som arter av Klebsiella og Enterobacter, og som er kjent for sin mang-

lende evne til å dyrke de som ikke kan anvende citrat, slik som Escherichia coli.

Reagenset innbefatter fortrinsvis en indikator som er istand til å forårsake en farveforandring i matrisen ved respons på en positiv dyrkning av mikroorganismer. Reagenset kan være innarbeidet i næringsmediet og kan omfatte en enkel pH-indikator slik som. fenolrddt som vanligvis anvendes i Christensen's formulering. Denne indikator skifter fra gulorange til lyserodt i nærvær av en mikroorganisme, f.eks. Proteus-arter, sem er istand til å bryte ned urea i formuleringen. Likeledes kan reagenset innbe-fatte en reduksjon-oxydasjonstype indikator slik som en av de forskjellige tetrazolium-forbindelser, f.eks. 2,3,5-trifenyltetrazo-liumklorid (farvelost), som reduseres til et formazan, f.eks. tri-fenylformazan (intens rbdt) av de fleste mikroorganismer under deres vekst. Ved fremstilling av matrisen 11 for en semi-kvantitativ test foretrekkes en indikator som trifenyltetrazolium siden det reduserte produkt, trifenyltetraformazan ikke bare tilveiebringer en sterkt synlig farve, men også har den egenskap å være uopploselig. Den siste egenskap, sammen med det senere beskrevne suspenderingsmiddel, letter dannelsen av separate og distinkte koloniseringer.

Tilsetning av et suspenderingsmiddel til impregnerings-formuleringen er nodvendig for å forhindre utvaskning av det opploselige medium og reagenset fra matrisen 11 under dyppingen av denne i væskeproven og for å lokalisere mikroorganismene i matrisen 11 efter inokuleringen. Suspenderingsmidlets evne til å lokalisere mikroorganismene og derved gjore dannelsen av separate og distinkte kolonier i og på matrisen 11 mulig er spesielt vik-tig ved utforelse av semi-kvantitative tester. Suspenderingsnid-let anvendes i formuleringen i konsentrasjoner varierende fra 0,1 til 5 vekt%, fortrinsvis fra 0,5 til 3 vekt#.

Suspenderingsmidlet er karakterisert ved å være opplø-selig i en vandig opplesning, og danne en viskos kolloidal suspensjon. Suspenderingsmidler som er funnet å være nyttige for dette formål, enten alene eller i kombinasjon, er kolloider, inerte gummier, carragener, alginater og forskjellige polysaccharider og

polypeptider.

Efter at matrisen 11 er impregnert, i;6rkes den derefter. Siden en hoy temperatur kan innvirke på noe av næringsmidlet og testmaterialene som er impregnert i matrisen 11, er det funnet at torking av den impregnerte matrise 1-1 i et vakuum eller en blåse-ovn ved 40 - 60°C i 1 til 3 timer er den foretrukne torkemetode.

For å tilveiebringe en hensiktsmessig integrert testanordning IO, festes den tbrkede impregnerte matrise 11 til en holder eller et håndtak 12. Holderen 12 er en langstrakt del fortrinsvis dannet av et stivt, uopplbselig materiale, slik som en remse av polyethylenterefthalat,eller lignende. Siden matrisen 11 er beregnet for mikrobiologiske formål heller enn kjemiske formål, må spesielle forholdsregler taes for å sikre at matrisen

11 festes til holderen 12 med et mikrobiologisk inert lim. Visse dobbeltklebende taper, slik som nr. "415" og "419", er funnet å være nyttige for dette formål. Det er også funnet at matrisen 11 lett kan festes til holderen 12 uten å påvirke hverken matrisen 11 eller det impregnerte medium eller reagens. For å lette dette plaseres et tynt polyethylenark 14 (fig. 2) mellom holderen 12

og matrisen 11, og tilstrekkelig varme påfores siden 16 på holderen 12 lengst bort fra matrisen 11 for å bevirke at remsen smel-ter og binder matrisen 11 til holderen 12.

Matrisen 11 (fig. 1) forbundet med holder 12 plaseres derefter i den forseglbare beholder 13, steriliseres, og beholderen 13 forsegles. Vanligvis er en hvilken som helst beholder 13

som er istand til å forsegles funnet å være anvendbar for dette formål. Det er funnet at en konvolutt av polyethylen eller lignende, som forsegles langs sine sider 17 og IB og bunn 19, er akseptabel for dette

formål. Toppen 21 til beholder 13 eller konvolutten er fortrinnsvis utstyrt med en konvensjonell låsende forseglingslapp 22 som friksjohsforsegler beholderen 13 ved påforing av press på denne, og således overflødiggjor nødvendigheten av spesielle f orseglingsanord-ninger. Fortrinnsvis har beholder 13 dannet av et klart transparent materiale som gjor operioren istand til visuelt å observere og "av-lese" matrisen 11 i beholderen 13 uten å utsette operatoren eller laboratoriet for de dyrkede mikroorganismer.

I bruk er beholder 13 uforseglet og den sterile holder 12 og matrisen 11 er fjernet fra denne. Matrisen 11 dyppes i væskeproven som skal undersokes, slik som urin, melk, vann eller lignende, for å rehydratisere,.og inokulere matrisen 11. Den inokulerte matrise 11 forbundet til holder 12 plasseres bakteriefritt i beholder 13, og beholder 13 gjenforsegles og inkuberes ved den optimale temperatur, avhengig av den mistenkte mikroorganisme, i minst h timer. De fleste mikroorganismer inkuberes optimalt ved temperaturer fra ^ til

^0°C, og fortrinnsvis fra 35° til 39°G. Efter inkuberingsperi-oden observeres matrisen 11 visuelt og resultatene av den spesielle test avleses. Hvis testen er en semi-kvantitativ test, vil nærvær av farvede flekker indikere kolonilokaliseringer og tettheten av disse observeres, som tidligere beskrevet. Hvis testen er differensiert, observeres en farve på matrisen, hvilken farve er indikativ for positiv eller negativ dyrkning. Efter at resultatene av undersøk-elsen er kjent, kan anordningen 10 steriliseres og kastes. Det er imidlertid funnet at sterilisering ikke bevirker farveforandring i matrisen 11, som er et resultat av dyrkningen av mikroorganismene,

og anordningen 10 eller bare matrisen 11 kan oppbevares som en perman-ent plate om onskes.

Ved de fleste av slike konsentrasjonsundersokelser uttrykkes disse i enheter på 10 for å angi den relative konsentrasjon av den tilstedeværende mikroorganisme i en enkelt milliliter av proven. Dette kan lett forståes fra Figurene 3-6 hvor kolonilokaliseringene, som de fremgår på matrisen 11 i forskjellige konsentrasjoner er illustrert. Kolonilokaliseringene 23a og 23b i Figurene 3 og h kan lett telles, mens det i Figurene 5 og 6 er flerfoldige kolonilokaliseringer 23c og 23d som er så store at en spesifikk telling ville være meget vanskelig. Imidlertid, siden antall kolonilokaliseringer' er bare relativekan konsentrasjonen av mikroorganismer pr. milliliter lett visuelt bestemmes ved å:..sammenligne tettheten av koloni-ene som de fremgår på matrisen 11 med en sammenligningsplansje eller standard.

Av rent illustrative grunner er det antatt at hver av matrisene lia - lid i Fig. 3 - 6 er kjent for å absorbere 0,2 ml av en vandig prove. Det kan derefter lett bestemmes at antall og tetthet av kolonilokaliseringene 23a synlig i Fig. 3 angir at det er fire kolonilokaliseringer 23a inneholdt i 0,2 milliliter av proven, som angir tyve mikroorganismer i 1 milliliter i testproven. Siden de uttrykte konsentrasjoner imidlertid bare er relative, angis en konsentrasjon av denne mengde som 10<1> mikroorganismer pr. ml. Fig. <*>f ville derved uttrykkes som 10 2 eller rundt regnet 100 mikroorganismer pr. ml. I Fig. 5 og 6 er antallet av kolonilokaliseringer 23c og 23d langt storre og av denne grunn bestemmes tettheten av kolonilokaliseringene og dermed konsentrasjonen av mikroorganismene i proven. Fig. 5 ville angi ca. 10^ eller rundt regnet 1000 mikroorganismer pr. ml og Fig. 6 ville uttrykkes som 10 mikroorganismer pr. ml. Konsentrasjoner over 10y mikroorganismer pr. ml ville frem-komme på matrisen 11 som en fullstendig hel farve som ville gi matrisen 11 et sammenflytende farveutseende.

De folgende eksempler illustrerer den forbedrede testanordning ifolge denne oppfinnelse.

Eksempel 1

Testanordning

20,0 g natriumalginat ble tilsatt til 1 liter destillert vann og omrort inntil losning. Til denne losning ble folgende formulering tilsatt:

Bestanddelene ble blandet godt inntil det lostes i alginat-losningen under dannelse av en slutt-pH på 7, h.

Ark av"Schleiiher and Schuell No. k70" filtrerpapir ble dyppet

i den ovenfor angitte losning inntil de var fullstendig mettet og derefter trukket mellom to glasstaver for å fjerne overskuddslosning og for å sikre ens impregnering. Arkene ble derefter torket i en luftovn ved ca. 55°C i.2 timer..De dehydratiserte ark ble derefter kuttet opp i biter som målte 1x2 cm, hvilken storrelse var funnet å kunne absorbere 0,2 ml væskeprove.

Holdere for bitene ble fremstilt ved å kutte opp ark av poly-ethylenterefthalat i remser som målte 1x6 cm. For å feste bitene til holderne, ble bitene plassert på et varmebord og et tynt ark av polyethylen ble plassert over hver bit. Remsene ble derefter plassert over polyethylenarkene slik at hver bit var plassert nær en ende av hver remse. En varm plate oppvarmet til ca. 138°C ble plassert på toppen av remsene i ca. 5 sekunder for å smelte polyethylenarkene og binde biten til remsene. Holderen og de festede biter ble derefter plassert i forseglbare transparente beholdere og sterilisert med ethylenoxyd.

Eksempel II

Semi- kvantitativ test

a. Fremstilling av testprover.

Testprover ble fremstilt ved å propagere kulturer av Escherichia coli, Proteus mirabil-is, Enterobacter aerogenes, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus og Streptococcus faecalis i hjerne-hjerteinfusjonsbuljonger til maksimal uklarhet (1-5 x 10<Q7> celler pr. ml). Ti-foldige seriefortynninger av hver kultur ble fremstilt ved bruk av fysiologisk saltlosning som fortynner for å tilveie- - bringe serie bakterie-suspensjoner av hver kultur i det teoretiske område fra 10<1> til 10<?> celler pr. milliliter.

b. Undersøkelse av provene.

For å undersoke hver av de ovenfor beskrevne testprover ble en testanordning som beskrevet i Eksempel 1 anvendt. Beholderen var uforseglet og holderen og den oppsugende bit fjernet derfra. Den sterile, dehydratiserte matrise ble dyppet i en av .provefortynningene for å inokulere og rehydratisere matrisen eller biten. Den inokulerte bit ble igjen, sammen med holderen, plassert i beholderen. Beholderen ble derefter forseglet for å forhindre dehydratisering av biten og plassert i et inkuberingsrom opprettholdt ved 37°C i ca. 12 timer. En konvensjonell plateteller ble utfort på hver av provefortynningene for å fastslå cellekonsentrasjonene inneholdt i disse og for å tjene som kontroll for de erholdte resultater ved testanordningen.

Efter inkubasjonstiden ble anordningene fjernet fra inkubator-en og matrisene ble observert gjennom de transparente beholdere. Reduksjon av det farvelbse trifenyltetrazolium av mikroorganismene til det magentarode trifenyltetraformazan var synlig i alle de in-kuberte biter. I de biter som ble inokulert med prover som hadde en cellekonsentrasjon på mindre enn 10^ celler pr. ml, ble det observert distinkte og definerte magentarode flekker som anga en kolonilokalisering, hvilke flekker oket i antall efter som den kjente konsentrasjon på testproven oket. Sammenflytende magentarodt ble observert på alle biter som var inokulert med en prove med en konsentrasjon på lC<r> celler pr. ml eller hoyere.

Ved å sammenligne antall flekker som var synlige på bitene

og cellekonsentrasjonene i testprovene ble det fastslått at et defin-ert og distinkt forhold var tilstede. Det ble observert at tettheten eller antall flekker oket i samsvar med konsentrasjonen av mikroorganismer i testprovene.

Når disse undersokelser ble gjentatt med kliniske urinprover, friskt pasteurisert melk av grad A og vrakede melkeprover, ble hovedsakelig de samme resultater erholdt. Kolonilokaliseringene på bitene korresponderte med de erholdte resultater ved en agarplatekontroll.

Når andre vanlige suspenderingsmidler slik som forskjellige alginater, inerte polysaccharidgummier, lineære polysaccharider, carragener og lave konsentrasjoner av agar ble benyttet isteden for natriumalginat i den i Eksempel 1 angitte formulering, ble hovedsakelig de samme resultater observert idet de propagerte kolonier ble lokalisert og en semi-kvantitativ bes t-emmelse ble erholdt.

Når undersøkelsene ble gjentatt ved bruk av en anordning fremstilt ifolge Eksempel 1, men uten suspenderingsmiddel ble det observert at bitene hadde en sammenflytende lyserod eller magentarod farve ved alle konsentrasjoner efter inkuberingen. Således ble det funnet at en semi-kvantitativ bestemmelse av de fortynnede prover var umulig i fravær av suspenderingsmiddel idet lokalisering av mikroorganismene mislykkes.

Eksempel III

Differensiert test

20,0 g natriumalginat ble tilsatt til 1 liter destillert vann for å fremstille en losning ifolge Eksempel 1. Til denne losning ble tilsatt en modifisert Christensen's formulering med folgende formulering:

Formuleringen ble grundig blandet med natriumalginatlosningen inntil alt var lost, og den resulterende losning ble impregnert i "S & S nr. ^70"filterpapir ifolge den angitte fremgangsmåte. De impregnerte papirark ble torket i vakuum ved ^-0° i 2 timer. De dehydratiserte, impregnerte ark ble kuttet i biter, festet til holdere, plassert i beholdere og sterilisert som beskrevet i Eksempel 1.

Holderne og bitene ble derefter fjernet fra beholderne og inokulert i alle de provefortynninger som var beskrevet i Eksempel Ila inneholdende Proteus mirabilis, Enterobacter aerogenes og Escherichia coli og inkubert i 12 timer ved 36°C. En sammenflytende lyserbd farve ble observert på bitene som var inokulert i alle konsentrasjoner av provefortynningene som inneholdt Proteus mirabilis. Ingen forandring var synlig på bitene som var inokulert med testprover inneholdende Enterobacter aerogenes og Escherichia coli.

Eksempel IV

Differensiert test

20,0 gram natriumalginat ble blandet til 1 liter destillert vann under dannelse av en losning som beskrevet i Eksempel 1. Til denne losning ble tilsatt en modifisert Simmon<1>s citratformulering:

Den ovenfor angitte formulering ble grundig blandet og lost

i losningen som derefter ble impregnert i ark avS & S nr. <1>+70» filterpapir og fremgangsmåten ved fremstilling av testanordningen ble gjentatt som beskrevet i Eksempel I.

De således fremstilte biter ble derefter inokulert og rehydra-tisert i alle konsentrasjoner av de tre testprover som er angitt i Eksempel III og inkubert i 12 timer ved 37°C.

Bitene som var inokulert i alle konsentrasjoner av testprovene inneholdende Enterobacter aerogenes forandret farve fra en sammenflytende lysegronn farve til en sammenflytende sterkt blå farve som anga nærvær av Enterobacter arter. Bitene som var inokulert i testprovene inneholdende Proteus mirabilis og Escherichia coli bibeholdt sin sammenflytende lysegrbnne farve.

Eksempel V

Differensiert test

20,0 gram "Kelzan", et lineært polysaccharid, ble til-'

satt til 1 liter destillert vann under dannelse av en losning derav. Til denne losning ble tilsatt et modifisert Levin EMB medium med folgende formulering:

Blandingen ble omrort inntil denne var fullstendig blandet og opplost.

Biter ble fremstilt ved å impregnere den resulterende losning i'«S & S nr. <1>f70"filterpapirark og testanordningene ble fremstilt ifolge Eksempel I.

Bitene ble dyppet i alle konsentrasjoner i de testprover som er beskrevet i Eksempel III. Bitene som var inokulert i provene inneholdende Escherichia coli ble observert å- ha et gront metallisk skinn. De anordninger som var inokulert i testprovene inneholdende Enterobacter aerogenes og Proteus mirabilis ble observert å bibeholde en sterk fiolett farve uten sterk glans.

Selv om det her er beskrevet, og gitt eksempler på i fbrste rekke en testanordning med en matrise festet til en holder og innelukket i en beholder, skal det observeres at oppfinnelsen også angår fremstilling av bare den impregnerte matrise. For eksempel kan van-lig laboratorieutstyr, slik som pinsetter og kasetter benyttes for å erstatte holderen 12 og beholderen 13. Den sterile dehydratiserte matrise kan holdes ved hjelp av pinsetter og dyppes i provene som skal analyseres og derefter plasseres i en kasett og inkuberes. Den impregnerte matrise 11 kan også rehydratiseres og inokuleres om onskes ved å tilsette et oppmålt volum av proven direkte til matrisen 11, isteden for den tidligere beskrevne dyppingsmetode.

I tillegg skulle det være klart at anordningen er anvendbar for overvåkning av tilstedeværende mikroorganismer i andre prover enn væskeprover. For dette bruk kan matrisen rehydratiseres med sterilt vann eller lignende og inokuleres ved kontakt med den Taste" prove som skal analyseres.

Med andre ord er foreliggende oppfinnelse ikke begrenset til spesifikke oppsugende materialer, næringsmedia, reagenser eller suspenderingsmidler som er beskrevet i de ovenfor angitte eksempler, da det er innlysende at store variasjoner eller kombinasjoner av oppsugende materiale, næringsmedia, reagenser og suspenderingsmidler kan anvendes til de ulike formål.

Foreliggende oppfinnelse angår altså en testanordning beregnet på å analysere en prove for mikroorganismer, og hvor anordningen har en absorberende matrise impregnert med et næringsmedium innbefattende et reagens og et suspenderingsmiddel. Testanordningen er beregnet på å inokuleres ved å dyppes i testprbven og dyrke mikroorganismene inneholdt i proven ved inkubering. Den nye testanordning kan selekt-ivt tilveiebringe en relativt hurtig semi-kvantitativ eller en differensiert mikrobiologisk analyse av en prove ved å folge en enkel og okonomisk fremgangsmåte.

Claims (4)

1. Testanordning for analyse av en prove f or innhoid avmitaoorganis-mer, hvilken anordning er beregnet på å inokuleres med en prove og inkuberes i en forseglbar beholder, og hvilken anordning omfatter en matrise av et flatt oppsugende materiale som har en kjent, konstant absorpsjonskapasitet, og som er impregnert med et næringsmedium og en farveindikator, karakterisert ved at matrisen er tilsatt som loka liseringsmiddel for de dannede mikroorganismekolonier O,1 - 5 vekt% av et suspenderingsmiddel som omfatter en opploselig forbindelse som er istand til å danne en viskos kolloidal suspensjon i en vandig opplosning.

2. Testanordning ifolge krav 1, karakterisert ved at suspenderingsmidlet er valgt fra gruppen bestående av inerte gummier, polysaccharider og alginater.

3. Testanordning ifolge krav 2, karakterisert ved at suspenderingsmidlet er natriumalginat.

4. Testanordning ifolge krav 2, karakterisert ved at suspenderingsmidlet er et lineært polysaccharid.