NO134009B

NO134009B -

Info

Publication number: NO134009B
Application number: NO832/72A
Authority: NO
Inventors: R Freake; L F Strenkoski; D G Aitken; B H Haden
Original assignee: Miles Lab
Priority date: 1971-03-16
Filing date: 1972-03-15
Publication date: 1976-04-26
Also published as: ES400754A1; BE780652A; NL7203068A; DE2212573B2; CA955163A; AU468833B2; NL156190B; DK130425C; DE2212573A1; FR2130253B1; FR2130253A1; SE392910B; CH572096A5; IT951072B; GB1365001A; AU3925772A; JPS5221075B1; NO134009C; DE2212573C3; DK130425B

Description

Analyser av væskeprover for nærvær av mikroorganismer utfores .vanligvis innen medisinen, industrien og av statlige organer for å bestemme gråden av mikrobiologisk forurensning av forskjellige prover. I mange analyser av denne type er nærværet av mikroorganismer ofte av sekundær viktighet, det er konsentrasjonen av mikroorganismene i prbven som er den viktigste faktor å bestemme. For eksempel fast-slåes bacteriuria ved bestemmelse av konsentrasjonen av mikroorgan'-ismer i en urinprove, og ikke ved det blotte nærvær av mikroorgani-ismer i denne. Likeledes ansees melk- og vannprover å være "for-urenset" bare når konsentrasjonen av tilstedeværende 'mikroorganismer overskrider en på forhånd bestemt maksimumsgrense. Analyzes of fluid samples for the presence of microorganisms are commonly performed in medicine, industry, and by government agencies to determine the degree of microbiological contamination of various samples. In many analyzes of this type, the presence of microorganisms is often of secondary importance, it is the concentration of the microorganisms in the sample that is the most important factor to determine. For example, bacteriuria is determined by determining the concentration of micro-organisms in a urine sample, and not by the mere presence of micro-organisms in it. Similarly, milk and water samples are considered to be "pre-contaminated" only when the concentration of micro-organisms present exceeds a predetermined maximum limit.

Selvsagt er det så snart konsentrasjonen av mikroorganismene overskrider den angitte grense, til stor hjelp og ofte nodvendig å identifisere mikroorganismen for best og raskt utfore behandling av infeksjonen eller for å bestemme og avbote årsaken til forurens-ningen. Of course, as soon as the concentration of the micro-organisms exceeds the specified limit, it is of great help and often necessary to identify the micro-organism in order to best and quickly carry out treatment of the infection or to determine and remedy the cause of the pollution.

En kvantitativ analysemetode for mikroorganismer innbefatter A quantitative analysis method for microorganisms includes

å fremstille seriefortynninger av en oppmålt mengde av proven, inokulere et næringsmedium med en oppmålt mengde av en fortynning, og inkubere det inokulerte medium i ca. 2h timer. Hvis proven er for-urenset kan individuelle kolonier av de formerte mikroorganismer visuelt observeres og telles. Konsentrasjonen av mikroorganismer pr. milliliter av proven beregnes derefter ved å multiplisere antallet av mikroorganismekolonier med fortynningen av proven. De således formerte spesifikke kolonier utgjor en ren kilde av mikroorganismen for dyrkning av disse på selektive eller differensierte media for å identifisere denne. Denne dyrkning krever hyppig re-inkubering i ytterligere 2h timer. to prepare serial dilutions of a measured amount of the sample, inoculate a nutrient medium with a measured amount of a dilution, and incubate the inoculated medium for approx. 2h hours. If the sample is contaminated, individual colonies of the multiplied microorganisms can be visually observed and counted. The concentration of microorganisms per milliliters of the sample is then calculated by multiplying the number of microorganism colonies by the dilution of the sample. The specific colonies thus propagated constitute a pure source of the microorganism for cultivation of these on selective or differentiated media in order to identify it. This cultivation requires frequent re-incubation for an additional 2 h hours.

Ulempene forbundet med den angitte fremgangsmåte er nødvendig-heten av å fremstille seriefortynninger av proven, nødvendigheten av å fremstille et agarmedium, den nodvendige tid for å tilveiebringe både en kvantitativ test og en differensiert test, og nødvendig-heten av en betydelig mengde rent og sterilisert laboratorieutstyr. The disadvantages associated with the stated method are the need to prepare serial dilutions of the sample, the need to prepare an agar medium, the time required to provide both a quantitative test and a differentiated test, and the need for a significant amount of clean and sterilized laboratory equipment.

En annen metode er utviklet, i hvilken oppmålte volumer av Another method has been developed, in which measured volumes of

en prove filtreres gjennom en semi-permeabel membran. Vanskelig-heten med metoden er å velge en membran som har en porositet slik at mikroorganismene forhindres fra å passere gjennom membranen. Efter filtreringstrinnet fjernes membranen fra filteret og anbringes på a sample is filtered through a semi-permeable membrane. The difficulty with the method is to choose a membrane that has a porosity such that the microorganisms are prevented from passing through the membrane. After the filtration step, the membrane is removed from the filter and placed on

et næringsmedium hvorved næringsmidler i dette kan diffundere gjennom membranen. Ved inkubering formeres mikroorganismene på membranen og kan derefter observeres og telles som tidligere beskrevet. a nutrient medium whereby nutrients in it can diffuse through the membrane. During incubation, the microorganisms multiply on the membrane and can then be observed and counted as previously described.

Mens den sistnevnte fremgangsmåte er en forbedring med hensyn til den tidligere fremgangsmåte, er filtreringsutstyr nodvendig, og i tillegg er det nodvendig å vaske og resterilisere filterutstyret. Proven må i tillegg fremdeles måles for filtrering, hvorved ytterligere- tid og utstyrskreves. While the latter method is an improvement over the former method, filtration equipment is required, and in addition, it is necessary to wash and resterilize the filter equipment. In addition, the sample must still be measured for filtration, which requires additional time and equipment.

Den nye testanordning ifolge oppfinnelsen omfatter en oppsugende matrise impregnert med et næringsmedium inneholdende test-reagenser, og et suspenderingsmiddei. I bruk dyppes den impregnerte matrise øyeblikkelig i eller på annen måte mettes med væsken for å inokulere matrisen som absorberer et kjent volum av proven. Avhengig av næringsmediet og det anvendte reagens kan en semikvan-titativ eller differensiert test utfores. Likeledes kan et antall anordninger, hver inneholdende et forskjellig medium og reagens, inokuleres, og både semi-kvantitative og differenserte tester kan utfores samtidig. I tillegg er det funnet at pålitelige semi-kvantitative og differensierte testresultater kan erholdes på mindre enn 12 timer. The new test device according to the invention comprises an absorbent matrix impregnated with a nutrient medium containing test reagents, and a suspending agent. In use, the impregnated matrix is immediately dipped in or otherwise saturated with the liquid to inoculate the matrix which absorbs a known volume of the sample. Depending on the nutrient medium and the reagent used, a semi-quantitative or differentiated test can be carried out. Likewise, a number of devices, each containing a different medium and reagent, can be inoculated, and both semi-quantitative and differentiated tests can be performed simultaneously. In addition, it has been found that reliable semi-quantitative and differentiated test results can be obtained in less than 12 hours.

En testanordning som benytter en metode til å inokulere en matrise impregnert med et næringsmedium ved direkte dypping i den prove som skal undersokes, er tidligere kjent. Denne anordning er beskrevet i norsk patent 92.507, svarende til US patent-skrift nr. 2.904.474, og innbefatter en papirremse impregnert med et næringsmedium inneholdende en testsubstans, remsen har et avtagbart håndtak, og en slire for å innelukke remsen for inkube-ringsformål. A test device that uses a method to inoculate a matrix impregnated with a nutrient medium by direct immersion in the sample to be examined is previously known. This device is described in Norwegian patent 92,507, corresponding to US patent document no. 2,904,474, and includes a paper strip impregnated with a nutrient medium containing a test substance, the strip has a removable handle, and a sheath to enclose the strip for incubation purposes .

Fravær av et suspenderingsraiddel i den angitte anordning er funnet å være årsak til folgende ulemper: (1) utvaskning av de opploselige næringsmidler og testsubstanser i mediet under dyppingen av anordningen i proven, (2) de opploselige substanser som forblir i remsen efter dyppingen er tilboyelige til å diffundere til det laveste punkt på remsen på grunn av gravitasjpns-flyt, og (3) de mobile mikroorganismer mislykkes i å lokaliseres og mislykkes således i å danne distinkte kolonier eller lokalise-ringer som er nodvendige for semi-kvantitativ testing. The absence of a suspending agent in the specified device has been found to be the cause of the following disadvantages: (1) leaching of the soluble foodstuffs and test substances in the medium during the immersion of the device in the sample, (2) the soluble substances that remain in the strip after the immersion are prone to to diffuse to the lowest point of the strip due to gravity flow, and (3) the mobile microorganisms fail to localize and thus fail to form distinct colonies or localization rings necessary for semi-quantitative testing.

Anvendelse av et suspenderingsmiddel i testanordningen ifolge foreliggende oppfinnelse gjor det mulig å overkomme de ulemper som her er beskrevet. Testanordningen ifolge foreliggende oppfinnelse er således tilpasset inokulering med proven direkte og det unngåes således på forhånd å oppmåle og/eller fortynne proven. Direkte og ufortynnet inokulering tilveiebringer dyrkningsmediet med hovedsakelig det samme miljo som proven, og reduserer derved den nodvendige tid som kreves av mikroorganismene for å tilpasset et nytt, strengt miljo, og fremskynder derved propageringen av disse. Tilveiebringelse av en testanordning for utforelse av differensierte tester og som er istand ti 1 å inokuleres direkte med proven tillater semi-kvantitative og differensierte tester og utfores samtidig. The use of a suspending agent in the test device according to the present invention makes it possible to overcome the disadvantages described here. The test device according to the present invention is thus adapted to direct inoculation with the sample and it is thus avoided to measure and/or dilute the sample in advance. Direct and undiluted inoculation provides the culture medium with essentially the same environment as the sample, and thereby reduces the necessary time required by the microorganisms to adapt to a new, strict environment, thereby accelerating their propagation. Providing a test device for performing differentiated tests and capable of being directly inoculated with the sample allows semi-quantitative and differentiated tests to be performed simultaneously.

Foreliggende oppfinnelse angår således en testanordning for analyse av en prove for innhold av makroorganismer, hvilken anordning er beregnet på å inokuleres med en prove og inkuberes i en forseglbar beholder, og hvilken anordning omfatter en matrise av et flatt oppsugende materiale som har en kjent, konstant absorps jonskapasi-tet, og som er impregnert med et næringsmedium og en farveindikator, hvilken testanordning er kjennetegnet ved at matrisen er tilsatt som lokaliseringsmiddel for de dannede mikroorganismekolonier "0,1 - 5 vekt% av et suspenderingsmiddel som omfatter en opplbselig forbindelse som er istand til å danne en viskos kolloidal suspensjon i en vandig opplosning. The present invention thus relates to a test device for analyzing a sample for the content of macro-organisms, which device is intended to be inoculated with a sample and incubated in a sealable container, and which device comprises a matrix of a flat absorbent material which has a known, constant absorption capacity, and which is impregnated with a nutrient medium and a color indicator, which test device is characterized by the fact that the matrix has been added as a localization agent for the formed microorganism colonies "0.1 - 5% by weight of a suspending agent comprising a soluble compound which is to form a viscous colloidal suspension in an aqueous solution.

Suspenderingsmidlet er valgt fra gruppen bestående av inerte gummier, polysaccharider og alginater, og er fortrinsvis natriumalginat eller et lineært polysaccharid. The suspending agent is selected from the group consisting of inert gums, polysaccharides and alginates, and is preferably sodium alginate or a linear polysaccharide.

Testanordningen beskrives i det folgende under henvis-ning til den vedlagte tegning.. Fig. 1 viser en testanordning ifolge denne oppfinnelse innelukket i en beholder, Fig. 2 er et forstorret utsnitt av anordningen i fig. 1 fjernet fra beholderen, idet utsnittet er tatt langs linjen 2-2 i fig. 1, og Fig. 3, 4, 5 og 6 viser matrisene med kolonilokaliseringer. The test device is described in the following with reference to the attached drawing. Fig. 1 shows a test device according to this invention enclosed in a container, Fig. 2 is an enlarged section of the device in fig. 1 removed from the container, the section being taken along the line 2-2 in fig. 1, and Fig. 3, 4, 5 and 6 show the matrices with colony locations.

I den vedlagte tegning, og spesielt i fig. 1 er testanordningen generelt angitt ved nummerangivelse 10. Testanordning IO innbefatter vanligvis en absorberende matrise 11 forbundet med en beholder 12 og innesluttbar innen en forseglbar beholder 13. In the attached drawing, and especially in fig. 1, the test device is generally indicated by reference number 10. Test device 10 usually includes an absorbent matrix 11 connected to a container 12 and closable within a sealable container 13.

Matrisen 11 er dannet av et flatt oppsugende materiale slik som absorberende filterpapir eller lignende, impregnert med et egnet næringsmedium innbefattet et reagens og et suspenderL ngs-middel. Matrisen 11 er tilpasset til å inokuleres ved å dyppes i proven som skal analyseres, og derved unngå den tidligere beskrevne nødvendighet av å oppmåde og/eller fortynne proven. Derfor er det nodvendig at matrisen 11 har en kjent konstant absorpsjonskapasitet for det formål å foreta semi-kvantitative bestemmelser. Hvis således matrisen 11 er kjent for; å kunne absorbere et kjent volum av proven, f.eks. 0.2 ml, kan konseatrasjonen av mikroorganismer i proven lett bestemmes, som senere skal .forklares. The matrix 11 is formed from a flat absorbent material such as absorbent filter paper or the like, impregnated with a suitable nutrient medium including a reagent and a suspending agent. The matrix 11 is adapted to be inoculated by dipping into the sample to be analysed, thereby avoiding the previously described necessity of measuring and/or diluting the sample. Therefore, it is necessary that the matrix 11 has a known constant absorption capacity for the purpose of making semi-quantitative determinations. If thus the matrix 11 is known for; to be able to absorb a known volume of the sample, e.g. 0.2 ml, the concentration of microorganisms in the sample can be easily determined, which will be explained later.

Ved rehydratisering av den oppsugende matrise 11 i en væskeprove absorberes et spesifikt volum av proven av matrisen 11 When rehydrating the absorbing matrix 11 in a liquid sample, a specific volume of the sample is absorbed by the matrix 11

og eventuelle tilstedeværende mikroorganismer i den absorberte prove absorberes likeledes av matrisen 11. På denne måte inokuleres matrisen 11. Når den inokulerte matrise 11 som er impregnert med et egnet næringsmedium derefter inkuberes, dyrkes mikroorganismene og danner kolonier. and any microorganisms present in the absorbed sample are likewise absorbed by the matrix 11. In this way, the matrix 11 is inoculated. When the inoculated matrix 11, which is impregnated with a suitable nutrient medium, is then incubated, the microorganisms grow and form colonies.

Således angir uttrykket "mikroorganismer" i denne sam-menheng den generelle klasse mikroorganismer omfattende gjær, andre sopparter eller bakterier; som foreligger i den prove som skal analyseres. Uttrykket "koloni" henviser til "mikroorganismene" efter dyrkningen. Uttrykket "kolonilokalisering" angir plasering av en koloni som den observeres på 11, og er synonymt med uttrykket "koloni". Thus, the term "microorganisms" in this context denotes the general class of microorganisms including yeast, other fungal species or bacteria; present in the sample to be analysed. The term "colony" refers to the "microorganisms" after cultivation. The term "colony location" indicates the location of a colony as observed at 11, and is synonymous with the term "colony".

Næringsmediet kan være et konvensjonelt medium eller en modifikasjon derav, kjent for å tilveiebringe et egnet miljo for den utvalgte test. Hvis der onskes en semi-kvantitativ test, kan der benyttes næringsmedium slik som "Bacto Brain Heart Infusion". Denne type medium er betraktet som et generelt medium og er kjent for å være istand ti 1 å dyrke de fleste mikroorganismer. Om det onskes å utfore en differensiert test, velges et næringsmedium som enkelte mikroorganismer kan styrkes på, men som ikke er istand til å tilveiebringe vekst av andre mikroorganismer. Eksempler på egnede media som er nyttige for dette formål er Christensen's formulering som beskrives i Journal of Bacteriology, The nutrient medium can be a conventional medium or a modification thereof, known to provide a suitable environment for the selected test. If a semi-quantitative test is desired, nutrient medium such as "Bacto Brain Heart Infusion" can be used. This type of medium is considered a general medium and is known to be suitable for growing most microorganisms. If it is desired to carry out a differentiated test, a nutrient medium is chosen on which certain microorganisms can be strengthened, but which is not able to provide growth for other microorganisms. Examples of suitable media useful for this purpose are Christensen's formulation described in the Journal of Bacteriology,

42, 461, som er kjent for å gi en positiv reaksjon overfor arter av Proteus, men som gir en negativ reaksjon overfor andre gram-negative mikroorganismer, og Simmons Citrat som er vel kjent for sin evne ti 1 å dyrke eitrat-forbrukende organismer, slike som arter av Klebsiella og Enterobacter, og som er kjent for sin mang- 42, 461, which is known to give a positive reaction against species of Proteus, but which gives a negative reaction against other gram-negative microorganisms, and Simmons Citrate which is well known for its ability to grow nitrate-consuming organisms, such as species of Klebsiella and Enterobacter, and which are known for their many

lende evne til å dyrke de som ikke kan anvende citrat, slik som Escherichia coli. ability to grow those that cannot use citrate, such as Escherichia coli.

Reagenset innbefatter fortrinsvis en indikator som er istand til å forårsake en farveforandring i matrisen ved respons på en positiv dyrkning av mikroorganismer. Reagenset kan være innarbeidet i næringsmediet og kan omfatte en enkel pH-indikator slik som. fenolrddt som vanligvis anvendes i Christensen's formulering. Denne indikator skifter fra gulorange til lyserodt i nærvær av en mikroorganisme, f.eks. Proteus-arter, sem er istand til å bryte ned urea i formuleringen. Likeledes kan reagenset innbe-fatte en reduksjon-oxydasjonstype indikator slik som en av de forskjellige tetrazolium-forbindelser, f.eks. 2,3,5-trifenyltetrazo-liumklorid (farvelost), som reduseres til et formazan, f.eks. tri-fenylformazan (intens rbdt) av de fleste mikroorganismer under deres vekst. Ved fremstilling av matrisen 11 for en semi-kvantitativ test foretrekkes en indikator som trifenyltetrazolium siden det reduserte produkt, trifenyltetraformazan ikke bare tilveiebringer en sterkt synlig farve, men også har den egenskap å være uopploselig. Den siste egenskap, sammen med det senere beskrevne suspenderingsmiddel, letter dannelsen av separate og distinkte koloniseringer. The reagent preferably includes an indicator capable of causing a color change in the matrix in response to a positive culture of microorganisms. The reagent can be incorporated into the nutrient medium and can include a simple pH indicator such as phenol rddt which is usually used in Christensen's formulation. This indicator changes from yellow-orange to bright red in the presence of a microorganism, e.g. Proteus species, which are able to break down urea in the formulation. Likewise, the reagent may include a reduction-oxidation type indicator such as one of the various tetrazolium compounds, e.g. 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (fare cheese), which is reduced to a formazan, e.g. tri-phenylformazan (intense rbdt) by most microorganisms during their growth. In preparing the matrix 11 for a semi-quantitative test, an indicator such as triphenyltetrazolium is preferred since the reduced product, triphenyltetraformazan not only provides a highly visible color, but also has the property of being insoluble. The latter property, together with the suspending agent described later, facilitates the formation of separate and distinct colonizations.

Tilsetning av et suspenderingsmiddel til impregnerings-formuleringen er nodvendig for å forhindre utvaskning av det opploselige medium og reagenset fra matrisen 11 under dyppingen av denne i væskeproven og for å lokalisere mikroorganismene i matrisen 11 efter inokuleringen. Suspenderingsmidlets evne til å lokalisere mikroorganismene og derved gjore dannelsen av separate og distinkte kolonier i og på matrisen 11 mulig er spesielt vik-tig ved utforelse av semi-kvantitative tester. Suspenderingsnid-let anvendes i formuleringen i konsentrasjoner varierende fra 0,1 til 5 vekt%, fortrinsvis fra 0,5 til 3 vekt#. Addition of a suspending agent to the impregnation formulation is necessary to prevent leaching of the soluble medium and the reagent from the matrix 11 during the immersion of this in the liquid sample and to locate the microorganisms in the matrix 11 after inoculation. The suspending agent's ability to localize the microorganisms and thereby enable the formation of separate and distinct colonies in and on the matrix 11 is particularly important when performing semi-quantitative tests. The suspending agent is used in the formulation in concentrations varying from 0.1 to 5% by weight, preferably from 0.5 to 3% by weight.

Suspenderingsmidlet er karakterisert ved å være opplø-selig i en vandig opplesning, og danne en viskos kolloidal suspensjon. Suspenderingsmidler som er funnet å være nyttige for dette formål, enten alene eller i kombinasjon, er kolloider, inerte gummier, carragener, alginater og forskjellige polysaccharider og The suspending agent is characterized by being soluble in an aqueous solution and forming a viscous colloidal suspension. Suspending agents found to be useful for this purpose, either alone or in combination, are colloids, inert gums, carrageenans, alginates and various polysaccharides and

polypeptider. polypeptides.

Efter at matrisen 11 er impregnert, i;6rkes den derefter. Siden en hoy temperatur kan innvirke på noe av næringsmidlet og testmaterialene som er impregnert i matrisen 11, er det funnet at torking av den impregnerte matrise 1-1 i et vakuum eller en blåse-ovn ved 40 - 60°C i 1 til 3 timer er den foretrukne torkemetode. After the matrix 11 is impregnated, it is then dried. Since a high temperature can affect some of the food and test materials impregnated in the matrix 11, it has been found that drying the impregnated matrix 1-1 in a vacuum or a blowing oven at 40 - 60°C for 1 to 3 hours is the preferred drying method.

For å tilveiebringe en hensiktsmessig integrert testanordning IO, festes den tbrkede impregnerte matrise 11 til en holder eller et håndtak 12. Holderen 12 er en langstrakt del fortrinsvis dannet av et stivt, uopplbselig materiale, slik som en remse av polyethylenterefthalat,eller lignende. Siden matrisen 11 er beregnet for mikrobiologiske formål heller enn kjemiske formål, må spesielle forholdsregler taes for å sikre at matrisen To provide a suitable integrated test device 10, the broken impregnated matrix 11 is attached to a holder or a handle 12. The holder 12 is an elongate part preferably formed of a rigid, insoluble material, such as a strip of polyethylene terephthalate, or the like. Since the matrix 11 is intended for microbiological purposes rather than chemical purposes, special precautions must be taken to ensure that the matrix

11 festes til holderen 12 med et mikrobiologisk inert lim. Visse dobbeltklebende taper, slik som nr. "415" og "419", er funnet å være nyttige for dette formål. Det er også funnet at matrisen 11 lett kan festes til holderen 12 uten å påvirke hverken matrisen 11 eller det impregnerte medium eller reagens. For å lette dette plaseres et tynt polyethylenark 14 (fig. 2) mellom holderen 12 11 is attached to the holder 12 with a microbiologically inert adhesive. Certain double-sided tapes, such as Nos. "415" and "419", have been found useful for this purpose. It has also been found that the matrix 11 can be easily attached to the holder 12 without affecting either the matrix 11 or the impregnated medium or reagent. To facilitate this, a thin polyethylene sheet 14 (fig. 2) is placed between the holder 12

og matrisen 11, og tilstrekkelig varme påfores siden 16 på holderen 12 lengst bort fra matrisen 11 for å bevirke at remsen smel-ter og binder matrisen 11 til holderen 12. and the matrix 11, and sufficient heat is applied to the side 16 of the holder 12 farthest from the matrix 11 to cause the strip to melt and bond the matrix 11 to the holder 12.

Matrisen 11 (fig. 1) forbundet med holder 12 plaseres derefter i den forseglbare beholder 13, steriliseres, og beholderen 13 forsegles. Vanligvis er en hvilken som helst beholder 13 The matrix 11 (Fig. 1) connected to the holder 12 is then placed in the sealable container 13, sterilized, and the container 13 is sealed. Generally, any container is 13

som er istand til å forsegles funnet å være anvendbar for dette formål. Det er funnet at en konvolutt av polyethylen eller lignende, som forsegles langs sine sider 17 og IB og bunn 19, er akseptabel for dette which is capable of being sealed is found to be useful for this purpose. It has been found that an envelope of polyethylene or the like, which is sealed along its sides 17 and 1B and bottom 19, is acceptable for this

formål. Toppen 21 til beholder 13 eller konvolutten er fortrinnsvis utstyrt med en konvensjonell låsende forseglingslapp 22 som friksjohsforsegler beholderen 13 ved påforing av press på denne, og således overflødiggjor nødvendigheten av spesielle f orseglingsanord-ninger. Fortrinnsvis har beholder 13 dannet av et klart transparent materiale som gjor operioren istand til visuelt å observere og "av-lese" matrisen 11 i beholderen 13 uten å utsette operatoren eller laboratoriet for de dyrkede mikroorganismer. purpose. The top 21 of the container 13 or the envelope is preferably equipped with a conventional locking sealing tab 22 which friction-seals the container 13 by applying pressure to it, and thus eliminates the need for special sealing devices. Preferably, the container 13 is formed of a clear transparent material which enables the operator to visually observe and "read" the matrix 11 in the container 13 without exposing the operator or the laboratory to the cultured microorganisms.

I bruk er beholder 13 uforseglet og den sterile holder 12 og matrisen 11 er fjernet fra denne. Matrisen 11 dyppes i væskeproven som skal undersokes, slik som urin, melk, vann eller lignende, for å rehydratisere,.og inokulere matrisen 11. Den inokulerte matrise 11 forbundet til holder 12 plasseres bakteriefritt i beholder 13, og beholder 13 gjenforsegles og inkuberes ved den optimale temperatur, avhengig av den mistenkte mikroorganisme, i minst h timer. De fleste mikroorganismer inkuberes optimalt ved temperaturer fra ^ til In use, container 13 is unsealed and the sterile holder 12 and matrix 11 are removed from this. The matrix 11 is dipped in the liquid sample to be examined, such as urine, milk, water or the like, to rehydrate and inoculate the matrix 11. The inoculated matrix 11 connected to holder 12 is placed bacteria-free in container 13, and container 13 is resealed and incubated at the optimal temperature, depending on the suspected microorganism, for at least h hours. Most microorganisms are optimally incubated at temperatures from ^ to

^0°C, og fortrinnsvis fra 35° til 39°G. Efter inkuberingsperi-oden observeres matrisen 11 visuelt og resultatene av den spesielle test avleses. Hvis testen er en semi-kvantitativ test, vil nærvær av farvede flekker indikere kolonilokaliseringer og tettheten av disse observeres, som tidligere beskrevet. Hvis testen er differensiert, observeres en farve på matrisen, hvilken farve er indikativ for positiv eller negativ dyrkning. Efter at resultatene av undersøk-elsen er kjent, kan anordningen 10 steriliseres og kastes. Det er imidlertid funnet at sterilisering ikke bevirker farveforandring i matrisen 11, som er et resultat av dyrkningen av mikroorganismene, ^0°C, and preferably from 35° to 39°G. After the incubation period, the matrix 11 is observed visually and the results of the special test are read. If the test is a semi-quantitative test, the presence of colored spots will indicate colony locations and the density of these is observed, as previously described. If the test is differentiated, a color is observed on the matrix, which color is indicative of positive or negative culture. After the results of the examination are known, the device 10 can be sterilized and discarded. However, it has been found that sterilization does not cause a color change in the matrix 11, which is a result of the cultivation of the microorganisms,

og anordningen 10 eller bare matrisen 11 kan oppbevares som en perman-ent plate om onskes. and the device 10 or just the matrix 11 can be stored as a permanent disk if desired.

Ved de fleste av slike konsentrasjonsundersokelser uttrykkes disse i enheter på 10 for å angi den relative konsentrasjon av den tilstedeværende mikroorganisme i en enkelt milliliter av proven. Dette kan lett forståes fra Figurene 3-6 hvor kolonilokaliseringene, som de fremgår på matrisen 11 i forskjellige konsentrasjoner er illustrert. Kolonilokaliseringene 23a og 23b i Figurene 3 og h kan lett telles, mens det i Figurene 5 og 6 er flerfoldige kolonilokaliseringer 23c og 23d som er så store at en spesifikk telling ville være meget vanskelig. Imidlertid, siden antall kolonilokaliseringer' er bare relativekan konsentrasjonen av mikroorganismer pr. milliliter lett visuelt bestemmes ved å:..sammenligne tettheten av koloni-ene som de fremgår på matrisen 11 med en sammenligningsplansje eller standard. In most such concentration studies, these are expressed in units of 10 to indicate the relative concentration of the microorganism present in a single milliliter of the sample. This can be easily understood from Figures 3-6 where the colony localizations, as they appear on the matrix 11 in different concentrations, are illustrated. The colony locations 23a and 23b in Figures 3 and h can be easily counted, while in Figures 5 and 6 there are multiple colony locations 23c and 23d which are so large that a specific count would be very difficult. However, since the number of colony locations' is only relative, the concentration of microorganisms per milliliters is easily visually determined by:..comparing the density of the colonies as they appear on the matrix 11 with a comparison plate or standard.

Av rent illustrative grunner er det antatt at hver av matrisene lia - lid i Fig. 3 - 6 er kjent for å absorbere 0,2 ml av en vandig prove. Det kan derefter lett bestemmes at antall og tetthet av kolonilokaliseringene 23a synlig i Fig. 3 angir at det er fire kolonilokaliseringer 23a inneholdt i 0,2 milliliter av proven, som angir tyve mikroorganismer i 1 milliliter i testproven. Siden de uttrykte konsentrasjoner imidlertid bare er relative, angis en konsentrasjon av denne mengde som 10<1> mikroorganismer pr. ml. Fig. <*>f ville derved uttrykkes som 10 2 eller rundt regnet 100 mikroorganismer pr. ml. I Fig. 5 og 6 er antallet av kolonilokaliseringer 23c og 23d langt storre og av denne grunn bestemmes tettheten av kolonilokaliseringene og dermed konsentrasjonen av mikroorganismene i proven. Fig. 5 ville angi ca. 10^ eller rundt regnet 1000 mikroorganismer pr. ml og Fig. 6 ville uttrykkes som 10 mikroorganismer pr. ml. Konsentrasjoner over 10y mikroorganismer pr. ml ville frem-komme på matrisen 11 som en fullstendig hel farve som ville gi matrisen 11 et sammenflytende farveutseende. For purely illustrative reasons, it is assumed that each of the matrices 11a - 11a in Fig. 3 - 6 is known to absorb 0.2 ml of an aqueous sample. It can then be easily determined that the number and density of the colony locations 23a visible in Fig. 3 indicates that there are four colony locations 23a contained in 0.2 milliliters of the sample, which indicates twenty microorganisms in 1 milliliter of the test sample. However, since the expressed concentrations are only relative, a concentration of this quantity is indicated as 10<1> microorganisms per ml. Fig. <*>f would thereby be expressed as 10 2 or around 100 micro-organisms per ml. In Fig. 5 and 6, the number of colony localizations 23c and 23d is far greater and for this reason the density of the colony localizations and thus the concentration of the microorganisms in the sample is determined. Fig. 5 would indicate approx. 10^ or around 1,000 micro-organisms per ml and Fig. 6 would be expressed as 10 microorganisms per ml. Concentrations above 10y microorganisms per ml would appear on the matrix 11 as a completely solid color which would give the matrix 11 a confluent color appearance.

De folgende eksempler illustrerer den forbedrede testanordning ifolge denne oppfinnelse. The following examples illustrate the improved test device according to this invention.

Eksempel 1 Example 1

Testanordning Test device

20,0 g natriumalginat ble tilsatt til 1 liter destillert vann og omrort inntil losning. Til denne losning ble folgende formulering tilsatt: 20.0 g of sodium alginate was added to 1 liter of distilled water and stirred until dissolved. The following formulation was added to this solution:

Bestanddelene ble blandet godt inntil det lostes i alginat-losningen under dannelse av en slutt-pH på 7, h. The ingredients were mixed well until dissolved in the alginate solution, forming a final pH of 7.h.

Ark av"Schleiiher and Schuell No. k70" filtrerpapir ble dyppet Sheets of "Schleiher and Schuell No. k70" filter paper were dipped

i den ovenfor angitte losning inntil de var fullstendig mettet og derefter trukket mellom to glasstaver for å fjerne overskuddslosning og for å sikre ens impregnering. Arkene ble derefter torket i en luftovn ved ca. 55°C i.2 timer..De dehydratiserte ark ble derefter kuttet opp i biter som målte 1x2 cm, hvilken storrelse var funnet å kunne absorbere 0,2 ml væskeprove. in the above solution until they were completely saturated and then pulled between two glass rods to remove excess solution and to ensure uniform impregnation. The sheets were then dried in an air oven at approx. 55°C for 2 hours. The dehydrated sheets were then cut into pieces measuring 1x2 cm, which size was found to absorb 0.2 ml of liquid sample.

Holdere for bitene ble fremstilt ved å kutte opp ark av poly-ethylenterefthalat i remser som målte 1x6 cm. For å feste bitene til holderne, ble bitene plassert på et varmebord og et tynt ark av polyethylen ble plassert over hver bit. Remsene ble derefter plassert over polyethylenarkene slik at hver bit var plassert nær en ende av hver remse. En varm plate oppvarmet til ca. 138°C ble plassert på toppen av remsene i ca. 5 sekunder for å smelte polyethylenarkene og binde biten til remsene. Holderen og de festede biter ble derefter plassert i forseglbare transparente beholdere og sterilisert med ethylenoxyd. Holders for the pieces were made by cutting up sheets of polyethylene terephthalate into strips measuring 1x6 cm. To attach the pieces to the holders, the pieces were placed on a heating table and a thin sheet of polyethylene was placed over each piece. The strips were then placed over the polyethylene sheets so that each piece was located near one end of each strip. A hot plate heated to approx. 138°C was placed on top of the strips for approx. 5 seconds to melt the polyethylene sheets and tie the piece to the strips. The retainer and attached pieces were then placed in sealable transparent containers and sterilized with ethylene oxide.

Eksempel II Example II

Semi- kvantitativ test Semi-quantitative test

a. Fremstilling av testprover. a. Preparation of test samples.

Testprover ble fremstilt ved å propagere kulturer av Escherichia coli, Proteus mirabil-is, Enterobacter aerogenes, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus og Streptococcus faecalis i hjerne-hjerteinfusjonsbuljonger til maksimal uklarhet (1-5 x 10<Q7> celler pr. ml). Ti-foldige seriefortynninger av hver kultur ble fremstilt ved bruk av fysiologisk saltlosning som fortynner for å tilveie- - bringe serie bakterie-suspensjoner av hver kultur i det teoretiske område fra 10<1> til 10<?> celler pr. milliliter. Test samples were prepared by propagating cultures of Escherichia coli, Proteus mirabil-is, Enterobacter aerogenes, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus and Streptococcus faecalis in brain-heart infusion broths to maximum turbidity (1-5 x 10<Q7> cells per ml). Ten-fold serial dilutions of each culture were prepared using physiological saline as a diluent to provide serial bacterial suspensions of each culture in the theoretical range of 10<1> to 10<?> cells per cell. milliliters.

b. Undersøkelse av provene. b. Examination of the sample.

For å undersoke hver av de ovenfor beskrevne testprover ble en testanordning som beskrevet i Eksempel 1 anvendt. Beholderen var uforseglet og holderen og den oppsugende bit fjernet derfra. Den sterile, dehydratiserte matrise ble dyppet i en av .provefortynningene for å inokulere og rehydratisere matrisen eller biten. Den inokulerte bit ble igjen, sammen med holderen, plassert i beholderen. Beholderen ble derefter forseglet for å forhindre dehydratisering av biten og plassert i et inkuberingsrom opprettholdt ved 37°C i ca. 12 timer. En konvensjonell plateteller ble utfort på hver av provefortynningene for å fastslå cellekonsentrasjonene inneholdt i disse og for å tjene som kontroll for de erholdte resultater ved testanordningen. To examine each of the test samples described above, a test device as described in Example 1 was used. The container was unsealed and the holder and absorbent bit removed from it. The sterile, dehydrated matrix was dipped into one of the sample dilutions to inoculate and rehydrate the matrix or piece. The inoculated bit was again, together with the holder, placed in the container. The container was then sealed to prevent dehydration of the piece and placed in an incubation room maintained at 37°C for approx. 12 hours. A conventional plate counter was run on each of the sample dilutions to determine the cell concentrations contained therein and to serve as a control for the results obtained by the test device.

Efter inkubasjonstiden ble anordningene fjernet fra inkubator-en og matrisene ble observert gjennom de transparente beholdere. Reduksjon av det farvelbse trifenyltetrazolium av mikroorganismene til det magentarode trifenyltetraformazan var synlig i alle de in-kuberte biter. I de biter som ble inokulert med prover som hadde en cellekonsentrasjon på mindre enn 10^ celler pr. ml, ble det observert distinkte og definerte magentarode flekker som anga en kolonilokalisering, hvilke flekker oket i antall efter som den kjente konsentrasjon på testproven oket. Sammenflytende magentarodt ble observert på alle biter som var inokulert med en prove med en konsentrasjon på lC<r> celler pr. ml eller hoyere. After the incubation time, the devices were removed from the incubator and the matrices were observed through the transparent containers. Reduction of the yellow triphenyltetrazolium by the microorganisms to the magenta-red triphenyltetraformazan was visible in all the incubated pieces. In the pieces that were inoculated with samples that had a cell concentration of less than 10^ cells per ml, distinct and defined magenta-red spots indicating a colony location were observed, which spots increased in number as the known concentration on the test sample increased. Confluent magenta red was observed on all pieces inoculated with a sample at a concentration of 1C<r> cells per ml or higher.

Ved å sammenligne antall flekker som var synlige på bitene By comparing the number of spots that were visible on the pieces

og cellekonsentrasjonene i testprovene ble det fastslått at et defin-ert og distinkt forhold var tilstede. Det ble observert at tettheten eller antall flekker oket i samsvar med konsentrasjonen av mikroorganismer i testprovene. and the cell concentrations in the test samples, it was determined that a defined and distinct relationship was present. It was observed that the density or number of spots increased in accordance with the concentration of microorganisms in the test samples.

Når disse undersokelser ble gjentatt med kliniske urinprover, friskt pasteurisert melk av grad A og vrakede melkeprover, ble hovedsakelig de samme resultater erholdt. Kolonilokaliseringene på bitene korresponderte med de erholdte resultater ved en agarplatekontroll. When these investigations were repeated with clinical urine samples, fresh pasteurized grade A milk and scraped milk samples, essentially the same results were obtained. The colony localizations on the pieces corresponded with the results obtained in an agar plate control.

Når andre vanlige suspenderingsmidler slik som forskjellige alginater, inerte polysaccharidgummier, lineære polysaccharider, carragener og lave konsentrasjoner av agar ble benyttet isteden for natriumalginat i den i Eksempel 1 angitte formulering, ble hovedsakelig de samme resultater observert idet de propagerte kolonier ble lokalisert og en semi-kvantitativ bes t-emmelse ble erholdt. When other common suspending agents such as various alginates, inert polysaccharide gums, linear polysaccharides, carrageens and low concentrations of agar were used instead of sodium alginate in the formulation given in Example 1, essentially the same results were observed in that the propagated colonies were located and a semi- quantitative evidence was obtained.

Når undersøkelsene ble gjentatt ved bruk av en anordning fremstilt ifolge Eksempel 1, men uten suspenderingsmiddel ble det observert at bitene hadde en sammenflytende lyserod eller magentarod farve ved alle konsentrasjoner efter inkuberingen. Således ble det funnet at en semi-kvantitativ bestemmelse av de fortynnede prover var umulig i fravær av suspenderingsmiddel idet lokalisering av mikroorganismene mislykkes. When the investigations were repeated using a device prepared according to Example 1, but without suspending agent, it was observed that the pieces had a confluent light red or magenta color at all concentrations after the incubation. Thus, it was found that a semi-quantitative determination of the diluted samples was impossible in the absence of suspending agent, as localization of the microorganisms fails.

Eksempel III Example III

Differensiert test Differentiated test

20,0 g natriumalginat ble tilsatt til 1 liter destillert vann for å fremstille en losning ifolge Eksempel 1. Til denne losning ble tilsatt en modifisert Christensen's formulering med folgende formulering: 20.0 g of sodium alginate was added to 1 liter of distilled water to prepare a solution according to Example 1. To this solution was added a modified Christensen's formulation with the following formulation:

Formuleringen ble grundig blandet med natriumalginatlosningen inntil alt var lost, og den resulterende losning ble impregnert i "S & S nr. ^70"filterpapir ifolge den angitte fremgangsmåte. De impregnerte papirark ble torket i vakuum ved ^-0° i 2 timer. De dehydratiserte, impregnerte ark ble kuttet i biter, festet til holdere, plassert i beholdere og sterilisert som beskrevet i Eksempel 1. The formulation was thoroughly mixed with the sodium alginate solution until all was dissolved, and the resulting solution was impregnated into "S & S No. 70" filter paper according to the stated procedure. The impregnated paper sheets were dried in vacuum at ^-0° for 2 hours. The dehydrated, impregnated sheets were cut into pieces, attached to holders, placed in containers and sterilized as described in Example 1.

Holderne og bitene ble derefter fjernet fra beholderne og inokulert i alle de provefortynninger som var beskrevet i Eksempel Ila inneholdende Proteus mirabilis, Enterobacter aerogenes og Escherichia coli og inkubert i 12 timer ved 36°C. En sammenflytende lyserbd farve ble observert på bitene som var inokulert i alle konsentrasjoner av provefortynningene som inneholdt Proteus mirabilis. Ingen forandring var synlig på bitene som var inokulert med testprover inneholdende Enterobacter aerogenes og Escherichia coli. The holders and pieces were then removed from the containers and inoculated in all the sample dilutions described in Example IIa containing Proteus mirabilis, Enterobacter aerogenes and Escherichia coli and incubated for 12 hours at 36°C. A confluent lyserbd color was observed on the pieces inoculated in all concentrations of the sample dilutions containing Proteus mirabilis. No change was visible on the pieces inoculated with test samples containing Enterobacter aerogenes and Escherichia coli.

Eksempel IV Example IV

Differensiert test Differentiated test

20,0 gram natriumalginat ble blandet til 1 liter destillert vann under dannelse av en losning som beskrevet i Eksempel 1. Til denne losning ble tilsatt en modifisert Simmon<1>s citratformulering: 20.0 grams of sodium alginate were mixed with 1 liter of distilled water to form a solution as described in Example 1. To this solution was added a modified Simmon<1>'s citrate formulation:

Den ovenfor angitte formulering ble grundig blandet og lost The above formulation was thoroughly mixed and lost

i losningen som derefter ble impregnert i ark avS & S nr. <1>+70» filterpapir og fremgangsmåten ved fremstilling av testanordningen ble gjentatt som beskrevet i Eksempel I. in the solution which was then impregnated in sheets of S & S No. <1>+70" filter paper and the procedure for manufacturing the test device was repeated as described in Example I.

De således fremstilte biter ble derefter inokulert og rehydra-tisert i alle konsentrasjoner av de tre testprover som er angitt i Eksempel III og inkubert i 12 timer ved 37°C. The pieces thus prepared were then inoculated and rehydrated in all concentrations of the three test samples indicated in Example III and incubated for 12 hours at 37°C.

Bitene som var inokulert i alle konsentrasjoner av testprovene inneholdende Enterobacter aerogenes forandret farve fra en sammenflytende lysegronn farve til en sammenflytende sterkt blå farve som anga nærvær av Enterobacter arter. Bitene som var inokulert i testprovene inneholdende Proteus mirabilis og Escherichia coli bibeholdt sin sammenflytende lysegrbnne farve. The pieces inoculated with all concentrations of the test samples containing Enterobacter aerogenes changed color from a confluent light green color to a confluent bright blue color indicating the presence of Enterobacter species. The pieces inoculated in the test samples containing Proteus mirabilis and Escherichia coli retained their confluent light green color.

Eksempel V Example V

Differensiert test Differentiated test

20,0 gram "Kelzan", et lineært polysaccharid, ble til-' 20.0 grams of "Kelzan", a linear polysaccharide, was

satt til 1 liter destillert vann under dannelse av en losning derav. Til denne losning ble tilsatt et modifisert Levin EMB medium med folgende formulering: added to 1 liter of distilled water while forming a solution thereof. A modified Levin EMB medium with the following formulation was added to this solution:

Blandingen ble omrort inntil denne var fullstendig blandet og opplost. The mixture was stirred until it was completely mixed and dissolved.

Biter ble fremstilt ved å impregnere den resulterende losning i'«S & S nr. <1>f70"filterpapirark og testanordningene ble fremstilt ifolge Eksempel I. Bits were prepared by impregnating the resulting solution in "S & S No. <1>f70" filter paper sheets and the test devices were prepared according to Example I.

Bitene ble dyppet i alle konsentrasjoner i de testprover som er beskrevet i Eksempel III. Bitene som var inokulert i provene inneholdende Escherichia coli ble observert å- ha et gront metallisk skinn. De anordninger som var inokulert i testprovene inneholdende Enterobacter aerogenes og Proteus mirabilis ble observert å bibeholde en sterk fiolett farve uten sterk glans. The pieces were dipped in all concentrations in the test samples described in Example III. The pieces inoculated into the sample containing Escherichia coli were observed to have a green metallic skin. The devices inoculated in the test samples containing Enterobacter aerogenes and Proteus mirabilis were observed to retain a strong violet color without strong gloss.

Selv om det her er beskrevet, og gitt eksempler på i fbrste rekke en testanordning med en matrise festet til en holder og innelukket i en beholder, skal det observeres at oppfinnelsen også angår fremstilling av bare den impregnerte matrise. For eksempel kan van-lig laboratorieutstyr, slik som pinsetter og kasetter benyttes for å erstatte holderen 12 og beholderen 13. Den sterile dehydratiserte matrise kan holdes ved hjelp av pinsetter og dyppes i provene som skal analyseres og derefter plasseres i en kasett og inkuberes. Den impregnerte matrise 11 kan også rehydratiseres og inokuleres om onskes ved å tilsette et oppmålt volum av proven direkte til matrisen 11, isteden for den tidligere beskrevne dyppingsmetode. Although it has been described here, and given examples of primarily a test device with a matrix attached to a holder and enclosed in a container, it should be observed that the invention also relates to the production of just the impregnated matrix. For example, common laboratory equipment such as tweezers and cassettes can be used to replace the holder 12 and the container 13. The sterile dehydrated matrix can be held using tweezers and dipped into the sample to be analyzed and then placed in a cassette and incubated. The impregnated matrix 11 can also be rehydrated and inoculated if desired by adding a measured volume of the sample directly to the matrix 11, instead of the previously described dipping method.

I tillegg skulle det være klart at anordningen er anvendbar for overvåkning av tilstedeværende mikroorganismer i andre prover enn væskeprover. For dette bruk kan matrisen rehydratiseres med sterilt vann eller lignende og inokuleres ved kontakt med den Taste" prove som skal analyseres. In addition, it should be clear that the device can be used for monitoring microorganisms present in samples other than liquid samples. For this use, the matrix can be rehydrated with sterile water or the like and inoculated by contact with the "Taste" sample to be analyzed.

Med andre ord er foreliggende oppfinnelse ikke begrenset til spesifikke oppsugende materialer, næringsmedia, reagenser eller suspenderingsmidler som er beskrevet i de ovenfor angitte eksempler, da det er innlysende at store variasjoner eller kombinasjoner av oppsugende materiale, næringsmedia, reagenser og suspenderingsmidler kan anvendes til de ulike formål. In other words, the present invention is not limited to specific absorbent materials, nutrient media, reagents or suspending agents that are described in the examples given above, as it is obvious that large variations or combinations of absorbent material, nutrient media, reagents and suspending agents can be used for the various purpose.

Foreliggende oppfinnelse angår altså en testanordning beregnet på å analysere en prove for mikroorganismer, og hvor anordningen har en absorberende matrise impregnert med et næringsmedium innbefattende et reagens og et suspenderingsmiddel. Testanordningen er beregnet på å inokuleres ved å dyppes i testprbven og dyrke mikroorganismene inneholdt i proven ved inkubering. Den nye testanordning kan selekt-ivt tilveiebringe en relativt hurtig semi-kvantitativ eller en differensiert mikrobiologisk analyse av en prove ved å folge en enkel og okonomisk fremgangsmåte. The present invention therefore relates to a test device intended to analyze a sample for microorganisms, and where the device has an absorbent matrix impregnated with a nutrient medium including a reagent and a suspending agent. The test device is intended to be inoculated by dipping into the test sample and cultivating the microorganisms contained in the sample by incubation. The new test device can selectively provide a relatively fast semi-quantitative or a differentiated microbiological analysis of a sample by following a simple and economical procedure.

Claims

1. Test device for the analysis of a sample for contained microorganisms, which device is intended to be inoculated with a sample and incubated in a sealable container, and which device comprises a matrix of a flat absorbent material having a known, constant absorption capacity , and which is impregnated with a nutrient medium and a color indicator, characterized in that the matrix has been added as a localizing agent for the formed microorganism colonies 0.1 - 5% by weight of a suspending agent comprising a soluble compound capable of forming a viscous colloidal suspension in an aqueous solution.

2. Test device according to claim 1, characterized in that the suspending agent is selected from the group consisting of inert gums, polysaccharides and alginates.

3. Test device according to claim 2, characterized in that the suspending agent is sodium alginate.

4. Test device according to claim 2, characterized in that the suspending agent is a linear polysaccharide.