NO122123B - - Google Patents

Description

Fremgangsmåte til utvinning av ren nukleinsyre.

Foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte for fra animalske eller ve-getabilske råmaterialer, og spesielt fra kold fiskemelke, å utvinne ren nukleinsyre.

Det kjennes fremgangsmåter til behandling av forskjellige animalske stoffer for å utvinne nukleinsyre, særlig ved behandling av animalske materialer med natronlut og utfelling av nukleat med alkohol. Disse fremgangsmåter gir forurensede nuk-leinsyrer. Hvis man ønsker å få ren nukleinsyre, må man utsette materialet for en behandling for å befri det for de organiske og mineralske forurensninger, og utføre ekstrahering og utfelling først med tem-melig rene produkter. Tysk patent nr. 304.003 beskriver således en fremgangsmåte for rensning av hydrolyserte proteiner ifølge hvilken hydrolyseoppløsningene behandles med kalsium- eller magnesium-hydroksyd eller en blanding av disse for å eliminere visse forurensninger som gela-tinøse stoffer eller stoffer som med kalk eller magnesia danner uoppløselige salter. Selve proteinstoffene påvirkes ikke av denne behandling.

Fremgangsmåten etter oppfinnelsen,

hvor ren nukleinsyre utvinnes fra de nevnte råstoffer, og hvor råstoffer, f. eks. på forhånd opphakket fersk fiskemelke behandles med alkalilut og alkalinukleat felles ut med alkohol, karakterisert ved at det utfelte alkalinukleat renses ved behandling under oppvarmning med kalsiumsulfat i nærvær av vann og ved at det fra den rensede oppløsning av alkalinukleat felles ut praktisk talt ren nukleinsyre ved hjelp av en blanding av alkohol og saltsyre, hvor-

etter, om ønsket, den erholdte nukleinsyre i alkoholisk suspensjon behandles med en alkoholisk oppløsning av natrium eller av et metallsalt for å danne ved dobbelt omsetning det tilsvarende nukleat.

For å utføre fremgangsmåten ifølge foreliggende oppfinnelse må fersk fiskemelke opphakkes slik at det dannes en flytende velling. Denne velling behandles med konsentrert, varm alkalilut. Blandingen blir langsomt flytende, og hydrolysen stop-per når det hele danner en farget væske.

Det avkjøles til ca. 40°, og rå alkalinukleat utfelles med alkohol, det vaskes ved dekantering, og nukleatet fraskilles ved hjelp av kjente fysikalske metoder, f. eks. ved sentrifugering eller filtrering under trykk.

Den ikke tørkede utfelling renses ved innvirkning av kalsiumsulfat under oppvarmning i nærvær av vann. En første filtrering utført i varm tilstand for å hin-dre tilstopping av filtrene etterfølges av en annen filtrering av saften i kold tilstand for å fjerne alt av proteiner som er holdt tilbake av alkalinukleatet. Det fåes en klar, lett farvet oppløsning, som inneholder alkalinukleatet i praktisk talt ren tilstand.

Nukleinsyre utfelles fra denne rensede oppløsning på hvilken som helst kjent måte, f. eks. ved hjelp av saltsur alkohol. Den fraskilles ved væskeatskillelse eller sentrifugering og vaskes med alkohol og aceton. Der fåes en praktisk talt ren tymonukleinsyre eller desoksyribonukleinsyre.

For å fremstille salter av nukleinsyre tilsettes til en suspensjon av nukleinsyre i alkohol en alkoholisk oppløsning av natrium eller av et salt av det metall som skal danne nukleatet. Egnede salter er angitt under avsnitt II senere i denne be-skrivelse/ Metallnukleatet dannes ved dobbelt omsetning og kan fraskilles ved hvilken som helst kjent metode.

Eksempel.

500 kg fersk fiskemelke hakkes opp inn-til der fåes en flytende velling. Denne velling behandles med 85 liter natronlut ved 36° Bé i en time ved 80° C. Det røres om under oppvarmningen. Den seige masse som til å begynne med dannes ved opp-tagelsen av natrium blir langsomt flytende, og der dannes etter en time en brunaktig væske som kjøles til 40° C.

Hydrolysevæsken helles så i 650 liter alkohol av 80° G.L. Urent natriumnukleat felles ut og avsettes hurtig Væsken dekan-teres, og etter å ha vasket utfellingen tre ganger med alkohol ved 80° G.L. samles utfellingen opp etter å ha atskilt væsken i størst mulig utstrekning.

Utfellingen som er befridd for væske men ikke tørket, blandes med en pasta dannet av 97 liter vann og 5.25 kg kalsiumsulfat for 75 kg av utfellingen. Det blandes energisk og opphetes til 80° C. Blandingen filtreres i varm tilstand, filtratet avkjøles og filtreres påny. Det fåes mellom 85 og 90 liter av en klar, gylden saft. 8 volumdeler av denne saft helles i en lunken blanding av 16 volumdeler alkohol av 75/80° G.L. og 1.8 volumdeler saltsyre. Etter energisk omrøring avsetter nukleinsyre seg i form av et hvitt bunnfall. Dette oppsamles, vaskes med alkohol ved dekantering, væsken skilles fra eller den sentri-fugeres og det vaskes påny tre ganger med alkohol og en gang med aceton.

Der fåes et hvitt, lett og meget fint pulver av tymonukleinsyre som inneholder omtrent:

Denne syre gir med natriumacetat en stabil oppløsning som ikke inneholder organiske eller mineralske stoffer. II. En del av tymonukleinsyre utvun-net i eksempel 1 utrøres med alkohol av 85° G.L. Det tilsettes en alkoholisk oppløs-ning av natrium, eller av sulfater av mangan, kopper, jern, kalsium-, magnesium-eller koboltklorid etc. for å få de tilsvarende tymonukleater av natrium, mangan, kopper, jern, magnesium, kobolt etc. som dannes ved dobbelt omsetning.

Claims (2)

1. Fremgangsmåte til utvinning av ren nukleinsyre fra animalske eller vegetabil-ske råstoffer, og spesielt fra fersk fiskemelke, ved hvilken råmaterialet, f. eks. på forhånd opphakket fersk fiskemelke behandles med alkalilut, og alkalinukleat felles ut med alkohol, karakterisert ved at det utfelte alkalinukleat renses ved behandling under oppvarmning med kalsiumsulfat i nærvær av vann og det fra den rensede oppløsning av alkalinukleat utfelles praktisk talt ren nukleinsyre på i og for seg kjent måte ved hjelp av en blanding av alkohol og saltsyre, hvoretter, om ønsket, den erholdte nukleinsyre i alkoholisk suspensjon behandles med en alkoholisk oppløsning av natrium eller av et metallsalt for å danne ved dobbelt omsetning det tilsvarende nukleat.

2. Fremgangsmåte ifølge påstand 1, karakterisert ved at det med kalsiumsulfat behandlede alkalinukleat først filtreres i varm tilstand og etterpå i kold tilstand.