NL8902414A - Oligopeptiden/expressieprodukten van het aujeszky's disease virus en daarvoor coderende recombinante polynucleotiden. - Google Patents
Oligopeptiden/expressieprodukten van het aujeszky's disease virus en daarvoor coderende recombinante polynucleotiden. Download PDFInfo
- Publication number
- NL8902414A NL8902414A NL8902414A NL8902414A NL8902414A NL 8902414 A NL8902414 A NL 8902414A NL 8902414 A NL8902414 A NL 8902414A NL 8902414 A NL8902414 A NL 8902414A NL 8902414 A NL8902414 A NL 8902414A
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- ala
- pro
- leu
- arg
- gly
- Prior art date
Links
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 title claims description 91
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 title claims description 91
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 title claims description 50
- 241000701093 Suid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 title claims description 47
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 title claims description 5
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 title claims description 5
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 title claims description 5
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 61
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 51
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 16
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 claims description 14
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 12
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 11
- BQSLGJHIAGOZCD-CIUDSAMLSA-N Leu-Ala-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BQSLGJHIAGOZCD-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims description 8
- HASRFYOMVPJRPU-SRVKXCTJSA-N Leu-Arg-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HASRFYOMVPJRPU-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims description 8
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 claims description 8
- 108010082286 glycyl-seryl-alanine Proteins 0.000 claims description 8
- OLVCTPPSXNRGKV-GUBZILKMSA-N Ala-Pro-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 OLVCTPPSXNRGKV-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 7
- MPLOSMWGDNJSEV-WHFBIAKZSA-N Ala-Gly-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O MPLOSMWGDNJSEV-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 6
- KMGOBAQSCKTBGD-DLOVCJGASA-N Ala-His-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)N)CC1=CN=CN1 KMGOBAQSCKTBGD-DLOVCJGASA-N 0.000 claims description 6
- JGDBHIVECJGXJA-FXQIFTODSA-N Asp-Asp-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O JGDBHIVECJGXJA-FXQIFTODSA-N 0.000 claims description 6
- SBHUBSDEZQFJHJ-CIUDSAMLSA-N Asp-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O SBHUBSDEZQFJHJ-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims description 6
- WBDWQKRLTVCDSY-WHFBIAKZSA-N Asp-Gly-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O WBDWQKRLTVCDSY-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 6
- OIARJGNVARWKFP-YUMQZZPRSA-N Leu-Asn-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O OIARJGNVARWKFP-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 6
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims description 6
- QHASENCZLDHBGX-ONGXEEELSA-N Ala-Gly-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 QHASENCZLDHBGX-ONGXEEELSA-N 0.000 claims description 5
- IRJWAYCXIYUHQE-WHFBIAKZSA-N Gly-Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN IRJWAYCXIYUHQE-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 5
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims description 5
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 5
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 claims description 5
- IORKCNUBHNIMKY-CIUDSAMLSA-N Ala-Pro-Glu Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O IORKCNUBHNIMKY-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims description 4
- HULHGJZIZXCPLD-FXQIFTODSA-N Arg-Ala-Cys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N HULHGJZIZXCPLD-FXQIFTODSA-N 0.000 claims description 4
- OTOXOKCIIQLMFH-KZVJFYERSA-N Arg-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N OTOXOKCIIQLMFH-KZVJFYERSA-N 0.000 claims description 4
- IJPNNYWHXGADJG-GUBZILKMSA-N Arg-Ala-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O IJPNNYWHXGADJG-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 4
- IGFJVXOATGZTHD-UHFFFAOYSA-N Arg-Phe-His Natural products NC(CCNC(=N)N)C(=O)NC(Cc1ccccc1)C(=O)NC(Cc2c[nH]cn2)C(=O)O IGFJVXOATGZTHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- PQKSVQSMTHPRIB-ZKWXMUAHSA-N Asn-Val-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O PQKSVQSMTHPRIB-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 4
- AIGROOHQXCACHL-WDSKDSINSA-N Glu-Gly-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O AIGROOHQXCACHL-WDSKDSINSA-N 0.000 claims description 4
- QGZSAHIZRQHCEQ-QWRGUYRKSA-N Gly-Asp-Tyr Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 QGZSAHIZRQHCEQ-QWRGUYRKSA-N 0.000 claims description 4
- GGLIDLCEPDHEJO-BQBZGAKWSA-N Gly-Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CN GGLIDLCEPDHEJO-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims description 4
- VOEGKUNRHYKYSU-XVYDVKMFSA-N His-Asp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VOEGKUNRHYKYSU-XVYDVKMFSA-N 0.000 claims description 4
- TWROVBNEHJSXDG-IHRRRGAJSA-N His-Leu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O TWROVBNEHJSXDG-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims description 4
- PTRKPHUGYULXPU-KKUMJFAQSA-N Leu-Phe-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O PTRKPHUGYULXPU-KKUMJFAQSA-N 0.000 claims description 4
- DPURXCQCHSQPAN-AVGNSLFASA-N Leu-Pro-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 DPURXCQCHSQPAN-AVGNSLFASA-N 0.000 claims description 4
- GRVMHFCZUIYNKQ-UFYCRDLUSA-N Phe-Phe-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O GRVMHFCZUIYNKQ-UFYCRDLUSA-N 0.000 claims description 4
- SMCHPSMKAFIERP-FXQIFTODSA-N Pro-Asn-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 SMCHPSMKAFIERP-FXQIFTODSA-N 0.000 claims description 4
- KDGARKCAKHBEDB-NKWVEPMBSA-N Ser-Gly-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O KDGARKCAKHBEDB-NKWVEPMBSA-N 0.000 claims description 4
- QQWNRERCGGZOKG-WEDXCCLWSA-N Thr-Gly-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O QQWNRERCGGZOKG-WEDXCCLWSA-N 0.000 claims description 4
- PWKMJDQXKCENMF-MEYUZBJRSA-N Tyr-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O PWKMJDQXKCENMF-MEYUZBJRSA-N 0.000 claims description 4
- UMPVMAYCLYMYGA-ONGXEEELSA-N Val-Leu-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O UMPVMAYCLYMYGA-ONGXEEELSA-N 0.000 claims description 4
- RYQUMYBMOJYYDK-NHCYSSNCSA-N Val-Pro-Glu Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N RYQUMYBMOJYYDK-NHCYSSNCSA-N 0.000 claims description 4
- 108010029539 arginyl-prolyl-proline Proteins 0.000 claims description 4
- JYPCXBJRLBHWME-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-prolyl-L-arginine Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(O)=O JYPCXBJRLBHWME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims description 4
- 108010051673 leucyl-glycyl-phenylalanine Proteins 0.000 claims description 4
- 108010073472 leucyl-prolyl-proline Proteins 0.000 claims description 4
- 108010020432 prolyl-prolylisoleucine Proteins 0.000 claims description 4
- 108010004914 prolylarginine Proteins 0.000 claims description 4
- VHAQSYHSDKERBS-XPUUQOCRSA-N Ala-Val-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O VHAQSYHSDKERBS-XPUUQOCRSA-N 0.000 claims description 3
- OMSKGWFGWCQFBD-KZVJFYERSA-N Ala-Val-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OMSKGWFGWCQFBD-KZVJFYERSA-N 0.000 claims description 3
- KWKQGHSSNHPGOW-BQBZGAKWSA-N Arg-Ala-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O KWKQGHSSNHPGOW-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims description 3
- HPSVTWMFWCHKFN-GARJFASQSA-N Arg-Glu-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)C(=O)O HPSVTWMFWCHKFN-GARJFASQSA-N 0.000 claims description 3
- 108010010777 Arg-Gly-Asp-Gly Proteins 0.000 claims description 3
- JTZUZBADHGISJD-SRVKXCTJSA-N Arg-His-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O JTZUZBADHGISJD-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims description 3
- BKFXFUPYETWGGA-XVSYOHENSA-N Asn-Phe-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O BKFXFUPYETWGGA-XVSYOHENSA-N 0.000 claims description 3
- DBWYWXNMZZYIRY-LPEHRKFASA-N Asp-Arg-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)C(=O)O DBWYWXNMZZYIRY-LPEHRKFASA-N 0.000 claims description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 3
- RMWAOBGCZZSJHE-UMNHJUIQSA-N Glu-Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N RMWAOBGCZZSJHE-UMNHJUIQSA-N 0.000 claims description 3
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- BPANDPNDMJHFEV-CIUDSAMLSA-N Leu-Asp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O BPANDPNDMJHFEV-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims description 3
- MFDDVIJCQYOOES-GUBZILKMSA-N Met-Val-Cys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)N MFDDVIJCQYOOES-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 3
- XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N N-L-cysteinyl-L-phenylalanine Natural products SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- BFYHIHGIHGROAT-HTUGSXCWSA-N Phe-Glu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O BFYHIHGIHGROAT-HTUGSXCWSA-N 0.000 claims description 3
- BIYWZVCPZIFGPY-QWRGUYRKSA-N Phe-Gly-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BIYWZVCPZIFGPY-QWRGUYRKSA-N 0.000 claims description 3
- KDIIENQUNVNWHR-JYJNAYRXSA-N Pro-Arg-Phe Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O KDIIENQUNVNWHR-JYJNAYRXSA-N 0.000 claims description 3
- AUQGUYPHJSMAKI-CYDGBPFRSA-N Pro-Ile-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 AUQGUYPHJSMAKI-CYDGBPFRSA-N 0.000 claims description 3
- XKWABWFMQXMUMT-HJGDQZAQSA-N Thr-Pro-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O XKWABWFMQXMUMT-HJGDQZAQSA-N 0.000 claims description 3
- ASQFIHTXXMFENG-XPUUQOCRSA-N Val-Ala-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O ASQFIHTXXMFENG-XPUUQOCRSA-N 0.000 claims description 3
- 108010086434 alanyl-seryl-glycine Proteins 0.000 claims description 3
- 108010070944 alanylhistidine Proteins 0.000 claims description 3
- 108010081985 glycyl-cystinyl-aspartic acid Proteins 0.000 claims description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 claims description 3
- HPKSHFSEXICTLI-CIUDSAMLSA-N Arg-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HPKSHFSEXICTLI-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims description 2
- IICZCLFBILYRCU-WHFBIAKZSA-N Asn-Gly-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IICZCLFBILYRCU-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 2
- GVPSCJQLUGIKAM-GUBZILKMSA-N Asp-Arg-Arg Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O GVPSCJQLUGIKAM-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 2
- KDBHVPXBQADZKY-GUBZILKMSA-N Pro-Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 KDBHVPXBQADZKY-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 claims description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 2
- HWPXGQCMZITGFN-XVYDVKMFSA-N Ala-Cys-His Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N HWPXGQCMZITGFN-XVYDVKMFSA-N 0.000 claims 2
- XMGVWQWEWWULNS-BPUTZDHNSA-N Arg-Trp-Ser Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N XMGVWQWEWWULNS-BPUTZDHNSA-N 0.000 claims 2
- JRDYDYXZKFNNRQ-XPUUQOCRSA-N Gly-Ala-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN JRDYDYXZKFNNRQ-XPUUQOCRSA-N 0.000 claims 2
- DHNXGWVNLFPOMQ-KBPBESRZSA-N Gly-Phe-His Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)NC(=O)CN DHNXGWVNLFPOMQ-KBPBESRZSA-N 0.000 claims 2
- VSLXGYMEHVAJBH-DLOVCJGASA-N His-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O VSLXGYMEHVAJBH-DLOVCJGASA-N 0.000 claims 2
- WSGXUIQTEZDVHJ-GARJFASQSA-N Leu-Ala-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(O)=O WSGXUIQTEZDVHJ-GARJFASQSA-N 0.000 claims 2
- CGBYDGAJHSOGFQ-LPEHRKFASA-N Pro-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2 CGBYDGAJHSOGFQ-LPEHRKFASA-N 0.000 claims 2
- KPDRZQUWJKTMBP-DCAQKATOSA-N Pro-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 KPDRZQUWJKTMBP-DCAQKATOSA-N 0.000 claims 2
- STASJMBVVHNWCG-IHRRRGAJSA-N Pro-His-Leu Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)NC(=O)[C@H]1[NH2+]CCC1)C1=CN=CN1 STASJMBVVHNWCG-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims 2
- XGFYGMKZKFRGAI-RCWTZXSCSA-N Thr-Val-Arg Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N XGFYGMKZKFRGAI-RCWTZXSCSA-N 0.000 claims 2
- COYSIHFOCOMGCF-UHFFFAOYSA-N Val-Arg-Gly Natural products CC(C)C(N)C(=O)NC(C(=O)NCC(O)=O)CCCN=C(N)N COYSIHFOCOMGCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 108010085325 histidylproline Proteins 0.000 claims 2
- 108010018006 histidylserine Proteins 0.000 claims 2
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 claims 2
- IPZQNYYAYVRKKK-FXQIFTODSA-N Ala-Pro-Ala Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O IPZQNYYAYVRKKK-FXQIFTODSA-N 0.000 claims 1
- PPPXVIBMLFWNSK-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Cys Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)CN=C(N)N PPPXVIBMLFWNSK-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims 1
- RGKKALNPOYURGE-ZKWXMUAHSA-N Asp-Ala-Val Chemical compound N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O RGKKALNPOYURGE-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims 1
- VNLYIYOYUNGURO-ZLUOBGJFSA-N Cys-Asp-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N VNLYIYOYUNGURO-ZLUOBGJFSA-N 0.000 claims 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 claims 1
- OAQJOXZPGHTJNA-NGTWOADLSA-N Ile-Trp-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N OAQJOXZPGHTJNA-NGTWOADLSA-N 0.000 claims 1
- JDBQSGMJBMPNFT-AVGNSLFASA-N Leu-Pro-Val Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O JDBQSGMJBMPNFT-AVGNSLFASA-N 0.000 claims 1
- OSBADCBXAMSPQD-YESZJQIVSA-N Phe-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N OSBADCBXAMSPQD-YESZJQIVSA-N 0.000 claims 1
- YXSSXUIBUJGHJY-SFJXLCSZSA-N Trp-Thr-Phe Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)[C@H](O)C)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 YXSSXUIBUJGHJY-SFJXLCSZSA-N 0.000 claims 1
- COYSIHFOCOMGCF-WPRPVWTQSA-N Val-Arg-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CCCN=C(N)N COYSIHFOCOMGCF-WPRPVWTQSA-N 0.000 claims 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 32
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 27
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 22
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 16
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 description 15
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 12
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 11
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 11
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 10
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 6
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 5
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 4
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N Ala-Leu-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- ADSGHMXEAZJJNF-DCAQKATOSA-N Ala-Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](C)N ADSGHMXEAZJJNF-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- YHBDGLZYNIARKJ-GUBZILKMSA-N Ala-Pro-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](C)N YHBDGLZYNIARKJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 102000004594 DNA Polymerase I Human genes 0.000 description 2
- 108010017826 DNA Polymerase I Proteins 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BZAQOPHNBFOOJS-DCAQKATOSA-N His-Pro-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O BZAQOPHNBFOOJS-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102100035971 Molybdopterin molybdenumtransferase Human genes 0.000 description 2
- 101710119577 Molybdopterin molybdenumtransferase Proteins 0.000 description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 2
- MYQCCQSMKNCNKY-KKUMJFAQSA-N Phe-His-Ser Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N MYQCCQSMKNCNKY-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000001571 immunoadjuvant effect Effects 0.000 description 2
- 239000000568 immunological adjuvant Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 2
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000010814 radioimmunoprecipitation assay Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HSTOKWSFWGCZMH-UHFFFAOYSA-N 3,3'-diaminobenzidine Chemical compound C1=C(N)C(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C(N)=C1 HSTOKWSFWGCZMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- JBGSZRYCXBPWGX-BQBZGAKWSA-N Ala-Arg-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CCCN=C(N)N JBGSZRYCXBPWGX-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N Arg-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FIQKRDXFTANIEJ-ULQDDVLXSA-N Arg-Phe-His Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N FIQKRDXFTANIEJ-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- YCYXHLZRUSJITQ-SRVKXCTJSA-N Arg-Pro-Pro Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 YCYXHLZRUSJITQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- DTNUIAJCPRMNBT-WHFBIAKZSA-N Asp-Gly-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DTNUIAJCPRMNBT-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 101100022187 Caenorhabditis elegans mab-10 gene Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OZSBRCONEMXYOJ-AVGNSLFASA-N Cys-Phe-Glu Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N OZSBRCONEMXYOJ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 230000008836 DNA modification Effects 0.000 description 1
- 230000007023 DNA restriction-modification system Effects 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- DCBSZJJHOTXMHY-DCAQKATOSA-N Glu-Pro-Pro Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 DCBSZJJHOTXMHY-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- GZBZACMXFIPIDX-WHFBIAKZSA-N Gly-Cys-Asp Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)CN)C(=O)O GZBZACMXFIPIDX-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 101800000342 Glycoprotein C Proteins 0.000 description 1
- 101800000190 Glycoprotein G1 Proteins 0.000 description 1
- 101800000343 Glycoprotein N Proteins 0.000 description 1
- 101710181600 Glycoprotein gp2 Proteins 0.000 description 1
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 description 1
- 101710088172 HTH-type transcriptional regulator RipA Proteins 0.000 description 1
- OSZUPUINVNPCOE-SDDRHHMPSA-N His-Glu-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)C(=O)O OSZUPUINVNPCOE-SDDRHHMPSA-N 0.000 description 1
- LVWIJITYHRZHBO-IXOXFDKPSA-N His-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LVWIJITYHRZHBO-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 1
- APQYGMBHIVXFML-OSUNSFLBSA-N Ile-Val-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N APQYGMBHIVXFML-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 1
- AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N Leu-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- KLYYKKGCPOGDPE-OEAJRASXSA-N Phe-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KLYYKKGCPOGDPE-OEAJRASXSA-N 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- PULPZRAHVFBVTO-DCAQKATOSA-N Pro-Glu-Arg Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O PULPZRAHVFBVTO-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- QPPYAWVLAVXISR-DCAQKATOSA-N Ser-Pro-His Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CO)N)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O QPPYAWVLAVXISR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNBANYVJJBGDI-VZFHVOOUSA-N Thr-Ala-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O YRNBANYVJJBGDI-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- GEGYPBOPIGNZIF-CWRNSKLLSA-N Trp-Ser-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)N)C(=O)O GEGYPBOPIGNZIF-CWRNSKLLSA-N 0.000 description 1
- DJEVQCWNMQOABE-RCOVLWMOSA-N Val-Gly-Asp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N DJEVQCWNMQOABE-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 1
- YTNGABPUXFEOGU-SRVKXCTJSA-N Val-Pro-Arg Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O YTNGABPUXFEOGU-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 238000012412 chemical coupling Methods 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000009313 farming Methods 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 108010025801 glycyl-prolyl-arginine Proteins 0.000 description 1
- 231100000001 growth retardation Toxicity 0.000 description 1
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920002643 polyglutamic acid Polymers 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 description 1
- 108020001775 protein parts Proteins 0.000 description 1
- 208000009305 pseudorabies Diseases 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
- 101150069452 z gene Proteins 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/081—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from DNA viruses
- C07K16/085—Herpetoviridae, e.g. pseudorabies virus, Epstein-Barr virus
- C07K16/087—Herpes simplex virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
- C12N2710/16722—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Virology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Oligopeptiden/expressieprodukten van het Aujeszky's disease virus en daarvoor coderende recombinante polynucleotiden
De uitvinding heeft betrekking op nieuwe oligopeptiden/ expressieprodukten, welke gebruikt kunnen worden voor diagnostische doeleinden of ten behoeve van de produktie van polyklonale of monoklonale antilichamen.
Meer in het bijzonder heeft de uitvinding betrekking op nieuwe oligopeptiden/expressieprodukten, welke afgeleid zijn van glycoproteïne I (dat verder met de gebruikelijke afkorting gl zal worden aangeduid) van het Aujeszky's disease virus (ADV, dat ook wel pseudorabies virus of PRV wordt genoemd) en bruikbaar zijn voor een serologische diagnostiek, gericht op het onderscheiden van dieren (met name varkens) die door het wild-type virus zijn geïnfecteerd, van dieren die niet door het wild-type virus, dat het gl tot expressie brengt, zijn geïnfecteerd, met name dieren die tegen ADV zijn gevaccineerd met een vaccin dat niet gl bevat of tot expressie brengt (een gl-negatief vaccin).
De uitvinding strekt zich uit tot deze oligopeptiden/ expressieprodukten zelf, tot immunogene samenstellingen die een of meer van deze nieuwe oligopeptiden/expressieprodukten bevatten in een voor immunisatie-doeleinden geschikte vorm, tot gebruik van de nieuwe oligopeptiden/expressieprodukten voor diagnostische doeleinden of voor het produceren van polyklonale of monoklonale antilichamen, en tot recombinante genetische informatie (recombinante polynucleotiden, d.w.z. recombinant DNA of recombinant RNA) welke voor de nieuwe oligopeptiden/ expressieprodukten codeert.
Het is bijv. uit de Europese octrooiaanvrage EP-A-0223382 bekend, dat de ziekte van Aujeszky door het herpesvirus PRV (oftewel ADV) wordt veroorzaakt. Het virus veroorzaakt grote schade in de varkenshouderij, vooral door fertiliteitsproblemen bij zeugen, sterfte onder biggen en groeivertraging onder mestvarkens. Alle geïnfecteerde varkens vormen antilichamen tegen het gl van ADV. Deze antilichamen blijven jarenlang in het bloed aantoonbaar. Varkens die met gl-negatieve vaccins zijn gevaccineerd vormen daarentegen geen antilichamen tegen gl van ADV.
Om de economische schade te beperken worden in vele landen op uitgebreide schaal varkens gevaccineerd tegen de ziekte. Vaccinatie alleen is echter niet voldoende om het ADV uit te roeien; het virus kan blijven circuleren in gevaccineerde varkenspopulaties. Voor een uitroeiing van ADV in landen waar wordt gevaccineerd is het dan ook van cruciaal belang om over een test te beschikken die onderscheid kan maken tussen geïnfecteerde en gevaccineerde varkens (m.a.w. varkens met antilichamen tegen gl en varkens zonder antilichamen tegen gl).
Er zijn tests voor het maken van een dergelijk onderscheid ontwikkeld. Deze tests zijn gebaseerd op een detectie van antilichamen tegen gl (Van Oirschot et al, J. Gen. Virol. £2, 1986, 1179-1182; Anonymous, Internieuws 12/ 1987, 25-32; Van Oirschot et al, J. Virol. Meth. 22./ 1988, 191-206; Eloit et al, Vet. Ree. 124, 1989, 91-94) of een detectie van antilichamen tegen glycoproteine X (McMillen en McDonald, Proc. 1st Eur. Congr. Vet. Virol. 1989, p.38).
Uit een artikel van Petrovskis et al, J. Virol. 1986, 185-193, blijkt dat de volledige aminozuur sequentie van het glycoproteine gl bekend is. Bij het aan de uitvinding ten grondslag liggende onderzoek is van de in dit artikel getoonde sequentie gebruik gemaakt.
Uit de hierboven reeds genoemde Europese octrooiaanvrage EP-A-0223382 is recombinant DNA bekend, dat de voor het uit 577 aminozuren bestaande gl'van PRV coderende genetische informatie bevat. Hoewel ook gesproken wordt over fragmenten van gl, die "pseudorabies virus activiteit" vertonen, wordt niet duidelijk gemaakt welke fragmenten van het gl zo'n "pseudorabies virus activiteit" bezitten, oftewel welke fragmenten of delen van het gl immunologisch functioneel zijn. Zowel voor diagnostische doeleinden als voor de produktie van poly- en monoklonale anti-lichamen met een hoge specifieke affiniteit voor gl kan het nuttig zijn om een geschikt fragment te gebruiken in plaats van het complete eiwit.
Tot nu toe zijn geen oligopeptiden/expressieprodukten van het gl beschreven die in het varken, de natuurlijke gastheer van ADV, in staat zijn om antilichamen op te wekken. Dergelijke oligopeptiden/expressieprodukten zouden een belangrijke vooruitgang op het gebied van de diagnostiek kunnen betekenen. Dergelijke oligopeptiden/expressieprodukten zouden gebruikt kunnen worden voor een diagnostische test ter onderscheiding van geïnfecteerde varkens en varkens die gevaccineerd zijn met gl-negatieve vaccins. Ook zouden dergelijke oligopeptiden/ expressieprodukten gebruikt kunnen worden voor de ontwikkeling van een zg. "pig-side" test volgens het principe, beschreven in een artikel van Kemp et al, Science 241f 1988, 1352-1354. Een dergelijke test zou dan gebaseerd zijn op een binding van de antigene sequentie van het oligopeptide/ expressieprodukt door in geïnfecteerde dieren aanwezige antilichamen tegen het gl.
Het oligopeptide/expressieprodukt zou voor zo'n test gekoppeld moeten worden aan een tegen varkenserythrocyten gericht monoklonaal antilichaam.
Een andere mogelijkheid zou zijn om de oligopeptiden/ expressieprodukten te gebruiken voor het opwekken van een immuunrespons in het kader van een werkwijze voor het produceren van polyklonale of monoklonale antilichamen, die specifiek zijn voor het (de) desbetreffende antigene gebied(en) en op hun beurt gebruikt zouden kunnen worden in een diagnostische test.
Thans zijn met behulp van de zg. PEPSCAN-methode van Geysen et al (Proc. Natl. Acad. Sci. USA £1, 1984, 3998-4002; Proc. Natl. Acad. Sci. USA £2., 1985, 178-182; "Synthetic peptides as antigens" 1986, 130-149, Wiley; WO 84/03506 en WO 84/03564) en van monoklonale antilichamen gericht tegen het glycoproteine I van ADV, op het glycoproteine I gelegen reactieve sequenties gevonden die in de vorm van oligopeptiden/ expressieprodukten voor de bovenstaand vermelde doelen kunnen worden aangewend.
De uitvinding wordt in de eerste plaats belichaamd in een oligopeptide met een aminozuren sequentie (volgens de drie-letter code)
Ala Gly Asp Asp Asp Leu Asp Gly Asp Leu Asn Gly Asp Asp Arg Arg
Ala Gly Phe Gly Ser Ala Leu Ala Ser Leu Arg Glu Ala Pro Pro Ala
His Leu Val Asn Val Ser Glu Gly Ala Asn Phe Thr Leu Asp Ala Arg
Gly Asp Gly Ala Val Val Ala Gly lie Trp Thr Phe Leu Pro Val Arg
Gly Cys Asp Ala Val Ala Val Thr Met Val Cys Phe Glu Thr Ala Cys
His Pro Asp Leu Val Leu Gly Arg Ala Cys Val Pro Glu Ala Pro Glu
Arg Gly lie Gly Asp Tyr Leu Pro Pro Glu Val Pro Arg Leu Gin Arg
Glu Pro Pro Ile Val Thr Pro Glu Arg Trp Ser Pro His Leu Thr Val
Arg Arg Ala Thr Pro Asn Asp Thr Gly Leu Tyr Thr Leu His Asp Ala
Ser Gly Pro Arg Ala Val Phe Phe Val Ala Val Gly Asp Arg Pro Pro
Ala Pro Leu Ala Pro Val Gly Pro Ala Arg His Glu Pro Arg Phe His
Ala Leu Gly Phe His Ser Gin Leu Phe Ser Pro welke sequentie overeenstemt met die van de aminozuren 52-238 van het glycoproteine I (gl) van het Aujeszky's disease virus (ADV), of een immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan.
De term "oligopeptide" wordt hier in een ruime betekenis gebruikt, waarbij deze term met name geen enkele beperking inhoudt ten aanzien van de wijze waarop het verkregen is. De term slaat derhalve zowel op peptiden, die door chemische synthese zijn bereid, als ook op produkten, verkregen door expressie van relevante genetische informatie in geschikte (micro)biologische systemen. Voor alle duidelijkheid wordt daarom op veel plaatsen in deze tekst ook wel gesproken van oligopeptiden/ expressieprodukten.
Meer in het bijzonder wordt de uitvinding belichaamd in een oligopeptide met een aminozuren sequentie (volgens de drie-letter code)
Ala Gly Asp Asp Asp Leu Asp Gly Asp Leu Asn Gly Asp Asp Arg Arg Ala Gly Phe Gly Ser Ala Leu Ala Ser Leu Arg Glu Ala Pro Pro Ala His Leu welke sequentie overeenstemt met die van de aminozuren 52-85 van gl van ADV, of een immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan.
Aangezien het hier een betrekkelijk klein oligopeptide betreft, zal chemische synthese (volgens op zichzelf bekende technieken) een geschikte manier zijn om het oligopeptide in handen te krijgen. Produktie door expressie van relevante genetische informatie in een (micro)biologische gastheer is echter eveneens mogelijk.
Een mogelijke uitvoeringsvorm van de uitvinding betreft een oligopeptide met een aminozuren sequentie (volgens de drie-letter code)
Ala Gly Asp Asp Asp Leu Asp Gly Asp Leu Asn Gly Asp Asp Arg Arg welke sequentie overeenstemt met die van de aminozuren 52-67 van gl van ADV, of een immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan.
Een andere mogelijke uivoeringsvorm van de uitvinding betreft een oligopeptide met een aminozuren sequentie (volgens de drie-letter code)
Asn Gly Asp Asp Arg Arg Ala Gly Phe Gly Ser Ala Leu Ala Ser Leu Arg Glu Ala Pro Pro Ala His Leu welke sequentie overeenstemt met die van de aminozuren 62-85 van gl van ADV, of een immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan.
Een mogelijkheid binnen deze uitvoeringsvorm is een oligopeptide met een aminozuren sequentie (volgens de drie-letter code)
Ala Gly Phe Gly Ser Ala Leu Ala Ser Leu Arg Glu Ala Pro Pro Ala His Leu welke sequentie overeenstemt met die van de aminozuren 68-85 van gl van ADV, of een immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan.
Een belangrijke voorkeursuitvoeringsvorm van de uitvinding betreft een oligopeptide met een aminozuren sequentie (volgens de drie-letter code)
Arg Glu Ala Pro Pro Ala His Leu Val Asn Val Ser Glu Gly Ala Asn
Phe Thr Leu Asp Ala Arg Gly Asp Gly Ala Val Val Ala Gly Ile Trp
Thr Phe Leu Pro Val Arg Gly Cys Asp Ala Val Ala Val Thr Met Val
Cys Phe Glu Thr Ala Cys His Pro Asp Leu Val Leu Gly Arg Ala Cys
Val Pro Glu Ala Pro Glu Arg Gly lie Gly Asp Tyr Leu Pro Pro Glu
Val Pro Arg Leu Gin Arg Glu Pro Pro Ile Val Thr Pro Glu Arg Trp
Ser Pro His Leu Thr Val Arg Arg Ala Thr Pro Asn Asp Thr Gly Leu
Tyr Thr Leu His Asp Ala Ser Gly Pro Arg Ala Val Phe Phe Val Ala
Val Gly Asp Arg Pro Pro Ala Pro Leu Ala Pro Val Gly Pro Ala Arg
His Glu Pro Arg Phe His Ala Leu Gly Phe His Ser Gin Leu Phe Ser
Pro welke sequentie overeenstemt met die van de aminozuren 78-23S van gl van ADV, of een immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan.
Opnieuw geldt, dat het oligopeptide zowel door chemische synthese als door expressie kan worden geproduceerd. In het geval van dit oligopeptide heeft een produktie door expressie van relevante genetische informatie echter zeer de voorkeur.
Met de woorden "immunologisch functioneel fragment of derivaat" worden delen resp. gemodificeerde vormen van het oligopeptide/expressieprodukt bedoeld, die eveneens reactief zijn met antilichamen tegen gl. In het geval van fragmenten van het oligopeptide zal de minimale lengte daarvan acht a negen aminozuren bedragen om een specifieke reactiviteit met antilichamen tegen gl te kunnen bezitten. In het geval van derivaten van het oligopeptide zijn zodanige modificaties van het oligopeptide toegestaan, dat de reactiviteit niet beneden éénvijfde van de reactiviteit van het oligopeptide wordt verlaagd. Met modificaties wordt bijv. gedoeld op vervanging van een beperkt aantal aminozuren door andere aminozuren, weglating (deletie) of toevoeging (bijv. insertie) van een beperkt aantal aminozuren, en chemische modificaties zoals substituenten aan een beperkt aantal aminozuren en blokkering van de eindstandige amino- en carboxylgroepen. Expressie- produkten, die naast een sequentie volgens de uitvinding ook nog een vreemd eiwitgedeelte omvatten (d.w.z. een aminozuur sequentie die niet in gl voorkomt, zoals bijv. een aminozuur sequentie van een ander eiwit dan gl), met name fusie-eiwitten, worden eveneens door deze terminologie gedekt.
De oligopeptiden volgens de uitvinding kunnen volgens op zichzelf bekende methoden worden gesynthetiseerd. Ze kunnen echter ook worden verkregen door expressie (bijv. in bacteriën of in eukaryotische cellen) van recombinant DNA, dat voor een of meer oligopeptiden volgens de uitvinding coderende nucleo-tiden sequenties omvat.
De uitvinding verschaft dan ook eveneens een recombinant polynucleotide, dat een nucleotiden sequentie, coderend voor een oligopeptide of immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan volgens de uitvinding, zoals hierboven gedefinieerd, omvat.
Meer in het bijzonder verschaft de uitvinding recombinant DNA dat een DNA sequentie, coderend voor een oligopeptide of immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan volgens de uitvinding, omvat.
De voorkeur heeft een recombinant DNA, bestaande uit een vectorgedeelte en een insertiegedeelte dat een DNA sequentie, coderend voor een oligopeptide of immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan volgens de uitvinding, omvat.
De uitvinding wordt verder belichaamd in een gastheercel, die ten gevolge van een genetische manipulatie onder toepassing van een dergelijk recombinant DNA het vermogen heeft verkregen om een oligopeptide of immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan volgens de uitvinding tot expressie te brengen. De aard van de gastheercel is betrekkelijk willekeurig en wordt in hoofdzaak bepaald door produktietechnische overwegingen en door de bestaande technische mogelijkheden. In het algemeen zal gekozen worden voor microorganismen, in het bijzonder bacteriën (bijv. £. coli). maar eukaryotische cellen zoals gistcellen, schimmels, zoogdiercellen en plantecellen zijn eveneens bruikbaar.
Zoals reeds eerder is opgemerkt, strekt de uitvinding zich tevens uit tot de expressieprodukten, die door middel van een toepassing van dergelijke getransformeerde gastheercellen kunnen worden verkregen.
Uiteraard is voor een toepassing van de oligopeptiden/ expressieprodukten in een werkwijze voor het produceren van poly- of monoklonale antilichamen nodig, dat de desbetreffende oligopeptiden/expressieprodukten worden gebruikt in een vorm, waarin ze een immuunreactie teweeg kunnen brengen die een produktie van antilichamen tegen het gl omvat.
De uitvinding wordt daarom voorts belichaamd in nieuwe samenstellingen, omvattende een of meerdere in een immunogene vorm gebrachte oligopeptiden/expressieprodukten volgens de uitvinding. Zoals aan de deskundige bekend is, bestaan er verschillende methoden om een als zodanig niet-immunogene stof in een immunogene vorm te brengen. Een eerste mogelijkheid is om oligopeptiden/expressieprodukten volgens de uitvinding te koppelen aan een geschikt dragereiwit. Voor een chemische koppeling kan daartoe de C- of de N-terminus worden gebruikt. Aan de deskundigen is zonder meer bekend welke koppelingsmetho-den en welke dragereiwitten in aanmerking komen. Bij wijze van voorbeeld wordt gewezen op de mogelijkheid om het oligopeptide met behulp van een geschikt koppelingsmiddel te koppelen aan KLH (keyhole limpet hemocyanin) of aan BSA (bovine serum albumine). Ook toxoïden en liposomen zijn als drager bruikbaar. Desgewenst is het oligopeptide aan de N-terminus of aan de C-terminus van een voor een dergelijke koppeling geschikt extra aminozuur voorzien. Volgens de uitvinding gaat primair de voorkeur uit naar samenstellingen, die een immunogeen conjugaat van een eiwit en een oligopeptide volgens de uitvinding omvatten. Een andere mogelijkheid is om het oligopeptide door verknoping {"crosslinking") om te zetten in een of ander groter complex, of om het oligopeptide met behulp van recombinant DNA manipulaties als onderdeel van een (groter) eiwit tot expressie te brengen. De uitvinding wordt derhalve tevens belichaamd in samenstellingen, welke een immunogeen complex of een immunogeen recombinant eiwit omvatten waarvan een oligopeptide volgens de uitvinding deel uitmaakt.
De oligopeptiden/expressieprodukten volgens de uitvinding kunnen ook, om een sterke immuunrespons te verzekeren, in combinatie met een of meerdere voor immunisatie-doeleinden geschikte dragers en/of hulpstoffen worden toegepast. Dergelijke dragers en hulpstoffen zijn op zichzelf bekend. Dragers zoals poly-L-lysine, poly-L-glutaminezuur, muramyldipeptide en murabutidine kunnen in de samenstelling worden opgenomen.
Uiteraard wordt de uitvinding dus ook belichaamd in nieuwe samenstellingen, omvattende een of meer oligopeptiden/ expressieprodukten volgens de uitvinding in een vorm, die geschikt is voor het opwekken van een immuunrespons, waarbij antilichamen worden gevormd, in combinatie met ten minste één immunoadjuvans. Geschikte immunoadjuvantia zijn aan de deskundige bekend. Geschikte hulpstoffen zijn bijvoorbeeld ook aluminiumhydroxyde en andere bekende adjuvantia. Voor de toediening van de samenstellingen geschikte verdunningsmiddelen, zoals gedestilleerd water, met fosfaat gebufferde zoutoplossingen, en bufferoplossingen (zoals een citraatbuffer) zijn eveneens op zichzelf bekend.
De uitvinding strekt zich ook uit over het gebruik van een of meer oligopeptiden/expressieprodukten volgens de uitvinding, of van een of meer onder toepassing van de oligopeptiden/ expressieprodukten verkregen poly- of monoklonale antilichamen voor diagnostische doeleinden. In het bijzonder omvat de uitvinding een onderzoek aan varkenssera met behulp van een set van oligopeptiden/expressieprodukten volgens de uitvinding om te bepalen of de sera afkomstig zijn van een varken dat geïnfecteerd is met het ADV. Inzicht hierin is van belang voor de bestrijding c.q. uitroeiing van het ADV in besmette varkens-populaties. Voor een dergelijk onderzoek geschikte technieken zijn op zichzelf bekend. Bij wijze van voorbeeld kunnen worden genoemd ELISA's, RIPA's, Western blots, dotblots, enz. Volgens een concreter voorbeeld kan onstolbaar gemaakt bloed van varkens in aanraking worden gebracht met een tegen varkens-erythrocyten gericht monoklonaal antilichaam, waaraan een van de bovenstaand beschreven oligopeptiden/expressieprodukten volgens de uitvinding is gekoppeld. Wanneer zich in het bloed antilichamen tegen het oligopep'tide/expressieprodukt bevinden, zal een agglutinatie van de varkenserythrocyten optreden. Bij afwezigheid van dergelijke antilichamen tegen het oligopeptide/ expressieprodukt zal geen agglutinatie optreden.
Serum van varkens kan ook in aanraking worden gebracht met een nitrocellulosestrip waarop verschillende oligopeptiden/ expressieprodukten volgens de uitvinding (al dan niet in een gezuiverde vorm) zijn gerangschikt. Door achtereenvolgens te wassen, een gelabeld (bijv. met peroxidase gekoppeld) anti-varken antilichaam toe te voegen, opnieuw te wassen, en een substraat voor het peroxidase toe te voegen kan een kleur-vorming worden verkregen op de plaats van het oligopeptide, waarmee de in het monster aanwezige antilichamen reageren.
De uitvinding zal verder aan de hand van een beschrijving van het uitgevoerde onderzoek en de bijbehorende figuren worden toegelicht. Voor de toegepaste methodieken en meetmethoden wordt kortheidshalve verwezen naar de bovenstaand aangehaalde publikaties van Geysen et al. Het onderzoek omvatte onder meer competitieve ELISA's, immunoscreening van prokaryote expressie-produkten en PEPSCAN analyses om reactieve peptiden van gl van het ADV op te sporen. Als resultaat werd gevonden, dat er drie bindingsplaatsen voor monoklonale antilichamen tegen gl liggen in het N-terminale gedeelte van gl, tussen de aminozuren 52 en 85. Dit deel van het gl is derhalve een antigene site waarop meerdere epitopen liggen. Hierdoor is de kans groot dat zo'n site door polyklonale antisera wordt herkend. Deze hypothese werd getoetst door antisera van varkens die in de bekende gl-ELISA (Van Oirschot et al, 1988) positief of negatief waren, te onderzoeken in een indirecte ELISA met het oligopeptide 52-85 als antigeen. De sera werden in de peptide ELISA getest in een verdunning van 1:10. Er werden 8 positieve sera getest, waarvan 5 veldsera en 3 sera van een eerst met een gl-negatief vaccin gevaccineerd en na 3 weken met virulent wild-type NIA-3 virus gechallenged varken. De sera waren verzameld op 15, 18 en 21 dagen na de challenge. Van de 6 negatieve sera waren er 5 af komstig uit het veld en was er 1 afkomstig van een spf varken. De gl-seropositieve sera reageerden alle met het oligopeptide, in tegenstelling tot de gl-seronegatieve sera. De resultaten toonden aan, dat experimenteel of in het veld geïnfecteerde varkens antilichamen vormen, die specifiek reageren met het gebruikte oligopeptide.
Een ander resultaat van het uitgevoerde onderzoek was, dat er twee bindingspliatsen voor monoklonale antilichamen tegen gl werden gevonden in het N-terminale gedeelte van gl, en wel tussen de aminozuren 78 en 238. Op grond van resultaten van de "conventionele" gl-ELISA (artikelen van Van Oirschot et al) is gebleken dat de in dit deel gelegen epitopen zeer immunogeen zijn voor het varken. Antilichamen tegen één of beide epitopen blijven zeer lang na infectie aantoonbaar, vermoedelijk zelfs levenslang. Om die reden is de uitvinding niet beperkt tot het oligopeptide 52-85, maar omvat de uitvinding ook het oligo-peptide/expressieprodukt 78-238 en meer in het algemeen alle op de aminozuren 52-238 van gl gebaseerde oligopeptiden/expressie-produkten, die immunologisch functioneel zijn.
Uitcrevoerde experimenten
Monoklonale antilichamen
In het onderzoek werd gebruik gemaakt van een panel van elf verschillende monoklonale antilichamen (MAbs), opgewekt tegen de pseudorabies virus stammen NIA-3 en Phylaxia. De MAbs werden gezuiverd uit ascites vloeistof door ammoniumsulfaat precipitatie en in fosfaatgebufferde zoutoplossing verdund tot een uiteindelijke eiwitconcentratie van ongeveer 7 mg/ml. De MAbs werden in essentie op de wijze, zoals beschreven door Wilson en Nakane (in het boek van Knapp, Holibar en Wiek, eds, "Immunofluorescence and related staining techniques", Elsevier, Biochemical press, Amsterdam, 1978, 215-224), geconjugeerd met horse radish peroxidase (HRPO).
Competitieve ELISA
Er werden verdunningsreeksen van MAbs-HRPO conjugaten in fosfaatgebufferde zoutoplossing, die 0,05% Tween 80 bevatte, gemaakt om de hoogste verdunning van conjugaat te bepalen, die in afwezigheid van een tweede ongelabeld antilichaam een OD450 van 1,5-2,0 geeft. In de competitieve ELISA werd een twee keer zo hoge concentratie gebruikt. Elk van de competerende ongeconjugeerde MAbs werd in elk van de MAb-HRPO verdunningen 1:50, 1:100, en 1:1000 verdund. De mengsels werden overgebracht in de putjes (100 μΐ/putje) van een met PRV-antigeen beklede ELISA plaat. Na 1 uur incubatie bij 37°C werden de platen gewassen met 0,05% Tween in gedeioniseerd water en werd 100 μΐ substraat (3,3',5,5'-tetramethylbenzidine of TMB, 1 mg/ml) toegevoegd. De reacties werden gestopt door een toevoeging van 100 μΐ 0,5 M H2SO4 en de platen werden afgelezen bij 450 nm in een TITERTEK multiscan plate reader. De OD450 waarde in putjes zonder competerend antilichaam werd gesteld op 100%. Een MAb verdunning, die de OD450 waarde van het geconjugeerde MAb met >50% verlaagde, werd beschouwd als competerend.
Topografische analyse van de antiqene domeinen van ql
De gl specificiteit van de MAbs werd bepaald door een radio immunoprecipitatie assay en door SDS-PAGE (waarvan de resultaten niet worden getoond). In de competitieve ELISA bleken alle MAbs de binding van het homologe MAb-HRPO met meer dan 50% te remmen (Fig.l). Bij een 1:1000 verdunning van de competerende MAbs konden 6 antigene domeinen worden onderscheiden: antigeen domein A, vertegenwoordigd door MAbs 1, 3 en 5; antigeen domein B, vertegenwoordigd door MAbs 4, 8 en 11/ antigeen domein C, vertegenwoordigd door MAbs 6 en 9/ antigeen domein D, vertegenwoordigd door MAb 7; antigeen domein E, vertegenwoordigd door MAb 2 en antigeen domein F, vertegenwoordigd door MAb 10. MAb 9 competeerde voor de binding van MAb 6-HRPO in een 1:1000 verdunning van het competerende MAb, terwijl MAb 6 slechts in een 1:50 verdunning met geconjugeerd MAb 9 competeerde. Een wederzijdse competitie tussen MAb 7 en de MAbs 1, 3 en 5 vond alleen plaats bij een 1:50 verdunning van het competerende MAb. Deze resultaten wijzen op een grote verbondenheid van de antigene domeinen A en D. Ook tussen de MAbs 4 en 1 werd bij een 1:50 verdunning een wederzijdse competitie gevonden. De MAbs 3 en 4 competeerden niet wederzijds en alleen bij een 1:50 verdunning.
Recombinant DNA technieken
De recombinant technieken werden, tenzij anders vermeld, in essentie uitgevoerd zoals beschreven door Maniatis (in "Molecular Cloning: a Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory, U.S.A., 1982) of door Davis et al (in "Basic Methods in Molecular Biology", Elsevier, New York, 1986). Restrictie-enzymen en enzymen voor modificatie van DNA werden volgens de voorschriften van de leverancier gebruikt. Plasmide DNA werd bereid met behulp van de alkalische lysis methode (Maniatis 1982) . DNA restrictiefragmenten werden uit agarose gels geïsoleerd door elektroelutie.
Constructie van recombinante plasmiden
De pEX plasmiden brengen geïnserteerde genen tot expressie in de vorm van een cro-B-galactosidase fusie-eiwit. Expressie van dit gen staat onder controle van de lambda Pr promoter en wordt geïnduceerd door inactivering van de temperatuurgevoelige cl repressor bij 42°C. Escherichia coli bacteriën (de stam pop 2136, Institut Pasteur, Parijs) werden door middel van de CaCl2 transformatie procedure getransformeerd na een thermische schok van 5 min bij 34°C en 2 min op ijs. Plasmiden, die door een enkele digestie waren gelineariseerd werden gedefosforyleerd met kalfsdarm fosfatase. Het 2055 bp AhalII-NruI fragment (uit het BamHI-7 fragment van PRV stam NIA-3 geïsoleerd, zie Quint et al, J. Gen. Virol. £&, 1987, 523-534) met de volledige gl coderende sequentie daarop, en van het gl coderende gebied afgeleide fragmenten, werden in het juiste leesraam gekloneerd in de Smal site van pEXl, pEX2 of pEX3. Fragmenten werden zonodig blunt gemaakt door behandeling met het Klenow fragment van DNA polymerase I.
Isolatie van expressie orodukten
Expressie van de pEX fusie-eiwitten werd geïnduceerd door incubatie van een 1,5 ml exponentiële cultuur (Οϋβοο ca. 0,25) van cellen gedurende 90 min bij 42°C. De expressieprodukten werden als volgt gezuiverd: cellen werden neergecentrifugeerd (5 min met 6000xg), geresuspendeerd in 100 μΐ 50 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 mM EDTA, 15% (w/v) sucrose en gedurende 10 min behandeld met lysozyme (1 mg/ml). Na toevoeging van 140 μΐ 0,2% (w/v) Triton X-100 in 10 mM Tris-HCl (pH 8) werd het DNA afgebroken door toevoeging van 24 μΐ 1 M MgCl2 en 1 μΐ DNAse (10 mg/ml). De incubatie vond plaats bij 37°C totdat de suspensie niet langer visceus was. Nadat de tot expressie gebrachte onoplosbare eiwitten waren neergecentrifugeerd, werd de pellet in 250 μΐ fosfaatgebufferde zoutoplossing geresuspendeerd.
Immunoscreeninq van expressieprodukten
Een 5 μΐ monster van geresuspendeerde eiwitten werd opgelost in lysis buffer (10 mM Tris-HCl pH 8,0, 1 mM EDTA, 10% glycerol, 2% SDS, 5% 2-mercaptoethanol, Laemmli, Nature 227, 1970, 680-681). De eiwitten werden door SDS-polyacrylamide gel elektroforese (SDS-PAGE, 7,5%) gefractioneerd, gevolgd door Western blotting onder toepassing van het LKB-multiphor II Nova Blot systeem in 40 mM glycine, 50 mM Tris, 0,04% SDS (w/v) en 20% methanol (v/v). De nitrocellulose vellen werden twee keer gewassen in fosfaatgebufferde zoutoplossing die 0,5% (w/v) gelatine en 0,1% (w/v) Triton X-100 bevatte (PBS-GT), en 1 uur bij kamertemperatuur geïncubeerd met antilichamen (MAb 1:1000 verdund in PBS-GT). De filters werden drie keer gedurende 5 min gewassen in PBS-GT en gedurende 1 uur bij kamertemperatuur geïncubeerd met konijne anti-muis IgG-HRPO. De filters werden drie keer gedurende 5 min in PBS-GT en een keer gedurende 5 min in fosfaatgebufferde zoutoplossing gewassen en gedurende ongeveer 5 min geïncubeerd in substraatoplossing (3,3'-diamino-benzidine 0,5 mg/ml en 0,001% H2O2) .
Localisatie van antiaene domeinen door binding van crl-MAbs aan σΐ specifieke fusie-eiwitten
Een Ahalll-Nrul fragment, dat het volledige, voor gl coderende gebied bevat, werd in het juiste leesraam in het plasmide pEX2 gekloneerd, waarbij het plasmide pl (zie fig.2) werd verkregen, dat een voor 685 aminozuren coderende insertie bevatte. Doordat de insertie aan het 3'-uiteinde van het cro-lac Z gen plaats vond, leidde expressie tot een hybride eiwit van 115 kDa (cro-B-galactosidase) plus het produkt van het geïnserteerde vreemde gen. De voorspelde grootte van het expressie-eiwit van plasmide pl is 115+80 kDa (zie Mettenleiter et al, J. Virol. jjJl, 1985, 52-57) . Analyse van het hybride eiwit met SDS-PAGE liet een eiwit-band zien bij ca. 190 kDa (de gel elektroforese en Western blot resultaten van de hybride B-galactosidase eiwitten van de verschillende pEX kloons worden niet getoond). In een Western blot bleken 10 van de 11 geteste MAbs het fusie-eiwit van plasmide pl te herkennen (tabel 1).
Om de antigene domeinen op het eiwit in kaart te brengen, werd het Ahalll-Nrul fragment behandeld met Nael, waarna de verkregen fragmenten 'afhankelijk van het gewenste leesraam in de Smal site van pEXl, pEX2 of pEX3 werden gekloneerd. Aldus werden de plasmiden p2 (met de sequentie coderend voor de aminozuren 52 tot 305), p3 (met de sequentie coderend voor de aminozuren 501 tot 654), p4 (met de sequentie coderend voor de aminozuren 305 tot 411), p5 (met de sequentie coderend voor de aminozuren 411 tot 501), en p6 (met de sequentie coderend voor de aminozuren -15 tot 52) verkregen. Alleen het fusie-eiwit van plasmide p2 bleek door dezelfde MAbs te worden herkend als aan het fusie-eiwit van plasmide pl (dat de volledige, voor gl coderende sequentie bevatte) bonden. Deze resultaten gaven aan, dat de antigene domeinen A, B, C, D en E tussen de aminozuren 52 en 305 lagen. Vervolgens werden van de gl sequentie van p2 afgeleide fragmenten in pEX gekloneerd (fig.2). In een Western blot reageerden dezelfde 10 MAbs, die de fusie-eiwitten van de plasmiden pl en p2 herkenden, met de fusie-eiwitten van het plasmide psl (met de sequentie coderend voor de aminozuren 52 tot 238) . De MAbs 1, 3 en 5 (antigeen domein A), de MAbs 4, 8 en 11 (antigeen domein B) en MAb 7 (antigeen domein D) reageerden met de fusie-eiwitten van het plasmide ps4 (met de sequentie coderend voor de aminozuren 52 tot 123), maar niet met de fusie-eiwitten van de plasmiden ps2 (met de sequentie coderend voor de aminozuren 78 tot 238) en ps3 (met de sequentie coderend voor de aminozuren 123 tot 238) . MAb 2 (antigeen domein E) en de MAbs 6 en 9 (antigeen domein C) reageerden alleen met het fusie-eiwit van plasmide ps2. Het fusie-eiwit van plasmide ps3 werd door geen van de geteste gl MAbs herkend (zie tabel 1). Deze resultaten wijzen erop, dat de antigene domeinen A, B en D tussen de aminozuren 52 en 78 gelegen zijn en dat de antigene domeinen C en E tussen de aminozuren 78 en 238 liggen.
PEPSCAN
Op de door Geysen et al beschreven wijze werden door een chemische synthese verkregen, overlappende nonapeptiden, die de aminozuren 52-238 van het gl eiwit beslaan, getest. Alle MAbs werden getest in de ELISA in een verdunning van 1:150.
Localisatie van de epitopen met de PEPSCAN-methode
De 168 overlappende nonapeptiden, die de aminozuren 52 tot 238 van het psl plasmide beslaan, werden volgens de PEPSCAN-methode getest onder toepassing van de gl MAbs. De MAbs 1, 3 en 5 (antigeen domein A) reageerden op dezelfde wijze met peptiden binnen de aminozuur sequenties 63-73 en 75-84. De MAbs 4, 8 en 11 (antigeen domein B) reageerden op dezelfde wijze met peptiden binnen de aminozuur sequentie 52-67. MAb 7 (antigeen domein D) herkende peptiden binnen de aminozuur sequentie 68-84 (zie fig.3). De MAbs 2, 6, 9 en 10, behorende bij de antigene domeinen C, E en F, reageerden met geen van de onderzochte peptiden.
De resultaten geven aan, dat antigeen domein D een continu domein is, terwijl de antigene domeinen A en B semi-continu zijn. Het feit dat de antigene domeinen C en E (behorende bij de MAbs 2, 6 en 9) volgens de immunoscreening op plasmide ps2 zouden moeten liggen, maar de desbetreffende MAbs noch met de fusie-eiwitten van de plasmiden ps3 en ps4, noch met enig nonapeptide in de PEPSCAN-analyse reageerden, lijkt erop te duiden dat een locale conformatie voor de herkenning tussen deze MAbs en hun respectieve epitopen nodig is, welke locale conformatie aanwezig is in het fusie-eiwit van plasmide ps2, maar niet in de fusie-eiwitten van de plasmiden ps3 en ps4 en evenmin in de synthetische nonapeptiden.
Figuurbespreking
Fig.l toont de resultaten van de competitieve ELISA.
Fig.2 toont de kloneringsstrategie van de volledige, voor gl coderende sequentie en fragmenten daarvan in pEX expressie plasmiden. De vette lijn geeft het open leesraam van gl aan. De getallen duiden op de aminozuur posities.
Fig.3 toont de resultaten van de PEPSCAN-analyse aan de 33 nonapeptiden, die de aminozuren 52 tot 84 beslaan. De aminozuur sequentie is in de één-letter code aangegeven, met vermelding van de aminozuur positie. De horizontale lijnen beneden de aminozuur sequentie markeren de peptiden, die aan de aangegeven MAbs binden. De vette lijnen geven de peptiden aan, die het sterkste aan de MAbs binden. De vertikale lijnen geven de OD waarde aan, die uit de reactie van de MAbs met de nonapeptiden resulteert.
Tabel 1: reactiviteit van MAbs met pEX expressie-eiwitten die gl fragmenten bevatten en in de PEPSCAN-analyse
pEX kloons_PEES CAN
MAb pl p2 psl ps2 ps3 ps4 1 + + + - - + + 2 + + + + -- 3 + + + -- + + 4 + + + - - + + 5 + + + -- + + 6 + + + + -- 7 + + + — — + + 8 + + + -- + + 9 + + + + -- 10 ----- - 11 + + + -- + +
Claims (25)
1. Oligopeptide met een aminozuren sequentie (volgens de drie-letter code) Ala Gly Asp Asp Asp Leu Asp Gly Asp Leu Asn Gly Asp Asp Arg Arg Ala Gly Phe Gly Ser Ala Leu Ala Ser Leu Arg Glu Ala Pro Pro Ala His Leu Val Asn Val Ser Glu Gly Ala Asn Phe Thr Leu Asp Ala Arg Gly Asp Gly Ala Val Val Ala Gly lie Trp Thr Phe Leu Pro Val Arg Gly Cys Asp Ala Val Ala Val Thr Met Val Cys Phe Glu Thr Ala Cys His Pro Asp Leu Val Leu Gly Arg Ala Cys Val Pro Glu Ala Pro Glu Arg Gly lie Gly Asp Tyr Leu Pro Pro Glu Val Pro Arg Leu Gin Arg Glu Pro Pro Ile Val Thr Pro Glu Arg Trp Ser Pro His Leu Thr Val Arg Arg Ala Thr Pro Asn Asp Thr Gly Leu Tyr Thr Leu His Asp Ala Ser Gly Pro Arg Ala Val Phe Phe Val Ala Val Gly Asp Arg Pro Pro Ala Pro Leu Ala Pro Val Gly Pro Ala Arg His Glu Pro Arg Phe His Ala Leu Gly Phe His Ser Gin Leu Phe Ser Pro welke sequentie overeenstemt met die van de aminozuren 52-238 van het glycoproteine I (gl) van het Aujeszky's disease virus (ADV), of een immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan.
2. Oligopeptide volgens conclusie 1 met een aminozuren sequentie (volgens de drie-letter code) Ala Gly Asp Asp Asp Leu Asp Gly Asp Leu Asn Gly Asp Asp Arg Arg Ala Gly Phe Gly Ser Ala Leu Ala Ser Leu Arg Glu Ala Pro Pro Ala His Leu welke sequentie overeenstemt met die van de aminozuren 52-85 van gl van ADV, of een immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan.
3. Oligopeptide volgens conclusie 2 met een aminozuren sequentie (volgens de drie-letter code) Ala Gly Asp Asp Asp Leu Asp Gly Asp Leu Asn Gly Asp Asp Arg Arg welke sequentie overeenstemt met die van de aminozuren 52-67 van gl van ADV, of een immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan.
4. Oligopeptide volgens conclusie 2 met een aminozuren sequentie (volgens de drie-letter code) Asn Gly Asp Asp Arg Arg Ala Gly Phe Gly Ser Ala Leu Ala Ser Leu Arg Glu Ala Pro Pro Ala His Leu welke sequentie overeenstemt met die van de aminozuren 62-85 van gl van ADV, of een immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan.
5. Oligopeptide volgens conclusie 4 met een aminozuren sequentie (volgens de drie-letter code) Ala Gly Phe Gly Ser Ala Leu Ala Ser Leu Arg Glu Ala Pro Pro Ala His Leu welke sequentie overeenstemt met die van de aminozuren 68-85 van gl van ADV, of een immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan.
6. Oligopeptide volgens conclusie 1 met een aminozuren sequentie (volgens de drie-letter code) Arg Glu Ala Pro Pro Ala His Leu Val Asn Val Ser Glu Gly Ala Asn Phe Thr Leu Asp Ala Arg Gly Asp Gly Ala Val Val Ala Gly Ile Trp Thr Phe Leu Pro Val Arg Gly Cys Asp Ala Val Ala Val Thr Met Val Cys Phe Glu Thr Ala Cys His Pro Asp Leu Val Leu Gly Arg Ala Cys Val Pro Glu Ala Pro Glu Arg Gly lie Gly Asp Tyr Leu Pro Pro Glu Val Pro Arg. Leu Gin Arg Glu Pro Pro Ile Val Thr Pro Glu Arg Trp Ser Pro His Leu Thr Val Arg Arg Ala Thr Pro Asn Asp Thr Gly Leu Tyr Thr Leu His Asp Ala Ser Gly Pro Arg Ala Val Phe Phe Val Ala Val Gly Asp Arg Pro Pro Ala Pro Leu Ala Pro Val Gly Pro Ala Arg His Glu Pro Arg Phe His Ala Leu Gly Phe His Ser Gin Leu Phe Ser Pro welke sequentie overeenstemt met die van de aminozuren 78-238 van gl van ADV, of een immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan.
7. Oligopeptide volgens een van de conclusies 1-6 in de vorm van een expressieprodukt, verkregen door expressie van genetische informatie die voor de aminozuur sequentie van het oligopeptide codeert.
8. Samenstelling, omvattende ten minste één in een immunogene vorm gebracht oligopeptide of immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan volgens een van de conclusies 1-7.
9. Samenstelling volgens conclusie 8, omvattende een immunogeen conjugaat van een eiwit en een oligopeptide of immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan volgens een van de conclusies 1-7.
10. Samenstelling volgens conclusie 8, omvattende een immunogeen complex waarvan een oligopeptide of immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan volgens een van de conclusies 1-7 deel uitmaakt.
11. Samenstelling volgens conclusie 8, omvattende een immunogeen recombinant eiwit waarvan een oligopeptide of immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan volgens een van de conclusies 1-7 deel uitmaakt.
12. Recombinant polynucleotide, welke een nucleotiden sequentie, coderend voor een oligopeptide of immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan volgens een van de conclusies 1-7, omvat.
13. Recombinant DNA dat een DNA sequentie, coderend voor een oligopeptide of immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan volgens een van de conclusies 1-7, omvat.
14. Recombinant DNA, bestaande uit een vectorgedeelte en een insertiegedeelte dat een DNA sequentie, coderend voor een oligopeptide of immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan volgens een van de conclusies 1-7, omvat.
15. Gastheercel, die ten gevolge van een genetische manipulatie onder toepassing van een recombinant DNA volgens conclusie 14 het vermogen heeft verkregen om een oligopeptide of immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan volgens een van de conclusies 1-7 tot expressie te brengen.
16. Microorganismen, die ten gevolge van een genetische manipulatie onder toepassing van een recombinant DNA volgens conclusie 14 het vermogen hebben verkregen om een oligopeptide of immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan volgens een van de conclusies 1-7 tot expressie te brengen.
17. Bacteriën, die ten gevolge van een genetische manipulatie onder toepassing van een recombinant DNA volgens conclusie 14 het vermogen hebben verkregen om een oligopeptide of immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan volgens een van de conclusies 1-7 tot expressie te brengen.
18. Cellen van eukaryoten, die ten gevolge van een genetische manipulatie onder toepassing van een recombinant DNA volgens conclusie 14 het vermogen hebben verkregen om een oligopeptide of immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan volgens een van de conclusies 1-7 tot expressie te brengen.
19. Gebruik van een oligopeptide of immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan volgens een van de conclusies 1-7 voor diagnostische doeleinden.
20. Gebruik van een oligopeptide of immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan volgens een van de conclusies 1-7 voor het serologisch onderscheiden van dieren, die door ADV zijn geïnfecteerd, van niet door ADV geïnfecteerde dieren.
21. Gebruik van een oligopeptide of immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan volgens een van de conclusies 1-7 voor het serologisch onderscheiden van varkens, die door ADV zijn geïnfecteerd, van niet door ADV geïnfecteerde varkens.
22. Gebruik van een oligopeptide of immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan volgens een van de conclusies 1-7 voor het produceren van poly- of monoklonale antilichamen met specifieke affiniteit voor gl van ADV.
23. Kit voor diagnostisch onderzoek naar ADV infectie, omvattende een oligopeptide of immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan volgens een van de conclusies 1-7.
24. Gebruik van poly- of monoklonale antilichamen met specifieke affiniteit voor gl van ADV, verkregen onder toepassing van een oligopeptide of immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan volgens een van de conclusies 1-7, voor diagnostische doeleinden.
25. Kit voor diagnostisch onderzoek naar ADV infectie, omvattende poly- of monoklonale antilichamen met specifieke affiniteit voor gl van ADV, verkregen onder toepassing van een oligopeptide of immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan volgens een van de conclusies 1-7.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL8902414A NL8902414A (nl) | 1989-09-28 | 1989-09-28 | Oligopeptiden/expressieprodukten van het aujeszky's disease virus en daarvoor coderende recombinante polynucleotiden. |
| PCT/NL1990/000143 WO1991004986A1 (en) | 1989-09-28 | 1990-09-28 | Oligopeptides/expression products of the aujeszky's disease virus, and recombinant polynucleotides coding therefor |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL8902414 | 1989-09-28 | ||
| NL8902414A NL8902414A (nl) | 1989-09-28 | 1989-09-28 | Oligopeptiden/expressieprodukten van het aujeszky's disease virus en daarvoor coderende recombinante polynucleotiden. |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL8902414A true NL8902414A (nl) | 1991-04-16 |
Family
ID=19855368
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NL8902414A NL8902414A (nl) | 1989-09-28 | 1989-09-28 | Oligopeptiden/expressieprodukten van het aujeszky's disease virus en daarvoor coderende recombinante polynucleotiden. |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| NL (1) | NL8902414A (nl) |
| WO (1) | WO1991004986A1 (nl) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5631316A (en) * | 1993-09-30 | 1997-05-20 | Exxon Chemical Patents Inc. | Tire innerliner comprising ester-functionalized elastomeric interpolymers of C4-C7 isomonoolefin and para-alkylstyrene |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1987002058A1 (en) * | 1985-10-04 | 1987-04-09 | The Upjohn Company | Pseudorabies virus protein |
-
1989
- 1989-09-28 NL NL8902414A patent/NL8902414A/nl not_active Application Discontinuation
-
1990
- 1990-09-28 WO PCT/NL1990/000143 patent/WO1991004986A1/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1991004986A1 (en) | 1991-04-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0236145B1 (en) | Processes for the production of hcmv glycoproteins, antibodies thereto and hcmv vaccines, and recombinant vectors therefor | |
| Tanaka et al. | Production of rabbit antibodies against carboxy-terminal epitopes encoded by bullous pemphigoid cDNA | |
| IE64006B1 (en) | Antigens particulary envelope antigens of the virus of lymphadenopathies and of the acquired immune-deficiency syndrome and virus process for producing virus envelope antigens use of said antigens in the preparation of immunogenic compositions or for the diagnosis of the presence of antibodies against this virus | |
| Guldner et al. | Human anti-p68 autoantibodies recognize a common epitope of U1 RNA containing small nuclear ribonucleoprotein and influenza B virus. | |
| US6322794B1 (en) | Seroreactive epitopes on proteins of human papillomavirus (HPV) 18 | |
| JPH0678359B2 (ja) | エプスタイン、バールウィルス核抗原と免疫反応する抗体を産生する化学的に合成されたポリペプチド | |
| CN113018427A (zh) | 基于新冠病毒中和抗原表位的多价融合蛋白疫苗 | |
| Jacobs et al. | Epitope analysis of glycoprotein I of pseudorabies virus | |
| US5846733A (en) | Structural phosphoprotein (PP150) of human cytomegalovirus, and the preparation and use thereof | |
| KR20090126256A (ko) | 인간 거대세포바이러스(ｈｃｍｖ)의 재조합 항원 | |
| US6808711B2 (en) | Immunologically active proteins from Borrelia burgdorferi, nucleic acids which encode them, and their use in test kits and as vaccines | |
| JP2000506376A (ja) | トキソプラズマ・ゴンジイ抗原Ｔｇ２０ | |
| US5656457A (en) | DNA sequence for the unique sequence herpes simplex virus type 2-glycoprotein G protein and method of expressing said unique sequence of HSV-2gG | |
| JPH05184369A (ja) | 免疫原蛋白及びｃＤＮＡクローン | |
| CN113740536A (zh) | 一种非洲猪瘟病毒p30阻断ELISA抗体检测试剂盒及其应用 | |
| JP4319703B2 (ja) | エプスタイン−バールウイルスペプチド及び該ペプチドに対する抗体 | |
| US6162620A (en) | Processes for the production of HCMV glycoproteins, antibodies thereto and HCMV vaccines, and recombinant vectors therefor | |
| EP0348725A2 (en) | Species-specific epitode of chlamydia trachomatis and antibodies that recognize the same | |
| US6197497B1 (en) | Immunoassay for herpes simplex virus | |
| JP2644625B2 (ja) | インフルエンザ菌ｂ型の外膜タンパク質ｐ１およびペプチド類 | |
| EP0655072B1 (en) | Immunological method for the detection of antibodies to equine herpesvirus type 1 and 4 glycoprotein G | |
| NL8902414A (nl) | Oligopeptiden/expressieprodukten van het aujeszky's disease virus en daarvoor coderende recombinante polynucleotiden. | |
| Rocha et al. | Antibody response to a fragment of the protein G of VHS rhabdovirus in immunised trout | |
| US6177080B1 (en) | Polypeptides encoded by Kaposi sarcoma-associated herpes virus the use thereof in diagnosis and therapy | |
| JPH07107982A (ja) | 偽狂犬病ウイルスワクチン用ポリペプチド、その製法、およびそれを含有するワクチン |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A1B | A search report has been drawn up | ||
| BC | A request for examination has been filed | ||
| BV | The patent application has lapsed |