NL8902414A - OLIGOPEPTIDES / EXPRESSION PRODUCTS OF THE AUJESZKY'S DISEASE VIRUS AND CODING RECOMBINANT POLYNUCLEOTIDES. - Google Patents
OLIGOPEPTIDES / EXPRESSION PRODUCTS OF THE AUJESZKY'S DISEASE VIRUS AND CODING RECOMBINANT POLYNUCLEOTIDES. Download PDFInfo
- Publication number
- NL8902414A NL8902414A NL8902414A NL8902414A NL8902414A NL 8902414 A NL8902414 A NL 8902414A NL 8902414 A NL8902414 A NL 8902414A NL 8902414 A NL8902414 A NL 8902414A NL 8902414 A NL8902414 A NL 8902414A
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- ala
- pro
- leu
- arg
- gly
- Prior art date
Links
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 title claims description 91
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 title claims description 91
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 title claims description 50
- 241000701093 Suid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 title claims description 47
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 title claims description 5
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 title claims description 5
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 title claims description 5
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 61
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 51
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 16
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 claims description 14
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 12
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 11
- BQSLGJHIAGOZCD-CIUDSAMLSA-N Leu-Ala-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BQSLGJHIAGOZCD-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims description 8
- HASRFYOMVPJRPU-SRVKXCTJSA-N Leu-Arg-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HASRFYOMVPJRPU-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims description 8
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 claims description 8
- 108010082286 glycyl-seryl-alanine Proteins 0.000 claims description 8
- OLVCTPPSXNRGKV-GUBZILKMSA-N Ala-Pro-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 OLVCTPPSXNRGKV-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 7
- MPLOSMWGDNJSEV-WHFBIAKZSA-N Ala-Gly-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O MPLOSMWGDNJSEV-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 6
- KMGOBAQSCKTBGD-DLOVCJGASA-N Ala-His-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)N)CC1=CN=CN1 KMGOBAQSCKTBGD-DLOVCJGASA-N 0.000 claims description 6
- JGDBHIVECJGXJA-FXQIFTODSA-N Asp-Asp-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O JGDBHIVECJGXJA-FXQIFTODSA-N 0.000 claims description 6
- SBHUBSDEZQFJHJ-CIUDSAMLSA-N Asp-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O SBHUBSDEZQFJHJ-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims description 6
- WBDWQKRLTVCDSY-WHFBIAKZSA-N Asp-Gly-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O WBDWQKRLTVCDSY-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 6
- OIARJGNVARWKFP-YUMQZZPRSA-N Leu-Asn-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O OIARJGNVARWKFP-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 6
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims description 6
- QHASENCZLDHBGX-ONGXEEELSA-N Ala-Gly-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 QHASENCZLDHBGX-ONGXEEELSA-N 0.000 claims description 5
- IRJWAYCXIYUHQE-WHFBIAKZSA-N Gly-Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN IRJWAYCXIYUHQE-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 5
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims description 5
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 5
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 claims description 5
- IORKCNUBHNIMKY-CIUDSAMLSA-N Ala-Pro-Glu Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O IORKCNUBHNIMKY-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims description 4
- HULHGJZIZXCPLD-FXQIFTODSA-N Arg-Ala-Cys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N HULHGJZIZXCPLD-FXQIFTODSA-N 0.000 claims description 4
- OTOXOKCIIQLMFH-KZVJFYERSA-N Arg-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N OTOXOKCIIQLMFH-KZVJFYERSA-N 0.000 claims description 4
- IJPNNYWHXGADJG-GUBZILKMSA-N Arg-Ala-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O IJPNNYWHXGADJG-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 4
- IGFJVXOATGZTHD-UHFFFAOYSA-N Arg-Phe-His Natural products NC(CCNC(=N)N)C(=O)NC(Cc1ccccc1)C(=O)NC(Cc2c[nH]cn2)C(=O)O IGFJVXOATGZTHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- PQKSVQSMTHPRIB-ZKWXMUAHSA-N Asn-Val-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O PQKSVQSMTHPRIB-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 4
- AIGROOHQXCACHL-WDSKDSINSA-N Glu-Gly-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O AIGROOHQXCACHL-WDSKDSINSA-N 0.000 claims description 4
- QGZSAHIZRQHCEQ-QWRGUYRKSA-N Gly-Asp-Tyr Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 QGZSAHIZRQHCEQ-QWRGUYRKSA-N 0.000 claims description 4
- GGLIDLCEPDHEJO-BQBZGAKWSA-N Gly-Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CN GGLIDLCEPDHEJO-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims description 4
- VOEGKUNRHYKYSU-XVYDVKMFSA-N His-Asp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VOEGKUNRHYKYSU-XVYDVKMFSA-N 0.000 claims description 4
- TWROVBNEHJSXDG-IHRRRGAJSA-N His-Leu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O TWROVBNEHJSXDG-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims description 4
- PTRKPHUGYULXPU-KKUMJFAQSA-N Leu-Phe-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O PTRKPHUGYULXPU-KKUMJFAQSA-N 0.000 claims description 4
- DPURXCQCHSQPAN-AVGNSLFASA-N Leu-Pro-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 DPURXCQCHSQPAN-AVGNSLFASA-N 0.000 claims description 4
- GRVMHFCZUIYNKQ-UFYCRDLUSA-N Phe-Phe-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O GRVMHFCZUIYNKQ-UFYCRDLUSA-N 0.000 claims description 4
- SMCHPSMKAFIERP-FXQIFTODSA-N Pro-Asn-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 SMCHPSMKAFIERP-FXQIFTODSA-N 0.000 claims description 4
- KDGARKCAKHBEDB-NKWVEPMBSA-N Ser-Gly-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O KDGARKCAKHBEDB-NKWVEPMBSA-N 0.000 claims description 4
- QQWNRERCGGZOKG-WEDXCCLWSA-N Thr-Gly-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O QQWNRERCGGZOKG-WEDXCCLWSA-N 0.000 claims description 4
- PWKMJDQXKCENMF-MEYUZBJRSA-N Tyr-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O PWKMJDQXKCENMF-MEYUZBJRSA-N 0.000 claims description 4
- UMPVMAYCLYMYGA-ONGXEEELSA-N Val-Leu-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O UMPVMAYCLYMYGA-ONGXEEELSA-N 0.000 claims description 4
- RYQUMYBMOJYYDK-NHCYSSNCSA-N Val-Pro-Glu Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N RYQUMYBMOJYYDK-NHCYSSNCSA-N 0.000 claims description 4
- 108010029539 arginyl-prolyl-proline Proteins 0.000 claims description 4
- JYPCXBJRLBHWME-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-prolyl-L-arginine Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(O)=O JYPCXBJRLBHWME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims description 4
- 108010051673 leucyl-glycyl-phenylalanine Proteins 0.000 claims description 4
- 108010073472 leucyl-prolyl-proline Proteins 0.000 claims description 4
- 108010020432 prolyl-prolylisoleucine Proteins 0.000 claims description 4
- 108010004914 prolylarginine Proteins 0.000 claims description 4
- VHAQSYHSDKERBS-XPUUQOCRSA-N Ala-Val-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O VHAQSYHSDKERBS-XPUUQOCRSA-N 0.000 claims description 3
- OMSKGWFGWCQFBD-KZVJFYERSA-N Ala-Val-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OMSKGWFGWCQFBD-KZVJFYERSA-N 0.000 claims description 3
- KWKQGHSSNHPGOW-BQBZGAKWSA-N Arg-Ala-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O KWKQGHSSNHPGOW-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims description 3
- HPSVTWMFWCHKFN-GARJFASQSA-N Arg-Glu-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)C(=O)O HPSVTWMFWCHKFN-GARJFASQSA-N 0.000 claims description 3
- 108010010777 Arg-Gly-Asp-Gly Proteins 0.000 claims description 3
- JTZUZBADHGISJD-SRVKXCTJSA-N Arg-His-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O JTZUZBADHGISJD-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims description 3
- BKFXFUPYETWGGA-XVSYOHENSA-N Asn-Phe-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O BKFXFUPYETWGGA-XVSYOHENSA-N 0.000 claims description 3
- DBWYWXNMZZYIRY-LPEHRKFASA-N Asp-Arg-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)C(=O)O DBWYWXNMZZYIRY-LPEHRKFASA-N 0.000 claims description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 3
- RMWAOBGCZZSJHE-UMNHJUIQSA-N Glu-Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N RMWAOBGCZZSJHE-UMNHJUIQSA-N 0.000 claims description 3
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- BPANDPNDMJHFEV-CIUDSAMLSA-N Leu-Asp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O BPANDPNDMJHFEV-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims description 3
- MFDDVIJCQYOOES-GUBZILKMSA-N Met-Val-Cys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)N MFDDVIJCQYOOES-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 3
- XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N N-L-cysteinyl-L-phenylalanine Natural products SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- BFYHIHGIHGROAT-HTUGSXCWSA-N Phe-Glu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O BFYHIHGIHGROAT-HTUGSXCWSA-N 0.000 claims description 3
- BIYWZVCPZIFGPY-QWRGUYRKSA-N Phe-Gly-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BIYWZVCPZIFGPY-QWRGUYRKSA-N 0.000 claims description 3
- KDIIENQUNVNWHR-JYJNAYRXSA-N Pro-Arg-Phe Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O KDIIENQUNVNWHR-JYJNAYRXSA-N 0.000 claims description 3
- AUQGUYPHJSMAKI-CYDGBPFRSA-N Pro-Ile-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 AUQGUYPHJSMAKI-CYDGBPFRSA-N 0.000 claims description 3
- XKWABWFMQXMUMT-HJGDQZAQSA-N Thr-Pro-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O XKWABWFMQXMUMT-HJGDQZAQSA-N 0.000 claims description 3
- ASQFIHTXXMFENG-XPUUQOCRSA-N Val-Ala-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O ASQFIHTXXMFENG-XPUUQOCRSA-N 0.000 claims description 3
- 108010086434 alanyl-seryl-glycine Proteins 0.000 claims description 3
- 108010070944 alanylhistidine Proteins 0.000 claims description 3
- 108010081985 glycyl-cystinyl-aspartic acid Proteins 0.000 claims description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 claims description 3
- HPKSHFSEXICTLI-CIUDSAMLSA-N Arg-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HPKSHFSEXICTLI-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims description 2
- IICZCLFBILYRCU-WHFBIAKZSA-N Asn-Gly-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IICZCLFBILYRCU-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 2
- GVPSCJQLUGIKAM-GUBZILKMSA-N Asp-Arg-Arg Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O GVPSCJQLUGIKAM-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 2
- KDBHVPXBQADZKY-GUBZILKMSA-N Pro-Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 KDBHVPXBQADZKY-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 claims description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 2
- HWPXGQCMZITGFN-XVYDVKMFSA-N Ala-Cys-His Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N HWPXGQCMZITGFN-XVYDVKMFSA-N 0.000 claims 2
- XMGVWQWEWWULNS-BPUTZDHNSA-N Arg-Trp-Ser Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N XMGVWQWEWWULNS-BPUTZDHNSA-N 0.000 claims 2
- JRDYDYXZKFNNRQ-XPUUQOCRSA-N Gly-Ala-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN JRDYDYXZKFNNRQ-XPUUQOCRSA-N 0.000 claims 2
- DHNXGWVNLFPOMQ-KBPBESRZSA-N Gly-Phe-His Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)NC(=O)CN DHNXGWVNLFPOMQ-KBPBESRZSA-N 0.000 claims 2
- VSLXGYMEHVAJBH-DLOVCJGASA-N His-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O VSLXGYMEHVAJBH-DLOVCJGASA-N 0.000 claims 2
- WSGXUIQTEZDVHJ-GARJFASQSA-N Leu-Ala-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(O)=O WSGXUIQTEZDVHJ-GARJFASQSA-N 0.000 claims 2
- CGBYDGAJHSOGFQ-LPEHRKFASA-N Pro-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2 CGBYDGAJHSOGFQ-LPEHRKFASA-N 0.000 claims 2
- KPDRZQUWJKTMBP-DCAQKATOSA-N Pro-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 KPDRZQUWJKTMBP-DCAQKATOSA-N 0.000 claims 2
- STASJMBVVHNWCG-IHRRRGAJSA-N Pro-His-Leu Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)NC(=O)[C@H]1[NH2+]CCC1)C1=CN=CN1 STASJMBVVHNWCG-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims 2
- XGFYGMKZKFRGAI-RCWTZXSCSA-N Thr-Val-Arg Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N XGFYGMKZKFRGAI-RCWTZXSCSA-N 0.000 claims 2
- COYSIHFOCOMGCF-UHFFFAOYSA-N Val-Arg-Gly Natural products CC(C)C(N)C(=O)NC(C(=O)NCC(O)=O)CCCN=C(N)N COYSIHFOCOMGCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 108010085325 histidylproline Proteins 0.000 claims 2
- 108010018006 histidylserine Proteins 0.000 claims 2
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 claims 2
- IPZQNYYAYVRKKK-FXQIFTODSA-N Ala-Pro-Ala Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O IPZQNYYAYVRKKK-FXQIFTODSA-N 0.000 claims 1
- PPPXVIBMLFWNSK-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Cys Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)CN=C(N)N PPPXVIBMLFWNSK-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims 1
- RGKKALNPOYURGE-ZKWXMUAHSA-N Asp-Ala-Val Chemical compound N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O RGKKALNPOYURGE-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims 1
- VNLYIYOYUNGURO-ZLUOBGJFSA-N Cys-Asp-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N VNLYIYOYUNGURO-ZLUOBGJFSA-N 0.000 claims 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 claims 1
- OAQJOXZPGHTJNA-NGTWOADLSA-N Ile-Trp-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N OAQJOXZPGHTJNA-NGTWOADLSA-N 0.000 claims 1
- JDBQSGMJBMPNFT-AVGNSLFASA-N Leu-Pro-Val Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O JDBQSGMJBMPNFT-AVGNSLFASA-N 0.000 claims 1
- OSBADCBXAMSPQD-YESZJQIVSA-N Phe-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N OSBADCBXAMSPQD-YESZJQIVSA-N 0.000 claims 1
- YXSSXUIBUJGHJY-SFJXLCSZSA-N Trp-Thr-Phe Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)[C@H](O)C)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 YXSSXUIBUJGHJY-SFJXLCSZSA-N 0.000 claims 1
- COYSIHFOCOMGCF-WPRPVWTQSA-N Val-Arg-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CCCN=C(N)N COYSIHFOCOMGCF-WPRPVWTQSA-N 0.000 claims 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 32
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 27
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 22
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 16
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 description 15
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 12
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 11
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 11
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 10
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 6
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 5
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 4
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N Ala-Leu-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- ADSGHMXEAZJJNF-DCAQKATOSA-N Ala-Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](C)N ADSGHMXEAZJJNF-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- YHBDGLZYNIARKJ-GUBZILKMSA-N Ala-Pro-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](C)N YHBDGLZYNIARKJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 102000004594 DNA Polymerase I Human genes 0.000 description 2
- 108010017826 DNA Polymerase I Proteins 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BZAQOPHNBFOOJS-DCAQKATOSA-N His-Pro-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O BZAQOPHNBFOOJS-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102100035971 Molybdopterin molybdenumtransferase Human genes 0.000 description 2
- 101710119577 Molybdopterin molybdenumtransferase Proteins 0.000 description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 2
- MYQCCQSMKNCNKY-KKUMJFAQSA-N Phe-His-Ser Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N MYQCCQSMKNCNKY-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000001571 immunoadjuvant effect Effects 0.000 description 2
- 239000000568 immunological adjuvant Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 2
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000010814 radioimmunoprecipitation assay Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HSTOKWSFWGCZMH-UHFFFAOYSA-N 3,3'-diaminobenzidine Chemical compound C1=C(N)C(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C(N)=C1 HSTOKWSFWGCZMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- JBGSZRYCXBPWGX-BQBZGAKWSA-N Ala-Arg-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CCCN=C(N)N JBGSZRYCXBPWGX-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N Arg-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FIQKRDXFTANIEJ-ULQDDVLXSA-N Arg-Phe-His Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N FIQKRDXFTANIEJ-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- YCYXHLZRUSJITQ-SRVKXCTJSA-N Arg-Pro-Pro Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 YCYXHLZRUSJITQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- DTNUIAJCPRMNBT-WHFBIAKZSA-N Asp-Gly-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DTNUIAJCPRMNBT-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 101100022187 Caenorhabditis elegans mab-10 gene Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OZSBRCONEMXYOJ-AVGNSLFASA-N Cys-Phe-Glu Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N OZSBRCONEMXYOJ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 230000008836 DNA modification Effects 0.000 description 1
- 230000007023 DNA restriction-modification system Effects 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- DCBSZJJHOTXMHY-DCAQKATOSA-N Glu-Pro-Pro Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 DCBSZJJHOTXMHY-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- GZBZACMXFIPIDX-WHFBIAKZSA-N Gly-Cys-Asp Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)CN)C(=O)O GZBZACMXFIPIDX-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 101800000342 Glycoprotein C Proteins 0.000 description 1
- 101800000190 Glycoprotein G1 Proteins 0.000 description 1
- 101800000343 Glycoprotein N Proteins 0.000 description 1
- 101710181600 Glycoprotein gp2 Proteins 0.000 description 1
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 description 1
- 101710088172 HTH-type transcriptional regulator RipA Proteins 0.000 description 1
- OSZUPUINVNPCOE-SDDRHHMPSA-N His-Glu-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)C(=O)O OSZUPUINVNPCOE-SDDRHHMPSA-N 0.000 description 1
- LVWIJITYHRZHBO-IXOXFDKPSA-N His-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LVWIJITYHRZHBO-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 1
- APQYGMBHIVXFML-OSUNSFLBSA-N Ile-Val-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N APQYGMBHIVXFML-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 1
- AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N Leu-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- KLYYKKGCPOGDPE-OEAJRASXSA-N Phe-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KLYYKKGCPOGDPE-OEAJRASXSA-N 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- PULPZRAHVFBVTO-DCAQKATOSA-N Pro-Glu-Arg Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O PULPZRAHVFBVTO-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- QPPYAWVLAVXISR-DCAQKATOSA-N Ser-Pro-His Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CO)N)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O QPPYAWVLAVXISR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNBANYVJJBGDI-VZFHVOOUSA-N Thr-Ala-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O YRNBANYVJJBGDI-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- GEGYPBOPIGNZIF-CWRNSKLLSA-N Trp-Ser-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)N)C(=O)O GEGYPBOPIGNZIF-CWRNSKLLSA-N 0.000 description 1
- DJEVQCWNMQOABE-RCOVLWMOSA-N Val-Gly-Asp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N DJEVQCWNMQOABE-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 1
- YTNGABPUXFEOGU-SRVKXCTJSA-N Val-Pro-Arg Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O YTNGABPUXFEOGU-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 238000012412 chemical coupling Methods 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000009313 farming Methods 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 108010025801 glycyl-prolyl-arginine Proteins 0.000 description 1
- 231100000001 growth retardation Toxicity 0.000 description 1
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920002643 polyglutamic acid Polymers 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 description 1
- 108020001775 protein parts Proteins 0.000 description 1
- 208000009305 pseudorabies Diseases 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
- 101150069452 z gene Proteins 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/081—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from DNA viruses
- C07K16/085—Herpetoviridae, e.g. pseudorabies virus, Epstein-Barr virus
- C07K16/087—Herpes simplex virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
- C12N2710/16722—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Oligopeptiden/expressieprodukten van het Aujeszky's disease virus en daarvoor coderende recombinante polynucleotidenAujeszky's disease virus oligopeptides / expression products and recombinant polynucleotides encoding them
De uitvinding heeft betrekking op nieuwe oligopeptiden/ expressieprodukten, welke gebruikt kunnen worden voor diagnostische doeleinden of ten behoeve van de produktie van polyklonale of monoklonale antilichamen.The invention relates to new oligopeptides / expression products which can be used for diagnostic purposes or for the production of polyclonal or monoclonal antibodies.
Meer in het bijzonder heeft de uitvinding betrekking op nieuwe oligopeptiden/expressieprodukten, welke afgeleid zijn van glycoproteïne I (dat verder met de gebruikelijke afkorting gl zal worden aangeduid) van het Aujeszky's disease virus (ADV, dat ook wel pseudorabies virus of PRV wordt genoemd) en bruikbaar zijn voor een serologische diagnostiek, gericht op het onderscheiden van dieren (met name varkens) die door het wild-type virus zijn geïnfecteerd, van dieren die niet door het wild-type virus, dat het gl tot expressie brengt, zijn geïnfecteerd, met name dieren die tegen ADV zijn gevaccineerd met een vaccin dat niet gl bevat of tot expressie brengt (een gl-negatief vaccin).More particularly, the invention relates to novel oligopeptides / expression products derived from glycoprotein I (which will be referred to further by the usual abbreviation gl) of Aujeszky's disease virus (ADV, also referred to as pseudorabies virus or PRV) and useful for serological diagnostics aimed at distinguishing animals (in particular pigs) infected by the wild-type virus from animals not infected by the wild-type virus expressing the gl, in particular animals vaccinated against ADV with a vaccine that does not contain or express gl (a gl negative vaccine).
De uitvinding strekt zich uit tot deze oligopeptiden/ expressieprodukten zelf, tot immunogene samenstellingen die een of meer van deze nieuwe oligopeptiden/expressieprodukten bevatten in een voor immunisatie-doeleinden geschikte vorm, tot gebruik van de nieuwe oligopeptiden/expressieprodukten voor diagnostische doeleinden of voor het produceren van polyklonale of monoklonale antilichamen, en tot recombinante genetische informatie (recombinante polynucleotiden, d.w.z. recombinant DNA of recombinant RNA) welke voor de nieuwe oligopeptiden/ expressieprodukten codeert.The invention extends to these oligopeptides / expression products themselves, to immunogenic compositions containing one or more of these new oligopeptides / expression products in a form suitable for immunization purposes, to use the new oligopeptides / expression products for diagnostic purposes or to produce from polyclonal or monoclonal antibodies, and to recombinant genetic information (recombinant polynucleotides, ie recombinant DNA or recombinant RNA) encoding the new oligopeptides / expression products.
Het is bijv. uit de Europese octrooiaanvrage EP-A-0223382 bekend, dat de ziekte van Aujeszky door het herpesvirus PRV (oftewel ADV) wordt veroorzaakt. Het virus veroorzaakt grote schade in de varkenshouderij, vooral door fertiliteitsproblemen bij zeugen, sterfte onder biggen en groeivertraging onder mestvarkens. Alle geïnfecteerde varkens vormen antilichamen tegen het gl van ADV. Deze antilichamen blijven jarenlang in het bloed aantoonbaar. Varkens die met gl-negatieve vaccins zijn gevaccineerd vormen daarentegen geen antilichamen tegen gl van ADV.It is known, for example, from European patent application EP-A-0223382, that Aujeszky's disease is caused by the herpes virus PRV (or ADV). The virus causes extensive damage in pig farming, mainly due to fertility problems in sows, mortality in piglets and growth retardation in fattening pigs. All infected pigs form antibodies against the gl of ADV. These antibodies remain detectable in the blood for years. Pigs vaccinated with gl negative vaccines, on the other hand, do not form antibodies against gl of ADV.
Om de economische schade te beperken worden in vele landen op uitgebreide schaal varkens gevaccineerd tegen de ziekte. Vaccinatie alleen is echter niet voldoende om het ADV uit te roeien; het virus kan blijven circuleren in gevaccineerde varkenspopulaties. Voor een uitroeiing van ADV in landen waar wordt gevaccineerd is het dan ook van cruciaal belang om over een test te beschikken die onderscheid kan maken tussen geïnfecteerde en gevaccineerde varkens (m.a.w. varkens met antilichamen tegen gl en varkens zonder antilichamen tegen gl).To limit economic damage, pigs are extensively vaccinated against the disease in many countries. However, vaccination alone is not enough to eradicate the ADV; the virus can continue to circulate in vaccinated pig populations. Therefore, it is crucial for an eradication of ADV in vaccinated countries to have a test that can distinguish between infected and vaccinated pigs (i.e. pigs with anti-gl antibodies and pigs without anti-gl antibodies).
Er zijn tests voor het maken van een dergelijk onderscheid ontwikkeld. Deze tests zijn gebaseerd op een detectie van antilichamen tegen gl (Van Oirschot et al, J. Gen. Virol. £2, 1986, 1179-1182; Anonymous, Internieuws 12/ 1987, 25-32; Van Oirschot et al, J. Virol. Meth. 22./ 1988, 191-206; Eloit et al, Vet. Ree. 124, 1989, 91-94) of een detectie van antilichamen tegen glycoproteine X (McMillen en McDonald, Proc. 1st Eur. Congr. Vet. Virol. 1989, p.38).Tests to make such a distinction have been developed. These tests are based on a detection of antibodies to gl (Van Oirschot et al, J. Gen. Virol. £ 2, 1986, 1179-1182; Anonymous, Internieuws 12/1987, 25-32; Van Oirschot et al, J. Virol. Meth. 22./ 1988, 191-206; Eloit et al, Vet. Ree. 124, 1989, 91-94) or a detection of antibodies to glycoprotein X (McMillen and McDonald, Proc. 1st Eur. Congress. Vet. Virol. 1989, p. 38).
Uit een artikel van Petrovskis et al, J. Virol. 1986, 185-193, blijkt dat de volledige aminozuur sequentie van het glycoproteine gl bekend is. Bij het aan de uitvinding ten grondslag liggende onderzoek is van de in dit artikel getoonde sequentie gebruik gemaakt.From an article by Petrovskis et al, J. Virol. 1986, 185-193, it appears that the complete amino acid sequence of the glycoprotein g1 is known. The sequence underlying this invention has utilized the sequence shown in this article.
Uit de hierboven reeds genoemde Europese octrooiaanvrage EP-A-0223382 is recombinant DNA bekend, dat de voor het uit 577 aminozuren bestaande gl'van PRV coderende genetische informatie bevat. Hoewel ook gesproken wordt over fragmenten van gl, die "pseudorabies virus activiteit" vertonen, wordt niet duidelijk gemaakt welke fragmenten van het gl zo'n "pseudorabies virus activiteit" bezitten, oftewel welke fragmenten of delen van het gl immunologisch functioneel zijn. Zowel voor diagnostische doeleinden als voor de produktie van poly- en monoklonale anti-lichamen met een hoge specifieke affiniteit voor gl kan het nuttig zijn om een geschikt fragment te gebruiken in plaats van het complete eiwit.From the above-mentioned European patent application EP-A-0223382, recombinant DNA is known which contains the genetic information coding for the gl7 of PRV consisting of 577 amino acids. Although fragments of gl which exhibit "pseudorabies virus activity" are also discussed, it is not made clear which fragments of the gl have such "pseudorabies virus activity", ie which fragments or parts of the gl are immunologically functional. For diagnostic purposes as well as for the production of poly and monoclonal antibodies with a high specific affinity for g1, it may be useful to use an appropriate fragment in place of the complete protein.
Tot nu toe zijn geen oligopeptiden/expressieprodukten van het gl beschreven die in het varken, de natuurlijke gastheer van ADV, in staat zijn om antilichamen op te wekken. Dergelijke oligopeptiden/expressieprodukten zouden een belangrijke vooruitgang op het gebied van de diagnostiek kunnen betekenen. Dergelijke oligopeptiden/expressieprodukten zouden gebruikt kunnen worden voor een diagnostische test ter onderscheiding van geïnfecteerde varkens en varkens die gevaccineerd zijn met gl-negatieve vaccins. Ook zouden dergelijke oligopeptiden/ expressieprodukten gebruikt kunnen worden voor de ontwikkeling van een zg. "pig-side" test volgens het principe, beschreven in een artikel van Kemp et al, Science 241f 1988, 1352-1354. Een dergelijke test zou dan gebaseerd zijn op een binding van de antigene sequentie van het oligopeptide/ expressieprodukt door in geïnfecteerde dieren aanwezige antilichamen tegen het gl.To date, no oligopeptides / expression products of the g1 which are able to raise antibodies in the pig, the natural host of ADV, have been described. Such oligopeptides / expression products could represent significant advances in the field of diagnostics. Such oligopeptides / expression products could be used for a diagnostic test to distinguish infected pigs and pigs vaccinated with G1 negative vaccines. Also, such oligopeptides / expression products could be used to develop a so-called "pig-side" assay according to the principle described in an article by Kemp et al, Science 241f 1988, 1352-1354. Such an assay would then be based on a binding of the antigenic sequence of the oligopeptide / expression product by antibodies to the g1 present in infected animals.
Het oligopeptide/expressieprodukt zou voor zo'n test gekoppeld moeten worden aan een tegen varkenserythrocyten gericht monoklonaal antilichaam.The oligopeptide / expression product should be coupled to a monoclonal antibody directed against porcine erythrocytes for such an assay.
Een andere mogelijkheid zou zijn om de oligopeptiden/ expressieprodukten te gebruiken voor het opwekken van een immuunrespons in het kader van een werkwijze voor het produceren van polyklonale of monoklonale antilichamen, die specifiek zijn voor het (de) desbetreffende antigene gebied(en) en op hun beurt gebruikt zouden kunnen worden in een diagnostische test.Another possibility would be to use the oligopeptides / expression products to elicit an immune response as part of a method of producing polyclonal or monoclonal antibodies specific for the respective antigenic region (s) and their could in turn be used in a diagnostic test.
Thans zijn met behulp van de zg. PEPSCAN-methode van Geysen et al (Proc. Natl. Acad. Sci. USA £1, 1984, 3998-4002; Proc. Natl. Acad. Sci. USA £2., 1985, 178-182; "Synthetic peptides as antigens" 1986, 130-149, Wiley; WO 84/03506 en WO 84/03564) en van monoklonale antilichamen gericht tegen het glycoproteine I van ADV, op het glycoproteine I gelegen reactieve sequenties gevonden die in de vorm van oligopeptiden/ expressieprodukten voor de bovenstaand vermelde doelen kunnen worden aangewend.Currently, using the so-called PEPSCAN method of Geysen et al (Proc. Natl. Acad. Sci. USA £ 1, 1984, 3998-4002; Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2, 1985, 178 -182; "Synthetic peptides as antigens" 1986, 130-149, Wiley; WO 84/03506 and WO 84/03564) and of monoclonal antibodies directed against the glycoprotein I of ADV, found on the glycoprotein I reactive sequences found in the form of oligopeptides / expression products can be used for the above stated purposes.
De uitvinding wordt in de eerste plaats belichaamd in een oligopeptide met een aminozuren sequentie (volgens de drie-letter code)The invention is primarily embodied in an oligopeptide having an amino acid sequence (according to the three-letter code)
Ala Gly Asp Asp Asp Leu Asp Gly Asp Leu Asn Gly Asp Asp Arg ArgAla Gly Asp Asp Asp Leu Asp Gly Asp Leu Asn Gly Asp Asp Arg Arg
Ala Gly Phe Gly Ser Ala Leu Ala Ser Leu Arg Glu Ala Pro Pro AlaAla Gly Phe Gly Ser Ala Leu Ala Ser Leu Arg Glu Ala Pro Pro Ala
His Leu Val Asn Val Ser Glu Gly Ala Asn Phe Thr Leu Asp Ala ArgHis Leu Val Asn Val Ser Glu Gly Ala Asn Phe Thr Leu Asp Ala Arg
Gly Asp Gly Ala Val Val Ala Gly lie Trp Thr Phe Leu Pro Val ArgGly Asp Gly Ala Val Val Ala Gly lie Trp Thr Phe Leu Pro Val Arg
Gly Cys Asp Ala Val Ala Val Thr Met Val Cys Phe Glu Thr Ala CysGly Cys Asp Ala Val Ala Val Thr Met Val Cys Phe Glu Thr Ala Cys
His Pro Asp Leu Val Leu Gly Arg Ala Cys Val Pro Glu Ala Pro GluHis Pro Asp Leu Val Leu Gly Arg Ala Cys Val Pro Glu Ala Pro Glu
Arg Gly lie Gly Asp Tyr Leu Pro Pro Glu Val Pro Arg Leu Gin ArgArg Gly lie Gly Asp Tyr Leu Pro Pro Glu Val Pro Arg Leu Gin Arg
Glu Pro Pro Ile Val Thr Pro Glu Arg Trp Ser Pro His Leu Thr ValGlu Pro Pro Ile Val Thr Pro Glu Arg Trp Ser Pro His Leu Thr Val
Arg Arg Ala Thr Pro Asn Asp Thr Gly Leu Tyr Thr Leu His Asp AlaArg Arg Ala Thr Pro Asn Asp Thr Gly Leu Tyr Thr Leu His Asp Ala
Ser Gly Pro Arg Ala Val Phe Phe Val Ala Val Gly Asp Arg Pro ProSer Gly Pro Arg Ala Val Phe Phe Val Ala Val Gly Asp Arg Pro Pro
Ala Pro Leu Ala Pro Val Gly Pro Ala Arg His Glu Pro Arg Phe HisAla Pro Leu Ala Pro Val Gly Pro Ala Arg His Glu Pro Arg Phe His
Ala Leu Gly Phe His Ser Gin Leu Phe Ser Pro welke sequentie overeenstemt met die van de aminozuren 52-238 van het glycoproteine I (gl) van het Aujeszky's disease virus (ADV), of een immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan.Ala Leu Gly Phe His Ser Gin Leu Phe Ser Pro which corresponds to that of the amino acids 52-238 of the glycoprotein I (gl) of the Aujeszky's disease virus (ADV), or an immunologically functional fragment or derivative thereof.
De term "oligopeptide" wordt hier in een ruime betekenis gebruikt, waarbij deze term met name geen enkele beperking inhoudt ten aanzien van de wijze waarop het verkregen is. De term slaat derhalve zowel op peptiden, die door chemische synthese zijn bereid, als ook op produkten, verkregen door expressie van relevante genetische informatie in geschikte (micro)biologische systemen. Voor alle duidelijkheid wordt daarom op veel plaatsen in deze tekst ook wel gesproken van oligopeptiden/ expressieprodukten.The term "oligopeptide" is used in a broad sense here, in particular, this term does not limit the manner in which it is obtained. The term therefore refers to peptides prepared by chemical synthesis, as well as to products obtained by expression of relevant genetic information in suitable (micro) biological systems. For the sake of clarity, therefore, many places in this text are also referred to as oligopeptides / expression products.
Meer in het bijzonder wordt de uitvinding belichaamd in een oligopeptide met een aminozuren sequentie (volgens de drie-letter code)More specifically, the invention is embodied in an oligopeptide having an amino acid sequence (according to the three-letter code)
Ala Gly Asp Asp Asp Leu Asp Gly Asp Leu Asn Gly Asp Asp Arg Arg Ala Gly Phe Gly Ser Ala Leu Ala Ser Leu Arg Glu Ala Pro Pro Ala His Leu welke sequentie overeenstemt met die van de aminozuren 52-85 van gl van ADV, of een immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan.Ala Gly Asp Asp Asp Leu Asp Gly Asp Leu Asn Gly Asp Asp Arg Arg Ala Gly Phe Gly Ser Ala Leu Ala Ser Leu Arg Glu Ala Pro Pro Ala His Leu which sequence corresponds to that of the amino acids 52-85 of µl of ADV, or an immunologically functional fragment or derivative thereof.
Aangezien het hier een betrekkelijk klein oligopeptide betreft, zal chemische synthese (volgens op zichzelf bekende technieken) een geschikte manier zijn om het oligopeptide in handen te krijgen. Produktie door expressie van relevante genetische informatie in een (micro)biologische gastheer is echter eveneens mogelijk.Since this is a relatively small oligopeptide, chemical synthesis (using techniques known per se) will be a suitable way to obtain the oligopeptide. However, production by expression of relevant genetic information in a (micro) biological host is also possible.
Een mogelijke uitvoeringsvorm van de uitvinding betreft een oligopeptide met een aminozuren sequentie (volgens de drie-letter code)A possible embodiment of the invention concerns an oligopeptide with an amino acid sequence (according to the three-letter code)
Ala Gly Asp Asp Asp Leu Asp Gly Asp Leu Asn Gly Asp Asp Arg Arg welke sequentie overeenstemt met die van de aminozuren 52-67 van gl van ADV, of een immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan.Ala Gly Asp Asp Asp Leu Asp Gly Asp Leu Asn Gly Asp Asp Arg Arg which sequence corresponds to that of the amino acids 52-67 of G1 of ADV, or an immunologically functional fragment or derivative thereof.
Een andere mogelijke uivoeringsvorm van de uitvinding betreft een oligopeptide met een aminozuren sequentie (volgens de drie-letter code)Another possible embodiment of the invention concerns an oligopeptide with an amino acid sequence (according to the three-letter code)
Asn Gly Asp Asp Arg Arg Ala Gly Phe Gly Ser Ala Leu Ala Ser Leu Arg Glu Ala Pro Pro Ala His Leu welke sequentie overeenstemt met die van de aminozuren 62-85 van gl van ADV, of een immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan.Asn Gly Asp Asp Arg Arg Ala Gly Phe Gly Ser Ala Leu Ala Ser Leu Arg Glu Ala Pro Pro Ala His Leu which sequence corresponds to that of the amino acids 62-85 of µl of ADV, or an immunologically functional fragment or derivative thereof.
Een mogelijkheid binnen deze uitvoeringsvorm is een oligopeptide met een aminozuren sequentie (volgens de drie-letter code)One possibility within this embodiment is an oligopeptide with an amino acid sequence (according to the three-letter code)
Ala Gly Phe Gly Ser Ala Leu Ala Ser Leu Arg Glu Ala Pro Pro Ala His Leu welke sequentie overeenstemt met die van de aminozuren 68-85 van gl van ADV, of een immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan.Ala Gly Phe Gly Ser Ala Leu Ala Ser Leu Arg Glu Ala Pro Pro Ala His Leu which sequence corresponds to that of the amino acids 68-85 of µl of ADV, or an immunologically functional fragment or derivative thereof.
Een belangrijke voorkeursuitvoeringsvorm van de uitvinding betreft een oligopeptide met een aminozuren sequentie (volgens de drie-letter code)An important preferred embodiment of the invention relates to an oligopeptide with an amino acid sequence (according to the three-letter code)
Arg Glu Ala Pro Pro Ala His Leu Val Asn Val Ser Glu Gly Ala AsnArg Glu Ala Pro Pro Ala His Leu Val Asn Val Ser Glu Gly Ala Asn
Phe Thr Leu Asp Ala Arg Gly Asp Gly Ala Val Val Ala Gly Ile TrpPhe Thr Leu Asp Ala Arg Gly Asp Gly Ala Val Val Ala Gly Ile Trp
Thr Phe Leu Pro Val Arg Gly Cys Asp Ala Val Ala Val Thr Met ValThr Phe Leu Pro Val Arg Gly Cys Asp Ala Val Ala Val Thr Met Val
Cys Phe Glu Thr Ala Cys His Pro Asp Leu Val Leu Gly Arg Ala CysCys Phe Glu Thr Ala Cys His Pro Asp Leu Val Leu Gly Arg Ala Cys
Val Pro Glu Ala Pro Glu Arg Gly lie Gly Asp Tyr Leu Pro Pro GluVal Pro Glu Ala Pro Glu Arg Gly lie Gly Asp Tyr Leu Pro Pro Glu
Val Pro Arg Leu Gin Arg Glu Pro Pro Ile Val Thr Pro Glu Arg TrpVal Pro Arg Leu Gin Arg Glu Pro Pro Ile Val Thr Pro Glu Arg Trp
Ser Pro His Leu Thr Val Arg Arg Ala Thr Pro Asn Asp Thr Gly LeuSer Pro His Leu Thr Val Arg Arg Ala Thr Pro Asn Asp Thr Gly Leu
Tyr Thr Leu His Asp Ala Ser Gly Pro Arg Ala Val Phe Phe Val AlaTyr Thr Leu His Asp Ala Ser Gly Pro Arg Ala Val Phe Phe Val Ala
Val Gly Asp Arg Pro Pro Ala Pro Leu Ala Pro Val Gly Pro Ala ArgVal Gly Asp Arg Pro Pro Ala Pro Leu Ala Pro Val Gly Pro Ala Arg
His Glu Pro Arg Phe His Ala Leu Gly Phe His Ser Gin Leu Phe SerHis Glu Pro Arg Phe His Ala Leu Gly Phe His Ser Gin Leu Phe Ser
Pro welke sequentie overeenstemt met die van de aminozuren 78-23S van gl van ADV, of een immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan.Pro which corresponds to that of ADV amino acids 78-23S, or an immunologically functional fragment or derivative thereof.
Opnieuw geldt, dat het oligopeptide zowel door chemische synthese als door expressie kan worden geproduceerd. In het geval van dit oligopeptide heeft een produktie door expressie van relevante genetische informatie echter zeer de voorkeur.Again, the oligopeptide can be produced by both chemical synthesis and expression. However, in the case of this oligopeptide, production by expression of relevant genetic information is highly preferred.
Met de woorden "immunologisch functioneel fragment of derivaat" worden delen resp. gemodificeerde vormen van het oligopeptide/expressieprodukt bedoeld, die eveneens reactief zijn met antilichamen tegen gl. In het geval van fragmenten van het oligopeptide zal de minimale lengte daarvan acht a negen aminozuren bedragen om een specifieke reactiviteit met antilichamen tegen gl te kunnen bezitten. In het geval van derivaten van het oligopeptide zijn zodanige modificaties van het oligopeptide toegestaan, dat de reactiviteit niet beneden éénvijfde van de reactiviteit van het oligopeptide wordt verlaagd. Met modificaties wordt bijv. gedoeld op vervanging van een beperkt aantal aminozuren door andere aminozuren, weglating (deletie) of toevoeging (bijv. insertie) van een beperkt aantal aminozuren, en chemische modificaties zoals substituenten aan een beperkt aantal aminozuren en blokkering van de eindstandige amino- en carboxylgroepen. Expressie- produkten, die naast een sequentie volgens de uitvinding ook nog een vreemd eiwitgedeelte omvatten (d.w.z. een aminozuur sequentie die niet in gl voorkomt, zoals bijv. een aminozuur sequentie van een ander eiwit dan gl), met name fusie-eiwitten, worden eveneens door deze terminologie gedekt.With the words "immunologically functional fragment or derivative" parts and resp. modified forms of the oligopeptide / expression product, which are also reactive with antibodies to gl. In the case of fragments of the oligopeptide, the minimum length thereof should be eight to nine amino acids in order to have a specific reactivity with antibodies to g1. In the case of derivatives of the oligopeptide, modifications of the oligopeptide are allowed such that the reactivity is not reduced below one fifth of the reactivity of the oligopeptide. Modifications include, for example, replacement of a limited number of amino acids with other amino acids, deletion (deletion) or addition (e.g. insertion) of a limited number of amino acids, and chemical modifications such as substituents on a limited number of amino acids and blocking of the terminal amino and carboxyl groups. Expression products, which in addition to a sequence according to the invention also comprise a foreign protein part (ie an amino acid sequence that does not occur in gl, such as, for example, an amino acid sequence of a protein other than gl), in particular fusion proteins covered by this terminology.
De oligopeptiden volgens de uitvinding kunnen volgens op zichzelf bekende methoden worden gesynthetiseerd. Ze kunnen echter ook worden verkregen door expressie (bijv. in bacteriën of in eukaryotische cellen) van recombinant DNA, dat voor een of meer oligopeptiden volgens de uitvinding coderende nucleo-tiden sequenties omvat.The oligopeptides of the invention can be synthesized by methods known per se. However, they can also be obtained by expression (e.g., in bacteria or in eukaryotic cells) of recombinant DNA comprising nucleotide sequences encoding one or more oligopeptides of the invention.
De uitvinding verschaft dan ook eveneens een recombinant polynucleotide, dat een nucleotiden sequentie, coderend voor een oligopeptide of immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan volgens de uitvinding, zoals hierboven gedefinieerd, omvat.The invention therefore also provides a recombinant polynucleotide, comprising a nucleotide sequence encoding an oligopeptide or immunologically functional fragment or derivative thereof of the invention as defined above.
Meer in het bijzonder verschaft de uitvinding recombinant DNA dat een DNA sequentie, coderend voor een oligopeptide of immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan volgens de uitvinding, omvat.More particularly, the invention provides recombinant DNA comprising a DNA sequence encoding an oligopeptide or immunologically functional fragment or derivative thereof of the invention.
De voorkeur heeft een recombinant DNA, bestaande uit een vectorgedeelte en een insertiegedeelte dat een DNA sequentie, coderend voor een oligopeptide of immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan volgens de uitvinding, omvat.Preferred is a recombinant DNA consisting of a vector portion and an insertion portion comprising a DNA sequence encoding an oligopeptide or immunologically functional fragment or derivative thereof of the invention.
De uitvinding wordt verder belichaamd in een gastheercel, die ten gevolge van een genetische manipulatie onder toepassing van een dergelijk recombinant DNA het vermogen heeft verkregen om een oligopeptide of immunologisch functioneel fragment of derivaat daarvan volgens de uitvinding tot expressie te brengen. De aard van de gastheercel is betrekkelijk willekeurig en wordt in hoofdzaak bepaald door produktietechnische overwegingen en door de bestaande technische mogelijkheden. In het algemeen zal gekozen worden voor microorganismen, in het bijzonder bacteriën (bijv. £. coli). maar eukaryotische cellen zoals gistcellen, schimmels, zoogdiercellen en plantecellen zijn eveneens bruikbaar.The invention is further embodied in a host cell which, as a result of genetic engineering using such recombinant DNA, has acquired the ability to express an oligopeptide or immunologically functional fragment or derivative thereof according to the invention. The nature of the host cell is relatively arbitrary and is mainly determined by production engineering considerations and existing technical capabilities. In general, microorganisms will be chosen, in particular bacteria (eg. Coli). but eukaryotic cells such as yeast cells, fungi, mammalian cells and plant cells are also useful.
Zoals reeds eerder is opgemerkt, strekt de uitvinding zich tevens uit tot de expressieprodukten, die door middel van een toepassing van dergelijke getransformeerde gastheercellen kunnen worden verkregen.As noted previously, the invention also extends to the expression products obtainable through the use of such transformed host cells.
Uiteraard is voor een toepassing van de oligopeptiden/ expressieprodukten in een werkwijze voor het produceren van poly- of monoklonale antilichamen nodig, dat de desbetreffende oligopeptiden/expressieprodukten worden gebruikt in een vorm, waarin ze een immuunreactie teweeg kunnen brengen die een produktie van antilichamen tegen het gl omvat.Of course, to use the oligopeptides / expression products in a method of producing poly- or monoclonal antibodies, it is necessary that the respective oligopeptides / expression products be used in a form in which they can elicit an immune response that produces antibodies to the gl.
De uitvinding wordt daarom voorts belichaamd in nieuwe samenstellingen, omvattende een of meerdere in een immunogene vorm gebrachte oligopeptiden/expressieprodukten volgens de uitvinding. Zoals aan de deskundige bekend is, bestaan er verschillende methoden om een als zodanig niet-immunogene stof in een immunogene vorm te brengen. Een eerste mogelijkheid is om oligopeptiden/expressieprodukten volgens de uitvinding te koppelen aan een geschikt dragereiwit. Voor een chemische koppeling kan daartoe de C- of de N-terminus worden gebruikt. Aan de deskundigen is zonder meer bekend welke koppelingsmetho-den en welke dragereiwitten in aanmerking komen. Bij wijze van voorbeeld wordt gewezen op de mogelijkheid om het oligopeptide met behulp van een geschikt koppelingsmiddel te koppelen aan KLH (keyhole limpet hemocyanin) of aan BSA (bovine serum albumine). Ook toxoïden en liposomen zijn als drager bruikbaar. Desgewenst is het oligopeptide aan de N-terminus of aan de C-terminus van een voor een dergelijke koppeling geschikt extra aminozuur voorzien. Volgens de uitvinding gaat primair de voorkeur uit naar samenstellingen, die een immunogeen conjugaat van een eiwit en een oligopeptide volgens de uitvinding omvatten. Een andere mogelijkheid is om het oligopeptide door verknoping {"crosslinking") om te zetten in een of ander groter complex, of om het oligopeptide met behulp van recombinant DNA manipulaties als onderdeel van een (groter) eiwit tot expressie te brengen. De uitvinding wordt derhalve tevens belichaamd in samenstellingen, welke een immunogeen complex of een immunogeen recombinant eiwit omvatten waarvan een oligopeptide volgens de uitvinding deel uitmaakt.The invention is therefore further embodied in new compositions comprising one or more immunogenic oligopeptides / expression products of the invention. As is known to the person skilled in the art, there are various methods for bringing an non-immunogenic substance as such into an immunogenic form. A first possibility is to couple oligopeptides / expression products according to the invention with a suitable carrier protein. For a chemical coupling, the C- or N-terminus can be used. It is readily known to those skilled in the art which coupling methods and which carrier proteins are suitable. For example, reference is made to the possibility of coupling the oligopeptide to KLH (keyhole limpet hemocyanin) or to BSA (bovine serum albumin) using an appropriate coupling agent. Toxoids and liposomes can also be used as carriers. If desired, the oligopeptide is provided at the N-terminus or at the C-terminus with an additional amino acid suitable for such a coupling. In the present invention, primary preference is given to compositions comprising an immunogenic conjugate of a protein and an oligopeptide of the invention. Another possibility is to convert the oligopeptide to some larger complex by cross-linking ("crosslinking"), or to express the oligopeptide by means of recombinant DNA manipulations as part of a (larger) protein. The invention is therefore also embodied in compositions comprising an immunogenic complex or an immunogenic recombinant protein of which an oligopeptide of the invention forms part.
De oligopeptiden/expressieprodukten volgens de uitvinding kunnen ook, om een sterke immuunrespons te verzekeren, in combinatie met een of meerdere voor immunisatie-doeleinden geschikte dragers en/of hulpstoffen worden toegepast. Dergelijke dragers en hulpstoffen zijn op zichzelf bekend. Dragers zoals poly-L-lysine, poly-L-glutaminezuur, muramyldipeptide en murabutidine kunnen in de samenstelling worden opgenomen.The oligopeptides / expression products of the invention may also be used in combination with one or more carriers and / or excipients suitable for immunization purposes to ensure a strong immune response. Such carriers and auxiliary materials are known per se. Carriers such as poly-L-lysine, poly-L-glutamic acid, muramyl dipeptide and murabutidine can be included in the composition.
Uiteraard wordt de uitvinding dus ook belichaamd in nieuwe samenstellingen, omvattende een of meer oligopeptiden/ expressieprodukten volgens de uitvinding in een vorm, die geschikt is voor het opwekken van een immuunrespons, waarbij antilichamen worden gevormd, in combinatie met ten minste één immunoadjuvans. Geschikte immunoadjuvantia zijn aan de deskundige bekend. Geschikte hulpstoffen zijn bijvoorbeeld ook aluminiumhydroxyde en andere bekende adjuvantia. Voor de toediening van de samenstellingen geschikte verdunningsmiddelen, zoals gedestilleerd water, met fosfaat gebufferde zoutoplossingen, en bufferoplossingen (zoals een citraatbuffer) zijn eveneens op zichzelf bekend.Thus, of course, the invention is also embodied in new compositions comprising one or more oligopeptides / expression products of the invention in a form suitable for eliciting an immune response, producing antibodies, in combination with at least one immunoadjuvant. Suitable immunoadjuvants are known to the person skilled in the art. Suitable auxiliary substances are also, for example, aluminum hydroxide and other known adjuvants. Diluents suitable for the administration of the compositions, such as distilled water, phosphate buffered saline solutions, and buffer solutions (such as a citrate buffer) are also known per se.
De uitvinding strekt zich ook uit over het gebruik van een of meer oligopeptiden/expressieprodukten volgens de uitvinding, of van een of meer onder toepassing van de oligopeptiden/ expressieprodukten verkregen poly- of monoklonale antilichamen voor diagnostische doeleinden. In het bijzonder omvat de uitvinding een onderzoek aan varkenssera met behulp van een set van oligopeptiden/expressieprodukten volgens de uitvinding om te bepalen of de sera afkomstig zijn van een varken dat geïnfecteerd is met het ADV. Inzicht hierin is van belang voor de bestrijding c.q. uitroeiing van het ADV in besmette varkens-populaties. Voor een dergelijk onderzoek geschikte technieken zijn op zichzelf bekend. Bij wijze van voorbeeld kunnen worden genoemd ELISA's, RIPA's, Western blots, dotblots, enz. Volgens een concreter voorbeeld kan onstolbaar gemaakt bloed van varkens in aanraking worden gebracht met een tegen varkens-erythrocyten gericht monoklonaal antilichaam, waaraan een van de bovenstaand beschreven oligopeptiden/expressieprodukten volgens de uitvinding is gekoppeld. Wanneer zich in het bloed antilichamen tegen het oligopep'tide/expressieprodukt bevinden, zal een agglutinatie van de varkenserythrocyten optreden. Bij afwezigheid van dergelijke antilichamen tegen het oligopeptide/ expressieprodukt zal geen agglutinatie optreden.The invention also extends to the use of one or more oligopeptides / expression products of the invention, or of one or more poly or monoclonal antibodies obtained using the oligopeptides / expression products for diagnostic purposes. In particular, the invention includes a study on porcine sera using a set of oligopeptides / expression products of the invention to determine if the sera are from a pig infected with the ADV. Insight into this is important for the control or eradication of the ADV in infected pig populations. Techniques suitable for such an investigation are known per se. For example, mention may be made of ELISAs, RIPAs, Western blots, dot blots, etc. According to a more concrete example, solidified porcine blood can be contacted with a monoclonal antibody directed against porcine erythrocytes to which one of the oligopeptides described above / expression products of the invention. When antibodies to the oligopeptide / expression product are present in the blood, agglutination of the porcine erythrocytes will occur. In the absence of such antibodies to the oligopeptide / expression product, agglutination will not occur.
Serum van varkens kan ook in aanraking worden gebracht met een nitrocellulosestrip waarop verschillende oligopeptiden/ expressieprodukten volgens de uitvinding (al dan niet in een gezuiverde vorm) zijn gerangschikt. Door achtereenvolgens te wassen, een gelabeld (bijv. met peroxidase gekoppeld) anti-varken antilichaam toe te voegen, opnieuw te wassen, en een substraat voor het peroxidase toe te voegen kan een kleur-vorming worden verkregen op de plaats van het oligopeptide, waarmee de in het monster aanwezige antilichamen reageren.Pig serum can also be contacted with a nitrocellulose strip on which various oligopeptides / expression products of the invention (in purified or otherwise) are arranged. By successively washing, adding a labeled (e.g., peroxidase coupled) anti-pig antibody, washing again, and adding a substrate for the peroxidase, color formation can be achieved at the site of the oligopeptide, thereby the antibodies present in the sample react.
De uitvinding zal verder aan de hand van een beschrijving van het uitgevoerde onderzoek en de bijbehorende figuren worden toegelicht. Voor de toegepaste methodieken en meetmethoden wordt kortheidshalve verwezen naar de bovenstaand aangehaalde publikaties van Geysen et al. Het onderzoek omvatte onder meer competitieve ELISA's, immunoscreening van prokaryote expressie-produkten en PEPSCAN analyses om reactieve peptiden van gl van het ADV op te sporen. Als resultaat werd gevonden, dat er drie bindingsplaatsen voor monoklonale antilichamen tegen gl liggen in het N-terminale gedeelte van gl, tussen de aminozuren 52 en 85. Dit deel van het gl is derhalve een antigene site waarop meerdere epitopen liggen. Hierdoor is de kans groot dat zo'n site door polyklonale antisera wordt herkend. Deze hypothese werd getoetst door antisera van varkens die in de bekende gl-ELISA (Van Oirschot et al, 1988) positief of negatief waren, te onderzoeken in een indirecte ELISA met het oligopeptide 52-85 als antigeen. De sera werden in de peptide ELISA getest in een verdunning van 1:10. Er werden 8 positieve sera getest, waarvan 5 veldsera en 3 sera van een eerst met een gl-negatief vaccin gevaccineerd en na 3 weken met virulent wild-type NIA-3 virus gechallenged varken. De sera waren verzameld op 15, 18 en 21 dagen na de challenge. Van de 6 negatieve sera waren er 5 af komstig uit het veld en was er 1 afkomstig van een spf varken. De gl-seropositieve sera reageerden alle met het oligopeptide, in tegenstelling tot de gl-seronegatieve sera. De resultaten toonden aan, dat experimenteel of in het veld geïnfecteerde varkens antilichamen vormen, die specifiek reageren met het gebruikte oligopeptide.The invention will be further elucidated on the basis of a description of the performed research and the accompanying figures. For the methodology and measurement methods employed, reference is made, for brevity, to the publications of Geysen et al. Cited above. The study included competitive ELISAs, immunoscreening of prokaryotic expression products, and PEPSCAN analyzes to detect reactive peptides of GI of the ADV. As a result, it was found that there are three binding sites for anti-gl monoclonal antibodies in the N-terminal portion of gl, between amino acids 52 and 85. This portion of the gl is therefore an antigenic site on which multiple epitopes lie. This makes it very likely that such a site will be recognized by polyclonal antisera. This hypothesis was tested by testing antisera from pigs positive or negative in the known gl-ELISA (Van Oirschot et al, 1988) in an indirect ELISA with the oligopeptide 52-85 as antigen. The sera were tested in the peptide ELISA at a dilution of 1:10. Eight positive sera were tested, of which 5 field sera and 3 sera from a first vaccinated with a g1 negative vaccine and after 3 weeks challenge with virulent wild-type NIA-3 virus. The sera were collected 15, 18 and 21 days after the challenge. Of the 6 negative sera, 5 were from the field and 1 was from a spf pig. The gl seropositive sera all reacted with the oligopeptide, as opposed to the gl seronegative sera. The results showed that experimentally or field infected pigs form antibodies that react specifically with the oligopeptide used.
Een ander resultaat van het uitgevoerde onderzoek was, dat er twee bindingspliatsen voor monoklonale antilichamen tegen gl werden gevonden in het N-terminale gedeelte van gl, en wel tussen de aminozuren 78 en 238. Op grond van resultaten van de "conventionele" gl-ELISA (artikelen van Van Oirschot et al) is gebleken dat de in dit deel gelegen epitopen zeer immunogeen zijn voor het varken. Antilichamen tegen één of beide epitopen blijven zeer lang na infectie aantoonbaar, vermoedelijk zelfs levenslang. Om die reden is de uitvinding niet beperkt tot het oligopeptide 52-85, maar omvat de uitvinding ook het oligo-peptide/expressieprodukt 78-238 en meer in het algemeen alle op de aminozuren 52-238 van gl gebaseerde oligopeptiden/expressie-produkten, die immunologisch functioneel zijn.Another result of the research conducted was that two binding splits for anti-gl monoclonal antibodies were found in the N-terminal portion of gl, between amino acids 78 and 238. Based on results of the "conventional" gl-ELISA (articles by Van Oirschot et al) have shown that the epitopes located in this section are highly immunogenic to the pig. Antibodies against one or both epitopes remain detectable for a very long time after infection, probably even for life. Therefore, the invention is not limited to oligopeptide 52-85, but also includes oligo peptide / expression product 78-238 and more generally all oligopeptides / expression products based on amino acids 52-238 of g1, that are immunologically functional.
Uitcrevoerde experimentenExperiments performed
Monoklonale antilichamenMonoclonal antibodies
In het onderzoek werd gebruik gemaakt van een panel van elf verschillende monoklonale antilichamen (MAbs), opgewekt tegen de pseudorabies virus stammen NIA-3 en Phylaxia. De MAbs werden gezuiverd uit ascites vloeistof door ammoniumsulfaat precipitatie en in fosfaatgebufferde zoutoplossing verdund tot een uiteindelijke eiwitconcentratie van ongeveer 7 mg/ml. De MAbs werden in essentie op de wijze, zoals beschreven door Wilson en Nakane (in het boek van Knapp, Holibar en Wiek, eds, "Immunofluorescence and related staining techniques", Elsevier, Biochemical press, Amsterdam, 1978, 215-224), geconjugeerd met horse radish peroxidase (HRPO).The study used a panel of eleven different monoclonal antibodies (MAbs) raised against the pseudorabies virus strains NIA-3 and Phylaxia. The MAbs were purified from ascites liquid by ammonium sulfate precipitation and diluted in phosphate buffered saline to a final protein concentration of about 7 mg / ml. The MAbs were essentially in the manner described by Wilson and Nakane (in the book of Knapp, Holibar and Wiek, eds, "Immunofluorescence and related staining techniques", Elsevier, Biochemical press, Amsterdam, 1978, 215-224), conjugated to horse radish peroxidase (HRPO).
Competitieve ELISACompetitive ELISA
Er werden verdunningsreeksen van MAbs-HRPO conjugaten in fosfaatgebufferde zoutoplossing, die 0,05% Tween 80 bevatte, gemaakt om de hoogste verdunning van conjugaat te bepalen, die in afwezigheid van een tweede ongelabeld antilichaam een OD450 van 1,5-2,0 geeft. In de competitieve ELISA werd een twee keer zo hoge concentratie gebruikt. Elk van de competerende ongeconjugeerde MAbs werd in elk van de MAb-HRPO verdunningen 1:50, 1:100, en 1:1000 verdund. De mengsels werden overgebracht in de putjes (100 μΐ/putje) van een met PRV-antigeen beklede ELISA plaat. Na 1 uur incubatie bij 37°C werden de platen gewassen met 0,05% Tween in gedeioniseerd water en werd 100 μΐ substraat (3,3',5,5'-tetramethylbenzidine of TMB, 1 mg/ml) toegevoegd. De reacties werden gestopt door een toevoeging van 100 μΐ 0,5 M H2SO4 en de platen werden afgelezen bij 450 nm in een TITERTEK multiscan plate reader. De OD450 waarde in putjes zonder competerend antilichaam werd gesteld op 100%. Een MAb verdunning, die de OD450 waarde van het geconjugeerde MAb met >50% verlaagde, werd beschouwd als competerend.Dilution series of MAbs-HRPO conjugates in phosphate buffered saline containing 0.05% Tween 80 were made to determine the highest dilution of conjugate giving an OD450 of 1.5-2.0 in the absence of a second unlabeled antibody. . Twice the concentration was used in the competitive ELISA. Each of the competing unconjugated MAbs was diluted 1:50, 1: 100, and 1: 1000 in each of the MAb-HRPO. The mixtures were transferred to the wells (100 µl / well) of a PRV antigen coated ELISA plate. After 1 hour incubation at 37 ° C, the plates were washed with 0.05% Tween in deionized water and 100 µl of substrate (3,3 ', 5,5'-tetramethylbenzidine or TMB, 1 mg / ml) was added. Reactions were stopped by addition of 100 μΐ 0.5 M H2SO4 and plates were read at 450 nm in a TITERTEK multiscan plate reader. The OD450 value in wells without competing antibody was set at 100%. An MAb dilution, which reduced the OD450 value of the conjugated MAb by> 50%, was considered to be competitive.
Topografische analyse van de antiqene domeinen van qlTopographic analysis of the antiqene domains of ql
De gl specificiteit van de MAbs werd bepaald door een radio immunoprecipitatie assay en door SDS-PAGE (waarvan de resultaten niet worden getoond). In de competitieve ELISA bleken alle MAbs de binding van het homologe MAb-HRPO met meer dan 50% te remmen (Fig.l). Bij een 1:1000 verdunning van de competerende MAbs konden 6 antigene domeinen worden onderscheiden: antigeen domein A, vertegenwoordigd door MAbs 1, 3 en 5; antigeen domein B, vertegenwoordigd door MAbs 4, 8 en 11/ antigeen domein C, vertegenwoordigd door MAbs 6 en 9/ antigeen domein D, vertegenwoordigd door MAb 7; antigeen domein E, vertegenwoordigd door MAb 2 en antigeen domein F, vertegenwoordigd door MAb 10. MAb 9 competeerde voor de binding van MAb 6-HRPO in een 1:1000 verdunning van het competerende MAb, terwijl MAb 6 slechts in een 1:50 verdunning met geconjugeerd MAb 9 competeerde. Een wederzijdse competitie tussen MAb 7 en de MAbs 1, 3 en 5 vond alleen plaats bij een 1:50 verdunning van het competerende MAb. Deze resultaten wijzen op een grote verbondenheid van de antigene domeinen A en D. Ook tussen de MAbs 4 en 1 werd bij een 1:50 verdunning een wederzijdse competitie gevonden. De MAbs 3 en 4 competeerden niet wederzijds en alleen bij een 1:50 verdunning.The gl specificity of the MAbs was determined by a radio immunoprecipitation assay and by SDS-PAGE (the results of which are not shown). In the competitive ELISA, all MAbs were found to inhibit the binding of the homologous MAb-HRPO by more than 50% (Fig. 1). At a 1: 1000 dilution of the competing MAbs, 6 antigenic domains could be distinguished: antigenic domain A, represented by MAbs 1, 3 and 5; antigenic domain B, represented by MAbs 4, 8 and 11 / antigenic domain C, represented by MAbs 6 and 9 / antigenic domain D, represented by MAb 7; antigenic domain E, represented by MAb 2 and antigenic domain F, represented by MAb 10. MAb 9 competed for the binding of MAb 6-HRPO in a 1: 1000 dilution of the competing MAb, while MAb 6 only in a 1:50 dilution competed with conjugated MAb 9. A mutual competition between MAb 7 and MAbs 1, 3 and 5 only occurred at a 1:50 dilution of the competing MAb. These results indicate a great connection between the antigenic domains A and D. Also between MAbs 4 and 1 a mutual competition was found at a 1:50 dilution. The MAbs 3 and 4 did not compete mutually and only at a 1:50 dilution.
Recombinant DNA techniekenRecombinant DNA techniques
De recombinant technieken werden, tenzij anders vermeld, in essentie uitgevoerd zoals beschreven door Maniatis (in "Molecular Cloning: a Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory, U.S.A., 1982) of door Davis et al (in "Basic Methods in Molecular Biology", Elsevier, New York, 1986). Restrictie-enzymen en enzymen voor modificatie van DNA werden volgens de voorschriften van de leverancier gebruikt. Plasmide DNA werd bereid met behulp van de alkalische lysis methode (Maniatis 1982) . DNA restrictiefragmenten werden uit agarose gels geïsoleerd door elektroelutie.The recombinant techniques, unless otherwise stated, were essentially performed as described by Maniatis (in "Molecular Cloning: a Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory, USA, 1982) or by Davis et al (in "Basic Methods in Molecular Biology" , Elsevier, New York, 1986). Restriction enzymes and enzymes for DNA modification were used according to the supplier's instructions. Plasmid DNA was prepared using the alkaline lysis method (Maniatis 1982). DNA restriction fragments were isolated from agarose gels by electroelution.
Constructie van recombinante plasmidenConstruction of recombinant plasmids
De pEX plasmiden brengen geïnserteerde genen tot expressie in de vorm van een cro-B-galactosidase fusie-eiwit. Expressie van dit gen staat onder controle van de lambda Pr promoter en wordt geïnduceerd door inactivering van de temperatuurgevoelige cl repressor bij 42°C. Escherichia coli bacteriën (de stam pop 2136, Institut Pasteur, Parijs) werden door middel van de CaCl2 transformatie procedure getransformeerd na een thermische schok van 5 min bij 34°C en 2 min op ijs. Plasmiden, die door een enkele digestie waren gelineariseerd werden gedefosforyleerd met kalfsdarm fosfatase. Het 2055 bp AhalII-NruI fragment (uit het BamHI-7 fragment van PRV stam NIA-3 geïsoleerd, zie Quint et al, J. Gen. Virol. £&, 1987, 523-534) met de volledige gl coderende sequentie daarop, en van het gl coderende gebied afgeleide fragmenten, werden in het juiste leesraam gekloneerd in de Smal site van pEXl, pEX2 of pEX3. Fragmenten werden zonodig blunt gemaakt door behandeling met het Klenow fragment van DNA polymerase I.The pEX plasmids express inserted genes in the form of a cro-B-galactosidase fusion protein. Expression of this gene is under the control of the lambda Pr promoter and is induced by inactivation of the temperature sensitive cl repressor at 42 ° C. Escherichia coli bacteria (pop 2136 strain, Institut Pasteur, Paris) were transformed by the CaCl2 transformation procedure after a thermal shock of 5 min at 34 ° C and 2 min on ice. Plasmids linearized by a single digest were dephosphorylated with calf intestinal phosphatase. The 2055 bp AhalII-NruI fragment (isolated from the BamHI-7 fragment of PRV strain NIA-3, see Quint et al, J. Gen. Virol. &, 1987, 523-534) with the full µl coding sequence thereon, and fragments derived from the gl coding region, were cloned in the appropriate reading frame into the Smal site of pEX1, pEX2 or pEX3. Fragments were blunted, if necessary, by treatment with the Klenow fragment of DNA polymerase I.
Isolatie van expressie oroduktenIsolation of expression products
Expressie van de pEX fusie-eiwitten werd geïnduceerd door incubatie van een 1,5 ml exponentiële cultuur (Οϋβοο ca. 0,25) van cellen gedurende 90 min bij 42°C. De expressieprodukten werden als volgt gezuiverd: cellen werden neergecentrifugeerd (5 min met 6000xg), geresuspendeerd in 100 μΐ 50 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 mM EDTA, 15% (w/v) sucrose en gedurende 10 min behandeld met lysozyme (1 mg/ml). Na toevoeging van 140 μΐ 0,2% (w/v) Triton X-100 in 10 mM Tris-HCl (pH 8) werd het DNA afgebroken door toevoeging van 24 μΐ 1 M MgCl2 en 1 μΐ DNAse (10 mg/ml). De incubatie vond plaats bij 37°C totdat de suspensie niet langer visceus was. Nadat de tot expressie gebrachte onoplosbare eiwitten waren neergecentrifugeerd, werd de pellet in 250 μΐ fosfaatgebufferde zoutoplossing geresuspendeerd.Expression of the pEX fusion proteins was induced by incubating a 1.5 ml exponential culture (Οϋβοο ca. 0.25) of cells for 90 min at 42 ° C. The expression products were purified as follows: cells were centrifuged down (5 min with 6000xg), resuspended in 100 μΐ 50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM EDTA, 15% (w / v) sucrose and treated for 10 min with lysozyme (1 mg / ml). After adding 140 μΐ 0.2% (w / v) Triton X-100 in 10 mM Tris-HCl (pH 8), the DNA was degraded by adding 24 μΐ 1 M MgCl2 and 1 μΐ DNAse (10 mg / ml) . The incubation took place at 37 ° C until the suspension was no longer viscous. After the expressed insoluble proteins were centrifuged down, the pellet was resuspended in 250 µl phosphate buffered saline.
Immunoscreeninq van expressieproduktenImmunoscreening of expression products
Een 5 μΐ monster van geresuspendeerde eiwitten werd opgelost in lysis buffer (10 mM Tris-HCl pH 8,0, 1 mM EDTA, 10% glycerol, 2% SDS, 5% 2-mercaptoethanol, Laemmli, Nature 227, 1970, 680-681). De eiwitten werden door SDS-polyacrylamide gel elektroforese (SDS-PAGE, 7,5%) gefractioneerd, gevolgd door Western blotting onder toepassing van het LKB-multiphor II Nova Blot systeem in 40 mM glycine, 50 mM Tris, 0,04% SDS (w/v) en 20% methanol (v/v). De nitrocellulose vellen werden twee keer gewassen in fosfaatgebufferde zoutoplossing die 0,5% (w/v) gelatine en 0,1% (w/v) Triton X-100 bevatte (PBS-GT), en 1 uur bij kamertemperatuur geïncubeerd met antilichamen (MAb 1:1000 verdund in PBS-GT). De filters werden drie keer gedurende 5 min gewassen in PBS-GT en gedurende 1 uur bij kamertemperatuur geïncubeerd met konijne anti-muis IgG-HRPO. De filters werden drie keer gedurende 5 min in PBS-GT en een keer gedurende 5 min in fosfaatgebufferde zoutoplossing gewassen en gedurende ongeveer 5 min geïncubeerd in substraatoplossing (3,3'-diamino-benzidine 0,5 mg/ml en 0,001% H2O2) .A 5 μΐ sample of resuspended proteins was dissolved in lysis buffer (10 mM Tris-HCl pH 8.0, 1 mM EDTA, 10% glycerol, 2% SDS, 5% 2-mercaptoethanol, Laemmli, Nature 227, 1970, 680- 681). The proteins were fractionated by SDS polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE, 7.5%) followed by Western blotting using the LKB multiphor II Nova Blot system in 40 mM glycine, 50 mM Tris, 0.04% SDS (w / v) and 20% methanol (v / v). The nitrocellulose sheets were washed twice in phosphate buffered saline containing 0.5% (w / v) gelatin and 0.1% (w / v) Triton X-100 (PBS-GT), and incubated with antibodies for 1 hour at room temperature (MAb diluted 1: 1000 in PBS-GT). The filters were washed three times in PBS-GT for 5 min and incubated with rabbit anti-mouse IgG-HRPO for 1 hour at room temperature. The filters were washed three times for 5 min in PBS-GT and once for 5 min in phosphate buffered saline and incubated in substrate solution (3,3'-diamino-benzidine 0.5 mg / ml and 0.001% H2O2) for about 5 min. .
Localisatie van antiaene domeinen door binding van crl-MAbs aan σΐ specifieke fusie-eiwittenLocalization of antianic domains by binding of crl-MAbs to σΐ specific fusion proteins
Een Ahalll-Nrul fragment, dat het volledige, voor gl coderende gebied bevat, werd in het juiste leesraam in het plasmide pEX2 gekloneerd, waarbij het plasmide pl (zie fig.2) werd verkregen, dat een voor 685 aminozuren coderende insertie bevatte. Doordat de insertie aan het 3'-uiteinde van het cro-lac Z gen plaats vond, leidde expressie tot een hybride eiwit van 115 kDa (cro-B-galactosidase) plus het produkt van het geïnserteerde vreemde gen. De voorspelde grootte van het expressie-eiwit van plasmide pl is 115+80 kDa (zie Mettenleiter et al, J. Virol. jjJl, 1985, 52-57) . Analyse van het hybride eiwit met SDS-PAGE liet een eiwit-band zien bij ca. 190 kDa (de gel elektroforese en Western blot resultaten van de hybride B-galactosidase eiwitten van de verschillende pEX kloons worden niet getoond). In een Western blot bleken 10 van de 11 geteste MAbs het fusie-eiwit van plasmide pl te herkennen (tabel 1).An Ahalll-Nrul fragment, containing the entire gl coding region, was cloned into the appropriate reading frame in the plasmid pEX2 to yield the plasmid p1 (see Figure 2) containing an insert encoding 685 amino acids. Due to the insertion at the 3 'end of the cro-lac Z gene, expression resulted in a 115 kDa (cro-B-galactosidase) hybrid protein plus the product of the inserted foreign gene. The predicted size of the expression protein of plasmid p1 is 115 + 80 kDa (see Mettenleiter et al, J. Virol. JjJl, 1985, 52-57). Analysis of the hybrid protein with SDS-PAGE showed a protein band at approximately 190 kDa (the gel electrophoresis and Western blot results of the hybrid β-galactosidase proteins from the different pEX clones are not shown). In a Western blot, 10 of the 11 MAbs tested were found to recognize the plasmid p1 fusion protein (Table 1).
Om de antigene domeinen op het eiwit in kaart te brengen, werd het Ahalll-Nrul fragment behandeld met Nael, waarna de verkregen fragmenten 'afhankelijk van het gewenste leesraam in de Smal site van pEXl, pEX2 of pEX3 werden gekloneerd. Aldus werden de plasmiden p2 (met de sequentie coderend voor de aminozuren 52 tot 305), p3 (met de sequentie coderend voor de aminozuren 501 tot 654), p4 (met de sequentie coderend voor de aminozuren 305 tot 411), p5 (met de sequentie coderend voor de aminozuren 411 tot 501), en p6 (met de sequentie coderend voor de aminozuren -15 tot 52) verkregen. Alleen het fusie-eiwit van plasmide p2 bleek door dezelfde MAbs te worden herkend als aan het fusie-eiwit van plasmide pl (dat de volledige, voor gl coderende sequentie bevatte) bonden. Deze resultaten gaven aan, dat de antigene domeinen A, B, C, D en E tussen de aminozuren 52 en 305 lagen. Vervolgens werden van de gl sequentie van p2 afgeleide fragmenten in pEX gekloneerd (fig.2). In een Western blot reageerden dezelfde 10 MAbs, die de fusie-eiwitten van de plasmiden pl en p2 herkenden, met de fusie-eiwitten van het plasmide psl (met de sequentie coderend voor de aminozuren 52 tot 238) . De MAbs 1, 3 en 5 (antigeen domein A), de MAbs 4, 8 en 11 (antigeen domein B) en MAb 7 (antigeen domein D) reageerden met de fusie-eiwitten van het plasmide ps4 (met de sequentie coderend voor de aminozuren 52 tot 123), maar niet met de fusie-eiwitten van de plasmiden ps2 (met de sequentie coderend voor de aminozuren 78 tot 238) en ps3 (met de sequentie coderend voor de aminozuren 123 tot 238) . MAb 2 (antigeen domein E) en de MAbs 6 en 9 (antigeen domein C) reageerden alleen met het fusie-eiwit van plasmide ps2. Het fusie-eiwit van plasmide ps3 werd door geen van de geteste gl MAbs herkend (zie tabel 1). Deze resultaten wijzen erop, dat de antigene domeinen A, B en D tussen de aminozuren 52 en 78 gelegen zijn en dat de antigene domeinen C en E tussen de aminozuren 78 en 238 liggen.To map the antigenic domains on the protein, the Ahalll-Nrul fragment was treated with Nael and the fragments obtained were cloned into the Smal site of pEX1, pEX2 or pEX3 depending on the desired reading frame. Thus, the plasmids p2 (with the sequence encoding amino acids 52 to 305), p3 (with the sequence encoding amino acids 501 to 654), p4 (with the sequence encoding amino acids 305 to 411), p5 (with the sequence coding for amino acids 411 to 501), and p6 (with the sequence coding for amino acids -15 to 52) are obtained. Only the fusion protein of plasmid p2 was found to be recognized by the same MAbs as bound to the fusion protein of plasmid p1 (containing the complete gl coding sequence). These results indicated that the antigenic domains A, B, C, D and E were between amino acids 52 and 305. Fragments derived from the gl sequence of p2 were then cloned into pEX (Fig. 2). In a Western blot, the same 10 MAbs, which recognized the fusion proteins of the plasmids p1 and p2, reacted with the fusion proteins of the plasmid psl (with the sequence encoding amino acids 52 to 238). The MAbs 1, 3 and 5 (antigenic domain A), the MAbs 4, 8 and 11 (antigenic domain B) and MAb 7 (antigenic domain D) reacted with the fusion proteins of the plasmid ps4 (with the sequence encoding the amino acids 52 to 123), but not with the fusion proteins of the plasmids ps2 (with the sequence encoding amino acids 78 to 238) and ps3 (with the sequence encoding amino acids 123 to 238). MAb 2 (antigenic domain E) and MAbs 6 and 9 (antigenic domain C) reacted only with the fusion protein of plasmid ps2. The plasmid ps3 fusion protein was not recognized by any of the µl MAbs tested (see Table 1). These results indicate that the antigenic domains A, B and D are between amino acids 52 and 78 and that the antigenic domains C and E are between amino acids 78 and 238.
PEPSCANPEPSCAN
Op de door Geysen et al beschreven wijze werden door een chemische synthese verkregen, overlappende nonapeptiden, die de aminozuren 52-238 van het gl eiwit beslaan, getest. Alle MAbs werden getest in de ELISA in een verdunning van 1:150.Overlapping nonapeptides covering amino acids 52-238 of the µl protein obtained by chemical synthesis were tested in the manner described by Geysen et al. All MAbs were tested in the ELISA at a 1: 150 dilution.
Localisatie van de epitopen met de PEPSCAN-methodeLocalization of the epitopes with the PEPSCAN method
De 168 overlappende nonapeptiden, die de aminozuren 52 tot 238 van het psl plasmide beslaan, werden volgens de PEPSCAN-methode getest onder toepassing van de gl MAbs. De MAbs 1, 3 en 5 (antigeen domein A) reageerden op dezelfde wijze met peptiden binnen de aminozuur sequenties 63-73 en 75-84. De MAbs 4, 8 en 11 (antigeen domein B) reageerden op dezelfde wijze met peptiden binnen de aminozuur sequentie 52-67. MAb 7 (antigeen domein D) herkende peptiden binnen de aminozuur sequentie 68-84 (zie fig.3). De MAbs 2, 6, 9 en 10, behorende bij de antigene domeinen C, E en F, reageerden met geen van de onderzochte peptiden.The 168 overlapping nonapeptides covering amino acids 52 to 238 of the psl plasmid were tested by the PE MAbs using the PEPSCAN method. The MAbs 1, 3 and 5 (antigenic domain A) similarly reacted with peptides within the amino acid sequences 63-73 and 75-84. The MAbs 4, 8 and 11 (antigenic domain B) similarly reacted with peptides within the amino acid sequence 52-67. MAb 7 (antigenic domain D) recognized peptides within the amino acid sequence 68-84 (see Figure 3). The MAbs 2, 6, 9 and 10, belonging to the antigenic domains C, E and F, did not react with any of the peptides tested.
De resultaten geven aan, dat antigeen domein D een continu domein is, terwijl de antigene domeinen A en B semi-continu zijn. Het feit dat de antigene domeinen C en E (behorende bij de MAbs 2, 6 en 9) volgens de immunoscreening op plasmide ps2 zouden moeten liggen, maar de desbetreffende MAbs noch met de fusie-eiwitten van de plasmiden ps3 en ps4, noch met enig nonapeptide in de PEPSCAN-analyse reageerden, lijkt erop te duiden dat een locale conformatie voor de herkenning tussen deze MAbs en hun respectieve epitopen nodig is, welke locale conformatie aanwezig is in het fusie-eiwit van plasmide ps2, maar niet in de fusie-eiwitten van de plasmiden ps3 en ps4 en evenmin in de synthetische nonapeptiden.The results indicate that antigenic domain D is a continuous domain, while antigenic domains A and B are semi-continuous. The fact that the antigenic domains C and E (belonging to the MAbs 2, 6 and 9) should be on plasmid ps2 by immunoscreening, but the respective MAbs neither with the fusion proteins of the plasmids ps3 and ps4, nor with any nonapeptide in the PEPSCAN assay seems to indicate that a local conformation is needed for the recognition between these MAbs and their respective epitopes, which local conformation is present in the fusion protein of plasmid ps2, but not in the fusion proteins of the plasmids ps3 and ps4, nor in the synthetic nonapeptides.
FiguurbesprekingFigure discussion
Fig.l toont de resultaten van de competitieve ELISA.Fig. 1 shows the results of the competitive ELISA.
Fig.2 toont de kloneringsstrategie van de volledige, voor gl coderende sequentie en fragmenten daarvan in pEX expressie plasmiden. De vette lijn geeft het open leesraam van gl aan. De getallen duiden op de aminozuur posities.Figure 2 shows the cloning strategy of the complete gl coding sequence and fragments thereof in pEX expression plasmids. The bold line indicates the open reading frame of gl. The numbers indicate the amino acid positions.
Fig.3 toont de resultaten van de PEPSCAN-analyse aan de 33 nonapeptiden, die de aminozuren 52 tot 84 beslaan. De aminozuur sequentie is in de één-letter code aangegeven, met vermelding van de aminozuur positie. De horizontale lijnen beneden de aminozuur sequentie markeren de peptiden, die aan de aangegeven MAbs binden. De vette lijnen geven de peptiden aan, die het sterkste aan de MAbs binden. De vertikale lijnen geven de OD waarde aan, die uit de reactie van de MAbs met de nonapeptiden resulteert.Figure 3 shows the results of the PEPSCAN analysis on the 33 nonapeptides covering amino acids 52 to 84. The amino acid sequence is indicated in the one-letter code, indicating the amino acid position. The horizontal lines below the amino acid sequence highlight the peptides that bind to the indicated MAbs. The bold lines indicate the peptides, which bind the strongest to the MAbs. The vertical lines indicate the OD value resulting from the reaction of the MAbs with the nonapeptides.
Tabel 1: reactiviteit van MAbs met pEX expressie-eiwitten die gl fragmenten bevatten en in de PEPSCAN-analyseTable 1: Reactivity of MAbs with pEX expression proteins containing g1 fragments and in the PEPSCAN analysis
pEX kloons_PEES CANpEX clones_PEES CAN
MAb pl p2 psl ps2 ps3 ps4 1 + + + - - + + 2 + + + + -- 3 + + + -- + + 4 + + + - - + + 5 + + + -- + + 6 + + + + -- 7 + + + — — + + 8 + + + -- + + 9 + + + + -- 10 ----- - 11 + + + -- + +Mab pl p2 psl ps2 ps3 ps4 1 + + + - - + + 2 + + + + - 3 + + + - + + 4 + + + - - + + 5 + + + - + + 6 + + + + - 7 + + + - - + + 8 + + + - + + 9 + + + + - 10 ----- - 11 + + + - + +
Claims (25)
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL8902414A NL8902414A (en) | 1989-09-28 | 1989-09-28 | OLIGOPEPTIDES / EXPRESSION PRODUCTS OF THE AUJESZKY'S DISEASE VIRUS AND CODING RECOMBINANT POLYNUCLEOTIDES. |
| PCT/NL1990/000143 WO1991004986A1 (en) | 1989-09-28 | 1990-09-28 | Oligopeptides/expression products of the aujeszky's disease virus, and recombinant polynucleotides coding therefor |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL8902414 | 1989-09-28 | ||
| NL8902414A NL8902414A (en) | 1989-09-28 | 1989-09-28 | OLIGOPEPTIDES / EXPRESSION PRODUCTS OF THE AUJESZKY'S DISEASE VIRUS AND CODING RECOMBINANT POLYNUCLEOTIDES. |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL8902414A true NL8902414A (en) | 1991-04-16 |
Family
ID=19855368
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NL8902414A NL8902414A (en) | 1989-09-28 | 1989-09-28 | OLIGOPEPTIDES / EXPRESSION PRODUCTS OF THE AUJESZKY'S DISEASE VIRUS AND CODING RECOMBINANT POLYNUCLEOTIDES. |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| NL (1) | NL8902414A (en) |
| WO (1) | WO1991004986A1 (en) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5631316A (en) * | 1993-09-30 | 1997-05-20 | Exxon Chemical Patents Inc. | Tire innerliner comprising ester-functionalized elastomeric interpolymers of C4-C7 isomonoolefin and para-alkylstyrene |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1987002058A1 (en) * | 1985-10-04 | 1987-04-09 | The Upjohn Company | Pseudorabies virus protein |
-
1989
- 1989-09-28 NL NL8902414A patent/NL8902414A/en not_active Application Discontinuation
-
1990
- 1990-09-28 WO PCT/NL1990/000143 patent/WO1991004986A1/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1991004986A1 (en) | 1991-04-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0236145B1 (en) | Processes for the production of hcmv glycoproteins, antibodies thereto and hcmv vaccines, and recombinant vectors therefor | |
| Tanaka et al. | Production of rabbit antibodies against carboxy-terminal epitopes encoded by bullous pemphigoid cDNA | |
| IE64006B1 (en) | Antigens particulary envelope antigens of the virus of lymphadenopathies and of the acquired immune-deficiency syndrome and virus process for producing virus envelope antigens use of said antigens in the preparation of immunogenic compositions or for the diagnosis of the presence of antibodies against this virus | |
| Guldner et al. | Human anti-p68 autoantibodies recognize a common epitope of U1 RNA containing small nuclear ribonucleoprotein and influenza B virus. | |
| US6322794B1 (en) | Seroreactive epitopes on proteins of human papillomavirus (HPV) 18 | |
| JPH0678359B2 (en) | Epstein, a chemically synthesized polypeptide that produces antibodies that immunoreact with the Baar virus nuclear antigen | |
| CN113018427A (en) | Multivalent fusion protein vaccine based on neutralizing epitope of new coronavirus | |
| CN113740536A (en) | African swine fever virus p30 blocking ELISA antibody detection kit and application thereof | |
| Jacobs et al. | Epitope analysis of glycoprotein I of pseudorabies virus | |
| US5846733A (en) | Structural phosphoprotein (PP150) of human cytomegalovirus, and the preparation and use thereof | |
| KR20090126256A (en) | Recombinant antigens of human cytomegalovirus(hcmv) | |
| US6808711B2 (en) | Immunologically active proteins from Borrelia burgdorferi, nucleic acids which encode them, and their use in test kits and as vaccines | |
| JP2000506376A (en) | Toxoplasma gondii antigen Tg20 | |
| US5656457A (en) | DNA sequence for the unique sequence herpes simplex virus type 2-glycoprotein G protein and method of expressing said unique sequence of HSV-2gG | |
| JPH05184369A (en) | Immunogen protein and cdna clone | |
| JP4319703B2 (en) | Epstein-Barr virus peptide and antibody against the peptide | |
| US6162620A (en) | Processes for the production of HCMV glycoproteins, antibodies thereto and HCMV vaccines, and recombinant vectors therefor | |
| EP0348725A2 (en) | Species-specific epitode of chlamydia trachomatis and antibodies that recognize the same | |
| US6197497B1 (en) | Immunoassay for herpes simplex virus | |
| JP2644625B2 (en) | Outer membrane proteins P1 and peptides of Haemophilus influenzae type B | |
| EP0655072B1 (en) | Immunological method for the detection of antibodies to equine herpesvirus type 1 and 4 glycoprotein G | |
| NL8902414A (en) | OLIGOPEPTIDES / EXPRESSION PRODUCTS OF THE AUJESZKY'S DISEASE VIRUS AND CODING RECOMBINANT POLYNUCLEOTIDES. | |
| Rocha et al. | Antibody response to a fragment of the protein G of VHS rhabdovirus in immunised trout | |
| US6177080B1 (en) | Polypeptides encoded by Kaposi sarcoma-associated herpes virus the use thereof in diagnosis and therapy | |
| JPH07107982A (en) | Polypeptide for apparent rabies virus vaccine, preparation thereof and vaccine containing the same |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A1B | A search report has been drawn up | ||
| BC | A request for examination has been filed | ||
| BV | The patent application has lapsed |